本發明屬于生物(wu)醫學領域(yu)，尤其(qi)是涉及一(yi)種化合物(wu)在制(zhi)備抑制(zhi)激(ji)肽釋放酶(mei)KLK7的藥(yao)物(wu)上(shang)的應用及其(qi)合成(cheng)方法。

背景技術：

特應(ying)性皮(pi)(pi)(pi)炎(yan)(Atopic Dermatitis,AD)是一種廣(guang)泛傳播的(de)(de)(de)(de)(de)(de)慢性炎(yan)癥(zheng)性皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)病(bing)(bing)，特點是干燥、鱗狀皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)、炎(yan)癥(zheng)、皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)滲透性增加，AD病(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)對(dui)(dui)環境中常見的(de)(de)(de)(de)(de)(de)而對(dui)(dui)正常人無害的(de)(de)(de)(de)(de)(de)因(yin)素也會很敏感(gan)從而易于(yu)受到表面感(gan)染。在過去的(de)(de)(de)(de)(de)(de)30年間工業化(hua)國家的(de)(de)(de)(de)(de)(de)特應(ying)性皮(pi)(pi)(pi)炎(yan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發病(bing)(bing)率(lv)(lv)增長了2到3倍，據估計兒童的(de)(de)(de)(de)(de)(de)特應(ying)性皮(pi)(pi)(pi)炎(yan)患病(bing)(bing)率(lv)(lv)達到了15-30％，成(cheng)(cheng)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)特應(ying)性皮(pi)(pi)(pi)炎(yan)患病(bing)(bing)率(lv)(lv)達到了2-10％。由(you)于(yu)發病(bing)(bing)機(ji)制的(de)(de)(de)(de)(de)(de)復雜性，對(dui)(dui)AD的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發病(bing)(bing)機(ji)制了解得不多(duo)，但皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)屏(ping)障功能紊(wen)亂已(yi)經被(bei)證實是AD發展(zhan)過程中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)關鍵因(yin)素之(zhi)(zhi)一。皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)屏(ping)障的(de)(de)(de)(de)(de)(de)穩定(ding)依賴于(yu)顆(ke)粒(li)(li)層的(de)(de)(de)(de)(de)(de)角(jiao)(jiao)(jiao)質(zhi)形成(cheng)(cheng)細(xi)胞分(fen)化(hua)為角(jiao)(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)胞和皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)表層角(jiao)(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)胞脫(tuo)落(即脫(tuo)屑(xie))之(zhi)(zhi)間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)平(ping)衡，皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)脫(tuo)屑(xie)過程包括由(you)KLKs參(can)與(yu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)橋(qiao)粒(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)降(jiang)解，由(you)于(yu)橋(qiao)粒(li)(li)是角(jiao)(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)胞的(de)(de)(de)(de)(de)(de)粘(zhan)連蛋白，橋(qiao)粒(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)降(jiang)解則會導致角(jiao)(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)胞脫(tuo)落而致皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)脫(tuo)屑(xie)。證據顯(xian)示，局部(bu)或暫時性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)KLKs活(huo)性控制的(de)(de)(de)(de)(de)(de)失(shi)調，是AD病(bing)(bing)人皮(pi)(pi)(pi)膚(fu)屏(ping)障穩定(ding)缺失(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)主要(yao)原因(yin)之(zhi)(zhi)一。

KLKs(Kallikreins，激(ji)肽釋(shi)放酶)是(shi)具有胰蛋(dan)白(bai)酶或胰凝乳蛋(dan)白(bai)酶特異性(xing)的(de)(de)絲氨酸蛋(dan)白(bai)酶，其編碼基因定位于(yu)19q13.4，編碼15個(ge)分泌(mi)型絲氨酸蛋(dan)白(bai)酶KLK 1-KLK15。已經證明，KLKs存在(zai)于(yu)正(zheng)常人的(de)(de)角質層(ceng)(ceng)細胞中，目前發現，至少有8種KLK(KLK5,KLK 6,KLK 7,KLK 8,KLK10,KLK 11,KLK13和KLK14)存在(zai)于(yu)人的(de)(de)角質層(ceng)(ceng)和汗液中，其中KLK7占總(zong)量的(de)(de)40％。KLK7可(ke)能是(shi)皮膚損傷的(de)(de)一個(ge)關鍵酶，而且在(zai)AD病人中它(ta)可(ke)能參與一個(ge)系統性(xing)炎癥反應，在(zai)AD的(de)(de)角質層(ceng)(ceng)KLK7升高最(zui)為突(tu)出(chu)，這提示KLK7在(zai)AD的(de)(de)發病機制上(shang)可(ke)能是(shi)至關重要的(de)(de)，因此，抑制KLK7的(de)(de)活(huo)性(xing)對于(yu)AD的(de)(de)治療顯得最(zui)為重要。

LEKTI(Lympho-epithelial Kazal-type-related inhibitor,LEKTI)是由SPINK5基因(yin)編(bian)碼的(de)(de)(de)(de)絲氨(an)酸(suan)蛋(dan)(dan)白酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑家族的(de)(de)(de)(de)成員，LEKTI前(qian)體包含一個(ge)信號肽和(he)彼此隔開(kai)的(de)(de)(de)(de)15個(ge)絲氨(an)酸(suan)蛋(dan)(dan)白酶(mei)抑(yi)制(zhi)域(D1-D15)，表達后(hou)迅速被弗林蛋(dan)(dan)白酶(mei)水解(jie)為幾個(ge)蛋(dan)(dan)白片段，其中包含D6-D9抑(yi)制(zhi)域的(de)(de)(de)(de)LEKTI能(neng)抑(yi)制(zhi)胰(yi)蛋(dan)(dan)白酶(mei)、胰(yi)凝乳蛋(dan)(dan)白酶(mei)、KLK5和(he)KLK7等(deng)酶(mei)的(de)(de)(de)(de)活性。LEKTI的(de)(de)(de)(de)內源靶(ba)至(zhi)少包括KLK5、KLK7和(he)KLK14，它(ta)們共同參(can)與皮(pi)膚的(de)(de)(de)(de)脫屑過(guo)(guo)程。在AD病人，LEKTI表達水平(ping)嚴重降低，導致(zhi)了KLK7活性的(de)(de)(de)(de)異常(chang)升高(gao)。盡管(guan)LEKTI是表皮(pi)內KLK7的(de)(de)(de)(de)天然(ran)抑(yi)制(zhi)劑，但(dan)作(zuo)(zuo)為治療AD的(de)(de)(de)(de)外用藥，其不(bu)能(neng)透過(guo)(guo)皮(pi)膚角(jiao)質(zhi)(zhi)層，而(er)(er)且其大分子蛋(dan)(dan)白質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)特性也會導致(zhi)吸收擴散速度過(guo)(guo)慢、降解(jie)速度過(guo)(guo)快(kuai)的(de)(de)(de)(de)問(wen)題，因(yin)而(er)(er)作(zuo)(zuo)用非常(chang)有(you)限(xian)。到目(mu)前(qian)為止(zhi)，還沒(mei)有(you)一種(zhong)有(you)效的(de)(de)(de)(de)KLK7抑(yi)制(zhi)劑應用于臨床(chuang)。

技術實現要素：

基于此，本發(fa)明提供化合物(wu)在制備抑制激肽釋放酶(mei)KLK7的藥物(wu)上的應用及(ji)其合成方法。

本發明技術方案為：

一種化合(he)物(wu)在制(zhi)備抑制(zhi)激肽(tai)釋放(fang)酶(mei)KLK7的(de)藥物(wu)上的(de)應用(yong)，該化合(he)物(wu)的(de)結構式為(wei)：

合成所述(shu)的化合物的方(fang)法(fa)，所述(shu)合成路線如下：

其中：

物質十二的合成：將物質十、物質十一、POCl₃加入裝有回流冷凝管的圓底燒瓶中，將圓底燒瓶放置于超聲清洗儀中反應，減壓蒸出剩余的POCl₃，殘余(yu)物(wu)傾(qing)倒于(yu)碎冰(bing)中(zhong)，碎冰(bing)質量為殘余(yu)物(wu)的(de)20～50倍，析(xi)出沉淀,抽濾，固體用1％～5％的(de)NaOH溶液(ye)洗滌，水洗至中(zhong)性，得(de)物(wu)質十二(er)；

物(wu)質十(shi)三的合成(cheng)：反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加入二氯(lv)甲烷和(he)物(wu)質十(shi)二，鹽冰(bing)浴冷卻至-15℃，避光，氮氣保(bao)護下，逐滴(di)加入20wt％三溴(xiu)化硼的無水(shui)(shui)二氯(lv)甲烷溶液(ye)(ye)，滴(di)加完(wan)后(hou)，升溫反(fan)應(ying)，反(fan)應(ying)結束后(hou)將反(fan)應(ying)液(ye)(ye)倒(dao)入冰(bing)水(shui)(shui)中(zhong)，冰(bing)水(shui)(shui)的質量(liang)為反(fan)應(ying)液(ye)(ye)的5-15倍，分出(chu)有機相，水(shui)(shui)相用乙(yi)酸(suan)(suan)乙(yi)酯萃取三次，每次乙(yi)酸(suan)(suan)乙(yi)酯的體積為水(shui)(shui)相的0.5～5倍，合并有機相，有機相用硫酸(suan)(suan)鈉干燥，蒸出(chu)溶劑，得(de)物(wu)質十(shi)三；

物(wu)質(zhi)十(shi)四(si)的合成：將氯乙酸與5～20wt％氫氧(yang)化鈉水溶(rong)液(ye)(ye)(ye)混合得溶(rong)液(ye)(ye)(ye)A，將物(wu)質(zhi)十(shi)三與5～20wt％氫氧(yang)化鈉水溶(rong)液(ye)(ye)(ye)混合得溶(rong)液(ye)(ye)(ye)B，將溶(rong)液(ye)(ye)(ye)A加(jia)(jia)入到反應(ying)瓶中，再滴(di)(di)加(jia)(jia)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)B，滴(di)(di)加(jia)(jia)完畢，升溫(wen)反應(ying)，冷卻(que)，加(jia)(jia)5～20wt％鹽(yan)酸酸化至pH＝1～2，過濾、洗(xi)滌、干(gan)燥得物(wu)質(zhi)十(shi)四(si)；

物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)十五的合成：在反(fan)應瓶中裝(zhuang)有攪拌棒(bang)、溫度(du)計，回(hui)流冷凝(ning)管，其(qi)回(hui)流冷凝(ning)管連接氯(lv)化氫吸收裝(zhuang)置，依次加入氯(lv)化亞(ya)砜(feng)和(he)物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)十四，攪拌升溫反(fan)應，減壓蒸出(chu)低沸物(wu)(wu)，瓶內殘余物(wu)(wu)即為物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)十五，不經分離直接用于(yu)下步反(fan)應；

化(hua)合(he)(he)物(wu)II的(de)合(he)(he)成(cheng)：在(zai)反應瓶中加入(ru)上步(bu)制得的(de)物(wu)質(zhi)十(shi)五，再(zai)加入(ru)三乙(yi)胺、二氯甲烷和物(wu)質(zhi)十(shi)六，攪拌反應，減壓蒸出溶劑，冷卻(que)，過濾，水洗，丙酮洗得化(hua)合(he)(he)物(wu)II。

優選地，所述物質十、物質十一、POCl₃的質量比為1.0:1.0～1.5:30～50，超聲清洗儀中反應溫度為50～70℃，功率為350W，超聲作用60～120分鐘。

優(you)選地，所(suo)述二氯甲烷、物質十二、20wt％三(san)溴(xiu)化硼的二氯甲烷溶液的質量比為20～40:1:6～15，升溫至25℃，25℃反應2～4小(xiao)時(shi)。

優選地，所(suo)述溶(rong)(rong)液(ye)(ye)A中(zhong)(zhong)氯乙酸與氫氧(yang)化(hua)鈉的(de)摩爾(er)比(bi)(bi)為1:1.0～2.0，所(suo)述溶(rong)(rong)液(ye)(ye)B中(zhong)(zhong)物質十(shi)三(san)與氫氧(yang)化(hua)鈉的(de)摩爾(er)比(bi)(bi)為1:1.0～2.0，將溶(rong)(rong)液(ye)(ye)A加入(ru)到(dao)(dao)反(fan)應(ying)瓶(ping)中(zhong)(zhong)，再滴加溶(rong)(rong)液(ye)(ye)B，加入(ru)到(dao)(dao)反(fan)應(ying)瓶(ping)中(zhong)(zhong)的(de)物質十(shi)三(san)與氯乙酸的(de)摩爾(er)比(bi)(bi)為1:1.0～2.0，升溫反(fan)應(ying)，冷卻。

優選地，升溫至60～90℃反(fan)應1～6小時，冷卻(que)至25℃。

優選(xuan)地，所述(shu)物質十(shi)四與氯化亞砜的(de)摩爾(er)比為1:1.0～4.0，攪拌升溫(wen)至(zhi)60～78℃，在60～78℃下反應5～10小時。

優選地，所(suo)述(shu)物質(zhi)十(shi)五、物質(zhi)十(shi)六、三乙胺和二氯甲烷的摩爾比1.0:1:0～2.0:1.0～3.0:5.0～30，在0～25℃攪拌2小(xiao)時(shi)。

所述(shu)(shu)化合(he)物或所述(shu)(shu)方(fang)法在(zai)制備抑(yi)制激肽(tai)釋放(fang)酶KLK7的(de)藥(yao)(yao)物上的(de)應(ying)用，其特征(zheng)在(zai)于，所述(shu)(shu)制備抑(yi)制激肽(tai)釋放(fang)酶KLK7的(de)藥(yao)(yao)物上的(de)應(ying)用的(de)藥(yao)(yao)物包括(kuo)：

中的(de)一種或幾種的(de)混合(he)物(wu)。

優選地，所述制備(bei)抑(yi)制激肽釋(shi)放酶KLK7的(de)藥(yao)物(wu)上的(de)應用的(de)藥(yao)物(wu)包(bao)括：化(hua)合物(wu)I、化(hua)合物(wu)II、化(hua)合物(wu)III、化(hua)合物(wu)IV和化(hua)合物(wu)V的(de)摩(mo)爾比(bi)為1:1～4:1～5：1～3：1～2。

本發明優點：

1、明提供的(de)抑(yi)制激(ji)肽(tai)釋放酶KLK7的(de)化合物能夠有效的(de)抑(yi)制KLK7的(de)活性(xing)，其合成方法(fa)簡(jian)單易行，加(jia)入適當(dang)的(de)輔料和助(zhu)劑(ji)可制備成抑(yi)制KLK7活性(xing)的(de)藥物制劑(ji)。

2、采用(yong)本(ben)發(fa)明合(he)成方(fang)法副產物(wu)產生的少，雜質(zhi)含(han)量低至0.05％～0.08％。

3、本發明化合物(wu)和(he)其他化合物(wu)聯(lian)用，對(dui)于激肽釋放(fang)酶(mei)KLK7的活(huo)性抑(yi)制效率更高(gao)。

4、在皮膚中主要表(biao)達的絲氨酸蛋(dan)白(bai)酶還包括KLK5，KLK14，Matriptase與(yu)Elastase2。本(ben)發明(ming)化合物合物對(dui)上(shang)述絲氨酸蛋(dan)白(bai)酶在100μM的濃(nong)度(du)下均不變現出(chu)抑制活性，表(biao)明(ming)式其KLK7具有良好特異性。

5、本發明(ming)化合物在pH8，150mM NaCl，37℃的(de)(de)緩(huan)沖液中孵育72h，其對KLK7的(de)(de)抑制活性(xing)維持不變，表明(ming)本發明(ming)化合物的(de)(de)抑制效率高，活性(xing)強(qiang)，并且其抑制效果穩定。

附圖說明

圖1：本發明實施例式化合物II所示的(de)濃(nong)度與抑(yi)制率(lv)的(de)關系曲線；

圖2：本發明化合物II的H¹核磁圖；

圖3：本發明化合物II的C¹³核磁圖；

圖4：實施例7合(he)化合(he)物濃(nong)度與抑制率的(de)關(guan)系曲線。

具體實施方式

下面結合實(shi)施例(li)來進(jin)一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局(ju)限于實(shi)施例(li)表述的范圍。

實施例1

化(hua)合物(wu)在制備抑制激肽釋放酶KLK7的(de)藥(yao)物(wu)上的(de)應用，該化(hua)合物(wu)的(de)結構式為：

實施例2

合成實(shi)施例1所(suo)述(shu)的(de)化合物的(de)方(fang)法，所(suo)述(shu)合成路線如(ru)下：

其中：

物質十二的合成：將物質十、物質十一、POCl₃加入裝有回流冷凝管的圓底燒瓶中，將圓底燒瓶放置于超聲清洗儀中反應，減壓蒸出剩余的POCl₃，殘余物傾倒于(yu)碎冰中(zhong)，碎冰質量(liang)為殘余物的20倍(bei)，析出沉(chen)淀,抽濾，固體用1％～5％的NaOH溶液洗滌，水洗至中(zhong)性(xing)，得物質十二；

物質十三(san)(san)的合(he)成：反應(ying)瓶中加入二氯甲(jia)烷和物質十二，鹽冰(bing)浴冷卻至-15℃，避光(guang)，氮氣保護下，逐滴加入20wt％三(san)(san)溴化硼的無水(shui)二氯甲(jia)烷溶(rong)液，滴加完后(hou)，升溫反應(ying)，反應(ying)結束(shu)后(hou)將反應(ying)液倒(dao)入冰(bing)水(shui)中，冰(bing)水(shui)的質量為反應(ying)液的5倍(bei)，分出有機相(xiang)，水(shui)相(xiang)用乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯萃取三(san)(san)次，每次乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯的體積為水(shui)相(xiang)的0.5倍(bei)，合(he)并(bing)有機相(xiang)，有機相(xiang)用硫酸(suan)鈉干燥，蒸出溶(rong)劑，得物質十三(san)(san)；

物(wu)質(zhi)十(shi)(shi)四的合成(cheng)：將(jiang)氯乙酸與5wt％氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉(na)(na)水(shui)溶(rong)(rong)液(ye)混合得(de)溶(rong)(rong)液(ye)A，將(jiang)物(wu)質(zhi)十(shi)(shi)三(san)與5wt％氫(qing)氧(yang)化(hua)鈉(na)(na)水(shui)溶(rong)(rong)液(ye)混合得(de)溶(rong)(rong)液(ye)B，將(jiang)溶(rong)(rong)液(ye)A加(jia)(jia)(jia)入到反應瓶(ping)中，再滴加(jia)(jia)(jia)溶(rong)(rong)液(ye)B，滴加(jia)(jia)(jia)完畢，升溫反應，冷卻，加(jia)(jia)(jia)5wt％鹽酸酸化(hua)至pH＝1，過濾(lv)、洗滌(di)、干燥得(de)物(wu)質(zhi)十(shi)(shi)四；

物(wu)質(zhi)十(shi)五的合成(cheng)：在(zai)反應瓶中裝有攪(jiao)拌(ban)棒、溫(wen)度計，回流冷凝管，其回流冷凝管連接氯化氫吸收(shou)裝置(zhi)，依次加入氯化亞(ya)砜和物(wu)質(zhi)十(shi)四(si)，攪(jiao)拌(ban)升(sheng)溫(wen)反應，減(jian)壓蒸出低沸物(wu)，瓶內殘余物(wu)即為(wei)物(wu)質(zhi)十(shi)五，不(bu)經分離直接用于下步反應；

化合(he)物(wu)II的(de)合(he)成：在(zai)反(fan)(fan)應瓶中加入上步制(zhi)得的(de)物(wu)質十五，再加入三乙胺(an)、二氯(lv)甲烷(wan)和物(wu)質十六，攪(jiao)拌反(fan)(fan)應，減壓蒸出(chu)溶(rong)劑(ji)，冷卻，過濾，水洗，丙酮洗得化合(he)物(wu)II。

所述物質十、物質十一、POCl₃的質量比為(wei)1:1:3，超聲(sheng)清洗(xi)儀中反(fan)應溫度為(wei)50℃，功(gong)率為(wei)350W，超聲(sheng)作用60分(fen)鐘。

所述二氯(lv)(lv)甲烷(wan)、物質十(shi)二、20wt％三溴化(hua)硼的二氯(lv)(lv)甲烷(wan)溶液的質量比(bi)為(wei)20:1:6，升溫至(zhi)25℃，25℃下反(fan)應2小時(shi)。

所述溶液A中(zhong)氯(lv)乙酸(suan)與(yu)氫氧(yang)化鈉的(de)摩爾(er)比為(wei)1:1，所述溶液B中(zhong)物(wu)質十三與(yu)氫氧(yang)化鈉的(de)摩爾(er)比為(wei)1:1，將溶液A加(jia)入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)瓶中(zhong)，再滴加(jia)溶液B，加(jia)入(ru)到(dao)反(fan)應(ying)瓶中(zhong)的(de)物(wu)質十三與(yu)氯(lv)乙酸(suan)的(de)摩爾(er)比為(wei)1:1，升溫至60℃反(fan)應(ying)1小時，冷(leng)卻至25℃。

所(suo)述物質十四與氯化亞砜的摩爾比為1:1，攪拌升溫至(zhi)60℃，在60℃下反應5小(xiao)時(shi)。

所述物(wu)質十五(wu)、物(wu)質十六、三(san)乙胺和二(er)氯(lv)甲烷的摩爾比1:1:1:5，在0～25℃攪拌2小時。

實施例3

合(he)成實施例(li)1所(suo)(suo)述的化(hua)合(he)物的方法，所(suo)(suo)述合(he)成路線為實施例(li)2所(suo)(suo)述：

物質十二的合成：將物質十、物質十一、POCl₃加入裝有回流冷凝管的圓底燒瓶中，將圓底燒瓶放置于超聲清洗儀中反應，減壓蒸出剩余的POCl₃，殘余物傾倒于碎冰中，碎冰質(zhi)量為殘余物的(de)50倍(bei)，析出沉淀,抽濾，固(gu)體用(yong)5％的(de)NaOH溶液洗滌，水洗至中性，得物質(zhi)十二；

物(wu)(wu)質(zhi)十三(san)的(de)合(he)成：反應(ying)瓶中加入(ru)二(er)(er)氯甲(jia)烷和(he)物(wu)(wu)質(zhi)十二(er)(er)，鹽冰(bing)(bing)浴冷卻至-15℃，避光，氮氣保護(hu)下(xia)，逐滴(di)加入(ru)20wt％三(san)溴化(hua)硼的(de)無水(shui)二(er)(er)氯甲(jia)烷溶(rong)液(ye)，滴(di)加完后，升溫(wen)反應(ying)，反應(ying)結束(shu)后將(jiang)反應(ying)液(ye)倒入(ru)冰(bing)(bing)水(shui)中，冰(bing)(bing)水(shui)的(de)質(zhi)量(liang)為反應(ying)液(ye)的(de)15倍，分出(chu)有機相(xiang)，水(shui)相(xiang)用乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯萃取(qu)三(san)次(ci)，每次(ci)乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯的(de)體積為水(shui)相(xiang)的(de)0.5～5倍，合(he)并有機相(xiang)，有機相(xiang)用硫酸鈉干燥，蒸出(chu)溶(rong)劑，得(de)物(wu)(wu)質(zhi)十三(san)；

物質十四(si)的合(he)成：將氯乙酸與20wt％氫氧化(hua)鈉水溶(rong)液混合(he)得溶(rong)液A，將物質十三與20wt％氫氧化(hua)鈉水溶(rong)液混合(he)得溶(rong)液B，將溶(rong)液A加(jia)(jia)入(ru)到(dao)反應瓶中，再(zai)滴加(jia)(jia)溶(rong)液B，滴加(jia)(jia)完(wan)畢，升(sheng)溫反應，冷卻，加(jia)(jia)20wt％鹽酸酸化(hua)至pH＝2，過(guo)濾、洗滌、干燥(zao)得物質十四(si)；

物(wu)質(zhi)十(shi)五的合成(cheng)：在反(fan)應瓶(ping)中裝有攪拌棒、溫(wen)度(du)計，回流冷凝(ning)管，其回流冷凝(ning)管連接(jie)氯化氫(qing)吸收裝置，依次(ci)加入氯化亞(ya)砜和物(wu)質(zhi)十(shi)四，攪拌升溫(wen)反(fan)應，減壓(ya)蒸(zheng)出低(di)沸物(wu)，瓶(ping)內殘余(yu)物(wu)即為(wei)物(wu)質(zhi)十(shi)五，不經分(fen)離(li)直接(jie)用于下步反(fan)應；

化合(he)物(wu)II的合(he)成：在反應(ying)(ying)瓶中加(jia)入(ru)(ru)上步制得(de)的物(wu)質十(shi)五，再(zai)加(jia)入(ru)(ru)三乙(yi)胺、二(er)氯甲(jia)烷(wan)和物(wu)質十(shi)六，攪拌(ban)反應(ying)(ying)，減(jian)壓蒸出(chu)溶劑(ji)，冷卻，過濾，水(shui)洗，丙酮洗得(de)化合(he)物(wu)II。

所述物質十、物質十一、POCl₃的質量比為(wei)1:1.5:50，超聲清洗儀中反應溫度(du)為(wei)70℃，功率為(wei)350W，超聲作用(yong)120分鐘。

所(suo)述(shu)二氯(lv)甲(jia)烷(wan)、物(wu)質十二、20wt％三溴(xiu)化(hua)硼的(de)二氯(lv)甲(jia)烷(wan)溶液(ye)的(de)質量(liang)比為40:1:15，升溫至25℃，25℃下反應(ying)4小時。

所述溶(rong)液(ye)A中(zhong)氯(lv)乙(yi)酸與(yu)氫(qing)氧化(hua)鈉的摩爾(er)比(bi)為(wei)1:2，所述溶(rong)液(ye)B中(zhong)物質十三(san)與(yu)氫(qing)氧化(hua)鈉的摩爾(er)比(bi)為(wei)1:2，將溶(rong)液(ye)A加入到反(fan)(fan)應(ying)瓶(ping)中(zhong)，再滴(di)加溶(rong)液(ye)B，加入到反(fan)(fan)應(ying)瓶(ping)中(zhong)的物質十三(san)與(yu)氯(lv)乙(yi)酸的摩爾(er)比(bi)為(wei)1:2，升溫至(zhi)90℃反(fan)(fan)應(ying)6小(xiao)時，冷卻至(zhi)25℃。

所述物質十(shi)四(si)與氯化亞砜的摩爾比為(wei)1:4，攪(jiao)拌升(sheng)溫至(zhi)78℃，在78℃下(xia)反應10小時。

所述(shu)物質十五、物質十六、三乙胺(an)和二氯甲烷(wan)的摩(mo)爾比1:2:3:30，在25℃攪拌(ban)2小(xiao)時。

實施例4

合成實施例1所(suo)述的化(hua)合物的方法，所(suo)述合成路(lu)線(xian)為(wei)實施例2所(suo)述：

物質十二的合成：將物質十、物質十一、POCl₃加入裝有回流冷凝管的圓底燒瓶中，將圓底燒瓶放置于超聲清洗儀中反應，減壓蒸出剩余的POCl₃，殘余(yu)物(wu)傾倒于碎冰(bing)(bing)中(zhong)，碎冰(bing)(bing)質(zhi)量為殘余(yu)物(wu)的(de)30倍，析出沉淀(dian),抽濾(lv)，固體(ti)用3％的(de)NaOH溶液(ye)洗(xi)滌，水(shui)洗(xi)至(zhi)中(zhong)性，得(de)物(wu)質(zhi)十二；

物質(zhi)(zhi)十三的(de)(de)合成(cheng)：反(fan)應(ying)瓶中加入二氯甲烷和物質(zhi)(zhi)十二，鹽冰(bing)浴冷卻至-15℃，避光，氮氣(qi)保護下，逐滴加入20wt％三溴化硼(peng)的(de)(de)無(wu)水(shui)二氯甲烷溶(rong)液(ye)(ye)，滴加完(wan)后(hou)，升溫(wen)反(fan)應(ying)，反(fan)應(ying)結束后(hou)將反(fan)應(ying)液(ye)(ye)倒(dao)入冰(bing)水(shui)中，冰(bing)水(shui)的(de)(de)質(zhi)(zhi)量(liang)為反(fan)應(ying)液(ye)(ye)的(de)(de)10倍(bei)，分出(chu)有機相(xiang)，水(shui)相(xiang)用乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯萃取三次，每次乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯的(de)(de)體積為水(shui)相(xiang)的(de)(de)0.3倍(bei)，合并有機相(xiang)，有機相(xiang)用硫(liu)酸(suan)鈉(na)干燥(zao)，蒸出(chu)溶(rong)劑，得(de)物質(zhi)(zhi)十三；

物(wu)質(zhi)十(shi)四(si)的合(he)成(cheng)：將氯乙酸與(yu)15wt％氫氧(yang)化鈉(na)水(shui)溶(rong)液混(hun)合(he)得(de)溶(rong)液A，將物(wu)質(zhi)十(shi)三與(yu)15wt％氫氧(yang)化鈉(na)水(shui)溶(rong)液混(hun)合(he)得(de)溶(rong)液B，將溶(rong)液A加入到反應(ying)瓶中，再滴加溶(rong)液B，滴加完畢(bi)，升溫反應(ying)，冷卻，加15wt％鹽(yan)酸酸化至pH＝1，過濾(lv)、洗(xi)滌、干燥得(de)物(wu)質(zhi)十(shi)四(si)；

物(wu)質十(shi)(shi)五(wu)的合成：在反應(ying)瓶(ping)中裝有攪拌(ban)棒、溫度計，回流冷凝(ning)管(guan)，其回流冷凝(ning)管(guan)連接(jie)氯(lv)化氫吸收裝置，依(yi)次加入(ru)氯(lv)化亞砜和物(wu)質十(shi)(shi)四，攪拌(ban)升(sheng)溫反應(ying)，減壓蒸出低沸物(wu)，瓶(ping)內殘(can)余物(wu)即為物(wu)質十(shi)(shi)五(wu)，不經分(fen)離直接(jie)用于下步反應(ying)；

化(hua)合(he)物(wu)II的合(he)成：在反(fan)應瓶中(zhong)加入(ru)上步制得(de)的物(wu)質十(shi)五(wu)，再加入(ru)三乙胺、二氯甲烷(wan)和物(wu)質十(shi)六，攪拌反(fan)應，減(jian)壓蒸出(chu)溶劑，冷卻，過濾(lv)，水(shui)洗(xi)，丙酮洗(xi)得(de)化(hua)合(he)物(wu)II。

所述物質十、物質十一、POCl₃的質量(liang)比為(wei)(wei)1:1.2:40，超聲清洗儀中(zhong)反應溫(wen)度為(wei)(wei)60℃，功率為(wei)(wei)350W，超聲作用(yong)100分鐘(zhong)。

所(suo)述二(er)氯(lv)甲烷、物質十二(er)、20wt％三溴(xiu)化硼的二(er)氯(lv)甲烷溶液的質量比(bi)為(wei)30:1:10，升溫至(zhi)25℃，25℃下反應3小時。

所(suo)述(shu)溶液(ye)(ye)A中(zhong)氯(lv)乙(yi)酸(suan)與氫氧化鈉(na)的(de)摩爾比(bi)為(wei)(wei)1:1.5，所(suo)述(shu)溶液(ye)(ye)B中(zhong)物(wu)質(zhi)十(shi)三與氫氧化鈉(na)的(de)摩爾比(bi)為(wei)(wei)1:1.5，將溶液(ye)(ye)A加入到(dao)反(fan)應(ying)瓶中(zhong)，再(zai)滴(di)加溶液(ye)(ye)B，加入到(dao)反(fan)應(ying)瓶中(zhong)的(de)物(wu)質(zhi)十(shi)三與氯(lv)乙(yi)酸(suan)的(de)摩爾比(bi)為(wei)(wei)1:1.5，升溫至80℃反(fan)應(ying)4小時，冷卻至25℃。

所述物質十四與氯化亞砜的摩爾(er)比為(wei)1:3，攪拌升溫至(zhi)70℃，在70℃下反應8小時。

所述物質(zhi)十五、物質(zhi)十六、三乙胺和二氯(lv)甲烷的摩(mo)爾比1:1:5:2:3，在20℃攪拌2小時。

實施例5

1)將化合物II溶解在DMSO中，配置成濃度10mM的母液；

2)在KLK7活性緩沖液中加(jia)入化合物II，配制成6.25μM,12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM的溶液，并在37℃作用15分(fen)鐘；

3)加入熒光底物MCa-R-P-K-P-V-E-Nval-W-R-K(Dnp)-NH₂，在37℃下測KLK7的活性(xing)15分(fen)鐘，采用熒(ying)光(guang)酶標儀(yi)檢測熒(ying)光(guang)值(zhi)，根(gen)據熒(ying)光(guang)值(zhi)的大小計算(suan)KLK7的活性(xing)。

陰性對照組：在KLK7的活性緩沖液中加入DMSO，其它(ta)操(cao)作條(tiao)件均與實驗組相同。

根據上述(shu)實驗組和陰(yin)性對照組獲得的KLK7的活性計(ji)算化合物(wu)II對KLK7的抑制率(lv)，計(ji)算抑制率(lv)的公式為％inhibition＝(1-a/b)×100％，計(ji)算結果(guo)如表1所(suo)示(shi)；其(qi)中，a為待測(ce)樣品的酶活，b為陰(yin)性對照的酶活。

表1為化合物II在不同(tong)濃(nong)度下對KLK7活性的(de)抑(yi)制率，根(gen)據表1所(suo)示的(de)結果繪(hui)制化合物II的(de)濃(nong)度與(yu)(yu)抑(yi)制率的(de)關(guan)系(xi)圖，采(cai)用(yong)KaleidaGraph軟件進(jin)行曲線擬合得到化合物II的(de)濃(nong)度與(yu)(yu)抑(yi)制率的(de)關(guan)系(xi)曲線，如圖1所(suo)示。

由表1和(he)圖1的(de)(de)結(jie)果可(ke)以看出(chu)，隨(sui)著(zhu)化合物II濃度(du)的(de)(de)增加，對KLK7活性的(de)(de)抑制(zhi)率逐漸(jian)增高，式化合物II的(de)(de)濃度(du)為(wei)200μM時，對KLK7活性的(de)(de)抑制(zhi)率達到100％。

因(yin)此，式化合物(wu)II對KLK7具有優異(yi)的(de)(de)抑制效果，該化合物(wu)作為(wei)活性(xing)組分(fen)加入適當的(de)(de)輔料和助劑可(ke)制備成抑制KLK7活性(xing)的(de)(de)藥物(wu)制劑。

化(hua)合物(wu)II在不同(tong)濃度(du)下(xia)對KLK7活(huo)性的抑制率

由上述描述可以(yi)看出，本發明提(ti)供的(de)(de)(de)抑制(zhi)(zhi)激(ji)肽(tai)釋放酶KLK7的(de)(de)(de)化合物的(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備方法簡單(dan)易行，能夠有(you)效的(de)(de)(de)抑制(zhi)(zhi)KLK7的(de)(de)(de)活性，加(jia)入適當的(de)(de)(de)輔料和助劑可制(zhi)(zhi)備成(cheng)抑制(zhi)(zhi)KLK7活性的(de)(de)(de)藥物制(zhi)(zhi)劑。

實施例6

所述制備(bei)抑制激(ji)肽釋(shi)放酶KLK7的(de)藥(yao)物(wu)上的(de)應用(yong)的(de)藥(yao)物(wu)包(bao)括(kuo)：

所述化(hua)(hua)合物(wu)(wu)I、化(hua)(hua)合物(wu)(wu)II、化(hua)(hua)合物(wu)(wu)III、化(hua)(hua)合物(wu)(wu)IV和化(hua)(hua)合物(wu)(wu)V的質量比為1:1～2:1～2.5：2～3：1～2。

實施例7

實(shi)施例6組(zu)合物的(de)(de)中按摩爾(er)比為1:1:1：1：1混合后，按照(zhao)實(shi)施例5的(de)(de)方法測試不(bu)同濃(nong)度(du)下對KLK7活性的(de)(de)抑制率，結果見表2和圖4

表2混(hun)合物(wu)在不同(tong)濃度下(xia)對KLK7活性(xing)的(de)抑制率(lv)

由表2結果證明，式化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)I、化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)II、化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)III、化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)IV和化(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)V聯(lian)用效果要比單(dan)獨使用效果更加(jia)顯(xian)著，同樣的添加(jia)量情況下，混合(he)(he)物(wu)(wu)的藥效要比單(dan)獨使用時對KLK7活性抑制(zhi)率更高。

實施例8

合成(cheng)(cheng)化合物(wu)I的方法，所(suo)述合成(cheng)(cheng)路線(xian)如下(xia)：

其中：

物(wu)(wu)(wu)質(zhi)三的合成：向反應瓶(ping)中加入(ru)乙(yi)(yi)醇、物(wu)(wu)(wu)質(zhi)一、質(zhi)量(liang)濃度37％的甲醛水溶(rong)液、氫(qing)氧化鈉以(yi)及物(wu)(wu)(wu)質(zhi)二(er)，反應，反應完畢，乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯(zhi)萃取三次(ci)，每次(ci)乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯(zhi)的用量(liang)為前(qian)述乙(yi)(yi)醇體積的1～5倍(bei)，合并有(you)機相(xiang)，蒸餾，冷卻，過濾，水洗(xi)，乙(yi)(yi)醇洗(xi)，干燥(zao)得(de)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)三；

物質(zhi)(zhi)四(si)的(de)(de)合成：向反應(ying)(ying)瓶中加入物質(zhi)(zhi)三(san)、醋(cu)酐，控制(zhi)溫度為-12℃，滴加質(zhi)(zhi)量濃(nong)度為90％的(de)(de)發煙硝酸(suan)反應(ying)(ying)，反應(ying)(ying)完畢，升至25℃，倒(dao)入冰水(shui)中，冰水(shui)的(de)(de)體積(ji)為反應(ying)(ying)液(ye)5-10倍，過濾，先用1～5％碳(tan)酸(suan)氫鈉溶液(ye)洗，再用冰水(shui)洗，干燥得物質(zhi)(zhi)四(si)；

物(wu)質五的(de)合成：向反應(ying)瓶中加(jia)(jia)入乙(yi)(yi)醇(chun)、水(shui)、醋酸(suan)、鐵粉(fen)、氯化銨和(he)物(wu)質四，回(hui)流反應(ying)，再加(jia)(jia)入乙(yi)(yi)醇(chun)，第二次加(jia)(jia)入乙(yi)(yi)醇(chun)的(de)質量為(wei)物(wu)質四的(de)5倍(bei)，趁熱過(guo)濾(lv)(lv)，濾(lv)(lv)液冷卻(que)至25℃，倒入冰(bing)水(shui)中，冰(bing)水(shui)的(de)體積為(wei)濾(lv)(lv)液的(de)10倍(bei)，過(guo)濾(lv)(lv)，水(shui)洗，干燥得物(wu)質五；

物(wu)質(zhi)七的合成：向反(fan)(fan)應(ying)瓶中加入物(wu)質(zhi)五、物(wu)質(zhi)六、二甲(jia)基甲(jia)酰胺、碳酸鉀，反(fan)(fan)應(ying)，冷卻至25℃，將反(fan)(fan)應(ying)液加入到冰水中，冰水的質(zhi)量為反(fan)(fan)應(ying)液的10倍(bei)，過濾(lv)，水洗，干(gan)燥得物(wu)質(zhi)七。

物(wu)質八的(de)(de)合成：向反應瓶(ping)中加入物(wu)質七和吡(bi)啶的(de)(de)混合物(wu)，再滴加三氯(lv)(lv)(lv)氧磷(lin)，升(sheng)溫(wen)反應，將(jiang)反應液冷(leng)卻，加入氯(lv)(lv)(lv)仿，攪拌，冷(leng)卻，加入冷(leng)水，分出有(you)機(ji)相，冷(leng)水洗氯(lv)(lv)(lv)仿層(ceng)為中性，濃縮除去(qu)氯(lv)(lv)(lv)仿，干燥得物(wu)質八。

化合物(wu)I的合成：將二甲基甲酰胺(an)、物(wu)質八(ba)、碳酸鉀和物(wu)質九依次加到反(fan)應(ying)(ying)瓶中，加熱反(fan)應(ying)(ying)，冷卻，將反(fan)應(ying)(ying)液倒(dao)入水中，抽濾，濾餅用水淋洗，干燥得化合物(wu)I。

所述(shu)物(wu)質二、質量(liang)濃度37％的甲醛水溶液、物(wu)質一、氫(qing)氧化(hua)鈉和(he)乙(yi)醇(chun)的質量(liang)比為(wei)1:1:1:1:5，25℃下反(fan)應2時(shi)。

所(suo)述(shu)物(wu)質(zhi)三、醋酐、硝(xiao)酸的(de)質(zhi)量比為1:0.5:0.5，在-5℃下反應4小時。

所述物(wu)質(zhi)四、乙醇、水、醋酸、鐵粉、氯(lv)化銨質(zhi)量比為1:2.5:2:0.05:1:0.02，回流反應2小(xiao)時。

所述(shu)物質五、物質六、碳酸(suan)鉀、二甲(jia)基甲(jia)酰(xian)胺(an)的摩(mo)爾比為1:1:1:10，升(sheng)溫至80℃反應4小時。

所述物質七、吡(bi)啶(ding)、三氯(lv)(lv)氧磷(lin)的摩(mo)爾比為(wei)(wei)(wei)(wei)1:1:1.5，加畢，升溫至(zhi)100℃反應(ying)3小時，將反應(ying)液(ye)冷卻至(zhi)50℃，加入氯(lv)(lv)仿，氯(lv)(lv)仿的體積為(wei)(wei)(wei)(wei)吡(bi)啶(ding)的40倍，攪拌1小時，冷卻至(zhi)0℃，加入5℃的冷水，冷水的體積為(wei)(wei)(wei)(wei)氯(lv)(lv)仿的0.6倍，分(fen)出有(you)機(ji)相(xiang)，冷水洗(xi)氯(lv)(lv)仿層(ceng)為(wei)(wei)(wei)(wei)中性，濃(nong)縮除(chu)去氯(lv)(lv)仿，干燥得物質八。

所述物質八、物質九、碳(tan)酸鉀、二甲基甲酰(xian)胺的(de)摩爾比(bi)為(wei)1:2:2:20，加(jia)熱至50℃，反應(ying)(ying)1h，冷卻，將反應(ying)(ying)液(ye)(ye)倒入水中，水的(de)體積為(wei)反應(ying)(ying)液(ye)(ye)的(de)10倍，抽濾(lv)，濾(lv)餅用水淋(lin)洗，干燥得化(hua)合物I。

實施例9

合成(cheng)化合物III的方法，所述合成(cheng)路線如下：

其中：

物(wu)質(zhi)十八(ba)的合成：將物(wu)質(zhi)十七、KOH、水、二硫化碳加(jia)(jia)入到反(fan)應瓶，，加(jia)(jia)熱至(zhi)回(hui)流，反(fan)應2小(xiao)時(shi)，冷至(zhi)25℃，過濾(lv)，濾(lv)液用1wt％鹽酸調節pH值析出(chu)物(wu)質(zhi)十八(ba)，過濾(lv)、洗滌、干(gan)燥得物(wu)質(zhi)十八(ba)；

物(wu)質二十的合成：向反應瓶中加入物(wu)質十八、物(wu)質十九、甲(jia)苯和碳酸鉀，回流反應，冷卻過(guo)濾，用二氯(lv)甲(jia)烷(wan)(wan)洗(xi)固體，濾液減(jian)壓(ya)濃縮，殘留物(wu)用硅膠層析，己烷(wan)(wan)-乙酸乙酯洗(xi)脫，得物(wu)質二十。

化合(he)物III的合(he)成：向反應瓶中(zhong)加入(ru)物質二十、4-氟芐氯、NaOH、乙(yi)(yi)(yi)腈，回流(liu)反應，冷卻，減(jian)壓(ya)蒸(zheng)出溶劑(ji)得殘留物，殘留物用乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯萃取三次，每次乙(yi)(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)(yi)酯的體積為殘留物的2倍，有機相水洗，再用無(wu)水硫酸(suan)鈉(na)干燥，過濾，濾液(ye)減(jian)壓(ya)蒸(zheng)出溶劑(ji)得粗(cu)品(pin)，粗(cu)品(pin)以乙(yi)(yi)(yi)腈重結(jie)晶得化合(he)物III。

所述物質十七、二硫化(hua)碳、KOH、水(shui)的(de)摩爾比為(wei)1:1:1:5。

所(suo)述物質十八、物質十九、碳(tan)酸(suan)鉀(jia)、甲苯的摩(mo)爾比為(wei)1:1:1:5，回流反應，冷(leng)卻，所(suo)述己烷-乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯體(ti)積比為(wei)2:1。

所述物質(zhi)二十合(he)成中回流反(fan)應(ying)時間為4小時，冷卻(que)至25℃。

所(suo)述物質二十、4-氟芐(xia)氯、NaOH、乙(yi)腈的摩爾比為1:1:1:10，回流反應4小(xiao)時。

實施例10

合(he)成化合(he)物Ⅳ的(de)方法，所述合(he)成路線如下：

其中：

物質(zhi)二(er)(er)十(shi)(shi)三(san)的合成：將物質(zhi)二(er)(er)十(shi)(shi)一、物質(zhi)二(er)(er)十(shi)(shi)二(er)(er)、冰(bing)醋酸加入到反(fan)(fan)應(ying)瓶(ping)，加熱(re)至回流反(fan)(fan)應(ying)4-～8小時，冷卻，過濾，水洗，二(er)(er)氯(lv)甲烷洗，得(de)物質(zhi)二(er)(er)十(shi)(shi)三(san)；

物(wu)質二十四的合(he)成：向反(fan)應瓶中加(jia)入(ru)物(wu)質二十三和(he)吡啶的混合(he)物(wu)，再滴加(jia)三氯(lv)(lv)(lv)氧磷(lin)，加(jia)畢，升溫(wen)反(fan)應，反(fan)應結束后將反(fan)應液冷(leng)(leng)卻至50℃，加(jia)入(ru)氯(lv)(lv)(lv)仿(fang)，攪(jiao)拌反(fan)應，冷(leng)(leng)卻至5℃，加(jia)入(ru)冷(leng)(leng)水，分出(chu)有機相，冷(leng)(leng)水洗氯(lv)(lv)(lv)仿(fang)層為中性，濃縮(suo)除去氯(lv)(lv)(lv)仿(fang)，干燥得物(wu)質二十四；

化(hua)(hua)合物Ⅳ的合成(cheng)：向反(fan)應瓶中加入物質二(er)十四、物質二(er)十五、甲苯、碳酸鉀，回流反(fan)應4小時，冷至25℃，過濾，用二(er)氯甲烷洗(xi)固體，濾液(ye)減(jian)壓濃縮得(de)粗(cu)品，粗(cu)品以氯仿重結晶得(de)化(hua)(hua)合物Ⅳ。

所述物質(zhi)二(er)(er)十(shi)一、物質(zhi)二(er)(er)十(shi)二(er)(er)、冰醋酸的摩爾(er)比為1:1:1.5，回流反應4小時，冷卻至25℃。

所述(shu)(shu)物質二十三、吡啶、三氯(lv)氧磷的摩爾比(bi)為1:1:1.5，升溫至110℃反(fan)應2小時(shi)，將反(fan)應液冷(leng)卻至50℃，加入氯(lv)仿，所述(shu)(shu)氯(lv)仿的體積為吡啶的30倍(bei)，攪拌反(fan)應1小時(shi)，冷(leng)卻至0℃，加入5℃的冷(leng)水，冷(leng)水的體積為氯(lv)仿的0.5倍(bei)。

實施例11

合成(cheng)化(hua)合物(wu)V的(de)工藝(yi)，所述(shu)合成(cheng)路(lu)線如(ru)下：

其中：

物(wu)(wu)質(zhi)二(er)(er)十八的合(he)成：將(jiang)物(wu)(wu)質(zhi)二(er)(er)十六和物(wu)(wu)質(zhi)二(er)(er)十七加入干燥圓底(di)燒瓶中，升(sheng)溫進行(xing)攪拌反(fan)應(ying)，薄(bo)層色譜跟蹤反(fan)應(ying)至原(yuan)料消(xiao)失，將(jiang)混合(he)物(wu)(wu)冷卻至25℃，倒入冰水(shui)混合(he)物(wu)(wu)中，過濾，水(shui)洗，氯仿洗，得(de)物(wu)(wu)質(zhi)二(er)(er)十八；

物(wu)(wu)質(zhi)二(er)十九(jiu)的合(he)成:反應(ying)(ying)瓶中加入依次乙醚、氫化鋰(li)鋁，攪拌溶(rong)解，冰水浴冷卻至0℃，再緩慢(man)加入物(wu)(wu)質(zhi)二(er)十八，加料完畢，冰水浴下(xia)反應(ying)(ying)，將反應(ying)(ying)液倒入冰水中，靜置讓沉淀物(wu)(wu)停在底部，過濾，氯仿洗濾渣，濾液分(fen)出有(you)機相(xiang)(xiang)，水相(xiang)(xiang)以氯仿萃(cui)取三次，有(you)機相(xiang)(xiang)合(he)并，減壓(ya)濃縮得物(wu)(wu)質(zhi)二(er)十九(jiu)。

化合(he)物(wu)V的(de)(de)(de)合(he)成：在反(fan)應中加(jia)(jia)入物(wu)質二十(shi)九、三乙胺、二氯(lv)甲烷和(he)物(wu)質三十(shi)，攪拌反(fan)應，濃(nong)縮除去二氯(lv)甲烷，然(ran)后加(jia)(jia)水，加(jia)(jia)水質量(liang)為(wei)濃(nong)縮物(wu)的(de)(de)(de)10倍，用氯(lv)仿萃取(qu)三次，萃取(qu)劑氯(lv)仿每(mei)次用量(liang)為(wei)前述所(suo)加(jia)(jia)水的(de)(de)(de)體積(ji)的(de)(de)(de)1倍，有機相合(he)并，減壓濃(nong)縮得(de)粗品，粗品用氯(lv)仿重結晶(jing)得(de)化合(he)物(wu)V。

所述(shu)物(wu)(wu)質二(er)十(shi)六、物(wu)(wu)質二(er)十(shi)七(qi)的摩爾比為(wei)1:1.，升至80℃進行攪拌反應，所述(shu)冰水混合物(wu)(wu)的質量為(wei)物(wu)(wu)質二(er)十(shi)六的5倍。

所述(shu)物質二十八、氫化鋰鋁、乙醚的質量比為(wei)(wei)1:0.5:15，加(jia)料速(su)度以微回流為(wei)(wei)宜，所述(shu)冰(bing)水(shui)浴下(xia)反應(ying)1.5小時，將反應(ying)液倒入冰(bing)水(shui)中，冰(bing)水(shui)的體(ti)積(ji)為(wei)(wei)反應(ying)液的1倍(bei)，萃取(qu)劑氯仿每次用量為(wei)(wei)水(shui)相體(ti)積(ji)的1倍(bei)。

所(suo)述物質二(er)十九、物質三十、三乙胺和二(er)氯甲烷的摩(mo)爾比(bi)為(wei)1:1:1:10，25℃攪拌(ban)1.5小時(shi)。

上述的(de)實施例(li)僅(jin)為本(ben)(ben)(ben)發(fa)明的(de)優選(xuan)技術方案，而不(bu)應視為對于本(ben)(ben)(ben)發(fa)明的(de)限制，本(ben)(ben)(ben)申(shen)請(qing)中(zhong)的(de)實施例(li)及實施例(li)中(zhong)的(de)特(te)征在(zai)不(bu)沖(chong)突的(de)情況下，可以相互任意(yi)組合(he)。本(ben)(ben)(ben)發(fa)明的(de)保護(hu)范圍(wei)應以權利要求(qiu)記載的(de)技術方案，包(bao)括權利要求(qiu)記載的(de)技術方案中(zhong)技術特(te)征的(de)等同替換(huan)方案為保護(hu)范圍(wei)。即(ji)在(zai)此范圍(wei)內的(de)等同替換(huan)改(gai)進，也在(zai)本(ben)(ben)(ben)發(fa)明的(de)保護(hu)范圍(wei)之內。