激肽釋放酶7小分子抑制劑及其制備方法、用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物化學領域，特別是指一種激肽釋放酶7小分子抑制劑及其制備方 法、用途。
【背景技術】
[0002] 特應性皮炎（AD)是一種廣泛傳播的慢性炎癥性皮膚病，特點是干燥、鱗狀皮膚、 炎癥、皮膚滲透性增加，AD病人的皮膚對環境中常見的而對正常人無害的因素也會很敏感 從而易于受到表面感染。在過去的30年間工業化國家的特應性皮炎的發病率增長了 2到 3倍，據估計兒童的特應性皮炎患病率達到了 15-30%，成人的特應性皮炎患病率達到了 2-10%。由于發病機制的復雜性，對AD的發病機制了解得不多，但皮膚屏障功能紊亂已經 被證實是AD發展過程中的關鍵因素之一。
[0003] 皮膚屏障的穩定依賴于顆粒層的角質形成細胞分化為角質細胞和皮膚表層角質 細胞脫落（即脫肩）之間的平衡，皮膚的脫肩過程包括由（激肽釋放酶）KLKs參與的橋粒的 降解，由于橋粒是角質細胞的粘連蛋白，橋粒的降解則會導致角質細胞脫落而致皮膚脫肩。 證據顯示，局部或暫時性的KLKs活性控制的失調，是AD病人皮膚屏障穩定缺失的主要原因 之一。
[0004] KLKs(Kallikreins，激肽釋放酶）是具有胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶特異性的絲氨 酸蛋白酶，其編碼基因定位于19ql3. 4,編碼15個分泌型絲氨酸蛋白酶KLK I-KLK 15。已經 證明，KLKs存在于正常人的角質層細胞中，目前發現，至少有8種KLK (KLK 5, KLK 6, KLK7， KLK8，KLK 10，KLK11，KLK13和KLK 14)存在于人的角質層和汗液中。
[0005] 其中，KLK7占總量的40%。KLK7可能是皮膚損傷的一個關鍵酶，而且在AD病人 中它可能參與一個系統性炎癥反應，在AD的角質層KLK7升高最為突出，這提示KLK7在AD 的發病機制上可能是至關重要的，因此，抑制KLK7的活性對于AD的治療顯得最為重要。
[0006] LEKTI (Lympho-epithelial Kazal-type-related inhibitor,淋巴上皮組織 Kazal型相關蛋白抑制劑）是由SPINK5基因編碼的絲氨酸蛋白酶抑制劑家族的成員，LEKTI 前體包含一個信號肽和彼此隔開的15個絲氨酸蛋白酶抑制域（D1-D15)，表達后迅速被弗 林蛋白酶水解為幾個蛋白片段，其中包含D6-D9抑制域的LEKTI能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋 白酶、KLK5和KLK7等酶的活性。LEKTI的內源靶至少包括KLK5、KLK7和KLK14,它們共同 參與皮膚的脫肩過程。在AD病人，LEKTI表達水平嚴重降低，導致了 KLK7活性的異常升高。
[0007] 盡管LEKTI是表皮內KLK7的天然抑制劑，但作為治療AD的外用藥，其不能透過皮 膚角質層，同時由于其大分子蛋白質的特性也會導致其降解速度過快，因而將LEKTI作為 外用藥作用非常有限。并且，到目前為止，還沒有一種有效的KLK7小分子抑制劑應用于臨 床。因此，如果能得到作為皮膚外用藥的KLK7的小分子抑制劑，將有助于AD的治療。
【發明內容】
[0008] 有鑒于此，本發明的目的在于提出一種激肽釋放酶7小分子抑制劑及其制備方 法、用途，其作為小分子抑制劑能有效抑制KLK7,具有應用于制備特應性皮炎的治療藥物的 前景。
[0009] 本發明通過以KLK7作為靶分子，根據KLK7的晶體結構，以及藥效團模型進行分析 與篩選，合成出具有KLK7抑制作用的小分子化合物，經實驗驗證，該化合物具有顯著的抑 制KLK7作用。
[0010] 基于上述目的本發明提供的激肽釋放酶7小分子抑制劑的化合物結構由式⑴表 示：
[0012] 基于相同的發明構思，本發明還提供了激肽釋放酶7小分子抑制劑的制備方法， 包括以下步驟：
[0013] 步驟1) 2-甲基吲哚-3-乙酸（II )、1-氯丙烷、甲苯、碳酸鉀混合后，回流反應3-4 小時，過柱分離得化合物（III);
[0015] 步驟2)化合物（III)與二苯醚混合，升溫至110_130°C，光照下通入氯氣，控制反 應溫度160-180°C，冷卻至80-100°C，加入磷酸鋅，再加入水及重量濃度為20%的純堿溶 液，回流1-3小時，過柱分離得化合物（IV );
[0016]
[0017] 步驟3)化合物（IV)、水合肼、乙醇混合后，回流反應8-12小時，過柱分離得化合 物（V );
[0019] 步驟4)化合物（V )、中間體化合物（VI )、甲苯、碳酸鉀，回流反應3-5小時后， 過柱分離得化合物（I)。
[0021] 優選地，步驟1)中所述的2-甲基吲哚-3-乙酸、1-氯丙烷、碳酸鉀、甲苯的摩爾比 為 0· 5 ~2:0. 9 ~1. 3:0. 5 ~2:8 ~12〇
[0022] 優選地，步驟2)中所述的化合物（III)、二苯醚、氯氣、磷酸鋅、水、純堿的摩爾比為 0· 5 ~2:8 ~12:1. 8 ~2. 4:0. 001 ~0· 003:1. 2 ~I. 6:0. 1 ~0· 3。
[0023] 優選地，步驟3)中所述的化合物（IV)、水合肼、乙醇的摩爾比為1.0:1.5:10。
[0024] 優選地，步驟4)中所述的化合物（V )、中間體化合物（VI )、碳酸鉀、甲苯的摩爾 比為 0· 5 ~2:0. 9 ~1. 3:0. 5 ~2:8 ~12。
[0025] 優選地，所述中間體化合物（VI )的合成包括以下步驟：
[0026] 化合物（VE )、三苯基氯甲烷、氯仿、三乙胺混合，室溫下攪拌反應，過柱分離得化 合物（VID );
[0028] 化合物（VID)、對甲芐氯、甲苯、碳酸鉀混合，回流反應3-4小時，過柱分離得化合物 (IX);
[0030] 化合物（IX )與80%醋酸水溶液混合，加熱回流1小時，加入氫氧化鈉溶液，游離 出堿性化合物，過柱分離得化合物（X );
[0032] 化合物（X )、乙醚、三乙胺混合，再滴加氯乙酰氯，室溫反應，過柱分離得化合物
[0034] 基于相同的發明構思，本發明還提供了上述激肽釋放酶7小分子抑制劑的應用， 即將所述激肽釋放酶7小分子抑制劑用于抑制激肽釋放酶7的活性，制備治療特應性皮炎 的藥物。
[0035] 基于相同的發明構思，本發明還提供了一種治療特應性皮炎的藥物組合物，其中 含有所述的激肽釋放酶7小分子抑制劑作為有效成分。
[0036] 優選地，上述藥物組合物為外用膏劑或外用噴霧制劑。
[0037] 從上面所述可以看出，本發明提供的激肽釋放酶7小分子抑制劑及其制備方法、 用途，該抑制劑為小分子抑制劑，避免了傳統KLK7的天然抑制劑作為治療AD的外用藥時由 于分子大而不能透過皮膚角質層、吸收慢降解快等問題，該小分子抑制劑合成方法簡單，操 作方便，吸收快，有效抑制KLK7,具有應用于臨床特應性皮炎的治療藥物的制備前景。
【附圖說明】
[0038] 圖1為本發明的實施例所涉及的激肽釋放酶7小分子抑制劑的IC5。曲線擬合圖；
[0039] 圖2本發明的實施例所涉及的激肽釋放酶7小分子抑制劑的核磁圖。
【具體實施方式】
[0040] 為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，以下結合具體實施例，并參照 附圖，對本發明進一步詳細說明。
[0041 ] 實施例1 :激肽釋放酶7小分子抑制劑的制備
[0042] 向反應瓶中加入2-甲基吲哚-3-乙酸（II )、1_氯丙烷、甲苯、碳酸鉀，回流反 應4小時。其中，2-甲基吲哚-3-乙酸：1-氯丙烷：碳酸鉀：甲苯=1:1.2 :1:10(摩爾 比），過柱分離得化合物（III)。隨后，向反應瓶中加入化合物（III)、二苯醚混合后，升溫 至ll〇°C，打開光照，通入氯氣，控制反應溫度180°C，通完氯氣后，冷卻至80°C，加入磷酸 鋅，再加入水和重量濃度為20%的純堿溶液，回流1小時，過柱分離得化合物（IV )。其 中，化合物（III):二苯醚：氯氣：磷酸鋅：水（不包括純堿溶液中的水）：純堿（100% )= 1. 0:10. 0:2. 2:0. 001:1. 4:0. 3 (摩爾比），過柱分離得化合物（IV)。向反應瓶中加入化合物 (IV)，水合肼，乙醇，回流反應8小時。其中，化合物（IV):水合肼：乙醇=1.0:1.5:10(摩 爾比），過柱分離得化合物（V)。