一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素?lr電化學檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素?LR電化學檢測方法，該方法包括以下步驟：(1)在MCH/Au NPs/Au電極的表面分別滴加體積比為(9?11):(4?6):(2?4):(1?3)的核酸內切酶反應緩沖液、石墨烯?適配體復合物、待測的微囊藻毒素?LR溶液和核酸內切酶溶液；(2)將MCH/Au NPs/Au電極在25?35℃下培養1?2個小時，用乙醇和超純水輕輕淋洗電極表面，去除結合較弱的石墨烯，隨后在氮氣下干燥，取出后進行電化學方法檢測，測定微囊藻毒素?LR溶液的濃度。本發明所建立的方法利用了高靈敏的電化學分析技術與高專一性識別能力的核酸適配體有效地結合，實現了環境中痕量微囊藻毒素?LR的超靈敏、高專一性的檢測，且儀器廉價便攜，方法簡單易行，可以快速得到結果。
【專利說明】
_種石墨稀信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種微囊藻毒素-LR的檢測方法，尤其是涉及一種石墨烯信號放大的 微囊藻毒素-LR電化學檢測方法。
【背景技術】
[0002] 近年來，環境問題尤為嚴重，許多水域都出現了藍藻爆發的情況。微囊藻毒素 (MicrocystinsMCs)是由藍藻在富營養化水體中產生的一種生物毒素，它是由七個氨基酸 構成的具有生物活性的環狀七肽類化合物。微囊藻毒素有著許多種類，目前已確認的異構 體就達九十多種。其中微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR，MC-LR)便是其中的一種異構體，微 囊藻毒素-LR在水中存在最為普遍，也是毒性最強的一種微囊藻毒素，對水體中微囊藻毒 素-LR含量進行控制與高靈敏監測具有非常重要的環境意義。
[0003] 目前，測定微囊藻毒素 -LR的方法主要是采用傳統儀器分析方法，例如高效液相色 譜法，液-質聯用法等，這些方法具有好的靈敏度和準確性，然而分析過程往往非常復雜，費 力且耗時。近年來，有研究工作者利用抗體的特異性識別作用，構建微囊藻毒素 -LR的免疫 傳感器，實現了對微囊藻毒素 -LR的較為簡單、快捷的檢測，并取得較高的靈敏度和選擇性。 然而，微囊藻毒素 -LR抗體提取的成本較高，過程極其復雜，且提取周期較長，因此在實際應 用中鮮有報道。
[0004] 核酸適配體，是通過SELEX技術篩選出具有高度專一性結合靶物質的一系列短鏈 核苷酸序列，具有類似于抗體的特異性識別性能，具有可在體外化合成，合成周期短，不需 要復雜的提取步驟，且穩定性好等優于抗體的諸多性質。由于其獨特的性能，基于不同方法 發展的核酸適配體傳感器具有廣泛的應用前景。自從微囊藻毒素-LR的核酸適配體于2004 年被篩選出來后，用于微囊藻毒素-LR測定的適配體傳感器已有大量報道，如熒光法，比色 法等。其中，熒光適配體傳感器需要對適配體進行熒光基團標記來獲得響應信號，因此標記 過程復雜，費時，且可能對微囊藻毒素-LR和適配體間的親和性有一定影響。比色適配體傳 感器，方法簡單，快速，但往往靈敏度較低。而電化學分析方法由于其具有操作簡單、響應快 速，且靈敏度高，環境友好，易實現在線監測等優點，受到了越來越多的關注與應用。因此， 我們設想將高靈敏的電化學分析方法，與具有高親和力的核酸適配體技術相結合，構筑微 囊藻毒素-LR的電化學適配體傳感器，進而建立用于實現高靈敏、高選擇性檢測微囊藻毒 素-LR新型電化學分析方法。中國專利200810242879.5公開了一種微囊藻毒素-LR定量快速 檢測傳感器的制備及應用，但是該專利為選用生物抗體作為選擇性機制的電化學傳感器， 相對于核酸適配體，抗體培養的成本與周期較核酸適配體高，且過程較為復雜，不是很適合 在實際檢測中使用。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種制備簡單、成本 低廉、高靈敏度高選擇性的檢測微囊藻毒素-LR的電化學檢測方法。
[0006]本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：
[0007] 金納米粒子(Au NPs)修飾裸金電極(Bare Au)為基體電極，同時在體系外將石墨 烯與適配體復合形成石墨烯_適配體復合物，與核酸內切酶結合，構筑了一種簡單，快速的 電化學檢測方法，可實現高靈敏和高選擇性檢測MC-LR。
[0008] -種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，該方法包括以下步驟：
[0009] (1)在MCH/Au NPs/Au電極的表面依次滴加體積比為（9-11): (4-6): (2-4): (1-3) 的核酸內切酶反應緩沖液、石墨烯-適配體復合物、待測的微囊藻毒素-LR溶液和核酸內切 酶溶液；
[0010] (2)將MCH/Au NPs/Au電極在25-35°C下培養1~2個小時，用乙醇和超純水淋洗電 極表面，去除結合較弱的石墨烯，隨后在氮氣下干燥，取出后進行電化學方法檢測，測定微 囊藻毒素-LR溶液的濃度。
[0011] 所述的MCH/Au NPs/Au電極采用以下步驟制備：
[0012] (1)以金電極為工作電極，含有濃度為1~5mmol/L氯金酸的0 ? 05-0 ? 2mol/L的KC1 溶液為電解液，采用三電極體系，在-1.2-1.0V電位范圍內進行循環伏安法掃描，掃描圈數 為10-25圈，得到Au NPs/Au電極；
[0013] (2)將得到的Au NPs/Au電極浸入含30-60mmol/L的6-巰基-1-己醇的乙醇溶液中 密封，常溫下培養24小時后將電極取出，分別用乙醇和水淋洗，得到MCH/Au NPs/Au電極，在 氮氣中干燥備用。
[0014]所述的石墨烯-適配體復合物采用以下步驟制備：
[0015] (1)在10~20wiiol/L的微囊藻毒素-LR核酸適配體的溶液中，加入濃度為0.1~ 0.3mg/mL的石墨烯水溶液，將其置于冰水浴中，超聲三小時，得到黑色分散懸浮液；
[0016] (2)將得到的黑色分散懸浮液離心5-10分鐘后，取上清液，得到石墨烯-適配體復 合物，在4°C下冷藏備用。
[0017] 所述的微囊藻毒素-LR的核酸適配體的堿基序列為：
[0018] 5 '-GGCGC-CAAAC-AGGAC-CACCA-TGACA-ATTAC-CCATA-CCACC-TCAT T-ATGCC-CCATC-TCCGC-3'。
[0019] 所述的核酸內切酶反應緩沖液為Tris-HCl緩沖液反應緩沖液（50-200mM，含12_ 50mM MgCl2,0.5-2mM CaCl2,PH=7.5,25-35〇C) 〇
[0020] 所述的核酸內切酶溶液的酶的活力單位為500-1500U/mL。
[0021] 所述的電化學方法為差分脈沖伏安法，根據峰電流值與微囊藻毒素-LR濃度之間 的線性關系建立工作曲線。
[0022] 所述的電化學方法采用的電解液為pH=7.0,含3-10mmol/L的二茂鐵甲酸及0.05_ 0.3mo 1 /L高氯酸鈉的10-30mmo 1 /L的磷酸鹽緩沖溶液。
[0023]本發明中用于MC-LR的選擇性檢測，可具體采用以下方法：
[0024]向含有MC-LR的溶液中加入100倍MC-LR溶液濃度的干擾物，采用差分脈沖伏安法 測定混合溶液的峰電流響應。根據加入MC-LR和干擾物引起的峰電流的變化實現對MC-LR的 選擇性分析;所述的干擾物為百草枯，啶蟲脒，敵百蟲，殺蟲單，氧樂果或草甘膦的一種。
[0025]本發明以微囊藻毒素-LR核酸適配體為識別元素，將其與高靈敏的電分析方法相 結合，進一步通過設計與利用核酸內切酶輔助石墨烯信號放大作用，實現了對微囊藻毒素- LR的高靈敏、特異性分析。選用金納米粒子沉積修飾的金電極為基底電極，可以利用金納米 粒子提供更多的電化學活性面積和更好的導電性能，從而提供更加靈敏的電化學信號。之 后在電極表面組裝MCH單分子層，用以"阻斷"電極表面的電子傳遞"通道"。同時石墨烯-適 配體復合物存在于體系中，在體系中沒有微囊藻毒素-LR存在時，石墨烯由于適配體的作 用，不會自組裝到電極上。但是當體系中存在微囊藻毒素-LR時，微囊藻毒素-LR會與適配體 結合，從而使石墨稀裸露出來，裸露出來的石墨稀可以通過與MCH的作用，自組裝到Au NPs/ Au電極表面，使得被"阻斷"的電流信號重新被"打開"，而獲得響應電流值的增加。進一步 地，當在體系中滴加核酸內切酶DNase I后，核酸內切酶會將與MC-LR結合的核酸適配體分 解，使MC-LR又重新裸露出來，裸露出來的MC-LR又可以繼續與新的適配體結合，使得更多的 石墨烯裸露出來組裝到電極上，如此循環，實現對電流信號的放大效應，從而利用所得的電 流信號與MC-LR之間的濃度關系，實現對MC-LR的高靈敏電化學檢測。
[0026] 本發明將操作簡便，響應迅速的電化學分析方法與對MC-LR有特異性識別作用的 核酸適配體技術結合，并結合石墨烯優異的導電性與生物親和性的特點，發明了一種新穎 的MC-LR電化學檢測方法。與現有技術相比，本發明具有以下優點：
[0027] (1)與現有的生物傳感器相比，本發明采用金納米粒子沉積修飾金電極為基體電 極材料，利用石墨烯優異的導電性與良好的生物兼容性。進一步通過設計與利用核酸內切 酶輔助石墨烯信號放大作用，實現了對MC-LR的高靈敏、特異性分析。
[0028] (2)本發明將MC-LR的核酸適配體與石墨烯復合，得到石墨烯-適配體復合物。由于 核酸適配體對待測物質MC-LR的專一性結合能力，大大提高了選擇性，使得該電化學檢測方 法能夠在100倍于待測物質濃度的結構相似的干擾物質中選擇性的識別出待測物質MC-LR。 [0029 ] (3)與傳統的檢測微囊藻毒素-LR的方法相比，本發明所建立的方法利用了高靈敏 的電化學分析技術與高專一性識別能力的核酸適配體有效地結合，實現了環境中痕量MC-LR的超靈敏、高專一性的檢測，且儀器廉價便攜，方法簡單易行，可以快速得到結果。
【附圖說明】
[0030]圖1為本發明制備的Au NPs納米結構圖；
【具體實施方式】
[0031]下面結合附圖和具體實施例對本發明進行詳細說明。
[0032] 實施例1
[0033] -種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其中所涉及的傳感器的 具體制作過程如下：
[0034] (1)首先對金電極進行預處理，處理方式如下:將金電極表面置于新鮮配置的食人 魚(H2S〇4/H2〇2 = 7: 3v/v)洗液中浸泡10-15分鐘，取出后采用超純水洗凈后，依次分別采用 粒徑為1 ? 0wii、0 ? 3mi、0 ? 05wii的三氧化二鋁以"8"字小心的打磨至表面光潔。之后用超純水 將電極表面的三氧化二鋁沖洗干凈，將電極依次分別置于超純水，乙醇，超純水超聲5至10 分鐘。超聲完畢后，將電極立即取出，以其為工作電極，鉑絲電極為對電極，SCE為參比電極 進行循環伏安(CV)掃描，直到得到穩定的重復的循環伏安圖為止，則表明金電極預處理完 畢。CV掃描設置參數如下：電勢范圍-0.2-1.55V，掃速50mV/s。將預處理好的金電極用超純 水淋洗干凈，氮氣干燥后取出，置于3mmol/L的氯金酸(含有O.lmol/L KC1)中，繼續以其為 工作電極，采用CV法對溶液中的金還原，從而在電極表面形成金納米粒子(Au NPs)，得到金 納米粒子電極。參數設置如下：電勢范圍-1.2~-0.2V，掃速50mV/s，掃描圈數15圈。得到Au NPs電極，如圖1所示。
[0035] (2)在lOwnol/L的MC-LR核酸適配體的溶液中，加入濃度為0? 15mg/mL的石墨烯水 溶液，將其置于冰水浴中，超聲三小時，得到黑色分散懸浮液。之后將懸浮液離心5分鐘后， 取上清液，得到石墨烯-適配體復合物。將制備好的石墨烯-適配體復合物放入4 °C冰箱冷藏 備用。
[0036] (3)將（1)步驟中制備好的Au NPs電極浸入40mmol/L的MCH的乙醇溶液中，密封后 常溫下培養24小時，使Au NPs電極表面形成致密的MCH分子層。之后將電極取出，分別用乙 醇和水輕輕的淋洗后，得到MCH/Au NPs/Au電極，在氮氣氣氛下干燥備用。
[0037] 實施例2
[0038] 在對MC-LR濃度測量前，將制備好的MCH/Au NPs/Au電極取出，在電極表面滴加10y L核酸內切酶(DNase I)反應緩沖液(pH=7.0,含有濃度為100mm〇l/L的NaCl)，5yL石墨烯-適配體復合物，3yL的待測濃度的MC-LR，2yL的DNase I溶液（1000U/mL)，將電極置于30°C的 生化培養箱中培養一個小時后取出。用乙醇和超純水輕輕淋洗電極表面，以去除結合較弱 的石墨烯。隨后將電極在氮氣氣氛下進行干燥，取出后進行DPV檢測。電化學檢測均在含 5mmol/L二茂鐵甲酸及0. lmol/L的高氯酸鈉的20mmol/L的磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.0)中進 行。
[0039] 電流的變化和MC-LR的濃度在1.0X1CT12~1.0Xl(T1Qmol/L范圍內成良好線性關 系，相關系數約為0.99.最低檢測限為8.0Xl(T13m〇l/L。這個最低檢測限足以檢測水體中微 量存在的MC-LR。
[0040] 實施例3
[0041 ] 將制備好的電化學適配體傳感器，將1.0Xl(Tnm〇l/L MC-LR分別與濃度為1.0X nrVoi/L的干擾物兩兩混合進行測定。考察了氧樂果，草甘膦，百草枯，殺蟲單，啶蟲脒，敵 百蟲三種環境常見污染物對MC-LR測定的干擾實驗。采用實施例2中測試條件，測定電流響 應，研究結果顯示，100倍于MC-LR濃度的其他干擾物對MC-LR的電流造成的影響小于 10.0%。可見，所制備的適配體傳感器對MC-LR具有高的選擇性。
[0042] 實施例4
[0043] (1)按實施例1的處理方式對金電極進行預處理，將預處理好的金電極用超純水淋 洗干凈，氮氣干燥后取出，置于lmmol/L的氯金酸(含有0.1m〇l/L KC1)中，繼續以其為工作 電極，采用CV法對溶液中的金還原，從而在電極表面形成金納米粒子(Au NPs)，得到金納米 粒子電極。參數設置如下：電勢范圍-1.2~-0.2V，掃速50mV/s，掃描圈數10圈。得到Au NPs 電極，如圖1所示。
[0044] (2)在lOymol/L的MC-LR核酸適配體的溶液中，加入濃度為0? lmg/mL的石墨稀水溶 液，將其置于冰水浴中，超聲三小時，得到黑色分散懸浮液。之后將懸浮液離心5分鐘后，取 上清液，得到石墨烯-適配體復合物。將制備好的石墨烯-適配體復合物放入4 °C冰箱冷藏備 用。
[0045] (3)將（1)步驟中制備好的Au NPs電極浸入30mmol/L的MCH的乙醇溶液中，密封后 常溫下培養24小時，使Au NPs電極表面形成致密的MCH分子層。之后將電極取出，分別用乙 醇和水輕輕的淋洗后，得到MCH/Au NPs/Au電極，在氮氣氣氛下干燥備用。
[0046] (4)將制備好的MCH/Au NPs/Au電極取出，在電極表面滴加9yL核酸內切酶(DNase I)反應緩沖液(pH = 7.0，含有濃度為100mm〇l/L的NaCl)，4yL石墨烯-適配體復合物，2yL的 待測濃度的MC-LR，1此的DNase I溶液（1000U/mL)，將電極置于25°C的生化培養箱中培養1 小時后取出。用乙醇和超純水輕輕淋洗電極表面，以去除結合較弱的石墨烯。隨后將電極在 氮氣氣氛下進行干燥，取出后進行DPV檢測。電化學檢測均在含5mmol/L二茂鐵甲酸及 0. lmo 1/L的高氯酸鈉的10-30mmo 1/L的磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.0)中進行。
[0047] 電流的變化和MC-LR的濃度在一定范圍內成良好線性關系，可以得到足以檢測水 體中微量存在的MC-LR的檢測限。
[0048] 實施例5
[0049] (1)按實施例1的處理方式對金電極進行預處理，將預處理好的金電極用超純水淋 洗干凈，氮氣干燥后取出，置于5mmol/L的氯金酸(含有0. lmol/L KC1)中，繼續以其為工作 電極，采用CV法對溶液中的金還原，從而在電極表面形成金納米粒子(Au NPs)，得到金納米 粒子電極。參數設置如下：電勢范圍-1.2~-0.2V，掃速50mV/s，掃描圈數25圈。得到Au NPs 電極，如圖1所示。
[0050] (2)在20_〇1/L的MC-LR核酸適配體的溶液中，加入濃度為0.3mg/mL的石墨烯水溶 液，將其置于冰水浴中，超聲三小時，得到黑色分散懸浮液。之后將懸浮液離心10分鐘后，取 上清液，得到石墨烯-適配體復合物。將制備好的石墨烯-適配體復合物放入4 °C冰箱冷藏備 用。
[0051 ] (3)將（1)步驟中制備好的Au NPs電極浸入30mmol/L的MCH的乙醇溶液中，密封后 常溫下培養24小時，使Au NPs電極表面形成致密的MCH分子層。之后將電極取出，分別用乙 醇和水輕輕的淋洗后，得到MCH/Au NPs/Au電極，在氮氣氣氛下干燥備用。
[0052] (4)將制備好的MCH/Au NPs/Au電極取出，在電極表面滴加IlyL核酸內切酶(DNase I)反應緩沖液(pH = 7.0，含有濃度為100mm〇l/L的NaCl)，6yL石墨烯-適配體復合物，4yL的 待測濃度的MC-LR，3yL的DNase I溶液（1000U/mL)，將電極置于35°C的生化培養箱中培養2 小時后取出。用乙醇和超純水輕輕淋洗電極表面，以去除結合較弱的石墨烯。隨后將電極在 氮氣氣氛下進行干燥，取出后進行DPV檢測。電化學檢測均在含5mmol/L二茂鐵甲酸及 0. lmo 1/L的高氯酸鈉的10-30mmo 1/L的磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.0)中進行。
[0053] 電流的變化和MC-LR的濃度在一定范圍內成良好線性關系，可以得到足以檢測水 體中微量存在的MC-LR的檢測限。
[0054] 實施例6
[0055] (1)按實施例1的處理方式對金電極進行預處理，將預處理好的金電極用超純水淋 洗干凈，氮氣干燥后取出，置于3mmol/L的氯金酸(含有0.1m 〇l/L KC1)中，繼續以其為工作 電極，采用CV法對溶液中的金還原，從而在電極表面形成金納米粒子(Au NPs)，得到金納米 粒子電極。參數設置如下：電勢范圍-1.2~-0.2V，掃速50mV/s，掃描圈數20圈。得到Au NPs 電極，如圖1所示。
[0056] (2)在15_ol/L的MC-LR核酸適配體的溶液中，加入濃度為0.3mg/mL的石墨烯水溶 液，將其置于冰水浴中，超聲三小時，得到黑色分散懸浮液。之后將懸浮液離心7分鐘后，取 上清液，得到石墨烯-適配體復合物。將制備好的石墨烯-適配體復合物放入4 °C冰箱冷藏備 用。
[0057] (3)將（1)步驟中制備好的Au NPs電極浸入20mmol/L的MCH的乙醇溶液中，密封后 常溫下培養24小時，使Au NPs電極表面形成致密的MCH分子層。之后將電極取出，分別用乙 醇和水輕輕的淋洗后，得到MCH/Au NPs/Au電極，在氮氣氣氛下干燥備用。
[0058] (4)將制備好的MCH/Au NPs/Au電極取出，在電極表面滴加10yL核酸內切酶(DNase I)反應緩沖液(pH = 7.0，含有濃度為100mm〇l/L的NaCl)，5yL石墨烯-適配體復合物，3yL的 待測濃度的MC-LR，2yL的DNase I溶液（1000U/mL)，將電極置于30°C的生化培養箱中培養 1.5小時后取出。用乙醇和超純水輕輕淋洗電極表面，以去除結合較弱的石墨烯。隨后將電 極在氮氣氣氛下進行干燥，取出后進行DPV檢測。電化學檢測均在含5mmol/L二茂鐵甲酸及 0. lmo 1/L的高氯酸鈉的10-30mmo 1/L的磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.0)中進行。
[0059] 電流的變化和MC-LR的濃度在一定范圍內成良好線性關系，可以得到足以檢測水 體中微量存在的MC-LR的檢測限。
[0060] 上述的對實施例的描述是為了便于該技術領域的普通技術人員能理解和應用本 發明。熟悉本領域技術的人員顯然可以容易地對這些實施例做出各種修改，并把在此說明 的一般原理應用到其他實施例中而不必經過創造性的勞動。因此，本發明不限于這里的實 施例，本領域技術人員根據本發明的揭示，對于本發明做出的改進和修改都應該在本發明 的保護范圍之內。
[0061]
【主權項】
1. 一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特征在于，該方法包括以 下步驟： (1) 在MCH/Au NPs/Au電極的表面依次滴加體積比為(9-11): (4-6): (2-4): (1 -3)的核 酸內切酶反應緩沖液、石墨烯-適配體復合物、待測的微囊藻毒素-LR溶液和核酸內切酶溶 液； (2) 將MCH/Au NPs/Au電極在25-35°C下培養1~2個小時，用乙醇和超純水淋洗電極表 面，去除結合較弱的石墨烯，隨后在氮氣下干燥，取出后進行電化學方法檢測，測定微囊藻 毒素-LR溶液的濃度。2. 根據權利要求1所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的MCH/Au NPs/Au電極采用以下步驟制備： (1) 以金電極為工作電極，含有濃度為1~5mmol/L氯金酸的0.05-0.2111〇1/1的1((：1溶液 為電解液，米用二電極體系，在 _1.2_1.0V電位范圍內進行循環伏安法掃描，掃描圈數為10-25圈，得到Au NPs/Au電極； (2) 將得到的Au NPs/Au電極浸入含30-60mmo 1 /L的6-巰基-1 -己醇的乙醇溶液中密封， 常溫下培養24小時后將電極取出，分別用乙醇和水淋洗，得到MCH/Au NPs/Au電極，在氮氣 中干燥備用。3. 根據權利要求1所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的石墨烯-適配體復合物采用以下步驟制備： (1) 在10~20ymol/L的微囊藻毒素-LR核酸適配體的溶液中，加入濃度為0 · 1~0 · 3mg/ mL的石墨烯水溶液，將其置于冰水浴中，超聲三小時，得到黑色分散懸浮液； (2) 將得到的黑色分散懸浮液離心5-10分鐘后，取上清液，得到石墨烯-適配體復合物， 在4°C下冷藏備用。4. 根據權利要求3所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的微囊藻毒素-LR的核酸適配體的堿基序列為： 5 '-GGCGC-CAAAC-AGGAC-CACCA-TGACA-ATTAC-CCATA-CCACC-TCAT T-ATGCC-CCATC-TCCGC-3'。5. 根據權利要求1所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的核酸內切酶反應緩沖液為Tris-HCl緩沖液反應緩沖液。（50-200mM，含12_ 50mM MgCl2,0.5-2mM CaCl2,PH=7.5,25-35〇C) 〇6. 根據權利要求1所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素_LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的核酸內切酶溶液的酶的活力單位為500-1500U/mL。7. 根據權利要求1所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的電化學方法為差分脈沖伏安法，根據峰電流值與微囊藻毒素-LR濃度之間的 線性關系建立工作曲線。8. 根據權利要求7所述的一種石墨烯信號放大的微囊藻毒素-LR電化學檢測方法，其特 征在于，所述的電化學方法采用的電解液為pH = 7.0，含3-10mmol/L的二茂鐵甲酸及0. Οδ-Ο. 3mo 1 /L 高氯 酸鈉的 10-30mmo 1 /L 的磷酸鹽緩沖 溶液。
【文檔編號】G01N27/48GK106053570SQ201610308016
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月11日
【發明人】劉梅川, 王國強, 趙國華
【申請人】同濟大學