Nannocystin A及其結構類似物的合成的制作方法
【專利摘要】本發明涉及大環脂肽Nannocystin A及其結構類似物的合成，利用經典的逆合成分析，成功合成了天然產物Nannocystin A和其結構類似物，合成方法具有很強的醫藥工業的應用前景。
【專利說明】
Nannocystin A及其結構類似物的合成
技術領域
[0001] 本發明涉及大環脂肽Nannocystin A及其結構類似物的合成，屬于有機化學領域。
【背景技術】
[0002] Nannocystin A 是由 Mark Bronstrup (Holger Hoffmann , et al .Angew. Chem. Int · Ed · 2015，54，10145-10148)等人在2015年從myxobacterial genus， Nannocystis sp.中分離得到的一種大環脂肽類化合物。該分子具有一個新型的21元環骨 架，其中包含一個三肽和一個帶有環氧酰胺的聚酮片段。并通過核磁共振(NMR)技術、分子 動力學計算、化學降解和X-射線晶體學確定了該分子的絕對立體構型。在生物活性測試方 面，文章顯示該分子可在納摩爾級別通過誘導細胞凋亡而抑制細胞增殖。同年7月，Dominic Hoepfner(Phi 1 ipp Krastel，et al .Angew. Chem. Int .Ed. 2015，54，10149-10154)等人發表 相關文章進一步描述了該分子的特性，并確定了該分子的生物合成基因簇。在針對該分子 的生物學研究中，Dominic Hoepfner博士等人認為Nannocystin A的高生物活性是通過真 核生物翻譯延長因子Ια起作用。但是在對該分子構效關系方面的描述，兩篇文獻的結論并 不十分一致。
[0003] 因此，基于該分子的良好生物活性及其構效關系的相關爭議，對該分子的人工合 成和構效關系的進一步確證顯得尤為必要。可見，完成Nannocystin Α的全合成以及類似物 的開發將會具有重要的生物學研究意義以及進一步的工業應用前景，其也是目前的研究熱 點和重點，這也正是本發明得以完成的基礎所在和動力所倚。

【發明內容】

[0004] 如上所述，為了完成Nannocystin A的全合成以及類似物的開發，本發明人進行了 深入研究，在付出大量創造性勞動后，從而完成了本發明。
[0005] 本發明涉及如下兩個方面。
[0006] 第一個方面，本發明涉及如下式(I)所示結構的化合物及其藥學上可接受的鹽，其 中，R1-R9獨立地選自H，C1-C6的烷基，C1-C6的烷氧基，鹵素，羥基，氨基，硝基，氰基，巰基， 苯基。
[0007]
[0008] 在本發明的所述化合物中，除非另有規定，鹵素或鹵代中的鹵素例如可為F、Cl、Br 或I。
[0009] 在本發明的所述化合物中，C1-C6的烷基的含義是指具有1-6個碳原子的直鏈或支 鏈烷基，非限定性地例如可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、 正戊基、異戊基或正己基等。
[0010] 本發明的所述化合物中，C1-C6的烷氧基是指上述定義的"C1-C6的烷基"與0原子 相連后的基團。
[0011]優選的所述式(I)所示化合物的結構如下：
[0012]
[0013]
[0014] 第二個方面，本發明涉及上述化合物的合成方法。由于其結構均較為類似，以化合 物la為例進行詳細說明。
[0015] 1、化合物la的逆合成分析如下：
[0016]
- {
[0017] 考慮到la各酰胺鍵周圍的位阻較大，因此選擇在位阻相對較小的雙烯鍵之間進行 關環，所用到的反應為Suzuki偶聯反應。而片段2和3的酰胺鍵連接可在DIC條件下進行從而 得到關環前體化合物。其中，片段3可經過Mitsunobu反應從化合物7和化合物8連接得到。經 過不對稱Brown crotylboration反應及稀經復分解兩步反應化合物8可從化合物17進行 制備。切斷化合物2的各酰胺鍵可得到化合物4-6,化合物5和6可分別由L-異亮氨酸和D-酪 氨酸經過簡單轉化進行制備。而片段4中的環氧可由Sharpless不對稱環氧化進行構建，而 整個片段可由關鍵反應Vinylogous Mukaiyama aldol反應連接而成。
[0018]具體合成路線如下：
[0019] 1)片段22的合成
[0020]
[0021]反應式1:片段22的合成
[0022] 從已知化合物18出發，在咪唑條件下，與TBDPSC1反應得到化合物19。
[0023] 進一步的，在DMAP，EDCI條件下化合物19與TMSE0H反應得到化合物6。
[0024]進一步的，化合物6利用TFA脫除氨基端Boc保護基，得到化合物20,進一步，以 PyAOP為接肽試劑，DIPEA作為堿，化合物20與化合物5連接得到化合物21。
[0025] 進一步的，化合物21在TFA存在的條件下，脫除二肽化合物21上的Boc保護基即可 得到片段22。
[0026] 2)片段4的合成
[0027]
-i
[0028] 反應式2:片段4的合成
[0029] 起始原料12和13,以TiCU為路易斯酸，發生關鍵反應Vinylogous Mukaiyama Aldol得到化合物23。
[0030]進一步的，得到化合物23后，在活性甲基化物質Meerwein's salt及大位阻堿質子 海綿(proton sponge)作用下得到甲基化產物24。
[0031] 利用LiBH4還原反應脫除Evens '輔基得到醇類物質25，在Ti (0i-Pr )4, TBHP，L-( + )- DET，4A分子篩存在下，經由Sharp less不對稱環氧化反應得到化合物26,最后經過l)Dess-Martin氧化反應，在DMP，NaHC03存在下，以及2)Pinnick氧化反應，在NaC10 2，NaH2P〇4,2-methyl-2-butene存在下，反應可得到目標片段4。
[0032] 3)片段2的合成
[0033]
[0034]反應式3:片段2的合成
[0035] 在得到二肽化合物22和環氧片段4之后，在BEP，DIPEA條件下，二肽化合物22和環 氧片段4反應，得到三肽片段2。
[0036] 4)片段3的合成
[0037
[0038] 反應式4:片段3的合成
[0039] 從苯甲酸17出發經過一步不對稱Brown crotylboration反應，在1:_1311〇1(，1:抑118-2-butene，n-BuLi，（ +)-(IPc)2B0Me，BF3Et20，NaOH，H2〇2存在下反應可得到化合物 16，接著 在Hoveyda-Grubbs二代催化劑條件下，與化合物32發生稀經復分解反應得到化合物8。在 PPh3，DEAD存在下，利用Mitsunobu反應鏈接片段7和8得到酯類化合物27。進一步在TMSOTf， TEA存在下，保護三級羥基得到化合物28,之后在PMe3條件下還原疊氮并在酸性條件下脫除 TMS保護基即可得到片段3。
[0040] 5)化合物la的合成
[0041
[0042] 反應式5:化合物la的合成
[0043] 得到三肽化合物2之后，利用TASF脫除三肽硅保護基得到化合物30,接著在DIC， H0Bt，NMM條件下進行三肽30及酯類化合物3的連接得到關環前體31，最后在Pd(PPh3)4，Ag20 的條件下實現Suzuki偶聯得到最終產物Nannocystin A( la)。
[0044] 6)類似物lb-lg的合成
[0045] 本發明所設計的類似物旨在研究該類化合物的構效關系并為尋找抗癌活性更好 的該類化合物打下基礎，鑒于其結構較為類似，所使用的合成方法與上述相似。
【具體實施方式】
[0046] 下面通過具體的實例對本發明進行詳細說明，但這些例舉性實施方式的用途和目 的僅用來例舉本發明，并非對本發明的實際保護范圍構成任何形式的任何限定，更非將本 發明的保護范圍局限于此。
[0047] 實施例1
[0048]
[0049] 氮氣保護下，將化合物16(200mg，1.23mmo 1)和化合物32(0.83mL，4.94mmol)溶解 在甲苯（25·OmL)中，加入2，6-二氯苯醌（110mg,0·62mmol)，將Hoveyda-Grubbs第二代催化 劑（112mg，0.18mmo 1)溶解在適量甲苯中滴入上述混合物。將反應升溫至90 °C攪拌反應12小 時。反應結束后，恢復到室溫，旋干后硅膠柱分離獲得無色油狀物體SdSOrngjl^OJcODi +35.8°(c = l，CHCl3).1HMffi(500MHz，CDCl3)S7.37-7.27(m，5H)，6.63(dd，J=18.0， 8.0Ηζ,1Η) ,5.62(d,J= 18.0Hz, 1H) ,4.39(d, J = 8.4Hz , 1H), 2.60-2.51 (m, 1H), 1.28(s , 12H) ,0.84((1, J = 6.8Hz,3H) .13C 匪R( 125MHz，CDC13)S155·56,142.41,128.29,127.75, 126.96,83.27,77.97,48.11,29.71,24.84,16.32.HRMS ESI calcd.for[Ci7H25B03Na]+[M+ Na] +:311.1794;found :311.1787·
[0050] 實施例2
[0051] -
27
[0052] 氮氣保護下，將化合物8(7511^，0.26111111〇1)和7(8311^，0.52111111〇1)溶解在1'冊（411^) 中，0 °C 下依次加入PPh3(272 · 8mg，1 · 04mmo 1)和DEAD(0 · 17mL，1 · 04mmo 1)。接著恢復到室溫 攪拌反應8小時。反應結束后，加入飽和NaHC03溶液(5mL)，分液，水相用Et 20(2x30mL)萃取， 收集并合并有機相，用飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水Na2S0 4干燥。旋干后硅膠柱分離獲得無 色油狀物體27(74.911^;67%)。[0]。= -39.4°(。=1，〇1(：13).111匪1?(50冊抱，〇0(：13)37.36-7.27(m，5H)，6.49(dd，J=18.1，6.8Hz，lH)，5.86(d，J = 6.3Hz，lH)，5.45(dd，J=18.1， 1.0Hz,lH),3.79(s,lH),2.86-2.80(m,lH),1.26-1.21(m,18H),1.10(d,J=6.8Hz,3H). 13C 匪R(125MHz，CDC13)S168.77,153.05,137.76,128.35,128.24,127.01,83.20,80.69, 72·62,69·94，44·33，26·85，25·79，24·70，14·45·HRMS ESI calcd·for[C22H32BN305Na] + [M+ Na] +:452.2333；found:452.2323.
[0053] 實施例3
[0054]
[0055] 將化合物27( 159mg，0 · 37mmol)溶解在無水THF( lOmL)中，加入TEA(0 · 3mL, 1.85mmol)后冷卻到-50 °C，滴加 TMSOTf (0.2mL，1.1 lmmo 1)。滴加完畢后，保持-50 °C攪拌反 應15分鐘。加入飽和NaHC03 (5mL)溶液猝滅反應，利用乙酸乙酯（3x50mL)反復萃取，合并有 機相，用飽和食鹽水（15mL)洗滌，無水Na2S〇4干燥。旋干后硅膠柱分離獲得無色油狀物體28 (14〇11^ ;75%)。[0]。= + 13.6° (c = 1，CHC13) Mffi(500MHz，CDCl3)S7.34-7.26(m，5H)， 6.46(dd，J=18.1，7.0Hz，lH)，5.78(d，J = 6.7Hz，lH)，5.39(dd，J=18.1，1.2Hz，lH) ,3.56 (s,lH),2.86-2.77(m,lH),1.32(d,J= 13.4Hz,6H) ,1.22(s,12H) ,1.10(d,J = 6.8Hz,3H), 0.09(s，9H) .13C 匪R(125MHz，CDC13)S167·85,153.34,138.22,128.16,127.99,127.29, 83.12,80.24,76.54,71.05,44.57,27.99,26.93,24.71,15.02,2.24.HRMS ESI calcd.for [C25H40BN305NaSi ] + [M+Na] +: 524.2728 ； found: 524.2721.
[0056] 實施例4
[0057]
[0058] 將化合物28( 140mg，0 · 30mmol)溶解在THF(7 · OmL)和H20(lmL)中并攪拌20分鐘。接 著將PMe3(lM in THF，0.90mL)溶液滴入上述混合物中，室溫攪拌16小時。反應結束后，直接 旋干得到白色蠟狀物用于下一步。HRMS ESI calcd.for[C25H43BN05Si] + [M+H] +:476.3004; found :476.2999.
[0059] 實施例5
[0060]
[0061 ] 將化合物29溶解在DCM(2. OmL)中冷卻到0°C，加入HC1 (0.3mL，1M)，0°C下攪拌反應 3h。反應結束后，直接旋干得到白色蠟狀物用于下一步。HRMS ESI calcd.for[C22H35BN05] + [M+H]+:404.2608；found:404.2603.
[0062] 實施例6
[0063]
[0064] 將化合物 12(1.348,6.84111111〇1)溶解在001(5011^)中冷卻到-78°(：，滴加11(：14(1]? in 012(：12,51^，5111111〇1)并在-78°(：攪拌反應20分鐘。將化合物13(1.7(^，4.56111111〇1)溶解在 DCM( 15mL)中在-78°C條件下緩慢滴入上述混合物中，接著升溫至-30°C攪拌反應18小時。反 應結束后，用飽和酒石酸鉀鈉溶液(30mL)和飽和NaHC0 3溶液(30mL)淬滅反應，使之恢復到 室溫，分液，用乙醚(2x 50mL)反復萃取，收集有機相，用無水Na2S04干燥，過濾，旋干后硅膠 柱分離獲得無色油狀物體23(1.43g ,69%)。[a]D = + 12.6° (0 = 1,01(?).? NMR(500MHz, □Χη3)δ7.41-7.32(m，2H),7.32-7.27(m，lH),7.24-7.15(m，2H), 6.38(s，lH),5.95-5.85 (m，lH)，4.83-4.72(m，lH) ,4.35-4.24(m，2H)，4.19(dd，J = 9 · Ο，5·3Ηζ，1Η)，3.35(dd，J = 13.5,3.4Hz,lH),2.86(dd,J=13.5,9.3Hz,lH),2.55-2.39(m,2H),1.97(s,3H),1.88(d,J =0.7Hz，3H).13C NMR(125MHz，CDC13)S171.27，153.70，148.41，134.90，134.04，132.83， 129.42,128.98,127.47,78.48,74.71,66.51,55.27,37.67,34.76,20.77,13.84.HRMS ESI calcd. f or [Ci9H22N04NaI ] + [M+Na] +: 478.0491 ； found: 478.0484.
[0065] 實施例7
[0066] .23
^
[0067] 氮氣保護下，將化合物23(0.92g,2.02mmol)置于一個250mL烘干的圓底燒瓶中，手 套箱中稱取大位阻堿質子海綿(proton sponge) (2.16g, 10. lOmmol)及活性甲基化物質三 甲基氧鐵四氟硼酸鹽（0.59g,4.04mmol)置于上述250mL烘干圓底燒瓶中，加入無水DCM (100mL)作為溶劑，室溫攪拌反應3小時。反應結束后，分液，用DCM(2x 50mL)萃取，收集有幾 液，依次用IN HC1水溶液（30mL)，飽和NaHC03(30mL)洗滌，無水Na2S〇4干燥，旋干后硅膠柱分 離獲得無色油狀物體24(0.79g,83%)。[a] D = -53.4° ^ = NMR(500MHz，CDC13) 57.40-7.31(m,2H),7.31-7.25(m,lH),7.24-7.14(m,2H),6.29(s,lH),6.01-5.91(m,lH), 4.75-4.65(m,lH) ,4.26( t ,J = 8.5Hz , 1H) ,4.21-4.13(m, 1H), 3.76(t ,J = 6.8Hz , 1H), 3.35 (dd,J=13.5,3.4Hz,lH),3.22(s,3H) ,2.84(dd,J=13.4,9.3Hz,lH),2.56-2.42(m,lH), 2.41-2.29(m，lH)，1.91(s，3H) ,1.79((1, J = 0.8Hz，3H) .13C NMR(125MHz，CDC13)S171.52， 147.14,135.13,133.66,132.59,129.43,128.93,127.36,84.61,79.84,66.42,56.48， 55.43,37.58,32.70,18.70,13.85.HRMS ESI calcd. for[Ci9H22N04NaI ] + [M+Na] +: 492.0648；found :492.0641.
[0068] 實施例8
[0069]
[0070] 氮氣保護下，將化合物24(1.14g，2.43mmol)溶解在THF(60mL)和Me0H(l.2mL)，冷 卻至0°(：，滴加1^8!14(1.821^，4.6111111〇1，2111〇1/1丨111'冊)后0°(：反應3小時。反應結束后，加入 Na0H(20mL，lmol/L)恢復到室溫后攪拌10分鐘，加入水溶液(20mL)，利用DCM(2x 50mL)進行 萃取，收集有機液，無水Na2S04干燥，過濾旋干后硅膠柱分離獲得無色油狀物體25 (687.9mg， 96%)。[0]0 = +3.8。（c = 1，CHC13) .? NMR(500MHz，CDCl3)S6.19(s，lH)，5.37-5.28(m，lH)， 3.99(s,2H),3.67(t,J=6.8Hz,lH),3.20(s,3H),2.41-2.30(m,lH),2.30-2.14(m,lH), 1.76(d，J=1.0Hz，3H)，1.65(s，3H) .13C 匪R(125MHz,αχη3)δδ147· 51,137.14,120.85， 85.76,79.05,68.57,56.44,32.10,18.82,13.88.HRMS ESI calcd.for[Ci0Hi702NaI] + [M+ Na]+:319.0171；found:319.0164.
[0071] 實施例9
[0072]
[0073] 氮氣保護下，將化合物 25 (690mg，
2 · 3 3mmo 1)和L- (+) -DET (0 · 24mL，1 · 40mmo 1)溶解 在無水DCM(50mL)加入到裝有活化4A分子篩（1.5g)的圓底燒瓶中，室溫攪拌4.5小時。將反 應混合物冷卻至_35°C，滴加 Ti(0i-Pr)4(340yL，1.20mmol)之后攪拌1.5小時并緩慢升溫 至-5°C。接著將反應溫度降低到_30°C，滴入t-Bu00H(2mL，ca 5.5M in decane，9.32mmol)。 將反應升溫至〇°C反應60小時。反應結束后，加入水溶液（15mL)和EtOAc (15mL)并在室溫條 件下攪拌1小時。利用娃藻土過濾，乙酸乙酯(200mL)洗滌，收集濾液，依次用15 % w/wNa2S2〇4 (2x 75mL)水溶液、飽和NaHC03 (75mL)和飽和食鹽水（1 OOmL)洗滌，無水Na2S〇4干燥，過濾旋 干后硅膠柱分離獲得白色泡沫狀物體26(6481^,89^^1(1)4(^ = -31((3 = 1,01(:13).? NMR(500MHz，CDC13)S6.32(s，1H)，3.85(t，J = 6.9Hz，lH)，3.67(d，J= 12.3Hz，1H)，3.56((1, J= 12.3Hz, 1H) ,3.23( s, 3H), 3.07-2.98(m, 1H), 1.91 -1.83(m, 2H), 1.78(d, J = 0.9Hz , 3H),1.27(s,3H). 13C NMR(125MHz，CDC13)S147.12,83.91,79.81,65.23,60.67,56.91, 56.43,32.66,18.67,14.42.HRMS ESI calcd.for[Ci0Hi703NaI] + [M+Na] +:335.0120；found: 335.0116.
[0074] 實施例10
[0075]
[0076] 醇26(88mg, 0 · 30mmo 1)溶解在DCM(20mL)中，冷卻至0°C，依次加入NaHC03(lOOmg, 1.2〇1111]1〇1)和〇688-]\&11'1:;[11試劑（38211^，0.90_31)，恢復至室溫，攪拌反應1小時。反應結束 后，直接旋干后硅膠柱分離獲無色油狀物體用于下一步氧化反應。將上述無色油狀物溶解 在兩相溶劑卜131^31101和!120(1:1，101111^)中，室溫依次加入2-11161:1171-2-131^6116(21111^)、 NaH2P04(327mg，2.10mmol)和 NaC102(81mg，0.90mmol)。室溫反應 12 小時，反應結束后，加水 (1 OmL)淬滅反應，用乙酸乙酯(3x20mL)反復萃取，收集有機液，無水Na2S04干燥，過濾旋干后 硅膠柱分離獲得無色油狀物體4(9511^，98%)。[€^ = +2.2°(0 = 1，01(：13).1!1匪1?(5001抱， CDCl3)56.37(s,lH),3.87(t,J=6.7Hz,lH),3.24(s,3H),3.22(M,lH),1.95-1.80(m,2H), 1.79(s，3H)，1.55(s，3H). 13C 匪R(125MHz，CDC13)S174.92，146.61，83.45,80.28,59.72， 57.27,56.55,32.65,18.82,13.14.HRMS ESI calcd.for[Ci0Hi504NaI] + [M+Na]+:348.9913； found:348.9915.
[0077] 實施例11
[0078]
[0079] 將化合物18(63311^，1.81111111〇1)溶解在001(2011^)中冷卻至0°(：，依次加入咪唑 (492mg，7 · 24mmol)、TBDPSC1 (1 · 4ml，5 · 43mmol)，升到室溫攪拌1小時，反應結束后加入 NH4Cl(20mL)，用DCM(3x30mL)萃取，合并有機液，依次用水（30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗 滌，無水Na2S〇4干燥，濾液旋干得到粗產品直接進行下一步。
[0080] 將上述粗產品與2-三甲基硅乙醇(0.6ml，3.60mmol)-并溶解在CH2Cl2(20mL)中冷 卻至0 °C，依次加入EDCI (766mg，3.60mmo 1)和DMAP (30mg，0.18mmo 1)，升至室溫后攪拌反應 16小時。反應結束后，用乙酸乙酯（40mL)進行萃取，依次用5 %檸檬酸（2 X 12mL)，飽和 NaHC03(2 X 12mL)和飽和食鹽水(2 X 12mL)洗滌，無水Na2S〇4干燥。濾液旋干后硅膠柱分離獲 得無色油狀物體6(1.228,98%)。[€^ = -24.8°(0=1，01(：13).111匪1?(5001泡，00(：13)3 7.75-7.72(m,4H),7.43-7.34(m,6H),6.95(s,2H),5.01(d,J=7.6Hz,1H),4.45(d,J= 6.6Hz,lH),4.19(t,J=8.7Hz,2H),3.02-2.88(m,2H),1.45(s,9H),1.14(s,9H),0.04(s, 9H) .13C 匪R(125MHz，CDC13)S171.37，154.94，147.32，135.24，133.42，130.51，129.74， 129.69,127.37,126.04,80.05,64.02,54.40,37.07,28.33,26.72,20.38,17.63,-1 · 56 ·HRMS ESI calcd· for[C35H47N05NaSi2Cl2] + [M+Na] +: 710 · 2268;found: 710 · 2262 ·
[0081 ] 實施例12
[0082]
[0083] 將化合物6 (620mg , 0.90mmol)溶解在DCM( lOmL)中，滴入三氟乙酸（0.6mL , 8. lOmmol)，室溫攪拌反應2小時，反應結束后直接旋干并抽干得到化合物6-1直接用于下一 步反應。
[0084] 將化合物6-1和化合物5(265mg，1.08mmol)溶解在DCM(15mL)冷卻至0°C，依次加 入DIPEA(0.8mL，4.50mmo 1)和PyAOP (703mg，1.35mmo 1)，恢復到室溫攪拌反應 12小時。反應 結束后，加入飽和NH4C1溶液(5mL)，用乙酸乙酯（50mL)進行萃取，收集有機相，依次用飽和 NaHC03(10mL)和飽和食鹽水（lOmL)洗滌，無水Na2S〇4干燥，濾液旋干后硅膠柱分離得到無色 油狀物質21(26511^，36%)。[0]。= -41.6。（。= 1，01(：13).111匪1?(5001抱，〇0(：13)37.78-7.67 (m，4H)，7.44-7.30(m，6H)，6.95(s，2H)，4.68(d，J=5.9Hz，lH)，4.22-4.14(m，2H)，3.06-2.84(m,2H),2.75(s,3H),2.12-2.02(m,lH),1.46(s,9H),1.13(s,9H),0.97(dd,J=11.0, 6.5Hz，2H),0.9卜0.82(m，6H)，0.03(s，9H). 13C 匪R(125MHz，CDC13)S170.76，170.39， 147.30,135.21,135.18,133.43,130.48,129.67,129.54,127.37,126.02,80.37,63.94， 63.14,53.05,36.72,31.62,30.37,28.35,26.69,24.52,20.37,17.64,15.87,10.42,-1 · 58 ·HRMS ESI calcd· for[C42H60N206NaSi2Cl2] + [M+Na] +: 837 · 3265;found: 837 · 3262 ·
[0085] 實施例13
[0086]
[0087] 將化合物21(2611^，0.03111111〇1)溶解在001(211^)中，滴入三氟乙酸（0.0611^， 0. Slmmol)，室溫攪拌反應2小時，反應結束后直接旋干并抽干得到化合物21-1直接用于下 一步反應。
[0088] 將化合物21-1溶解在MeCN( 1 · 5mL)中，依次加入DIPEA(0 · 06mL, 363μπιο1)和BEP (20mg，73μπιο1)，將化合物4溶解在DCM(lmL)中滴入上述混合物中，室溫下反應過夜。反應結 束后，加入乙酸乙酯（1 OmL)，分液，有機相依次用飽和NaHC03 (1 OmL)和飽和食鹽水（1 OmL)洗 滌，無水Na2S〇4干燥。濾液旋干后硅膠柱分離得到三肽化合物2(26mg，90 % )。[a ]D = -43.8° ^ = NMR(500MHz，CDC13)S7.75-7.71(m，4H) ,7.42-7.31 (m，6H), 6.95(s，2H)， 6.60(d ,J = 7.5Hz,lH),6.35(s,lH),4.73-4.63(m,lH) ,4,44(d ,J= 11.4Hz, 1H) ,4.22-4.16 (m,2H),3.90(t J = 6.7Hz,lH),3.24(s,3H),3.13-3.08(m,lH),3.04-3.00(m,lH),3.00(s, 3H),2.87-2.80(m,lH),2.15(s,lH),1.86-1.77(m,5H),1.48(s,3H),1.13(s,9H),0.98-0.94(m，2H)，0.89-0.86(m，6H),0.82-0.79(m，2H)，0.04(s，9H). 13C NMR(125MHz，CDCl3)S 171.39,170.70,169.22,147.33,146.81,135.23,133.45,130.49,129.73,129.57,127.40, 126.07,83.73,80.11,64.10,61.85,60.57,59.23,56.56,53.14,36.64,32.86,31.13, 30.90,26.72,24.43,20.39,18.90,17.61,15.65,15.10,10-48,-1.51.HRMS ESI calcd. f or [C47H65N207NaSi2Cl2l ] + [M+Na] +: 1045.2650 ； found: 1045.2644.
[0089] 實施例14
[0090]
[0091] 將化合物2(5511^，0.054111111〇1)溶解在1'冊（511^)，冷卻至0°(：加入溶在1'冊（11^)的 TASF(44mg，0.16mmol)試劑，升至室溫攪拌反應12小時，反應結束后加入飽和NH4CI (10mL) 溶液，加入乙酸乙酯（3x 30mL).反復萃取，收集有機相，依次用水（30mL)和飽和食鹽水 (30mL)洗滌，無水Na2S〇4干燥，濾液旋干直接用于下一步。
[0092] 將化合物3(27mg，0 · 067mmo 1)溶解在DMF(3mL)中，依次加入NMM(0 · 1ml，0 · 9mmo 1)， !108以8211^，0.6111111〇1)和01(：(31111，0.201臟〇1)。將上步所得粗產品溶解在001(111^)中滴入 上述混合物中，室溫下攪拌過夜。反應結束后，加入飽和NH4CI (10mL)，用乙酸乙酯(3x30mL) 反復萃取，合并有機相，依次用水(60mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滌。無水Na 2S〇4干燥，濾液旋 干后硅膠柱分離得到關環前體化合物31(511^，88%)。[€(九=-19.8° ((63 = 1,003).? NMR (500MHz，CDCl3)S7.27((1, J = 5.1Hz，5H)，7.15(s，2H)，6.98(s，lH)，6.83 (s，lH)，6.38(dd， J=18.0,7.1Hz,lH),6.32(s,lH),5.83(s,lH),5.67(d ,J = 7.7Hz,lH),5.35(d ,J = 18.1Hz, 1H) ,4.69(dd ,J=14.2,8.5Hz,lH) ,4.40(d ,J = 8.3Hz , 1H), 4.32(d ,J = 11. 1Hz , 1H), 3.85 (t ,J = 6.5Hz,lH),3.20(dd ,J = 23.7,7.1Hz,2H),3.14(s,3H),3.02(s,3H),2.90-2.86(m, lH),2.84(d ,J = 6.3Hz,lH),2.09(s,lH),1.79(d ,J = 6.4Hz,2H),1.77(s,3H),1.42(s,3H), 1.22(s,12H),1.13(d,J = 6.7Hz,3H),1.09(s,3H),1.03(s,3H),0.86(t ,J = 7.4Hz,6H), 0.73(d,J = 6.5Hz，3H).13C NMR(125MHz，CDC13)S171.72，170.25，170.03，153.05，146.92， 146.88,138.05,130.32,128.94,128.19,127.57,121.28,83.63,83.21,80.52,80.08， 76.02,71.57,62.56,60.57,60.35,59.32,56.48,54.09,44.51,36.25,32.96,31.68， 31.28,29.71,29.36,26.92,24.74,24.63,18.99,15.63,15.49,15.03,10.50.HRMS ESI calcd.for[C48H67BN30iiNaCl2I] + [M+Na] +:1092.3188； found :1092.3178.
[0093] 實施例15
[0094]
[0095] 將？(1(?卩113)4(1011^，0.009111111〇1)和厶820(3311^，0.14111111〇1)溶解在脫氣的1'冊/!120 (20mL，v:v = 10:1)，將溶在脫氣THF/H2〇(13mL，v: v=10:1)中的化合物31滴入上述混合物 中，室溫下攪拌反應12小時。反應結束后，用乙酸乙酯（100mL)進行萃取，依次用水（30mL) and飽和食鹽水(30mL)進行洗滌，無水Na 2S〇4干燥，濾液旋干后硅膠柱分離得到化合物la。 [α]〇 = -29° (c = l,MeOH). ΧΗ NMR(500MHz ,DMS0)59.77(s , 1Η), 8.61 (d ,J= 10.1Hz , 1Η), 8.05(d,J = 9.8Hz,lH) ,7.56(d,J = 7.4Hz,2H) ,7.37(s,2H) ,7.32(t,J = 7.5Hz,2H) ,7.25 (t,J=7.3Hz,lH),6.45-6.32(m,lH),6.24-6.07(m,2H),5.89(s,1H),5.13(s,1H),4.77-4.63(m,2H),4.47(d,J=11.3Hz,lH),3.62(dd,J=10.3,3.2Hz,lH),3.09(s,3H) ,2.97(s, 3H) ,2.81 (d,J= 10.8Hz, 1H) ,2.68-2.58(m,2H) ,2.48-2.44(m, 1H), 2.12(t ,J = 11.2Hz , 1H),1.70(s,3H),1.51-1.37(m,4H),1.22(d,J=12.6Hz,2H),1.14(s,3H),1.03(s,3H), 0.98-0.82(m,4H),0.77(t ,J = 7.3Hz,3H),0.33(d ,J = 6.6Hz,3H).13C NMR( 125MHz ,DMS〇-)5 170.48,170.34,169.29,168.50,147.19,139.84,138.04,133.29,130.78,129.59,128.65, 127.69,126.86,125.91,124.70,121.49,83.78,78.76,71.76,61.15,59.22,59.15,57.91, 55.09,52.60,41.77,37.11,30.92,30.29,29.57,28.10,24.53,24.09,14.82,14.38, 10.75,9.96,9.69.HRMS ESI calcd. for [C42H55N309NaCl2] + [M+Na] +: 838.3213 ； found: 838.3211.
[0096] 采用與上述基本相同的實驗步驟相應的替換對應原料化合物合成了化合物lb、lc 和Id，其相應的核磁和質譜分析數據如下：
[0097]
[0098] 1)化合物lb的相關數據：[a]D = -16° (c = l，MeOH) .? NMR (500MHz，MeOH-d4)S 7.38-7.28(m,5H) ,7.07(d,J = 8.5Hz,2H),6.66(d,J = 8.5Hz,2H),6.46-6.39(m,lH),6.15 (s,lH),6.05-6.00(m,lH),4.65(d ,J = 3.6Hz,lH),4.54(d ,J=11.4Hz,2H),3.71-3.66(m, 1H),3.17(s,3H),3.07(s,3H),3.00-2.95(m,lH),2.88-2.85(m,lH),2.74-2.69(m,2H), 2.34-2.27(m,lH),2.21-2.16(m,lH),2.06-1.94(m,2H),1.73(s,3H),1.61(s,lH),1.49(s, 3H) ,1.29(d,6H) ,1.05(d ,J = 6.9Hz,3H) ,0.86-0.85(m, 2H), 0.71 (d ,J = 6.9Hz , 3H) ,0.57 (d，J = 6.5Hz，3H) .13C 匪R( 125MHz，Me0H-d4)Sl71· 63,171.49,170.62,169.11,155.99， 139.48,136.87,133.24,130.18,129.52,127.93,127.30,127.28,125.64,125.35,114.83， 84.38,78.08,61.25,60.38,58.42,56.21,54.60,53.43,42.17,38.57,31.34,31.28， 30.87,29.37,24.08,23.64,18.39,15.78,14.17,9.71,9.06.HRMS ESI calcd.for [C42H57N308Na] + [M+Na] +: 754.4043 ； found: 754.4048
[0099]
[0100] 2)化合物 1 c的相關數據：[a ]D = -23 · 60° (c = 1,MeOH) ·咕 NMR(500MHz ,MeOH_d4) δ 7.47-7.39(m,2H),7.37-7.32(m,2H),7.30-7.26(m,1H),7.10-7.00(m,2H),6.73-6.66(m, 2H) ,6.46-6.37(m,lH) ,6.17(d,J=10.7Hz,lH) ,6.01(dd,J=15.8,5.9Hz,lH) ,5.92(s, lH),4.80(s,lH),4.75-4.64(m,2H),4.56(s,lH),3.77(d,J=7.8Hz,lH),3.24(s,3H),3.03 (s,3H),2.80-2.70(m,2H),2.59(s,lH),2.22-2.10(m,lH),1.74(s,3H),1.50(s,3H),1.44-1.35(m,2H),1.22(d,J=8.7Hz,6H),1.10(s,3H),1.08-1.01(m,3H). 13C NMR(125MHz,Me0H-d4)5l71.71,171.47,170.83,170.01,156.02,136.30,133.28,130.42,130.09,128.31, 127.62,127.31,127.11,126.41,125.79,114.88,83.63,80.02,71.47,70.48,60.54, 58.56,54.95,54.23,52.81,42.05,37.36,31.03,29.94,26.80,24.74,13.99,12.23, 10 · 74·HRMS ESI calcd· for[C39H5iN309Na] + [M+Na] +: 728 · 3523;found: 728 · 3513 ·
[0101]
[0102] 3)化甘物Id 的相天數據：La」D = -28.C(c = 0.5，Me0H) .? NMR(500MHz，Me0H_d4)S
7·51-7.46(m，2H)，7.38-7.32(m，2H)，7.31-7.24(m，5H),7.21- 7.17(m，lH)，6.49-6.41(m， 1H) ,6.18(d,J=10.5Hz,lH),6.05(dd,J=15.3,5.5Hz,lH) ,5.95(d,J=1.7Hz,lH) ,4.98-4.92(m,lH),4.65(s,lH) ,4.53(d ,J= 11.3Hz , 1H), 3.74(dd ,J= 10.1,3.2Hz , 1H), 3.22(s, 3H),3.16-3.11(m,lH),3.08(s,3H),2.95(dd,J=9.7,2.6Hz,lH),2.81-2.75(m,lH),2.74-2.68(m,lH),2.23-2.15(m,lH),1.97-1.90(m,lH),1.75(s,3H),1.63-1.56(m,lH),1.51(s, 3H), 1.23(s,3H),l. 12-1.06(m,6H),l. 02-0.92(m,2H),0.86(t,J = 7.4Hz,3H),0.43(dJ = 6.6Hz,3H),13C NMR(125MHz,Me0H-d4)5l71.54,171.21,170.05,169.34,139.36,136.86, 136.70,133.23,129.18,129.02,128.05,127.63,127.04,126.40,126.26,125.46,84.08, 80.00,71.89,61.25,60.37,60.07,58.51,54.75,53.29,42.05,38.85,31.45,30.80, 29.46,26.96,24.42,24.03,14.18,14.05,10.04,9.80,9.06.
[0103]綜上所述，發明人付出了大量的創造性勞動，完成了Nannocystin A的全合成以及 類似物的開發，這將會具有重要的生物學研究意義以及進一步的工業應用前景。
[0104]應當理解，這些實施例的用途僅用于說明本發明而非意欲限制本發明的保護范 圍。此外，也應理解，在閱讀了本發明的技術內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各 種改動、修改和/或變型，所有的這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的保 護范圍之內。
【主權項】
1. 設及如下式（I)所示結構的化合物及其藥學上可接受的鹽，其中，R1-R9獨立地選自 H，C1-C6的烷基，C1-C6的烷氧基，面素，徑基，氨基，硝基，氯基，琉基，苯基2. 根據權利要求1所述的化合物及其藥學上可接受的鹽，其特征在于:R1、R2為Η或C1， R3 為Η或 0H，R4 為Η、化，R5、R6 為H、C冊，R7 為H、0Me，R8 為 CH(C出）C出 CH3、CH3，R9 為Η 或 0Η。3. 化合物la的制備方法，其特征在于，所述制備方法的合成路線如下：4. 根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于:Ξ膚化合物2利用TASF脫除Ξ膚娃保 護基得到化合物30,接著在DIC，HO化，NMM條件下進行Ξ膚30及醋類化合物3的連接得到關 環前體31，最后在Pd(PF*h3)4，Ag2〇的條件下實現Suzuki偶聯得到最終產物化nnocystin A (la)。5. 根據權利要求3-4任一項所述的制備方法，其特征在于:所述Ξ膚化合物2和醋類化 合物3的合成路線如下6. 根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于:Ξ膚片段2合成方法為在BEP，DIPEA條 件下，二膚化合物22和環氧片段4反應，得到Ξ膚片段2;醋類化合物3合成方法為苯甲醒17 經過一步不對稱化own croty化oration反應，在t-BuOK，trans-2-butene，n-BuLi，（ + )- (IPc) 2B0Me，BF3Et2〇，NaOH，出〇2存在下反應可得到化合物16，接著在Hov巧da-Grubbs二代催 化劑條件下，與化合物32發生締控復分解反應得到化合物8，所述化veyda-GriAbs二代催化 劑如路線中所示，在PPh3，DEAD存在下，利用Mitsunobu反應鏈接片段7和8得到醋類化合物 27，進一步在TMSOTf，TEA存在下，保護Ξ級徑基得到化合物28，之后在PMe3條件下還原疊氮 并在酸性條件下脫除TMS保護基即可得到片段3。7. 根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于:環氧片段4的合成路線如下：8. 根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于:化合物22的合成路線如下：
【文檔編號】C07K1/06GK106083997SQ201610522803
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月5日
【發明人】葉濤, 許正雙, 廖林萍, 周經經
【申請人】北京大學深圳研究生院, 深圳乾延藥物研發科技有限公司