本發明(ming)涉及一種(zhong)利用魚(yu)鱗制備ACE(血管緊(jin)張(zhang)素(su)轉換酶)抑制肽(tai)的(de)方法。

背景技術：

魚(yu)(yu)鱗是魚(yu)(yu)類加工的主(zhu)要副產(chan)品之一。魚(yu)(yu)鱗中含有豐富的蛋白質(約(yue)占(zhan)魚(yu)(yu)鱗質量的50-70％)、脂(zhi)肪(卵磷脂(zhi)、多種脂(zhi)肪酸(suan))、多種礦物質、維生(sheng)素和微量元素，但(dan)是大部分魚(yu)(yu)鱗都作為廢(fei)棄物丟棄而未能很好(hao)地開發利用。開發利用魚(yu)(yu)鱗資源對(dui)減少(shao)環境污染和提高魚(yu)(yu)類加工的附加值、對(dui)創(chuang)造經濟和社會效益(yi)都有很大的意義。

高(gao)(gao)血(xue)壓(ya)(ya)是全(quan)球范圍內(nei)的重(zhong)大疾(ji)(ji)(ji)病，其發病率(lv)在全(quan)球已超過(guo)10億(yi)，估(gu)計(ji)我國(guo)患病人(ren)數超過(guo)1.6億(yi)。高(gao)(gao)血(xue)壓(ya)(ya)是引發心血(xue)管(guan)疾(ji)(ji)(ji)病和(he)死(si)亡的最(zui)主要危險因素(su)(su)，我國(guo)每年至少有(you)一半的心血(xue)管(guan)病死(si)亡是與高(gao)(gao)血(xue)壓(ya)(ya)有(you)關的。同時，血(xue)壓(ya)(ya)升高(gao)(gao)還(huan)是多種疾(ji)(ji)(ji)病的導火索，會使冠心病、心力衰竭及腎臟疾(ji)(ji)(ji)患等(deng)疾(ji)(ji)(ji)病的發病風險增高(gao)(gao)。而由于部分(fen)高(gao)(gao)血(xue)壓(ya)(ya)患者并無明顯的臨床癥狀，高(gao)(gao)血(xue)壓(ya)(ya)又(you)被(bei)稱為人(ren)類健康的“無形殺手”。因此高(gao)(gao)血(xue)壓(ya)(ya)的防(fang)治已成為全(quan)世界食品醫藥界面臨的一項(xiang)艱巨任(ren)務(wu)。目前臨床常用(yong)的降(jiang)壓(ya)(ya)藥物(wu)主要有(you)利尿降(jiang)壓(ya)(ya)藥、受(shou)體阻滯劑(ji)、鈣通道阻滯劑(ji)CCB、血(xue)管(guan)緊張(zhang)素(su)(su)轉(zhuan)化(hua)酶(mei)抑(yi)制劑(ji)ACE I和(he)血(xue)管(guan)緊張(zhang)素(su)(su)II受(shou)體拮抗劑(ji)ARB，但大部分(fen)降(jiang)壓(ya)(ya)藥物(wu)的副(fu)作用(yong)比較多。

ACE(血管(guan)緊(jin)張(zhang)(zhang)素(su)轉(zhuan)換(huan)酶)在血壓(ya)調(diao)節中扮演著(zhu)重要的(de)(de)角色，它是(shi)(shi)一種(zhong)膜結合(he)糖蛋白，ACE能(neng)夠促使血管(guan)緊(jin)張(zhang)(zhang)素(su)I水解形成具有(you)(you)升(sheng)壓(ya)作(zuo)(zuo)用的(de)(de)血管(guan)緊(jin)張(zhang)(zhang)素(su)II，同時促進具有(you)(you)使血管(guan)舒(shu)張(zhang)(zhang)作(zuo)(zuo)用的(de)(de)緩激(ji)肽物質(zhi)的(de)(de)水解，導(dao)致血壓(ya)升(sheng)高(gao)。而ACE I就是(shi)(shi)通(tong)過抑(yi)制(zhi)ACE(血管(guan)緊(jin)張(zhang)(zhang)素(su)轉(zhuan)換(huan)酶)的(de)(de)活性(xing)達到降血壓(ya)的(de)(de)目的(de)(de)。相(xiang)(xiang)比其他(ta)降壓(ya)物質(zhi)，ACE抑(yi)制(zhi)肽是(shi)(shi)一種(zhong)對高(gao)血壓(ya)有(you)(you)降壓(ya)作(zuo)(zuo)用同時副作(zuo)(zuo)用相(xiang)(xiang)對較小的(de)(de)降血壓(ya)藥，但還是(shi)(shi)會有(you)(you)如咳嗽、味覺功能(neng)紊亂以(yi)及皮疹等副作(zuo)(zuo)用。

從天然(ran)蛋(dan)白質(zhi)中(zhong)提取得到的ACE抑(yi)(yi)制肽(tai)安(an)全(quan)性高，易(yi)于消(xiao)化吸收，無副作用，因此從天然(ran)蛋(dan)白質(zhi)中(zhong)提取ACE抑(yi)(yi)制肽(tai)成為預(yu)防和治療高血壓最(zui)具(ju)開(kai)發價值的產品之一。目前人們已經從大豆、帶魚、酪蛋(dan)白、槍魚等物質(zhi)中(zhong)獲(huo)得了ACE抑(yi)(yi)制肽(tai)，但采(cai)用魚鱗(lin)作為原料(liao)制備ACE抑(yi)(yi)制肽(tai)的技術還未見報道。

技術實現要素：

本發明的(de)首要目的(de)在于提供一種(zhong)利用魚鱗制備ACE(血管緊(jin)張素轉換酶)抑制肽(tai)的(de)方(fang)法，該方(fang)法原料來源(yuan)豐富(fu)、設備簡(jian)單、操作容(rong)易，既從(cong)魚鱗中提取(qu)高價值(zhi)的(de)ACE抑制肽(tai)，同時又實(shi)現其高附加(jia)值(zhi)利用、充(chong)分發揮其資源(yuan)優勢。

本發明的另一目的在于(yu)提供由(you)上述方法(fa)制(zhi)得的ACE抑制(zhi)肽。

本發明的再(zai)一目(mu)的在(zai)(zai)于提供上(shang)述的ACE抑制肽在(zai)(zai)制備降(jiang)血壓(ya)藥物中的應用(yong)。

本發(fa)明的目的通過下述(shu)技術方案實現：

一種利用魚鱗(lin)制備ACE抑制肽的方(fang)法，包括以下步(bu)驟：

(1)將魚鱗水洗去雜質后，用(yong)(yong)10％(W/V)的NaCl溶液浸泡(pao)1-2天(tian)，中間換液一次，脫除雜蛋白和魚銀粉；將魚鱗撈(lao)出后再用(yong)(yong)0.4mol/L的HCl溶液、料液比(bi)1:10-1:20，浸泡(pao)1-2h，以脫除鈣鹽等無機鹽；

(2)將魚鱗(lin)用(yong)蒸餾水(shui)浸泡溶(rong)脹，接著用(yong)堿性蛋白(bai)酶(mei)酶(mei)解，然后離(li)心，上(shang)清液(ye)為酶(mei)解液(ye)，將酶(mei)解液(ye)冷凍干燥得(de)到ACE抑制肽；

步驟(1)所述(shu)的料液比優選(xuan)1:15；

步驟(2)所述的酶(mei)(mei)解(jie)，pH值優選9，溫度優選55℃，底(di)物(wu)濃度為5g/100mL，加(jia)酶(mei)(mei)量為底(di)物(wu)的6％，酶(mei)(mei)解(jie)時間優選2h；酶(mei)(mei)解(jie)結束后在(zai)沸水浴中(zhong)加(jia)熱10min終(zhong)止酶(mei)(mei)解(jie)反應；

步驟(zou)(2)所述的離心是(shi)4℃、4000r/min離心15min。

由上述方法制(zhi)得的ACE抑制(zhi)肽(tai)可用(yong)于制(zhi)備降血壓藥物。

魚(yu)鱗的主要成分(fen)為蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質和羥基磷灰石(shi)，其中(zhong)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質含量占(50％-70％)，通過(guo)鹽酸脫鈣(gai)后魚(yu)鱗中(zhong)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質含量達(da)到90％以(yi)上。堿性(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)酶可(ke)以(yi)特異(yi)性(xing)地切斷(duan)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質中(zhong)的肽(tai)鍵(jian)，魚(yu)鱗通過(guo)堿性(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)質的水(shui)解作用可(ke)以(yi)產生多肽(tai)，通過(guo)體外(wai)ACE抑制(zhi)率(lv)檢測(ce)到魚(yu)鱗水(shui)解物中(zhong)含有能(neng)夠抑制(zhi)ACE活(huo)性(xing)的多肽(tai)。

本發明相(xiang)對于現有技術具有如下(xia)的(de)優(you)點及效果：

1、本發明方法的原料(liao)魚鱗是魚類加工的副產品，原料(liao)豐富，使魚鱗資源得到(dao)了充分的利用，減少環境污染的同時提高了魚鱗的附加值。

2、本(ben)發(fa)明技術成本(ben)低(di)廉，采用酶法制(zhi)(zhi)備，工藝(yi)合(he)理，操作簡單。產(chan)品為(wei)ACE抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)率較(jiao)高的ACE抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)肽，與(yu)化學(xue)合(he)成的ACE抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)肽相比，本(ben)發(fa)明制(zhi)(zhi)備的ACE抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)肽安全無毒(du)、易于(yu)消化。

具體實施方式

下面結合(he)實(shi)施例對(dui)本發(fa)明作進一步詳(xiang)細(xi)的描述，但本發(fa)明的實(shi)施方(fang)式(shi)不限于此。

實施例1

一(yi)種(zhong)利用魚鱗制備ACE抑制肽的方法，包括以(yi)下步(bu)驟：

(1)將魚鱗(lin)水洗去雜質后(hou)(hou)，用(yong)10％(W/V)的NaCl溶液(ye)浸泡48h，中間換液(ye)一次，脫除雜蛋白和魚銀(yin)粉；將魚鱗(lin)撈出后(hou)(hou)再用(yong)0.4mol/L的HCl溶液(ye)、料(liao)液(ye)比1:15浸泡1h，以脫除鈣鹽(yan)等無機鹽(yan)；

(2)將魚(yu)鱗(lin)用蒸餾水浸泡溶脹1h，然后(hou)用堿性蛋白(bai)酶(mei)(mei)(mei)酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)(jie)，酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)(jie)pH值9，溫(wen)度55℃，底物濃(nong)度為(wei)(wei)5g/100mL，加酶(mei)(mei)(mei)量為(wei)(wei)底物的6％，酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)(jie)時(shi)間2h；酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)(jie)結束(shu)后(hou)在(zai)沸水浴(yu)中加熱(re)10min終止酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)(jie)反應(ying)；

(3)離心(4℃、4000r/min離心15min)，上清液為(wei)酶解液，將酶解液冷凍干燥(zao)得到ACE抑制肽，該ACE抑制肽體外ACE抑制率為(wei)86.20％。

實施例2

一種利用魚鱗制(zhi)(zhi)備ACE抑制(zhi)(zhi)肽的方法，包括以下步驟：

(1)將(jiang)魚(yu)鱗水洗去雜(za)質后，用10％(W/V)的NaCl溶液浸(jin)泡24h，中間換液一次，脫(tuo)除雜(za)蛋白和魚(yu)銀粉；將(jiang)魚(yu)鱗撈出(chu)后再用0.4mol/L的HCl溶液、料液比1:15浸(jin)泡2h，以脫(tuo)除鈣鹽等無機鹽；

(2)將(jiang)魚鱗用(yong)蒸餾水浸(jin)泡溶(rong)脹1h，然后用(yong)堿(jian)性蛋(dan)白(bai)酶酶解(jie)，酶解(jie)pH值9，溫度(du)60℃，底物濃度(du)為5g/100mL，加(jia)酶量為底物的(de)4％，酶解(jie)時間2h；酶解(jie)結(jie)束后在沸水浴中加(jia)熱10min終止酶解(jie)反應(ying)；

(3)離心(4℃、4000r/min離心15min)，上(shang)清液為酶解液，將酶解液冷凍干燥(zao)得到ACE抑制肽(tai)，該ACE抑制肽(tai)體(ti)外ACE抑制率為72.48％。

上(shang)述(shu)實施(shi)例(li)為(wei)本(ben)發(fa)明較佳的(de)(de)(de)實施(shi)方式(shi)，但本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)實施(shi)方式(shi)并不受上(shang)述(shu)實施(shi)例(li)的(de)(de)(de)限制，其(qi)他的(de)(de)(de)任(ren)何未(wei)背(bei)離本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)精神(shen)實質與原理下所作(zuo)的(de)(de)(de)改變(bian)、修飾、替代、組(zu)合、簡化，均應為(wei)等效的(de)(de)(de)置換方式(shi)，都包含在本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)保護范圍之(zhi)內(nei)。