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改良的鈉通道的肽抑制劑的制作方法

文檔(dang)序號:11281430閱(yue)讀(du):255來源:國知(zhi)局(ju)
改良的鈉通道的肽抑制劑的制造方法與工藝

優先權聲明

本申(shen)請(qing)要求(qiu)于(yu)2014年10月8日提(ti)交的(de)美(mei)國臨時申(shen)請(qing)序列號(hao)62/061,461的(de)權益,其全部內容通過引用并入本文。

本發明涉及經優化的(de)(de)肽,其是(shi)具有提高(gao)的(de)(de)與鈉通道(dao)結合并(bing)抑制鈉通道(dao)活化的(de)(de)能力的(de)(de)特化的(de)(de)非天然存在的(de)(de)肽。本發明還涉及用(yong)于通過鈉通道(dao)的(de)(de)活性調(diao)節(jie)鈉吸收和流體(ti)(ti)體(ti)(ti)積(ji)的(de)(de)方法以及用(yong)于通過鈉通道(dao)的(de)(de)活性治(zhi)療響應(ying)于調(diao)節(jie)鈉吸收的(de)(de)病癥(zheng)的(de)(de)方法。



背景技術:

上皮黏膜表面內襯有體積和組成受到精確控制的流體。在氣道中,氣道表面液體的薄膜通過用作潤滑劑高效地清除黏液來幫助保護哺乳動物氣道免受感染(hobbs等,j.physiol.591:4377(2013);knowles等,j.clin.invest.109:571(2002))。該層在清除黏液期間向頭部移動,并且在兩個氣道聚合時累積的過量液體通過以na+通過上皮na+通道(enac)的na+調節的氣道表面液體吸收來消除(hobbs等,j.physiol.591:4377(2013);knowles等,j.clin.invest.109:571(2002))。關鍵的是,在氣道中調節enac活性的機制了解甚少。最近,已累積的證據表明,氣道表面液體中的分子調節劑可以用作體積敏感信號,其稀釋或濃縮可以改變控制離子轉運速率的特定細胞表面受體以根據需要吸收或分泌氣道表面液體(chambers等,respir.physiol.neurobiol.159:256(2007))。作為調節靶標之一,enac必須被細胞內弗林蛋白酶類型蛋白酶和/或細胞外通道激活蛋白酶(channelactivatingprotease,cap)(例如前列腺蛋白酶(prostasin))切割以具有活性并傳導na+(planes等(deng)(deng)(deng),curr.top.dev.biol.78:23(2007);rossier,proc.am.thorac.soc.1:4(2004);vallet等(deng)(deng)(deng),nature389:607(1997);chraibi等(deng)(deng)(deng),j.gen.physiol.111:127(1998))。enac還可(ke)被外源性絲氨酸(suan)蛋白(bai)酶(例如胰(yi)蛋白(bai)酶)切割和活(huo)化(hua),這是被蛋白(bai)酶抑(yi)(yi)制劑抑(yi)(yi)肽(tai)酶減弱(ruo)的(de)作用(vallet等(deng)(deng)(deng),nature389:607(1997))。當(dang)將(jiang)人支氣(qi)管上(shang)皮培養物封固在洗掉天然氣(qi)道表面(mian)液體(ti)(ti)的(de)尤斯灌流室中時,enac顯著地具(ju)有活(huo)性,這表明細胞附(fu)著的(de)蛋白(bai)酶占優勢(myerburg等(deng)(deng)(deng),j.biol.chem.281:27942(2006);tarran等(deng)(deng)(deng),j.gen.physiol.127:591(2006);gaillard等(deng)(deng)(deng),2010pfleugersarch,460:1-17)。相比之下,在存在天然氣(qi)道表面(mian)液體(ti)(ti)的(de)薄膜條(tiao)件下,enac活(huo)性降低,表明氣(qi)道表面(mian)液體(ti)(ti)包含可(ke)溶性蛋白(bai)酶抑(yi)(yi)制劑(myerburg等(deng)(deng)(deng),j.biol.chem.281:27942(2006);tarran等(deng)(deng)(deng),j.gen.physiol.127:591(2006);gaillard等(deng)(deng)(deng),2010pfleugersarch,460:1-17)。

最近(jin),已表(biao)明,短腭(e)、肺和(he)鼻上(shang)皮克隆(long)(splunc1)蛋白(bai)占(zhan)氣道表(biao)面(mian)液(ye)(ye)體(ti)中(zhong)(zhong)的(de)總蛋白(bai)質的(de)多至10%,并且可容(rong)易地在鼻腔灌洗液(ye)(ye)和(he)氣管(guan)分(fen)泌(mi)物二者中(zhong)(zhong)檢測(ce)到(dao)(bingle,c.d.,和(he)craven,c.j.(2002)plunc:anovelfamilyofcandidatehostdefenseproteinsexpressedintheupperairwaysandnasopharynxhummolgenet11,937;campos,m.a.,等(deng)(2004)purificationandcharacterizationofpluncfromhumantracheobronchialsecretionsamjrespircellmolbiol30,184;lindahl,m.,stahlbom,b.,和(he)tagesson,c.(2001);identificationofanewpotentialairwayirritationmarker,palatelungnasalepithelialcloneprotein,inhumannasallavagefluidwithtwo-dimensionalelectrophoresisandmatrix-assistedlaserdesorption/ionization-timeofflightelectrophoresis22,1795)。splunc1顯(xian)示(shi)是(shi)一種體(ti)積敏(min)感分(fen)子,因為其可以分(fen)泌(mi)到(dao)表(biao)達enac的(de)表(biao)面(mian)上(shang)皮的(de)黏膜表(biao)面(mian)中(zhong)(zhong)(bartlett等(deng),j.leukoc.biol.83:1201(2008);bingle等(deng),j.pathol.205:491(2005))。此外,已證明,splunc1包含通過(guo)其n端結構(gou)(gou)域發揮作為enac的(de)抑(yi)制劑的(de)功能的(de)亞結構(gou)(gou)域。

本發明公開了新的(de)(de)特(te)(te)化(hua)的(de)(de)非天然存在的(de)(de)肽,其(qi)通過結合并抑(yi)制(zhi)離(li)子(zi)轉運以調(diao)節(jie)鈉(na)(na)吸收(shou)和流體體積來模擬splunc1在調(diao)節(jie)鈉(na)(na)通道中(zhong)的(de)(de)特(te)(te)性(xing),并且治(zhi)療響應于調(diao)節(jie)鈉(na)(na)吸收(shou)的(de)(de)病(bing)癥。



技術實現要素:

本(ben)發明部分地基于(yu)設(she)計調節鈉(na)通(tong)道(dao)(dao)活性(xing)(xing)的(de)特(te)化的(de)非(fei)天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)肽。因此,在(zai)(zai)一(yi)個(ge)方(fang)(fang)面,本(ben)發明涉及(ji)抑制鈉(na)通(tong)道(dao)(dao)活化的(de)方(fang)(fang)法(fa),其(qi)(qi)包(bao)括使(shi)鈉(na)通(tong)道(dao)(dao)與特(te)化的(de)非(fei)天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)肽或其(qi)(qi)功能(neng)(neng)性(xing)(xing)片(pian)段接觸。在(zai)(zai)一(yi)個(ge)實(shi)施方(fang)(fang)案中,鈉(na)通(tong)道(dao)(dao)是上皮鈉(na)通(tong)道(dao)(dao)(enac)。在(zai)(zai)一(yi)個(ge)實(shi)施方(fang)(fang)案中,特(te)化的(de)非(fei)天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)肽或其(qi)(qi)功能(neng)(neng)性(xing)(xing)片(pian)段與鈉(na)通(tong)道(dao)(dao)結合。

本(ben)發明的(de)(de)另一方(fang)面涉(she)及(ji)通(tong)(tong)過鈉通(tong)(tong)道(dao)抑制鈉吸收(shou)的(de)(de)方(fang)法(fa),其(qi)包括(kuo)使鈉通(tong)(tong)道(dao)與特化(hua)的(de)(de)非天(tian)然(ran)存(cun)在(zai)的(de)(de)肽或(huo)其(qi)功(gong)能性(xing)片段接觸(chu)。在(zai)一個實施方(fang)案中,特化(hua)的(de)(de)非天(tian)然(ran)存(cun)在(zai)的(de)(de)肽或(huo)其(qi)功(gong)能性(xing)片段與鈉通(tong)(tong)道(dao)結(jie)合。

本發明的(de)(de)另一(yi)方(fang)面(mian)涉及(ji)增加內(nei)襯于上皮黏膜表(biao)面(mian)的(de)(de)流體的(de)(de)體積的(de)(de)方(fang)法,其(qi)包括使上皮黏膜表(biao)面(mian)上存(cun)在的(de)(de)鈉(na)通道與(yu)特化的(de)(de)非(fei)(fei)天(tian)然存(cun)在的(de)(de)肽或其(qi)功(gong)(gong)能(neng)性(xing)片(pian)段接(jie)觸。在一(yi)個實(shi)施方(fang)案中,特化的(de)(de)非(fei)(fei)天(tian)然存(cun)在的(de)(de)肽或其(qi)功(gong)(gong)能(neng)性(xing)片(pian)段與(yu)鈉(na)通道結(jie)合。

本(ben)發明的(de)(de)(de)另一(yi)方(fang)面涉及(ji)降低細(xi)胞(bao)表面上(shang)存在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)鈉(na)通(tong)道(dao)的(de)(de)(de)水平的(de)(de)(de)方(fang)法(fa),其(qi)(qi)(qi)包(bao)括使鈉(na)通(tong)道(dao)與(yu)特化的(de)(de)(de)非天然存在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)肽或(huo)其(qi)(qi)(qi)功(gong)能(neng)(neng)性片段(duan)接觸。在(zai)(zai)(zai)一(yi)個實(shi)施方(fang)案中,特化的(de)(de)(de)非天然存在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)肽或(huo)其(qi)(qi)(qi)功(gong)能(neng)(neng)性片段(duan)與(yu)鈉(na)通(tong)道(dao)結(jie)合。

本發明的(de)(de)(de)另一方(fang)面涉及在有需要的(de)(de)(de)對象中(zhong)治療(liao)(liao)響應于抑制跨上(shang)皮黏(nian)膜(mo)表面的(de)(de)(de)鈉(na)吸收的(de)(de)(de)病(bing)癥的(de)(de)(de)方(fang)法,其包括向該對象遞送治療(liao)(liao)有效量的(de)(de)(de)特化的(de)(de)(de)非天然存在的(de)(de)(de)肽或其功能性片段。在一個實(shi)施(shi)方(fang)案(an)中(zhong),特化的(de)(de)(de)非天然存在的(de)(de)(de)肽或其功能性片段與鈉(na)通道(dao)結合。

本發明的(de)(de)另(ling)一方(fang)(fang)面涉(she)及在有需要的(de)(de)對(dui)象中(zhong)調節鹽平衡、血量和/或(huo)血壓的(de)(de)方(fang)(fang)法,其(qi)(qi)包括向該對(dui)象遞(di)送治(zhi)療有效量的(de)(de)特化的(de)(de)非(fei)天然(ran)存(cun)在的(de)(de)肽或(huo)功能(neng)性片段。在一個實施方(fang)(fang)案中(zhong),特化的(de)(de)非(fei)天然(ran)存(cun)在的(de)(de)肽或(huo)其(qi)(qi)功能(neng)性片段與鈉通道結合。

本發明的(de)(de)另一方(fang)面(mian)涉及模擬plunc蛋白的(de)(de)鈉通(tong)道(dao)(dao)(dao)結合(he)(he)結構域(yu)并與鈉通(tong)道(dao)(dao)(dao)結合(he)(he)的(de)(de)特化的(de)(de)非天(tian)然存(cun)在的(de)(de)肽或其功能性(xing)片段,其中當與該(gai)肽結合(he)(he)時蛋白酶(mei)對鈉通(tong)道(dao)(dao)(dao)的(de)(de)切割受到(dao)抑制。

本(ben)發(fa)(fa)明(ming)的另一方(fang)面涉及(ji)包含本(ben)發(fa)(fa)明(ming)的肽的試劑(ji)盒。

本(ben)發明的(de)另一(yi)方面涉及特化的(de)非天然存(cun)在的(de)肽或(huo)其功能性片段(duan)用于制備在有需要的(de)對象中治療響(xiang)應于抑制鈉吸收的(de)病癥(zheng)的(de)藥(yao)物的(de)用途。

本發(fa)明的這些(xie)及(ji)其他方(fang)面在下文對本發(fa)明的描(miao)述中更(geng)詳細(xi)地闡述。

附圖簡述

圖1示出了s18(seqidno:1)的(de)(de)(de)序列。紅(hong)色突出顯示的(de)(de)(de)是enac相(xiang)互作用所必需(xu)的(de)(de)(de)殘(can)基,而藍色突出顯示的(de)(de)(de)是發現(xian)不起作用的(de)(de)(de)殘(can)基。

圖2a至2b顯(xian)示,抑制enac和保持asl高(gao)度(du)需要s18的第(di)一半(lpvpldqt(seqidno:113)而不是(shi)剩余部分dqtlplnvnp(seqidno:114)。

圖(tu)3a顯示(shi),盡管(guan)seqidno:2以(yi)d-丙氨酸為(wei)側翼,s18(seqidno:1)和(he)aalpvpldqtlplnvnpaa(seqidno:2)具(ju)有相(xiang)同的(de)功效(xiao)(xiao)和(he)效(xiao)(xiao)力。圖(tu)3b顯示(shi),盡管(guan)(seqidno:3)以(yi)d-丙氨酸為(wei)側翼,s18和(he)aalpvpldqtaa(seqidno:3)具(ju)有相(xiang)等的(de)功效(xiao)(xiao)和(he)效(xiao)(xiao)力。圖(tu)3a還示(shi)出了肽樣品(pin)的(de)相(xiang)對(dui)功效(xiao)(xiao),所述(shu)肽樣品(pin)包括aalpnlepldqtaa(seqidno:5),其相(xiang)對(dui)于s18或(huo)seqidno:4顯示(shi)出增加的(de)功效(xiao)(xiao)。

圖4示出了s18和seqidno:5的另外的比較,以及seqidno:5的增加的功(gong)效。

圖5a至5u示出了(le)分析當gfp標記的(de)(de)α-enac與β和γenac共(gong)表達時不(bu)同(tong)肽(tai)(tai)對hek293t細胞中(zhong)α-enac內(nei)化的(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)和對細胞生(sheng)存力的(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)實驗(yan)結果(guo)。在幾幅圖的(de)(de)底部示出了(le)ec50值。在這(zhe)(zhe)些圖中(zhong),adg是具(ju)有(you)以下(xia)序列的(de)(de)陰性對照肽(tai)(tai):nh3-adggllllnnppppqtvv-nh2(seqidno:143)。這(zhe)(zhe)些實驗(yan)中(zhong)使用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)肽(tai)(tai)是s18(seqidno:1)、seqidno:2、seqidno:141、seqidno:129、seqidno:130、seqidno:128、seqidno:131、seqidno:132、seqidno:133、seqidno:134、seqidno:135、seqidno:136、seqidno:137、seqidno:138、seqidno:131、seqidno:139、seqidno:140、seqidno:144和seqidno:127。這(zhe)(zhe)些實驗(yan)中(zhong)還(huan)使用(yong)(yong)(yong)了(le)seqidno:12、seqidno:13、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18和seqidno:136的(de)(de)肽(tai)(tai),其各自(zi)在n和c兩端具(ju)有(you)aa帽(mao)。還(huan)示出了(le)阿米洛利,其通過另一種(zhong)機(ji)制(zhi)抑制(zhi)enac,并且不(bu)降低(di)細胞表面上功能性受體的(de)(de)量。

圖6示出(chu)了分析當(dang)gfp標記的α-enac僅與γenac而不與β-enac共表達(da)(da)時不同肽(tai)對(dui)hek293t細(xi)胞中(zhong)α-enac內化的作用的實驗結果(guo)。在(zai)(zai)該(gai)(gai)圖中(zhong),與s18(seqidno:1)和(he)(he)seqidno:128一起使用了seqidno:143(陰性(xing)對(dui)照(zhao)肽(tai))和(he)(he)水(載體(ti))對(dui)照(zhao)。盡管當(dang)共表達(da)(da)β-enac時seqidno:1和(he)(he)seqidno:128有效地降低α-enac,但是當(dang)不存在(zai)(zai)β-enac時,在(zai)(zai)該(gai)(gai)實驗中(zhong)沒(mei)有觀察(cha)到影響。

圖7a示出(chu)了(le)分(fen)析在(zai)用(yong)s18肽(tai)(seqidno:1)處理之(zhi)后對(dui)enac-tgc57bl:fvb小鼠的(de)(de)(de)百分(fen)比存(cun)活的(de)(de)(de)作用(yong)的(de)(de)(de)實驗結果。s18(100mm溶(rong)液)以(yi)1μl/g體重每天(tian)施用(yong)3次。

圖7b示(shi)出了分析在用(yong)吸(xi)入的seqidno:142或seqidno:128處理(li)之后(hou)對enac-tgc57bl:fvb小(xiao)鼠(shu)的百分比存活的作(zuo)用(yong)的實(shi)驗結果。

圖7c和7d示出了分(fen)析在用seqidno:129或seqidno:128處理之后對enac-tgc57bl:c3h小鼠的百分(fen)比存(cun)活的作用的實驗結(jie)果。

圖7e示(shi)出(chu)了分析在用每天一次劑量的(de)seqidno:128處理之后對enac-tgc57bl:c3h小鼠的(de)百分比存活(huo)(左圖)和(he)體(ti)重增加(右圖)的(de)作用的(de)實驗(yan)結果。

圖7f示出(chu)分(fen)析在用seqidno:127、seqidno:134或seqidno:136處理之(zhi)后對(dui)enac-tgc57bl:c3h小鼠的(de)百分(fen)比存(cun)活的(de)作用的(de)實驗結果(guo)。

發明詳述

現(xian)在(zai)將參照附(fu)圖更詳細地(di)(di)描述本(ben)(ben)發(fa)(fa)明,在(zai)附(fu)圖中(zhong)示出了本(ben)(ben)發(fa)(fa)明的一些(xie)優選實施(shi)方案(an)(an)。然(ran)而,本(ben)(ben)發(fa)(fa)明可以(yi)以(yi)不同的形(xing)式體現(xian),并(bing)且(qie)不應被解釋為限于(yu)本(ben)(ben)文所述的實施(shi)方案(an)(an)。當然(ran),提供這些(xie)實施(shi)方案(an)(an),使得本(ben)(ben)公開內容是徹(che)底且(qie)完整的,并(bing)且(qie)將向本(ben)(ben)領(ling)域(yu)技術人員(yuan)充分地(di)(di)傳達本(ben)(ben)發(fa)(fa)明的范圍。

除非(fei)另有(you)定義,否則本文(wen)使用(yong)的(de)(de)所(suo)有(you)技術(shu)和(he)(he)科學(xue)術(shu)語具有(you)與本發(fa)明所(suo)屬領域技術(shu)人員通(tong)常理解的(de)(de)相同的(de)(de)含義。本文(wen)用(yong)于描述本發(fa)明的(de)(de)術(shu)語僅用(yong)于描述特定實施方(fang)案的(de)(de)目的(de)(de),并且不旨在限制本發(fa)明。本文(wen)引(yin)用(yong)的(de)(de)所(suo)有(you)出版物(wu)、專利(li)申請、專利(li)、專利(li)公(gong)開及(ji)其(qi)他參考文(wen)獻針對與引(yin)用(yong)文(wen)獻所(suo)在句子和(he)(he)/或短語相關的(de)(de)教(jiao)導而通(tong)過引(yin)用(yong)并入整體本文(wen)。

氨基酸以由iupac-iub生物(wu)化學(xue)命(ming)名委員會推薦的方(fang)(fang)式,或者(對于氨基酸)通(tong)過單字母代碼或三(san)字母代碼表示,二(er)者均根據37c.f.r.§1.822和已建立的使用(yong)方(fang)(fang)法。

除非上下文另外(wai)明(ming)確(que)指出,在(zai)本發明(ming)說明(ming)書和(he)所附權利(li)要求書的中使用的沒(mei)有數量詞修飾的名(ming)詞還旨在(zai)包括復數形(xing)式(shi)。

此外,本文使用的(de)“和(he)/或(huo)”是指(zhi)且涵蓋相(xiang)關(guan)所列舉(ju)項目中(zhong)一(yi)個或(huo)更(geng)多個的(de)任(ren)何和(he)所有(you)可(ke)能(neng)組(zu)(zu)合,以及在替代方案(an)(“或(huo)”)中(zhong)解釋時(shi)缺(que)少的(de)組(zu)(zu)合。

術(shu)語“基(ji)(ji)(ji)本上(shang)由(you)(you)...組成”(及其語法變化形(xing)式)當(dang)應用于本發(fa)明的(de)(de)肽(tai)(tai)序(xu)列(lie)時意指由(you)(you)以下兩者(zhe)組成肽(tai)(tai):所(suo)記載(zai)的(de)(de)序(xu)列(lie)(例如,seqidno)和(he)在所(suo)記載(zai)的(de)(de)序(xu)列(lie)的(de)(de)n-端和(he)/或(huo)(huo)c-端的(de)(de)總(zong)(zong)共10個(ge)或(huo)(huo)更少(shao)(例如,1、2、3、4、5、6、7、8、9或(huo)(huo)10)的(de)(de)附(fu)加(jia)(jia)氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸,以致所(suo)述肽(tai)(tai)的(de)(de)功(gong)能未被實(shi)質(zhi)改(gai)變。總(zong)(zong)共10個(ge)或(huo)(huo)更少(shao)的(de)(de)附(fu)加(jia)(jia)氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)(ji)包括(kuo)兩端的(de)(de)附(fu)加(jia)(jia)氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)(ji)加(jia)(jia)在一(yi)起的(de)(de)總(zong)(zong)量。術(shu)語“實(shi)質(zhi)地改(gai)變”當(dang)應用于本發(fa)明的(de)(de)肽(tai)(tai)時是指與由(you)(you)所(suo)記載(zai)的(de)(de)序(xu)列(lie)組成的(de)(de)肽(tai)(tai)的(de)(de)活性相比,結合活性(例如,與鈉(na)通道或(huo)(huo)特(te)化的(de)(de)非天(tian)然存在的(de)(de)肽(tai)(tai))增加(jia)(jia)或(huo)(huo)降(jiang)低至少(shao)約50%或(huo)(huo)更多。

術(shu)語“調節”指特定(ding)活性(xing)水平的增強(例如(ru)增加(jia))或抑(yi)制(例如(ru)降低)。

術語“增(zeng)(zeng)強”或(huo)“增(zeng)(zeng)加”指特定參數增(zeng)(zeng)加至少約1.25倍(bei)(bei)、1.5倍(bei)(bei)、2倍(bei)(bei)、3倍(bei)(bei)、4倍(bei)(bei)、5倍(bei)(bei)、6倍(bei)(bei)、8倍(bei)(bei)、10倍(bei)(bei)、12倍(bei)(bei)或(huo)者甚至15倍(bei)(bei)。

本(ben)文使用的術語“抑制(zhi)”或(huo)“降(jiang)低(di)(di)”或(huo)者其(qi)語法(fa)變化形式指特定水平或(huo)活性降(jiang)低(di)(di)或(huo)減小至少(shao)約(yue)15%、25%、35%、40%、50%、60%、75%、80%、90%、95%或(huo)更多。在一(yi)些具體(ti)實施方案中,抑制(zhi)或(huo)降(jiang)低(di)(di)導致很少(shao)或(huo)基本(ben)上沒有(you)可(ke)檢測的活性(至多,不顯(xian)著量(liang),例如小于約(yue)10%或(huo)甚至5%)。

關(guan)于特化(hua)的(de)非天然(ran)(ran)存(cun)(cun)在的(de)肽和鈉通道,所使用(yong)的(de)術(shu)語(yu)“接(jie)觸”或其(qi)語(yu)法(fa)變化(hua)形式指使特化(hua)的(de)非天然(ran)(ran)存(cun)(cun)在的(de)肽和鈉通道彼此充分接(jie)近以使一(yi)者對另一(yi)者施(shi)加生物效應(ying)。在一(yi)些實施(shi)方案中,術(shu)語(yu)接(jie)觸意指特化(hua)的(de)非天然(ran)(ran)存(cun)(cun)在的(de)肽與(yu)鈉通道結合(he)。

本文使用的(de)“治療(liao)(liao)有效”量(liang)是(shi)為對(dui)象(xiang)提(ti)供(gong)一些改善或(huo)益(yi)處的(de)量(liang)。換句話說,“治療(liao)(liao)有效”量(liang)是(shi)在對(dui)象(xiang)中(zhong)一定程度地緩解、緩和或(huo)減(jian)輕至少(shao)一種臨床(chuang)癥狀的(de)量(liang)。本領(ling)域技(ji)術(shu)人員(yuan)將理(li)解,治療(liao)(liao)效果無(wu)需(xu)是(shi)完全或(huo)可治愈的(de),只要(yao)向(xiang)對(dui)象(xiang)提(ti)供(gong)一些益(yi)處即可。

術(shu)語“治療”旨(zhi)在降低或者(zhe)至少(shao)部分(fen)地改善或改變對(dui)象的病癥的嚴重(zhong)程度,并且旨(zhi)在實現至少(shao)一(yi)種臨(lin)床(chuang)癥狀(zhuang)的一(yi)定程度的緩解、緩和或減輕(qing)。

術(shu)語“片(pian)(pian)段(duan)(duan)”當應用于(yu)肽(tai)(tai)(tai)時將被理解為意指相對于(yu)參(can)照(zhao)肽(tai)(tai)(tai)或(huo)(huo)(huo)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序列(lie)而言(yan)長(chang)度縮短的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序列(lie),并且包含與(yu)參(can)照(zhao)肽(tai)(tai)(tai)或(huo)(huo)(huo)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序列(lie)相同(tong)的(de)(de)(de)連(lian)續(xu)(xu)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序列(lie)、基(ji)(ji)(ji)(ji)本(ben)上(shang)由其(qi)組(zu)成(cheng)和/或(huo)(huo)(huo)由其(qi)組(zu)成(cheng)。在適當時,根(gen)(gen)據本(ben)發(fa)(fa)明的(de)(de)(de)這(zhe)樣(yang)的(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)片(pian)(pian)段(duan)(duan)可(ke)(ke)包含較(jiao)大多(duo)(duo)肽(tai)(tai)(tai)中,所述肽(tai)(tai)(tai)片(pian)(pian)段(duan)(duan)為較(jiao)大多(duo)(duo)肽(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)組(zu)成(cheng)部分。在一些(xie)實(shi)施方案中,這(zhe)樣(yang)的(de)(de)(de)片(pian)(pian)段(duan)(duan)可(ke)(ke)以包含長(chang)度為根(gen)(gen)據本(ben)發(fa)(fa)明的(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)或(huo)(huo)(huo)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序列(lie)的(de)(de)(de)至(zhi)少約(yue)4、5、6、7、8、9、10或(huo)(huo)(huo)更多(duo)(duo)個(ge)連(lian)續(xu)(xu)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)的(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)、基(ji)(ji)(ji)(ji)本(ben)上(shang)由其(qi)組(zu)成(cheng)和/或(huo)(huo)(huo)由其(qi)組(zu)成(cheng)。在另一些(xie)實(shi)施方案中,這(zhe)樣(yang)的(de)(de)(de)片(pian)(pian)段(duan)(duan)可(ke)(ke)以包含長(chang)度小于(yu)根(gen)(gen)據本(ben)發(fa)(fa)明的(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)或(huo)(huo)(huo)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序列(lie)的(de)(de)(de)約(yue)10、9、8、7、6、5、4或(huo)(huo)(huo)更少個(ge)連(lian)續(xu)(xu)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)的(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai),基(ji)(ji)(ji)(ji)本(ben)上(shang)由其(qi)組(zu)成(cheng)和/或(huo)(huo)(huo)由其(qi)組(zu)成(cheng)。

除(chu)非另外(wai)說明,否則本文使用的(de)術語“蛋白(bai)質(zhi)”和(he)“多(duo)肽”可互(hu)換(huan)使用并且涵蓋肽和(he)蛋白(bai)質(zhi)二者。

“融(rong)合(he)(he)(he)蛋白(bai)”是當將天然發現未融(rong)合(he)(he)(he)在一(yi)起(qi)的(de)編碼兩種(或(huo)(huo)更多(duo)種)不同多(duo)肽的(de)兩個異源核苷酸(suan)序列或(huo)(huo)其片(pian)段一(yi)起(qi)融(rong)合(he)(he)(he)在正確的(de)翻譯閱讀框時產(chan)生的(de)多(duo)肽。舉例(li)說明性(xing)的(de)融(rong)合(he)(he)(he)多(duo)肽包(bao)括本發明的(de)肽(或(huo)(huo)其片(pian)段)與谷胱甘肽-s-轉移酶(mei)、麥芽糖結合(he)(he)(he)蛋白(bai)或(huo)(huo)報道(dao)蛋白(bai)(例(li)如,綠色熒光蛋白(bai)、β-葡糖醛酸(suan)糖苷酶(mei)、β-半乳(ru)糖苷酶(mei)、螢光素酶(mei)等)、血凝(ning)素、c-myc、flag表位等的(de)全部(bu)或(huo)(huo)一(yi)部(bu)分(fen)的(de)融(rong)合(he)(he)(he)體。

本(ben)文(wen)使用的(de)(de)“功(gong)(gong)(gong)(gong)能(neng)性(xing)(xing)(xing)”肽(tai)(tai)或(huo)(huo)(huo)“功(gong)(gong)(gong)(gong)能(neng)性(xing)(xing)(xing)片段(duan)”是(shi)基本(ben)上(shang)保留(liu)(liu)與該(gai)肽(tai)(tai)通(tong)常相(xiang)關的(de)(de)至(zhi)(zhi)少(shao)一(yi)種生物活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(例如(ru)(ru),結(jie)合(he)(he)或(huo)(huo)(huo)抑(yi)制(zhi)鈉通(tong)道)的(de)(de)功(gong)(gong)(gong)(gong)能(neng)性(xing)(xing)(xing)片段(duan)。在一(yi)些具體實施方案中,“功(gong)(gong)(gong)(gong)能(neng)性(xing)(xing)(xing)”肽(tai)(tai)或(huo)(huo)(huo)“功(gong)(gong)(gong)(gong)能(neng)性(xing)(xing)(xing)片段(duan)”基本(ben)上(shang)保留(liu)(liu)未經修飾的(de)(de)肽(tai)(tai)所具有的(de)(de)所有活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)。“基本(ben)上(shang)保留(liu)(liu)”生物活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)意指該(gai)肽(tai)(tai)保留(liu)(liu)天然多肽(tai)(tai)的(de)(de)生物活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)至(zhi)(zhi)少(shao)約20%、30%、40%、50%、60%、75%、85%、90%、95%、97%、99%或(huo)(huo)(huo)更(geng)多(并且甚至(zhi)(zhi)可(ke)以(yi)具有比天然肽(tai)(tai)更(geng)高的(de)(de)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)水平)。“非功(gong)(gong)(gong)(gong)能(neng)性(xing)(xing)(xing)”肽(tai)(tai)是(shi)顯(xian)示出(chu)很少(shao)或(huo)(huo)(huo)基本(ben)上(shang)沒有與所述(shu)肽(tai)(tai)相(xiang)關的(de)(de)可(ke)檢(jian)測(ce)生物活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(例如(ru)(ru),至(zhi)(zhi)多,僅(jin)不顯(xian)著量,例如(ru)(ru)例如(ru)(ru)小于約10%或(huo)(huo)(huo)甚至(zhi)(zhi)5%)的(de)(de)肽(tai)(tai)。生物活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(例如(ru)(ru)蛋(dan)白質結(jie)合(he)(he)和鈉通(tong)道抑(yi)制(zhi)活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing))可(ke)以(yi)使用本(ben)領域公知的(de)(de)和如(ru)(ru)本(ben)文(wen)所述(shu)的(de)(de)測(ce)定(ding)來測(ce)量。

當涉(she)及(ji)例如多肽量(liang)、劑量(liang)、時間、溫(wen)度、酶活性或(huo)其他(ta)生物活性等(deng)的可測(ce)量(liang)值時,本文使用的術語(yu)“約(yue)/大約(yue)”意指(zhi)涵蓋特(te)定量(liang)的±20%、±10%、±5%、±1%、±0.5%或(huo)±甚至0.1%的變化。

本(ben)發(fa)明的第一(yi)方(fang)面(mian)涉(she)及特(te)化(hua)的非(fei)天(tian)然存(cun)在的肽(tai)與(yu)鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)結合并阻止鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)活化(hua)從而(er)抑(yi)制(zhi)鈉(na)(na)(na)離(li)子流(liu)動的能力(li)。因此,本(ben)發(fa)明的一(yi)個方(fang)面(mian)涉(she)及抑(yi)制(zhi)鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)活化(hua)的方(fang)法,其(qi)(qi)包括使鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)與(yu)特(te)化(hua)的非(fei)天(tian)然存(cun)在的肽(tai)或(huo)其(qi)(qi)功能性片段(duan)接觸(例(li)(li)如,結合)。在一(yi)個實施(shi)方(fang)案(an)中(zhong),鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)是上皮鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)(enac),例(li)(li)如人enac或(huo)非(fei)人哺乳動物(wu)enac。在另一(yi)個實施(shi)方(fang)案(an)中(zhong),鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)是在序列和(he)/或(huo)結構上與(yu)enac類似的通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao),例(li)(li)如酸敏感離(li)子通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)(asic)。鈉(na)(na)(na)通(tong)(tong)(tong)道(dao)(dao)活性的抑(yi)制(zhi)可通(tong)(tong)(tong)過本(ben)領域已(yi)知或(huo)本(ben)文(wen)公開的任何(he)方(fang)法來測量,包括但不(bu)限于(yu)鈉(na)(na)(na)流(liu)量或(huo)者跨(kua)膜、跨(kua)細(xi)胞或(huo)跨(kua)天(tian)然或(huo)人工(gong)內襯的電位變化(hua)。抑(yi)制(zhi)可為至少約(yue)20%,例(li)(li)如至少約(yue)30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或(huo)100%。

抑(yi)制鈉通(tong)道(dao)活(huo)化的(de)方(fang)(fang)法可在(zai)例(li)(li)(li)如(ru)分(fen)離(li)的(de)鈉通(tong)道(dao)、人工膜中(zhong)(zhong)的(de)鈉通(tong)道(dao)或(huo)細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)(zhong)的(de)鈉通(tong)道(dao)上(shang)(shang)進行。在(zai)一(yi)個(ge)(ge)實(shi)(shi)(shi)施方(fang)(fang)案(an)(an)(an)(an)中(zhong)(zhong),鈉通(tong)道(dao)存(cun)在(zai)于(yu)(yu)分(fen)離(li)的(de)細(xi)胞(bao)(bao),例(li)(li)(li)如(ru)培養的(de)原代細(xi)胞(bao)(bao)或(huo)細(xi)胞(bao)(bao)系中(zhong)(zhong)。在(zai)另一(yi)個(ge)(ge)實(shi)(shi)(shi)施方(fang)(fang)案(an)(an)(an)(an)中(zhong)(zhong),分(fen)離(li)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)是(shi)上(shang)(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)培養物的(de)一(yi)部分(fen),例(li)(li)(li)如(ru)天然或(huo)人工上(shang)(shang)皮(pi)內襯,例(li)(li)(li)如(ru)其中(zhong)(zhong)可跨內襯測量(liang)例(li)(li)(li)如(ru)離(li)子流(liu)量(liang)和/或(huo)電位的(de)特征(zheng)的(de)裝置(zhi)(例(li)(li)(li)如(ru)尤斯灌流(liu)室)中(zhong)(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)培養物。在(zai)另一(yi)個(ge)(ge)實(shi)(shi)(shi)施方(fang)(fang)案(an)(an)(an)(an)中(zhong)(zhong),細(xi)胞(bao)(bao)是(shi)分(fen)離(li)的(de)組織或(huo)組織培養物的(de)一(yi)部分(fen)。在(zai)另一(yi)個(ge)(ge)實(shi)(shi)(shi)施方(fang)(fang)案(an)(an)(an)(an)中(zhong)(zhong),細(xi)胞(bao)(bao)可以存(cun)在(zai)于(yu)(yu)動物,例(li)(li)(li)如(ru)作為疾病(bing)模(mo)型或(huo)需要治療的(de)對象的(de)動物中(zhong)(zhong)。

在(zai)一個實施(shi)方案(an)中,使鈉(na)通(tong)道與(yu)特化的(de)非天然(ran)存在(zai)的(de)肽(tai)接觸(例如,結合(he))的(de)步驟包(bao)(bao)括將特化的(de)非天然(ran)存在(zai)的(de)肽(tai)或者其功能性片段或同系物遞(di)送至(zhi)包(bao)(bao)含(han)鈉(na)通(tong)道的(de)細胞(bao)。

本文使用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)術語“同系物”用(yong)于指這(zhe)樣的(de)(de)(de)(de)(de)多肽(tai),其與(yu)公(gong)開(kai)的(de)(de)(de)(de)(de)特化(hua)(hua)(hua)非天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)區別之(zhi)處(chu)在(zai)(zai)于對特化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)多肽(tai)進行了修飾但顯著(zhu)保(bao)留所公(gong)開(kai)的(de)(de)(de)(de)(de)非天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)物活(huo)性(xing)。次要修飾包(bao)括(kuo)(kuo)但不限(xian)于一(yi)(yi)個或(huo)(huo)幾個氨(an)(an)基酸側鏈的(de)(de)(de)(de)(de)改變(bian)、一(yi)(yi)個或(huo)(huo)幾個氨(an)(an)基酸的(de)(de)(de)(de)(de)變(bian)化(hua)(hua)(hua)(包(bao)括(kuo)(kuo)缺失(shi)、插入和(he)替換(huan))、一(yi)(yi)個或(huo)(huo)幾個原(yuan)子的(de)(de)(de)(de)(de)立體(ti)化(hua)(hua)(hua)學變(bian)化(hua)(hua)(hua)以及少量衍(yan)生(sheng)化(hua)(hua)(hua),包(bao)括(kuo)(kuo)但不限(xian)于甲(jia)基化(hua)(hua)(hua)、糖基化(hua)(hua)(hua)、磷(lin)酸化(hua)(hua)(hua)、乙酰(xian)化(hua)(hua)(hua)、肉豆蔻酰(xian)化(hua)(hua)(hua)、異戊烯化(hua)(hua)(hua)、棕櫚酰(xian)化(hua)(hua)(hua)、酰(xian)胺(an)化(hua)(hua)(hua)和(he)糖基磷(lin)脂酰(xian)肌醇的(de)(de)(de)(de)(de)添加。本文使用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)術語“基本上(shang)保(bao)留”指保(bao)留天(tian)然(ran)存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)性(xing)(例如,結合鈉通(tong)道)的(de)(de)(de)(de)(de)至少約20%,例如約30%、40%、50%或(huo)(huo)更多的(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)片段、同系物或(huo)(huo)其他變(bian)體(ti)。取(qu)決于肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)其他生(sheng)物活(huo)性(xing)可包(bao)括(kuo)(kuo)酶活(huo)性(xing)、受體(ti)結合、配體(ti)結合、生(sheng)長因子的(de)(de)(de)(de)(de)誘(you)導、細胞信號轉導事件(jian)等。

在(zai)一(yi)(yi)(yi)(yi)個(ge)(ge)實施方(fang)案(an)(an)中(zhong),所(suo)(suo)述(shu)(shu)方(fang)法包括向包含(han)鈉通道的(de)(de)(de)(de)細胞遞(di)送分離(li)的(de)(de)(de)(de)特(te)化(hua)的(de)(de)(de)(de)非(fei)(fei)天(tian)(tian)然(ran)(ran)存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)肽。在(zai)一(yi)(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)示例性(xing)實施方(fang)案(an)(an)中(zhong),特(te)化(hua)的(de)(de)(de)(de)非(fei)(fei)天(tian)(tian)然(ran)(ran)存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)肽包含(han)公開的(de)(de)(de)(de)特(te)化(hua)的(de)(de)(de)(de)非(fei)(fei)天(tian)(tian)然(ran)(ran)存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)肽或其(qi)(qi)(qi)功能(neng)性(xing)片(pian)段(duan)、基(ji)(ji)(ji)(ji)本上(shang)由(you)其(qi)(qi)(qi)組(zu)成(cheng)(cheng)或由(you)其(qi)(qi)(qi)組(zu)成(cheng)(cheng)。在(zai)另一(yi)(yi)(yi)(yi)個(ge)(ge)實施方(fang)案(an)(an)中(zhong),分離(li)的(de)(de)(de)(de)特(te)化(hua)的(de)(de)(de)(de)非(fei)(fei)天(tian)(tian)然(ran)(ran)存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)肽包含(han)與公知的(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)序(xu)列或其(qi)(qi)(qi)功能(neng)性(xing)片(pian)段(duan)具(ju)有至(zhi)少(shao)(shao)70%同一(yi)(yi)(yi)(yi)性(xing),例如(ru)至(zhi)少(shao)(shao)75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%同一(yi)(yi)(yi)(yi)性(xing)的(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)序(xu)列、基(ji)(ji)(ji)(ji)本上(shang)由(you)其(qi)(qi)(qi)組(zu)成(cheng)(cheng)或由(you)其(qi)(qi)(qi)組(zu)成(cheng)(cheng)。在(zai)一(yi)(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)實施方(fang)案(an)(an)中(zhong),所(suo)(suo)述(shu)(shu)肽包含(han)plunc蛋白的(de)(de)(de)(de)天(tian)(tian)然(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)序(xu)列的(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)(yi)(yi)部分,其(qi)(qi)(qi)具(ju)有一(yi)(yi)(yi)(yi)個(ge)(ge)或更(geng)多個(ge)(ge)保(bao)守的(de)(de)(de)(de)天(tian)(tian)然(ran)(ran)或非(fei)(fei)天(tian)(tian)然(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)替(ti)換和(he)/或一(yi)(yi)(yi)(yi)個(ge)(ge)或更(geng)多個(ge)(ge)非(fei)(fei)天(tian)(tian)然(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)添加。保(bao)守替(ti)換物(wu)如(ru)下所(suo)(suo)述(shu)(shu)。在(zai)一(yi)(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)實施方(fang)案(an)(an)中(zhong),如(ru)下所(suo)(suo)述(shu)(shu),所(suo)(suo)述(shu)(shu)肽包含(han)如(ru)下一(yi)(yi)(yi)(yi)個(ge)(ge)或更(geng)多個(ge)(ge)末端修飾。

本(ben)發明(ming)肽的(de)非(fei)限制性(xing)實例(li)在下(xia)表1中(zhong)公開。在一(yi)些(xie)實施(shi)方(fang)案(an)中(zhong),本(ben)發明(ming)的(de)肽可(ke)以(yi)(yi)在氨(an)(an)基(ji)(ji)和/或羧基(ji)(ji)末端包含一(yi)個或更多個附(fu)(fu)加殘基(ji)(ji)。在一(yi)些(xie)實施(shi)方(fang)案(an)中(zhong),一(yi)個或更多個附(fu)(fu)加殘基(ji)(ji)是d-丙氨(an)(an)酸。例(li)如(ru),肽可(ke)以(yi)(yi)在氨(an)(an)基(ji)(ji)和/或羧基(ji)(ji)末端包含一(yi)個或兩(liang)個d-丙氨(an)(an)酸。

本(ben)(ben)發明的(de)(de)(de)特化的(de)(de)(de)非天然(ran)存(cun)在的(de)(de)(de)肽還(huan)包(bao)括(kuo)功能(neng)性(xing)部分或(huo)片(pian)段(duan)。片(pian)段(duan)的(de)(de)(de)長度不(bu)關鍵(jian),只要其基(ji)本(ben)(ben)上保留肽的(de)(de)(de)生物活性(xing)(例(li)如,鈉(na)通道(dao)結合活性(xing))即(ji)可。舉(ju)例(li)說明性(xing)的(de)(de)(de)片(pian)段(duan)包(bao)含特化的(de)(de)(de)天然(ran)存(cun)在的(de)(de)(de)肽的(de)(de)(de)至少約4、5、6、7、8、9、10或(huo)更多連(lian)續氨基(ji)酸。在另(ling)一些實施方案中,所(suo)述(shu)片(pian)段(duan)包(bao)含特化的(de)(de)(de)非天然(ran)存(cun)在的(de)(de)(de)肽的(de)(de)(de)不(bu)超(chao)過約10、9、8、7、6、5或(huo)4個連(lian)續氨基(ji)酸。

同樣,本領域技術人員將認識到,本發明還涵(han)蓋包含(han)特化的(de)非天然存(cun)在的(de)肽或(huo)其功(gong)能性(xing)(xing)片段的(de)融合(he)多肽。作為另一(yi)個(ge)替代方案,融合(he)蛋白(bai)可包含(han)報道分(fen)子(zi)。在另一(yi)些實施方案中,融合(he)蛋白(bai)可包含(han)提供與所述肽的(de)活性(xing)(xing)相同或(huo)不(bu)同的(de)功(gong)能或(huo)活性(xing)(xing)的(de)多肽,例如靶向(xiang)、結合(he)、或(huo)者(zhe)酶活性(xing)(xing)或(huo)功(gong)能。

同樣,應理解,本文具體公開的肽(tai)通(tong)常容(rong)許氨基(ji)酸序列中(zhong)的替(ti)換(huan)并且基(ji)本上保留生物(wu)活性(xing)。為了(le)鑒定本發(fa)明除本文具體公開的那些之外(wai)的肽(tai),氨基(ji)酸替(ti)換(huan)可基(ji)于(yu)本領域已知的任何特征(zheng),包(bao)括氨基(ji)酸側鏈(lian)取(qu)代(dai)基(ji)的相(xiang)對(dui)類(lei)似性(xing)或差異,例(li)如其疏水性(xing)、親水性(xing)、電(dian)荷(he)、大小等(deng)。

在鑒定編碼除本文具體公開的(de)(de)那些肽(tai)之外的(de)(de)肽(tai)的(de)(de)氨(an)(an)(an)基(ji)酸序列中(zhong)(zhong),可(ke)考慮(lv)氨(an)(an)(an)基(ji)酸的(de)(de)親(qin)水指(zhi)數(shu)。親(qin)水性氨(an)(an)(an)基(ji)酸指(zhi)數(shu)在賦予蛋白質(zhi)(zhi)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)(yong)的(de)(de)生物功能中(zhong)(zhong)的(de)(de)重要性在本領域中(zhong)(zhong)是(shi)普遍理解(jie)的(de)(de)(參見,kyte和doolittle,j.mol.biol.157:105(1982);其通過引(yin)用(yong)(yong)整體并入本文)。公認的(de)(de)是(shi),氨(an)(an)(an)基(ji)酸的(de)(de)相(xiang)對親(qin)水特(te)征有(you)助于所得蛋白質(zhi)(zhi)的(de)(de)二級結(jie)構(gou),其進(jin)而限定蛋白質(zhi)(zhi)與其他分子例(li)如酶、底物、受(shou)體、dna、抗體、抗原等(deng)的(de)(de)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)(yong)。

每個(ge)氨(an)(an)(an)基酸(suan)(suan)(suan)已基于其(qi)疏水(shui)(shui)性和電荷特征分配親(qin)水(shui)(shui)指(zhi)數(kyte和doolittle,同上(shang)),這些是:異亮氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+4.5)、纈氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+4.2)、亮氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+3.8)、苯丙氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+2.8)、半胱(guang)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)/胱(guang)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+2.5)、甲硫氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+1.9)、丙氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+1.8)、甘氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.4)、蘇氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.7)、絲氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.8)、色氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.9)、酪氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-1.3)、脯氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-1.6)、組氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.2)、谷氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.5)、谷氨(an)(an)(an)酰胺(-3.5)、天冬氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.5)、天冬酰胺(-3.5)、賴氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.9)和精氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-4.5)。

因此,當修飾(shi)本文具(ju)體公開的(de)肽時,可考慮(lv)氨(an)基酸(suan)(或氨(an)基酸(suan)序列)的(de)親水指數。

在(zai)本(ben)領域(yu)中還應理解,氨基酸的(de)替換可(ke)基于親(qin)(qin)水性(xing)進行。美國專利no.4,554,101(通(tong)過引用整(zheng)體(ti)并(bing)入本(ben)文(wen))指(zhi)出,蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)最大局部親(qin)(qin)水性(xing)(如由其相(xiang)鄰氨基酸的(de)親(qin)(qin)水性(xing)控制的(de))與蛋(dan)白(bai)質(zhi)的(de)生物特性(xing)相(xiang)關。

如美國專利no.4,554,101中詳(xiang)述的(de),已(yi)向氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)分配以下親水性(xing)值(zhi):精氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0)、賴(lai)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(±3.0)、天冬氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0±1)、谷氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0±1)、絲(si)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+0.3)、天冬酰(xian)胺(+0.2)、谷氨(an)酰(xian)胺(+0.2)、甘(gan)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(0)、蘇氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.4)、脯氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.5±i)、丙氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.5)、組氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.5)、半胱氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.0)、甲硫氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.3)、纈氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.5)、亮(liang)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.8)、異亮(liang)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.8)、酪氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-2.3)、苯(ben)丙氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-2.5)、色氨(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-3.4)。

因此,當鑒定除本文具體公開(kai)的那些肽之外的另外的肽時,可(ke)考(kao)慮氨基(ji)酸(或氨基(ji)酸序列)的親水性。

本發明的肽(tai)(及其(qi)片段(duan))包括與本文公開的肽(tai)序列具(ju)有至少約70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或(huo)更高氨基酸序列同一性的肽(tai)。

如本領域已(yi)知的(de)(de)(de),可(ke)使(shi)用很多(duo)不同的(de)(de)(de)程序(xu)來鑒定多(duo)肽是否與(yu)已(yi)知序(xu)列具有(you)序(xu)列同一性(xing)或(huo)相(xiang)似(si)性(xing)。序(xu)列同一性(xing)或(huo)相(xiang)似(si)性(xing)可(ke)使(shi)用本領域已(yi)知的(de)(de)(de)標準技術(shu)來確定,包括但不限于smith&waterman,adv.appl.math.2:482(1981)的(de)(de)(de)局部序(xu)列同一性(xing)算(suan)法(fa);通(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)needleman&wunsch,j.mol.biol.48:443(1970)的(de)(de)(de)序(xu)列同一性(xing)比對算(suan)法(fa);通(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)pearson&lipman,proc.natl.acad.sci.usa85:2444(1988)的(de)(de)(de)相(xiang)似(si)性(xing)檢索(suo)方法(fa);通(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)這些(xie)算(suan)法(fa)(wisconsingeneticssoftwarepackage,geneticscomputergroup,575sciencedrive,madison,wi中(zhong)的(de)(de)(de)gap、bestfit、fasta和tfasta)的(de)(de)(de)計算(suan)機化實施;devereux等,nucl.acidres.12:387(1984)描述的(de)(de)(de)最佳擬合(he)序(xu)列程序(xu),優選(xuan)地使(shi)用默認(ren)設置,或(huo)者通(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)檢驗。

可(ke)用(yong)算法(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)一個實例是(shi)pileup。pileup使用(yong)漸進式的(de)(de)(de)(de)成(cheng)對比(bi)對由一組相(xiang)關序列(lie)生成(cheng)多重序列(lie)比(bi)對。其還(huan)可(ke)繪制顯示用(yong)于生成(cheng)比(bi)對結果的(de)(de)(de)(de)聚類(lei)關系的(de)(de)(de)(de)樹。pileup使用(yong)feng和doolittle,j.mol.evol.35:351(1987)的(de)(de)(de)(de)漸進式比(bi)對方(fang)法(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)簡化(hua);該(gai)方(fang)法(fa)(fa)與higgins和sharp,cabios5:151(1989)所述的(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)類(lei)似。

可用算法的另一個實例是(shi)在altschul等(deng),j.mol.biol.215:403(1990)和karlin等(deng).,proc.natl.acad.sci.usa90:5873(1993)中所(suo)述的blast算法。特別有用的blast程(cheng)序(xu)是(shi)從(cong)altschul等(deng),meth.enzymol.,266:460(1996);blast.wustl/edu/blast/readme.html.獲得的wu-blast-2程(cheng)序(xu)。wu-blast-2使用數(shu)個優選設置為默認值的檢索參(can)數(shu)。這些(xie)參(can)數(shu)是(shi)動(dong)態值,并(bing)且由程(cheng)序(xu)本身根據具體序(xu)列的組(zu)成和檢索目的序(xu)列所(suo)針對的具體數(shu)據庫的組(zu)成確定;然而,可調(diao)整這些(xie)值以(yi)增(zeng)加靈敏(min)度。

另一種(zhong)可用的算法是由altschul等(deng),nucleicacidsres.25:3389(1997)報道的有空位的blast。

百(bai)分比(bi)氨基(ji)酸序列(lie)(lie)同(tong)一(yi)性值由(you)匹配相同(tong)殘(can)基(ji)的數(shu)目除(chu)以比(bi)對區中(zhong)(zhong)“較(jiao)長”序列(lie)(lie)的殘(can)基(ji)總數(shu)來確定。“較(jiao)長”序列(lie)(lie)是(shi)在(zai)比(bi)對區中(zhong)(zhong)具有最多實際殘(can)基(ji)的序列(lie)(lie)(忽略wu-blast-2為最大化比(bi)對評分而引入的空(kong)位(wei))。

比(bi)(bi)對(dui)(dui)可包(bao)括在待比(bi)(bi)對(dui)(dui)的(de)序(xu)列(lie)中引入(ru)(ru)空(kong)位(wei)。此外,對(dui)(dui)于(yu)與本文(wen)具體公開的(de)肽相比(bi)(bi)包(bao)含更多或更少(shao)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)的(de)序(xu)列(lie),應理(li)解,在一(yi)個(ge)實施方(fang)案中,序(xu)列(lie)同(tong)一(yi)性(xing)的(de)百分(fen)(fen)(fen)比(bi)(bi)將基(ji)(ji)(ji)于(yu)相對(dui)(dui)于(yu)總氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)數(shu)的(de)相同(tong)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)的(de)數(shu)目來(lai)(lai)確(que)定(ding)。因此,例如(ru),在一(yi)個(ge)實施方(fang)案中,使用較短序(xu)列(lie)中氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)的(de)數(shu)目來(lai)(lai)確(que)定(ding)比(bi)(bi)本文(wen)具體公開的(de)序(xu)列(lie)短的(de)序(xu)列(lie)的(de)序(xu)列(lie)同(tong)一(yi)性(xing)。在百分(fen)(fen)(fen)比(bi)(bi)同(tong)一(yi)性(xing)計算(suan)中,序(xu)列(lie)變化的(de)不同(tong)顯示(例如(ru)插入(ru)(ru)、缺失、替(ti)換(huan)等(deng))不分(fen)(fen)(fen)配相對(dui)(dui)權重。

在一個(ge)實(shi)施方案中,僅(jin)將(jiang)(jiang)同一性(xing)(xing)評正(zheng)分(+1)并(bing)且向包括空位的(de)所有(you)(you)序(xu)(xu)列(lie)(lie)變化形式(shi)評分為(wei)“0”,其避(bi)免用于(yu)序(xu)(xu)列(lie)(lie)相似性(xing)(xing)計(ji)算的(de)下述加權標度或參數的(de)需要(yao)。百分比(bi)序(xu)(xu)列(lie)(lie)同一性(xing)(xing),可例如通過將(jiang)(jiang)匹配相同殘(can)基(ji)(ji)的(de)數目除以比(bi)對區(qu)中“較短”序(xu)(xu)列(lie)(lie)的(de)總(zong)殘(can)基(ji)(ji)數并(bing)乘以100來確定。“較長”序(xu)(xu)列(lie)(lie)是在比(bi)對區(qu)中具有(you)(you)最多實(shi)際殘(can)基(ji)(ji)的(de)序(xu)(xu)列(lie)(lie)。

可(ke)(ke)(ke)通(tong)過(guo)在(zai)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)和(he)/或(huo)羧(suo)基(ji)(ji)末(mo)(mo)(mo)端(duan)添(tian)(tian)加封端(duan)劑促進相關肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)體內(nei)(nei)存(cun)(cun)活來修(xiu)飾本(ben)發明的(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)和(he)片段以(yi)用于(yu)體內(nei)(nei)使用。這可(ke)(ke)(ke)用于(yu)其中肽(tai)(tai)末(mo)(mo)(mo)端(duan)在(zai)被細(xi)胞攝取之(zhi)前(qian)易于(yu)被蛋白(bai)酶降解的(de)(de)(de)(de)(de)情況。這樣的(de)(de)(de)(de)(de)封端(duan)劑可(ke)(ke)(ke)包括但不(bu)限于(yu)可(ke)(ke)(ke)與(yu)待施用肽(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)和(he)/或(huo)羧(suo)基(ji)(ji)末(mo)(mo)(mo)端(duan)殘(can)基(ji)(ji)連接的(de)(de)(de)(de)(de)另(ling)外(wai)(wai)的(de)(de)(de)(de)(de)相關或(huo)不(bu)相關的(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)序列(lie)。這可(ke)(ke)(ke)在(zai)肽(tai)(tai)合(he)成期(qi)間(jian)化學進行(xing)或(huo)者通(tong)過(guo)任何合(he)適方法(fa)通(tong)過(guo)重組dna技術進行(xing)。例如(ru),可(ke)(ke)(ke)向末(mo)(mo)(mo)端(duan)添(tian)(tian)加一(yi)個或(huo)更(geng)多個非(fei)天然存(cun)(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan),例如(ru)d-丙氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)。或(huo)者,可(ke)(ke)(ke)使封端(duan)劑諸如(ru)焦谷(gu)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)或(huo)本(ben)領域已知的(de)(de)(de)(de)(de)其他分子連接至氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)和(he)/或(huo)羧(suo)基(ji)(ji)末(mo)(mo)(mo)端(duan)殘(can)基(ji)(ji),或(huo)者可(ke)(ke)(ke)用不(bu)同(tong)部分替換氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)末(mo)(mo)(mo)端(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)基(ji)(ji)或(huo)羧(suo)基(ji)(ji)末(mo)(mo)(mo)端(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)羧(suo)基(ji)(ji)。另(ling)外(wai)(wai),可(ke)(ke)(ke)對肽(tai)(tai)末(mo)(mo)(mo)端(duan)進行(xing)修(xiu)飾,例如(ru)通(tong)過(guo)n端(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)乙酰化和(he)/或(huo)c端(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)酰胺化進行(xing)修(xiu)飾。同(tong)樣地,可(ke)(ke)(ke)在(zai)施用之(zhi)前(qian)使肽(tai)(tai)與(yu)可(ke)(ke)(ke)藥用的(de)(de)(de)(de)(de)“載體”蛋白(bai)共(gong)價或(huo)非(fei)共(gong)價偶聯。

在(zai)一(yi)個實施(shi)(shi)(shi)方(fang)案中(zhong),本發明的(de)(de)(de)(de)肽或(huo)(huo)其片(pian)段(duan)直接施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)于對象(xiang)。一(yi)般來(lai)說,使(shi)本發明的(de)(de)(de)(de)化合物混(hun)懸在(zai)可(ke)(ke)(ke)藥用(yong)(yong)載體(例如。生理鹽(yan)水(shui))中(zhong)并經(jing)口或(huo)(huo)通過(guo)靜脈(mo)內(nei)(nei)(nei)(nei)輸注施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong),或(huo)(huo)者如下(xia)施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong):皮下(xia)、肌(ji)內(nei)(nei)(nei)(nei)、鞘內(nei)(nei)(nei)(nei)、腹膜內(nei)(nei)(nei)(nei)、直腸內(nei)(nei)(nei)(nei)、陰道內(nei)(nei)(nei)(nei)、鼻內(nei)(nei)(nei)(nei)、胃(wei)內(nei)(nei)(nei)(nei)、氣管內(nei)(nei)(nei)(nei)或(huo)(huo)肺(fei)(fei)內(nei)(nei)(nei)(nei)。在(zai)另一(yi)個實施(shi)(shi)(shi)方(fang)案中(zhong),氣管內(nei)(nei)(nei)(nei)或(huo)(huo)肺(fei)(fei)內(nei)(nei)(nei)(nei)遞(di)送(song)(song)可(ke)(ke)(ke)使(shi)用(yong)(yong)標準的(de)(de)(de)(de)噴(pen)(pen)霧器(qi)(qi)(qi)、噴(pen)(pen)射噴(pen)(pen)霧器(qi)(qi)(qi)、絲網噴(pen)(pen)霧器(qi)(qi)(qi)、干粉吸入(ru)(ru)器(qi)(qi)(qi)或(huo)(huo)定量(liang)(liang)霧化吸入(ru)(ru)器(qi)(qi)(qi)來(lai)完(wan)成。其可(ke)(ke)(ke)直接遞(di)送(song)(song)至(zhi)疾病或(huo)(huo)病癥的(de)(de)(de)(de)部位(wei),例如肺(fei)(fei)、腎或(huo)(huo)腸。所需(xu)劑(ji)量(liang)(liang)取決(jue)于施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)途徑(jing)的(de)(de)(de)(de)選擇、制劑(ji)的(de)(de)(de)(de)性質(zhi)、患者疾病的(de)(de)(de)(de)性質(zhi)、對象(xiang)的(de)(de)(de)(de)大小、體重、表面積、年齡和(he)性別,正施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)其他藥物,以(yi)及(ji)主(zhu)治醫師的(de)(de)(de)(de)判斷(duan)。合適的(de)(de)(de)(de)劑(ji)量(liang)(liang)為0.01μg/kg至(zhi)100.0μg/kg。考慮到可(ke)(ke)(ke)利用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)肽、片(pian)段(duan)和(he)同系物的(de)(de)(de)(de)多樣性以(yi)及(ji)不同施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)途徑(jing)的(de)(de)(de)(de)不同效率,預(yu)期所需(xu)劑(ji)量(liang)(liang)廣泛變化。例如,預(yu)期與(yu)通過(guo)靜脈(mo)內(nei)(nei)(nei)(nei)注射來(lai)施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)相比(bi),經(jing)口施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)需(xu)要(yao)更(geng)(geng)高的(de)(de)(de)(de)劑(ji)量(liang)(liang)。如本領域中(zhong)公知的(de)(de)(de)(de),這些劑(ji)量(liang)(liang)水(shui)平的(de)(de)(de)(de)變化可(ke)(ke)(ke)使(shi)用(yong)(yong)用(yong)(yong)于優化的(de)(de)(de)(de)標準經(jing)驗途徑(jing)進行調(diao)整。施(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)可(ke)(ke)(ke)以(yi)是單(dan)次或(huo)(huo)多次的(de)(de)(de)(de)(例如2、3、4、6、8、10、20、50、100、150或(huo)(huo)更(geng)(geng)多次)。肽、片(pian)段(duan)和(he)同系物在(zai)合適遞(di)送(song)(song)載體(例如聚合物微粒或(huo)(huo)可(ke)(ke)(ke)植入(ru)(ru)裝置)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)包封可(ke)(ke)(ke)提高遞(di)送(song)(song)的(de)(de)(de)(de)效率,特別是對于經(jing)口遞(di)送(song)(song)。

根據某些實施方(fang)案,肽或(huo)(huo)其片段可在(zai)體(ti)(ti)內靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)特(te)定細胞或(huo)(huo)組(zu)織。靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)遞送載體(ti)(ti)(包括脂質體(ti)(ti))和所靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)的系(xi)統是本領(ling)域已知的。例如,脂質體(ti)(ti)可通過使用與脂質體(ti)(ti)一(yi)起并入以靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)可結(jie)合靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)分子的特(te)定細胞或(huo)(huo)組(zu)織的靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)劑(ji)(例如抗體(ti)(ti)、可溶(rong)性受體(ti)(ti)或(huo)(huo)配體(ti)(ti))來針對特(te)定的靶(ba)(ba)(ba)細胞或(huo)(huo)組(zu)織。靶(ba)(ba)(ba)向(xiang)脂質體(ti)(ti)在(zai)例如ho等.,biochemistry25:5500(1986);ho等,j.biol.chem.262:13979(1987);ho等,j.biol.chem.262:13973(1987);huang等的美國專(zhuan)利no.4,957,735中進(jin)行了描述(shu),其全部內容通過引用并入本文(wen)。

本(ben)發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)(de)另一方(fang)面涉及通過(guo)鈉通道抑制(zhi)鈉吸收(shou)的(de)(de)(de)(de)方(fang)法,其包括使鈉通道與特化的(de)(de)(de)(de)非天(tian)然存在(zai)的(de)(de)(de)(de)肽或其片段接觸(例如,結合(he))。鈉吸收(shou)的(de)(de)(de)(de)抑制(zhi)可通過(guo)本(ben)領域已知的(de)(de)(de)(de)或本(ben)文公(gong)開的(de)(de)(de)(de)任何(he)技術來測量。

本發(fa)明的(de)(de)(de)(de)另(ling)一(yi)方面(mian)(mian)涉(she)及一(yi)種增加內(nei)(nei)襯于上(shang)(shang)皮黏(nian)膜表(biao)面(mian)(mian)的(de)(de)(de)(de)流(liu)體(ti)的(de)(de)(de)(de)體(ti)積(ji)的(de)(de)(de)(de)方法,其包括使上(shang)(shang)皮黏(nian)膜表(biao)面(mian)(mian)上(shang)(shang)存在的(de)(de)(de)(de)鈉通道(dao)與(yu)特化的(de)(de)(de)(de)非天然(ran)存在的(de)(de)(de)(de)肽或者(zhe)其功能性片(pian)段或同系物接觸(例(li)如,結(jie)合(he))。內(nei)(nei)襯于上(shang)(shang)皮黏(nian)膜表(biao)面(mian)(mian)的(de)(de)(de)(de)流(liu)體(ti)的(de)(de)(de)(de)體(ti)積(ji)可(ke)通過本領(ling)域已知的(de)(de)(de)(de)或本文公開(kai)的(de)(de)(de)(de)任何技術來(lai)測(ce)量。

本發明的(de)另一方(fang)面涉及降低細胞(bao)表面上存在的(de)鈉通(tong)(tong)道(dao)的(de)水平的(de)方(fang)法(fa),其包括使鈉通(tong)(tong)道(dao)與特化(hua)的(de)非天然(ran)存在的(de)肽或(huo)者(zhe)其功能性片段或(huo)同源物接觸(例如,結合)。

本發(fa)明(ming)(ming)的(de)另(ling)一方(fang)(fang)面(mian)涉及在(zai)(zai)(zai)有(you)(you)(you)需要(yao)的(de)對(dui)象中(zhong)(zhong)治(zhi)(zhi)療(liao)響應(ying)于抑制跨上(shang)皮黏(nian)膜表面(mian)的(de)鈉吸收(shou)的(de)病(bing)(bing)癥(zheng)的(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa),其(qi)包括(kuo)向該(gai)對(dui)象遞送治(zhi)(zhi)療(liao)有(you)(you)(you)效量的(de)特化(hua)的(de)非天(tian)然存(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)肽或(huo)(huo)者其(qi)功能(neng)性(xing)片(pian)段(duan)或(huo)(huo)同系物。在(zai)(zai)(zai)一個實(shi)施方(fang)(fang)案(an)中(zhong)(zhong),本發(fa)明(ming)(ming)涵蓋在(zai)(zai)(zai)有(you)(you)(you)需要(yao)的(de)對(dui)象中(zhong)(zhong)治(zhi)(zhi)療(liao)響應(ying)于抑制跨上(shang)皮黏(nian)膜表面(mian)的(de)鈉吸收(shou)的(de)病(bing)(bing)癥(zheng)的(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa),其(qi)包括(kuo)向該(gai)對(dui)象施用包含選自(zi)seqidno:2至128的(de)序列的(de)肽。在(zai)(zai)(zai)一些非限制性(xing)實(shi)例(li)(li)中(zhong)(zhong),本發(fa)明(ming)(ming)方(fang)(fang)法(fa)(fa)中(zhong)(zhong)的(de)病(bing)(bing)癥(zheng)可(ke)以是肺病(bing)(bing)(例(li)(li)如(ru),囊性(xing)纖維(wei)化(hua)、非囊性(xing)纖維(wei)化(hua)、支氣管擴(kuo)張、慢(man)性(xing)阻塞(sai)性(xing)肺病(bing)(bing)、急性(xing)或(huo)(huo)慢(man)性(xing)支氣管炎(yan)、或(huo)(huo)哮喘(chuan))、胃腸病(bing)(bing)(例(li)(li)如(ru)、炎(yan)性(xing)腸病(bing)(bing))、腎病(bing)(bing)或(huo)(huo)心血管病(bing)(bing)。

本發明的(de)另一(yi)方(fang)面涉及在(zai)有需(xu)要的(de)對(dui)象中(zhong)調節(jie)鹽平衡、血(xue)量(liang)和(he)/或(huo)血(xue)壓的(de)方(fang)法(fa),其(qi)包括向(xiang)該(gai)對(dui)象遞送治(zhi)療有效(xiao)量(liang)的(de)特化(hua)的(de)非天(tian)然存在(zai)的(de)肽(tai)或(huo)者(zhe)其(qi)功(gong)能性片(pian)段或(huo)其(qi)同(tong)系物。

本(ben)發(fa)(fa)明的(de)第(di)三方面涉及(ji)可用于(yu)實施本(ben)文公開的(de)方法(fa)的(de)產(chan)品(pin)。因此,本(ben)發(fa)(fa)明的(de)一個方面涉及(ji)包含以(yi)下序列的(de)肽(tai)或其功(gong)能(neng)性片段:

x1-x2-x3-x4-x5-x6-x7-x8(seqidno:116)

其中:

x1為亮氨(an)酸(suan)或(huo)者以(yi)天然(ran)或(huo)非天然(ran)氨(an)基酸(suan)的保守替換物;

x2為脯氨(an)酸(suan)或者以天(tian)然或非天(tian)然氨(an)基酸(suan)的保守替換物(wu);

x3為纈氨酸或者以天然或非天然氨基酸的保守替(ti)換物;

x4為脯氨酸(suan)或者以天然或非天然氨基酸(suan)的保守替換(huan)物;

x5為亮氨(an)酸或(huo)者以天(tian)然(ran)或(huo)非天(tian)然(ran)氨(an)基(ji)酸的保守替換物;

x6為天(tian)冬氨酸或者以天(tian)然或非(fei)天(tian)然氨基(ji)酸的(de)保守替換物;

x7為(wei)谷氨(an)酰胺或者以(yi)天然或非天然氨(an)基酸的保守替換物;并(bing)且

x8為蘇氨(an)酸(suan)或者以天然或非天然氨(an)基酸(suan)的保守替換物。

本發明(ming)的(de)(de)另一方(fang)面涉及包含以下序列的(de)(de)肽或其功能(neng)性(xing)片段(duan):

x1-x2-x3-x4-x5-x6-x7-x8(seqidno:117)

其中:

x1為亮(liang)氨(an)酸(suan)、正亮(liang)氨(an)酸(suan)或纈氨(an)酸(suan);

x2為脯(fu)氨酸、4-羥脯(fu)氨酸、(2r,5s)-5-苯基-吡(bi)咯(ge)烷(wan)-2-羧酸或3,4-脫氫-l-脯(fu)氨酸;

x3為纈氨(an)(an)酸、亮氨(an)(an)酸、正亮氨(an)(an)酸或n-甲基纈氨(an)(an)酸;

x4為(wei)脯(fu)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)、4-羥脯(fu)氨(an)酸(suan)(suan)(suan)、(2r,5s)-5-苯基-吡咯烷-2-羧酸(suan)(suan)(suan)或3,4-脫氫-l-脯(fu)氨(an)酸(suan)(suan)(suan);

x5為(wei)亮氨酸(suan)、正亮氨酸(suan)或(huo)纈氨酸(suan);

x6為天(tian)冬氨(an)酸或谷氨(an)酸;

x7為(wei)谷氨酰胺(an)或天冬酰胺(an);并且

x8為蘇氨酸(suan)(suan),絲氨酸(suan)(suan)或l-α-甲基絲氨酸(suan)(suan)。

本發明的(de)另一方面涉及包含(han)以下(xia)序列的(de)肽(tai)或其功能性片段:

x1-x2-x3-x4-x5-x6-x7-x8-x9-x10-x11-x12-x13-x14-x15(seqidno:118)

其中:

x1為亮氨酸(suan)或者以天(tian)然或非(fei)天(tian)然氨基(ji)酸(suan)的保守(shou)替換物;

x2為(wei)脯氨酸或(huo)者以天然或(huo)非天然氨基酸的保守替換物;

x3為纈氨酸或者以天然或非天然氨基酸的保守替(ti)換物;

x4為脯(fu)氨(an)酸(suan)或(huo)者以天然或(huo)非天然氨(an)基(ji)酸(suan)的保守替(ti)換物(wu);

x5為亮氨酸或(huo)者以天(tian)然或(huo)非天(tian)然氨基(ji)酸的保守替換物(wu);

x6為天(tian)冬氨酸或者以(yi)天(tian)然或非天(tian)然氨基酸的(de)保守替換物(wu);

x7為谷氨酰(xian)胺或者以天(tian)然或非天(tian)然氨基(ji)酸(suan)的保守替換物;

x8為蘇(su)氨(an)酸(suan)或者(zhe)以天然或非天然氨(an)基酸(suan)的保守替換物;

x9為(wei)蘇(su)氨酸(suan)或者(zhe)以天(tian)然或非天(tian)然氨基酸(suan)的保守替換物(wu);

x10為亮氨(an)酸或者以天(tian)然或非(fei)天(tian)然氨(an)基酸的(de)保守替換物;

x11為脯氨酸(suan)或者以天(tian)然或非天(tian)然氨基酸(suan)的(de)保守替換(huan)物;

x12為(wei)天冬酰胺或(huo)者(zhe)以天然(ran)或(huo)非(fei)天然(ran)氨基酸的(de)保守替換物;

x13為纈氨(an)酸(suan)或者以天然或非天然氨(an)基酸(suan)的保守替換物;

x14為天(tian)冬酰胺或者以天(tian)然(ran)或非(fei)天(tian)然(ran)氨(an)基酸的保守替(ti)換物;并(bing)且

x15為(wei)脯氨(an)酸(suan)或者以天(tian)(tian)然(ran)或非天(tian)(tian)然(ran)氨(an)基酸(suan)的保(bao)守替換物。

在(zai)一些實(shi)施(shi)方(fang)案(an)(an)中,所述(shu)(shu)(shu)肽(tai)包含(han)選自seqidno:4-142和seqidno:144的(de)(de)序列(lie)。在(zai)一個(ge)(ge)實(shi)施(shi)方(fang)案(an)(an)中,所述(shu)(shu)(shu)肽(tai)包含(han)seqidno:5或seqidno:122的(de)(de)序列(lie)。在(zai)一個(ge)(ge)實(shi)施(shi)方(fang)案(an)(an)中,所述(shu)(shu)(shu)肽(tai)包含(han)seqidno:2(aalpvpldqtlplnvnpaa)或seqidno:119的(de)(de)序列(lie)。在(zai)一個(ge)(ge)實(shi)施(shi)方(fang)案(an)(an)中,所述(shu)(shu)(shu)肽(tai)包含(han)seqidno:127或seqidno:128(aalpipldqtaa)的(de)(de)序列(lie)。

在某些(xie)實施方(fang)案(an)中,本(ben)發明的(de)肽(tai)包含(han)至少一(yi)(yi)個經修飾(shi)的(de)末端(duan),例如以(yi)保護(hu)肽(tai)免于降解。在一(yi)(yi)些(xie)實施方(fang)案(an)中,n端(duan)是乙(yi)酰化的(de)和/或c端(duan)是酰胺(an)化的(de)。在一(yi)(yi)些(xie)實施方(fang)案(an)中,所述肽(tai)包含(han)seqidno:10-127、129、130、133、134或136-140中任一(yi)(yi)個的(de)序列,所述肽(tai)還(huan)包含(han)在氨基和/或羧(suo)基末端(duan)的(de)一(yi)(yi)個或兩個d-丙氨酸。

在某些實(shi)施方案中,本(ben)發明的肽包(bao)含至(zhi)少一(yi)個非天然氨基酸(suan)(例(li)如(ru),1、2、3個或更多)或至(zhi)少一(yi)個末(mo)端修(xiu)飾(例(li)如(ru)1或2個)。在一(yi)些實(shi)施方案中,所述肽包(bao)含至(zhi)少一(yi)個非天然氨基酸(suan)和(he)至(zhi)少一(yi)個末(mo)端修(xiu)飾。

在(zai)某些(xie)實(shi)施(shi)(shi)方案(an)(an)中(zhong),所述(shu)肽模擬(ni)plunc蛋(dan)白的(de)(de)(de)鈉(na)通道(dao)結(jie)(jie)合(he)(he)結(jie)(jie)構域。鈉(na)通道(dao)結(jie)(jie)合(he)(he)結(jie)(jie)構域是(shi)(shi)具有與全長(chang)(chang)plunc蛋(dan)白基(ji)(ji)本相(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)鈉(na)通道(dao)結(jie)(jie)合(he)(he)活性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)所需的(de)(de)(de)plunc蛋(dan)白的(de)(de)(de)最小片段(duan)。術語“基(ji)(ji)本相(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)結(jie)(jie)合(he)(he)活性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)”指為全長(chang)(chang)蛋(dan)白質(zhi)的(de)(de)(de)結(jie)(jie)合(he)(he)活性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)至少(shao)約50%,例如結(jie)(jie)合(he)(he)活性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)的(de)(de)(de)至少(shao)約60%、70%、80%或(huo)90%的(de)(de)(de)活性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)。在(zai)一(yi)些(xie)實(shi)施(shi)(shi)方案(an)(an)中(zhong),所述(shu)肽至少(shao)與全長(chang)(chang)plunc蛋(dan)白具有相(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)結(jie)(jie)合(he)(he)活性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)。在(zai)一(yi)個實(shi)施(shi)(shi)方案(an)(an)中(zhong),鈉(na)通道(dao)是(shi)(shi)enac,例如人enac。在(zai)另一(yi)個實(shi)施(shi)(shi)方案(an)(an)中(zhong),鈉(na)通道(dao)是(shi)(shi)在(zai)序(xu)列和/或(huo)結(jie)(jie)構上與enac類(lei)似(si)的(de)(de)(de)通道(dao),例如酸(suan)敏感離子通道(dao)(asic)。

本(ben)(ben)發明(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽可(ke)任選地與其他(ta)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)劑(ji)(ji)聯合(he)遞(di)(di)(di)(di)送(song)。另外的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)劑(ji)(ji)可(ke)與本(ben)(ben)發明(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽并(bing)行(xing)(xing)遞(di)(di)(di)(di)送(song)。本(ben)(ben)文使用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)詞(ci)語(yu)“并(bing)行(xing)(xing)”意(yi)指在(zai)(zai)(zai)時(shi)間上足夠(gou)接近(jin)以產生(sheng)組合(he)效果(即,并(bing)行(xing)(xing)可(ke)以是同時(shi),或者(zhe)其可(ke)以是在(zai)(zai)(zai)彼此(ci)(ci)之前或之后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)短時(shi)間內發生(sheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)兩(liang)個或更多個事(shi)件)。在(zai)(zai)(zai)本(ben)(ben)發明(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)個實施方(fang)案(an)中,將(jiang)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽與調(diao)(diao)節囊性(xing)纖維化(hua)(hua)(hua)(hua)跨膜傳導調(diao)(diao)節蛋白(bai)(cftr)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)功能的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)物并(bing)行(xing)(xing)遞(di)(di)(di)(di)送(song)于(yu)患者(zhe),在(zai)(zai)(zai)此(ci)(ci)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽和cftr靶向(xiang)(xiang)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)組合(he)活(huo)(huo)(huo)性(xing)具(ju)有優于(yu)單(dan)獨(du)cftr靶向(xiang)(xiang)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)(huo)(huo)性(xing)。在(zai)(zai)(zai)本(ben)(ben)發明(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)另一(yi)個實施方(fang)案(an)中,將(jiang)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽與黏(nian)液(ye)溶(rong)(rong)解(jie)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)物并(bing)行(xing)(xing)遞(di)(di)(di)(di)送(song)于(yu)患者(zhe),在(zai)(zai)(zai)此(ci)(ci)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽和黏(nian)液(ye)溶(rong)(rong)解(jie)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)組合(he)活(huo)(huo)(huo)性(xing)具(ju)有優于(yu)單(dan)獨(du)黏(nian)液(ye)溶(rong)(rong)解(jie)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)(huo)(huo)性(xing)。在(zai)(zai)(zai)本(ben)(ben)發明(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)又(you)一(yi)個實施方(fang)案(an)中,將(jiang)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽與長效b激(ji)動劑(ji)(ji)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)物(laba)并(bing)行(xing)(xing)遞(di)(di)(di)(di)送(song)于(yu)患者(zhe),在(zai)(zai)(zai)此(ci)(ci)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽和laba劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)組合(he)活(huo)(huo)(huo)性(xing)具(ju)有優于(yu)單(dan)獨(du)laba的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)(huo)(huo)性(xing)。在(zai)(zai)(zai)本(ben)(ben)發明(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)又(you)一(yi)個實施方(fang)案(an)中,將(jiang)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽與糖皮質(zhi)激(ji)素激(ji)動劑(ji)(ji)并(bing)行(xing)(xing)遞(di)(di)(di)(di)送(song)于(yu)患者(zhe),在(zai)(zai)(zai)此(ci)(ci)特化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)存(cun)(cun)(cun)在(zai)(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽和糖皮質(zhi)激(ji)素劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)組合(he)活(huo)(huo)(huo)性(xing)具(ju)有優于(yu)單(dan)獨(du)糖皮質(zhi)激(ji)素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)(huo)(huo)性(xing)。

本發(fa)明(ming)的另(ling)一方面涉及(ji)(ji)包含本發(fa)明(ming)的肽并且(qie)可(ke)用(yong)(yong)于實施本發(fa)明(ming)方法的試劑盒(he)。所述試劑盒(he)還可(ke)包含用(yong)(yong)于進行方法的另(ling)外試劑(例如,緩沖劑、容器、另(ling)外的治療劑)以(yi)及(ji)(ji)說(shuo)明(ming)書。

作(zuo)為另一方(fang)(fang)面,本(ben)發明(ming)提供了(le)實現本(ben)文所(suo)(suo)討(tao)論的(de)任何治療效(xiao)果(guo)(例如(ru)(ru),鈉吸收的(de)調節(jie))的(de)藥(yao)物(wu)制劑(ji)及其施用(yong)方(fang)(fang)法(fa)。所(suo)(suo)述藥(yao)物(wu)制劑(ji)可(ke)以包(bao)含在可(ke)藥(yao)用(yong)載(zai)體中的(de)上文所(suo)(suo)討(tao)論的(de)任何試劑(ji),例如(ru)(ru)特(te)化(hua)的(de)非天然存在的(de)肽或其功能性片段。

“可(ke)藥(yao)用”意指(zhi)不是生物學或其他(ta)方(fang)面不期(qi)望(wang)的材料,即所(suo)述材料可(ke)施用于對(dui)象而不引起任(ren)何不期(qi)望(wang)的生物效應,例(li)如毒性。

本發明的制(zhi)劑(ji)可(ke)以任選地包括藥用試劑(ji)、藥劑(ji)、載體、佐(zuo)劑(ji)、分散劑(ji)、稀釋劑(ji)等(deng)。

本發明的(de)肽(tai)(tai)可(ke)(ke)以根據已知技術配(pei)(pei)制(zhi)成(cheng)用于在(zai)藥用載(zai)體(ti)中施用。參見,例(li)如,remington,thescienceandpracticeofpharmacy(第9版1995)。在(zai)制(zhi)備根據本發明的(de)藥物(wu)制(zhi)劑中,通常(chang)將肽(tai)(tai)(包(bao)括其(qi)(qi)生(sheng)理上(shang)可(ke)(ke)接受(shou)的(de)鹽)與(yu)尤(you)其(qi)(qi)可(ke)(ke)接受(shou)的(de)載(zai)體(ti)混合。所述載(zai)體(ti)可(ke)(ke)以是固體(ti)或(huo)液體(ti),或(huo)者(zhe)二(er)者(zhe),并且優選(xuan)地與(yu)肽(tai)(tai)配(pei)(pei)制(zhi)成(cheng)單位劑量(liang)制(zhi)劑,例(li)如片劑,其(qi)(qi)可(ke)(ke)包(bao)含(han)按重量(liang)計0.01%或(huo)0.5%至95%或(huo)99%的(de)肽(tai)(tai)。本發明的(de)制(zhi)劑中可(ke)(ke)包(bao)含(han)一種或(huo)更多種肽(tai)(tai),其(qi)(qi)可(ke)(ke)通過藥學的(de)任(ren)何公知技術來制(zhi)備。

本發(fa)(fa)明的(de)(de)(de)另一方面是在體內治療對(dui)(dui)象(xiang)的(de)(de)(de)方法,其(qi)包(bao)(bao)括向對(dui)(dui)象(xiang)施用(yong)(yong)包(bao)(bao)含在可(ke)藥(yao)用(yong)(yong)載體中的(de)(de)(de)本發(fa)(fa)明肽的(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)組合物(wu),其(qi)中所述藥(yao)物(wu)組合物(wu)以(yi)治療有(you)效量施用(yong)(yong)。向有(you)此需(xu)要的(de)(de)(de)人對(dui)(dui)象(xiang)或動物(wu)施用(yong)(yong)本發(fa)(fa)明的(de)(de)(de)肽可(ke)通過本領域已知的(de)(de)(de)用(yong)(yong)于施用(yong)(yong)化合物(wu)的(de)(de)(de)任何方式來進行。

本發(fa)明的(de)(de)(de)(de)(de)制劑包(bao)括(kuo)適(shi)于以(yi)下(xia)(xia)的(de)(de)(de)(de)(de)那(nei)些:經(jing)口、直腸、局(ju)部、經(jing)頰(例如,舌下(xia)(xia))、經(jing)陰道(dao)、腸胃外(例如皮(pi)下(xia)(xia),肌(ji)(ji)內(nei)包(bao)括(kuo)骨骼肌(ji)(ji)、心肌(ji)(ji)、隔膜肌(ji)(ji)和平滑肌(ji)(ji),皮(pi)內(nei),靜脈內(nei),腹膜內(nei))、表面(mian)(即(ji),皮(pi)膚和黏膜表面(mian)二者,包(bao)括(kuo)氣道(dao)表面(mian))、鼻內(nei)、經(jing)皮(pi)、關節(jie)內(nei)、鞘(qiao)內(nei)和吸入(ru)施用;通過門靜脈內(nei)遞(di)送(song)來適(shi)用于肝;以(yi)及直接器官(guan)注(zhu)射(she)(例如,注(zhu)入(ru)肝中、注(zhu)入(ru)腦中以(yi)遞(di)送(song)到中樞(shu)神經(jing)系(xi)統、注(zhu)入(ru)胰腺中、或者注(zhu)入(ru)腫(zhong)(zhong)瘤(liu)或腫(zhong)(zhong)瘤(liu)周(zhou)圍的(de)(de)(de)(de)(de)組織中)。任何(he)給定(ding)情況下(xia)(xia)的(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)合適(shi)途徑將取決于所治療(liao)病癥的(de)(de)(de)(de)(de)性(xing)質(zhi)和嚴重程度以(yi)及正在使用的(de)(de)(de)(de)(de)具體肽的(de)(de)(de)(de)(de)性(xing)質(zhi)。

對(dui)于(yu)(yu)注射(she),載體(ti)通(tong)常是(shi)液(ye)體(ti),例如無菌無熱原(yuan)水(shui)、無菌生理(li)鹽水(shui)、高張鹽水(shui)、無熱原(yuan)磷酸緩沖鹽水(shui)溶液(ye)、抑菌水(shui)或(huo)cremophorel[r](basf,parsippany,n.j.)。對(dui)于(yu)(yu)其他施用方(fang)法,載體(ti)可以是(shi)固(gu)體(ti)或(huo)液(ye)體(ti)。

對(dui)于(yu)(yu)經口(kou)施用(yong)(yong)(yong),肽可(ke)(ke)以(yi)以(yi)固體劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)型(例如膠(jiao)(jiao)囊(nang)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)、片劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)和(he)散(san)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))或(huo)液體劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)型(例如酏劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)、糖(tang)(tang)(tang)漿(jiang)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)和(he)混(hun)懸劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))施用(yong)(yong)(yong)。肽可(ke)(ke)以(yi)與無活性(xing)(xing)成分(fen)和(he)粉狀載(zai)體一起(qi)包封在(zai)(zai)明膠(jiao)(jiao)膠(jiao)(jiao)囊(nang)中,所(suo)述載(zai)體例如葡萄糖(tang)(tang)(tang)、乳糖(tang)(tang)(tang)、蔗糖(tang)(tang)(tang)、甘露醇、淀粉、纖(xian)維素或(huo)纖(xian)維素衍生物(wu)(wu)、硬脂酸(suan)(suan)鎂、硬脂酸(suan)(suan)、糖(tang)(tang)(tang)精鈉(na)、滑石、碳(tan)酸(suan)(suan)鎂等。可(ke)(ke)以(yi)添加(jia)以(yi)提(ti)供期望顏色、味道、穩定性(xing)(xing)、緩沖(chong)能力(li)、分(fen)散(san)或(huo)其他已知的(de)(de)(de)(de)(de)所(suo)期望特征的(de)(de)(de)(de)(de)另外的(de)(de)(de)(de)(de)無活性(xing)(xing)成分(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)實(shi)例為氧化鐵紅、硅膠(jiao)(jiao)、月(yue)桂基硫酸(suan)(suan)鈉(na)、二(er)氧化鈦、食用(yong)(yong)(yong)白色墨等。可(ke)(ke)使用(yong)(yong)(yong)類似的(de)(de)(de)(de)(de)稀釋劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)來制(zhi)備(bei)壓(ya)(ya)制(zhi)片劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)。片劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)和(he)膠(jiao)(jiao)囊(nang)劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)二(er)者均可(ke)(ke)制(zhi)成持續(xu)釋放產品以(yi)提(ti)供藥(yao)物(wu)(wu)在(zai)(zai)數(shu)小時(shi)時(shi)間內的(de)(de)(de)(de)(de)持續(xu)釋放。壓(ya)(ya)制(zhi)片劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)可(ke)(ke)以(yi)是(shi)糖(tang)(tang)(tang)包衣(yi)或(huo)膜包衣(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)掩(yan)蓋任何令(ling)人(ren)不愉快的(de)(de)(de)(de)(de)味道并且保護片劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)免受大氣破壞,或(huo)者是(shi)腸(chang)溶包衣(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)在(zai)(zai)胃腸(chang)道中選擇性(xing)(xing)崩解。用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)經口(kou)施用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)液體劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)型可(ke)(ke)包含著色劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)和(he)調(diao)味劑(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)以(yi)提(ti)高患者的(de)(de)(de)(de)(de)接受度。

適(shi)于經頰(jia)(舌下)施用的(de)(de)(de)制劑包(bao)括包(bao)含在(zai)矯味(wei)基質(通常為蔗(zhe)糖和(he)阿(a)拉伯(bo)膠或黃蓍(shi)膠)中(zhong)的(de)(de)(de)化(hua)合物的(de)(de)(de)錠(ding)劑和(he)包(bao)含在(zai)惰性基質(例(li)如明膠和(he)甘(gan)油或蔗(zhe)糖和(he)阿(a)拉伯(bo)膠)中(zhong)的(de)(de)(de)化(hua)合物的(de)(de)(de)錠(ding)劑。

適(shi)于腸胃外施用的本(ben)發明制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)包含(han)肽(tai)的無菌(jun)(jun)水(shui)(shui)性(xing)和(he)(he)(he)非水(shui)(shui)性(xing)注射液劑(ji)(ji)(ji),該制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)優選(xuan)地與預(yu)期接(jie)受者(zhe)(zhe)的血(xue)液等張。這些制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)可包含(han)抗氧化劑(ji)(ji)(ji)、緩沖劑(ji)(ji)(ji)、抑菌(jun)(jun)劑(ji)(ji)(ji)以及使(shi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)與預(yu)期接(jie)受者(zhe)(zhe)的血(xue)液等滲的溶質。水(shui)(shui)性(xing)和(he)(he)(he)非水(shui)(shui)性(xing)無菌(jun)(jun)混(hun)懸液劑(ji)(ji)(ji)可包含(han)懸浮劑(ji)(ji)(ji)和(he)(he)(he)增稠劑(ji)(ji)(ji)。制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)可存在(zai)于單(dan)位/劑(ji)(ji)(ji)量(liang)或(huo)多劑(ji)(ji)(ji)量(liang)容器(例如(ru)密封的安瓿(bu)和(he)(he)(he)小瓶)中(zhong),并且可儲(chu)存在(zai)冷凍干(gan)(gan)燥(凍干(gan)(gan))條件下,僅需在(zai)使(shi)用之前(qian)即刻添加無菌(jun)(jun)液體載體(例如(ru)鹽或(huo)注射用水(shui)(shui))。

即時注(zhu)射溶液劑(ji)(ji)和混(hun)懸劑(ji)(ji)可(ke)由前述種(zhong)類(lei)的(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)散劑(ji)(ji)、顆粒劑(ji)(ji)和片劑(ji)(ji)制備(bei)。例如(ru),在本發明的(de)(de)(de)一個方面,提(ti)供了在密封(feng)容器中的(de)(de)(de)單(dan)位劑(ji)(ji)型的(de)(de)(de)包含(han)本發明肽(tai)的(de)(de)(de)可(ke)注(zhu)射的(de)(de)(de)穩定無(wu)菌(jun)組(zu)合物。肽(tai)或鹽以凍干物的(de)(de)(de)形式提(ti)供,其能(neng)夠(gou)用(yong)(yong)合適的(de)(de)(de)可(ke)藥用(yong)(yong)載體(ti)(ti)重構(gou)以形成(cheng)適于將其注(zhu)入對(dui)象中的(de)(de)(de)液體(ti)(ti)組(zu)合物。單(dan)位劑(ji)(ji)型通常包含(han)約1mg至(zhi)約10g的(de)(de)(de)肽(tai)或鹽。當肽(tai)或鹽基本上不溶于水(shui)時,可(ke)使用(yong)(yong)足夠(gou)量的(de)(de)(de)可(ke)藥用(yong)(yong)的(de)(de)(de)乳化(hua)(hua)劑(ji)(ji)以在水(shui)性(xing)載體(ti)(ti)中乳化(hua)(hua)肽(tai)或鹽。一種(zhong)這(zhe)樣的(de)(de)(de)可(ke)用(yong)(yong)乳化(hua)(hua)劑(ji)(ji)是磷(lin)脂(zhi)酰(xian)膽堿(jian)。

適(shi)于直腸施用的(de)(de)制劑(ji)優選作為單位劑(ji)量栓劑(ji)存(cun)在(zai)。這些可(ke)通過將肽與一(yi)種或更多種常規的(de)(de)固體載體(例如可(ke)可(ke)脂)混(hun)(hun)合并隨后使所(suo)得混(hun)(hun)合物成形來制備。

適于表面施用于皮(pi)膚的制劑(ji)(ji)優選采用軟膏劑(ji)(ji)、乳膏劑(ji)(ji)、洗劑(ji)(ji),糊劑(ji)(ji)、凝膠劑(ji)(ji)、噴霧劑(ji)(ji)、氣(qi)霧劑(ji)(ji)或油劑(ji)(ji)的形式。可使(shi)用的載體包括凡士林、羊毛(mao)脂、聚乙二醇(chun)、醇(chun)、經皮(pi)增強劑(ji)(ji),及其兩種或更(geng)多(duo)種的組合。

適于經皮施(shi)用(yong)的(de)(de)制劑(ji)(ji)可作為適于與接(jie)受(shou)者的(de)(de)表皮長時間緊密接(jie)觸(chu)的(de)(de)離散貼劑(ji)(ji)存在。適于經皮施(shi)用(yong)的(de)(de)制劑(ji)(ji)還(huan)可通(tong)(tong)過離子電滲法遞送(參見,例如,tyle,pharm.res.3:318(1986)),并且(qie)通(tong)(tong)常采(cai)用(yong)肽的(de)(de)任選(xuan)緩沖水溶液劑(ji)(ji)的(de)(de)形式。合適的(de)(de)制劑(ji)(ji)包含(han)檸(ning)檬(meng)酸(suan)鹽或bis/tris緩沖液(ph6)或乙醇/水,并且(qie)包含(han)0.1m至(zhi)0.2m的(de)(de)化合物。

或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)者(zhe),可(ke)將肽(tai)配制成用(yong)(yong)于經鼻施(shi)用(yong)(yong)或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)另外地(di)通過任(ren)(ren)何(he)合適(shi)的(de)方式(shi)施(shi)用(yong)(yong)于對(dui)象的(de)肺,所述方式(shi)例(li)(li)(li)如通過對(dui)象吸(xi)(xi)入的(de)包(bao)(bao)含(han)肽(tai)的(de)可(ke)呼吸(xi)(xi)顆粒(li)(li)的(de)氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)混懸劑(ji)(ji)(ji)(ji)來施(shi)用(yong)(yong)。可(ke)呼吸(xi)(xi)顆粒(li)(li)可(ke)以(yi)是液體(ti)(ti)或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)固體(ti)(ti)。術語“氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)”包(bao)(bao)括(kuo)任(ren)(ren)何(he)氣(qi)(qi)(qi)載混懸相,其能夠(gou)被吸(xi)(xi)入細支氣(qi)(qi)(qi)管或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)鼻通道。特(te)別地(di),氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)包(bao)(bao)括(kuo)液滴(di)的(de)氣(qi)(qi)(qi)載混懸劑(ji)(ji)(ji)(ji),如可(ke)在定量霧化吸(xi)(xi)入器或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)噴(pen)霧器中(zhong)或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)者(zhe)在霧狀(zhuang)噴(pen)霧器中(zhong)產(chan)生(sheng)(sheng)。氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)還包(bao)(bao)括(kuo)混懸在空氣(qi)(qi)(qi)或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)其他載體(ti)(ti)氣(qi)(qi)(qi)體(ti)(ti)中(zhong)的(de)干粉組合物,其可(ke)以(yi)通過從(cong)例(li)(li)(li)如吸(xi)(xi)入器裝置吹入而被遞(di)送。參(can)見(jian)ganderton和jones,drugdeliverytotherespiratorytract,ellishorwood(1987);gonda(1990)criticalreviewsintherapeuticdrugcarriersystems6:273-313;以(yi)及raeburn等,j.pharmacol.toxicol.meth.27:143(1992)。如本領(ling)(ling)域技術人(ren)員已知的(de),包(bao)(bao)含(han)肽(tai)的(de)液體(ti)(ti)顆粒(li)(li)的(de)氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)可(ke)通過任(ren)(ren)何(he)合適(shi)的(de)方式(shi)產(chan)生(sheng)(sheng),例(li)(li)(li)如用(yong)(yong)壓力驅動的(de)氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)噴(pen)霧器或(huo)(huo)(huo)(huo)(huo)超聲噴(pen)霧器。參(can)見(jian),例(li)(li)(li)如,美國(guo)專利no.4,501,729。包(bao)(bao)含(han)肽(tai)的(de)固體(ti)(ti)顆粒(li)(li)的(de)氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)同樣地(di)可(ke)通過藥學領(ling)(ling)域已知的(de)技術用(yong)(yong)任(ren)(ren)何(he)固體(ti)(ti)的(de)顆粒(li)(li)藥物氣(qi)(qi)(qi)霧劑(ji)(ji)(ji)(ji)發生(sheng)(sheng)器產(chan)生(sheng)(sheng)。

或者,可以以局部而非全(quan)身(shen)的方式,例(li)如在(zai)藥性(xing)持(chi)久或持(chi)續釋放(fang)制劑中施用肽。

此外,本(ben)發明提供了本(ben)文(wen)公開(kai)的(de)(de)(de)肽及其鹽(yan)(yan)的(de)(de)(de)脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)制劑。用于形成脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)混懸劑的(de)(de)(de)技(ji)術(shu)是本(ben)領域公知的(de)(de)(de)。當肽或(huo)(huo)其鹽(yan)(yan)是水(shui)溶(rong)性(xing)鹽(yan)(yan)時(shi),使(shi)用常規(gui)的(de)(de)(de)脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)技(ji)術(shu),可(ke)(ke)將(jiang)其并入脂質(zhi)(zhi)囊(nang)泡中(zhong)。在(zai)(zai)這樣(yang)的(de)(de)(de)情(qing)況下(xia),由于肽或(huo)(huo)鹽(yan)(yan)的(de)(de)(de)水(shui)溶(rong)性(xing),肽或(huo)(huo)鹽(yan)(yan)將(jiang)基本(ben)上夾帶(dai)在(zai)(zai)脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)親水(shui)性(xing)中(zhong)心或(huo)(huo)核心內。所使(shi)用的(de)(de)(de)脂質(zhi)(zhi)層可(ke)(ke)具(ju)有任何常規(gui)的(de)(de)(de)組(zu)成,并且(qie)可(ke)(ke)包含膽(dan)固(gu)醇或(huo)(huo)可(ke)(ke)不含膽(dan)固(gu)醇。當目的(de)(de)(de)肽或(huo)(huo)鹽(yan)(yan)不溶(rong)于水(shui)時(shi),仍(reng)使(shi)用常規(gui)的(de)(de)(de)脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)形成技(ji)術(shu)時(shi),鹽(yan)(yan)可(ke)(ke)基本(ben)上夾帶(dai)在(zai)(zai)形成脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)結構的(de)(de)(de)疏水(shui)性(xing)脂質(zhi)(zhi)雙層內。在(zai)(zai)任一情(qing)況下(xia),所產(chan)生的(de)(de)(de)脂質(zhi)(zhi)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)尺(chi)寸可(ke)(ke)減小(xiao),如通過使(shi)用標準的(de)(de)(de)超聲(sheng)處理和(he)勻漿(jiang)技(ji)術(shu)來減小(xiao)。

可(ke)將包含本文公開的(de)肽或其鹽的(de)脂質體制(zhi)劑(ji)凍(dong)干以產生凍(dong)干物,所述凍(dong)干物可(ke)用可(ke)藥用載體(例(li)如水(shui))重構以再生脂質體混懸劑(ji)。

在(zai)(zai)(zai)水不溶(rong)性(xing)(xing)肽的(de)情(qing)況(kuang)下(xia),可以制備包含(han)水不溶(rong)性(xing)(xing)肽,例如在(zai)(zai)(zai)水性(xing)(xing)基質乳(ru)劑(ji)(ji)中(zhong)的(de)水不溶(rong)性(xing)(xing)肽的(de)藥物組合(he)物。在(zai)(zai)(zai)這樣的(de)情(qing)況(kuang)下(xia),組合(he)物將包含(han)足夠(gou)量(liang)的(de)可藥用乳(ru)化(hua)(hua)劑(ji)(ji)以乳(ru)化(hua)(hua)期望量(liang)的(de)肽。特別可用的(de)乳(ru)化(hua)(hua)劑(ji)(ji)包括(kuo)磷(lin)脂(zhi)酰膽堿(jian)和卵磷(lin)脂(zhi)。

在(zai)一(yi)些具體(ti)(ti)實(shi)施方案中(zhong),將(jiang)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)有(you)效(xiao)量(liang)(liang)(liang)(liang)(如(ru)該術語(yu)在(zai)上(shang)文定義(yi)的(de))的(de)肽(tai)施用于(yu)(yu)(yu)(yu)對(dui)象。藥學活性肽(tai)的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)可通(tong)過本領(ling)域(yu)已知的(de)方法來(lai)確定,參(can)見例(li)如(ru)remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingco.,easton,pa)。任何特定肽(tai)的(de)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)有(you)效(xiao)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)將(jiang)根據肽(tai)或(huo)患(huan)(huan)者(zhe)而所有(you)變化(hua),并且將(jiang)取決于(yu)(yu)(yu)(yu)患(huan)(huan)者(zhe)的(de)狀況和遞送途徑。作為一(yi)般命題,約(yue)(yue)(yue)0.1mg/kg至(zhi)約(yue)(yue)(yue)50mg/kg的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)將(jiang)具有(you)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)效(xiao)力,其中(zhong)所有(you)重(zhong)量(liang)(liang)(liang)(liang)均基于(yu)(yu)(yu)(yu)肽(tai)的(de)重(zhong)量(liang)(liang)(liang)(liang)來(lai)計算(suan),包(bao)括使用鹽的(de)情況。較(jiao)(jiao)高(gao)級(ji)別(bie)的(de)毒性問題可將(jiang)靜(jing)脈內劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)限制在(zai)較(jiao)(jiao)低水平,例(li)如(ru)至(zhi)多(duo)約(yue)(yue)(yue)10mg/kg,其中(zhong)所有(you)的(de)重(zhong)量(liang)(liang)(liang)(liang)均基于(yu)(yu)(yu)(yu)肽(tai)的(de)重(zhong)量(liang)(liang)(liang)(liang)來(lai)計算(suan),包(bao)括使用鹽的(de)情況。約(yue)(yue)(yue)10mg/kg至(zhi)約(yue)(yue)(yue)50mg/kg的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)可用于(yu)(yu)(yu)(yu)經(jing)口(kou)施用。通(tong)常來(lai)說,約(yue)(yue)(yue)0.5mg/kg至(zhi)5mg/kg的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)可用于(yu)(yu)(yu)(yu)肌內注(zhu)射。對(dui)于(yu)(yu)(yu)(yu)靜(jing)脈內或(huo)經(jing)口(kou)施用,具體(ti)(ti)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)(liang)分別(bie)為約(yue)(yue)(yue)1微摩爾(er)(er)/kg至(zhi)50微摩爾(er)(er)/kg、更具體(ti)(ti)地約(yue)(yue)(yue)22微摩爾(er)(er)/kg至(zhi)33微摩爾(er)(er)/kg的(de)肽(tai)。

在本發明的一些具體實施(shi)方案中,可在不同時(shi)間間隔(例(li)如(ru),每(mei)小時(shi)、每(mei)天、每(mei)周、每(mei)月等)內使用一次(ci)以上施(shi)用(例(li)如(ru),兩次(ci)、三次(ci)、四(si)次(ci)或更多次(ci)施(shi)用)以實現治療(liao)效果。

本發明用于(yu)獸(shou)醫和醫療應用。合適(shi)的(de)對象(xiang)包(bao)括(kuo)(kuo)禽類(lei)和哺(bu)(bu)乳動(dong)物(wu),其中優(you)選(xuan)哺(bu)(bu)乳動(dong)物(wu)。本文使(shi)用的(de)術(shu)語“禽類(lei)”包(bao)括(kuo)(kuo)但不限于(yu)雞、鴨、鵝、鵪鶉(chun)、火雞和野雞。本文使(shi)用的(de)術(shu)語“哺(bu)(bu)乳動(dong)物(wu)”包(bao)括(kuo)(kuo)但不限于(yu)人、牛(niu)、綿羊(yang)、山羊(yang)、馬、貓(mao)、犬(quan)、兔形(xing)動(dong)物(wu)等。人對象(xiang)包(bao)括(kuo)(kuo)新生兒、嬰幼兒、青少(shao)年和成人。

在以下實(shi)施例(li)中更(geng)具體(ti)地描述本(ben)發明,這(zhe)些實(shi)施例(li)旨在僅是舉例(li)說明性的(de),因為本(ben)文的(de)眾多修(xiu)改方案(an)和變化方案(an)對本(ben)領(ling)域技術人員都將是顯(xian)而易見的(de)。

實施例1

實驗部分

組織獲(huo)取(qu)和細(xi)胞培養(yang):如由unc醫學(xue)院irb批準(zhun)的(de)(de)(de)方(fang)案先(xian)前(qian)所述的(de)(de)(de),從人支(zhi)(zhi)氣管(guan)組織通(tong)(tong)過酶促(cu)消化來收(shou)獲(huo)細(xi)胞(tarran等,j.gen.physiol.127:591(2006))。在肺(fei)移植(zhi)時從主干或肺(fei)葉(xie)(lumbar)支(zhi)(zhi)氣管(guan)的(de)(de)(de)一部分獲(huo)得人過量的(de)(de)(de)供體(ti)肺(fei)和切除的(de)(de)(de)接受者肺(fei),并(bing)通(tong)(tong)過酶促(cu)消化來收(shou)獲(huo)細(xi)胞。使(shi)所有制備物(wu)維持(chi)在改(gai)良的(de)(de)(de)支(zhi)(zhi)氣管(guan)上(shang)皮培養(yang)基中(zhong)的(de)(de)(de)空氣-液(ye)體(ti)界面處,并(bing)接種在用(yong)人胎盤vi型(xing)膠原(sigma)包(bao)被(bei)的(de)(de)(de)12mmt-clear插(cha)入物(wu)(corningcostar)上(shang)后(hou)2至5周使(shi)用(yong)。使(shi)用(yong)磷酸(suan)緩沖鹽水(shui)(pbs)來洗滌人支(zhi)(zhi)氣管(guan)上(shang)皮培養(yang)物(wu)黏膜(mo)表面。

共聚(ju)焦(jiao)顯(xian)微鏡:為標記氣(qi)道(dao)表面液(ye)(ye)(ye)體(ti),向人支氣(qi)管(guan)(guan)上皮(pi)培(pei)養(yang)物(wu)(wu)黏(nian)膜(mo)表面添(tian)加包(bao)含德克薩斯紅-右(you)旋糖酐(2mg/ml;invitrogen)的(de)(de)林(lin)格(ge)液(ye)(ye)(ye)。經(jing)黏(nian)膜(mo)添(tian)加全氟化(hua)碳以防止(zhi)氣(qi)道(dao)表面液(ye)(ye)(ye)體(ti)蒸發,并將(jiang)培(pei)養(yang)物(wu)(wu)放(fang)置在具有63×甘油(you)浸(jin)漬物(wu)(wu)鏡的(de)(de)leicasp8共聚(ju)焦(jiao)顯(xian)微鏡的(de)(de)臺上包(bao)含100μl林(lin)格(ge)液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)室中。每個培(pei)養(yang)物(wu)(wu)掃描(miao)10個點(dian),并確定平均氣(qi)道(dao)表面液(ye)(ye)(ye)體(ti)高(gao)度(du)。對(dui)于共聚(ju)焦(jiao)顯(xian)微鏡,將(jiang)人支氣(qi)管(guan)(guan)上皮(pi)培(pei)養(yang)物(wu)(wu)在包(bao)含以下(mm)的(de)(de)改良林(lin)格(ge)溶液(ye)(ye)(ye)中漿(jiang)膜(mo)浸(jin)浴:116nacl、10nahco3、5.1kcl、1.2cacl2、1.2mgcl2、20tes、10葡萄糖,ph7.4)。在所有其他時(shi)間,將(jiang)人支氣(qi)管(guan)(guan)上皮(pi)培(pei)養(yang)物(wu)(wu)維(wei)持在充(chong)入5%co2的(de)(de)包(bao)含24mmnahco3的(de)(de)改良begm生長(chang)培(pei)養(yang)基中。全氟化(hua)碳(fc-77)從3m獲得,并且如先(xian)前報(bao)道(dao)的(de)(de),其對(dui)asl的(de)(de)高(gao)度(du)沒(mei)有作用。

α-enac的(de)(de)內(nei)化:根據生產(chan)商的(de)(de)說(shuo)明并如(ru)先前所公開的(de)(de),在(zai)384孔板中使用(yong)lipofectamine用(yong)在(zai)enac的(de)(de)n端融合gfp的(de)(de)gfp-αenac以及(ji)未(wei)經標記的(de)(de)βenac和γenac轉染hek293t細胞(bao)(參見,例如(ru),hobbs等(deng)amjphysiollungcellmolphysiol.2013年12月;305(12):l990-l1001.doi:10.1152/ajplung.00103.2013.電子出版于2013年10月;garland等(deng)procnatlacadsciusa.2013年10月1日;110(40):15973-8.doi:10.1073/pnas.1311999110.電子出版于2013年9月16日;tan等(deng)jphysiol.2014年12月1日;592(pt23):5251-68)。24小時之后,在(zai)t=0時添(tian)加(jia)肽或載體(ti)對照,3小時后使用(yong)tecanm1000讀(du)板器(qi)讀(du)取(qu)熒(ying)光。在(zai)488nm和510nm下讀(du)取(qu)熒(ying)光。

圖6示出了分析在(zai)(zai)gfp標記的(de)(de)α-enac僅與(yu)γenac而(er)不(bu)(bu)與(yu)β-enac共表達時不(bu)(bu)同肽對hek293t細胞中α-enac內化的(de)(de)作用的(de)(de)實(shi)驗結果。在(zai)(zai)該圖中,與(yu)s18(seqidno:1和seqidno:128)一(yi)起使用了seqidno:143(陰性對照肽)和水(載體)對照。盡管(guan)在(zai)(zai)共表達β-enac時seqidno:1和seqidno:128有效地降低α-enac,但(dan)是當不(bu)(bu)存(cun)在(zai)(zai)β-enac時,在(zai)(zai)該實(shi)驗中沒有觀察到影響。

βenac小鼠中的(de)(de)效(xiao)(xiao)力(li)測試:與cf患(huan)(huan)者一樣,enac-tg小鼠在出生(sheng)時(shi)(shi)未患(huan)(huan)疾(ji)病(bing),但很快(kuai)發生(sheng)阻塞性肺病(bing)(zhou,z.,等(deng)amjrespircritcaremed178,1245-1256(2008))。c57bl:fvb和c57bl:c3h混(hun)合菌株的(de)(de)死(si)亡率分別為90%和50%,并(bing)且(qie)在這(zhe)些(xie)背(bei)景(jing)下(xia)疾(ji)病(bing)的(de)(de)再現率足夠高:用n為約8至(zhi)10只動物/組產生(sheng)可靠的(de)(de)數(shu)據(ju)。此外,βenac-tg小鼠以與人中cf/copd類似的(de)(de)方(fang)式對治療干預作出反應,并(bing)且(qie)在出生(sheng)時(shi)(shi)抑制肺病(bing)后可預防肺病(bing)的(de)(de)發展(zhan)(livraghi,a.,等(deng)jimmunol182,4357-4367(2009))。在平行的(de)(de)小鼠組群中,通過鼻內(nei)滴注(zhu)(1μl/g體重)每天1至(zhi)3次(ci)地給(gei)藥s18衍生(sheng)肽或載體,持續14天。每天稱重小鼠,并(bing)且(qie)如果(guo)發現利尿效(xiao)(xiao)應,則通過皮下(xia)注(zhu)射無菌鹽水來替(ti)代分泌(mi)的(de)(de)體積。在處理(li)結束時(shi)(shi),處死(si)小鼠用于表型分析。

統計學分析:所(suo)有數據均表示為n個(ge)(ge)實驗的平均值±se。每(mei)個(ge)(ge)研究(jiu)使用來自三個(ge)(ge)或(huo)更多個(ge)(ge)單(dan)獨供體的氣道培養物(wu),并(bing)且在三個(ge)(ge)獨立的場合重復每(mei)個(ge)(ge)卵母(mu)細胞研究(jiu)。視實驗情況(kuang)而定,使用配(pei)對(dui)(dui)或(huo)非(fei)配(pei)對(dui)(dui)t檢驗或(huo)其非(fei)等效參數測試平均值之間(jian)的差異(yi)的統計學顯著性。從(cong)這樣的比(bi)較,判斷產生(sheng)p≤0.05的差異(yi)是顯著的。將所(suo)有的結(jie)合測定擬合成hill方程(cheng)。

實施例2

特化的非天然存在的肽的鑒定

基于正常(chang)人支氣管(guan)上皮培養物(wu)將氣道表面液體高度(du)調節至7μm的(de)能力(其與胰蛋白酶(mei)敏感性(xing)(xing)enac活(huo)性(xing)(xing)的(de)降低相并聯(lian)),我(wo)們之前表明splunc1衍生肽(即(ji)s18;圖1)在單次劑量之后可以以亞微摩(mo)爾范圍(wei)內的(de)ec50抑制(zhi)enac多達24小(xiao)時(hobbs等,2013)。盡管(guan)s18對蛋白水解具有抗性(xing)(xing)且熱穩定,我(wo)們仍(reng)測試了我(wo)們是否可減小(xiao)s18的(de)大(da)小(xiao)、增加(jia)(jia)其穩定性(xing)(xing)和/或(huo)提高其功效。任何這些作用(yong)都(dou)會增加(jia)(jia)其作為藥物(wu)的(de)效用(yong)。

為(wei)了確定我(wo)們(men)(men)的(de)(de)丙(bing)氨(an)酸(suan)(suan)掃描數(shu)據,我(wo)們(men)(men)制備了子(zi)序(xu)(xu)列a(lpvpldqt(seqidno:113));圖(tu)1)的(de)(de)肽(tai)。作(zuo)為(wei)對(dui)照,我(wo)們(men)(men)制備了含有(you)(you)帶電荷的(de)(de)中(zhong)間(jian)區(qu)(dqt)的(de)(de)重(zhong)疊第二肽(tai),以及子(zi)序(xu)(xu)列b(dqtlplnvnp(seqidno:114))。如圖(tu)2中(zhong)所示(shi)(shi),lpvpldqt(seqidno:113)保留與s18類似的(de)(de)活性,而(er)(er)dqtlplnvnp(seqidno:114)無活性。然(ran)而(er)(er),我(wo)們(men)(men)檢測(ce)對(dui)蛋(dan)白酶(mei)的(de)(de)易感性的(de)(de)另外實驗證明,盡(jin)管lpvpldqt(seqidno:113)可抑制enac引導的(de)(de)流體吸收,但該肽(tai)更易遭(zao)受蛋(dan)白水解降(jiang)解。因(yin)此,我(wo)們(men)(men)產生了新的(de)(de)肽(tai),其中(zhong)我(wo)們(men)(men)使c端和(he)n端的(de)(de)側翼具有(you)(you)一對(dui)d-丙(bing)氨(an)酸(suan)(suan)(示(shi)(shi)為(wei)小寫‘a’)。將30μm肽(tai)經(jing)黏膜添加(jia)至(zhi)hbec并(bing)在3小時后(hou)通過xz-共聚焦顯微鏡(jing)測(ce)量asl高(gao)度。圖(tu)2a示(shi)(shi)出了s18的(de)(de)n端區(qu)域(lpvpldqt)(seqidno:113)相對(dui)于重(zhong)疊的(de)(de),但是(shi)為(wei)c端的(de)(de)區(qu)段(dqtlplnvnp)(seqidno:114)的(de)(de)比(bi)較。在圖(tu)2b中(zhong),向(xiang)子(zi)-s18肽(tai)lpvpldqt(seqidno:113)和(he)lpvpldqtlpl(seqidno:115)中(zhong)添加(jia)d-丙(bing)氨(an)酸(suan)(suan)以增加(jia)lpvpldqt(seqidno:113)的(de)(de)穩定性。d-丙(bing)氨(an)酸(suan)(suan)以小寫a表示(shi)(shi)。所有(you)(you)n=6至(zhi)9。數(shu)據示(shi)(shi)為(wei)平均值±sem。

當與(yu)s18相(xiang)比(bi)(bi)(bi)時,15-聚(ju)體和8-聚(ju)體顯示(shi)(shi)出相(xiang)同的(de)(de)(de)活性(圖(tu)(tu)2a至2b)。然后,我(wo)們(men)產(chan)生(sheng)針(zhen)對(dui)(dui)(dui)s18對(dui)(dui)(dui)比(bi)(bi)(bi)肽(tai)aalpvpldqtaa(seqidno:3)的(de)(de)(de)全劑(ji)量應(ying)答(da)。s18和aalpvpldqtaa(seqidno:3)產(chan)生(sheng)相(xiang)同的(de)(de)(de)劑(ji)量應(ying)答(da)(圖(tu)(tu)3a),表明縮短肽(tai)并使(shi)其(qi)(qi)側翼(yi)具有(you)(you)(you)非天(tian)然氨(an)(an)基酸(suan)不影響其(qi)(qi)功效或效力。接(jie)著,我(wo)們(men)基于seqidno:2的(de)(de)(de)序列制(zhi)備了(le)幾種(zhong)新的(de)(de)(de)肽(tai)。在(zai)此(ci),由于脯氨(an)(an)酸(suan)通常在(zai)肽(tai)中(zhong)提(ti)供扭結,因(yin)此(ci)不對(dui)(dui)(dui)其(qi)(qi)進行(xing)改變和替換,我(wo)們(men)系統地(di)對(dui)(dui)(dui)其(qi)(qi)他氨(an)(an)基酸(suan)進行(xing)保(bao)守替換物。劑(ji)量應(ying)答(da)示(shi)(shi)于圖(tu)(tu)3b中(zhong)。注意(yi),由于該圖(tu)(tu)上有(you)(you)(you)幾條線,因(yin)此(ci)省略了(le)誤差棒和數據符號。然而,這些數據是(shi)使(shi)用(yong)配對(dui)(dui)(dui)氣道培養(yang)物同時獲得的(de)(de)(de),因(yin)此(ci)其(qi)(qi)比(bi)(bi)(bi)較是(shi)有(you)(you)(you)效的(de)(de)(de)。顯然,與(yu)s18相(xiang)比(bi)(bi)(bi),seqidno:5(aalpnlepldqtaa)顯示(shi)(shi)出效力呈對(dui)(dui)(dui)數倍增(zeng)加,而seqidno:9(aalpvpldqsaa)和seqidno:6(aalpvpnledqtaa)分別顯示(shi)(shi)出降低的(de)(de)(de)功效和效力(圖(tu)(tu)3b)。圖(tu)(tu)3b中(zhong)包括的(de)(de)(de)其(qi)(qi)他序列是(shi)seqidno:4(aanlepvpldqtaa)、seqidno:7(aalpvpldntaa)和seqidno:8(aalpvpleqtaa)。

使(shi)用(yong)新鮮批次(ci)的(de)(de)(de)氣道(dao)細(xi)胞,我們進(jin)行(xing)了針對seqidno:5的(de)(de)(de)另外的(de)(de)(de)劑量應答(圖4)。可以看出(chu),與s18相比,該(gai)肽產生功(gong)效的(de)(de)(de)顯著增加,并且ic50為30nm。

測試了(le)肽(tai)調節αenac的(de)(de)(de)內化的(de)(de)(de)能(neng)力。來自(zi)這(zhe)些(xie)實(shi)驗(yan)的(de)(de)(de)結(jie)果示于圖5a至(zhi)5u中。adg是具有以下序列(lie)的(de)(de)(de)陰(yin)性對(dui)照肽(tai):nh3-adggllllnnppppqtvv-nh2(seqidno:143)。這(zhe)些(xie)實(shi)驗(yan)中使(shi)用的(de)(de)(de)肽(tai)是s18(seqidno:1)、seqidno:2、seqidno:141、seqidno:129、seqidno:130、seqidno:128、seqidno:131、seqidno:132、seqidno:133、seqidno:134、seqidno:135、seqidno:136、seqidno:137、seqidno:138、seqidno:131、seqidno:139、seqidno:140、seqidno:144和seqidno:127。在這(zhe)些(xie)實(shi)驗(yan)中還(huan)使(shi)用了(le)seqidno:12、seqidno:13、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18和seqidno:136的(de)(de)(de)肽(tai),其各(ge)自(zi)在n和c兩(liang)端具有aa帽。還(huan)示出(chu)了(le)阿(a)米(mi)洛利,其通過另(ling)一種機(ji)制(zhi)抑制(zhi)enac,并且不降(jiang)低細(xi)胞(bao)表(biao)面上功(gong)能(neng)性受體的(de)(de)(de)量。這(zhe)些(xie)結(jie)果表(biao)明(ming)splunc肽(tai)觸發enac功(gong)能(neng)的(de)(de)(de)破壞以抑制(zhi)其活性。

在(zai)(zai)βenac小鼠中(zhong)測試肽的(de)(de)效(xiao)力。來自這些(xie)實(shi)驗的(de)(de)結(jie)果示(shi)于圖(tu)(tu)7a至7f中(zhong)。與吸入的(de)(de)seqidno:142相比,用吸入的(de)(de)seqidno:128進(jin)行14天處(chu)理(li)(li)在(zai)(zai)增加(jia)βenac-tgc57bl:fvb小鼠的(de)(de)百(bai)分比存(cun)(cun)活方面更(geng)有效(xiao)(圖(tu)(tu)7b)。seqidno:128的(de)(de)14天處(chu)理(li)(li)還(huan)增加(jia)βenac-tgc57bl:c3h小鼠的(de)(de)百(bai)分比存(cun)(cun)活(圖(tu)(tu)7c和(he)7d)。每日一(yi)次給藥seqidno:128增加(jia)βenac-tgc57bl:c3h小鼠的(de)(de)存(cun)(cun)活百(bai)分比(圖(tu)(tu)7e,左(zuo)圖(tu)(tu))。圖(tu)(tu)7e的(de)(de)右圖(tu)(tu)顯示(shi),seqidno:128不具有利尿作用。圖(tu)(tu)7f顯示(shi),用seqidno:127進(jin)行處(chu)理(li)(li)增加(jia)enac-tgc57bl:c3h小鼠的(de)(de)百(bai)分比存(cun)(cun)活。實(shi)驗中(zhong)使用的(de)(de)其他肽的(de)(de)序列是seqidno:129、seqidno:134和(he)seqidno:136。

前述(shu)內容(rong)是對本(ben)(ben)發(fa)明(ming)的舉例說明(ming),并且(qie)不應解釋(shi)為(wei)對本(ben)(ben)發(fa)明(ming)進行限(xian)制。本(ben)(ben)發(fa)明(ming)由所(suo)附權(quan)利(li)要求(qiu)書限(xian)定,其中本(ben)(ben)文中包括權(quan)利(li)要求(qiu)書的等同(tong)方(fang)案。

序列表

<110>北卡羅米納大學查佩爾(er)希爾(er)分校

斯拜麗絲生物科學公司

r·塔蘭

d·j·克里斯滕森

<120>改(gai)良的鈉通道的肽抑制劑

<130>5470-721wo

<150>us62/061,461

<151>2014-10-08

<160>144

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>18

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(18)..(18)

<223>酰胺化

<400>1

glyglyleuprovalproleuaspglnthrleuproleuasnvalasn

151015

proala

<210>2

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(18)..(19)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(19)..(19)

<223>酰胺化

<400>2

xaaxaaleuprovalproleuaspglnthrleuproleuasnvalasn

151015

proxaaxaa

<210>3

<211>12

<212>prt

<213>人工(gong)序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化(hua)

<400>3

xaaxaaleuprovalproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>4

<211>12

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性(xing)的肽(tai)序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化

<400>4

xaaxaaxaaprovalproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>5

<211>12

<212>prt

<213>人工(gong)序(xu)列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉(na)通道活性的肽(tai)序(xu)列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰(xian)胺(an)化

<400>5

xaaxaaleuproxaaproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>6

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制(zhi)鈉通道活性(xing)的(de)肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(7)..(7)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺(an)化

<400>6

xaaxaaleuprovalproxaaaspglnthrxaaxaa

1510

<210>7

<211>12

<212>prt

<213>人工(gong)序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化

<400>7

xaaxaaleuprovalproleuaspasnthrxaaxaa

1510

<210>8

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的肽(tai)序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化

<400>8

xaaxaaleuprovalproleugluglnthrxaaxaa

1510

<210>9

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺(an)化

<400>9

xaaxaaleuprovalproleuaspglnserxaaxaa

1510

<210>10

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通(tong)道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化(hua)

<400>10

leuprovalproleuaspglnthr

15

<210>11

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>11

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>12

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>12

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>13

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的肽(tai)序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>13

leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

<210>14

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活(huo)性的肽(tai)序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>14

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>15

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>15

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>16

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>16

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>17

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>17

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>18

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性(xing)的(de)肽(tai)序(xu)列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>18

leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

<210>19

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>19

leuprovalproleugluglnser

15

<210>20

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的肽(tai)序(xu)列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa是ms

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>20

leuprovalproleugluglnxaa

15

<210>21

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通(tong)道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>21

leuprovalprovalaspglnthr

15

<210>22

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>22

leuprovalprovalgluglnser

15

<210>23

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序(xu)列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>23

leuprovalprovalaspglnser

15

<210>24

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>24

valprovalproleuaspglnthr

15

<210>25

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>25

leuproleuproleuaspglnser

15

<210>26

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>26

valproleuproleuaspglnser

15

<210>27

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通(tong)道活性(xing)的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>27

leuproleuproleuaspglnthr

15

<210>28

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道(dao)活(huo)性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>28

valxaaleuxaavalgluglnser

15

<210>29

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>29

valproleuprovalgluglnser

15

<210>30

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的(de)肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>30

leuproleuproleugluglnser

15

<210>31

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的(de)肽序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是mv

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>31

leuproxaaproleuaspglnser

15

<210>32

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列(lie)

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性(xing)的肽序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>32

leuproxaaproleuaspglnthr

15

<210>33

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活(huo)性(xing)的肽序(xu)列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>33

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>34

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉(na)通(tong)道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>34

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>35

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通(tong)道活(huo)性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>35

leuxaaxaaxaaleugluglnser

15

<210>36

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序(xu)列

<220>

<223>抑(yi)制鈉(na)通道活(huo)性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是nyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>36

leuxaaxaaxaavalgluglnser

15

<210>37

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列(lie)

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化(hua)

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>37

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>38

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>38

leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

<210>39

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>39

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>40

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工(gong)序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化(hua)

<400>40

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>41

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是(shi)hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>41

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>42

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉(na)通道活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>42

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>43

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的(de)肽(tai)序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>43

leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

<210>44

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化(hua)

<400>44

leuprovalproleugluglnser

15

<210>45

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化(hua)

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa是ms

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>45

leuprovalproleugluglnxaa

15

<210>46

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>46

leuprovalprovalaspglnthr

15

<210>47

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化(hua)

<400>47

leuprovalprovalgluglnser

15

<210>48

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的(de)肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>48

leuprovalprovalaspglnser

15

<210>49

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化(hua)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>49

valprovalproleuaspglnthr

15

<210>50

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺(an)化

<400>50

leuproleuproleuaspglnser

15

<210>51

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>51

valproleuproleuaspglnser

15

<210>52

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>52

leuproleuproleuaspglnthr

15

<210>53

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的(de)肽(tai)序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>53

valxaaleuxaavalgluglnser

15

<210>54

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>54

valproleuprovalgluglnser

15

<210>55

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道(dao)活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化(hua)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>55

leuproleuproleugluglnser

15

<210>56

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是mv

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>56

leuproxaaproleuaspglnser

15

<210>57

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>57

leuproxaaproleuaspglnthr

15

<210>58

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽序列(lie)

<220>

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<222>(1)..(1)

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<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>58

leuproxaaprovalgluglnser

15

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<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活(huo)性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化(hua)

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>59

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>60

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活(huo)性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

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<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>60

leuxaaxaaxaaleugluglnser

15

<210>61

<211>8

<212>prt

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<220>

<223>抑制鈉(na)通道(dao)活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

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<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuxaaxaaxaavalgluglnser

15

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<220>

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<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuxaavalproleuaspglnthr

15

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<211>8

<212>prt

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<220>

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<220>

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<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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<400>63

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

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<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

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<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>64

leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

<210>65

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

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<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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15

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<220>

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<222>(4)..(4)

<223>xaa是2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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<220>

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<222>(2)..(2)

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<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuxaavalproleuaspglnthr

15

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<211>8

<212>prt

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<220>

<223>抑制鈉(na)通道活(huo)性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>68

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

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<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

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<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>70

leuprovalproleugluglnser

15

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<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

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<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuprovalproleugluglnxaa

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>72

leuprovalprovalaspglnthr

15

<210>73

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性(xing)的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>73

leuprovalprovalgluglnser

15

<210>74

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>74

leuprovalprovalaspglnser

15

<210>75

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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valprovalproleuaspglnthr

15

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<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuproleuproleuaspglnser

15

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<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>77

valproleuproleuaspglnser

15

<210>78

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺(an)化

<400>78

leuproleuproleuaspglnthr

15

<210>79

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活(huo)性的肽序(xu)列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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valxaaleuxaavalgluglnser

15

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<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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<400>80

valproleuprovalgluglnser

15

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<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuproleuproleugluglnser

15

<210>82

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序(xu)列(lie)

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是mv

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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<400>82

leuproxaaproleuaspglnser

15

<210>83

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制(zhi)鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>83

leuproxaaproleuaspglnthr

15

<210>84

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺(an)化

<400>84

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>85

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化(hua)

<400>85

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>86

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是(shi)hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuxaaxaaxaaleugluglnser

15

<210>87

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

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leuxaaxaaxaavalgluglnser

15

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<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化(hua)

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>88

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>89

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通(tong)道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

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leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽(tai)序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>90

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>91

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化(hua)

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是2pp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化(hua)

<400>91

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

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<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活(huo)性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>92

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>93

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>93

leuprovalxaaleuaspglnthr

15

<210>94

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>94

leuxaavalxaaleuaspglnthr

15

<210>95

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>95

leuprovalproleugluglnser

15

<210>96

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa是(shi)ms

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>96

leuprovalproleugluglnxaa

15

<210>97

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>97

leuprovalprovalaspglnthr

15

<210>98

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>98

leuprovalprovalgluglnser

15

<210>99

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉(na)通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>99

leuprovalprovalaspglnser

15

<210>100

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的(de)肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>100

valprovalproleuaspglnthr

15

<210>101

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>101

leuproleuproleuaspglnser

15

<210>102

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性(xing)的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>102

valproleuproleuaspglnser

15

<210>103

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制(zhi)鈉通道活(huo)性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>103

leuproleuproleuaspglnthr

15

<210>104

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的(de)肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是nyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是nyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>104

valxaaleuxaavalgluglnser

15

<210>105

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉(na)通(tong)道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰(xian)化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>105

valproleuprovalgluglnser

15

<210>106

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰(xian)化(hua)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>106

leuproleuproleugluglnser

15

<210>107

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉(na)通道活(huo)性的(de)肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是mv

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>107

leuproxaaproleuaspglnser

15

<210>108

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性(xing)的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化(hua)

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>108

leuproxaaproleuaspglnthr

15

<210>109

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>109

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>110

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙(yi)酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>110

leuproxaaprovalgluglnser

15

<210>111

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰(xian)化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>111

leuxaaxaaxaaleugluglnser

15

<210>112

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>112

leuxaaxaaxaavalgluglnser

15

<210>113

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化(hua)

<400>113

leuprovalproleuaspglnthr

15

<210>114

<211>10

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑(yi)制(zhi)鈉(na)通道活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>114

aspglnthrleuproleuasnvalasnpro

1510

<210>115

<211>11

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通(tong)道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(11)..(11)

<223>酰(xian)胺化

<400>115

leuprovalproleuaspglnthrleuproleu

1510

<210>116

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<;223>xaa是l或(huo)者具有天然或(huo)非天然氨基酸的保(bao)守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223&gt;xaa是p或(huo)者具有(you)天然(ran)或(huo)非天然(ran)氨基酸的(de)保守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是v或者具有天(tian)然或非天(tian)然氨基酸的保守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是p或(huo)者具(ju)有天(tian)然(ran)或(huo)非天(tian)然(ran)氨基酸的保守(shou)替(ti)換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是l或者具有天(tian)然或非天(tian)然氨(an)基酸的(de)保守(shou)替(ti)換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>xaa是d或(huo)者具有天然或(huo)非天然氨(an)基酸的保守替換物(wu)

<220>

<221>misc_feature

<222>(7)..(7)

<223>xaa是q或者具有天然或非天然氨基酸的保守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa是t或(huo)(huo)者具有天然或(huo)(huo)非天然氨基酸的保守(shou)替換物

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>116

xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa

15

<210>117

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道(dao)活性的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是l、nle或者v

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是(shi)pro、hyp、2pp或者(zhe)dhp

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是v、l、nle或者mv

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是pro、hyp、2pp或者dhp

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是l、nle或者v

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>xaa是d或者e

<220>

<221>misc_feature

<222>(7)..(7)

<223>xaa是qorn

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa是t、s或者ms

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>117

xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa

15

<210>118

<211>15

<212>prt

<213>人(ren)工序(xu)列

<220>

<223>抑(yi)制鈉(na)通(tong)道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是l或(huo)者具有天(tian)然或(huo)非天(tian)然氨基酸的保守替(ti)換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是p或者具(ju)有天然(ran)或非(fei)天然(ran)氨基酸的保(bao)守(shou)替換(huan)物(wu)

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)v或者具有(you)天然(ran)或非天然(ran)氨基酸的保守替(ti)換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是(shi)p或者(zhe)具有天然或非天然氨基酸的(de)保(bao)守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是l或者具有天(tian)然或非(fei)天(tian)然氨基酸的保守替換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>xaa是d或(huo)者具有天(tian)然(ran)或(huo)非天(tian)然(ran)氨基(ji)酸的保守替換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(7)..(7)

<223>xaa是q或(huo)者具有天(tian)然(ran)或(huo)非天(tian)然(ran)氨基酸(suan)的保守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa是t或者具有天然或非天然氨(an)基酸的保守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(9)..(9)

<223>xaa是t或者具有天然或非天然氨基(ji)酸的(de)保守替換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>xaa是l或(huo)者具有(you)天然(ran)或(huo)非天然(ran)氨基酸的保守替換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(11)

<223>xaa是p或者具有天(tian)(tian)然或非天(tian)(tian)然氨基(ji)酸的保守替(ti)換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(12)..(12)

<223>xaa是(shi)n或者具(ju)有(you)天(tian)然(ran)或非(fei)天(tian)然(ran)氨基酸的保(bao)守替換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(13)..(13)

<223>xaa是v或者具有天然(ran)(ran)或非天然(ran)(ran)氨基酸的保守替換(huan)物

<220>

<221>misc_feature

<222>(14)..(14)

<223>xaa是(shi)n或者具(ju)有天然或非天然氨基(ji)酸的保守替(ti)換物

<220>

<221>misc_feature

<222>(15)..(15)

<223>xaa是p或(huo)者(zhe)具有天然或(huo)非天然氨基酸的(de)保守替換(huan)物(wu)

<220>

<221>mod_res

<222>(15)..(15)

<223>酰胺(an)化

<400>118

xaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaaxaa

151015

<210>119

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉(na)通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(15)..(15)

<223>酰胺化

<400>119

leuprovalproleuaspglnthrleuproleuasnvalasnpro

151015

<210>120

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>120

leuprovalproleuaspglnthr

15

<210>121

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性(xing)的肽序(xu)列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>121

xaaprovalproleuaspglnthr

15

<210>122

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>122

leuproxaaproleuaspglnthr

15

<210>123

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的(de)肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>123

leuprovalproxaaaspglnthr

15

<210>124

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活(huo)性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>124

leuprovalproleuaspasnthr

15

<210>125

<211>8

<212>prt

<213>人(ren)工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道(dao)活性的肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺(an)化

<400>125

leuprovalproleugluglnthr

15

<210>126

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制(zhi)鈉(na)通道(dao)活性的肽序(xu)列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>126

leuprovalproleuaspglnser

15

<210>127

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>127

leuproileproleuaspglnthr

15

<210>128

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺(an)化

<400>128

xaaxaaleuproileproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>129

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性的肽序(xu)列

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>xaa是(shi)ahp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>129

leuproxaaproleuaspglnthr

15

<210>130

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性(xing)的肽序列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>130

leupropheproleuaspglnthr

15

<210>131

<211>12

<212>prt

<213>人工(gong)序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性(xing)的(de)肽(tai)序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化

<400>131

xaaxaaleuxaaxaaproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>132

<211>12

<212>prt

<213>人(ren)工(gong)序列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道(dao)活(huo)性的(de)肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是(shi)nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺(an)化

<400>132

xaaxaaleuproxaaxaaleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>133

<211>18

<212>prt

<213>人工序(xu)列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道(dao)活(huo)性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是nle

<220>

<221>mod_res

<222>(18)..(18)

<223>酰(xian)胺化

<400>133

glyglyleuproxaaproleuaspglnthrleuproleuasnvalasn

151015

proala

<210>134

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(1)..(1)

<223>乙酰化

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰(xian)胺化

<400>134

leuproileproleuaspglnthr

15

<210>135

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性(xing)的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(10)..(10)

<223>酰胺化

<400>135

xaaleuproxaaproleuaspglnthrxaa

1510

<210>136

<211>8

<212>prt

<213>人工序(xu)列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的(de)肽序列(lie)

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是dhp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>136

leuxaavalproleuaspglnthr

15

<210>137

<211>8

<212>prt

<213>人工(gong)序列

<220>

<223>抑制鈉通道活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>137

valprovalproleuaspglnser

15

<210>138

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化

<400>138

glyglyleuproileproleuaspglnthrleuproleuasnvalasn

151015

proala

<210>139

<211>8

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉通道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa是hyp

<220>

<221>mod_res

<222>(8)..(8)

<223>酰胺化(hua)

<400>139

leuxaaileproleuaspglnthr

15

<210>140

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>抑制鈉(na)通道活性(xing)的肽序(xu)列(lie)

<220>

<221>mod_res

<222>(18)..(18)

<223>酰胺化

<400>140

glyglyleuproileproleuaspglnthrleuproleuasnvalasn

151015

proala

<210>141

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制(zhi)鈉通道活性(xing)的肽序(xu)列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化(hua)

<400>141

xaaxaaleuproleuproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>142

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(lie)

<220>

<223>抑制鈉通(tong)道活性的肽(tai)序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(2)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>xaa是nle

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(12)

<223>xaa是(shi)d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(12)..(12)

<223>酰胺化(hua)

<400>142

xaaxaaleuproxaaproleuaspglnthrxaaxaa

1510

<210>143

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>adg陰性對照肽序列

<220>

<221>mod_res

<222>(18)..(18)

<223>酰胺化

<400>143

alaaspglyglyleuleuleuleuasnasnproproproproglnthr

151015

valval

<210>144

<211>10

<212>prt

<213>人(ren)工序(xu)列

<220>

<223>抑(yi)制鈉通道(dao)活性的肽序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>xaa是d-ala

<220>

<221>mod_res

<222>(10)..(10)

<223>酰胺(an)化

<400>144

xaaleuproileproleugluglnserxaa

1510

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