相關申請的交叉引用根據37cfr§1.53(b)提交的本非臨時申請根據35usc§119(e)要求于2013年12月16日提交的美國臨時申請61/916,661以及于2013年12月16日提交的美國臨時申請61/916,691的權益，在此將其全部內容引入本申請，作為參考。序列表本申請包括序列表，其已經以ascii格式電子提交并將其全部內容通過引用的方式并入本申請。與2014年12月12日產生的所述ascii副本命名為p5760pct_sl.txt且其大小為35,047字節。本發明涉及用作抗體-藥物綴合物(adc)的接頭的新型肽模擬化合物。本發明還涉及包含肽模擬接頭的adc。本發明還涉及治療人類疾病的方法。
背景技術：
：近年來使用單克隆抗體(mabs)將抗癌藥物直接遞送至腫瘤細胞已吸引了大量關注。fda已批準兩種新型抗體-藥物綴合物用于治療癌癥。(brentuximabvedotin)是一種適用于治療復發性或難治性霍奇金淋巴瘤和全身間變性大細胞淋巴瘤(alcl)的針對cd30的抗體-藥物綴合物(adc)。(ado-trastuzumabemtansine)是一種批準用于患有her2陽性、晚期(轉移性)乳腺癌的患者的新療法。為了獲得adc的治療性有效抗腫瘤活性和可接受的治療指數，可優化若干方面的設計。具體地，眾所周知接頭的化學結構對adc的有效性和安全性均可具有顯著影響(ducry&stump，bioconjugatechem，2010，21，5-13)。選擇正確的接頭會影響藥物適當遞送至預期的癌細胞的細胞區室。接頭通常可分為兩類：可斷裂的(例如肽、腙或二硫化物)或不可斷裂的(例如硫醚)。可被溶酶體酶(例如組織蛋白酶b)水解的肽接頭如纈氨酸-瓜氨酸(val-cit)已被用于使藥物與抗體連接(us6214345)。部分由于其在系統循環中的相對穩定性以及在腫瘤中有效釋放藥物的能力，它們一直是特別有用的。包含val-cit接頭的adc已在體內顯示出相對穩定性(藥物釋放的t1/2約7天(doronina等(2008)，bioconjugatechem.，19，1960-1963)。然而，由天然肽表示的化學間隔是有限的；因此，期望具有如肽一樣起作用并可被溶酶體蛋白酶有效水解的各種非肽接頭。非肽結構的更大多樣性可產生通過肽接頭無法獲得的新的、有益的特性。本申請所提供的是用于adc的各種類型的非肽接頭，其可被溶酶體酶裂解。技術實現要素：本發明涉及由式(i)表示的抗體-藥物綴合物：ab—(l—d)p,ab為抗體；l為由下式表示的肽模擬接頭：—str—(pm)—sp—其中str為共價連接至ab的延伸單元；sp為鍵或共價連接至藥物部分的間隔單元；pm為選自以下的非肽化學部分：w為–nh-雜環烷基-或雜環烷基；y為雜芳基、芳基、-c(o)c1-c6亞烷基、c1-c6亞烷基-nh2、c1-c6亞烷基-nh-ch3、c1-c6亞烷基-n-(ch3)2、c1-c6烯基或c1-c6亞烷基；每個r1獨立為c1-c10烷基、c1-c10烯基、(c1-c10烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c10烷基)nhc(o)nh2；r3和r2各自獨立為h、c1-c10烷基、c1-c10烯基、芳基烷基或雜芳基烷基，或r3和r2可一起形成c3-c7環烷基；r4和r5各自獨立為c1-c10烷基、c1-c10烯基、芳基烷基、雜芳基烷基、(c1-c10烷基)och2-，或r4和r5可形成c3-c7環烷基環；p為1至8的整數；d為藥物部分。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物的藥物組合物。本發明還涉及治療癌癥的方法、式(i)的抗體-藥物綴合物在治療中的用途以及式(i)的抗體-藥物綴合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。本發明還涉及制備式(i)的抗體-藥物綴合物的方法。附圖說明圖1顯示了cd33adc(cd33cbi-pbdadc3-2和adc2-2)在具有hl-60人急性髓細胞性白血病腫瘤的scid小鼠中的效能比較。圖2顯示了napi2badcs(napi2bcbi-pbdadc2-1和adc3-1)在具有ovcar3x2.1人卵巢腫瘤的scid-beige小鼠中的效能比較。具體實施方式本申請所提供的是可被溶酶體酶裂解的、用于adc的各種類型的非肽接頭。例如，二肽(例如val-cit)中間的酰胺鍵被酰胺模擬物代替；和/或整個氨基酸(例如，val-cit二肽中的纈氨酸氨基酸)被非氨基酸部分(例如，環烷基二羰基結構(例如，環大小＝4或5))代替。本發明涉及式(i)的抗體-藥物綴合物。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中y為雜芳基；r4和r5一起形成環丁基環。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中y為選自以下的部分：本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中str為由下式表示的化學部分：其中r6選自c1-c10亞烷基、c1-c10烯基、c3-c8環烷基、(c1-c8亞烷基)o-和c1-c10亞烷基-c(o)n(ra)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的一至五個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基、羧酸基團、烷基硫基、c3-c8環烷基、c4-c7雜環烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基烷基和雜芳基，每個ra獨立為h或c1-c6烷基；sp為—ar—rb—，其中ar為芳基或雜芳基，rb為(c1-c10亞烷基)o-。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中str具有下式：其中r7選自c1-c10亞烷基、c1-c10烯基、(c1-c10亞烷基)o-、n(rc)-(c2-c6亞烷基)-n(rc)和n(rc)-(c2-c6亞烷基)；其中每個rc獨立為h或c1-c6烷基；sp為—ar—rb—，其中ar為芳基或雜芳基，rb為(c1-c10亞烷基)o-或sp-c1-c6亞烷基-c(o)nh-。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中ab為抗體；l為由下式表示的非肽化學部分r1為c1-c6烷基、c1-c6烯基、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r3和r2各自獨立為h或c1-c10烷基。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中ab為抗體；l為由下式表示的非肽化學部分r1為c1-c6烷基、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r4和r5一起形成c3-c7環烷基環。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其中ab為抗體；l為由下式表示的非肽化學部分r1為c1-c6烷基、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中str為由下式表示的化學部分：其中r6選自c1-c10亞烷基和c1-c10亞烷基-c(o)n(ra)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的一至五個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基、羧酸基團、烷基硫基、c3-c8環烷基、c4-c7雜環烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基烷基和雜芳基，每個ra獨立為h或c1-c6烷基；p為1、2、3或4。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中str為由下式表示的化學部分：其中r6選自c1-c10亞烷基和c1-c10亞烷基-c(o)n(ra)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的一至五個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基、羧酸基團、烷基硫基、c3-c8環烷基、c4-c7雜環烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基烷基和雜芳基，每個ra獨立為h或c1-c6烷基；p為1、2、3或4。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中str為由下式表示的化學部分：其中r6選自c1-c10亞烷基和c1-c10亞烷基-c(o)n(ra)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的一至五個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基、羧酸基團、烷基硫基、c3-c8環烷基、c4-c7雜環烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基烷基和雜芳基，每個ra獨立為h或c1-c6烷基；p為1、2、3或4。本發明還涉及上述抗體-綴合物中的任一者，其中y為雜芳基、芳基或烯基；r6為c1-c10亞烷基。本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)和(i)(a1)中的任一者，其中y為本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)和(i)(a1)中的任一者，其中y為本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)和(i)(a1)中的任一者，其中y為本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)(a1)、(i)(b1)和(i)(c1)中的任一者，其中str為由下式表示的化學部分：r6為c1-c6亞烷基，其可取代有1-3個選自芳基和雜芳基的基團；sp為-c1-c6亞烷基-c(o)nh-或—ar—rb—，其中ar為芳基，rb為(c1-c3亞烷基)o-。本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)(a1)、(i)(b1)和(i)(c1)中的任一者，其中str為由下式表示的化學部分：r6為c1-c6亞烷基，其可取代有1-3個選自芳基和雜芳基的基團；sp為-c1-c6亞烷基-c(o)nh-。本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)和(i)(a1)中的任一者，其由下式表示：其中r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2p為1、2、3或4。本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)和(i)(b1)中的任一者，其由下式表示：其中p為1、2、3或4；r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r4和r5各自獨立為c1-c6烷基，其中所述烷基為未取代的，或r4和r5可形成c3-c7環烷基環。本發明還涉及上述抗體-綴合物(i)和(i)(c1)中的任一者，其由下式表示：其中p為1、2、3或4；r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2。本發明還涉及抗體-綴合物(i)，其由下式表示：其中p為1、2、3或4；r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2。本發明還涉及抗體-藥物綴合物(i)(b3)，其中str為由下式表示的化學部分：r6為c1-c6亞烷基，其可取代有1-3個選自芳基和雜芳基的基團。本發明還涉及抗體-藥物綴合物(i)(b3)，其中r1為(ch2)3nhc(o)nh2。本發明還涉及抗體-藥物綴合物(i)(b3)，其中r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及抗體-藥物綴合物(i)、(i)(b1)、(i)(b2)和(i)(b3)，其中r1為(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2。本發明還涉及上述抗體-綴合物中的任一者，其中d為具有下式的二聚體藥物部分：其中r11選自h、p(o)3h2、c(o)nraarbb或與l的鍵；r22選自h、p(o)3h2、c(o)nraarbb或與l的鍵；raa和rbb獨立地選自h和任選取代有一個或多個f的c1-c6烷基，或raa和rbb形成五或六元雜環烷基；t為連接基團，選自c3-c12亞烷基、y1、(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)、(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)、(c2-c6亞烯基)-y1-(c2-c6亞烯基)和(c2-c6亞炔基)-y1-(c2-c6亞炔基)；其中y1獨立選自o、s、nr11、芳基和雜芳基；其中亞烷基、亞烯基、芳基和雜芳基獨立且任選取代有f、oh、o(c1-c6烷基)、nh2、nhch3、n(ch3)2、nhc(o)(c1-c6亞烷基)m、op(o)3h2和c1-c6烷基，其中烷基任選取代有一個或多個f，m為0或1；或亞烷基、亞烯基、芳基和雜芳基獨立且任選取代有與l的鍵，其中所述與l的鍵可經一個任選的取代基連接；d'為選自以下的藥物部分：其中波浪線表示與t的連接位點；x1和x2獨立選自o和nr33，其中r33選自h、c(o)和任選取代有一個或多個f的c1-c6烷基，或x1和x2各自獨立地不存在；r44為h、co2r、c(o)或與l的鍵，其中r為c1-c6烷基或芐基；且r55為h或c1-c6烷基。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中ab為抗體，其結合選自以下的靶標：her2、cll1、cd33、cd22和napi2b；p為1-4；d為x1不存在或為o；r11為c(o)n-哌嗪(ch3)或p(o)3h2。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中ab為抗體，其結合選自以下的靶標：her2、cll1、cd33、cd22和napi2b；p為1-4；d為x1不存在或為o；r11為c(o)n-哌嗪(ch3)或p(o)3h2。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中ab為抗體，其結合選自以下的靶標：her2、cll1、cd33、cd22和napi2b；p為1-4；且r1為c1-c6烷基-nh2、c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r20為h或me。本發明還涉及式(i)(b6)的抗體-藥物綴合物，其中r20為h，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)(b6)的抗體-藥物綴合物，其中r20為me，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中ab為抗體，其結合選自以下的靶標：her2、cll1、cd33、cd22和napi2b；p為1-4；r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r20為h或me。本發明還涉及式(i)(b7)的抗體-藥物綴合物，其中r20為h，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)(b7)的抗體-藥物綴合物，其中r20為me，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中ab為抗體，其結合選自以下的靶標：her2、cll1、cd33、cd22和napi2b；p為1-4；且r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2。本發明還涉及式(i)(b8)的抗體-藥物綴合物，其中r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)的抗體-藥物綴合物，其由下式表示：其中ab為抗體，其結合選自以下的靶標：her2、cll1、cd33、cd22和napi2b；p為1-4；r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；x1和x2各自獨立地不存在或為o；每個r11獨立為c(o)n-哌嗪(ch3)或p(o)3h2。本發明還涉及式(i)(b9)的抗體-藥物綴合物，其中x1不存在，r11為p(o)3h2，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及上述式(i)(b6)、(i)(b7)、(i)(b8)和(i)(b9)的抗體-藥物綴合物中任一者，其中所述ab為結合her2的抗體。本發明還涉及上述式(i)(b6)、(i)(b7)、(i)(b8)和(i)(b9)的抗體-藥物綴合物中任一者，其中所述ab為結合cll1的抗體。本發明還涉及上述式(i)(b6)、(i)(b7)、(i)(b8)和(i)(b9)的抗體-藥物綴合物中任一者，其中所述ab為結合cd33的抗體。本發明還涉及上述式(i)(b6)、(i)(b7)、(i)(b8)和(i)(b9)的抗體-藥物綴合物中任一者，其中所述ab為結合cd22的抗體。本發明還涉及上述式(i)(b6)、(i)(b7)、(i)(b8)和(i)(b9)的抗體-藥物綴合物中任一者，其中所述ab為結合napi2b的抗體。本發明還涉及上述抗體-藥物綴合物中任一者，其中其中y1為苯基，其任選取代有f、oh、o(c1-c6烷基)、nh2、nhch3、n(ch3)2、nhc(o)(c1-c6亞烷基)m、op(o)3h2和c1-c6烷基，其中烷基任選取代有一個或多個f，m為0或1。本發明還涉及式(i)(b)(ld1)的非肽化合物：其中str為可共價連接至抗體的延伸單元；sp為鍵或共價連接至藥物部分的間隔單元；r1為c1-c10烷基、(c1-c10烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c10烷基)nhc(o)nh2；r4和r5各自獨立為c1-c10烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、(c1-c10烷基)och2-，或r4和r5可形成c3-c7環烷基環；d為藥物部分。本發明還涉及由下式表示的非肽化合物：其中r6為c1-c10亞烷基；r4和r5一起形成c3-c7環烷基環。本發明還涉及由下式表示的非肽化合物：本發明還涉及下式的非肽化合物：其中str為可共價連接至抗體的延伸單元；sp為任選的共價連接至藥物部分的間隔單元；y為雜芳基、芳基、-c(o)c1-c6亞烷基、c1-c6亞烷基-nh2、c1-c6亞烷基-nh-ch3、c1-c6亞烷基-n-(ch3)2、c1-c6烯基或c1-c6亞烷基；r1為c1-c10烷基、(c1-c10烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c10烷基)nhc(o)nh2；r3和r2各自獨立為h、c1-c10烷基、芳基烷基或雜芳基烷基，或r3和r2可一起形成c3-c7環烷基；d為藥物部分。本發明還涉及由下式表示的非肽化合物：其中r6為c1-c10亞烷基。本發明還涉及由下式表示的非肽化合物：本發明還涉及所述非肽化合物中任一者，其中str具有下式：其中r6選自c1-c10亞烷基、c3-c8環烷基、o-(c1-c8亞烷基)和c1-c10亞烷基-c(o)n(ra)-c2-c6亞烷基，其中每個亞烷基可被選自以下的一至五個取代基取代：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基、羧酸基團、烷基硫基、c3-c8環烷基、c4-c7雜環烷基芳基、芳基烷基、雜芳基烷基和雜芳基；每個ra獨立為h或c1-c6烷基；sp為—ar—rb—，其中ar為芳基或雜芳基，rb為(c1-c10亞烷基)o-。本發明還涉及非肽化合物，其中r6為c1-c10亞烷基，sp為—ar—rb—，其中ar為芳基，rb為(c1-c6亞烷基)o-。本發明還涉及非肽化合物，其中r6為–(ch2)q，q為1-10。本發明還涉及非肽化合物，其中str具有下式：其中r7選自c1-c10亞烷基、c1-c10亞烷基-o、n(rc)-(c2-c6亞烷基)-n(rc)和n(rc)-(c2-c6亞烷基)；其中每個rc獨立為h或c1-c6烷基；sp為—ar—rb—，其中ar為芳基或雜芳基，rb為(c1-c10亞烷基)o-。本發明還涉及非肽化合物，其中r6為c1-c10亞烷基，sp為—ar—rb—，其中ar為芳基，rb為(c1-c6亞烷基)o-。本發明還涉及上述式(iv)、(iv)(a)、(iv)(b)、(v)、(v)(a)和(v)(b)的非肽化合物中任一者，其中d為具有下式的二聚體藥物部分：其中r11選自h、p(o)3h2、c(o)nraarbb或與l的鍵；r22選自h、p(o)3h2、c(o)nraarbb或與l的鍵；raa和rbb獨立地選自h和任選取代有一個或多個f的c1-c6烷基，或raa和rbb形成五或六元雜環烷基；t為連接基團，選自c3-c12亞烷基、y1、(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)、(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)、(c2-c6亞烯基)-y1-(c2-c6亞烯基)和(c2-c6亞炔基)-y1-(c2-c6亞炔基)；其中y1獨立選自o、s、nr11、芳基和雜芳基；其中亞烷基、亞烯基、芳基和雜芳基獨立且任選取代有f、oh、o(c1-c6烷基)、nh2、nhch3、n(ch3)2、nhc(o)(c1-c6亞烷基)m、op(o)3h2和c1-c6烷基，其中烷基任選取代有一個或多個f，m為0或1；或亞烷基、亞烯基、芳基和雜芳基獨立且任選取代有與l的鍵，其中所述與l的鍵可經一個任選的取代基連接；d'為選自以下的藥物部分：其中波浪線表示與t的連接位點；x1和x2獨立選自o和nr33，其中r33選自h、c(o)和任選取代有一個或多個f的c1-c6烷基，或x1和x2各自獨立地不存在；r44為h、co2r、c(o)或與l的鍵，其中r為c1-c6烷基或芐基；且r55為h或c1-c6烷基。本發明還涉及任一上述接頭藥物化合物，其中其中y1為苯基，其任選取代有f、oh、o(c1-c6烷基)、nh2、nhch3、n(ch3)2、nhc(o)(c1-c6亞烷基)m、op(o)3h2和c1-c6烷基，其中烷基任選取代有一個或多個f，m為0或1。本發明還涉及下式的化合物：其中，d為下式的藥物部分本發明還涉及下式的化合物：其中，d為下式的藥物部分x1不存在或為o；r11為c(o)n-哌嗪(ch3)或p(o)3h2。本發明還涉及下式的化合物：其中，r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r20為h或me。本發明還涉及式(i)(b((ld6)的化合物，其中r20為h，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)(b((ld6)的化合物，其中r20為me，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及下式的化合物：其中，r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；r20為h或me。本發明還涉及式(i)(b((ld7)的化合物，其中r20為h，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及式(i)(b((ld7)的化合物，其中r20為me，r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及下式的化合物：其中，r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2。本發明還涉及式(i)(b)(ld8)的化合物，其中r1為(ch2)4nh2。本發明還涉及下式的化合物：其中，r1為c1-c6烷基-nh2、(c1-c6烷基)nhc(nh)nh2或(c1-c6烷基)nhc(o)nh2；x1和x2各自獨立地不存在或為o；每個r11獨立為c(o)n-哌嗪(ch3)或p(o)3h2。本發明還涉及任一上述綴合物，其中d為選自以下的抗生素部分：克林霉素、新生霉素、瑞他莫林(retapamulin)、達托霉素、gsk-2140944、cg-400549、西他沙星、替考拉寧、三氯生、萘啶酮、雷得唑來、多柔比星、氨芐西林、萬古霉素、亞胺培南、多利培南、吉西他濱、達巴萬星和阿奇霉素。上述抗生素的殺菌和抑菌作用的機制包括但不限于：(i)抑制細胞壁、肽聚糖延伸(萬古霉素、替考拉寧、達巴萬星)；(ii)抑制細胞壁、青霉素結合蛋白交聯(亞胺培南、多利培南、氨芐西林)；(iii)細胞膜去極化(達托霉素)；(iv)干擾dna復制(吉西他濱)；(v)dna結合(多柔比星)；(vi)烯酰acp-還原酶fabi(cg-400549、三氯生、萘啶酮)；(vii)抑制核糖體蛋白合成，核糖體30s(克林霉素、瑞他莫林、雷得唑來)；和(viii)拓樸異構酶(topoiia)抑制劑(新生霉素、西他沙星、gsk-2140944)。在結構上，大部分抗生素可分為以下組：(i)氨基糖甙類；(ii)β-內酰胺類；(iii)大環內酯類/環狀肽；(iv)四環素類；(v)氟喹啉類/氟喹諾酮類；和(vi)噁唑烷酮類。參見shaw,k.andbarbachyn,m.(2011)ann.n.y.acad.sci.1241:48-70；sutcliffe,j.(2011)ann.n.y.acad.sci.1241:122-152。本發明還涉及本申請所述的任一上述抗體-藥物綴合物或抗體-抗生素綴合物，其中p為1。本發明還涉及本申請所述的任一上述抗體-藥物綴合物或抗體-抗生素綴合物，其中p為2。本發明還涉及本申請所述的任一上述抗體-藥物綴合物或抗體-抗生素綴合物，其中p為3。本發明還涉及本申請所述的任一上述抗體-藥物綴合物或抗體-抗生素綴合物，其中p為4。本發明提供新的抗菌療法，其旨在通過靶標逃避常規抗生素療法的菌群來防止抗生素逃脫。該新的抗菌療法使用抗體抗生素綴合物(aac)來實現，其中對于存在于金黃色葡萄球菌(s.aureus)(包括mrsa)上的細胞壁組分特異的抗體與有效的抗生素化學連接。該抗生素經一種可蛋白酶斷裂的肽接頭而連接至抗體，該接頭設計為經組織蛋白酶b(一種存在于大部分哺乳動物細胞類型中的溶酶體蛋白酶)斷裂(dubowchiketal(2002)bioconj.chem.13:855-869)。aac作為前藥起作用，其中抗生素處于失活狀態(由于抗體的大尺寸)直到接頭斷裂。由于天然感染中存在的相當大部分的金黃色葡萄球菌由宿主細胞(主要為嗜中性粒細胞和巨噬細胞)容納，在宿主中感染的過程中的某一點以及在宿主細胞內度過的時間為細菌提供了逃避抗生素活性的重大機會。本發明的aac被設計為在細菌被宿主細胞容納后結合金黃色葡萄球菌并在吞噬溶酶體內釋放抗生素。通過該機制，aac能夠將活性抗生素特定地集中于其中常規抗生素較差治療金黃色葡萄球菌的位點。盡管本發明不受具體作用機制限制或限定，aac經以下三種潛在機制改善抗生素活性：(1)aac將抗生素遞送至容納細菌的哺乳動物細胞內部，由此增強不良分散于其中隱蔽細菌的吞噬溶酶體內的抗生素的效能。(2)aac調理細菌由此增強游離細菌被吞噬細胞攝取，并且局部釋放抗生素以殺死細菌(當它們隱蔽在吞噬溶酶體中時)。(3)aac通過將抗生素與抗體連接而改善抗生素的體內半衰期(改善的藥代動力學)。aac的改善的藥代動力學能夠將充足的抗生素遞送至其中金黃色葡萄球菌集中的區域，同時限制需要系統給藥的抗生素的總劑量。該性質允許使用aac的長期療法以靶標持續感染，并且具有最低的抗生素副作用。本發明還涉及抗體-藥物綴合物，其為抗體-抗生素綴合物，其中抗體結合細菌且d為抗生素部分。本發明還涉及任一上述抗體-抗生素綴合物,其中d為選自以下的藥物：克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、達托霉素、gsk-2140944、cg-400549、西他沙星、替考拉寧、三氯生、萘啶酮、雷得唑來、多柔比星、氨芐西林、萬古霉素、亞胺培南、多利培南、吉西他濱、達巴萬星和阿奇霉素。本發明的另一方面為藥物組合物，其包含本發明的抗體-抗生素綴合物化合物。本發明的另一方面為治療細菌感染的方法，通過對患者給予治療有效量的本發明的抗體-抗生素綴合物化合物。在一個實施方案中，所述患者為人。在一個實施方案中，細菌感染為金黃色葡萄球菌感染。在一些實施方案中，患者已經診斷有金黃色葡萄球菌感染。在一些實施方案中，治療細菌感染包括減少細菌載量。在另一個實施方案中，治療方法還包括給予第二種治療劑。在另一個實施方案中，第二種治療劑為抗生素。在一個實施方案中，與本發明的抗體-抗生素綴合物化合物組合給予的第二種抗生素選自以下結構類別：(i)氨基糖甙類；(ii)β-內酰胺類；(iii)大環內酯類/環狀肽；(iv)四環素類；(v)氟喹啉類/氟喹諾酮類；和(vi)噁唑烷酮類。在一個實施方案中，與本發明的抗體-抗生素綴合物化合物組合給予的第二種抗生素選自利福霉素、克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、達托霉素、gsk-2140944、cg-400549、西他沙星、替考拉寧、三氯生、萘啶酮、雷得唑來、多柔比星、氨芐西林、萬古霉素、亞胺培南、多利培南、吉西他濱、達巴萬星和阿奇霉素。本發明的另一方面為制備本發明的抗體或抗體-抗生素綴合物化合物的方法。本發明的另一方面為治療細菌感染的試劑盒，其包含本發明的藥物組合物和使用說明。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合選自以下的一種或多種多肽：cll1bmpr1b；e16；steap1；0772p；mpf；napi2b；sema5b；pscahlg；etbr；msg783；steap2；trpm4；cripto；cd21；cd79b；fcrh2；her2；nca；mdp；il20rα；短縮素；ephb2r；aslg659；psca；geda；baff-r；cd22；cd79a；cxcr5；hla-dob；p2x5；cd72；ly64；fcrh1；irta2；tenb2；pmel17；tmeff1；gdnf-ra1；ly6e；tmem46；ly6g6d；lgr5；ret；ly6k；gpr19；gpr54；asphd1；酪氨酸酶；tmem118；gpr172a；muc16；和cd33。本發明還涉及治療有需要的人的疾病的方法，包括向所述人給予有效量的本發明的抗體-藥物綴合物。本發明還涉及藥物組合物，其包含本發明的化合物及其藥用載體。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合選自以下的一種或多種多肽：cll1；steap1；napi2b；steap2；trpm4；cripto；cd21；cd79b；fcrh2；her2；cd22；cd79a；cd72；ly64；ly6e；muc16；和cd33。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd33。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd22。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合napi2b。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cll1。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合her2。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd33且抗-cd33抗體包括：包含氨基酸序列seqidno:11的hvr-l1，包含氨基酸序列seqidno:12的hvr-l2，包含氨基酸序列seqidno:13的hvr-l3，包含氨基酸序列seqidno:14的hvr-h1，包含氨基酸序列seqidno:15的hvr-h2，以及包含氨基酸序列seqidno:16的hvr-h3。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd33且所述抗cd33抗體包括：包含氨基酸序列seqidno:17的vl域和包含氨基酸序列seqidno:18的vh域。在一些實施方案中，所述抗體-藥物綴合物的抗體結合cd33。在一些實施方案中，所述抗體-藥物綴合物的抗體包括(a)包含氨基酸序列seqidno:22的hvr-h1；(b)包含氨基酸序列seqidno:23的hvr-h2；(c)包含氨基酸序列seqidno:24的hvr-h3；(d)包含氨基酸序列seqidno:19的hvr-l1；(e)包含氨基酸序列seqidno:20的hvr-l2；以及(f)包含選自seqidno:21的氨基酸序列的hvr-l3。在一些實施方案中，所述抗體包含如以上提供的任意實施方案中的vh域，以及如以上提供的任意實施方案中的vl域。在一個實施方案中，所述抗體分別包含seqidno:25和seqidno:26的vl和vh序列，包括那些序列的翻譯后修飾。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合napi2b。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中所述抗體結合napi2b且所述napi2b抗體包括：包含氨基酸序列seqidno:1的hvr-l1，包含氨基酸序列seqidno:2的hvr-l2，包含氨基酸序列seqidno:3的hvr-l3，包含氨基酸序列seqidno:4的hvr-h1，包含氨基酸序列seqidno:5的hvr-h2，以及包含氨基酸序列seqidno:6的hvr-h3。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合napi2b且所述napi2b抗體包括：包含氨基酸序列seqidno:7的vl域和包含氨基酸序列seqidno:8的vh域。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合napi2b且所述napi2b抗體包含氨基酸序列seqidno:9和氨基酸序列seqidno:10。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd22。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd22且所述cd22抗體包括：包含氨基酸序列seqidno:41的hvr-l1，包含氨基酸序列seqidno:42的hvr-l2，包含氨基酸序列seqidno:43的hvr-l3，包含氨基酸序列seqidno:44的hvr-h1，包含氨基酸序列seqidno:45的hvr-h2，以及包含氨基酸序列seqidno:46的hvr-h3。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd22且所述cd22抗體包括：包含氨基酸序列seqidno:47的vl域和包含氨基酸序列seqidno:48的vh域。本發明還涉及任一上述抗體-藥物綴合物，其中抗體結合cd22且所述cd22抗體包含氨基酸序列seqidno:49和氨基酸序列seqidno:50。定義除非另有說明，否則如本申請所使用的下列術語和短語意欲具有如下含義：當本申請中使用商品名時，申請人意欲獨立地包括商品名產品制劑、通用藥和所述商品名產品的活性藥物成分。如本申請所使用的術語“肽模擬”或pm是指非肽化學部分。肽類是通過肽(酰胺)鍵連接的氨基酸單體的短鏈，當一個氨基酸的羧基與另一氨基酸的氨基反應時形成所述共價化學鍵。最短的肽類是二肽，其組成為通過單一肽鍵連接的2個氨基酸，然后是三肽、四肽等。肽模擬化學部分包含非氨基酸化學部分。肽模擬化學部分還可包含被一個或多個非氨基酸化學單元分隔的一個或多個氨基酸。肽模擬化學部分在其任意化學結構部分中不含有通過肽鍵連接的兩個或多個鄰近氨基酸。如本申請所使用的術語“氨基酸”是指甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或瓜氨酸。術語“抗生素”(abx或abx)包括特異性抑制微生物諸如細菌的生長或將其殺死的任何分子，但其在所給予的濃度和給藥間隔對宿主是非致命性的。在具體方面，抗生素在所給予的濃度和給藥間隔對宿主是無毒性的。對細菌有效的抗生素可廣泛分類為殺菌的(即直接殺死)或抑菌的(即防止分裂)。抗菌抗生素可進一步細分類為窄譜或廣譜。廣譜抗生素針對寬范圍的細菌有效，包括革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌，這與窄譜抗生素不同，后者僅針對較小范圍細菌或特定細菌家族有效。抗生素的實例包括：(i)氨基糖甙類，例如阿米卡星、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、鏈霉素、妥布霉素、巴龍霉素；(ii)安沙霉素類，例如格爾德霉素、除莠霉素；(iii)碳頭孢烯類，例如氯碳頭孢；(iv)碳青霉烯類，例如厄他培南、多利培南、亞胺培南/西司他丁、美羅培南；(v)頭孢菌素類(第一代)，例如頭孢羥氨芐、頭孢唑林、頭孢噻吩、頭孢氨芐；(vi)頭孢菌素類(第二代)，例如頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢西丁、頭孢丙烯、頭孢呋辛、(vi)頭孢菌素類(第三代)，例如頭孢克肟、頭孢地尼、頭孢托侖、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢布烯、頭孢唑肟、頭孢曲松；(vii)頭孢菌素類(第四代)，例如頭孢吡肟；(viii)頭孢菌素類(第五代)，例如頭孢托羅；(ix)糖肽類，例如替考拉寧、萬古霉素；(x)大環內酯類，例如阿奇霉素、克拉霉素、地紅霉素、紅霉素、羅紅霉素、醋竹桃霉素、泰利霉素、大觀霉素；(xi)單環β-內酰胺類，例如氨曲南；(xii)青霉素類，例如阿莫西林、氨芐西林、axlocillin、羧芐西林、氯唑西林、雙氯西林、氟氯西林、美洛西林、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、盤尼西林、哌拉西林、替卡西林；(xiii)抗生素多肽類，例如桿菌肽、粘菌素、多粘菌素b；(xiv)喹諾酮類，例如環丙沙星、依諾沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星；(xv)磺酰胺類，例如磺胺米隆、偶氮磺胺、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、磺胺、柳氮磺吡啶、磺胺異噁唑、甲氧芐啶、甲氧芐啶-磺胺甲噁唑(tmp-smx)；(xvi)四環素類，例如地美環素、多西環素、米諾環素、土霉素、四環素；以及(xvii)其他抗生素，諸如胂凡納明、氯霉素、克林霉素、林可霉素、乙胺丁醇、磷霉素、夫西地酸、呋喃唑酮、異煙肼、利奈唑胺、甲硝唑、莫匹羅星、呋喃妥因、平板霉素、吡嗪酰胺、奎奴普丁/達福普汀、利福平(rifampin/rifampicin)或替硝唑。術語“甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌”(mrsa)，或者已知為多藥耐藥金黃色葡萄球菌或苯唑西林耐藥金黃色葡萄球菌(orsa)，是指對β-內酰胺抗生素抵抗的金黃色葡萄球菌的任何菌株，所述抗生素包括青霉素類(例如甲氧西林、雙氯西林、萘夫西林、苯唑西林等)以及頭孢菌素類。“甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌”(mssa)是指對β-內酰胺抗生素敏感的金黃色葡萄球菌的任何菌株。本申請中的術語“抗體”以其最廣泛的含義使用并且具體涵蓋單克隆抗體、多克隆抗體、二聚體、多聚體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們表現出所需的生物活性(milleretal(2003)jour.ofimmunology170:4854-4861)。抗體可以為鼠、人、人源化、嵌合的抗體或來源于其它物種的抗體。抗體為由能夠識別和結合特異性抗原的免疫系統產生的蛋白(janeway,c.,travers,p.,walport,m.,shlomchik(2001)immunobiology,5thed.,garlandpublishing,newyork)。靶標抗原一般具有由多種抗體上的cdr識別的大量結合位點，也稱作表位。特異性結合不同表位的各抗體具有不同的結構。因此，一種抗原可以具有一種以上相應的抗體。抗體包括全長免疫球蛋白分子或全長免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即包含免疫特異性結合所關注靶標的抗原或其部分的抗原結合位點的分子，所述靶標包括但不限于癌細胞或產生與自身免疫疾病相關的自身免疫抗體的細胞。本申請公開的免疫球蛋白可以具有任意類型(例如igg、ige、igm、igd和iga)、類別(例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亞類的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白可來源于任意物種。然而，在一個方面中，免疫球蛋白來源于人、鼠或兔。如本申請所使用的術語"抗體片段"包含全長抗體的一部分，一般為其抗原結合區或可變區。抗體片段的實例包括fab、fab'、f(ab')2和fv片段；雙抗體；線性抗體；微抗體(minibody)(olafsenetal(2004)proteineng.design&sel.17(4):315-323)；fab表達文庫制備的片段；抗-個體基因型(抗-id)抗體；cdr(互補決定區)；和以免疫特異性方式結合癌細胞抗原、病毒抗原或微生物抗原的以上任意的表位-結合片段；單-鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。如本申請所使用的術語“單克隆抗體”指從基本上同質的抗體群中獲得的抗體，即除可能少量存在的天然發生的可能突變之外，包含在該群體中的各抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異的，靶向單個抗原位點。此外，與包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制品不同的是，每種單克隆抗體只針對抗原上的單一決定簇。除其特異性外，單克隆抗體的優點還在于它們可以以不被其它抗體污染的方式合成。修飾語“單克隆”表示獲自基本上同質的抗體群的抗體特性，并非解釋為需要由任何特定方法產生抗體。例如，可以通過首先由kohler等(1975)nature，256:495描述的雜交瘤方法制備用于本發明的單克隆抗體或可以通過重組dna方法制備(例如參見：us4816567；us5807715)。例如，還可以使用clackson等(1991)nature，352:624-628；marks等(1991)j.mol.biol.，222:581-597中所述的技術從噬菌體抗體文庫分離單克隆抗體。本申請的單克隆抗體具體地包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬于特定抗體類型或亞型的抗體中的相應序列相同或同源，而所述鏈的剩余部分與來源于另一物種或屬于另一抗體類型或亞型的抗體中的相應序列相同或同源，本申請中還包括所述抗體的片段，只要它們顯示出期望的生物學活性(us4816567；和morrison等(1984)proc.natl.acad.sci.usa，81:6851-6855)。本申請關注的嵌合抗體包括“靈長化(primatized)”抗體，其包含來源于非人的靈長類(例如舊大陸猴、猿等)的可變區抗原結合序列和人恒定區序列。如本申請所使用的術語“完整抗體”為包含vl和vh結構域以及輕鏈恒定域(cl)和重鏈恒定域ch1、ch2和ch3的抗體。恒定域可以為天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列變體。完整抗體可以具有一種或多種“效應子作用”，意指歸因于抗體的fc恒定區(天然序列fc區或氨基酸序列變體fc區)的那些生物活性。抗體效應子作用的實例包括c1q結合；補體依賴性細胞毒性；fc受體結合；抗體-依賴性細胞介導的細胞毒作用(adcc)；胞吞作用；和細胞表面受體諸如b細胞受體和bcr的下調。如本申請所使用的術語“fc區”是指包含至少一部分恒定區的免疫球蛋白重鏈的c末端區。所述術語包含天然序列fc區和變體fc區。在一個實施方案中，人igg重鏈fc區從cys226或從pro230延伸至重鏈的羧基端。然而，所述fc區的c末端賴氨酸(lys447)可存在或不存在。除非在本申請中另有規定，否則fc區或恒定區中的氨基酸殘基編號是根據eu編號系統，也稱作eu索引，如在kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md,1991中所述。如本申請所使用的術語“框架”或“fr”是指除高變區(hvr)殘基外的可變域殘基。可變域的fr通常由四個fr域組成：fr1、fr2、fr3和fr4。因此，hvr和fr序列通常出現在以下vh(或vl)的序列中：fr1-h1(l1)-fr2-h2(l2)-fr3-h3(l3)-fr4。取決于其重鏈恒定域的氨基酸序列，可以將完整抗體指定為不同“類別”。存在5種主要類別的完整免疫球蛋白抗體：iga、igd、ige、igg和igm，且可以將其中的幾種進一步分成“亞類”(亞型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。對應于不同抗體類別的重鏈恒定域分別稱作α、δ、ε、γ和μ。不同類別免疫球蛋白的亞單位結構和三維構型是眾所周知的。ig型包括鉸鏈-修飾型或無鉸鏈型(rouxetal(1998)j.immunol.161:4083-4090；lundetal(2000)eur.j.biochem.267:7246-7256；us2005/0048572；us2004/0229310)。如本申請所使用的術語“人抗體”是指具有以下氨基酸序列的抗體，所述氨基酸序列對應于通過人或人細胞產生的或來源于利用人抗體庫或其它人抗體編碼序列的非人來源的抗體的氨基酸序列。人抗體的該定義特別排除了包含非人抗原結合殘基的人源化抗體。如本申請所使用的術語“人共有框架”是指在選擇人免疫球蛋白vl或vh框架序列中代表最常見氨基酸殘基的框架。通常，人免疫球蛋白vl或vh序列的選擇是來自可變域序列的亞組。通常，所述序列亞組是如kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,fifthedition,nihpublication91-3242,bethesdamd(1991),vols.1-3中的亞組。在一個實施方案中，對于vl，所述亞組是如以上kabat等中的亞組kappai。在一個實施方案中，對于vh，所述亞組是如以上kabat等中的亞組iii。如本申請所述使用的術語“人源化抗體”是指包含來自非人hvr的氨基酸殘基以及來自人fr的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施方案中，人源化抗體將包含實質上所有的至少一種、以及典型兩種的可變區，其中所有或實質上所有的hvr(例如，cdr)對應于非人抗體的那些，且所有或實質上所有的fr對應于人抗體的那些。人源化抗體任選可包含至少一部分的來源于人抗體的抗體恒定區。抗體的“人源化形式”，例如非人抗體，是指已進行人源化的抗體。如本申請所使用的術語“高變區”或“hvr”是指序列高度可變和/或形成結構定義環(“高度可變環”)的抗體可變域的各區域。通常，天然四鏈抗體包含6個hvr；三個在vh(h1、h2、h3)，三個在vl(l1、l2、l3)。hvr通常包含來自高度可變環和/或來自“互補決定區”(cdr)的氨基酸殘基，后者具有最高序列可變性和/或涉及抗體識別。示例性高度可變環出現在氨基酸殘基26-32(l1)、50-52(l2)、91-96(l3)、26-32(h1)、53-55(h2)和96-101(h3)處(chothiaandlesk,j.mol.biol.196:901-917(1987))。示例性cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)出現在以下氨基酸殘基處：l1的24-34、l2的50-56、l3的89-97、h1的31-35b、h2的50-65以及h3的95-102(kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md(1991))。除了vh中的cdr1外，cdr通常包含形成高度可變環的氨基酸殘基。cdr還包括“特異性決定殘基”或“sdr”，其為接觸抗原的殘基。sdr包含在cdr稱作縮寫-cdr或a-cdr的區域內。示例性a-cdr(a-cdr-l1、a-cdr-l2、a-cdr-l3、a-cdr-h1、a-cdr-h2和a-cdr-h3)出現在以下氨基酸殘基處：l1的31-34、l2的50-55、l3的89-96、h1的31-35b、h2的50-58以及h3的95-102(參見almagroandfransson,front.biosci.13:1619-1633(2008))。除非另外指明，否則可變域中的hvr殘基和其它殘基(例如，fr殘基)在本申請中的編號是根據以上kabat等。如本申請所使用的術語“可變區”或“可變域”是指涉及將抗體結合至抗原的抗體重鏈或輕鏈域。天然抗體的重鏈和輕鏈可變域(分別為vh和vl)通常具有相似結構，各域包含四個保守框架區(fr)和三個高變區(hvr)(參見例如kindtetal.kubyimmunology,6thed.,w.h.freemanandco.,page91(2007))。單個vh或vl域可足以賦予抗原結合特異性。此外，可使用來自結合抗原的抗體的vh或vl域來分離結合特定抗原的抗體，從而分別篩選互補vl或vh域的文庫。參見例如，portolanoetal.,j.immunol.150:880-887(1993)；clarksonetal.,nature352:624-628(1991)。如本申請所使用的術語“載體(vector)”是指能將另一核酸遞送至其連接部位的核酸分子。所述術語包括作為自我復制核酸結構的載體以及并入已將其引入的宿主細胞基因組中的載體。某些載體能夠指引核酸表達至其有效連接部位。此類載體在本申請中稱作“表達載體”。如本申請所使用的術語“游離半胱氨酸”是指已經改造到親本抗體中、帶有巰基官能團(-sh)并且未作為分子內或分子間二硫鍵配對的半胱氨酸殘基。如本申請所使用的術語“接頭(linker)”、“接頭單元”或“連接”是指包含使藥物部分共價連接至抗體的原子鏈的化學部分。在各個實施方案中，接頭為二價基團，指定為l。如本申請所使用的術語“藥物部分”是指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞死亡或破壞的物質。細胞毒性試劑包括但不限于放射性同位素(例如at211、i131、i125、y90、re186、re188、sm153、bi212、p32、pb212和lu的放射性)；化療劑或藥物(例如，甲氨蝶呤、阿霉素、長春堿類(長春新堿、長春花堿、依托泊苷)、多柔比星、美法侖、絲裂霉素c、苯丁酸氮芥、柔紅霉素或其它嵌入劑)；生長抑制劑；酶及其片段例如溶核酶；以及以下公開的各種抗腫瘤或抗癌試劑。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“酰基”是指基團-c(o)r’，其中r’是烷基、c3-c6環烷基或雜環基，其各自如本申請所定義。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“烷氧基”是指基團-or’，其中r’是如上定義的c1-c4烷基或c3-c6環烷基。“烷氧基”的實例包括甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、異丁氧基、環丙氧基和環丁氧基，以及其鹵代形式，例如氟甲氧基和二氟甲氧基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“烷基”是指具有1-12個(c1-c12)碳原子的直鏈或支鏈、單價或二價烴鏈基團，其可為未取代的或被多個取代度取代，例如包含在本發明內的一、二、三、四、五或六取代。取代基的實例選自：鹵素、三氟甲基、二氟甲基、氨基、烷基氨基、氰基、磺酰基、磺酰胺基團、亞砜基團、羥基、烷氧基、酯基、羧酸和烷基硫基。如本申請所使用的“烷基”的實例包括但不限于甲基(me，-ch3)、乙基(et、-ch2ch3)、1-丙基(n-pr、正丙基、-ch2ch2ch3)、2-丙基(i-pr、異丙基、-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu、正丁基、-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu、異丁基、-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu、仲丁基、-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu、叔丁基、-c(ch3)3)、1-戊基(正戊基、-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3，以及其二價(“亞烷基”)和取代形式。取代烷基的實例包括但不限于羥基甲基、二氟甲基和三氟甲基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“烯基”是指2-8個碳原子間任意長度(c2-c10)的具有至少一個不飽和位點(即，碳-碳sp2雙鍵)的直鏈或支鏈、單價或二價烴鏈基團，其中所述烯基可任選地被一個或多個在以上“烷基”定義中所述的取代基所獨立取代，并包括具有“順式”和“反式”定向或替代的“e”和“z”定向的基團。烯基的實例包括但不限于乙烯基(-ch＝ch2)、丙-1-烯基(-ch＝chch3)、丙-2-烯基(-ch2ch＝ch2)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基、己-1,3-二烯基以及其二價(“亞烯基”)和取代形式。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“炔基”是指2-8個碳原子間任意長度(c2-c10)的具有至少一個不飽和位點(即，碳-碳sp三鍵)的直鏈或支鏈、單價或二價烴鏈基團，其中所述炔基可任選地被一個或多個在以上烷基定義中所述的取代基所獨立取代，炔基的實例包括但不限于乙炔基(-c≡ch)、丙-1-炔基(-c≡cch3)、丙-2-炔基(炔丙基，-ch2c≡ch)、丁-1-炔基、丁-2-炔基和丁-3-炔基，以及其二價(“亞炔基”)和取代形式。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“烷基氨基”是指基團-nr’r”，其中r’是h、c1-c6烷基或c3-c6環烷基，且r”是c1-c6烷基或c3-c6環烷基，烷基氨基的實例包括但不限于甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、丙基氨基和環丙基氨基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“酰胺基團”是指基團-c(o)nr’r”，其中r’和r”各自獨立為h、c1-c6烷基或c3-c6環烷基；酰胺的實例包括但不限于-c(o)nh2、-c(o)nhch3和-c(o)n(ch3)2。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“芳基”是指芳族烴環系。所述環系可為單環或稠合多環的(例如，二環、三環等)，經取代或未取代的。在各種實施方案中，單環芳基環是c5-c10或c5-c7或c5-c6，其中這些碳數是指形成環系的碳原子數目。c6環系，即苯環，是一種芳基基團。在各種實施方案中，多環環是二環芳基基團，其中二環芳基基團的實例是c8-c12或c9-c10。具有10個碳原子的萘環是一種多環芳基基團。芳基取代基的實例在以下“任選取代的”的定義中描述。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“氰基”是指基團-cn。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的“環烷基”是指非芳族的、經取代或未取代的、飽和或部分飽和的烴環基團。取代基的實例在“任選取代的”的定義中描述。在一個實例中，環烷基基團具有3-12個碳原子(c3-c12)。在其它實例中，環烷基是c3-c8、c3-c10、c5-c10。在其它實例中，作為單環的環烷基是c3-c8、c3-c6或c5-c6。在另一實例中，作為雙環的環烷基是c7-c12。在另一實例中，作為螺系的環烷基是c5-c12。單環環烷基的實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、全氘環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一基和環十二基。具有7-12個環原子的二環環烷基的示例性排列包括但不限于[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]環系。示例性橋接二環環烷基包括但不限于二環[2.2.1]庚烷、二環[2.2.2]辛烷和二環[3.2.2]壬烷。螺環烷基的實例包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷和螺[4.5]癸烷。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“酯基”是指基團-c(o)or’，其中r’是c1-c6烷基或c3-c6環烷基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“雜環”、“雜環烷基”或“雜環基”是指包含2-12個環碳原子和1-3個環雜原子的未取代或經取代的單環或多環非芳族環系。多環環系可為稠合二或三環、螺環或橋環。雜原子的實例包括n、o和s，包括n-氧化物、硫氧化物和二氧化物。在一個實施方案中，所述環是3-8元環并且為完全飽和或具有一個或多個不飽和度。多取代度包含在本發明定義內。取代基的實例在下定義。“雜環”基團的實例包括但不限于四氫呋喃基、吡喃基、1,4-二氧雜環己基、1,3-二氧雜環己基、氧雜環戊烷基、氧雜環丁烷基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚-6-基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、氮雜環丁烷基、哌嗪基、吡咯烷酮基、哌嗪酮基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基，以及它們的各種互變異構體。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“雜芳基”是指包含1-9個碳和至少一個雜原子的芳香環系。雜原子的實例包括n、o和s。雜芳基可為單環或多環的、經取代或未取代的。單環雜芳基在環中可具有2-6個環碳原子和1-3個環雜原子，而多環雜芳基可包含3-9個環碳原子和1-5個環雜原子。多環雜芳基環可包含稠合環、螺環或橋環連接，例如，二環雜芳基是一種多環雜芳基。二環雜芳基環可包含8-12元原子。單環雜芳基環可包含5-8元原子(碳和雜原子)。示例性雜芳基包括但不限于：苯并呋喃基、苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、氮雜吲哚基、氮雜苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基、四嗪基、四唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、三嗪基、三唑基、噻唑基和噻吩基。雜芳基取代基的實例在以下“任選取代的”的定義中描述。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“雜芳基烷基”是指基團(雜芳基)c1-c3烷基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“芳基烷基”是指基團(芳基)c1-c3烷基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“脲”是指基團-nr’c(o)nr”，其中r’和r”各自獨立為h、c1-c6烷基或c3-c6環烷基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“任選地”是指隨后描述的一種或多種事件可發生或不發生，且同時包括發生的事件和不發生的事件。除非另有定義，否則如本申請所使用的短語“任選取代的”、“取代的”或其變體表示用一個或多個取代基任選取代，包括多取代度，例如一、二或三取代。所述短語不應被解釋重復本申請描述且描繪的取代。示例性的任選的取代基包括酰基、c1-c6烷基、磺酰基、氨基、磺酰胺基團、亞砜基團、烷氧基、氰基、鹵素、脲、酯基、羧酸基團、酰胺基團、羥基、氧代和硝基。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“治療”是指緩解指定病癥、消除或減少病癥的一種或多種癥狀、減緩或消除病癥的進展。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語"有效量"是指被例如研究者或臨床醫生所尋找的將引起組織、系統、動物或人的生物或醫學反應的藥物或藥劑的量。除非在權利要求中另有定義，否則如本申請所使用的術語“治療有效量”是指相比于未接受此量的相應受試者，導致疾病、病癥或副作用的治療，或者導致疾病或病癥的進展速率減小的任意量。所述術語在其范圍內還包括有效增強正常生理功能的量。對于治療中使用而言，治療有效量的式i化合物以及其鹽可作為化學原料給藥。此外，活性成分可呈現為藥物組合物。本發明還涉及實驗部分中的任一實施例。如本申請所使用的短語“藥用鹽”是指抗體-藥物綴合物(adc)或接頭-藥物部分的藥用有機或無機鹽。示例性的鹽包括但不限于硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(即1,1’-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。藥用鹽可能牽涉包含另一種分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其它抗衡離子。抗衡離子可以是穩定母體化合物電荷的任何有機或無機部分。另外，藥用鹽可以在其結構中具有超過一種荷電原子。在多種荷電原子作為藥用鹽的組成部分的情況中，可以具有多種抗衡離子。因此，藥用鹽可具有一種或多種荷電原子和/或一種或多種抗衡離子。非藥用的其它鹽可用于制備本發明化合物，且應考慮這些構成本發明的另一方面。這些鹽諸如草酸鹽和三氟乙酸鹽，雖然它們自身不是藥用的，但可用于制備用作獲得本發明化合物及其藥用鹽的中間體的鹽。本發明化合物可以以固體或液體形式存在。在固態中，其可以結晶或非結晶形式或其混合物存在。技術人員將會理解可形成藥用溶劑化物以用于結晶或非結晶化合物。在結晶溶劑化物中，溶劑分子在結晶期間摻入晶體晶格。溶劑化物可涉及非水性溶劑，其例如但不限于乙醇、異丙醇、dmso、乙酸、乙醇胺或乙酸乙酯，或者它們可涉及水作為摻入晶體晶格中的溶劑。其中水為摻入晶體晶格中的溶劑的溶劑化物典型稱作"水合物"。水合物包括化學計量的水合物以及包含可變量水的組成。本發明包括所有所述溶劑化物。技術人員將會進一步理解，以結晶形式存在的本發明某些化合物，包括其各種溶劑化物，可呈現多晶型現象(即出現不同結晶結構的能力)。這些不同晶形典型稱作"多晶型"。本發明包括所有所述多晶型。多晶型具有相同化學組成，但在填裝、幾何排布和結晶固態的其它描述屬性上不同。因此，多晶型可具有不同物理性質，例如形狀、密度、硬度、可變形性、穩定性和溶出性能。多晶型典型呈現出不同熔點、ir譜和x射線粉末衍射圖，其可用于鑒定。技術人員將會理解不同多晶型的產生可通過例如改變或調整化合物制備中所使用的反應條件或試劑。例如，溫度、壓力或溶劑的改變可能導致多晶型。此外，一種多晶型在特定條件下可自發轉化為另一多晶型。本發明化合物或其鹽可以立體異構形式存在(例如，其包含一個或多個不對稱碳原子)。單獨的立體異構體(對映異構體和非對映異構體)以及這些的混合物包括在本發明的范圍內。同樣地，應理解式(i)化合物或鹽可以以不同于式中所示的互變異構形式存在，且這些也包括在本發明的范圍內。應理解本發明包括上文所定義的具體群組的所有組合和子集。本發明的范圍包括立體異構體混合物以及純化對映異構體或者對映異構/非對映異構富集的混合物。應理解本發明包括上文所定義的具體群組的所有組合和子集。本發明主題還包括本發明化合物的同位素標記形式，但存在以下事實：一個或多個原子被具有不同于自然界中通常發現的原子質量或質量數的原子質量或質量數的原子所替代。可摻入本發明化合物及其藥用鹽中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，例如2h、3h、11c、13c、14c、15n、17o、18o、31p、32p、35s、18f、36cl、123i和125i。包含前述同位素和/或其它原子的其它同位素的本發明化合物以及所述化合物的藥用鹽在本發明的范圍內。同位素標記的本發明化合物，例如摻入放射性同位素如3h、14c的那些，用于藥物和/或底物組織分布測定中。氘化(即3h)和碳-14(即14c)同位素因其易于制備和可檢測性而通常使用。11c和18f同位素用于pet(正電子成像術)，且125i同位素用于spect(單光子發射計算機化斷層顯像)，其均用于腦成像。另外，用較重的同位素如氘(即2h)取代，可獲得由更高的代謝穩定性引起的某些治療益處，例如增加的體內半衰期或減少的劑量需求，且因此可在某些情況下優選。本發明式i及跟隨的同位素標記化合物通常可以通過進行以下方案和/或實施例中公開的步驟，通過用易于獲得的同位素標記試劑替代非同位素標記試劑而制備。adc的藥物組合物本發明的治療性抗體-藥物綴合物(adc)通常與藥用腸胃外媒介物一起且以單位劑量可注射形式配制成藥物制劑以供腸胃外給藥，即推注(bolus)、靜脈內注射、腫瘤內注射。任選將具有所需純度的抗體-藥物綴合物(adc)與藥用稀釋劑、載體、賦形劑或穩定劑混合(remington'spharmaceuticalsciences(1980)第16版，osol,a.編)，其為凍干制劑或水溶液形式。半胱氨酸改造的抗體本發明化合物包括包含半胱氨酸改造的抗體的抗體-藥物綴合物，其中野生型或親代抗體中的一個或多個氨基酸被半胱氨酸氨基酸替代。由此可以改造任意形式的抗體，即，使其突變。例如，可以將親代fab抗體片段改造成半胱氨酸改造的fab，在本申請中稱作“thiofab”。類似地，可以將親代單克隆抗體改造成“thiomab”。應注意單一位點突變在thiofab中產生單一改造的半胱氨酸殘基，而單一位點突變在thiomab中產生兩個改造的半胱氨酸殘基，這是由于igg抗體的二聚化特性所致。評價被半胱氨酸(cys)殘基替代的(“改造的”)突變體的新引入的改造的半胱氨酸巰基的反應性。巰基反應值為0-1.0范圍內的相對數值范圍并且可以測定任意半胱氨酸改造的抗體的該值。本發明半胱氨酸改造的抗體的巰基反應值在0.6-1.0；0.7-1.0；或0.8-1.0的范圍內。為了通過誘變來制備半胱氨酸改造抗體，可通過本領域中已知的多種方法制備編碼起始多肽的氨基酸序列變體的dna。這些方法包括但不限于通過位點-定向(或寡核苷酸介導的)誘變、pcr誘變和對編碼所述多肽的較早制備的dna的盒式誘變制備。還可以通過限制片段操作或通過使用合成寡核苷酸的重疊延伸pcr構建重組抗體的變體。誘變引物編碼半胱氨酸密碼子替代物。標準誘變技術可以用于產生編碼所述突變的半胱氨酸改造的抗體的dna。一般指導原則可以在下列文獻中找到：sambrooketalmolecularcloning,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,1989；和ausubeletalcurrentprotocolsinmolecularbiology,greenepublishingandwiley-interscience,newyork,n.y.,1993。半胱氨酸氨基酸可在抗體的反應位點進行改造，且其不形成鏈內或分子間的二硫鍵(junutula,etal.,2008bnaturebiotech.,26(8):925-932；dornanetal(2009)blood114(13):2721-2729；us7521541；us7723485；wo2009/052249,shenetal(2012)naturebiotech.,30(2):184-191；junutulaetal(2008)jourofimmun.methods332:41-52)。經改造的半胱氨酸巰基可與具有巰基-反應性親電子基團如馬來酰亞胺或α-鹵代酰胺的本發明接頭試劑或接頭-藥物中間體反應以形成具有半胱氨酸改造的抗體(thiomabs)和藥物(d)部分的adc。因此藥物部分的定位可被設計、控制并知曉。藥物載量(drugloading)可被控制，這是由于經改造的半胱氨酸巰基典型地與巰基-反應性接頭試劑或接頭-藥物中間體以高收率反應。通過在重鏈或輕鏈的單一位點的取代來改造抗體以引入半胱氨酸氨基酸得到在對稱抗體上的兩個新的半胱氨酸。可實現接近2的藥物載量且結合產物adc的接近同質性也可實現。本發明半胱氨酸改造的抗體優選保持其野生型、親代抗體對應物的抗原結合能力。因此，半胱氨酸改造的抗體能夠結合，優選特異性結合抗原。所述抗原包括：例如腫瘤-相關抗原(taa)、細胞表面受體蛋白和其它細胞表面分子、跨膜蛋白、信號傳導蛋白、細胞存活調節因子、細胞增殖調節因子、與組織發育或分化相關(例如，已知或懷疑在功能上相關)的分子、淋巴因子、細胞因子、涉及細胞周期調節的分子、涉及血管生成的分子和與血管生成相關(例如，已知或懷疑在功能上相關)的分子。腫瘤-相關抗原可以為分化簇因子(即cd蛋白)。能夠結合半胱氨酸改造的抗體的抗原可以為上述類型之一的亞組中的成員，其中所述類型中另一亞組包含具有不同特性的其它分子/抗原(就所關注的抗原而言)。制備半胱氨酸改造的抗體，其用于通過鏈內二硫基的還原和再氧化與接頭-藥物中間體結合。腫瘤相關抗原：抗體，包括但不限于可用于治療癌癥的本發明抗體-藥物綴合物中的半胱氨酸改造的抗體，其包括但不限于針對細胞表面受體和腫瘤相關抗原(taa)。某些腫瘤相關抗原是本領域中已知的并可制備它們以用于使用本領域眾所周知的方法和信息生產抗體。在發現用于癌癥診斷和療法的有效細胞靶標的嘗試中，研究人員尋求鑒定與一種或多種正常非癌細胞相比在一種或多種特定類型的癌細胞表面上特異性表達的跨膜多肽或另外的腫瘤相關多肽。與非癌細胞相比，通常所述腫瘤相關多肽更大量地在癌細胞表面上表達。對所述腫瘤相關細胞表面抗原多肽的鑒定已經使人們能夠更特異性地靶向癌細胞，通過基于抗體的療法對其進行破壞。腫瘤相關抗原taa的實例包括但不限于以下所列的那些。為方便起見，均為本領域已知的有關這些抗原的信息在以下列出，并且按照美國國家生物技術信息中心(ncbi)的核酸和蛋白質序列鑒定規定，包括名稱、別名、genbank登記號和主要參考文獻。對應于下列taa的核酸和蛋白質序列可以在公共數據庫如genbank中獲得。由抗體靶向的腫瘤相關抗原包括所有氨基酸序列變體和同工型，它們與引述的參考文獻中鑒定的序列相比具有至少約70％、80％、85％、90％或95％序列同一性，和/或表現出基本上與具有引述參考文獻中發現的序列的taa相同的生物特性或特征。例如，具有變體序列的taa通常能夠采用所列相應序列特異性結合與所述taa特異性結合的抗體。特別將本申請特別引述的參考文獻中的序列和公開內容引入作為參考。(1)bmpr1b(骨形成蛋白受體-ib型,genbank登記號nm_001203)tendijke,p.,etalscience264(5155):101-104(1994),oncogene14(11):1377-1382(1997))；wo2004063362(權利要求2)；wo2003042661(權利要求12)；us2003134790-a1(38-39頁)；wo2002102235(權利要求13；296頁)；wo2003055443(91-92頁)；wo200299122(實施例2；528-530頁)；wo2003029421(權利要求6)；wo2003024392(權利要求2；圖112)；wo200298358(權利要求1；183頁)；wo200254940(100-101頁)；wo200259377(349-350頁)；wo200230268(權利要求27；376頁)；wo200148204(實施例；圖4)np_001194骨形成蛋白受體,ib型/pid＝np_001194.1-交叉參考：mim:603248；np_001194.1；ay065994(2)e16(lat1,slc7a5,genbank登記號nm_003486)biochem.biophys.res.commun.255(2),283-288(1999),nature395(6699):288-291(1998),gaugitsch,h.w.,etal(1992)j.biol.chem.267(16):11267-11273)；wo2004048938(實施例2)；wo2004032842(實施例iv)；wo2003042661(權利要求12)；wo2003016475(權利要求1)；wo200278524(實施例2)；wo200299074(權利要求19；127-129頁)；wo200286443(權利要求27；222、393頁)；wo2003003906(權利要求10；293頁)；wo200264798(權利要求33；93-95頁)；wo200014228(權利要求5；133-136頁)；us2003224454(圖3)；wo2003025138(權利要求12；150頁)；np_003477溶質載體家族7(陽離子氨基酸轉運蛋白，y+系統)，成員5/pid＝np_003477.3-人類交叉參考：mim:600182；np_003477.3；nm_015923；nm_003486_1(3)steap1(前列腺的六跨膜上皮細胞抗原，genbank登記號nm_012449)cancerres.61(15),5857-5860(2001),hubert,r.s.,etal(1999)proc.natl.acad.sci.u.s.a.96(25):14523-14528)；wo2004065577(權利要求6)；wo2004027049(圖1l)；ep1394274(實施例11)；wo2004016225(權利要求2)；wo2003042661(權利要求12)；us2003157089(實施例5)；us2003185830(實施例5)；us2003064397(圖2)；wo200289747(實施例5；618-619頁)；wo2003022995(實施例9；圖13a，實施例53；173頁，實施例2；圖2a)；np_036581前列腺的六跨膜上皮細胞抗原交叉參考：mim:604415；np_036581.1；nm_012449_1(4)0772p(ca125,muc16,genbank登記號af361486)j.biol.chem.276(29):27371-27375(2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f-r(b細胞-活化因子受體,blys受體，blys受體3,br3,genbank登記號af116456)；baffreceptor/pid＝np_443177.1-homosapiensthompson,j.s.,etalscience293(5537),2108-2111(2001)；wo2004058309；wo2004011611；wo2003045422(實施例；32-33頁)；wo2003014294(權利要求35；圖6b)；wo2003035846(權利要求70；615-616頁)；wo200294852(136-137欄)；wo200238766(權利要求3；133頁)；wo200224909(實施例3；圖3)；交叉參考：mim:606269；np_443177.1；nm_052945_1；af132600(27)cd22(b-細胞受體cd22-b同工型,bl-cam,lyb-8,lyb8,siglec-2,flj22814,genbank登記號ak026467)；wilsonetal(1991)j.exp.med.173:137-146；wo2003072036(權利要求1；圖1)；交叉參考：mim:107266；np_001762.1；nm_001771_1(28)cd79a(cd79a,cd79α,免疫球蛋白-相關α，一種b細胞特異性蛋白，其與igβ(cd79b)共價相互作用并在表面上與igm分子形成復合物，轉導涉及b細胞分化的信號),pi:4.84,mw:25028tm:2[p]genechromosome:19q13.2,genbank登記號np_001774.10)wo2003088808，us20030228319；wo2003062401(權利要求9)；us2002150573(權利要求4，13-14頁)；wo9958658(權利要求13，圖16)；wo9207574(圖1)；us5644033；ha等(1992)j.immunol.148(5):1526-1531；mueller等(1992)eur.j.biochem.22:1621-1625；hashimoto等(1994)immunogenetics40(4):287-295；preud’hommeetal(1992)clin.exp.immunol.90(1):141-146；yuetal(1992)j.immunol.148(2)633-637；sakaguchietal(1988)emboj.7(11):3457-3464；(29)cxcr5(伯基特淋巴瘤受體1，一種g蛋白偶聯受體，由cxcl13趨化因子活化，在淋巴細胞遷移和體液防御中起作用，在hiv-2感染中起作用并可能在aids、淋巴瘤、黑素瘤和白血病發展中起作用)；372aa,pi:8.54mw:41959tm:7[p]genechromosome:11q23.3,genbank登記號np_001707.1)wo2004040000；wo2004015426；us2003105292(實施例2)；us6555339(實施例2)；wo200261087(圖1)；wo200157188(權利要求20，269頁)；wo200172830(12-13頁)；wo200022129(實施例1，152-153頁，實施例2，254-256頁)；wo9928468(權利要求1，38頁)；us5440021(實施例2，49-52欄)；wo9428931(56-58頁)；wo9217497(權利要求7，圖5)；dobneretal(1992)eur.j.immunol.22:2795-2799；barellaetal(1995)biochem.j.309:773-779；(30)hla-dob(mhcii類分子的β亞單位(ia抗原)，其與肽結合并且將其呈遞給cd4+t淋巴細胞)；273aa,pi:6.56mw:30820tm:1[p]genechromosome:6p21.3,genbank登記號np_002111.1)tonnelleetal(1985)emboj.4(11):2839-2847；jonssonetal(1989)immunogenetics29(6):411-413；becketal(1992)j.mol.biol.228:433-441；strausbergetal(2002)proc.natl.acad.sciusa99:16899-16903；serveniusetal(1987)j.biol.chem.262:8759-8766；becketal(1996)j.mol.biol.255:1-13；naruseetal(2002)tissueantigens59:512-519；wo9958658(權利要求13，圖15)；us6153408(35-38欄)；us5976551(168-170欄)；us6011146(145-146欄)；kasaharaetal(1989)immunogenetics30(1):66-68；larhammaretal(1985)j.biol.chem.260(26):14111-14119；(31)p2x5(嘌呤源受體p2x配體門控離子通道5，一種由胞外atp門控的離子通道，可能涉及突觸傳遞和神經發生，其缺陷可以促使特發性逼尿肌不穩定性病理生理學)；422aa),pi:7.63,mw:47206tm:1[p]genechromosome:17p13.3,genbank登記號np_002552.2)leetal(1997)febslett.418(1-2):195-199；wo2004047749；wo2003072035(權利要求10)；touchman等(2000)genomeres.10:165-173；wo200222660(權利要求20)；wo2003093444(權利要求1)；wo2003087768(權利要求1)；wo2003029277(82頁)；(32)cd72(b細胞分化抗原cd72，lyb-2)蛋白完整序列maeaity...tafrfpd(1..359；359aa),pi:8.66,mw:40225tm:1[p]genechromosome:9p13.3,genbank登記號np_001773.1)wo2004042346(權利要求65)；wo2003026493(51-52、57-58頁)；wo200075655(105-106頁)；vonhoegenetal(1990)j.immunol.144(12):4870-4877；strausbergetal(2002)proc.natl.acad.sciusa99:16899-16903；(33)ly64(淋巴細胞抗原64(rp105)，即富含亮氨酸重復(lrr)家族的i型膜蛋白，調節b細胞細胞活化和凋亡，其功能缺失與系統性紅斑狼瘡患者的疾病活動增加有關)；661aa,pi:6.20,mw:74147tm:1[p]genechromosome:5q12,genbank登記號np_005573.1)us2002193567；wo9707198(權利要求11，39-42頁)；miuraetal(1996)genomics38(3):299-304；miuraetal(1998)blood92:2815-2822；wo2003083047；wo9744452(權利要求8，57-61頁)；wo200012130(24-26頁)；(34)fcrh1(fc受體樣蛋白1，一種含有c2型ig-樣和itam結構域的免疫球蛋白fc結構域的推定受體，可能在b淋巴細胞分化中起作用)；429aa,pi:5.28,mw:46925tm:1[p]genechromosome:1q21-1q22,genbank登記號np_443170.1)wo2003077836；wo200138490(權利要求6，圖18e-1-18-e-2)；davisetal(2001)proc.natl.acad.sciusa98(17):9772-9777；wo2003089624(權利要求8)；ep1347046(權利要求1)；wo2003089624(權利要求7)；(35)irta2(免疫球蛋白超家族受體易位相關2，一種在b細胞發育和淋巴瘤生成中具有可能的作用的推定的免疫受體；由于易位所導致的基因失調在某些b細胞惡性腫瘤中發生)；977aa,pi:6.88mw:106468tm:1[p]genechromosome:1q21,genbank登記號human:af343662,af343663,af343664,af343665,af369794,af397453,ak090423,ak090475,al834187,ay358085；小鼠:ak089756,ay158090,ay506558；np_112571.1wo2003024392(權利要求2，圖97)；nakayamaetal(2000)biochem.biophys.res.commun.277(1):124-127；wo2003077836；wo200138490(權利要求3，圖18b-1-18b-2)；(36)tenb2(tmeff2,tomoregulin,tpef,hpp1,tr,與egf/調蛋白家族生長因子和卵泡抑素相關的推定的跨膜蛋白聚糖)；374aa,ncbi登記號：aad55776,aaf91397,aag49451,ncbirefseq:np_057276；ncbigene:23671；omim:605734；swissprotq9uik5；genbank登記號af179274；ay358907,caf85723,cq782436wo2004074320(seqidno810)；jp2004113151(seqidnos2，4，8)；wo2003042661(seqidno580)；wo2003009814(seqidno411)；ep1295944(69-70頁)；wo200230268(329頁)；wo200190304(seqidno2706)；us2004249130；us2004022727；wo2004063355；us2004197325；us2003232350；us2004005563；us2003124579；horieetal(2000)genomics67:146-152；uchidaetal(1999)biochem.biophys.res.commun.266:593-602；liangetal(2000)cancerres.60:4907-12；glynne-jonesetal(2001)intjcancer.oct15；94(2):178-84；(37)pmel17(銀同系物；silv；d12s53e；pmel17；(si)；(sil)；me20；gp100)bc001414；bt007202；m32295；m77348；nm_006928；mcglinchey,r.p.etal(2009)proc.natl.acad.sci.u.s.a.106(33),13731-13736；kummer,m.p.etal(2009)j.biol.chem.284(4),2296-2306；(38)tmeff1(具有egf樣和兩個卵泡抑素樣域1的跨膜蛋白；tomoregulin-1；h7365；c9orf2；c9orf2；u19878；x83961)nm_080655；nm_003692；harms,p.w.(2003)genesdev.17(21),2624-2629；gery,s.etal(2003)oncogene22(18):2723-2727；(39)gdnf-ra1(gdnf家族受體α1；gfra1；gdnfr；gdnfra；retl1；trnr1；ret1l；gdnfr-alpha1；gfr-alpha-1；u95847；bc014962；nm_145793)nm_005264；kim,m.h.etal(2009)mol.cell.biol.29(8),2264-2277；treanor,j.j.etal(1996)nature382(6586):80-83；(40)ly6e(淋巴細胞抗原6復合物，基因座e；ly67,rig-e,sca-2,tsa-1)np_002337.1；nm_002346.2；denooij-vandalen,a.g.etal(2003)int.j.cancer103(6),768-774；zammit,d.j.etal(2002)mol.cell.biol.22(3):946-952；(41)tmem46(shisa同系物2(有爪蟾蜍)；shisa2)np_001007539.1；nm_001007538.1；furushima,k.etal(2007)dev.biol.306(2),480-492；clark,h.f.etal(2003)genomeres.13(10):2265-2270；(42)ly6g6d(淋巴細胞抗原6復合物，基因座g6d；ly6-d,megt1)np_067079.2；nm_021246.2；mallya,m.etal(2002)genomics80(1):113-123；ribas,g.etal(1999)j.immunol.163(1):278-287；(43)lgr5(含有亮氨酸富集的重復單元的g蛋白偶聯受體5；gpr49,gpr67)np_003658.1；nm_003667.2；salanti,g.etal(2009)am.j.epidemiol.170(5):537-545；yamamoto,y.etal(2003)hepatology37(3):528-533；(44)ret(ret原癌基因；men2a；hscr1；men2b；mtc1；(ptc)；cdhf12；hs.168114；ret51；ret-ele1)np_066124.1；nm_020975.4；tsukamoto,h.etal(2009)cancersci.100(10):1895-1901；narita,n.etal(2009)oncogene28(34):3058-3068；(45)ly6k(淋巴細胞抗原6復合物，基因座k；ly6k；hsj001348；flj35226)np_059997.3；nm_017527.3；ishikawa,n.etal(2007)cancerres.67(24):11601-11611；denooij-vandalen,a.g.etal(2003)int.j.cancer103(6):768-774；(46)gpr19(g蛋白偶聯受體19；mm.4787)np_006134.1；nm_006143.2；montpetit,a.andsinnett,d.(1999)hum.genet.105(1-2):162-164；o'dowd,b.f.etal(1996)febslett.394(3):325-329；(47)gpr54(kiss1受體；kiss1r；gpr54；hot7t175；axor12)np_115940.2；nm_032551.4；navenot,j.m.etal(2009)mol.pharmacol.75(6):1300-1306；hata,k.etal(2009)anticancerres.29(2):617-623；(48)asphd1(含有天冬氨酸β-羥化酶域的1；loc253982)np_859069.2；nm_181718.3；gerhard,d.s.etal(2004)genomeres.14(10b):2121-2127；(49)酪氨酸酶(tyr；ocaia；oca1a；酪氨酸酶；shep3)np_000363.1；nm_000372.4；bishop,d.t.etal(2009)nat.genet.41(8):920-925；nan,h.etal(2009)int.j.cancer125(4):909-917；(50)tmem118(環指蛋白，跨膜2；rnft2；flj14627)np_001103373.1；nm_001109903.1；clark,h.f.etal(2003)genomeres.13(10):2265-2270；scherer,s.e.etal(2006)nature440(7082):346-351(51)gpr172a(g蛋白偶聯受體172a；gpcr41；flj11856；d15ertd747e)np_078807.1；nm_024531.3；ericsson,t.a.etal(2003)proc.natl.acad.sci.u.s.a.100(11):6759-6764；takeda,s.etal(2002)febslett.520(1-3):97-101。在一個實施方案中，所述抗體結合一種或多種以下多肽：bmpr1b；e16；steap1；0772p；mpf；napi2b；sema5b；pscahlg；etbr；msg783；steap2；trpm4；cripto；cd21；cd79b；fcrh2；her2；nca；mdp；il20rα；短縮素；ephb2r；aslg659；psca；geda；baff-r；cd22；cd79a；cxcr5；hla-dob；p2x5；cd72；ly64；fcrh1；irta2；tenb2；pmel17；tmeff1；gdnf-ra1；ly6e；tmem46；ly6g6d；lgr5；ret；ly6k；gpr19；gpr54；asphd1；酪氨酸酶；tmem118；gpr172a；和cd33。在一個實施方案中，所述抗體結合bmpr1b；在一個實施方案中，所述抗體結合e16；在一個實施方案中，所述抗體結合steap1；在一個實施方案中，所述抗體結合0772p；在一個實施方案中，所述抗體結合mpf；在一個實施方案中，所述抗體結合napi2b；在一個實施方案中，所述抗體結合sema5b；在一個實施方案中，所述抗體結合pscahlg；在一個實施方案中，所述抗體結合etbr；在一個實施方案中，所述抗體結合msg783；在一個實施方案中，所述抗體結合steap2；在一個實施方案中，所述抗體結合trpm4；在一個實施方案中，所述抗體結合cripto；在一個實施方案中，所述抗體結合cd21；在一個實施方案中，所述抗體結合cd79b；在一個實施方案中，所述抗體結合fcrh2；在一個實施方案中，所述抗體結合her2；在一個實施方案中，所述抗體結合nca；在一個實施方案中，所述抗體結合mdp；在一個實施方案中，所述抗體結合il20rα；在一個實施方案中，所述抗體結合短縮素；在一個實施方案中，所述抗體結合ephb2r；在一個實施方案中，所述抗體結合aslg659；在一個實施方案中，所述抗體結合psca；在一個實施方案中，所述抗體結合geda；在一個實施方案中，所述抗體結合baff-r；在一個實施方案中，所述抗體結合cd22；在一個實施方案中，所述抗體結合cd79a；在一個實施方案中，所述抗體結合cxcr5；在一個實施方案中，所述抗體結合hla-dob；在一個實施方案中，所述抗體結合p2x5；在一個實施方案中，所述抗體結合cd72；在一個實施方案中，所述抗體結合ly64；在一個實施方案中，所述抗體結合fcrh1；在一個實施方案中，所述抗體結合irta2；在一個實施方案中，所述抗體結合tenb2；在一個實施方案中，所述抗體結合pmel17；在一個實施方案中，所述抗體結合tmeff1；在一個實施方案中，所述抗體結合gdnf-ra1；在一個實施方案中，所述抗體結合ly6e；在一個實施方案中，所述抗體結合tmem46；在一個實施方案中，所述抗體結合ly6g6d；在一個實施方案中，所述抗體結合lgr5；在一個實施方案中，所述抗體結合ret；在一個實施方案中，所述抗體結合ly6k；在一個實施方案中，所述抗體結合gpr19；在一個實施方案中，所述抗體結合gpr54；在一個實施方案中，所述抗體結合asphd1；在一個實施方案中，所述抗體結合酪氨酸酶；在一個實施方案中，所述抗體結合tmem118；在一個實施方案中，所述抗體結合gpr172a；在一個實施方案中，所述抗體結合cd33。親代抗體還可為包含白蛋白-結合肽(abp)序列的融合蛋白(dennisetal.(2002)“albuminbindingasageneralstrategyforimprovingthepharmacokineticsofproteins”jbiolchem.277:35035-35043；wo01/45746)。本發明的抗體包括具有下列文獻中教導的abp序列的融合蛋白：(i)dennis等(2002)jbiolchem.277:35035-35043，表iii和iv，35038頁；(ii)us20040001827，[0076]處；和(iii)wo01/45746，12-13頁處，并且將所有這些文獻引入本申請作為參考。抗體的產生可使用重組方法和組合物，例如如us4816567中所述的以及本領域已知的。在一些實施方案中，在真核宿主細胞(例如，哺乳動物宿主細胞)中產生所述抗體。在一些實施方案中，在原核宿主細胞(例如，大腸桿菌)中產生所述抗體。在某些實施方案中，可將一個或多個氨基酸修飾引入本申請所提供的抗體的fc區，從而產生fc區變體。所述fc區變體可包含在一個或多個氨基酸位置含有氨基酸修飾(例如取代)的人fc區序列(例如，人igg1、igg2、igg3或igg4fc區)。在某些實施方案中，本發明關注具有一些而非全部效應子功能的抗體變體，這使得其為某些應用中的期望侯選，在所述應用中體內抗體半衰期是重要的但某些效應子功能(例如補體和adcc)是不必要或有害的。可進行體外和/或體內細胞毒性測定以證實cdc和/或adcc活性的減少/缺失。例如，可進行fc受體(fcr)結合分析以確保抗體缺乏fcγr結合(因此很可能缺乏adcc活性)，但保持fcrn結合能力。adc的藥物載量藥物載量是每個抗體中藥物部分的平均數目。藥物載量范圍可為每個抗體(ab)1至8個藥物(d)，即，其中1、2、3、4、5、6、7和8個藥物部分共價連接至所述抗體。adc的組成包括與1至8個藥物綴合的抗體的集合。來自綴合反應的adc制品中，每個抗體的藥物平均數目可以通過常規手段如質譜學、elisa測定、電泳和hplc進行表征。也可測定adc依據p的定量分布。通過elisa可以測定特定adc制品中的p平均值(hamblettetal(2004)clin.cancerres.10:7063-7070；sandersonetal(2005)clin.cancerres.11:843-852)。然而，p(藥物)值分布不能通過抗體-抗原結合和elisa的檢測限制來辨別。而且，檢測抗體-藥物綴合物的elisa測定不能確定藥物部分于何處連接抗體，如重鏈或輕鏈片段或具體氨基酸殘基。在一些情況下，可以通過如反相hplc或電泳手段實現同質adc的分離、純化和表征，其中p為來自adc與其它藥物載量的某個值。對于一些抗體-藥物綴合物，p可能受限于抗體上的連接位點數目。例如，抗體可能僅有一個或幾個半胱氨酸巰基，或可能僅有一個或幾個充分反應性的巰基，接頭可以通過所述巰基連接。更高的藥物載量，例如p＞5，可能導致某些抗體-藥物綴合物的聚集、不可溶性、毒性或細胞滲透性的喪失。典型地，綴合反應期間，小于理論最大值的藥物部分與抗體綴合。抗體可以包含例如許多不與接頭-藥物中間體(x-l-d)或接頭試劑反應的賴氨酸殘基。僅反應性最強的賴氨酸基團可與胺反應性接頭試劑反應。而且，僅反應性最強的半胱氨酸巰基可與巰基反應性接頭試劑或接頭-藥物中間體反應。通常，即便有，抗體也不會包含許多可連接至藥物部分的游離且反應性的半胱氨酸巰基。抗體化合物中的大多數半胱氨酸巰基殘基都以二硫鍵形式存在，且必須用還原劑如二硫蘇糖醇(dtt)或tcep在不完全或完全還原條件下還原。adc的負載(藥物/抗體比，"dar")可以以幾種不同的方式得到控制，包括：(i)限制相對于抗體的接頭-藥物中間體或接頭試劑的摩爾過量，(ii)限制綴合反應時間或溫度，和(iii)針對半胱氨酸巰基修飾的部分或限制性還原條件。在抗體超過一個親核或親電基團與接頭-藥物中間體反應或與接頭試劑然后是二聚藥物部分試劑反應的情況下，則所得產物為抗體-藥物綴合物的混合物，其具有連接抗體的藥物部分的分布，例如1、2、3等。液相色譜方法如聚合物反相(plrp)和疏水性相互作用(hic)可通過藥物載量值分離混合物中的化合物。可以分離具有單一藥物載量值(p)的adc制品，然而，這些單一負載值adc可能仍然是非均質混合物，因為藥物部分可經由接頭連接于抗體上的不同位點。因此，本發明的抗體-藥物綴合物組合物包括抗體-藥物綴合物化合物的混合物，其中所述抗體具有一個或多個藥物部分且其中所述藥物部分可在各種氨基酸殘基上與抗體連接。示例性藥物部分美登素和美登素類化合物在一些實施方案中，免疫綴合物包含與一種或多種美登素類化合物分子綴合的抗體。美登素類化合物為美登素的衍生物，且為有絲分裂抑制劑，其通過抑制微管蛋白聚合而起作用。美登素首先由東非齒葉美登木(shrubmaytenusserrata)分離(美國專利3896111)。隨后，發現某些微生物也產生美登素類化合物，諸如美登醇和c-3美登醇酯(美國專利4,151,042)。合成的美登素類化合物公開于例如美國專利4,137,230；4,248,870；4,256,746；4,260,608；4,265,814；4,294,757；4,307,016；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,313,946；4,315,929；4,317,821；4,322,348；4,331,598；4,361,650；4,364,866；4,424,219；4,450,254；4,362,663；和4,371,533。美登素類化合物藥物部分為在抗體-藥物綴合物中有吸引力的藥物部分，這是因為它們(i)可相對容易地通過發酵或化學修飾或發酵產品衍生化來制備，(ii)易于衍生出適于經非二硫化物接頭與抗體綴合的官能團，(iii)在血漿中穩定，且(iv)對多種腫瘤細胞系是有效的。適于用作美登素類化合物藥物部分的某些美登素類化合物在本領域中已知且可根據已知方法由天然來源分離或使用基因加工技術產生(參見例如yuetal(2002)pnas99:7968-7973)。美登素類化合物也可根據已知方法合成制備。示例性美登素類化合物藥物部分包括但不限于具有經修飾的芳族環的那些，例如：c-19-脫氯(美國專利4256746)(例如通過ansamytocinp2的氫化鋁鋰還原來制備)；c-20-羥基(或c-20-脫甲基)+/-c-19-脫氯(美國專利4361650和4307016)(例如通過使用鏈霉菌屬或放線菌屬的脫甲基化或使用lah的脫氯作用來制備)；和c-20-脫甲氧基、c-20-乙酰氧基(-ocor)、+/-脫氯(美國專利4,294,757)(例如通過使用酰氯的酰化來制備)，以及在芳族環的其他位置具有修飾的那些。示例性美登素類化合物藥物部分還包括具有修飾的那些，諸如c-9-sh(美國專利4424219)(例如通過使美登醇與h2s或p2s5反應來制備)；c-14-烷氧基甲基(脫甲氧基/ch2or)(us4331598)；c-14-羥基甲基或乙酰氧基甲基(ch2oh或ch2oac)(美國專利4450254)(例如由nocardia制備)；c-15-羥基/乙酰氧基(us4364866)(例如通過鏈霉菌屬轉化美登醇來制備)；c-15-甲氧基(美國專利4313946和4315929)(例如由trewianudlflora分離)；c-18-n-脫甲基(美國專利4362663和4322348)(例如通過鏈霉菌屬使美登醇脫甲基來制備)；和4,5-脫氧(us4371533)(例如通過美登醇的三氯化鈦/lah還原來制備)。美登素類化合物化合物上的許多位置可用作連接位置。例如，酯連接可通過使用常規偶聯技術與羥基反應來形成。在一些實施方案中，反應可發生在具有羥基的c-3位上、修飾有羥基甲基的c-14位上、修飾有羥基的c-15位上以及具有羥基的c-20位上。在一些實施方案中，連接在美登醇或美登醇類似物的c-3位上形成。美登素類化合物藥物部分包括具有以下結構的那些：其中波浪線表示美登素類化合物藥物部分的硫原子與adc的接頭的共價連接。每個r可獨立為h或c1-c6烷基。使酰胺基團與硫原子連接的亞烷基鏈可為甲基、乙基或丙基，即m為1、2或3(us633410；us5208020；charietal(1992)cancerres.52:127-131；liuetal(1996)proc.natl.acad.sciusa93:8618-8623)。針對本發明的adc考慮了美登素類化合物藥物部分的所有立體異構體，即手性碳的r和s構型的任何組合(us7276497；us6913748；us6441163；us633410(re39151)；us5208020；widdisonetal(2006)j.med.chem.49:4392-4408,將其全部內容通過引用的方式并入本申請)。在一些實施方案中，美登素類化合物藥物部分具有以下立體化學：美登素類化合物藥物部分的示例性實施方案包括但不限于dm1；dm3；和dm4，其具有以下結構：其中波浪線表示藥物的硫原子與抗體-藥物綴合物的接頭(l)的共價連接。其他示例性美登素類化合物抗體-藥物綴合物具有以下結構和縮寫(其中ab為抗體且p為1至約20。在一些實施方案中，p為1至10，p為1至7，p為1至5，或p為1至4):其中dm1經bmpeo接頭與抗體的巰基連接的示例性抗體-藥物綴合物具有以下結構和縮寫：其中ab為抗體；n為0、1或2；且p為1至約20。在一些實施方案中，p為1至10，p為1至7，p為1至5，或p為1至4。含有美登素類化合物的免疫綴合物、其制備方法以及其治療用途披露于例如美國專利5,208,020和5,416,064；us2005/0276812a1；和歐洲專利ep0425235b1，將以上公開通過引用的方式明確地并入本申請。還參見liuetal.proc.natl.acad.sci.usa93:8618-8623(1996)；andcharietal.cancerresearch52:127-131(1992)。在一些實施方案中，抗體-美登素類化合物綴合物可通過使抗體與美登素類化合物分子化學連接來制備，而不會顯著降低抗體或美登素類化合物分子的生物活性。參見例如美國專利5,208,020(將以上公開通過引用的方式明確地并入本申請)。在一些實施方案中，其中每個抗體分子具有平均3-4個綴合的美登素類化合物分子的adc顯示出增強對靶標細胞的細胞毒性而不會不利地影響抗體的功能或溶解度。在一些實例中，甚至一個分子的毒素/抗體預期可優于使用裸露抗體而增強細胞毒性。用于制備抗體-美登素類化合物綴合物的示例性連接基團包括例如披露于本申請的那些以及披露于以下的那些：美國專利5208020；ep專利0425235b1；charietal.cancerresearch52:127-131(1992)；us2005/0276812a1；andus2005/016993a1，將以上公開通過引用的方式明確地并入本申請。卡奇霉素(calicheamicin)在一些實施方案中，所述免疫綴合物包含與一個或多個卡奇霉素分子綴合的抗體。抗生素的卡奇霉素家族及其類似物能夠以亞皮摩爾濃度產生雙鏈dna斷裂(hinmanetal.,(1993)cancerresearch53:3336-3342；lodeetal.,(1998)cancerresearch58:2925-2928)。卡奇霉素具有作用的分子內位點，但在一些情況下，其不能容易地跨越質膜。因此，這些藥物經抗體介導的內化的細胞攝取可在一些實施方案中顯著增強其細胞毒性作用。用卡奇霉素藥物部分制備抗體-藥物綴合物的非限制性示例性方法描述于例如us5712374；us5714586；us5739116；和us5767285。cbi二聚體在一些實施方案中，藥物部分為具有下式的cbi二聚體：其中r11選自h、p(o)3h2、c(o)nraarbb或與l的鍵；r22選自h、p(o)3h2、c(o)nraarbb或與l的鍵；raa和rbb獨立地選自h和任選取代有一個或多個f的c1-c6烷基，或raa和rbb形成五或六元雜環烷基；t為連接基團，選自c3-c12亞烷基、y1、(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)、(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)-y1-(c1-c6亞烷基)、(c2-c6亞烯基)-y1-(c2-c6亞烯基)和(c2-c6亞炔基)-y1-(c2-c6亞炔基)；其中y1獨立選自o、s、nr11、芳基和雜芳基；其中亞烷基、亞烯基、芳基和雜芳基獨立且任選取代有f、oh、o(c1-c6烷基)、nh2、nhch3、n(ch3)2、op(o)3h2和c1-c6烷基，其中烷基任選取代有一個或多個f；或亞烷基、亞烯基、芳基和雜芳基獨立且任選取代有與l的鍵；d'為藥物部分，選自：其中波浪線表示與t的連接位點；x1和x2獨立選自o和nr33，其中r33選自h和任選取代有一個或多個f的c1-c6烷基，或x1和x2各自獨立地不存在；r44為h、co2r、c(o)或與l的鍵，其中r為c1-c6烷基或芐基；且r55為h或c1-c6烷基。其他藥物部分藥物部分還包括格爾德霉素(mandleretal(2000)j.nat.cancerinst.92(19):1573-1581；mandleretal(2000)bioorganic&med.chem.letters10:1025-1028；mandleretal(2002)bioconjugatechem.13:786-791)；以及酶促活性毒素及其片段，包括但不限于白喉a鏈、白喉毒素的未結合活性片段、外毒素a鏈(來自銅綠假單胞菌)、蓖麻毒蛋白a鏈、相思豆毒蛋白a鏈、蒴蓮根毒素a鏈、α-八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、商陸蛋白(papi、papii和pap-s)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥阜草抑制劑、白樹毒素、mitogellin、局限曲菌素、酚霉素、依諾霉素和單端孢霉烯族毒素。參見例如wo93/21232。藥物部分還包括具有溶核活性的化合物(例如核糖核酸酶或dna內切核酸酶)。抗生素可與抗體綴合的抗生素包括克林霉素、新生霉素、瑞他莫林、達托霉素、gsk-2140944、cg-400549、西他沙星、替考拉寧、三氯生、萘啶酮、雷得唑來、多柔比星、氨芐西林、萬古霉素、亞胺培南、多利培南、吉西他濱、達巴萬星和阿奇霉素。所述抗生素的殺菌和抑菌作用的機制包括但不限于：(i)抑制細胞壁、肽聚糖延伸(萬古霉素、替考拉寧、達巴萬星)；(ii)抑制細胞壁、青霉素結合蛋白交聯(亞胺培南、多利培南、氨芐西林)；(iii)細胞膜去極化(達托霉素)；(iv)干擾dna復制(吉西他濱)；(v)dna結合(多柔比星)；(vi)烯酰acp-還原酶fabi(cg-400549、三氯生、萘啶酮)；(vii)抑制核糖體蛋白合成，核糖體30s(克林霉素、瑞他莫林、雷得唑來)；和(viii)拓樸異構酶(topoiia)抑制劑(新生霉素、西他沙星、gsk-2140944)。在結構上，大部分抗生素可分為以下組：(i)氨基糖甙類；(ii)β-內酰胺類；(iii)大環內酯類/環狀肽；(iv)四環素類；(v)氟喹啉類/氟喹諾酮類；和(vi)噁唑烷酮類。參見shaw,k.andbarbachyn,m.(2011)ann.n.y.acad.sci.1241:48-70；sutcliffe,j.(2011)ann.n.y.acad.sci.1241:122-152。在某些實施方案中，免疫綴合物可包含高度放射性原子。各種放射性同位素可用于產生放射綴合的抗體。實例包括at211、i131、i125、y90、re186、re188、sm153、bi212、p32、pb212和lu的放射性同位素。在一些實施方案中，當免疫綴合物用于檢測時，其可包含用于閃爍法研究的放射性原子，例如tc99或i123，或用于核磁共振(nmr)成像(也已知為磁共振成像,mri)的自旋標記物，諸如鋯-89、碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。鋯-89可與各種金屬螯合劑絡合且與抗體綴合，例如用于pet成像(wo2011/056983)。放射性或其他標記物可以已知方式摻入至免疫綴合物中。例如，可使用適當的氨基酸前體生物合成或化學合成肽，所述前體包含例如一個或多個氟-19原子代替一個或多個氫。在一些實施方案中，標記物諸如tc99、i123、re186、re188和in111可經半胱氨酸殘基連接在抗體中。在一些實施方案中，釔-90可經抗體的賴氨酸殘基連接。在一些實施方案中，iodogen方法(frakeretal(1978)biochem.biophys.res.commun.80:49-57)可用于摻入碘-123。"monoclonalantibodiesinimmunoscintigraphy"(chatal,crcpress1989)描述了某些其他方法。在某些實施方案中，免疫綴合物可包含綴合至前藥活化酶的抗體。在一些所述實施方案中，前藥活化酶將前藥(例如肽基化療劑，參見wo81/01145)轉變成活性藥物，諸如抗癌藥。在一些實施方案中，所述免疫綴合物在抗體依賴性酶介導的前藥療法(“adept”)中是有用的。可綴合至抗體的酶包括但不限于對于將含磷酸鹽/酯的前藥轉變為游離藥物有用的堿性磷酸酶；對于將含硫酸鹽/酯的前藥轉變為游離藥物有用的芳基硫酸酯酶；對于將無毒5-氟胞嘧啶轉變為抗癌藥物5-氟尿嘧啶有用的胞嘧啶脫氨酶；對于將含肽的前藥轉變為游離藥物有用的蛋白酶，諸如沙雷氏菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、羧肽酶和組織蛋白酶(諸如組織蛋白酶b和l)；對于轉化含d-氨基酸替代的前藥有用的d-丙氨酰羧肽酶；對于將糖基化前藥轉變為游離藥物有用的碳水化合物切割酶，諸如β-半乳糖苷酶和神經氨酸酶；對于將用β-內酰胺衍生的藥物轉變為游離藥物有用的β-內酰胺酶；及對于將在其胺氮處分別用苯氧基乙酰基或苯基乙酰基衍生的藥物轉變為游離藥物有用的青霉素酰胺酶，諸如青霉素v酰胺酶或青霉素g酰胺酶。在一些實施方案中，可通過本領域公知的重組dna技術將酶共價結合至抗體。參見例如neuberger等，nature312:604-608(1984)。適應癥和治療方法預期本發明的抗體-藥物綴合物(adc)可用于治療各種疾病或病癥，例如其特征在于腫瘤抗原的過表達的疾病或病癥。示例性病癥或過度增殖性病癥包括良性或惡性實體瘤以及造血系統病癥例如白血病和淋巴惡性腫瘤。其它疾病包括神經元、神經膠質、星形膠質細胞、下丘腦、腺體、巨噬細胞、上皮細胞、間質、囊胚腔、炎性、血管發生和免疫性疾病，包括自身免疫性疾病。在某些實施方案中，包含抗napi2b抗體的本發明adc(例如上述那些)用于治療實體瘤如卵巢癌的方法中。在另一實施方案中，包含抗cd33抗體的本發明adc(例如上述那些)用于治療血液惡性腫瘤的方法中，所述血液惡性腫瘤例如非霍奇金淋巴瘤(nhl)、彌散性大造血淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、多發性骨髓瘤、急性髓細胞性白血病(aml)和髓細胞白血病(mcl)，并包括b細胞相關的癌癥和增殖病癥。參見：us8226945；li等(2013)mol.cancer.ther.12(7):1255-1265；polson等(2010)leukemia24:1566-1573；polson等(2011)expertopin.investig.drugs20(1):75-85，這些文獻的內容通過引用的方式并入本申請。在另一實施方案中，包含抗muc16抗體的本發明adc(例如上述那些)用于治療卵巢癌、乳腺癌和胰腺癌的方法中。所述癌癥可與muc16/ca125/o772p多肽的表達或活性相關。參見：wo2007/001851；us7989595；us8449883；us7723485；chenetal(2007)cancerres.67(10):4924-4932；junutula,etal.,(2008)naturebiotech.,26(8):925-932，這些文獻的內容通過引用的方式并入本申請。在某些實施方案中，包含抗her2抗體的本發明adc(例如上述那些)用于治療癌癥的方法中，所述癌癥例如乳腺癌或胃癌，更具體的是her2+乳腺癌或胃癌，其中所述方法包括對需要所述治療的患者給藥所述adc。在一個所述實施方案中，所述adc包含抗her2抗體曲妥珠單抗或帕妥珠單抗。一般而言，待治療的疾病或病癥為過度增殖性疾病如癌癥。本申請所治療的癌癥的實例包括但不局限于癌、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。所述癌癥的更具體的實例包括：鱗狀細胞癌(例如上皮鱗狀細胞癌)；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌；腹膜癌；肝細胞癌；胃癌(gastricorstomachcancer)，包括胃腸癌；胰腺癌；成膠質細胞瘤；宮頸癌；卵巢癌；肝癌；膀胱癌；肝細胞癌；乳腺癌；結腸癌；直腸癌；結腸直腸癌；子宮內膜癌或子宮癌；唾液腺癌；腎癌(kidneyorrenalcancer)；前列腺癌、外陰癌；甲狀腺癌；肝癌；肛門癌；陰莖癌以及頭頸部癌。抗體-藥物綴合物可用于治療的自身免疫性疾病包括風濕病(例如類風濕性關節炎；斯耶格侖氏綜合征；硬皮病；狼瘡，如系統性紅斑狼瘡(sle)和狼瘡性腎炎；多肌炎/皮肌炎；冷球蛋白血癥；抗-磷脂抗體綜合征；和牛皮癬性關節炎)、骨關節炎、自身免疫性胃腸和肝病(例如炎性腸病(例如潰瘍性結腸炎和克羅恩病)、自身免疫性胃炎和惡性貧血、自身免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬變、原發性硬化性膽管炎和乳糜瀉)、血管炎(例如anca相關血管炎，包括丘-施血管炎、韋格納肉芽腫和多動脈炎)、自身免疫性神經疾病(例如多發性硬化、斜視眼肌陣攣綜合征、重癥肌無力、眼腦脊髓病、帕金森病、阿爾茨海默病和自身免疫性多神經病)、腎臟疾病(例如腎小球腎炎、古德帕斯徹綜合征和貝格爾病)、自身免疫性皮膚病(例如銀屑病、蕁麻疹(urticaria)、蕁麻疹(hives)、尋常天皰瘡、大皰性類天皰瘡和皮膚紅斑狼瘡)、血液病(例如血小板減少性紫癜、血栓性血小板減少性紫癜、輸血后紫癜和自身免疫性溶血性貧血)、動脈粥樣硬化、眼色素層炎、自身免疫性聽覺疾病(例如內耳疾病和聽力喪失)、貝切特病、雷諾綜合征、器官移植和自身免疫性內分泌病癥(例如糖尿病相關性自身免疫性疾病，諸如胰島素依賴性糖尿病(iddm)、艾迪生病和自身免疫性甲狀腺病(例如格雷夫斯病和甲狀腺炎))。更優選的所述疾病包括：例如類風濕性關節炎、潰瘍性結腸炎、anca相關血管炎、狼瘡、多發性硬化、斯耶格侖綜合征、格雷夫斯病、iddm、惡性貧血、甲狀腺炎和腎小球腎炎。為預防或治療疾病，adc的適當劑量將取決于如上定義的待治療的疾病類型、疾病的嚴重度和時程、給藥所述分子是為了預防還是為了治療目的、先前的治療、患者的臨床史和對抗體的反應，以及主治醫師的判定。將所述分子適當地對所述患者給藥一次或在一系列治療過程中給藥。取決于疾病類型和嚴重度，對患者給藥的分子的初始候選劑量約為1μg/kg至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)，例如，無論是通過一次或多次分開的給藥，還是通過連續輸注。典型的每日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或更大的范圍內，這取決于上述因素。對患者給藥的adc的示例性劑量在約0.1至約10mg/kg患者體重的范圍內。實驗部分制備肽模擬接頭藥物部分的方法；將pct/us2014/042560引入本申請，作為參考。實施例1.7-(4-((4-((2r,5s,z)-5-(芐基氧基羰基氨基)-4-氟-6-甲基-2-(3-脲基丙基)庚-3-烯酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.將1-1(10.0g,85.36mmol)、1-2(13.3g,89.79mmol)的混合物在150℃攪拌1h。將混合物冷卻至25℃，將固體溶于熱水中。將混合物在冰浴中冷卻并將析出物經濾過收集并用水洗滌。將濾餅干燥得到1-3，其為白色固體(19.0g,90.0％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.96(br,1h),7.78-7.77(m,4h),3.52(t,j＝6.8hz,2h),2.18(t,j＝7.2hz,2h),1.59-1.51(m,2h),1.47-1.41(m,2h).步驟2.在室溫向1-3(9.0g,36.40mmol)在無水dcm(100ml)中的混合物中逐滴加入(cocl)2(15.0ml,157.76mmol)、dmf(1ml)。在反應混合物在室溫攪拌0.5h后，將其減壓濃縮。將殘留物與無水thf(60ml)共蒸發得到酰氯，其為黃色固體。在-78℃在氮氣下向1-4(6.6g,37.25mmol)在無水thf(60ml)中的混合物中逐滴加入n-buli(15.0ml,2.5m,37.5mmol)。在-78℃將酰氯/thf(40ml)緩慢加至混合物中。將反應混合物在-78℃攪拌15min，并用nh4cl水溶液(30ml)淬滅。將混合物在etoac和水之間分配。將合并的有機層經na2so4干燥，濾過，并濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe/etoac3:1)得到粗化合物1-5，其為白色固體(13.0g,87.9％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.89-7.83(m,4h),7.32-7.28(m,2h),7.25-7.22(m,1h),7.19-7.17(m,2h),4.66-4.60(m,1h),4.30(t,j＝8.4hz,1h),4.17(dd,j＝9.2,2.8hz,1h),3.61(t,j＝6.4hz,2h),3.00–2.78(m,4h),1.70-1.60(m,4h).步驟3.向1-6(3.0g,25.39mmol)在dcm(100ml)中的溶液中加入pcc(10.9g,50.78mmol)。在將混合物在25℃在氮氣下攪拌16h后，將其經硅膠填料濾過。將濾液在25℃的浴溫減壓濃縮得到化合物1-7，其為油狀物(1.8g,61.0％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.18(d,j＝18.4hz,1h),5.79(dd,j＝32.8,9.2hz,1h),3.02-2.93(m,1h),1.13(d,j＝6.8hz,6h).步驟4.將1-5(6.0g,14.7mmol)在dcm(20ml)中的溶液用冰浴冷卻至0℃。逐滴加入bu2botf/dcm(1m,15ml,15mmol)，隨后以保持內部溫度低于3℃的速率加入et3n(3.03g,30mmol)。將冰浴用干冰-丙酮浴替換。當內部溫度降低至低于-65℃時，逐滴加入化合物1-7(1.5g,12.9mmol)在dcm(10ml)中的溶液。將溶液在干冰-丙酮浴中攪拌20min，然后在冰浴溫度攪拌1h。將反應混合物用磷酸鹽緩沖水溶液(ph＝7.0,20ml)和meoh(10ml)淬滅。向該渾濁溶液中以保持內部溫度低于10℃的速率加入meoh/30％h2o2混合物(2:1,20ml)。在將溶液攪拌另外的1h后，在旋轉蒸發器上在25-30℃的浴溫除去揮發物。將漿液用etoac(50ml×3)萃取。將合并的有機層用飽和na2so3溶液(15ml)、5％nahco3溶液(30ml)和鹽水(25ml)洗滌，經na2so4干燥，濾過并濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe/etoac3:1)得到粗的1-8，其為油狀物(4.0g,59.7％).lcms(esi):m/z505.0[m-17].步驟5.在0℃在氮氣下向1-8(4.0g,7.65mmol)和cl3ccn(1.67g,11.48mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入dbu(234mg,1.53mmol)。將混合物在0℃攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經硅膠柱色譜純化(5％-20％石油醚/etoac)得到1-9(3.0g,58.8％).lcms(esi):m/z505.1[m-160].1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),7.83-7.80(m,2h),7.72-7.69(m,2h),7.36-7.28(m,2h),7.28-7.22(m,3h),5.69-5.63(q,1h),4.89(dd,j＝37.6,9.6hz,1h),4.63-4.58(m,2h),4.20-4.11(m,2h),3.74-3.69(m,2h),3.35(dd,j＝13.2,3.2hz,1h),2.78-2.69(m,2h),1.99-1.85(m,2h),1.80-1.76(m,2h),0.96-0.92(q,6h).步驟6.將1-9(3.0g,4.50mmol)在二甲苯(5ml)中的溶液在微波中在135℃加熱2h。將混合物冷卻至25℃并經硅膠柱色譜純化(5％-10％-50％pe/etoac)得到1-10(1.4g,46.7％).lcms(esi):m/z685.0[m+h2o].1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.83-7.81(m,2h),7.71-7.69(m,2h),7.36-7.32(m,2h),7.29-7.25(m,1h),7.21-7.19(m,2h),6.90(d,j＝8.8hz,1h),5.11(dd,j＝36.4,9.6hz,1h),4.81-4.76(m,1h),4.68-4.64(m,1h),4.30-4.16(m,3h),3.75-3.68(m,2h),3.27(dd,j＝13.2,3.2hz,1h),2.80-2.74(q,1h),2.08-2.05(m,1h),1.93-1.90(m,1h),1.76-1.70(m,2h),1.65-1.62(m,1h),1.00(dd,j＝6.8,3.2hz,6h).步驟7.向化合物1-10(1.4g,2.1mmol)在thf/h2o(v/v4:1,10ml)中的溶液中加入h2o2(1.43g,30％在水中,12.6mmol)，隨后加入lioh.h2o(264.6mg,6.3mmol)。在將溶液在25℃攪拌1.5h后，加入飽和na2so3溶液(8ml)。除去溶劑并將殘留物用dcm(20ml×2)萃取。將水溶液用1mhcl酸化至ph＝1，用etoac/meoh(10/1,25ml×3)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥，濾過，并濃縮得到化合物1-11(1.0g,93.4％).lcms(esi):m/z527.0[m+na+].步驟8.在0℃在氮氣下向化合物1-11(1.0g,1.97mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(364mg,2.96mmol)在dcm/meoh(v/v2:1,7.5ml)中的溶液中加入eedq(732mg,2.96mmol)。將混合物在25℃攪拌16h。除去溶劑，將殘留物經硅膠柱色譜純化(30％石油醚/etoac)得到粗化合物1-13(1.0g,82.8％).lcms(esi):m/z614.0[m+h+].步驟9.在0℃向化合物1-13(1.0g,1.63mmol)在etoh(15ml)中的溶液中加入nabh4(364.8mg,9.60mmol)。將混合物在25℃攪拌2h并加入水(10ml)以淬滅反應混合物。然后在0℃逐滴加入cbz-cl(410.4mg,2.40mmol)。將混合物在0℃攪拌1h。將混合物用水稀釋，并用dcm(25ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥，減壓濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化(dcm/meoh＝20:1～5:1)得到粗化合物1-14(300mg,31.2％).lcms(esi):m/z602.0[m+h].步驟10.向化合物1-14(300mg,0.498mmol)在etoh(10ml)中的溶液中逐滴加入nh2nh2.xh2o(48mg,50％,0.748mmol)。將混合物回流加熱1h。將反應混合物濃縮，并將殘留物(1-15)無需進一步純化即可直接用于下一反應中。步驟11.向化合物1-15(281.0mg,0.496mmol)在dmf(5ml)中的攪拌溶液中加入tea(100mg,0.992mmol)和cdi(162.7mg,0.992mmol)。在將混合物在29℃攪拌1h后，加入nh3h2o(5ml)，并將混合物在29℃攪拌16h。將反應混合物濾過并將濾液經制備性hplc純化，得到化合物1-16(50mg,19.6％)，其為白色固體。lcms(esi):m/z515.1[m+1].1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.94(s,1h),7.66(d,j＝9.2hz,1h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.29(m,5h),7.22(d,j＝8.4hz,2h),5.94(t,j＝6.0hz,1h),5.36(s,2h),5.10(t,j＝6.0hz,1h),5.05-4.94(m,3h),4.42(d,j＝4.2hz,2h),3.92-3.83(m,1h),3.46-3.44(m,1h),3.01-2.90(m,2h),1.92-1.85(m,1h),1.65-1.63(m,1h),1.44-1.28(m,3h),0.88(t,j＝6.4hz,6h).步驟12.向化合物1-16(50mg,0.097mmol)在無水dmf(3ml)中的混合物中加入dipea(63mg,0.485mmol)。在25℃加入pnp碳酸鹽(87mg,0.291mmol)。將反應混合物在25℃攪拌8h，并加入諾氟沙星(93mg,0.291mmol)。在將混合物在25℃攪拌另外的3h后，將其濾過，并將濾液經制備性hplc純化，得到實施例1(35mg,42.0％).lcms(esi):rt＝0.885min,m/2+h+＝430.7.方法＝5-95/2min.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.04(s,1h),8.95(s,1h),7.94(d,j＝12.8hz,1h),7.66(d,j＝8.8hz,1h),7.60(d,j＝8.8hz,2h),7.34-7.28(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.94(t,j＝5.2hz,1h),5.36(s,2h),5.06-4.94(m,5h),4.59-4.57(q,2h),3.92-3.84(m,1h),3.61(s,4h),3.49-3.43(q,1h),3.33-3.31(m,4h),3.01-2.90(m,2h),1.90-1.83(m,1h),1.68-1.65(m,1h),1.41(d,j＝6.8hz,5h),1.33-1.23(m,1h),0.86(t,j＝6.8hz,6h).實施例2.7-(4-((4-((2r,5s,z)-5-(芐基氧基羰基氨基)-4-氟-2,6-二甲基庚-3-烯酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向nah(1.82g,45.5mmol)在thf(200ml)中的混合物中逐滴加入2-1(10.0g,41.3mmol)在thf(20ml)中的溶液。將混合物在0℃攪拌1h，然后冷卻至-78℃。逐滴加入化合物2-2(2.98g,41.3mmol)在thf(5ml)中的溶液并將混合物緩慢溫熱至25℃，并在25℃攪拌16h。在0℃緩慢加入飽和nh4cl溶液，隨后加入水(50ml)并將混合物用etoac(80ml×2)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝50:1)得到2-3(2.2g,33％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.73(dd,j＝10.4,22.0hz,1h),4.30(q,j＝7.2hz,2h),3.37-3.31(m,1h),1.35(t,j＝7.2hz,3h),1.08-1.04(m,6h).步驟2.在0℃向2-3(12.0g,74.91mmol)在thf(80ml)中的溶液中加入lialh4(5.69g,149.82mmol)。在將混合物在0℃攪拌2h后，將其用飽和nh4cl溶液(1ml)淬滅。減壓除去有機溶劑并將混合物用水(50ml)稀釋并用etoac(100ml×2)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到粗產物2-4(8.0g).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ5.06(dd,j＝10.4,21.2hz,1h),4.24(d,j＝21.2hz,2h),2.42-2.37(m,1h),1.03-0.99(m,6h).步驟3.在25℃向2-4(8.0g,33.86mmol)在dcm(100ml)中的溶液中加入pcc(29.2g,67.72mmol)。在將混合物在氮氣下回流加熱3h后，將其冷卻至25℃并經硅膠填料濾過。濃縮濾液得到粗的2-5(5.1g).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.19(d,j＝18.0hz,1h),5.79(dd,j＝9.6,32.8hz,1h),3.01-2.95(m,1h),1.15-1.13(m,6h).步驟4.將bu2botf/dcm(1m,66ml,66mmol)逐滴加至2-6(15.37g,65.88mmol)在dcm(200ml)中的溶液中，隨后以保持內部溫度低于3℃的速率加入et3n(8.89g,87.84mmol)。將其冷卻至-65℃，并逐滴加入2-5(5.1g,43.92mmol)在dcm(10ml)中的溶液。將溶液在干冰-丙酮浴中攪拌20min，然后在冰浴中攪拌1h。將反應混合物用ph7磷酸鹽緩沖水溶液(50ml)和meoh(150ml)淬滅。向該渾濁溶液中以保持內部溫度低于10℃的速率加入meoh/30％h2o2混合物(2:1,90ml)。在將溶液攪拌另外的1h后，在旋轉蒸發器上在25-30℃的浴溫除去揮發物。將所得的漿液用etoac(150ml×3)萃取。將合并的有機層用飽和na2so3溶液(150ml)、5％nahco3溶液(150ml)和鹽水(150ml)洗滌，經na2so4干燥，濾過并濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe/etoac3:1)得到2-7(8.8g,57％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36-7.27(m,3h),7.21-7.19(m,2h),4.85(dd,j＝9.2,38.4hz,1h),4.73-4.67(m,1h),4.53-4.50(m,1h),4.27-4.19(m,2h),3.99-3.95(m,1h),3.24(dd,j＝3.2,13.6hz,1h),3.17-3.16(m,1h),2.83-2.74(m,2h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.02-0.99(m,6h).步驟5.在0℃在氮氣下向2-7(2.0g,5.72mmol)和cl3ccn(1.24g,8.58mmol)在dcm(15ml)中的溶液中加入dbu(174mg,1.14mmol)。在將混合物在0℃攪拌1h后，除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化(5％-20％石油醚/etoac)得到2-8(1.55g,55％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),7.35-7.27(m,3h),7.25-7.19(m,2h),5.81-5.75(m,1h),4.98-4.85(m,1h),4.64-4.59(m,1h),4.40-4.36(m,1h),4.22-4.17(m,2h),3.27-3.24(m,1h),2.83-2.71(m,2h),1.40-1.38(m,3h),0.99-0.95(m,6h).步驟6.將2-8(1.55g,3.14mmol)在二甲苯(10ml)中的溶液在135℃加熱30h。將其冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將殘留物經硅膠柱色譜純化(5％-10％-50％石油醚/etoac)得到2-9(450mg,29％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35-7.28(m,3h),7.21-7.20(m,2h),6.75(d,j＝8.4hz,1h),5.20(dd,j＝9.2,37.6hz,1h),4.76-4.65(m,2h),4.28-4.17(m,3h),3.27-3.23(m,1h),2.79(dd,j＝9.6,13.2hz,1h),2.07-2.00(m,1h),1.33(d,j＝7.2hz,3h),1.00-0.94(m,6h).步驟7.向2-9(950mg,1.92mmol)在thf和h2o(v/v4:1,10ml)中的溶液中加入h2o2(1.38mg,11.52mmol)，隨后加入lioh.h2o(242mg,5.76mmol)在水(2ml)中的溶液。在將溶液在10℃攪拌1h后，加入飽和na2so3溶液(8ml)。除去溶劑，并將殘留物用dcm(20ml×2)洗滌。將水溶液用1mhcl酸化至ph1，并用etoac(25ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到2-10(420mg,65％).lcms(esi):m/z334.0[m+h+].步驟8.在0℃在氮氣下向2-10(420mg,1.26mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(233mg,1.89mmol)在dcm(10ml)中的溶液中加入eedq(623mg,2.52mmol)。在將混合物在10℃攪拌3h后，除去溶劑，并將殘留物經硅膠柱色譜純化(30％石油醚/乙酸乙酯)得到2-11(300mg,54％).lcms(esi):m/z439.0[m+h+].步驟9.在0℃向2-11(300mg,0.682mmol)在etoh(6ml)中的溶液中加入nabh4(300mg,7.94mmol)。將混合物在10℃攪拌3h。加入水(0.5ml)，并減壓除去etoh。將粗物質溶于thf(4ml)和飽和nahco3溶液(4ml)的混合物，并在10℃加入cbzcl(140mg,8.18mmol)。在將混合物在10℃攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物用dcm(8ml×2)萃取。將有機層經na2so4干燥，濃縮，并經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝2:1)得到2-12(125mg,43％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.53-7.46(m,2h),7.36-7.25(m,7h),5.11-5.00(m,3h),4.56(s,2h),3.94-3.87(m,1h),3.63-3.59(m,1h),1.98-1.92(m,1h),1.27(d,j＝6.8hz,3h),0.96-0.93(m,6h).lcms(esi):m/z429.2[m+h+].步驟10.在10℃向2-12(20mg,0.0467mmol)在dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(43mg,0.140mmol)和diea(24mg,0.187mmol)。在將混合物回流加熱16h后，除去溶劑，并將殘留物溶于dmf(2ml)。在10℃向該溶液中加入diea(24mg,0.187mmol)和諾氟沙星(22mg,0.070mmol)，并將所得的溶液在10℃攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例2(14.1mg,39％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.35(br,1h),10.02(s,1h),8.95(s,1h),7.95-7.91(m,1h),7.69-7.58(m,3h),7.34-7.19(m,8h),5.12-5.00(m,5h),4.59-4.57(m,2h),3.87-3.81(m,1h),3.60-3.51(m,5h),3.30(s,4h),1.89-1.83(m,1h),1.40(t,j＝7.2hz,3h),1.20-1.81(m,3h),0.87(m,6h).lcms(esi):m/z774.8[m+h+]實施例3.1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(4-((4-((s)-2-(1-((s)-1-(噻吩-3-基)乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.在20℃向化合物3-1(2g,15.9mmol)在meoh(20ml)中的溶液中加入nh4oac(12.2g,0.159mol)和nabh3cn(3.5g,55.5mmol)。在將混合物在20℃攪拌16h后，將其濃縮。將殘留物在etoac(50ml)和naoh溶液(5m,5ml)(調節ph>13)之間分配。將有機層用鹽水(20ml×2)洗滌，濃縮并經柱色譜純化(20％-30％meoh/dcm)得到粗化合物3-2(800mg,40％收率).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.63-7.61(d,j＝8.0hz,1h),7.58-5.57(m,1h),7.25-7.23(d,j＝8.0hz,2h),4.53-4.48(m,1h),1.51-1.49(d,j＝8.0hz,3h).步驟2.在20℃向化合物3-3(500mg,1.23mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入化合物3-2(600mg,4.7mmol)、dipea(0.5ml,3mmol)和hatu(740mg,2mmol)。在將混合物在20℃攪拌2h后，將其經制備性hplc純化，得到3-4(360mg,57％收率)。化合物3-4(300mg)經sfc分離得到2個異構體3-4a和3-4b.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.03(s,1h),8.12-8.10(m,1h),7.9-7.75(m,1h),7.55-7.52(m,2h),7.45-7.35(m,2h),7.3-7.2(m,3h),7.04(m,1h),6.0(m,1h),5.5-5.2(m,2h),5.1-5.0(m,1h),4.45-4.35(m,3h),3.1-2.9(m,4h),2.43-2.39(m,4h),1.8-1.7(m,3h),1.7-1.5(m,1h),1.5-1.33(m,5h).步驟3.在20℃向化合物3-4b(110mg,0.21mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp(130mg,0.43mmol)和dipea(0.5ml,3mmol)。在將混合物在20℃在氮氣下攪拌1.5h后，加入諾氟沙星(100mg,0.31mmol)。將混合物在20℃攪拌另外的1h并經制備性hplc純化(fa)，得到實施例3(102.1mg,57％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.15(s,1h),8.93(s,1h),8.10-8.08(d,1h),8.04(s,1h),7.93-7.90(m,2h),7.60-7.58(d,j＝8.0hz,2h),7.41-7.39(d,,2h),7.32-7.30(d,j＝8.0hz,2h),7.25(d,1h),7.20(d,1h),7.04-7.02(d,1h),6.0(m,1h),5.40(s,2h),5.1-5.0(m,3h),4.6-4.5(m,2h),4.5-4.35(m,1h),3.59(s,1h),3.2(s,4h),3.1-2.9(m,2h),2.42-2.40(m,4h),1.8-1.7(m,3h),1.7-1.6(m,1h),1.5-1.3(m,8h).實施例4.(s)-1-乙基-7-(4-((4-(2-(1-(乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-胍基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物4-1(1.3g,2mmol)在dcm/meoh(20ml/20ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基)-甲醇(370mg,3mmol)和eedq(989mg,4mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將殘留物經柱色譜純化(pe/etoac＝1/3)得到4-3(1.94g,收率:90％)在室溫經注射器向4-3(1.44g,2mmol)在dcm(50ml)中的溶液中加入4-4(1.2ml,9.56mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將殘留物濃縮并由甲基叔丁基醚洗滌，然后濾過并合并濾餅得到4-5(700mg,收率:70％).步驟2.向4-5(700mg,1.32mmol)在dme(10ml)中的溶液中加入4-6(424mg,1.58mmol)和nahco3(222mg,2.64mmol)在水(10ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl調節至ph＝3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮并經柱色譜純化(pe/etoac＝1/3)得到4-7(400mg,收率:37％)步驟3.在0℃向4-7(250mg,0.365mmol)、pnp碳酸鹽(223mg,0.731mmol)在dmf(4ml)中的溶液中加入dipea(142mg,1.095mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物(4-8)無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.在室溫向來自最后一步的混合物中加入諾氟沙星(234mg,0.73mmol)。在將混合物在室溫攪拌1h后，將其經制備性hplc和sfc純化，得到4-9(收率:30％).步驟5.在0℃向化合物4-9(100mg,0.1mmol)中加入tfa在dcm(1:5)中的溶液。將混合物在室溫攪拌3h。將混合物經nh3.h2o堿化為ph＝9。將殘留物經制備性hplc、然后sfc純化，得到實施例4(16.0mg,收率:15％).1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.83(s,1h),8.55(s,1h),7.97(d,j＝13.2hz,1h),7.62(d,j＝7.6hz,2h),7.35(d,j＝7.6hz,2h),7.17(s,1h),5.13(s,2h),4.55-4.52(m,3h),3.72(s,4h),3.34(s,4h),3.31–3.24(m,4h),2.58-2.54(m,4h),2.00–1.69(m,6h),1.52(s,3h),1.15–0.11(m,3h).實施例5.1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(4-((4-((s)-2-(1-((s)-1-苯基乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.將化合物5-1(50mg,0.1mmol)和5-2(15mg,0.12mmol)在dmf(10ml)中的混合物在室溫攪拌3h。將混合物濃縮并經制備性tlc純化(meoh/dcm＝1/10)得到5-3(50mg,99％).步驟2.在0℃向化合物5-3(40mg,0.078mmol)、pnp碳酸鹽(48mg,0.157mmol)在dmf(4ml)中的溶液中加入dipea(30mg,0.236mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物(5-4)無需進一步純化即可用于下一步。步驟3.在室溫向來自最后一步的混合物中加入諾氟沙星(51mg,0.157mmol)并攪拌1h。將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例5.(7mg,收率:8％)1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ8.86(s,1h),8.46(s,1h),8.00(d,j＝12.8hz,1h),7.61(d,j＝8hz,2h),7.35–7.33(m,2h),7.30(d,j＝7.2hz,2h),7.24(d,j＝7.2hz,2h),7.20(d,j＝14hz,2h),7.16(s,2h),5.12(s,2h),5.04(d,j＝7.2hz,1h),4.50–4.47(m,4h),3.71(s,4h),3.34(s,4h),3.22–3.03(m,2h),2.60–2.51(m,4h),1.94–1.86(m,3h),1.74–1.71(m,1h),1.60–1.45(m,7h).實施例6.1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(4-((4-((s)-2-(1-((s)-1-(噻吩-2-基)乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例6使用如實施例3的操作制備。其與實施例10共用中間體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.3(s,1h),10.13(s,1h),8.93(s,1h),8.25(d,1h),7.94-7.91(d,j＝12.0hz,1h),7.8(d,1h),7.60-7.58(d,j＝8.0hz,2h),7.33-7.30(d,j＝8.0hz,3h),7.20(d,1h),6.92-6.91(m,2h),5.95(m,1h),5.40(s,1h),5.25-5.15(m,1h),5.04(s,2h),4.65-4.4(m,2h),4.5-4.4(m,1h),3.7-3.5(s,4h),3.3(s,4h),3.1-2.85(m,2h),2.44-2.42(m,4h),1.8-1.7(m,3h),1.7-1.55(m,1h),1.46-1.45(d,j＝4.0hz,1h),1.45-1.3(m,5h).實施例7.7-(4-((4-((s)-2-(1-((r)-3-(烯丙基氧基)-3-氧代-1-(噻吩-3-基)丙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物7-1(10.0g,89.17mmol)和ch2(cooh)2(9.3g,89.17mmol)在etoh(100ml)中的溶液中加入nh4oac(13.7g,178.33mmol)。將混合物在80℃攪拌6h。將其冷卻至室溫，濾過，并用etoh(100ml)洗滌。收集濾餅，并減壓濃縮得到化合物7-2(8.0g,52.6％)，其為白色固體。1hnmrd2o400mhz,δ7.44(s,2h),7.13(d,j＝3.2hz,1h),4.69(t,j＝7.2hz,1h),2.84-2.73(m,2h).步驟2.向化合物7-2(6.0g,35.04mmol)和化合物7-3(60.0g)的混合物中逐滴加入tmscl(13.4ml,ρ＝0.85,105.13mmol)。將反應混合物在室溫在氮氣下攪拌過夜。將混合物減壓濃縮，并將殘留物用h2o(50ml)稀釋，經hcl溶液調節至ph1，并用etoac(50ml×3)洗滌。將水相經nh3h2o調節至ph12，并用etoac(50ml×3)萃取。將合并的etoac層經na2so4干燥，濾過，并減壓濃縮得到化合物7-4，其為油狀物(4.0g,54.1％).1hnmrdmso-d6400mhz,δ7.45-7.43(q,1h),7.31(s,1h),7.15(d,j＝4.8hz,1h),5.91-5.85(m,1h),5.27(dd,j＝17.2,1.6hz,1h),5.20-5.17(m,1h),4.53(d,j＝5.2hz,2h),4.31-4.27(m,1h),2.73-2.61(m,2h).步驟3.向化合物7-5(1.0g,2.46mmol)在dmf(20ml)中的混合物中加入dipea(636mg,4.92mmol)，隨后加入hatu(1.4g,3.69mmol)。將混合物在室溫攪拌15min，并加入化合物7-4(624mg,2.95mmol)。將反應混合物在室溫攪拌2h并經制備性hplc純化，得到化合物7-6，其為白色固體(800mg,54.1％).化合物7-6擴大至1.5g,并經sfc分離得到7-6a(580mg)和7-6b(560mg).7-6alcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.773min,ms＝600.1[m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.05(s,1h),8.25(d,j＝8.4hz,1h),7.74(d,j＝7.9hz,1h),7.56(d,j＝8.4hz,2h),7.45-7.43(q,1h),7.31(d,j＝2.6hz,1h),7.24(d,j＝8.4hz,2h),7.08(d,j＝4.0hz,1h),5.97(t,j＝5.6hz,1h),5.90-5.80(m,1h),5.43-5.37(m,3h),5.27(dd,j＝17.4,1.5hz,1h),5.17(dd,j＝10.4hz,1.3hz,1h),5.17(t,j＝5.7hz,1h),4.51(d,j＝5.3hz,2h),4.44-4.39(m,3h),3.06-2.98(m,1h),2.97-2.88(m,3h),2.48-2.39(m,4h),1.78-1.70(m,3h),1.64-1.55(m,1h),1.42-1.28(m,2h).7-6blcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.762min,ms＝600.1[m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.04(s,1h),8.26(d,j＝8.4hz,1h),7.79(d,j＝7.7hz,1h),7.57(d,j＝8.4hz,2h),7.39-7.37(q,1h),7.31(s,1h),7.24(d,j＝8.4hz,2h),7.07(d,j＝4.9hz,1h),5.97(t,j＝5.5hz,1h),5.91-5.81(m,1h),5.43-5.36(m,3h),5.26(dd,j＝17.3,1.4hz,1h),5.18(d,j＝10.4hz,1h),5.11(t,j＝5.7hz,1h),4.53-4.52(m,2h),4.44-4.40(m,3h),3.05-2.98(m,1h),2.97-2.85(m,3h),2.46-2.33(m,4h),1.77-1.72(m,3h),1.64-1.56(m,1h),1.42-1.30(m,2h).步驟4.向7-6a(50mg,0.083mmol)在無水dmf(5ml)中的溶液中加入dipea(107mg,0.83mmol)，隨后加入pnp碳酸鹽(60mg,0.20mmol)。將反應混合物在室溫攪拌過夜。然后加入諾氟沙星(64mg,0.20mmol)。將反應混合物在室溫攪拌另外的2h。將混合物濾過，并將濾液經制備性hplc純化，得到實施例7，其為白色固體(41.7g,53.5％).lcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.858min,ms＝473.3[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ15.32(br,1h),10.15(s,1h),8.95(s,1h),8.23(d,j＝8.0hz,1h),7.91(d,j＝13.0hz,1h),7.77(d,j＝7.5hz,1h),7.62(d,j＝8.0hz,2h),7.44-7.42(q,1h),7.35-7.31(m,3h),7.19(br,1h),7.08(d,j＝4.5hz,1h),5.98(br,1h),5.89-5.80(m,1h),5.44-5.37(m,3h),5.23(d,j＝17.6hz,1h),5.16(d,j＝10.5hz,1h),5.07(s,2h),4.57(br,2h),4.51(d,j＝5.5hz,2h),4.45-4.40(m,1h),3.61(br,4h),3.31(br,4h),3.06-3.01(m,1h),2.95-2.90(m,3h),2.47-2.40(m,4h),1.76-1.72(m,3h),1.62-1.59(m,1h),1.40-1.35(m,5h).實施例8.1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(4-((4-((s)-2-(1-((r)-1-(噻吩-3-基)乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例8使用如實施例3的操作制備，采用來自合成實施例3的中間體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.14(s,1h),8.92(s,1h),8.05-8.03(d,1h),7.93-7.90(d,j＝12.0hz,1h),7.85-7.83(d,1h),7.61-7.59(d,j＝8.0hz,1h),7.36-7.35(m,1h),7.33-7.31(d,j＝8.0hz,2h),7.24(s,1h),7.20(m,1h),5.5(m,1h),7.04-7.03(m,1h),6.0(m,1h),5.40(s,2h),5.1-5.0(m,3h),4.6-4.5(m,2h),4.5-4.35(m,1h),3.59(s,1h),3.2(s,4h),3.05-2.9(m,2h),2.44-2.41(m,4h),1.8-1.7(m,3h),1.7-1.6(m,1h),1.5-1.35(m,8h).實施例9.1-乙基-6-氟-7-(4-((4-((2s)-2-(1-(4-甲基戊-2-基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例9使用如實施例5的操作制備。lcms:(5-95ab,1.5min),t＝0.858min,m＝8.352(m+1)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.22(s,1h),8.85(s,1h),7.89-7.71(m,2h),7.65-7.64(d,j＝8.8hz,2h),7.53-7.50(m,1h),7.34-7.31(d,j＝8.8hz,2h),7.18-7.13(m,1h),6.06(s,1h),5.45(d,j＝3.2hz,2h),5.05(s,2h),4.60-4.42(m,2h),3.91-3.88(t,j＝6.4hz,1h),3.59(s,4h),3.26(s,4h),3.03-2.99(m,1h),2.97-2.91(m,1h),2.41-2.39(m,5h),1.74-1.71(m,3h),1.7-1.5(m,2h),1.5-1.3(m,6h),1.2-1.1(m,1h),1.03-1.00(m,3h),0.81(m,6h).實施例10.1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(4-((4-((s)-2-(1-((r)-1-(噻吩-2-基)乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例10使用如實施例3的操作制備，其與實施例6共用中間體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.3(s,1h),10.13(s,1h),8.94(s,1h),8.25(d,1h),7.94-7.91(d,j＝12.0hz,1h),7.8(d,1h),7.62-7.60(d,j＝8.0hz,2h),7.34-7.31(d,j＝8.0hz,2h),7.28-7.27(d,j＝4.0hz,1h),7.20(d,1h),6.93(s,1h),6.90-6.88(m,1h),5.95(m,1h),5.40(s,1h),5.25-5.15(m,1h),5.05(s,2h),4.65-4.4(m,2h),4.5-4.4(m,1h),3.7-3.5(s,4h),3.3(s,4h),3.1-2.85(m,2h),2.44-2.42(m,4h),1.85-1.7(m,3h),1.7-1.55(m,1h),1.47-1.46(d,j＝4.0hz,1h),1.46-1.3(m,5h).實施例11.1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(4-((4-((2s)-2-(1-(戊-2-基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例11使用如實施例5的操作制備。lcms:(5-95ab,1.5min),t＝0.848min,m＝821.2(m+1)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.15-10.13(m,1h),8.96(s,1h),7.97-7.93(d,j＝13.2hz,1h),7.81-7.74(m,1h),7.63(d,j＝8.8hz,2h),7.50-7.46(m,1h),7.34(d,j＝8.4hz,2h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.98-5.95(t,j＝5.6hz,1h),5.42(s,2h),5.06(s,2h),4.60-4.57(q,j＝6.8hz,2h),4.44-4.42(m,1h),3.81(m,1h),3.60(s,4h),3.49-3.36(s,4h),3.33-3.29(m,2h),3.1-2.9(m,2h),2.42-2.39(m,4h),1.73(m,4h),1.63-1.58(m,1h),1.41(m,5h),1.35-1.30(m,2h),1.04-1.02(m,3h),0.84-0.78(m,3h).實施例12.(s)-1-乙基-6-氟-7-(4-((4-(2-(1-(異丙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.將化合物12-1(120mg,0.3mmol)、hatu(171mg,0.45mmol)、dipea(195mg,1.5mmol)在dmf(10ml)中的混合物在室溫攪拌30min。然后加入化合物12-2(9mg,0.3mmol)。將反應混合物在室溫攪拌3h。將混合物濃縮并經制備性tlc純化(meoh/dcm＝1/10)得到12-3(180mg,136％).步驟2.在0℃向化合物12-3(180mg,0.4mmol)、pnp碳酸鹽(245mg,0.81mmol)在dmf(4ml)中的溶液中加入dipea(156mg,1.21mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物(12-4)無需進一步純化即可用于下一步。步驟3.在室溫向最后一步的混合物中加入諾氟沙星(259mg,0.81mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例12(18.5mg,收率:6％，經歷兩步).1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ8.88(s,1h),8.02-7.99(d,j＝13.2hz,1h),7.65-7.62(d,j＝8.8hz,3h),7.37-7.35(d,j＝8.4hz,2h),7.19(d,j＝6.4hz,1h),5.13(s,2h),4.54-4.50(m,4h),4.06-4.01(m,1h),3.73(s,4h),3.35(s,4h),3.26-3.19(m,2h),2.57-2.52(m,4h),1.94-1.90(m,2h),1.81-1.74(m,2h),1.59-1.53(m,3h),1.21-1.13(m,6h).實施例13.(s)-1-乙基-7-(4-((4-(2-(1-(乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.將化合物13-1(1g,2.63mmol)和hcl在二噁烷(4m,10ml)中的混合物在室溫攪拌2h。將溶液濃縮得到13-2。步驟2.向化合物13-2(651mg,2.326mmol)在dme-h2o(10ml/2ml)中的溶液中加入化合物13-3(623mg,2.326mmol)和飽和nahco3(10ml)的混合物。將混合物在室溫攪拌16h。將溶液濃縮并將殘留物經制備性hplc純化，得到13-4.1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.33(d,j＝8.8hz,2h),4.57-4.52(m,3h),3.29-3.10(m,4h),2.60-2.53(m,4h),2.05-1.50(m,6h),1.16(t,j＝7.6hz,3h).lcms(esi):m/z434.1[m+h+].步驟3.向13-4(60mg,0.139mmol)在dcm(10ml)中的溶液中加入dipea(90mg,0.695mmol)和pnp碳酸鹽(84mg,0.277mmol)。將混合物在25℃攪拌2天。將混合物濃縮并溶于dmf(5ml)中且加入諾氟沙星(88mg,0.278mmol)。將混合物在25℃攪拌1.5h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例13.1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.86(s,1h),8.00(d,j＝13.2hz,1h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.35(d,j＝8.8hz,2h),7.18(d,j＝6.8hz,1h),5.11(s,2h),4.57-4.48(m,3h),3.71(s,4h),3.33-3.32(m,4h),3.26-3.08(m,4h),2.60-2.47(m,4h),1.93-1.50(m,10h),1.14(t,j＝7.2hz,3h).lcms(esi):m/z779.4.[m+h+].實施例14.1-乙基-6-氟-7-(4-((4-((s)-2-(1-((r)-3-甲基丁-2-基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例14使用如實施例5的操作制備.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.16(s,1h),8.96(s,1h),7.97-7.93(d,j＝13.2hz,1h),7.85-7.83(d,j＝7.6hz,1h),7.63-7.61(d,j＝8.8hz,2h),7.43-7.41(d,j＝8.8hz,1h),7.35-7.33(d,j＝8.8hz,2h),7.22-7.21(d,j＝6.8hz,1h),6.00-5.97(m,1h),5.43(s,2h),5.07(s,2h),4.61-4.56(m,2h),4.46-4.41(m,1h),3.62(m,6h),3.41(s,2h),3.30(s,4h),3.12-2.89(m,2h),2.45-2.39(m,4h),1.76-1.62(m,4h),1.44-1.39(m,3h),1.00(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝5.6hz,6h).實施例15.7-(4-((4-((s)-2-(3,3-二甲基-1-((r)-1-苯基乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向ph3p(91.8g,350mmol)在mecn(250ml)中的攪拌溶液中逐滴加入溴(56g,350mmol)在mecn(40ml)中的溶液。然后將化合物15-1(18.2g,175mmol)加至混合物中。將反應混合物回流加熱16h。除去溶劑并將殘留物蒸餾得到15-2，其為淺黃色油狀物(14g,35％).1hnmrcdcl3400mhz,δ3.40(s,4h),1.17(s,6h).步驟2.在0℃向nah(3.4g,60％,84.9mmol)在dmf(40ml)中的混懸液中逐滴加入化合物15-3(11.14g,69.6mmol)。將混合物在氮氣下在70℃加熱1h。然后加入化合物15-2(8.0g,34.8mmol)并在氮氣下攪拌60h。將混合物倒入nh4cl水溶液(20g，300ml)中并用pe(50mlx5)萃取。將有機相濃縮并經色譜純化(pe)得到化合物15-4(3.0g,收率:37.9％).1hnmrcdcl3400mhzδ4.21-4.16(m,4h),2.36(s,4h),1.26-1.22(m,6h),1.11(s,6h).步驟3.向化合物15-4(3.0g,13.9mmol)在etoh(10ml)中的攪拌溶液中在室溫加入koh水溶液(85％,779mg,13.9mmol)。將反應混合物在76℃攪拌3h。將混合物濃縮并在etoac(75ml)和h2o(125ml)之間分配。將水相用1nhcl酸化直到ph＝3并用etoac(75mlx2)萃取。將有機層濃縮得到化合物15-5(1.9g,68.3％)，其為油狀物。1hnmrcdcl3400mhz,δ11.62(s,1h),4.26-4.21(m,2h),2.42(s,4h),1.29-1.26(m,3h),1.15-1.13(d,j＝7.2hz,6h).步驟4.在室溫向化合物15-5(500mg,0.5mmol)在dcm(8ml)中的攪拌溶液中加入hatu(285.0mg,0.75mmol)和dipea(193.5mg,1.5mmol)。在將反應混合物在室溫攪拌30min后，加入15-6(90.9mg,0.75mmol)并在室溫攪拌16h。將混合物濃縮并經色譜純化(dcm:meoh＝90:10)得到化合物15-7，其為白色固體(70mg,46.2％)lcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.807min,ms＝303.9[m+1]1hnmrcdcl3400mhz,δ7.34-7.22(m,5h),6.19(d,j＝7.2hz,1h),5.14-5.06(m,1h),4.22-4.16(m,2h),2.46-2.31(m,4h),1.46(d,j＝6.8hz,3h),1.25-1.21(m,3h),1.09(s,6h).步驟5.在室溫向化合物15-7(70mg,0.23mmol)在meoh/thf/h2o(1ml/2ml/2ml)中的攪拌溶液中加入lioh·h2o(19.4mg,0.462mmol)。將反應混合物在室溫攪拌1h。除去有機溶劑并在etoac(30ml)和h2o(25ml)之間分配。將水相用1nhcl酸化為ph＝3并用etoac(30ml)萃取。將有機相濃縮得到化合物15-8，其為白色固體(50mg,78.7％)。1hnmrcdcl3400mhz,δ7.34-7.23(m,5h),6.30(d,j＝7.2hz,1h),5.14-5.07(m,1h),2.50-2.31(m,4h),1.48(d,j＝6.8hz,3h),1.11(d,j＝16hz,6h).步驟6.在室溫向化合物15-8(50mg,0.18mmol)在dcm(10ml)中的攪拌溶液中加入hatu(102.6mg,0.27mmol)和dipea(46.44mg,0.36mmol)并攪拌30min。將化合物15-9(53mg,0.19mmol)加至反應混合物并在室溫攪拌16h。將混合物濃縮并經色譜純化(dcm:meoh＝85:15)得到化合物15-10(60mg,61.8％)，其為白色固體。lcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.803min,ms＝538.2[m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.19(d,j＝8hz,1h),7.58(d,j＝8.4hz,2h),7.31-7.17(m,7h),5.07-5.00(m,1h),4.56(s,2h),4.51-4.47(m,1h),3.21-3.17(m,1h),2.45-2.35(m,4h),1.89-1.85(m,1h),1.75-1.72(m,1h),1.55-1.47(m,5h),1.08(d,j＝2hz,6h).步驟7.在室溫向化合物15-10(60mg,0.11mmol)在無水dmf(3ml)中的攪拌溶液中加入pnp碳酸鹽(15-11)(66.9mg,0.22mmol)和dipea(70.9mg,0.55mmol)并在室溫攪拌3h。混合物(15-12)無需進一步純化即可用于下一步。步驟8.在室溫向最后一步的反應混合物中加入諾氟沙星(70.2mg,0.22mmol)。將混合物在室溫攪拌16h并經制備性hplc純化，得到實施例15(14.4mg,收率:14.8％).lcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.887min,ms＝883.4.4[m+1],442.4[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.24(s,1h),8.94(s,1h),8.39(s,1h),8.13(d,j＝2hz,1h),7.965-7.963(m,2h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.47(d,j＝8.8hz,2h),7.30-7.26(m,4h),7.19-7.18(m,2h),6.05(s,1h),5.46(s,2h),5.07(s,2h),4.97-4.91(m,1h),4.57(s,2h),4.45(s,1h),3.62(s,4h),3.35(s,4h),3.05-3.02(m,1h),2.96-2.92(m,1h),2.32-2.26(m,4h),1.73-1.71(m,1h),1.63-1.61(m,1h),1.42-1.37(m,8h),0.99(s,6h).實施例16.(s)-1-乙基-7-(4-((4-(2-(1-(乙基氨基甲酰基)環戊烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在室溫向化合物16-1(10g,62.4mmol)在dmf(50ml)中的溶液中加入1,4-二溴丁烷(14.8g,68.6mmol)、k2co3(21.5g,155.8mmol)和化合物16-2(1.4g,6.2mmol)并在室溫攪拌16h。減壓除去溶劑，并將殘留物在etoac(200ml)和h2o(80ml)之間分配，將合并的有機相干燥并濃縮得到化合物16-3，其為油狀物(10.0g,收率:75％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.15-4.10(m,4h),2.14-2.10(m,4h),1.64-1.61(m,4h),1.20-1.17(m,6h).步驟2.在室溫向化合物16-3(6.0g,28.0mmol)在etoh(20ml)中的溶液中加入85％koh水溶液(1.85g,28.0mmol)并在76℃攪拌3h。除去溶劑并將殘留物在etoac(20ml)和h2o(30ml)之間分配。將水相用1nhcl酸化為ph＝3并用etoac(20ml×2)萃取。將有機層干燥并濃縮得到化合物16-4，其為油狀物(2.5g,收率:48.0％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.61-10.60(m,1h),4.21-4.15(m,2h),2.21-2.18(m,4h),1.72-1.65(m,4h),1.26-1.22(m,3h).步驟3.在0℃向化合物16-4(2.5g,13.4mmol)和化合物16-5(1.62g,14.1mmol)在無水thf(20ml)中的溶液中加入dcc(3.04g,14.74mmol)。將混合物在氮氣下在室溫攪拌16h。將混合物濾過并將濾液濃縮得到粗化合物16-6，其無需進一步純化即可用于下一步。1hnmr(400mhz,meoh-d4)δ4.23-4.18(m,2h),2.79(s,4h),2.36-2.23(m,4h),1.76-1.72(m,4h),1.30-1.28(t,j＝7.2hz,3h).步驟4.在室溫向化合物16-6(1.0g,3.53mmol)在dmf(15ml)中的溶液中加入化合物16-7(658.7mg,2.35mmol)。將反應混合物在室溫攪拌16h。將混合物濃縮并經硅膠柱色譜純化(dcm:meoh＝10:1)得到化合物16-8，其為白色固體(150mg,收率:14.2％).lcms(esi):m/z449.0[m+1].步驟5.在室溫向化合物16-8(150mg,0.33mmol)在thf/meoh/h2o(3ml/3ml/1.5ml)中的溶液中加入lioh·h2o(28.14mg,0.67mmol)。將反應混合物在室溫攪拌16h。將混合物濃縮并在etoac(15ml)和h2o(20ml)之間分配。將水相用1nhcl酸化為ph＝3，用etoac(15ml×3)萃取并濃縮得到粗化合物16-9，其為白色固體，其無需進一步純化即可用于下一步。lcms(esi):m/z420.9[m+1].步驟6.在室溫向化合物16-9(250mg,0.595mmol)在dmf(15ml)中的溶液中加入hatu(339.2mg,0.89mmol)和dipea(268.6mg,2.08mmol)并攪拌30min。將乙胺鹽酸鹽(96.98mg,1.19mmol)加至反應混合物并在室溫攪拌16h。將混合物濾過并經制備性hplc和sfc純化，得到化合物16-10，其為白色固體(30mg,收率:11.3％).lcms(esi):m/z447.9[m+1].1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(s,1h),7.75-7.73(m,2h),7.57-7.55(m,2h),7.23-7.21(m,2h),5.97-5.94(m,1h),5.39(s,2h),5.11-5.08(m,1h)，4.41-4.36(m,2h),4.35-4.32(s,1h)，3.13-3.06(m,2h),2.97-2.90(m,2h),2.16-2.14(m,2h),2.11-2.05(m,1h),1.95-1.93(m,1h),1.92-1.91(m,1h),1.51-1.49(m,4h),1.39-1.37(m,1h),1.20-1.19(m,2h),1.02-0.98(t,j＝7.2hz,3h).步驟7.在0℃向化合物16-10(30mg,0.067mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入化合物16-11(40.7mg,0.134mmol)和dipea(43.22mg,0.335mmol)。在將混合物在室溫攪拌5h后，其無需進一步純化即可直接用于下一步。步驟8.在室溫向來自最后一步的混合物中(16-12)加入化合物16-13(42.8mg,0.134mmol)。將混合物在室溫攪拌1h，然后經制備性hplc純化，得到預期產物實施例16.(35.0mg收率:66.0％)1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.09(s,1h),8.95(s,1h),7.93(d,j＝13.2hz,1h),7.80-7.71(m,2h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.32(d,j＝8.4hz,2h),7.18(d,j＝8.0hz,1h),5.98-5.91(m,1h),5.39(s,2h),5.04(s,2h),4.60-4.52(m,2h),4.38-4.32(m,1h),3.59(s,4h),3.30(s,4h),3.12-3.08(m,2h),2.96-2.85(m,2h),2.14-2.11(m,2h),2.10-2.00(m,1h),1.94-1.89(m,1h),1.63-1.40(m,5h),1.38-1.30(m,5h),1.02-0.98(t,j＝7.2hz,3h).實施例17.7-(4-((4-((s)-2-(1-((s)-3-(烯丙基氧基)-3-氧代-1-(噻吩-3-基)丙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例17使用如實施例7的操作制備，其使用來自合成實施例7的中間體。實施例18.(s)-1-乙基-7-(4-((4-(2-(1-(乙基氨基甲酰基)環己烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.在室溫向化合物18-1(4.0g,17.5mmol)在etoh(20ml)中的溶液中加入85％koh水溶液(1.15g,17.5mmol)。在將反應混合物在76℃攪拌3h后，將其濃縮并在etoac(15ml)和h2o(25ml)之間分配。將水相用1nhcl酸化為ph＝3并用etoac(15ml×2)萃取。將有機層濃縮得到化合物18-2，其為油狀物(2.5g,收率:71.4％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.20-4.15(m,2h),2.03-1.90(m,4h),1.56-1.47(m,6h),1.45-1.43(t,4.0hz,3h).步驟2.在0℃向化合物18-2(2.5g,12.5mmol)和18-3(1.51g,13.13mmol)在無水thf(20ml)中的溶液中加入dcc(2.83g,13.35mmol)。將混合物在氮氣下在室溫攪拌16h。將混合物濾過并將濾液濃縮得到粗化合物18-4，其無需進一步純化即可用于下一步(2.0g,收率:53.8％).步驟3.在室溫向化合物18-4(2.0g,6.7mmol)在dmf(15ml)中的攪拌溶液中加入化合物18-5(1.26g,4.5mmol)。將反應混合物在室溫攪拌16h。將混合物濃縮并經柱色譜純化(dcm:meoh＝10:1)得到化合物18-6，其為白色固體(700mg,收率:22.4％).lcms(esi):m/z463.0[m+1].步驟4.在室溫向化合物18-6(700mg,1.50mmol)在thf/meoh/h2o(4ml/4ml/2ml)中的溶液中加入lioh·h2o(126.0mg,3.0mmol)。在將反應混合物在室溫攪拌16h后，將其濃縮并在etoac(25ml)和h2o(30ml)之間分配，將水相用1nhcl酸化為ph＝3，用etoac(25ml×2)萃取并濃縮得到粗化合物18-7，其為白色固體，其無需進一步純化即可用于下一步。lcms(esi):m/z435.0[m+1].步驟5.在室溫向化合物18-7(300mg,0.69mmol)在dmf(15ml)中的溶液中加入hatu(395.2mg,1.04mmol)和dipea(267.03mg,2.07mmol)并在室溫攪拌30min。將乙胺(112.47mg,1.38mmol)加至反應混合物并在室溫攪拌16h。將混合物濾過并經制備性hplc和sfc純化，得到化合物18-8(60mg,收率:18.8％)，其為白色固體。lcms(esi):m/z462.0[m+1].1hnmr(400mhz,meoh–d4)δ7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.28(d,j＝8.8hz,2h),4.58(s,1h),4.54-4.50(m,3h)，3.62-3.57(m,1h),3.26-3.18(s,2h)，3.10-3.07(m,2h),2.16-2.02(m,2h),1.85-1.81(m,3h),1.73-1.71(m,1h),1.59-1.50(m,5h),1.18-1.14(m,1h),1.12-1.09(m,3h).步驟6.在0℃向化合物18-8(100mg,0.216mmol)在無水dmf(3ml)中的攪拌溶液中加入化合物18-9(131.3mg,0.432mmol)和dipea(139.3mg,1.08mmol)。將混合物(18-10)在室溫攪拌3h并無需進一步純化即可用于下一步。步驟7.在室溫向來自最后一步的混合物(18-10)中加入諾氟沙星(18-11)(137.9mg,0.432mmol)并在室溫攪拌1h。將混合物經制備性hplc純化，得到實施例18(98.0mg收率:56.2％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.30(s,1h),10.09(s,1h),8.93(s,1h),7.92(d,j＝13.2hz,1h),7.78-7.72(m,1h),7.67(d,j＝7.6hz,1h),7.63(d,j＝8.8hz,2h),7.32(d,j＝8.8hz,2h),7.18(d,j＝8.0hz,1h),5.98-5.92(m,1h),5.38(s,2h),5.04(s,2h),4.57-4.55(m,2h),4.39-4.31(m,1h),3.59(s,4h),3.31(s,4h),3.31-3.08(m,2h),3.00-2.86(m,2h),2.12-2.03(m,1h),2.01-1.91(m,1h),1.90-1.83(m,3h),1.58-1.67(m,1h),1.40-1.25(m,11h),1.01-0.97(t,j＝7.2hz,3h).實施例19.7-(4-((4-((s)-2-(2,2-二甲基-3-氧代-3-((r)-1-苯基乙基氨基)丙酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向化合物19-1(5.0g,31.22mmol)在無水thf(70ml)中的溶液中緩慢加入nah(3.75g,93.65mmol,c＝60％)。在將混合物在0℃攪拌10m后，在0℃逐滴加入mei(6.15ml,124.88mmol)，并將反應混合物在0℃攪拌2h。將混合物用etoac(50ml)稀釋，濾過，將濾液減壓濃縮。將殘留物用etoac(50ml)稀釋，濾過，并將濾液濃縮得到化合物19-2(3.5g,59.6％)，其為油狀物。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ4.13-4.08(q,4h),1.33(s,6h),1.16(t,j＝6.8hz,6h).步驟2.向化合物19-2(3.0g,15.94mmol)在etoh(20ml)中的溶液中加入koh水溶液(85％,894mg,15.94mmol)。將反應混合物回流加熱1h。在減壓除去有機溶劑后，將其用h2o(20ml)稀釋，并用pe(10ml×2)洗滌。將水相用濃hcl溶液調節至ph2并用etoac(20ml×3)萃取。將合并的etoac層經na2so4干燥，濾過，并減壓濃縮得到化合物19-3(1.5g,58.8％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ3.98-3.93(q,4h),1.17(s,6h),1.12(t,j＝7.2hz,3h).步驟3.向化合物19-3(1.0g,6.24mmol)在無水dcm(20ml)中的混合物中加入dipea(1.61g,12.48mmol)，隨后加入hatu(2.85g,7.49mmol)。在將混合物在室溫攪拌15min后，并加入化合物19-4(908mg,7.49mmol)。將反應混合物在室溫攪拌3h，并用檸檬酸溶液(10ml×3)、鹽水(10ml×1)洗滌，經na2so4干燥，濾過，并減壓濃縮。將殘留物經柱色譜純化(pe/etoac＝5:1)得到化合物19-5，其為白色固體(1.30g,79.3％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.00(d,j＝8.0hz,1h),7.31-7.28(m,4h),7.22-7.18(m,1h),4.97-4.90(m,1h),4.12-4.01(m,2h),1.36(d,j＝6.8hz,3h),1.33(d,j＝2.4hz,6h),1.14(d,j＝6.8hz,3h).步驟4.向化合物19-5(1.5g,5.70mmol)在meoh/h2o混合物(15ml/5ml)中的溶液中加入lioh·h2o(478mg,11.40mmol)。將反應混合物回流加熱2h。減壓除去有機溶劑，并將水漿液用dcm(5ml×3)洗滌。將其用濃hcl溶液調節至ph1并用etoac(10ml×3)萃取。將合并的etoac層經na2so4干燥，濾過，并減壓濃縮得到化合物19-6，其為白色固體(800mg,59.7％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.45(br,1h),7.95(d,j＝8.0hz,1h),7.32-7.27(m,4h),7.23-7.17(m,1h),4.97-4.90(m,1h),1.36(d,j＝6.8hz,3h),1.31(d,j＝3.6hz,6h).步驟5.向化合物19-6(167mg,0.71mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入dipea(183mg,1.42mmol)，隨后加入hatu(323mg,0.85mmol)。將混合物在室溫攪拌10min，并加入化合物19-7(200mg,0.71mmol)。在將反應混合物在室溫攪拌2h后，將其經制備性hplc純化，得到化合物19-8，其為白色固體(80mg,22.7％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.05(s,1h),8.11(d,j＝8.0hz,1h),7.88(d,j＝7.6hz,1h),7.57-7.54(m,2h),7.32-7.25(m,4h),7.22-7.15(m,3h),5.95(t,j＝5.6hz,1h),5.39(s,2h),5.08(br,1h),4.98-4.94(m,1h),4.41(s,2h),4.36-4.31(m,1h),3.00-2.89(m,2h),1.78-1.75(m,1h),1.63-1.59(m,1h),1.40-1.33(m,8h),1.30(s,3h).步驟6.向化合物19-8(80mg,0.16mmol)在無水dmf(4ml)中的溶液中加入dipea(103mg,0.80mmol)，隨后加入pnp碳酸鹽(97mg,0.32mmol)。在將其在室溫在氮氣下攪拌2h后，加入諾氟沙星(102mg,0.32mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h，濾過，并將濾液經制備性hplc純化，得到實施例19，其為白色固體(81mg,60.0％).lcms(esi):rt＝0.854min,m/2+h+＝422.2.方法＝5-95/1.5min.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.30(br,1h),10.16(s,1h),8.95(s,1h),8.11(d,j＝8.0hz,1h),7.95-7.91(m,2h),7.64(d,j＝8.8hz,2h),7.35-7.27(m,6h),7.21-7.17(m,2h),5.97(t,j＝5.6hz,1h),5.42(s,2h),5.07(s,2h),5.00-4.97(m,1h),4.58-4.55(m,2h),4.39-4.33(m,1h),3.61(s,4h),3.31(s,4h),3.02-2.92(m,2h),1.80-1.78(m,1h),1.64-1.62(m,1h),1.42-1.33(m,14h).實施例20.(s)-7-(4-((4-(6-氨基-2-(1-(乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在室溫向化合物20-1(5g,10.7mmol)在dcm中的攪拌溶液中加入化合物20-2(5.5ml,53mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將反應混合物用h2o萃取并將合并的水層濃縮得到20-3.(收率:95％)步驟2.向化合物20-4(1.5g,5.6mmol)在dme(50ml)中的溶液中加入化合物20-3(2.75g,11.2mmol)和nahco3(940mg,11.2mmol)在水(50ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到化合物20-5.(收率:80％)lcms(esi):m/z400.0[m+h+].步驟3.向化合物20-5(1g,2.5mmol)在dcm和meoh混合物(20ml,10ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基)甲醇(20-6)(462mg,3.75mmol)和eedq(1.236g,5mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將殘留物經柱色譜純化(pe/etoac＝1/3)得到20-7(收率:60％).lcms(esi):m/z505.1[m+h+].步驟4.在0℃向化合物20-7(180mg,0.36mmol)在dmf(6ml)中的溶液中加入化合物20-8(219mg,0.72mmol)和dipea(140mg,1.08mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物(20-9)無需進一步純化即可用于下一步。(收率:100％)lcms(esi):m/z670.6[m+h+].步驟5.在室溫向粗的20-9混合物中加入諾氟沙星(230mg,0.72mmol)并在室溫攪拌1h。將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物20-11.(收率:60％)lcms(esi):m/z850.5[m+h+].步驟6.在0℃向化合物20-11中加入tfa和dcm溶液(1:1)。將混合物在室溫攪拌1h。將混合物用nh3.h2o堿化為ph＝9。將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到實施例20(收率:30％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.26(s,1h),9.43(hcooh),8.97(d,j＝7.6hz,1h),7.99-7.89(m,6h),7.67-7.65(m,2h),7.39-7.33(m,2h),7.23-7.21(m,1h),5.06(s,2h),4.72-4.60(m,2h),4.40(s,1h),3.80-3.55(m,6h),3.31(s,4h),3.15-3.12(m,2h),2.76-2.73(m,2h),2.48-2.41(m,2h),1.81-1.69(m,4h),1.59-1.55(m,2h),1.43-1.34(m,5h),1.07-0.98(m,3h).實施例21.(s)-7-(4-((4-(5-氨基-2-(1-(乙基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向21-1(10.0g,0.06mol)在h2o(300ml)中的溶液中加入cu2(oh)2co3(24.0g,0.12mol)。在將混合物在100℃攪拌1h后，將其快速濾過。將na2co3(20.0g,0.18mol)加至濾液中。在將其在室溫攪拌20min后，在室溫逐滴加入alloccl(12.0g,0.10mol)并在室溫攪拌3h。將混合物濾過并用h2o洗滌，然后加入硫代乙酰胺(7.5g,0.10mol)。在將其在50℃攪拌3h后，加入hcl(aq)調節ph＝3-4。將混合物回流加熱1h。在將熱混合物濾過后，將濾液濃縮直到白色固體沉淀析出。將其冷卻至室溫并濾過得到21-2，其為白色固體(4.5g,35％)步驟2.向21-2(1.0g,4.6mmol)在thf(30ml)中的溶液中加入dipea(1.9g,15.0mmol)和化合物21-3(1.2g,4.6mmol)。在將其在100℃攪拌4h后，將混合物冷卻至室溫，加入水(100ml)，隨后加入hcl(aq)調節ph＝2-3。將混合物用etoac(50ml×2)萃取。將有機層用鹽水(50ml)洗滌，經na2so4干燥并濃縮得到粗的21-4，其為棕色固體(1.3g,粗的).步驟3.向21-4(1.2g,3.2mmol)在dcm(50ml)中的溶液中加入eedq(1.1g,4.5mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(750mg,6.0mmol)。在將混合物在室溫攪拌4h后，加入水(50ml)。將混合物用dcm(60ml×2)萃取，經na2so4干燥，濃縮，并經柱色譜純化(pe:etoac＝1:20)得到21-5，其為黃色油狀物(500mg,30％).步驟4.向21-5(500mg,1.05mmol)在dcm(30ml)中的溶液中加入dipea(650mg,5.0mmol)和pnp碳酸鹽(320mg,1.5mmol)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑，并將殘留物溶于dmf(20ml)。加入dipea(400mg,3.0mol)和諾氟沙星(380mg,1.2mmol)。將混合物在100℃攪拌5h，然后冷卻至室溫，加入飽和nacl(100ml)并濾過得到粗產物，其為黃色固體(300mg,ms＝820.2,m+1).向上述粗產物(300mg)在thf(30ml)中的溶液中加入pd(pph3)4(80mg,0.07mmol)和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1h,3h,5h)-三酮(1.0g,6.4mmol)。將混合物在50℃在氮氣下攪拌16h并冷卻至室溫將混合物濾過，濃縮并經制備性hplc純化，得到實施例21(24mg,8％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10,37(s,1h),8.94(s,1h),7.94-7.89(m,6h),7.65-7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.31(m,2h),7.19(d,j＝7.6hz,1h),5.04(s,2h),4.63-4.54(m,2h),4.47-4.41(m,1h),3.68-3.53(m,6h),3.29(s,4h),3.14-3.08(m,2h),2.80-2.77(m,2h),2.48-2.42(m,2h),1.88-1.63(m,6h),1.48(t,j＝6.8hz,3h),1.05-0.95(t,j＝7.2hz,3h).實施例22.7-(4-((4-(2-(3-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)異噁唑-5-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向化合物22-1(50.0g,0.43mol)和na2co3(90.0g,0.85mol)在thf和h2o(300ml/300ml)中的混懸液中緩慢加入cbzcl(84.0g,0.49mol)。將反應混合物溫熱至室溫并在室溫攪拌16h。除去有機溶劑并將水溶液用etoac(200ml)萃取。將水溶液用1mhcl酸化至ph＝2，然后用etoac(200ml×2)萃取。將合并的有機層用鹽水(150ml)洗滌，經無水na2so4干燥，濾過并濃縮得到粗的22-2，其為白色固體，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.向化合物22-2(20g,79.6mmol)在無水dcm(200ml)中的溶液中加入hatu(35g,92.1mmol)和dipea(28g,217mmol)。在將其在室溫攪拌15min后，加入n-甲氧基甲胺鹽酸鹽(11g,112.8mmol)。在將溶液攪拌3h后，將其用1mhcl、飽和nahco3和鹽水洗滌。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮并經硅膠柱色譜純化，得到化合物22-3(12g,51.2％)。步驟3.在-78℃在氮氣下將dibal-h(30ml,1m在甲苯中)逐滴加至化合物22-3(4g,13.6mmol)在無水dcm(150ml)中的溶液中。在將溶液在-78℃攪拌6h后，將其用meoh(100ml)和水(10ml)淬滅。將混懸液濾出并將濾液經na2so4干燥。除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化，得到化合物22-4，其為無色油狀物(1.1g,34.4％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.65(s,1h),7.37-7.32(m,5h),5.35-5.33(m,1h),5.12(s,2h),4.38-4.32(m,1h),2.36-2.28(m,1h),1.05-1.03(d,j＝7.2hz,3h),0.95(d,j＝6.8hz,3h).步驟4.向化合物22-4(110mg,0.47mmol)在etoh(10ml)中的溶液中加入乙酸鈉(57.5mg,0.7mmol)和羥胺鹽酸鹽(49mg,0.7mmol)。在將反應混合物在80℃攪拌16h后，除去溶劑并將殘留物溶于水并用etoac(30ml×2)萃取。將合并的有機層用鹽水(30ml)洗滌，經無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮得到化合物22-5，其為白色固體其無需進一步純化即可用于下一步。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.97(s,0.6h),10.73(s,0.3h),7.49-7.45(m,1h),7.39-7.29(m,5h),7.18(d,j＝7.2hz,0.3h),6.54(d,j＝6.8hz,0.6h),5.02(s,2h),4.63-4.58(m,0.6h),3.88-3.82(m,0.3h),1.89-1.78(m,1h),0.84(q,j＝6.8hz,6h).lcms(esi):m/z251.0[m+h+].步驟5.向化合物22-5(800mg,3.2mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入ncs(470mg,3.5mmol)。在將混合物在40℃攪拌1h后，將其用etoac(50ml)和水(20ml)稀釋。分離有機層并用鹽水(30ml×5)洗滌，經na2so4干燥，濾過并濃縮得到化合物22-6，其直接用于下一步。步驟6.在0℃向化合物22-7(168mg,2.4mmol)在dcm(10ml)中的攪拌溶液中加入tea(240mg,2.4mmol)。在將其攪拌30min后，緩慢加入化合物22-6(1.2mmol)在dcm(10ml)中的溶液。將反應混合物溫熱至室溫并在室溫攪拌16h。將水加至反應混合物并分離各層并將水層用dcm(20ml×3)萃取。將合并的有機層用鹽水(20ml)洗滌，經無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化，得到化合物22-8，其為淡黃色固體(150mg,39.3％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34-7.31(m,5h),6.09(s,1h),5.41(d,j＝8.0hz,1h),5.14-5.06(m,2h),4.96(d,j＝6.4hz,1h),4.78-4.74(q,j＝9.2hz,1h),2.17-2.08(m,1h),1.55(d,j＝6.8hz,3h),1.03(d,j＝6.8hz,3h),0.96-0.91(t,j＝9.6hz,6h).步驟7.在0℃向化合物22-8(1g,3.14mmol)在無水dcm(50ml)中的溶液中加入mscl(5g,43.9mmol)。將反應混合物溫熱至室溫并在室溫攪拌3h。將水加至反應混合物并分離各層并將水層用dcm(50ml×3)萃取。將合并的有機層用鹽水(50ml)洗滌，經無水硫酸鈉干燥，濾過并濃縮。將粗產物經硅膠柱色譜純化，得到化合物22-9，其為無色油狀物(1.2g,96.4％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36-7.33(m,5h),6.26(s,1h),5.82-5.77(q,j＝13.6hz,1h),5.32-5.31(d,j＝8.8hz,1h),5.14-5.08(m,2h),4.80-4.77(m,1h),3.00(s,3h),2.20-2.12(m,1h),1.79-1.77(d,j＝6.8hz,3h),0.97-0.93(q,j＝10hz,6h).步驟8.將含有csf(690mg,4.54mmol)的燒瓶用氮氣凈化，加入tmscn(750mg,7.57mmol)和無水dmf(2.5ml)。將混合物在室溫攪拌15min且形成淡黃色混懸液。加入化合物22-9(600mg,1.51mmol)在無水dmf(2ml)中的溶液。在將混合物在50℃在氮氣下攪拌16h后，加入水(50ml)和etoac(50ml)并分離各層。將水層用etac(50ml×2)萃取。將合并的有機層用nahco3水溶液、鹽水洗滌并經na2so4干燥。除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物22-10(60mg,12.1％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37-7.33(m,5h),6.22(s,1h),5.28-5.26(m,1h),5.15-5.08(m,2h),4.80-4.76(m,1h),4.12-4.06(m,j＝14.8hz,1h),2.19-2.14(m,1h),1.74-1.70(d,j＝7.2hz,3h),0.98-0.93(m,6h).lcms(esi):m/z327.9[m+h+].步驟9.向化合物22-10(500mg,1.5mmol)在etoh(10ml)中的攪拌溶液中加入naoh水溶液(4m,5ml)。在將反應混合物在50℃攪拌2h后，除去有機溶劑并將水層用h2o(20ml)和etoac(30ml)稀釋。分離各層并將水層用1mhcl酸化至ph＝2。將其用etoac(30ml×2)萃取。將合并的有機層用鹽水洗滌，干燥并濃縮得到粗化合物22-11其無需進一步純化即可用于下一步。步驟10.在0℃在氮氣下將eedq(300mg,1.22mmol)加至化合物22-11(220mg,0.61mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(155mg,1.22mmol)在無水dcm(10ml)中的溶液中。將反應混合物溫熱至室溫并在室溫在氮氣下攪拌1h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc和sfc分離純化，得到22-12和22-13.1hnmr(400mhz,meod-d4)δ7.49-7.47(d,j＝8.4hz,2h),7.27-7.23(m,7h),6.23(s,1h),5.05-4.97(m,2h),4.48(s,3h),4.00-3.94(q,j＝14.0hz,1h),2.04-1.95(m,1h),1.521.51(d,j＝7.2hz,3h),0.91-0.90(d,j＝6.8hz,3h),0.82-0.80(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z473.9[m+na+],497.0[m+2na+].1hnmr(400mhz,meod)δ7.54-7.52(d,j＝8.4hz,2h),7.31-7.29(m,7h),6.29(s,1h),5.05(s,2h),4.55(s,3h),4.05-4.00(m,1h),2.10-2.00(m,1h),1.58-1.56(d,j＝7.2hz,3h),0.97-0.96(d,j＝6.8hz,3h),0.87-0.85(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z473.8[m+na+],496.9[m+2na+].步驟11.向22-12或22-13(30mg,0.066mmol)在無水dcm(5ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(40.4mg,0.13mmol)和dipea(0.5ml)。將混合物回流加熱20h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(3ml)。加入dipea(0.5ml)和諾氟沙星(63.5mg,0.2mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例22.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.37(s,1h),8.97(s,1h),7.97-7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.83-7.81(d,j＝10.8hz,1h),7.62-7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.21(m,8h),6.34(s,1h),5.07-5.01(m,4h),4.60-4.56(m,2h),4.47-4.43(m,1h),4.08-4.03(m,1h),3.61(s,4h),3.33(s,4h),1.97-1.92(m,1h),1.49-1.47(d,j＝7.2hz,3h),1.43-1.39(t,j＝7.2hz,3h),0.91-0.90(d,j＝4.8hz,3h),0.77-0.76(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z797.0[m+h+].實施例23.7-(4-((4-((s)-2-((r)-3-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向l-丙氨酸23-1(18g,0.2mol)在水(100ml)中的溶液中加入碳酸鈉(32g,0.30mol)。溶液變為澄清并冷卻至0℃。1h內加入cbzcl(40g,235mmol)在thf(200ml)中的溶液，保持溫度低于5℃。在將其在室溫攪拌另外的3h后，將溶液用etoac洗滌。然后將水溶液酸化并用etoac(300mlx3)萃取。將有機層經na2so4干燥并濃縮得到化合物23-2。步驟2.在0℃將亞硫酰氯(3.27ml,44.8mmol)加至cbz-l-丙氨酸23-2(10.0g,44.8mmol)和苯甲醛二甲基乙縮醛(6.73mml,44.8mmol)在無水thf中的攪拌混合物中。在將其攪拌30min后，加入無水zncl2(6.11g,44.8mmol)。將混合物在0℃攪拌3h，然后加入另外的0.2當量的zncl2/socl2。然后將混合物用水淬滅(低于10℃)并用mtbe(150mlx3)萃取。將有機層經na2so4干燥并經硅膠柱色譜純化，得到化合物23-4.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.41-7.39(m,10h),6.65(s,1h),5.18-5.16(m,2h),4.47-4.52(m,1h),1.63-1.57(m,3h).步驟3.在-78℃在1h內向化合物23-4(15.0g,48.2mmol)在無水thf(80ml)中的溶液中逐滴加入lihmds(1m,63ml)并將溶液在-78℃攪拌20min。然后緩慢加入烯丙基碘(6.3ml,68.9mmol)并將反應混合物在-78℃攪拌3h。將混合物溫熱至室溫并攪拌另外的12h。將混合物用乙醚稀釋并用aq.nh4cl(100ml)淬滅。將混合物用乙醚(150mlx3)萃取。將有機層經na2so4干燥并經硅膠柱色譜純化，得到化合物23-5(15g,88％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34-7.14(m,9h),6.82-6.81(m,1h),6.28-6.21(m,2h),5.62-5.56(m,1h),5.23-5.08(m,2h),5.01-4.84(m,2h),3.36-3.19(m,1h),2.50-2.45(m,1h),1.65(s,2h),1.62-1.60(m,1h).步驟4.在-78℃使臭氧鼓泡通過化合物23-5(7.8g,22.2mmol)在dcm中的溶液中，直到溶液變為藍色。使氮氣鼓泡通過溶液直到其變為無色，然后加入me2s(33ml)并在-78℃攪拌1h。在將其溫熱至室溫后，蒸發溶劑得到化合物23-6.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.66(s,1h),7.42-7.16(m,9h),6.80-6.78(m,2h),6.57(s,1h),4.99-4.96(m,1h),4.86-4.83(m,1h),4.13-4.02(m,1h),3.10-3.05(m,1h),1.76(s,3h).步驟5.向化合物23-6(1.0g,2.83mmol)在meoh(20ml)中的溶液中加入化合物23-7(438mg,4.24mmol)、nacnbh3(263mg,4.24mmol)和naoac(100mg)。加入乙酸以調節ph為6.0。將反應混合物在室溫在氮氣下攪拌24h。除去溶劑后，將殘留物用dcm(50mlx2)萃取，用10％hcl和水(30ml)洗滌。將有機層經na2so4干燥，濃縮并用柱色譜純化，得到化合物23-8.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37-7.29(m,5h),5.35(s,1h),5.11-5.03(m,2h),4.89-4.88(m,1h),3.71(s,3h),3.41-3.35(m,2h),2.45-2.43(m,1h),2.32-2.31(m,1h),1.47-1.39(m,6h).步驟6.向化合物23-8(334mg,1mmol)在thf(1ml)中的溶液中加入aq.lioh(4當量)。將混合物在室溫攪拌3h。除去溶劑后，將殘留物溶于水中并用aq.hcl酸化至ph3.0。將其用乙醚(20mlx3)萃取。合并有機層，干燥并濃縮得到化合物23-9，其直接用于下一步。步驟7.向化合物23-9(320mg,1.0mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入eedq(247mg,1.0mmol)和化合物23-10(123mg,1.0mmol)。在將反應混合物在室溫攪拌1h后，除去溶劑并將殘留物用制備性hplc純化，得到23-11.1hnmr(400mhz,meod)δ7.55-7.52(m,2h),7.34-7.27(m,7h),5.05(s,2h),4.65-4.58(m,1h),4.54(s,2h),3.61-3.59(m,2h),2.60-2.45(m,1h),2.10-2.00(m,1h),1.56-1.54(m,3h),1.33(s,3h).lcms(esi):m/z448.1[m+na+].步驟8.向23-11(42mg,0.1mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(2當量)和dipea(0.2ml)。將溶液回流加熱16h。蒸發溶劑并將殘留物溶于無水dmf(5ml)。加入dipea(0.2ml)和諾氟沙星(4當量)。將混合物在室溫攪拌30min，除去溶劑后，將殘留物用制備性hplc純化，得到實施例23.1hnmr(400mhz,meod)δ8.77(s,1h),7.91-7.88(m,1h),7.50-7.48(m,2h),7.25-7.23(m,7h),7.10-7.00(m,1h),5.02(s,2h),4.96(s,2h),4.61-4.42(m,6h),4.15-4.08(m,1h),3.62(s,4h),3.52-3.50(m,2h),2.50-2.40(m,1h),2.00-1.92(m,1h),1.47-1.41(m,6h),1.27(s,3h).lcms(esi):m/z771.1[m+h+].實施例24.7-(4-((4-((s)-2-((2s,3s)-3-(芐基氧基羰基氨基)-1,1,1-三氟-4-甲基戊-2-基氨基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向化合物24-1(9.93g,35.28mmol)和2-甲基丙烷-2-亞磺酰胺(4.28g,35.28mmol)在thf(100ml)中的溶液中逐滴加入ti(oet)4(32.19g,141.12mmol)。在將混合物在25℃攪拌16h后，在0℃逐滴加入水(25ml)。將混合物濾過并將濾液用etoac(50ml×3)萃取。除去溶劑得到粗產物24-2(11g,81.1％).lcms(esi):m/z385.3[m+h+].步驟2.在-78℃將tmscf3(3.55g,24.96mmol)逐滴加至24-2(6.4g,16.64mmol)和tmaf(1.86g,19.97mmol)在thf(30ml)中的溶液中。在將溶液在-78℃攪拌2h后，將其用水(2ml)緩慢淬滅，然后用水(50ml)稀釋。將混合物用etoac(60ml×2)萃取。將有機層濃縮并將殘留物經硅膠柱色譜純化，得到24-3(3.3g,44％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37-7.20(m,10h),4.21-4.11(m,1h),3.98-3.93(m,3h),3.65-3.61(m,2h),2.88-2.85(m,1h),2.29-2.20(m,1h),1.22(s,9h),1.13-1.11(m,3h),0.95-0.91(m,3h).步驟3.將24-3(3.3g,7.26mmol)和4mhcl/meoh(25ml)的混合物在25℃攪拌6h。除去溶劑得到粗產物24-4(2.8g).lcms(esi):m/z351.2[m+h+].步驟4.在25℃向24-4(900mg,2.57mmol)、2-氧代丙酸(905mg,10.28mmol)和hoac(617mg,10.28mmol)在dce(12ml)中的溶液中加入nabh(aco)3(2.18g,10.28mmol)。在將混合物在25℃攪拌16h后，除去溶劑并將殘留物經柱色譜純化，得到24-5(700mg,64.5％).lcms(esi):m/z423.3[m+h+].步驟5.在0℃向24-5(700mg,1.66mmol)在meoh(5ml)中的溶液中逐滴加入socl2(395mg,3.32mmol)。在將溶液在50℃攪拌16h后，將其冷卻至25℃并減壓除去溶劑得到粗產物24-6(620mg,粗的).lcms(esi):m/z437.3[m+h+].步驟6.向24-6(520mg,1.19mmol)和boc2o(260mg,1.19mmol)在meoh(8ml)中的溶液中加入pd/c(100mg)。在將混合物在25℃在氫氣下攪拌16h后，將其濾過，除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe/etoac5:1)得到24-7(390mg,92％).lcms(esi):m/z357.2[m+h+].步驟7.向24-7(395mg,1.08mmol)在meoh(5ml)中的溶液中加入4mhcl/meoh(5ml,20mmol)。在將溶液在25℃攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物溶于dcm(8ml)。在0℃加入cbzcl(276mg,1.62mmol)和et3n(219mg,2.16mmol)并將混合物在25℃攪拌6h。除去溶劑并將殘留物經制備性tlc純化，得到化合物8(110mg,26％).lcms(esi):391.1[m+h+].步驟8.在25℃向化合物8(110mg,0.282mmol)在thf/meoh/h2o(0.5ml:0.5ml:0.5ml)中的溶液中加入lioh.h2o(42mg,1mmol)。將溶液在25℃攪拌2h。除去溶劑，并將殘留物用水(3ml)吸收。將水溶液用1mhcl酸化至ph2并用etoac(15ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到化合物9(100mg,94％).lcms(esi):377.1m/z[m+h+].步驟9.在0℃在氮氣下向24-9(120mg,0.319mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(79mg,0.638mmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入eedq(158mg,0.638mmol)。將混合物在室溫攪拌6h。除去溶劑后，將殘留物經制備性tlc純化，然后經sfc分離得到主要異構體(72mg)24-10和次要異構體(26mg)。未確定每個異構體的絕對構型。1hnmr(400mhz,meod)δ7.65-7.63(m,2h),7.37-7.27(m,7h),5.14-5.07(m,2h),4.56(s,2h),3.81-3.79(m,1h),3.59-3.57(m,1h),3.37-3.35(m,1h),2.11-2.10(m,1h),1.33(d,j＝6.8hz,3h),0.93(d,j＝6.8hz,3h),0.87(d,j＝6.4hz,3h).lcms(esi):482.2m/z[m+h+].步驟10.在25℃向24-10(20mg,0.042mmol)在thf(1.5ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(38mg,0.125mmol)和dipea(21mg,0.166mmol)。將混合物在50℃加熱18h。除去溶劑，并將殘留物溶于dmf(1.5ml)。加入諾氟沙星(20mg,0.062mmol)并將混合物在25℃攪拌2h。將混合物經制備性hplc純化，得到實施例24(11.2mg,33％).1hnmr(400mhz,meod)δ8.86(s,1h),8.41(s,1h),8.1-7.94(m,1h),7.70-7.68(m,2h),7.37-7.09(m,9h),5.13-5.09(m,4h),4.89-4.86(m,2h),3.80-3.57(m,6h),3.38-3.28(m,3h),2.20-2.07(m,1h),1.52(s,3h),1.33(t,j＝6.8hz,3h),0.937(d,j＝6.8hz,3h),0.87(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):827.3m/z[m+h+].實施例25:7-(4-((4-((2s,5r)-5-(芐基氧基羰基氨基)-2,6-二甲基-4-氧代庚酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物25-1(2g,17.07mmol)和k2co3(7.066g,51.2mmol)在etoh(50ml)中的溶液中加入芐基溴(8.7g,51.2mmol)。在將混合物回流加熱5h后，將固體濾出并將濾液減壓濃縮并經快速硅膠色譜純化(etoac:己烷＝1:10)得到25-2(3.52g,58.1％).步驟2.在-78℃歷時1h向甲基膦酸二甲酯(6.78g,54.7mmol)在無水thf(60ml)中的溶液中逐滴加入lda(2mol/l,27ml)。在將其在-78℃攪拌1h后，在-78℃逐滴加入25-2(3.52g,9.12mmol)在無水thf(10ml)中的溶液。將混合物攪拌1h并將其用etoac(100ml×3)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌并濃縮得到粗產物25-3,，其無需進一步純化即可用于下一步(3.12g,84.9％).lcms(esi):m/z403.9[m+h+],425.9[m+na+]步驟3.在0℃向25-3(3.12g,7.75mmol)在無水thf(60ml)中的溶液中加入氫化鈉(372mg,9.3mmol,60％)。在將其在0℃攪拌30min后，逐滴加入2-氧代-丙酸乙酯(1.349g,11.6mmol)在無水thf(5ml)中的溶液。將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h。除去溶劑，將殘留物經制備性hplc純化，得到25-4(2.85g,93.6％).lcms(esi):m/z394.2[m+h+].步驟4.向25-4(2.85g,7.3mmol)和硫酸(750mg,7.3mmol)在etoh(60ml)中的溶液中加入10％鈀/活性炭(1g)。在將其在氫氣下攪拌6h后，將反應混合物經硅藻土填料濾過并濃縮得到預期產物25-5(3.65g,100％).步驟5.向25-5(3.65g,7.3mmol)和三乙胺(2.21g,21.9mmol)在ch2cl2(150ml)中的溶液中逐滴加入cbzcl(1.36g,8.03mmol)在冰浴中的溶液。在將混合物在室溫攪拌2h后，將其用etoac(50ml×3)萃取。將有機層用鹽水(50ml)洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮得到粗產物25-6.lcms(esi):m/z350.2[m+h+],372.2[m+na+].步驟6.向25-6(1.6g,4.58mmol)在h2o和thf混合物(40ml,1:3)中的溶液中加入氫氧化鋰水合物(1.93g,45.8mmol)。在將反應混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac(50ml×3)萃取。將有機層用鹽水(50ml)洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮得到粗產物25-7(1.43g,97.3％).lcms(esi):m/z344.1[m+na+].步驟7.向化合物25-7(1.0g,3.11mmol)在無水dcm(20ml)中的溶液中加入eedq(1.52g,6.22mmol)和25-8(765mg,6.22mmol)。將混合物在0℃在氮氣下攪拌16h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到25-9、25-10、25-11和25-12.1hnmr(400mhz,meod)δ7.49(d,j＝8.8hz,2h),7.35-7.25(m,7h),5.06(s,2h),4.53(s,2h),4.12(d,j＝5.6hz,1h),3.07-3.92(m,2h),2.62-2.57(m,1h),2.26-2.21(m,1h),1.18(d,j＝6.8hz,3h),0.95(d,j＝6.8hz,3h),0.81(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z427.2[m+h+],449.1[m+na+],409.2[m-oh].1hnmr(400mhz,meod)δ7.49(d,j＝8.8hz,2h),7.33-7.20(m,7h),5.07(s,2h),4.53(s,2h),4.12(d,j＝5.6hz,1h),3.28-2.92(m,2h),2.63-2.57(m,1h),2.27-2.19(m,1h),1.18(d,j＝6.8hz,3h),0.95(d,j＝6.8hz,3h),0.81(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z427.2[m+h+],449.1[m+na+],409.2[m-oh].1hnmr(400mhz,meod)δ7.41(d,j＝6.8hz,2h),7.39-7.16(m,7h),5.03-4.96(m,2h),4.47(s,2h),3.89(d,j＝6.4hz,1h),2.93-2.82(m,2h),2.49-2.43(m,1h),2.10-2.05(m,1h),1.07(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h),0.77(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z427.2[m+h+],449.1[m+na+],409.2[m-oh].1hnmr(400mhz,meod)δ8.02(d,j＝18.8hz,2h),7.79-7.29(m,7h),5.16-5.08(m,2h),4.56(s,2h),4.01(d,j＝6.0hz,1h),3.32-2.94(m,2h),2.60-2.55(m,1h),2.24-2.12(m,1h),1.19(d,j＝6.8hz,3h),0.95-0.88(m,6h).lcms(esi):m/z409.0[m-oh].步驟8.向25-9(100mg,0.235mmol)在無水dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(147mg,0.47mmol)和dipea(61mg)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(3ml)。加入dipea(61mg,0.47mmol)和諾氟沙星(150mg,0.47mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例25，其為白色固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.33(s,1h),10.01(s,1h),8.96(s,1h),7.94(d,j＝12.8hz,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.58(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.30(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.05-5.04(m,4h),4.59-4.58(m,2h),3.84-3.80(m,1h),3.61(s,4h),2.94-2.89(m,2h),2.12-2.05(m,1h),1.42-1.39(m,3h),1.07(d,j＝6.0hz,3h),0.82(d,j＝6.4hz,6h).lcms(esi):m/z772.6[m+h+],386.7[m/2+h+].實施例26.7-(4-((4-(2-(5-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向26-1(10.0g,78.7mmol)在meoh(180ml)和h2o(180ml)中的溶液中加入lioh·h2o(16.9g,393.3mmol)。在將混合物在室溫攪拌24h后，將其用濃hcl酸化為ph＝6。然后將粗物質用(200ml×3)萃取并濃縮得到26-2.步驟2.向26-2(2g,20.2mmol)和dmap(247mg,2.02mmol)在dcm(400ml)中的攪拌溶液中加入26-3(5.89g,22.2mmol)和edci(4.26g,22.2mmol)。在將溶液在室溫攪拌2h后，將其先后用水(200ml×3)、鹽水(100ml)洗滌，經na2so4干燥并濃縮得到26-4.步驟3.將26-4(3g,8.7mmol)和burgess試劑(3.1g,13.1mmol)在thf(50ml)中的混合物在室溫攪拌24h。除去溶劑后，將殘留物用etoac(100ml×3)萃取。將有機層用鹽水(100ml)洗滌，濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到26-5.步驟4.將26-5(1.67g,5.09mmol)和naoh(66mmol)在etoh(66ml)和h2o(66ml)中的溶液的混合物在80℃加熱12h。在將其冷卻至室溫后，將混合物用etoac(50ml)洗滌并將水層調節至ph5-6，并用etoac(60ml×3)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并濃縮得到26-6.步驟5.將26-6(1.47g,4.23mmol)、26-7(1.56g,12.7mmol)和eedq(3.14g,12.7mmol)在dcm(50ml)中的混合物在室溫攪拌2h。除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到26-8和26-9.步驟6.將26-8(40mg,0.088mmol)、pnp(57mg,0.18mmol)和dipea(34mg,0.26mmol)在dcm(3ml)中的混合物在50℃攪拌12h。將其濃縮并與諾氟沙星(82mg,0.26mmol)和dipea(34mg,0.26mmol)在dmf(5ml)中混合。在將其在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例26(30.5mg,43.6％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.33(s,1h),10.44(s,1h),8.97(s,1h),8.12-8.08(m,1h),7.95(d,j＝13.2hz,1h),7.58(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.34(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.05(d,j＝14.8hz,4h),4.59-4.58(m,3h),4.19-4.17(m,1h),3.61(s,4h),3.38(s,4h),2.10-2.07(m,1h),1.58(dd,j＝2.0,7.2hz,3h),1.40(t,j＝6.8hz,3h),0.93(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z798.3[m+h+],820.2[m+na+].實施例27.7-(4-((4-((s)-2-(2-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)噻唑-5-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在-78℃向27-1(8g,31.8mmol)和et3n(6.43g,63.6mmol)在無水thf(100ml)中的溶液中逐滴加入氯甲酸乙酯(3.45g,31.8mmol)在thf(10ml)中的溶液。在將反應混合物在-78℃攪拌1h后，加入nh3.h2o(5ml)。歷時2h將反應混合物溫熱至室溫。將白色固體經濾過收集并干燥得到27-2(5.1g,63.8％).步驟2.將27-2(3g,12mmol)和lawesson試劑(9.7g,24mmol)在無水thf(60ml)中的溶液在70℃攪拌16h。除去溶劑并將殘留物經柱色譜純化(etoac:己烷＝1:3)得到27-3(2.9g,90.6％).lcms(esi):m/z267.1[m+h+],289.1[m+na+].步驟3.向27-3(3g,11.26mmol)、khco3(3.38g,33.8mmol)在無水dme(40ml)中的溶液中逐滴加入27-3a(11.31g,22.52mmol)在dme(10ml)中的溶液。在將反應混合物在-40℃攪拌16h后，加入水(50ml)和etoac(100ml)，并將有機層用鹽水洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮。在-40℃向粗中間體和2,6-二甲基吡啶(3.3g,30.4mmol)在thf(20ml)中的混合物中緩慢逐滴加入2,2,2-三氟乙酸酐溶液(3.2g,15.2mmol)。在將反應混合物在-10℃攪拌2h后，加入水(100ml)和etoac(100ml)。將有機層用鹽水洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮。將粗產物經制備性hplc純化，得到27-4(2g,67.7％).lcms(esi):m/z391.2[m+h+].步驟4.向27-4(2g,5.13mmol)在ch3oh和h2o混合物(60ml/20ml)中的溶液中加入氫氧化鋰(2.15g,51.3mmol)。在將混合物在室溫攪拌16h后，將ph用稀hcl(5％)調節至5并將混合物用etoac(60ml×2)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮得到27-5.lcms(esi):m/z363.2[m+h+].步驟5.在0℃向27-5(1g,2.76mmol)和eedq(750mg,5.52mmol)在ch2cl2(20ml)中的溶液中加入(4-氨基苯基)甲醇(680mg,5.52mmol)。將反應混合物在0℃攪拌2h，然后在室溫攪拌16h。將反應混合物用ch2cl2(50ml)稀釋并用鹽水(50ml)洗滌，經na2so4干燥，濾過，濃縮，經制備性hplc和sfc純化，得到27-6和27-7(各370mg,28.7％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.55(d,j＝8.4hz,2h),7.36-7.29(m,8h),5.11(s,2h),4.80(d,j＝6.8hz,1h),4.56(s,2h),4.07-4.01(m,1h),2.33-2.25(m,1h),1.60(d,j＝6.8hz,3h),0.96-0.91(m,6h).lcms(esi):m/z468.0[m+h+],490.2[m+na+].1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.90(s,1h),7.49-7.23(m,9h),7.05(s,1h),5.48-5.45(m,1h),5.14-5.10(m,2h),5.03-4.99(m,1h),4.61(s,2h),3.94-3.88(m,1h),2.42-2.34(m,1h),1.63(d,j＝7.2hz,3h),1.02-1.94(m,6h).lcms(esi):m/z489.9[m+na+].步驟6.向27-6(50mg,0.11mmol)在無水dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(67mg,0.22mmol)和dipea(28mg)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于無水dmf(5ml)。加入dipea(60mg,047mmol)和諾氟沙星(60mg,0.188mmol)。在將混合物在室溫攪拌1h后，除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例27.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.34(s,1h),10.17(s,1h),8.97(s,1h),8.10(d,j＝8.4hz,1h),7.95(d,j＝8.4hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.36-7.31(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.05(s,4h),4.66-4.56(m,3h),4.03-3.97(m,1h),3.61(s,4h),3.35(s,4h),2.20-2.14(m,1h),1.47-1.39(m,6h),0.87-0.80(m,6h).lcms(esi):m/z813.1,[m+h+],407.1[m/2+h+].實施例28.7-(4-((4-((r)-2-((s)-6-(芐基氧基羰基)-7-異丙基-5-氧代-6,7-二氫-5h-咪唑并[5,1-c][1,2,4]三唑-3-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃在10min內向28-1(12g,0.1mol)在meoh(200ml)中的溶液中加入socl2(10ml)。在將混合物在室溫攪拌12h后，除去溶劑，得到預期產物28-2.步驟2.向28-2(2.6g,5mmol)在dcm(50ml)中的溶液中加入tea(2ml)并在0℃攪拌直到溶液變為澄清。然后在1h內逐滴加入cbzcl(10.2g,6mmol)并保持溫度低于5℃。然后將混合物在室溫攪拌另外的10h。將溶液用吸dcm(100ml)收并用aq.hcl、aq.nahco3和水洗滌，將有機層經無水na2so4干燥，然后蒸發溶劑得到28-3.lcms(esi):m/z265.9[m+h+].步驟3.向28-3(2.65g,10mmol)在meoh(25ml)中的溶液中加入nh2nh2.h2o(5ml,80％)。在將混合物在室溫攪拌6h后，將固體經濾過收集得到28-4.1hnmr(400mhz,meod)δ7.36-7.30(m,5h),5.07(s,2h),4.59(s,1h),3.84-3.82(m,1h),0.94-0.91(m,6h).步驟4.將化合物28-4(2.65g,10mmol)、28-5(4.2g,20.2mmol)和無水meoh(50ml)在150℃在密封容器中加熱24h。除去溶劑得到預期產物28-6.步驟5.向28-6(740mg,2mmol)在etoh(20ml)和水(10ml)中的溶液中加入naoh(400mg,10mmol)。在將混合物在50℃攪拌1h后，除去溶劑，并將殘留物經柱色譜純化，得到28-7.1hnmr(400mhz,meod)δ7.32-7.26(m,5h),5.10-5.05(m,2h),4.61-4.59(m,1h),3.94-3.92(m,1h),2.16-2.14(m,1h),1.55-1.53(m,3h),0.99-0.82(m,6h).步驟6.向28-7(100mg,0.28mmol)在無水dcm(5ml)中的溶液中加入(4-氨基苯基)甲醇(250mg,2mmol)和eedq(247mg,1mmol)。在將混合物在0℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到28-8和28-9.1hnmr(400mhz,meod)δ7.57(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.30(m,7h),5.13-5.05(m,2h),4.63(d,j＝7.6hz,1h),4.57(s,2h),4.07-4.02(m,1h),2.23-2.17(m,1h),1.66(d,j＝7.2hz,3h),0.98(d,j＝6.8hz,3h),0.87(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z452.0[m+h+].1hnmr(400mhz,meod)δ7.57(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.30(m,7h),5.13-5.05(m,2h),4.63(d,j＝7.6hz,1h),4.57(s,2h),4.00-3.99(m,1h),2.19-2.17(m,1h),1.66(s,3h),0.98(d,j＝5.6hz,3h),0.87(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z473.9[m+na+].步驟7.向28-8(45mg,0.1mmol)在無水dcm(30ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(62mg,0.2mmol)和dipea(1ml)。在將混合物回流加熱16h后，除去溶劑，并將殘留物溶于dmf(5ml)。加入dipea(1.0ml)和諾氟沙星(65mg,0.2mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例28.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.97(s,1h),7.97-7.94(m,2h),7.48-7.23(m,10h),5.17(s,2h),5.04(s,2h),4.61-4.58(m,2h),4.50-4.40(m,1h),3.69-3.63(m,4h),3.40-3.35(m,1h),3.29-3.26(m,4h),2.09-2.08(m,1h),1.91-1.88(m,2h),1.41(t,j＝7.2hz,3h),0.96-0.89(m,6h).lcms(esi):823.3m/z[m+h+].實施例29.7-(4-((4-((r)-2-(2-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)噻唑-5-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例29使用如實施例27的操作制備。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.33(brs,1h),10.17(s,1h),8.96(s,1h),8.10(d,j＝8.4hz,1h),7.95(d,j＝8.4hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.36-7.31(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.05(s,4h),4.66-4.56(m,3h),4.03-3.97(m,1h),3.61(s,4h),3.35(s,4h),2.20-2.14(m,1h),1.47-1.39(m,6h),0.87-0.80(m,6h).lcms(esi):m/z813.1,[m+h+],407.3[m/2+h+].實施例30.7-(4-((4-((s)-2-((s)-6-(芐基氧基羰基)-7-異丙基-5-氧代-6,7-二氫-5h-咪唑并[5,1-c][1,2,4]三唑-3-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.實施例30使用如實施例28的操作制備.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(s,1h),8.14-7.93(m,2h),7.57-7.19(m,10h),5.19(s,2h),5.11-5.03(m,2h),4.62-4.56(m,2h),4.51-4.47(m,1h),3.67-3.57(m,4h),3.52-3.50(m,1h),3.40-3.35(m,4h),2.25-2.15(m,1h),1.90(s,2h),1.41(t,j＝7.2hz,3h),0.98-0.84(m,6h).實施例31:7-(4-((4-((2s,5s)-5-(芐基氧基羰基氨基)-2,6-二甲基-4-氧代庚酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.實施例31使用如實施例25的操作制備。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.29(s,1h),9.98(s,1h),8.92(s,1h),7.90(d,j＝13.2hz,1h),7.57-7.54(m,3h),7.32-7.24(m,7h),7.17(d,j＝7.6hz,1h),5.05-4.97(m,4h),4.56-4.54(m,2h),3.95-3.92(m,1h),3.58(s,4h),3.26(s,4h),2.93-2.83(m,2h),2.57-2.52(m,1h),2.16-2.08(m,1h),1.45-1.35(m,3h),1.07(d,j＝6.4hz,3h),0.85(d,j＝8.2hz,3h),0.75(d,j＝8.0hz,3h).lcms(esi):m/z772.1[m+h+].實施例32:7-(4-((4-((2r,5r)-5-(芐基氧基羰基氨基)-2,6-二甲基-4-氧代庚酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.實施例32使用如實施例25的操作制備，采用來自合成實施例25的中間體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.30(s,1h),10.03(s,1h),8.97(s,1h),7.95(d,j＝12.8hz,1h),7.74(d,j＝8.4hz,1h),7.58(d,j＝8.4hz,2h)7.37-7.31(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h)5.09-5.02(m,4h),4.60-4.56(m,2h),3.84-3.80(m,1h),3.61(s,4h),3.34(s,4h),2.92-2.85(m,2h),2.12-2.08(m,1h),2.05(s,1h),1.42-1.39(m,3h),1.07(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,6h).lcms(esi):m/z772.4[m+h+].實施例33:7-(4-((4-((2r,5s)-5-(芐基氧基羰基氨基)-2,6-二甲基-4-氧代庚酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.實施例33使用如實施例25的操作制備，采用來自合成實施例25的中間體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.34(s,1h),10.02(s,1h),8.97(s,1h),7.95(d,j＝12.8hz,1h),7.58(d,j＝8.4hz,3h),7.36-7.29(m,7h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.08-5.00(m,4h),4.61-4.56(m,2h),3.99-3.95(m,1h),3.61(s,4h),3.31(s,4h),2.96-2.85(m,2h),2.50-2.47(m,1h),2.19-2.13(m,1h),1.42-1.39(m,3h),1.08(d,j＝6.0hz,3h),0.90(d,j＝6.0hz,3h),0.82(d,j＝6.4hz,3h).lcms(esi):m/z772.0[m+h+].實施例34.7-(4-((4-(2-(5-((r)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.實施例34使用如實施例26的操作制備，采用來自合成實施例26的中間體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.46(s,1h),8.95(s,1h),8.09(s,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.58(d,j＝8.0hz,2h),7.36-7.33(m,7h),7.20(d,j＝6.4hz,1h),5.04(d,j＝15.2hz,4h),4.62-4.57(m,3h),4.22-4.21(m,1h),3.61(s,4h),3.35(s,4h),2.13-2.11(m,1h),1.58(d,j＝5.6hz,3h),1.40(t,j＝6.8hz,3h),0.93(d,j＝6.0hz,3h),0.81(d,j＝6.4hz,3h).lcms(esi):m/z798.1[m+h+].實施例35:7-(4-((4-((2s,5s)-5-(芐基氧基羰基氨基)-4-羥基-2,6-二甲基庚酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.在冰浴中向實施例25(120mg,0.156mmol)在無水ch3oh(20ml)中的溶液中加入nabh4(6mg,0.158mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例35，其為固體(40mg).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.33(s,1h),9.88(s,1h),8.96(s,1h),7.94(d,j＝12.8hz,1h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.20(m,8h),6.95(d,j＝10.0hz,1h),5.05-4.99(m,4h),4.59-4.57(m,3h),3.61(s,4h),3.47-3.42(m,1h),3.30(s,4h),2.72-2.66(m,1h)2.07-2.04(m,1h),1.59-1.51(m,2h),1.45-1.35(m,3h),1.05(d,j＝8.0hz,3h),0.85-0.75(m,6h).lcms(esi):m/z387.7[m/2+h+].實施例36.7-(4-((4-(2-(5-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-4h-1,2,4-三唑-3-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.在15℃向28-8(80mg,0.177mmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入boc2o(232mg,1.062mmol)和et3n(107mg,1.062mmol)。在將溶液在15℃攪拌16h后，減壓除去dcm并將殘留物用石油醚(5ml×3)洗滌。將所得的固體溶于dcm(3ml)，并加入pnp碳酸鹽(108mg,0.354mmol)dipea(92mg,0.708mmol)。在將溶液在15℃攪拌2h后，減壓除去溶劑并加入殘留物溶于dmf(3ml)中的溶液和諾氟沙星(170mg,0.531mmol)和dipea(92mg,0.708mmol)。將其在15℃攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例36的混合物(37mg,26％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.96(s,1h),7.95(d,j＝13.2hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.34-7.20(m,8h),5.06-5.00(m,4h),4.59-4.41(m,3h),4.08-3.82(m,1h),3.61(s,4h),3.29(s,4h),2.15-2.07(m,1h),1.50-1.49(m,3h),1.40(t,j＝7.2hz,3h),0.88-0.87(m,3h),0.75-0.73(m,3h).實施例37.7-(4-((4-(2-(5-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)異噁唑-3-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.將37-1(5g,43.1mmol)和羥胺鹽酸鹽(3.02g,43.1mmol)在吡啶(50ml)中的混合物在70℃攪拌16h。除去溶劑并將殘留物溶于dmf(30ml)并在0℃加入ncs(5.73g,43.1mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。除去溶劑后，殘留物(37-2)無需純化即可直接用于下一步。步驟2.在0℃向37-2(5g,30.2mmol)、cuso4.5h2o(250mg,1mmol)、抗壞血酸鈉(198mg,1mmol)、na2co3(1.1g,10.4mmol)在t-buoh和h2o混合物(20ml/20ml)中的混合物中加入(1-異丙基-丙-2-炔基)-氨基甲酸芐酯(1.2g,5.2mmol)。在將混合物在60℃攪拌16h后，將其用etoac(80ml×3)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮并經制備性hplc純化，得到37-3.lcms(esi):m/z361.1[m+h+]步驟3.向37-3(150mg,0.417mmol)在thf和h2o混合物(8ml/4ml)中的溶液中加入氫氧化鋰水合物(145mg,4.17mmol)，并將混合物在室溫攪拌16h。除去溶劑并將混合物用etoac洗滌。將其酸化后，將其用etoac(30ml×3)萃取。將有機層用鹽水(30ml)洗滌，經na2so4干燥，濃縮得到粗產物37-4，其無需進一步純化即可用于下一步(123mg,84.8％).lcms(esi):m/z347.2[m+h+].步驟4.在0℃向37-4(123mg,0.35mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(87mg,0.71mmol)在ch2cl2(5ml)中的混合物中加入eedq(174mg,0.71mmol)。將混合物在室溫攪拌16h并用etoac(30ml×3)萃取。將有機層用鹽水(30ml)洗滌，經na2so4干燥，濃縮并經制備性hplc純化，得到37-5(63mg,39.4％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.44-7.42(m,2h),7.23-7.19(m,7h),6.23(d,j＝2.8hz,1h),4.99-4.98(m,2h),4.58-4.54(m,1h),4.46(s,2h),3.90-3.85(m,1h),2.10-2.01(m,1h),1.45-1.43(m,3h),089-0.79(m,6h).lcms(esi):m/z434.1[m-oh].步驟5.向37-5(40mg,0.089mmol)在無水dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(57mg,0.177mmol)和dipea(23mg)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(2ml)、dipea(23mg)并加入諾氟沙星(54mg,0.178mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例37.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.30(s,1h),10.28(s,1h),8.93(s,1h),7.95-7.89(m,2h),7.57(d,j＝8.8hz,2h),7.35-7.12(m,8h),6.32(d,j＝4.4hz,1h),5.02(d,j＝11.6hz,4h),4.56-4.52(m,3h),3.97-3.91(m,1h),3.57(s,4h),3.29(s,4h),2.03-1.96(m,1h),1.41-1.35(m,6h),0.85-0.75(m,6h).lcms(esi):m/z797.3[m+h+],399.3[m/2+h+].實施例38.7-(4-((4-(2-(5-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)噻唑-2-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃在氮氣下向38-1(40g,0.34mol)在meoh(200ml)中的溶液中加入socl2(28ml,0.38mol)。在將混合物在室溫攪拌12后，除去溶劑得到粗產物38-2.步驟2.歷時20min將cbzcl(53ml,0.37mol)逐滴加至38-2(57g,0.34mol)和na2co3(72g,0.68mol)在水(300ml)中的混合物中。在將混合物在室溫攪拌12h后，將其用etoac(500ml×3)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并濃縮得到粗產物，將其經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝5:1)得到化合物38-3.步驟3.向化合物38-3(10g,37.7mmol)在thf(20ml)中的溶液中加入clch2i(26.6g,151mmol)。在將其冷卻至-78℃后，在2h內緩慢加入lda。在將其在-78℃在氮氣下攪拌30min后，在-70℃加入hoac(21ml,377mmol)在thf中的溶液。將其溫熱至室溫，并加入etoac(30ml)并將混合物倒入鹽水中。將其用etoac(80ml×3)萃取，經na2so4干燥，濃縮，并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝5:1)得到化合物38-4.步驟4.在將化合物38-4(5g,17.6mmol)和nan3(1.8g,26.4mmol)的混合物在室溫攪拌1h后，將其倒入水中并用etoac(150ml×3)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并減壓濃縮得到粗產物化合物38-5.步驟5.向化合物38-5(4.84g,16.7mmol)在meoh(50ml)中的溶液中加入sncl·2h2o(7.5g,33.3mmol)并將混合物在室溫攪拌2h。除去溶劑后，殘留物(38-6)直接用于下一步。步驟6.將化合物38-6(3.75g,14.2mmol)、nahco3(11.93g,142mmol)、boc2o(3.41g,15.6mmol)在h2o(15ml)和二噁烷(15ml)中的混合物在室溫攪拌1h。將混合物用etoac(150ml×3)萃取，經na2so4干燥，濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝5:1至2:1)得到化合物38-7。在將化合物38-7(1.6g,4.43mmol)和4mhcl/meoh(20ml)的混合物在室溫攪拌1h后，將其蒸發得到化合物38-6，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟7.向化合物38-6(1.17g,4.43mmol)和化合物38-8(643mg,4.87mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入eedq(1.31g,5.31mmol)。在將混合物在室溫攪拌1h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物38-9.步驟8.在氮氣下向化合物38-9(1g,2.64mmol)在thf(20ml)中的溶液中加入lawesson試劑(1.18g,2.91mmol)。在將混合物在60℃攪拌1h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物38-10.步驟9.向化合物38-10(630mg,1.67mmol)在meoh(5ml)和h2o(1ml)中的溶液中加入lioh·h2o(105mg,2.51mmol)。在將混懸液在室溫攪拌1h后，將其用濃hcl酸化至ph＝6。將混合物用萃取(50ml×3)并減壓濃縮得到化合物38-11.步驟10.將化合物38-11(438mg,1.21mmol)、化合物38-12(446mg,3.62mmol)、hatu(690mg,1.82mmol)、dipea(468mg,3.62mmol)和eedq(895mg,3.62mmol)在dcm(10ml)中的混合物在室溫攪拌2h。除去溶劑后，將其經制備性hplc純化，得到38-13(200mg,35.4％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.54(d,j＝8.4hz,3h),7.31-7.25(m,7h),5.06-5.04(m,2h),4.64(d,j＝8.0hz,1h),4.55(s,2h),4.21(m,1h),2.14-2.04(m,1h),1.63(d,j＝6.8hz,3h),0.99(d,j＝6.8hz,3h),0.89-0.86(m,3h).lcms(esi):m/z467.9[m+h+].步驟11.將38-13(50mg,0.107mmol)、pnp(65mg,0.214mmol)和dipea(41mg,0.321mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h。將其濃縮并加至諾氟沙星(102mg,0.321mmol)和dipea(41mg,0.321mmol)在dmf(5ml)中的混合物中。在將其在室溫攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例38(24mg,27.6％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.40(s,1h),8.96(s,1h),7.96-7.88(m,2h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.51(s,1h),7.36-7.20(m,8h),5.07(s,2h),5.02-5.00(m,2h),4.59-4.55(m,3h),4.24-4.22(m,1h),3.61(s,4h),3.32(s,4h),1.97-1.92(m,1h),1.52(d,j＝6.8hz,3h),1.40(t,j＝6.8hz,3h),0.92(d,j＝6.0hz,3h),0.79-0.77(m,3h).lcms(esi):m/z813.2[m+h+].實施例39.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-胍基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向化合物39-1(1g,4mmol)、化合物39-2(459mg,4mmol)在thf(20ml)中的攪拌溶液中加入dcc(908mg,4.4mmol)。將反應混合物在室溫攪拌16h。將混合物濾過并將濾液濃縮得到化合物39-3(收率:90％).步驟2.向化合物39-4(2g,3.1mmol)在dcm/meoh(20ml/20ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基-甲醇(39-60)(570mg,4.6mmol)和eedq(1.532mg,6.2mmol)。將混合物在室溫攪拌16h并經柱色譜純化(pe/etoac＝1/3)得到化合物39-6(2g,收率:86％).步驟3.在室溫向化合物39-6(2g,2.65mmol)在dcm(50ml)中的溶液中加入化合物39-7(1.3ml,13.3mmol)。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其濃縮并用mtbe洗滌，并濾過得到化合物39-8(收率:80％).步驟4.向化合物39-8(640mg,1.2mmol)在dme(10ml)中的溶液中加入化合物39-3(640mg,1.8mmol)和nahco3(304mg,3.6mmol)在水(10ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮并經柱色譜純化(pe/etoac＝1/2)得到39-9(510mg,收率:55％).步驟5.在0℃向化合物39-9(200mg,0.26mmol)、pnp碳酸鹽(158mg,0.52mmol)在dmf(4ml)中的溶液中加入dipea(101mg,0.78mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。在室溫向混合物中加入諾氟沙星(170mg,0.52mmol)。將混合物在室溫攪拌1h并經制備性hplc和sfc純化，得到化合物39-10(收率:30％，經歷兩步).步驟6.在0℃向化合物39-10(100mg,0.1mmol)中加入tfa和dcm混合物(tfa/dcm＝1/5)。在將混合物在室溫攪拌3h后，將其經nh3.h2o堿化為ph＝9。將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到實施例39(13.8mg,15％).lcms:(5-95,ab,1.5min,esi),0.826min,ms＝858.2[m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.80(s,1h),8.55(s,1h),7.98(d,j＝13.2hz,1h),7.58(s,2h),7.36-7.27(m,9h),7.15(m,1h),5.11(d,j＝16.4hz,4h),4.57-4.50(m,4h),3.94(d,j＝7.2hz,1h),3.71(m,4h),3.22(s,2h),2.07(d,j＝6.8hz,1h),1.95(s,1h),1.83-1.79(m,1h),1.70(d,j＝1.6hz,2h),1.51(s,3h),0.97-0.96(m,6h).實施例40.7-(4-((4-((s)-6-氨基-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(噻吩-2-基)丙酰氨基)己酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向化合物40-1(1g,5.85mmol)在h2o(6ml)和二噁烷(9ml)中的混合物中加入k2co3(2.02g,14.63mmol)和cbz-cl(1.2g,7.01mmol)。將反應混合物在室溫攪拌2h。將混合物用etoac(20ml)洗滌。將水相用1nhcl酸化為ph＝3并用etoac(25mlx2)萃取，將有機層經na2so4干燥，濾過并減壓濃縮得到粗化合物40-2，其為油狀物(1.5g,收率:84.3％).lcms:(10-80,ab,2min,esi),0.954min,ms＝305.8[m+1],327.8[m+na+]1hnmrdmso-d6400mhzδ7.65-7.63(d,j＝8.0hz,1h),7.37-7.29(m,6h),6.94-6.90(m,2h),5.01(s,2h),4.2-4.1(m,1h),3.31-3.27(m,1h),3.12-3.06(m,1h).步驟2.在0℃向化合物40-2(2.0g,6.55mmol)、化合物40-3(829.15mg,7.2mmol)在無水thf(25ml)中的溶液中加入dcc(1.49g,7.21mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h。將混合物濾過并將濾液濃縮得到粗化合物40-4，其無需進一步純化即可直接用于下一步(2.2g,收率:84.6％).lcms:(10-80,ab,2min,esi),1.040min,ms＝424.8[m+na+]步驟3.在室溫向化合物40-5(5g,10.7mmol)在dcm(80ml)中的攪拌溶液中經注射器逐滴加入哌啶(4.5g,52.8mmol)。在將混合物在室溫攪拌30min后，將其減壓濃縮，并將殘留物在etoac(30ml)和h2o(50ml)之間分配。將水相濃縮得到粗化合物40-6(2.0g,76％)，其為白色固體，其直接用于下一步。步驟4.向化合物40-4(980mg,2.44mmol)在dme(10ml)中的溶液中加入化合物40-6(500mg,2.03mmol)和nahco3(374mg,4.46mmol)在水(10ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac(20ml)洗滌并將水相用15％檸檬酸溶液酸化至ph＝3。將所得的混懸液用etoac(30mlx2)萃取。將有機層經制備性hplc純化，得到化合物40-7，其為白色固體(200mg,18.4％).lcms:(10-80,ab,2min，esi),1.123min，ms＝434.1[m+1-boc+],556.1[m+na+]步驟5.向化合物40-7(300mg,0.563mmol)在dcm/meoh(20ml/10ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基-甲醇(40-8)(103.9mg,0.845mmol)和eedq(208.82mg,0.845mmol)。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其濃縮。將殘留物經柱色譜純化(pe:etoac＝2:3)得到化合物40-9，其為白色固體(260mg,收率:72.3％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.880min，ms＝539.0[m+1-boc+],661.0[m+na+]1hnmrcdcl3400mhz,δ8.51(s,1h),7.44(d,j＝8hz,2h),7.24-7.19(m,6h),7.05-7.03(m,1h),6.78-6.73(m,3h),5.52(d,j＝3.2hz,1h),5.03(s,2h)，4.56(s,2h)，4.46-4.39(m,2h),3.25(d,j＝5.6hz,2h),2.98(s,2h),1.87-1.83(m,1h),1.39(d,j＝7.6hz,2h),1.35(s,9h),1.25-1.17(m,2h).步驟6.在0℃向化合物40-9(250mg,0.39mmol)在無水dmf(5ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(237.14mg,0.78mmol)和dipea(251.6mg,1.95mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物(40-11)無需進一步純化即可直接用于下一步。步驟7.在室溫向40-11的混合物中加入諾氟沙星(249.1mg,0.78mmol)。在將混合物在室溫攪拌1h后，將其經制備性hplc純化，得到粗化合物40-13(220mg收率:57.3％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.964min，ms＝442.6[1/2m+1],984.4[m+1]步驟8.在室溫向化合物40-13(120mg,0.12mmol)中加入dcm:tfa混合物(5:1,3ml)。在將混合物在室溫攪拌1h后，將其用氨水調節至ph＝7，然后濃縮，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例40(29mg,收率:16.9％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.826min，ms＝884.3[m+1],442.8[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.23(s,1h),8.93(s,1h),8.44(s,1h),8.42(s,0.5h,hcooh),7.92(d,j＝13.2hz,1h),7.93-7.61(m,3h),7.33-7.25(m,8h),7.20-7.16(m,1h),6.88-6.86(m,2h),5.63(s,2h),4.97(s,2h),4.58-4.53(m,2h),4.40-4.31(m,1h),4.30-4.19(m,1h),3.58(s,4h),3.28-3.19(m,4h),3.19-3.03(m,2h),3.04-2.96(m,2h),2.69-2.64(m,2h),1.73-1.67(m,2h),1.57-1.49(m,2h),1.47-1.34(m,3h),1.32-1.28(m,2h).實施例41.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-乙酰氨基-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在將化合物41-1(470.6mg,4mmol)在水(10ml)中的溶液超聲6min后，歷時4min加入ac2o。將混合物濃縮并將殘留物溶于meoh，濾過，濃縮得到粗的41-2，其為白色固體(350mg,55％).1hnmrdmso-d6400mhz,δ7.94-7.92(d,j＝8.01h),4.10-4.08(m,1h),2.01-1.99(m,1h),1.84(s,1h),0.83-0.80(m,6h)步驟2.在室溫向化合物41-2(160mg,1mmol)和ho-su(122mg,1.05mmol)在thf(10ml)中的溶液中加入dcc(218mg,1.05mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h。將混合物濾過并將濾液濃縮得到41-3(242mg,收率:95％).步驟3.將化合物41-3(242mg,0.94mmol)、41-4(265mg,0.94mmol)溶于dmf(15ml)。在將反應混合物在室溫攪拌3h后，將其濾過并經制備性hplc純化，得到41-5(70mg,收率:17.7％).步驟4.在室溫向化合物41-5(60mg,0.142mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(87mg,0.285mmol)和dipea(56mg,0.427mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。加入諾氟沙星(91mg,0.285mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa)得到實施例41(40mg,收率:37％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.784min，ms＝767.1[m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ9.96(s,1h),8.93(s,1h),8.10(d,j＝7.6hz,1h),7.92(d,j＝12.4hz,1h),7.86(d,j＝8.8hz,1h),7.58(d,j＝8.4hz,2h),7.31(d,j＝8.8hz,2h),7.18(d,j＝7.2hz,1h),5.96-5.94(m,1h),5.38(s,2h),5.03(s,2h),4.58-4.53(m,2h),4.38-4.32(m,1h),4.17-4.14(m,1h),3.58(s,4h),3.26(s,4h),3.00-2.91(m,2h),1.96-1.92(m,1h),1.86(s,3h),1.68-1.55(m,2h),1.38(m,5h),0.85-0.80(m,6h).實施例42:7-(4-{4-[(s)-6-氨基-2-((s)-2-芐基氧基羰基氨基-3-苯基-丙酰基氨基)-已酰基氨基]-芐基氧基羰基}-哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫-喹啉-3-羧酸步驟1.向5ml42-1(200mg,0.25mmol)的thf溶液中加入diea(0.18ml,0.99mmol)，然后加入氯甲酸(4-硝基苯基)酯(150mg,0.75mmol)，隨后加入吡啶(0.03ml,0.32mmol)。將反應混合物在28℃攪拌過夜。將混合物濃縮至干，溶于etoac，經飽和nh4cl、鹽水洗滌。將有機層經mgso4干燥，濃縮。將粗物質用乙醚研磨，濾過得到淺黃色固體42-2(190mg,79％).lcms(esi):m/z970.7[m+h+].步驟2.向1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸(59mg,0.18mmol)在2mldmf中的混懸液中加入diea(0.11ml,0.62mmol)，然后加入一份42-2(120mg,0.12mmol)，緩慢變成黃色溶液直到反應完成。將反應混合物倒入冰水，用dcm萃取。將有機層經飽和nh4cl、鹽水洗滌，經mgso4干燥，濃縮得到42-3(140mg,99％).lcms(esi):m/z1150.9[m+h+].步驟3.向10ml42-3(145mg,0.13mmol)的dcm溶液中加入苯甲醚(0.05ml,0.50mmol)，冷卻至冰浴，然后逐滴加入tfa(0.1ml,1.00mmol)。在10mins后反應完成，移去冰浴。將反應混合物濃縮至干，溶于dcm，經飽和nahco3/水、鹽水洗滌。將有機層經mgso4干燥，濃縮。將粗物質用dcm研磨，濾過得到淺黃色固體42(38mg,34％).lcms(esi):m/z878.7[m+h+].1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.13(s,1h),8.86(s,1h),8.26(s,1h),7.91(d,j＝12.7hz,1h),7.62(d,j＝8.2hz,2h),7.48(d,j＝9.2hz,1h),7.38–7.10(m,13h),5.07(s,2h),4.95(s,2h),4.51(s,2h),4.40(s,1h),4.33(s,1h),3.61(s,4h),3.03(d,j＝12.2hz,2h),1.69(d,j＝15.5hz,3h),1.39(t,j＝6.8hz,8h).實施例43.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(噻吩-2-基)丙酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在10℃向化合物43-1(178mg,0.665mmol)和化合物43-2(79mg,0.688mmol)在thf(3ml)中的溶液中加入dcc(149mg,0.721mmol)在thf(0.5ml)中的溶液。將溶液在10℃攪拌6h。將固體濾過，并除去溶劑。將殘留物溶于dcm(5ml)。將混合物靜置1h并濾過除去更多的dcu。將濾液蒸發得到粗化合物43-3(245mg).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(d,j＝5.2hz,1h),7.02-6.96(m,2h),5.30-4.93(m,1h),3.54-3.40(m,2h),2.82(s,4h),1.44(s,9h).步驟2.向化合物43-3(245mg,0.665mmol)在dme(2ml)中的溶液中加入化合物43-4(175mg,0.998mmol)在水(2ml)中的溶液。將溶液在10℃攪拌16h。加入飽和nahco3溶液(3ml)，并將混合物用dcm(15mlx2)洗滌。將水層用1mhcl溶液酸化至ph3，并用etoac(15mlx3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到粗產物43-5(270mg).lcms(esi):m/z429.2[m+h+].步驟3.將化合物43-5(270mg,0.63mmol)在hcl/meoh(4m,5ml)中的溶液在10℃攪拌2h。減壓除去溶劑并將殘留物溶于h2o/thf(v/v1:1,3ml)，然后加入na2co3(134mg,1.26mmol)和cbzcl(167mg,0.979mmol)。將混合物在10℃攪拌2h，然后加入lioh.h2o(79mg,1.89mmol)并將所得的溶液在10℃攪拌1h。除去有機溶劑并將水溶液用dcm(15mlx2)洗滌。將水層用1mhcl溶液酸化至ph2并用etoac(15mlx3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到粗產物(182mg).lcms(esi):m/z463.2[m+h+].步驟4.在氮氣下向化合物43-6(180mg,0.389mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(144mg,1.17mmol)在dmf(4ml)中的溶液中加入eedq(289mg,1.17mmol)。將混合物在30℃攪拌16h。將混合物經制備性hplc純化，得到43-6(80mg,36％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.55-7.53(m,2h),7.32-7.27(m,7h),7.17-7.15(m,1h),6.88-6.84(m,2h),5.11-5.03(m,2h),4.55(s,2h),4.50-4.39(m,2h),3.38-3.36(m,1h),3.19-3.05(m,3h),1.89-1.50(m,4h).lcms(esi):m/z568.1[m+h+].步驟5.在10℃向43-7(20mg,0.035mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(21mg,0.070mmol)和dipea(18mg,0.141mmol)。在將混合物在10℃攪拌24h后，加入諾氟沙星(17mg,0.053mmol)和dipea(9mg,0.0695mmol)。將所得的溶液在10℃攪拌1h并經制備性hplc純化，得到實施例43(7mg,22％).1hnmr(400mhz,dmso–d6)δ10.16(s,1h),8.95(s,1h),8.33-8.32(m,1h),7.94(d,j＝12.0hz,1h),7.63-7.57(m,3h),7.35-7.19(m,10h),6.91-6.90(m,2h),6.04(m,1h),5.44(s,2h),5.06(s,2h),5.00(s,2h),4.59-4.29(m,4h),3.61(s,4h),3.21(s,4h),3.04-2.94(m,4h),1.71-1.61(m,2h),1.45-1.38(m,5h).lcms(esi):m/z913.3[m+h+].實施例44.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.將化合物44-1(600mg,2.14mmol)和化合物44-2(936mg,2.14mmol)溶于dmf(5ml)并在室溫攪拌3h得到44-3，其為混合物。步驟2.向化合物44-3(2.14mmol)在dmf(10ml)中的溶液中加入化合物44-4(0.6ml,4.5mmol)并在室溫攪拌1h。將混合物濃縮并用mtbe(30mlx3)洗滌，濾過并將濾液濃縮得到44-5(597mg,收率:70％).步驟3.向化合物44-7(75mg,1mmol)在dme(10ml)中的溶液中加入化合物44-6(340mg,1.1mmol)和nahco3(252mg,3mmol)在水(10ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph＝3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到粗化合物44-8(350mg)步驟4.向44-8(350mg,1.3mmol)和44-9(157mg,1.36mmol)在thf(15ml)中的溶液中加入dcc(281mg,1.36mmol)。在將其在氮氣下攪拌16h后，將其濃縮得到44-10(480mg,收率:100％).步驟5.將化合物44-10(404mg,1.1mmol)、化合物44-5(835mg,2.2mmol)溶于dmf(6ml)。在將反應混合物在室溫攪拌3h后，將其濾過并經制備性hplc純化，得到化合物44-11(110mg,收率:16％).步驟6.在室溫向化合物44-11(85mg,0.135mmol)在無水dmf(5ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(82mg,0.27mmol)和dipea(52mg,0.40mmol)。將其在室溫攪拌16h。加入諾氟沙星(85mg,0.27mmol)并將混合物在室溫攪拌另外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa)得到實施例44(70mg,收率:51％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.794min，ms＝977.3[m+1],489.3[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ15.32(s,1h),9.90(s,1h),8.96(s,1h),8.17(s,2h),8.11(s,1h),7.95(d,j＝13.6hz,1h),7.82(d,j＝8.4hz,1h),7.62(d,j＝8.8hz,2h),7.33(d,j＝8.4hz,2h),7.21(d,j＝9.6hz,1h),5.98(s,1h),5.41(s,2h),5.06(s,2h),4.59(d,j＝7.2hz,2h),4.35(s,1h),4.22(d,j＝14.8hz,1h),3.76-3.73(m,2h),3.61(s,4h),3.28(s,4h),3.12-2.86(m,2h),2.60(s,4h),2.07(d,j＝6.8hz,2h),1.98(s,1h),1.80-1.56(m,2h),1.47-1.39(m,9h),1.18(s,2h),0.87-0.82(m,6h).實施例45.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(3-氟苯基)丙酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在10oc向化合物45-1(178mg,0.63mmol)和化合物45-2(76mg,0.662mmol)在thf(3ml)中的溶液中加入dcc(143mg,0.693mmol)在thf(0.5ml)中的溶液。在將溶液在10℃攪拌3h后，將固體濾過，并除去溶劑。將殘留物溶于dcm(5ml)。將混合物靜置1小時，然后濾過除去更多的dcu。將濾液蒸發得到粗化合物45-3(250mg).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.69-7.27(m,1h),7.23-6.95(m,3h),4.98-4.85(m,1h),3.33-3.14(m,2h),2.82(s,4h),1.37(s,9h).步驟2.向化合物45-3(250mg,0.63mmol)在dme(2ml)中的溶液中加入化合物45-4(173mg,0.986mmol)在水(2ml)中的溶液。將溶液在10℃攪拌16h。加入飽和nahco3溶液(3ml)，并將混合物用dcm(5mlx2)洗滌。將水層用1mhcl溶液酸化至ph3，用etoac(10mlx3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到粗產物45-5(280mg).lcms(esi):m/z441.2[m+h+].步驟3.在將化合物45-5(240mg,0.545mmol)在4mhcl/meoh(5ml)中的溶液在10℃攪拌2h后，減壓除去溶劑并將殘留物溶于h2o/thf(v/v1:1,3ml)。加入na2co3(116mg,1.09mmol)和cbzcl(139mg,0.817mmol)。將混合物在10℃攪拌2h，然后加入lioh.h2o(67mg,1.63mmol)并將所得的溶液在10℃攪拌1h。除去溶劑，并將水溶液用dcm(5mlx2)洗滌并用1mhcl溶液酸化至ph2。將其用etoac(10mlx3)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥，濾過，濃縮得到粗產物45-6(198mg).lcms(esi):m/z475.2[m+h+].步驟4.在氮氣下向化合物45-6(192mg,0.405mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(150mg,1.21mmol)在dmf(4ml)中的溶液中加入eedq(300mg,1.21mmol)。在將混合物在30℃攪拌16h后，將其經制備性hplc純化，得到45-7(70mg,30％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.55-7.53(m,2h),7.31-7.17(m,8h),7.05-7.00(m,2h),6.91-6.86(m,1h),5.07-4.99(m,2h),4.56(s,2h),4.49-4.41(m,2h),3.17-3.06(m,3h),2.91-2.85(m,1h),1.87-1.50(m,4h).lcms(esi):m/z580.2[m+h+].步驟5.在10℃向45-7(20mg,0.0345mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(21mg,0.069mmol)和dipea(18mg,0.139mmol)。在將混合物在10℃攪拌24h后，加入諾氟沙星(17mg,0.053mmol)和dipea(9mg,0.0695mmol)。將反應混合物在10℃攪拌1h并經制備性hplc純化，得到實施例45(17mg,53％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(br,1h),10.12(s,1h),8.96(s,1h),8.30-8.28(m,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.52(d,j＝8.8hz,1h),7.35-7.13(m,11h),7.04-7.00(m,1h),5.99(m,1h),5.43(s,2h),5.06(s,2h),4.95(s,2h),4.61-4.33(m,4h),3.61(s,4h),3.32(s,4h),3.06-2.66(m,4h),1.75-1.60(m,2h),1.45-1.35(m,5h).lcms(esi):m/z925.5[m+h+].實施例46.7-(4-((4-((s)-2-((r)-2-(芐基氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-2-羧酸步驟1.在冰浴中向化合物46-1(200mg,1.27mmol)在thf(10ml)中的溶液中加入氯甲酸芐酯(226mg,1.33mmol)。逐滴加入na2co3(270mg,2.54mmol)在水(10ml)中的溶液，同時在7℃或更低溫度劇烈攪拌。在將混合物攪拌16h后，分離有機層，用稀hcl(0.1m,60ml)和飽和nahco3溶液(60ml)洗滌，經無水na2so4干燥，濃縮得到化合物46-2，其為白色固體(250mg,67.6％).步驟2.在0℃向化合物46-2(250mg,0.887mmol)、1-羥基吡咯烷-2,5-二酮(102mg,0.887mmol)在無水thf(10ml)中的混合物中加入dcc(183mg,0.887mmol)。將混合物在室溫攪拌16h，并濾過。將濾液真空濃縮得到粗產物化合物46-3，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟3.在0℃向化合物46-3(710mg,1.87mmol)在dme和h2o混合物(10ml/10ml)中的溶液中加入化合物46-4(327mg,1.87mmol)和nahco3(236mg,2.8mmol)。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac(50mlx3)萃取。將有機層用鹽水(50ml)洗滌，經na2so4干燥，并真空濃縮。將粗產物經制備性hplc純化，得到預期產物化合物46-5，其為白色固體(421mg,50.2％).lcms(esi):m/z449.2[m+h+].步驟4.向化合物46-5(410mg,0.915mmol)在dcm(10ml)中的溶液中加入eedq(448mg,1.83mmol)和4-氨基苯基-甲醇(225g,1.83mmol)。在將混合物在0℃攪拌1h后，除去溶劑并將殘留物用制備性hplc和sfc分離純化，得到46-6a和46-6b.46-6a1hnmr(400mhz,meod-d4)δ7.54(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.29(m,7h),5.12(s,2h),4.55-4.49(m,4h),3.30-3.03(m,2h),2.83-2.53(m,2h),1.93-1.75(m,4h).lcms:m/z553.9[m+h+].46-6b1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.94(s,1h),9.31(d,j＝9.2hz,1h),8.53(d,j＝9.6hz,1h),8.26(d,j＝9.6hz,2h),8.00-7.96(m,5h),7.90(d,j＝9.6hz,2h),6.45-6.44(m,1h),5.81(s,1h),5.48-5.36(m,3h),4.77-4.69(m,4h),3.09-2.95(m,2h),2.79-2.64(m,2h),1.64-1.20(m,4h).lcms(esi):m/z553.9[m+h+].步驟5.向46-6a(20mg,0.036mmol)在無水dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(22mg,0.072mmol)和dipea(14mg)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(5ml)。加入dipea(9mg,0.072mmol)和諾氟沙星(23mg,0.072mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例46.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.33(s,1h),10.11(s,1h),8.97(s,1h),8.34(d,j＝7.6hz,1h),7.95(d,j＝12.8hz,1h),7.78(d,j＝8.4hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.21(m,8h),6.00-5.98(m,1h),5.97(s,2h),5.43-5.03(m,4h),4.61-4.37(m,4h),3.61(s,4h),3.31(s,4h),3.04-2.49(m,4h),1.70-1.20(m,7h).lcms(esi):m/z450.3[m/2+h+].實施例47.7-(4-((4-((r)-3-(2-氨基-2-氧代乙基硫基)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.將化合物47-1(120mg,0.411mmol)在4mhcl/1,4-二噁烷(5ml)中的混合物在室溫攪拌2h。將混合物濃縮得到47-2.lcms(esi):m/z193.0[m+h+].步驟2.向化合物47-2(1.3g,6.85mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入化合物47-3(2.065g,8.22mmol)、dipea(4.418g,34.25mmol)、hobt(1.018g,7.535mmol)和edci(1.7g,8.905mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將溶液濾過并且固體無需進一步純化即可用于下一步(47-4).lcms(esi):m/z425.9[m+h+].步驟3.向化合物47-4(500mg,1.176mmol)在thf/meoh/h2o(6ml/2ml/2ml)中的溶液中加入lioh(85mg,7.05mmol)。將混合物在室溫攪拌1.5h。將混合物濃縮并將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物47-5.lcms(esi):m/z412.0[m+h+].步驟4.向化合物47-5(600mg,1.46mmol)在dcm/dmf(10ml/2ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基-甲醇(216mg,1.75mmol)和eedq(541mg,2.19mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用h2o淬滅。將殘留物經制備性hplc純化，然后經sfc純化，得到47-6a和47-6b.47-6a1hnmr(400mhz,meod-d4)δ7.57(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.26(m,7h),5.06(s,2h),4.71-4.68(m,1h),4.54(s,2h),3.97(d,j＝6.4hz,2h),3.25(m,2h),3.13-3.08(m,1h),3.0-2.93(m,1h),2.13-2.01(m,1h),0.98-0.95(m,6h).lcms(esi):m/z517.2[m+h+].47-6b1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.93(m,1h),8.597-8.56(m,1h),7.61-7.1(m,11h),5.13-5.00(m,3h),4.63-4.59(m,1h),4.44-4.41(m,2h),3.92-3.90(m,2h),3.17-2.84(m,4h),2.00-1.96(m,1h),0.90-0.89(m,6h).lcms(esi):m/z517.1[m+h+].步驟5.向47-6a(40mg,0.0775mmol)在dcm(3ml)中的溶液中加入碳酸二-(4-硝基-苯基)酯(20mg,0.093mmol)和dipea(15mg,0.116mmol)。將混合物在45℃攪拌16h。將溶液濃縮并溶于dmf(3ml)，并加入諾氟沙星(50mg,0.155mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例47(5.5mg).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.25(s,1h),8.93-8.89(m,1h),8.40-8.34(m,2h),7.63-7.61(m,4h),7.36-7.35(m,8h),7.13(m,2h),5.06-5.03(4h),4.62-4.52(m,3h),3.94-3.91(m,1h),3.36(m,4h),3.19(m,4h),3.00-2.86(m,3h),2.03-1.95(m,1h),1.38(m,3h),0.88-0.83(m,6h).lcms(esi):m/z862.4[m+h+].實施例48.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(呋喃-2-基)丙酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0oc向化合物48-1(1.0g,6.45mmol)在thf和nahco3溶液中的混合物中經注射器加入cbzcl。將反應混合物在室溫攪拌2h并經制備性hplc純化，得到48-2(收率:32％).步驟2.在0℃向化合物48-2(380mg,1.31mmol)、化合物48-3(151mg,1.31mmol)在thf(25ml)中的溶液中加入dcc(271mg,1.31mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h。將溶液濾過并將濾液濃縮得到48-4，其無需進一步純化即可用于下一步(收率:90％).步驟3.向化合物48-4(540mg,1.38mmol)在dme(15ml)中的溶液中加入化合物48-5(364mg,2.07mmol)和nahco3(174mg,2.07mmol)在水(15ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph3.0。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到化合物48-6(收率:90％).lcms:(10-80,ab,2min，esi),0.826min，ms＝447.1[m+1]步驟4.向化合物48-6(420mg,0.94mmol)在dcm/meoh(20ml/10ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基-甲醇(174mg,1.4mmol)和eedq(495mg,1.88mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用h2o淬滅。將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到48-8(收率:50％).1hnmrdmso-d6400mhz,δ9.98(s,1h),8.20(d,j＝8hz,1h),7.56-7.49(m,3h),7.37(s,1h),7.35-7.30(m,5h),7.24(d,j＝8.8hz,3h),6.33-6.32(m,1h),6.13(d,j＝3.2hz,1h),5.98-5.95(t,j＝6.0hz,1h),5.41(s,2h),5.11-5.08(t,j＝5.6hz,1h),4.99(d,j＝13.2hz,2h),4.44-4.35(m,3h),3.33-2.83(m,4h),1.71-1.58(m,2h),1.44-1.34(m,2h).步驟5.在0℃向化合物48-9(30mg,0.06mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入中的溶液pnp碳酸鹽(37mg,0.12mmol)和dipea(24mg,0.18mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物(48-10)無需進一步純化即可用于下一步(收率:95％)lcms:(10-80,ab,2min，esi),1.092min，ms＝717.1[m+1]步驟6.將來自最后一步的48-10和諾氟沙星的混合物在室溫攪拌1h。將殘留物經制備性hplc純化，然后經sfc純化，得到實施例48.(收率:30％)1hnmrdmso-d6400mhzδ10.08(s,1h),8.96(s,1h),8.22(d,j＝7.2hz,1h),7.95(d,j＝13.2hz,1h),7.62(s,1h),7.60(s,1h),7.53(d,j＝8.4hz,1h),7.50(s,1h),7.36-7.33(m,5h),7.30(d,j＝7.6hz,4h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),6.33-6.32(m,1h),6.13(d,j＝2.4hz,1h),5.99-5.96(m,1h),5.42(s,2h),5.07(s,2h),5.01(d,j＝1.6hz,2h),4.61-4.56(m,2h),4.45-4.35(m,2h),3.62(d,j＝10.4hz,5h),3.06-3.01(m,2h),2.89-2.83(m,2h),2.55-2.45(m,2h),1.71-1.58(m,2h),1.42(s,5h).實施例49.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在室溫將化合物49-1(100mg,0.26mmol)和化合物49-2(138mg,0.38mmol)溶于dmf(5ml)。將反應混合物在室溫攪拌3h，濾過并經制備性hplc純化，得到49-3(100mg,收率:54％).步驟2.在室溫向化合物49-3(60mg,0.142mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(87mg,0.285mmol)和dipea(56mg,0.427mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。加入諾氟沙星(91mg,0.285mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa)得到實施例49(40mg,收率:37％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.866min，ms＝859.2[m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ15.32-15.28(m,1h),10.08(s,1h),8.96(s,1h),8.11(d,j＝7.2hz,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.37-7.30(m,8h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),5.78(d,j＝4.8hz,1h),5.41(s,2h),5.05(d,j＝9.6hz,4h),4.58(d,j＝7.2hz,2h),4.41(d,j＝5.6hz,1h),3.93(s,1h),3.33(s,4h),3.04-2.93(m,2h),2.00-1.95(m,1h),1.68(s,2h),1.60-1.58(m,5h),1.42(d,j＝7.2hz,6h).實施例50.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-3-(哌啶-4-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.在0℃將dcm/tfa(5:1,v:v)的混合物(1ml)加至實施例56(50mg,52mmol)。將混合物在0℃攪拌1h。lcms顯示80％預期產物和20％stm。將混合物經制備性hplc純化(fa)，得到實施例50(31.2mg,70％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.811min，ms＝856.2[m+1],428.8[1/2m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.81(s,1h),8.54(s,1h),7.98-7.95(m,1h),7.59-7.57(m,2h),7.36-7.32(m,7h),7.2-7.1(m,1h),5.12-5.09(m,4h),4.7-4.4(m,3h),3.88-3.86(m,1h),3.70(m,4h),3.3(m,4h),3.0-2.8(m,2h),2.1-1.7(m,6h),1.6-1.3(m,5h),0.98-0.96(m,6h).實施例51:7-(4-{4-[(s)-2-((s)-2-芐基氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)-丙酰基氨基]-芐基氧基羰基}-哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫-喹啉-3-羧酸實施例51使用如實施例42的操作制備。步驟1.向1-乙基-6-氟-4-氧代-7-(哌嗪-1-基)-1,4-二氫喹啉-3-羧酸(129mg,0.40mmol)在2mldmf中的混懸液中加入diea(0.30ml,1.69mmol)，然后一份加入51-1(120mg,0.34mmol)，緩慢變成黃色溶液直到反應完成。將反應混合物倒入冰水，用dcm萃取。將有機層經飽和nh4cl、鹽水洗滌，經mgso4干燥，濃縮，經制備性hplc純化，得到51(125mg,48％).lcms(esi):m/z773.3[m+h+].1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.29(s,1h),9.98(s,1h),8.95(s,1h),8.14(d,j＝6.8hz,1h),7.95(d,j＝13.1hz,1h),7.59(d,j＝8.3hz,2h),7.47–7.12(m,8h),5.05(d,j＝9.9hz,4h),4.70–4.48(m,2h),4.42(t,j＝7.0hz,1h),3.91(t,j＝7.8hz,1h),3.61(s,4h),1.98(d,j＝6.8hz,1h),1.53–1.14(m,6h),0.86(dd,j＝17.7,6.7hz,6h).實施例52.7-(4-((4-((s)-2-((r)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(三甲基甲硅烷基)丙酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在10℃向52-1(3.31g,10.0mmol)在dcm(10ml)中的攪拌溶液中加入dbu(1.67g,11.0mmol)并在室溫攪拌1h。在-78℃向(cocl)2(1.83g,14.4mmol)在dcm(30ml)中的攪拌溶液中加入dmso(1.28g,16.32mmol)。在15min后，歷時5min加入化合物52-1(1.0g,9.60mmol)和dbu的混合物。在30min后，加入et3n(3.59g,35.52mmol)，并在30min后，在-78℃加入葉立德52-2。在將其攪拌30min后，將反應混合物溫熱至室溫并在室溫攪拌6h。將混合物用1mhcl溶液淬滅。除去溶劑后，將殘留物用etoac(60mlx3)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌，經na2so4干燥并濃縮。將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物52-3(940mg,32％).1hnmr:400mhz,cdcl3,δ7.37-7.30(m,5h),6.58(s,1h),5.15(s,2h),3.76(s,3h),0.16-0.13(s,9h).lcms(esi):m/z308.1[m+h+].步驟2.在室溫將wetpd/c(0.1g)加至化合物52-3(0.5g,1.6mmol)在meoh(50ml)中的溶液中。將反應混合物在氫氣下(50psi)在室溫攪拌4h。將反應混合物濾過并將濾液濃縮得到化合物52-4，其無需進一步純化即可直接用于下一步。1hnmr:cdcl3,400mhz,δ7.36-7.30(m,5h),5.10(s,2h),4.42-4.36(m,1h),3.72(s,3h),1.17-1.11(dd,j＝6.4,14.8hz,1h),0.99-0.93(dd,j＝9.2,14.8hz,1h),0.04(s,9h).lcms(esi):m/z310.1[m+h+].步驟3.在0℃向化合物52-4(220mg,0.7mmol)在thf/h2o(5ml/5ml)中的溶液中加入lioh(44mg,1mmol)。將反應混合物溫熱至室溫并攪拌20h。除去溶劑后，將殘留物用etoac(20ml)萃取并將水層用1mhcl酸化為ph＝2并用etoac(30mlx2)萃取。將有機層用鹽水(20mlx2)洗滌，經硫酸鈉干燥并濃縮。將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物52-5.lcms(esi):m/z280.1[m+h+].步驟4.在0℃向化合物52-5(145mg,0.49mmol)和52-6(57mg,0.495mmol)在無水thf(20ml)中的溶液中逐滴加入dcc(102.3mg,0.495mmol)在無水thf(10ml)中的溶液。將反應混合物在0-5℃攪拌3h。除去溶劑后，將殘留物溶于dcm(20ml)。將析出物濾過并將濾液濃縮得到粗產物52-7，其為白色固體，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟5.向化合物52-7(如上獲得,0.49mmol)在dme(15ml)和h2o(15ml)中的溶液中加入化合物52-8(129.5mg,0.74mmol)和nahco3(61.8mg,0.74mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h。除去溶劑后，殘留物(52-9)無需進一步純化即可用于下一步。1hnmr:dmso-d6,400mhz,δ7.97(dd,j＝7.6,29.2hz,1h),7.35-7.29(m,5h),5.93-5.92(m,1h),5.36(s,2h),5.07-4.98(m,2h),4.15-4.07(m,2h),2.95-2.90(m,2h),1.75-1.64(m,1h),1.58-1.49(m,1h),0.98-0.87(m,2h),-0.01(s,9h).步驟6.在0℃在氮氣下向中化合物52-9(160mg,0.35mmol)和(4-氨基苯基)甲醇(65.2mg,0.53mmol)在無水dcm(10ml)的溶液中加入eedq(175mg,0.71mmol)。將反應混合物溫熱至室溫并在氮氣下攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到52-10and52-11.lcms:(10-80,ab,2min，esi),1.151min，ms＝558.1[m+1]1hnmr甲醇-d4,400mhz,δ9.99(s,1h),7.92(d,j＝8.0hz,1h),7.55(d,j＝8.8hz,1h),7.45-7.24(m,8h),6.01-5.98(m,1h),5.41(s,2h),5.11(t,j＝5.2hz,1h),5.05(d,j＝4.8hz,2h),4.44(d,j＝5.6hz,3h),4.15-4.08(m,1h),3.08-2.87(m,2h),1.72-1.41(m,4h),1.02-0.90(m,2h),0(s,9h).lcms:(10-80,ab,2min，esi),1.130min，ms＝558.1[m+1]1hnmr甲醇-d4,400mhz,δ9.89(s,1h),8.16(d,j＝8.0hz,1h),7.59-7.57(d,j＝8.8hz,2h),7.45-7.24(m,8h),6.01-5.95(m,1h),5.41(s,2h),5.11(t,j＝5.6hz,1h),5.03(d,j＝11.2hz,2h),4.43(d,j＝5.6hz,2h),4.42-4.38(m,1h),4.20-4.12(m,1h),3.05-2.87(m,2h),1.72-1.41(m,4h),0.95(d,j＝8.0hz,2h),0(s,9h).步驟7.向52-11(30mg,0.066mmol)在無水dcm(5ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(40.4mg,0.13mmol)和dipea(0.5ml)。將混合物回流加熱20h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(3ml)。加入dipea(0.5ml)和諾氟沙星(63.5mg,0.2mmol)。將混合物在室溫攪拌2h。將反應混合物經制備性hplc純化，得到實施例52.lcms:(10-80,ab,2min，esi),1.269min,ms＝903.0[m+1]1hnmrdmso-d6,400mhz,δ10.00(s,1h),8.97(s,1h),8.18(d,j＝10.4hz,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.40(d,j＝8.4hz,1h),7.35-7.30(m,7h),7.21(d,j＝7.6hz,1h),5.96(t,j＝6.4hz,1h),5.41(s,2h),5.06(s,2h),5.02(d,j＝9.6hz,2h),4.61-4.55(m,2h),4.41-4.36(m,1h),4.21-4.12(m,1h),3.61(s,4h),3.33(s,4h),3.03-2.90(m,2h),1.71-1.68(m,1h),1.58-1.53(m,1h),1.41(t,j＝7.2hz,4h),1.42-1.31(m,1h),0.93(d,j＝6.8hz,2h),-0.01(s,9h).實施例53.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-4,4,4-三氟丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-2-羧酸實施例53使用如實施例46的操作制備，采用來自合成實施例46的中間體。步驟1.向46-6b(23mg,0.041mmol)在無水dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(25mg,0.082mmol)和dipea(16mg)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(5ml)。加入dipea(16mg,0.123mmol)和諾氟沙星(26mg,0.082mmol)，并將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例53.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.33(s,1h),10.03(s,1h),8.97(s,1h),8.51(d,j＝8.0hz,1h),7.45(d,j＝13.2hz,1h),7.79(d,j＝8.4hz,1h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.36-7.21(m,8h),5.98-5.96(m,1h),5.41(s,2h),5.07-5.01(m,4h),4.59-4.42(m,4h),3.61(s,4h),3.31(s,4h),3.17-2.50(m,4h),1.71-1.60(m,7h).lcms(esi):m/z898.8[m+h+],450.3[m/2+h+].實施例54.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-(三甲基甲硅烷基)丙酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例54使用如實施例52的操作制備，采用來自合成實施例52的中間體。lcms:(10-80,ab,2min，esi),1.274min,ms＝903.0[m+1]1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.10(s,1h),8.97(s,1h),7.95(d,j＝13.2hz,2h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.40(d,j＝8.4hz,1h),7.37-7.29(m,7h),7.21(d,j＝10.8hz,1h),5.98(t,j＝6.4hz,1h),5.05(d,j＝8.8hz,2h),5.01(d,j＝13.2hz,2h),4.62-4.56(m,2h),4.43-4.40(m,1h),4.14-4.08(m,1h),3.61(s,4h),3.33(s,4h),3.05-2.91(m,2h),1.76-1.52(m,2h),1.48-1.39(m,5h),1.01-0.89(m,2h),-0.01(s,9h).實施例55.7-(4-((4-((r)-3-(2-氨基乙基硫基)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物555-1(1.55g,10mmol)、55-1a(2.51g,10mmol)和et3n(3.03g,30mmol)在dmf(20ml)中的混合物中加入hatu(3.8g,10mmol)。在將混合物在室溫攪拌3h后，將其用etoac(60mlx3)萃取。將有機層用鹽水(60mlx3)洗滌，經naso4干燥，真空濃縮并經柱色譜純化(20％etoac/己烷)得到化合物55-2(3.21g,91.2％).lcms(esi):m/z353.1[m+h+].步驟2.在0℃歷時10-15min將三苯基膦(2.87g,10.94mmol)在無水dcm(60ml)中的溶液逐滴加至化合物55-2(3.21g,9.12mmol)和四溴甲烷(4.54g,13.68mmol)在無水dcm中的充分攪拌的溶液。在將混合物在室溫攪拌9-10h后，將其用戊烷(200ml)處理并將所得的析出物經濾過除去并用戊烷洗滌若干次。將合并的戊烷溶液用5％nahco3、水、鹽水洗滌并經na2so4干燥。蒸發溶劑并將油狀物經硅膠柱色譜純化(己烷:etoac＝4:1)得到化合物55-3(3.43g,90.7％).lcms(esi):m/z414.9[m+h+].步驟3.向化合物55-3(3.43g,8.3mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入化合物55-4(1.12g,4.0mmol)和k2co3(1.15g,8.3mmol)。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac(100mlx2)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌，經na2so4干燥，并濃縮得到粗產物化合物55-5(3.67g,86.4％).lcms(esi):m/z412.0[m-boc+h+],534.1[m+na+].步驟4.向化合物55-5(3.67g,6.22mmol)在thf/h2o(30ml/10ml)中的溶液中加入lioh.h2o(2.6g,62.2mmol)。在將混合物在室溫攪拌16h后，除去溶劑，并加入水(30ml)。將其用etoac(80mlx3)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌，經na2so4干燥，真空濃縮得到化合物55-6,，其無需進一步純化即可用于下一步(3g,96.9％).lcms(esi):m/z398.2[m-boc+h+].步驟5.在0℃向化合物55-6(500mg,1.0mmol)、(4-氨基-苯基)-甲醇(246mg,2mmol)和dipea(258mg,2mmol)在dcm(10ml)中的溶液中加入hatu(380mg,1.0mmol)。在將混合物在0℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物用制備性hplc和sfc分離純化，得到55-7a和55-7b.55-7a1hnmr(400mhz,meod)δ7.60(d,j＝8.8hz,2h),7.31-7.24(m,7h),5.06(s,2h),4.67-4.64(m,1h),4.53(s,2h),3.88(d,j＝7.6hz,1h),3.28-3.11(m,3h),2.89-2.84(m,1h),2.67-2.57(m,2h),2.08-1.99(m,1h),1.41(s,9h),1.01-1.99(m,6h).lcms(esi):m/z503.0[m+h+-boc].55-7b1hnmr(400mhz,meod)δ7.56(d,j＝8.8hz,2h),7.34-7.25(m,7h),5.08(s,2h),4.66-4.63(m,1h),4.54(s,2h),3.96(d,j＝7.6hz,1h),3.22-3.04(m,3h),2.90-2.80(m,1h),2.69-2.57(m,2h),2.13-2.03(m,1h),1.40(s,9h),0.98-0.94(m,6h).lcms(esi):m/z502.9[m+h+-boc],624.5[m+na+].步驟6.向55-7a(28mg,0.047mmol)在無水dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(30mg,0.094mmol)和dipea(0.2ml)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(2ml)。加入dipea(0.2ml)和諾氟沙星(29mg,0.094mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物55-8(38mg,84.4％).lcms(esi):m/z948.4[m+h+].步驟7.在0℃歷時10min向化合物55-8(38mg,0.04mmol)在無水dcm(10ml)中的溶液中加入hcl/ch3oh(4mol/l)。在將混合物在室溫攪拌1h后，除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例55，其為白色固體。1hnmr(400mhz,meod)δ8.86(s,1h),7.97(d,j＝13.2hz,1h),7.66(d,j＝8.4hz,2h),7.34(d,j＝8.8hz,2h),7.27-7.22(m,5h),7.14(d,j＝7.2hz,1h),5.08(d,j＝21.6hz,4h),4.73-4.51(m,1h),4.50-4.48(m,2h),3.81(d,j＝8.0hz,1h),3.69(s,4h),3.34(s,4h),3.25-2.91(m,3h),2.90-2.79(m,3h),2.09-2.00(m,1h),1.55-1.45(m,3h),1.09-1.00(m,6h).lcms(esi):m/z848.1[m+h+].實施例56.7-(4-((4-((s)-2-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物56-2(150mg,0.551mmol)在thf/h2o(10ml/2ml)中的溶液中加入nahco3(138mg,1.653mmol)和化合物56-1(287mg,0.827mmol)。在將混合物在25℃攪拌過夜后，將其用hcl(1n)酸化至ph＝6，用etoac(50mlx3)萃取。將有機層干燥并濃縮得到56-3，將其經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝10/1至1/10).lcms:(0-60,ab,2min，esi),1.309min，ms＝406.3[m+1-boc+]步驟2.向化合物56-3(1.2g,2.376mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入化合物56-4(439mg,3.56mmol)和hatu(1.7g,5.064mmol)。將混合物在25℃攪拌過夜。將溶液用h2o淬滅，并用dcm(50mlx3)萃取。將有機層干燥，并濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝10/1至1/10)得到56-5.lcms:(0-60,ab,2min，esi),1.413min，ms＝511.2[m+1-boc+]步驟3.在0℃在氮氣下向化合物56-5(100mg,0.16mmol)在無水dmf(2ml)中的溶液中加入dipea(0.5ml,3mmol)和pnp碳酸鹽(200mg,0.66mmol,4.1eq)。將混合物在室溫攪拌過夜。向混合物中加入諾氟沙星(102mg,0.32mmol,2eq)并攪拌1h。將混合物經制備性hplc純化(fa),得到實施例56(60mg,40％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),1.064min，ms＝956.3[m+1]1hnmr:meoh-d4400mhz,δ8.84(s,1h),7.97-7.93(dd,j＝16,1h),7.59-7.57(m,2h),7.35-7.27(m,7h),7.20-7.10(m,1h),5.11-5.07(m,4h),4.6-4.5(m,1h),4.55-4.45(m,2h),4.10-3.90(m,3h),3.75-3.65(m,4h),3.3(m,4h),2.80-2.50(m,2h),2.1-2.0(m,1h),1.8-1.6(m,5h),1.6-1.5(m,3h),1.43(s,9h),1.2-1.0(m,2h),0.96-0.94(d,j＝6.8hz,6h).步驟1.歷時15min在氮氣下將化合物57-2(10g,100mmol)在冰醋酸(30ml)中的溶液加至化合物57-1(13.1g,100mmol)在冰醋酸(150ml)中的溶液中。在將其在室溫攪拌1h后，將白色不均勻反應混合物回流加熱5h。真空除去大部分乙酸。將殘留物在水和dcm之間分配。除去dcm并將棕色油狀物溶于少量的etoac并倒入pe。將白色析出物經濾過收集得到57-3(12g,收率:56％).1hnmrdmso-d6400mhz,δ11.98(s,1h),3.34-3.31(m,2h),2.61(m,4h),2.19-2.16(m,2h),1.50-1.43(m,4h),1.23(d,j＝7.2hz,2h).步驟2.歷時15min向化合物57-3(12g,56.3mmol)和過量的三乙胺(25ml,168.9mmol)在dcm(100ml)中的溶液中加入過量的化合物57-4(36g,140.8mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌6h。混合物變為均勻的并在40℃攪拌3h。將其濃縮，用水和鹽水洗滌，經無水mgso4干燥。將其濃縮并經柱色譜純化(etoac),得到57-5(4g,收率:23％).1hnmrmeod-d4400mhz,δ3.54-3.50(m,2h),2.86(d,j＝3.2hz,4h),2.71(d,j＝2.8hz,4h),2.66-2.63(m,2h),1.79-1.75(m,2h),1.65-1.59(m,2h),1.45-1.41(m,2h).步驟3.向化合物57-6(375mg,2.86mmol)在dme(10ml)中的溶液中加入化合物57-5(800mg,2.6mmol)和nahco3(656mg,7.8mmol)在水(10ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph＝3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到粗化合物57-7(1.2g,含有雜質).步驟4.向化合物57-8(2.0g,4.10mmol)在thf(50ml)中的混合物中加入化合物57-9(3.8g,24.34mol)和pd(pph3)4(946mg,0.82mmol)。將反應混合物在60℃攪拌3h。將混合物冷卻至室溫并濾過，將濾餅經制備性hplc純化，得到57-10(1.0g,60.4％).步驟5.將化合物57-7(100mg,0.31mmol)、hatu(175mg,0.46mmol)、dipea(119mg,0.92mmol)溶于dmf(10ml)。將反應混合物在室溫攪拌30min。然后加入化合物57-10(124mg,119mmol)。將反應混合物在室溫攪拌3h。然后將混合物濃縮并經制備性hplc純化，得到57-11a和57-11b(30mgeach,5％).步驟6.在0℃向化合物57-11a(30mg,0.042mmol)和pnp碳酸鹽(26mg,0.084mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入dipea(17mg,0.127mmol)。將混合物在室溫攪拌16h并在室溫加入諾氟沙星(27mg,0.084mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例57(14mg,收率:15％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.832min，ms＝529.4[1/2m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.89(s,1h),8.33(d,j＝4.6hz,1h),8.06-8.01(m,2h),7.63(d,j＝8.4hz,2h),7.50-7.40(m,1h),7.39(d,j＝8.4hz,2h),7.21(s,1h),5.55-5.51(m,1h),5.15(s,2h),4.92(s,1h),4.58(s,6h),3.74(s,4h),3.49-3.46(m,2h),3.35-3.33(m,4h),2.69(s,4h),2.26-2.22(m,4h),1.65-1.57(m,9h),1.56-1.29(m,5h),1.01(d,j＝6.8hz,3h),0.93(d,j＝6.4hz,3h),0.92-0.81(m,6h)實施例58.7-(4-((4-((s)-6-氨基-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)己酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.歷時20min將cbzcl(26.7ml,0.19mol)逐滴加至58-1(20g,0.17mol)和na2co3(36g,0.34mol)在水(100ml)中的混合物中。在將其在室溫攪拌12h后，將其用etoac(200ml×2)洗滌。將水層調節至ph＝2并用etoac(200ml×4)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并濃縮得到58-2.步驟2.向58-2(20g,79.3mmol)、n,o-二甲基羥胺(8.4g,87.2mmol)和hatu(45.2g,118.9mmol)在dcm(200ml)中的溶液中加入et3n(45.8ml,317.1mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物用etoac(200ml×3)萃取。將有機層用濃hcl、nahco3水溶液、飽和nacl洗滌并濃縮。將粗物質經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到58-3.步驟3.將化合物58-3(6.0g,20.4mmol)在dcm(100ml)中的溶液在干冰/丙酮浴中冷卻至-78℃。逐滴加入dibal-h(30.6ml,30.6mmol)并將混合物在-78℃攪拌4h。將過量的氫化物用meoh(5ml)淬滅并將溶液溫熱至室溫。除去溶劑后，58-4無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.將58-4(4.80g,20.4mmol)、化合物5(4.70g,24.5mmol)和k2co3(5.64g,40.8mmol)在meoh(60ml)中的混合物在室溫攪拌12h。除去溶劑后，將殘留物用etoac(100ml×3)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌并經na2so4干燥。除去溶劑并將粗物質經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到58-6.步驟5.將58-7(10g,68.4mmol)和cu(oh)2co3(15.12g,68.4mmol)在h2o(100ml)中的溶液回流加熱30min。將回流過程中形成的固體趁熱經濾過除去。將濾液冷卻至0℃并通過加入固體na2co3(1.0g)調節至ph9。逐滴加入alloccl(10.8ml,102.6mmol)，同時將溶液在0℃攪拌。加入過程中，通過加入固體na2co3(20g)將反應混合物保持在ph9。將反應混合物溫熱至室溫并攪拌12h。將反應過程中形成的藍色固體產物以定量收率經濾過收集。將如上收集的固體orn(alloc)的銅鹽懸浮于h2o(200ml)并加入兩當量的硫代乙酰胺(6.511g,86.66mmol)。將堿性混懸液在50℃攪拌3h，在該過程中，固體緩慢溶解。然后將溶液用2mhcl酸化至ph2并進一步煮沸5min。將析出的cus經濾過除去。將濾液真空濃縮為約100ml，此時沉淀出產物orn(alloc)的鹽酸鹽58-8，其為白色固體，定量收率。步驟6.將nan3(8.5g,129.7mmol)在蒸餾水(45ml)和ch2cl2(75ml)中的溶液在冰浴上冷卻。歷時5min緩慢加入tf2o(4.4ml,25.94mmol)，同時繼續攪拌2h。將混合物置于分液漏斗中并移去ch2cl2相。將含水部分用ch2cl2(35ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分并用飽和na2co3洗滌一次且無需進一步純化即可使用。將化合物58-8(2.99g,12.97mmol)與k2co3(2.69g,19.46mmol)和cuso4·5h2o(486mg,1.94mmol)在蒸餾水(90ml)和meoh(180ml)中混合。加入三氟甲磺酰基疊氮化物在ch2cl2(150ml)中的溶液并將混合物在室溫攪拌12h。隨后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用0.2mph6.2磷酸鹽緩沖液(100ml)稀釋并用etoac(200ml×2)萃取除去磺酰胺副產物。然后將水相用濃hcl酸化至ph2。產物獲得自另外一次etoac(400ml×3)萃取。合并etoac萃取物，經na2so4干燥并蒸發得到58-9，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟7.將58-9(3.32g,12.97mmol)、58-6(1.50g,6.48mmol)和cu(ch3cn)4pf6(362mg,0.97mmol)在dmf(10ml)中的混合物在50℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到58-10(2.3g,36.4％).步驟8.將58-10(2.33g,4.78mmol)、58-11(1.76mg,14.3mmol)和eedq(3.55g,14.3mmol)在dcm(50ml)中的混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc和sfc分離純化，得到58-12(326mg)和58-13(30mg).1hnmr(400mhz,meod)δ8.04(s,1h),7.55-7.53(m,2h),7.33-7.30(m,7h),5.91-5.87(m,1h),5.45-5.41(m,1h),5.27-5.23(m,1h),5.15-5.11(m,1h),5.07(d,j＝2.8hz,2h),4.70-4.68(m,1h),4.55(s,2h),4.48-4.46(m,2h),3.34-3.32(m,1h),3.09-3.07(m,2h),2.28-2.22(m,3h),1.54-1.50(m,2h),1.44-1.35(m,2h),0.93(d,j＝6.8hz,3h),0.87(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z593.0[m+h+].1hnmr(400mhz,meod)δ8.04(s,1h),7.55-7.52(m,2h),7.32-7.27(m,7h),5.91-5.87(m,1h),5.43-5.42(m,1h),5.27-5.22(m,1h),5.15-5.12(m,1h),5.07(d,j＝3.6hz,2h),4.70-4.68(m,1h),4.55(s,2h),4.47(d,j＝5.2hz,2h),3.07-3.05(m,2h),2.22-2.14(m,3h),1.54-1.50(m,2h),1.44-1.20(m,2h),0.92(d,j＝6.8hz,3h),0.87(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z593.0[m+h+].步驟9.將58-12(100mg,0.169mmol)、pnp(103mg,0.338mmol)和dipea(66mg,0.507mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h，并除去溶劑。將上述粗產物(128mg,0.169mmol)、諾氟沙星(160mg,0.507mmol)和dipea(66mg,0.507mmol)在dmf(5ml)中的混合物在室溫攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到100mg中間體。向中間體(50mg,0.053mmol)和1,3-二甲基巴比妥酸(67mg,0.426mmol)在thf(5ml)中的溶液中加入pd(pph3)4(12mg,0.0106mmol)。將混合物在50℃攪拌12h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例58(20.6mg).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.96(s,1h),8.47-8.43(m,1h),8.09(s,1h),7.96-7.93(m,1h),7.74-7.72(m,1h),7.62-7.60(m,2h),7.38-7.29(m,7h),7.22-7.20(m,1h),5.52-5.49(m,1h),5.07(s,2h),5.02(d,j＝4.8hz,2h),4.62-4.58(m,3h),3.62(s,4h),3.15(s,4h),2,67-2.66(m,2h),2.15-2.09(m,3h),1.54-1.52(m,2h),1.40(t,j＝7.2hz,3h),1.23-1.18(m,2h),0.84(d,j＝6.4hz,3h),0.78(d,j＝6.4hz,3h).lcms(esi):m/z854.1[m+h+].實施例59.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((r)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物59-2(118mg,0.71mmol)在dme(5ml)中的溶液中加入化合物59-1(200mg,0.71mmol)和nahco3(122mg,1.42mmol)在水(5ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph＝3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到粗化合物59-3(240mg).步驟2.將化合物59-3(240mg,0.67mmol)、hatu(506mg,1.34mmol)、dipea(258mg,2.01mmol)溶于dmf(5ml)并在室溫攪拌30min。然后加入化合物59-4(269mg,0.67mmol)。將反應混合物在室溫攪拌3h。將混合物濃縮并經制備性hplc純化，得到59-5a和59-5b(40mgeach,8％)步驟3.在室溫向化合物59-5a(40mg,0.054mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(34mg,0.11mmol)和dipea(21mg,0.162mmol)并在室溫攪拌1.5h。加入諾氟沙星(35mg,0.11mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h并濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa)(14mg,收率:20％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.838min，ms＝546.5[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.64(s,1h),8.96(s,1h),8.22(d,j＝9.2hz,1h),8.04(d,j＝8.4hz,1h),8.04-7.92(m,2h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.36(d,j＝8.4hz,2h),7.22-7.20(m,5h),7.14(s,1h),6.06(d,j＝6hz,1h),5.50-5.47(m,1h),5.44(s,2h),5.07(s,2h),4.90-4.86(m,1h),4.61-4.58(m,3h),3.61(s,4h),3.34-3.25(m,4h),3.04-2.91(m,4h),2.75-2.71(m,2h),2.60(s,4h),2.14-2.11(m,2h),2.09-2.00(m,2h),1.42-1.29(m,10h),1.40(d,j＝7.2hz,2h),0.85-0.79(m,6h).實施例60.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((r)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物60-2(83mg,0.71mmol)在dme(5ml)中的溶液中加入化合物60-1(200mg,0.71mmol)和nahco3(122mg,1.42mmol)在水(5ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到化合物60-3(160mg,具有雜質,收率:80％.步驟2.將化合物60-3(160mg,0.51mmol)、hatu(390mg,1.02mmol)、dipea(200mg,0.68mmol)溶于dmf(5ml)并在室溫攪拌30min。然后加入化合物60-4(207mg,0.51mmol)。將反應混合物在室溫攪拌3h。然后將混合物濃縮并經制備性hplc純化，得到60-5a和60-5b(分別為60mg和60mg,8％和8％)步驟3.在室溫向化合物60-5a(60mg,0.086mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(60mg,0.2mmol)和dipea(0.5ml,3mmol)，并將混合物在室溫攪拌1.5h。加入諾氟沙星(60mg,0.19mmol)。將混合物在室溫攪拌額外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa)得到實施例60(47.9mg,收率:54％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.824min，ms＝522.4[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.1(s,1h),8.93(s,1h),8.15-8.13(d,1h),7.99(s,1h),7.93-7.90(d,1h),7.81-7.79(d,1h),7.57-7.55(d,j＝8.0hz,2h),7.35-7.33(d,j＝8.0hz,2h),7.20-7.18(m,1h),6.0(m,1h),5.5(m,1h),5.40(s,2h),5.04(s,2h),4.8(m,1h),4.6-4.5(m,2h),4.2-4.1(m,1h),3.6(s,4h),3.2(m,6h),3.05-2.9(m,2h),2.57(s,4h),2.15-2.0(m,5h),1.9-1.8(m,1h),1.5-1.35(m,7h),1.3-1.1(m,4h),0.82-0.80(m,j＝8.0hz,3h),0.76-0.70(m,9h).實施例61.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((r)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物61-2(64mg,0.71mmol)在dme(5ml)中的溶液中加入化合物61-1(200mg,0.71mmol)和nahco3(122mg,1.42mmol)在水(5ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph＝3。將所得的混懸液用ea萃取。將合并的有機層濃縮得到化合物61-3.(100mg,含有雜質,收率:60％)步驟2.將化合物61-3(100mg,0.35mmol)、hatu(267mg,0.7mmol)、dipea(136mg,1.05mmol)溶于dmf(5ml)并在室溫攪拌30min。加入化合物61-4(142mg,0.35mmol)并將反應混合物在室溫攪拌3h。將混合物濃縮并經制備性hplc純化，得到61-5aand61-5b(分別為43mg、22mg，6％、3％)。步驟3.在室溫向化合物61-5b(22mg,0.033mmol)在無水dmf(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(20mg,0.066mmol)和dipea(0.2ml,1.2mmol)并將混合物在室溫攪拌1.5h。加入諾氟沙星(20mg,0.066mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa),得到實施例61(14.6mg收率:43％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.805min，ms＝508.3[1/2m+1]1hnmr甲醇-d4+cdcl3400mhz,δ8.83(s,1h),8.02-7.99(m,2h),7.77(solvent:cdcl3),7.59-7.57(d,j＝8.0hz,2h),7.36-7.34(d,j＝8.0hz,2h),7.15-7.13(m,1h),5.5(m,1h),5.11(s,2h),4.95-4.9(m,1h),4.55-4.45(m,2h),4.4-4.35(m,1h),3.7(s,4h),3.45(m,2h),3.4(s,4h),3.25-3.05(m,2h),2.66(s,4h),2.3-2.1(m,5h),1.6-1.5(m,7h),1.5-1.3(m,2h),1.3-1.2(m,5h),0.96-0.94(d,j＝8.0hz,3h),0.87-0.85(d,j＝8.0hz,3h).實施例62.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2,2-二甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.歷時20min將cbzcl(24ml,0.17mol)逐滴加至62-1(20g,0.15mol)和na2co3(32g,0.30mol)在水(100ml)中的混合物中。在將反應混合物攪拌12h后，將其用etoac(200ml×2)洗滌。將水層調節至ph＝2并用etoac(200ml×4)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并減壓濃縮得到62-2，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.向62-2(10g,37.7mmol)、n,o-二甲基羥胺(4.0g,41.5mmol)和hatu(21.3g,56.0mmol)在dcm(100ml)中的混合物中加入et3n(21.8ml,150.8mmol)。在將混合物在室溫攪拌1h后，除去溶劑并將粗物質用水(200ml)吸收。將水層用etoac(200ml×3)萃取。將萃取物用濃hcl、nahco3水溶液、飽和nacl洗滌。將其濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到62-3.步驟3.在-78℃將dibal-h(19.5ml,19.46mmol)逐滴加至化合物3(4g,12.97mmol)在dcm(60ml)中的溶液中。在將混合物在-78℃攪拌4h后，將過量的氫化物用meoh(5ml)淬滅并將所得的溶液溫熱至室溫。將溶液濃縮得到化合物4，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.在將62-4(3.23g,12.97mmol)，62-5(2.99g,15.56mmol)和k2co3(3.58g,25.94mmol)在meoh(40ml)中的混合物在室溫攪拌12h后，除去溶劑，并將殘留物用etoac(60ml×3)萃取。將有機層用鹽水洗滌，經na2so4干燥，濃縮并經柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到62-6.步驟5.在0℃歷時5min將tf2o(4.4ml,25.94mmol)緩慢加至nan3(8.3g,129.7mmol)在h2o(45ml)和dcm(75ml)混合物中的溶液中。在將其攪拌2h后，分離dcm層并將含水部分用dcm(35ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分并用飽和na2co3洗滌一次并加至62-7(2.27g,12.97mmol)、k2co3(2.69g,19.46mmol)和cuso4·5h2o(323mg,1.30mmol)在h2o(90ml)和meoh(180ml)中的混合物中。在將混合物攪拌12h后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph6.2,100ml)稀釋，并用etoac(200ml×2)萃取。然后將水相用濃hcl酸化至ph＝2，并用萃取(400ml×3)。合并有機層，經na2so4干燥并濃縮得到62-8，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟6.在將62-8(2.61g,12.97mmol)、62-6(1.59g,6.48mmol)和cu(ch3cn)4pf6(362mg,0.97mmol)在dmf(5ml)中的混合物在50℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到62-9.步驟7.在將62-9(968mg,2.17mmol)、62-10(801mg,6.50mmol)和eedq(1.61g,6.50mmol)在dcm(50ml)中的混合物在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到62-11(395.9mg,33.1％).1hnmr(400mhz,meod)δ8.11(s,1h),7.59-7.56(m,2h),7.37-7.27(m,7h),5.55-5.51(m,1h),5.13-5.05(m,2h),4.79(s,1h),4.58(s,2h),3.34-3.32(m,1h),3.25-3.11(m,1h),2.28-2.22(m,2h),1.48-1.41(m,2h),0.96(s,9h).lcms(esi):m/z551.9[m+h+].步驟8.在將62-11(190mg,0.34mmol)、pnp碳酸鹽(126mg,0.41mmol)和dipea(132mg,1.02mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h后，除去溶劑并加至諾氟沙星(323mg,1.02mmol)和dipea(132mg,1.02mmol)在dmf(5ml)中的混合物中。在將其在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例62(6.2mg).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.31(s,1h),10.66(s,1h),8.96(s,1h),8.15(s,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.72-7.70(m,1h),7.60(d,j＝8.0hz,2h),7.38-7.28(m,8h),6.04-6.03(m,1h),5.52-5.51(m,1h),5.42(s,2h),5.07(s,2h),5.03-5.01(m,2h),4.66(d,j＝9.6hz,1h),4.58-4.56(m,2h),3.61(s,4h),3.41(s,4h),3.02-2.98(m,2h),2.12-2.02(m,2h),1.42-1.39(m,3h),1.26-1.23(m,2h),0.84(s,9h).lcms(esi):m/z897.1[m+h+].實施例63.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((s)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)丙酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例63使用如實施例61的操作制備，其采用來自合成實施例61的中間體。步驟1.在室溫向化合物61-5a(43mg,0.064mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(40mg,0.128mmol)和dipea(0.4ml,2.4mmol)并將混合物在室溫攪拌1.5h。加入諾氟沙星(40mg,0.128mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa)，得到實施例63(33.8mg,收率:52％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.803min，ms＝508.4[1/2m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.86(s,1h),8.15-8.12(d,1h),8.10-8.05(m,1h),8.05-7.98(d,1h),7.62-7.60(d,j＝8.0hz,2h),7.37-7.35(d,j＝8.0hz,2h),7.20-7.18(m,1h),5.5(m,1h),5.12(s,2h),4.95-4.9(m,1h),4.6-4.5(m,2h),4.42-4.38(m,1h),3.7(s,4h),3.41(m,2h),3.3(s,4h),3.25-3.1(m,2h),2.63(s,4h),2.35-2.2(m,5h),1.6-1.5(m,7h),1.5-1.3(m,2h),1.35-1.33(d,j＝8.0hz,3h),1.3-1.2(m,2h),0.95-0.93(d,j＝8.0hz,3h),0.91-0.88(d,j＝8.0hz,3h).實施例64.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-乙酰氨基-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向64-1(1.1g,11.4mmol)在thf中的攪拌溶液中加入64-2(4.5ml,57mmol)、tea(9ml,62.7mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌3h。將反應混合物倒入水(30ml)中并用萃取dcm,將合并的有機層用nacl水溶液洗滌并濃縮得到64-3(收率:95％).步驟2.在室溫將化合物64-3(139mg,1mmol)、64-4(302mg,1.5mmol)、cu(ch3cn)4pf6(75mg,0.2mmol)溶于dmf(8ml)。將混合物在60℃攪拌2h。混合物64-5無需進一步純化即可用于下一步。步驟3.在室溫向64-5的粗混合物中加入64-6(1.123g,9.12mmol)和eedq(3g,12.2mmol)。將混合物在室溫在氮氣氣氛下攪拌16h。將殘留物經制備性hplc純化，然后經sfc純化，得到64-7.(收率:80％)lcms(esi):m/z446.0[m+h+].步驟4.在0℃向64-7(30mg,0.068mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(42mg,0.136mmol)和dipea(27mg,0.21mmol)。將混合物在室溫攪拌16h。混合物64-8無需進一步純化即可用于下一步。(收率:95％)lcms(esi):m/z611.2[m+h+].步驟5.在室溫向64-8的混合物中加入諾氟沙星(44mg,0.136mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。將殘留物經制備性hplc純化，然后經sfc純化，得到實施例64(收率:30％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.62(s,1h),8.96(s,1h),8.17(d,j＝9.2hz,1h),8.06(d,j＝6.8hz,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.36(d,j＝8.0hz,2h),7.21(d,j＝6.0hz,1h),6.02(d,j＝4.4hz,1h),5.51-5.42(m,3h),5.07(s,2h),4.90-4.86(m,1h),4.59-4.57(m,2h),3.65-3.61(m,4h),3.06-2.96(m,2h),2.12-1.87(m,3h),1.86(s,3h),1.48-1.35(m,3h),1.28(s,2h),0.89-0.72(m,6h).實施例65:7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.在0℃歷時5min將tf2o(8.8ml,51.9mmol)緩慢加至nan3(16.9g,259.4mmol)在蒸餾水(30ml)和ch2cl2(45ml)的混合物中的溶液中。在將其攪拌2h后，將有機相分離并將含水部分用ch2cl2(40ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分并用飽和na2co3洗滌一次并加至65-1(2.3g,12.97mmol)、k2co3(2.69g,19.46mmol)和cuso4.5h2o(65mg,0.26mmol)在h2o(90ml)和meoh(180ml)中的混合物中。在將混合物在26℃攪拌12h后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(50ml)稀釋。將混合物用濃hcl酸化至ph＝6，然后用磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph6.2,50ml)稀釋。將混合物用etoac(100ml×2)洗滌，然后將水相用濃hcl酸化至ph＝2。將混合物用etoac(200ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥并濃縮得到65-2，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.在將65-2(2.6g,12.97mmol)、65-3(1.5g,6.48mmol)和cu(mecn)4pf6(304mg,0.97mmol)在dmf(10ml)中的混合物在50℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到65-4(516mg,18％).步驟3.在將65-4(285mg,0.66mmol)、65-5(244mg,1.98mmol)和eedq(490mg,1.98mmol)在dcm(30ml)中的混合物在24℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到65-6(250mg,70.4％).1hnmr(400mhz,meod)δ8.10(s,1h),7.58(s,2h),7.45-7.20(m,7h),5.55-5.52(m,1h),5.10-5.05(m,2h),4.77-4.58(m,3h),3.22-3.21(m,2h),2.33-2.15(m,3h),1.49-1.47(m,2h),0.97(s,3h),0.90(s,3h).lcms(esi):m/z538.3[m+h+].步驟4.在將65-6(127mg,0.24mmol)、pnp(143mg,0.47mmol)和dipea(92mg,0.71mmol)在dcm(10ml)中的混合物在50℃攪拌12h后，除去溶劑并將殘留物與dipea(93mg,0.72mmol)和諾氟沙星(230mg,0.72mmol)在dmf(10ml)中混合。在將其在24℃攪拌4h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例65(30mg,14.1％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.63(s,1h),8.96(s,1h),8.08(s,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.71(d,j＝9.2hz,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.38-7.29(m,8h),7.21(d,j＝7.6hz,1h),6.02(s,1h),5.48-5.47(m,1h),5.42(s,2h),5.06(s,2h),5.02(s,2h),4.62-4.60(m,3h),3.61(s,4h),3.44(s,4h),3.02-2.99(m,2h),2.12-2.02(m,3h),1.40(t,j＝6.8hz,3h),1.27-1.24(m,2h),0.84(d,j＝6.8hz,3h),0.78(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z883.7[m+h+].實施例66.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-(芐基氧基羰基氨基)(環丙基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.在0℃向66-1(5.0g,43.43mmol)和na2co3(6.9g,65.15mmol)在h2o(50ml)中的混合物中逐滴加入cbzcl(8.89g,52.12mmol)。在將反應混合物在25℃攪拌16h后，將其用etoac(30ml×2)洗滌。將水相用濃hcl酸化至ph2，并用etoac(50ml×2)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并減壓濃縮得到66-2(11g,粗的).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38-7.29(m,5h),5.13-5.08(m,2h),4.72-4.68(m,1h),1.12-1.09(m,1h),0.61-0.43(m,4h).步驟2.在25℃向66-2(500mg,2.006mmol)、n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(235mg,2.407mmol)和et3n(609mg,6.018mmol)在dcm(10ml)中的混合物中加入hatu(1.14g,3.009mmol)。在將其在25℃攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物用水(10ml)吸收。將水層用etoac(8ml×2)萃取。將有機層用飽和na2co3溶液(10ml)、1nhcl溶液(10ml)、然后水(10ml)洗滌。將有機層經na2so4干燥，濾過并濃縮。將粗物質經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝2:1)得到66-3(400mg,68％).lcms(esi):m/z293.1[m+h+].步驟3.在-78℃將dibal-h在甲苯中的溶液(1m,18ml,18mmol)加至66-3(3.5g,11.97mmol)在dcm(30ml)中的混合物中。在將混合物在-78℃攪拌3h后，逐滴加入meoh(5ml)。將混合物溫熱至25℃。除去溶劑并將其溶于meoh(25ml)和k2co3(3.31g,23.94mmol)，并在0℃加入66-4(2.76g,14.36mmol)。將混合物在25℃攪拌16h。除去溶劑后，將粗物質用1nhcl溶液(30ml)吸收，用etoac(20ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝5:1-2:1)得到66-5(1.5g,55％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.41-7.30(m,5h),5.12-5.05(m,3h),4.47(m,1h),2.24(s,1h),1.18-1.11(m,1h),0.56-0.47(m,4h).步驟4.在25℃將cu(ch3cn)4pf6(366mg,0.981mmol)加至66-6(2.63g,13.08mmol)和66-5(1.5g,6.54mmol)在dmf(10ml)中的溶液中。將反應混合物在50℃在氮氣下攪拌2h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到66-7(3.0g,53％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.01(s,1h),7.83-7.81(m,1h),7.37-7.14(m,5h),5.97(br,1h),5.40-5.38(m,1h),5.03-4.99(m,2h),4.32-4.28(m,1h),2.94(s,2h),2.17-2.07(m,2h),1.30-1.10(m,3h),0.50-0.26(m,4h).步驟5.將66-7(1.0g,2.32mmol)、66-8(571mg,4.64mmol)和eedq(1.15g,4.64mmol)在dcm(15ml)中的溶液在25℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到66-9(500mg)和66-10(112mg)。1hnmr(400mhz,dmso–d6)δ10.60(s,1h),8.10(s,1h),7.82(d,j＝9.2hz,1h),7.56-7.54(m,2h),7.36-7.25(m,7h),6.08-6.05(m,1h),5.51-5.43(m,3h),5.14(t,j＝5.6hz,1h),5.03(s,2h),4.44(d,j＝5.6hz,2h),4.31(t,j＝8.4hz,1h),3.04-2.97(m,2h),2.15-2.08(m,2h),1.30-1.23(m,3h),0.49-0.30(m,4h).lcms(esi):m/z536.3[m+h+].1hnmr(400mhz,dmso–d6)δ10.54(s,1h),8.09(s,1h),7.82-7.80(m,1h),7.56-7.54(m,2h),7.36-7.26(m,7h),6.03-6.01(m,1h),5.49-5.42(m,3h),5.13(t,j＝5.6hz,1h),5.03(s,2h),4.44(d,j＝5.6hz,2h),4.29(t,j＝8.4hz,1h),3.04-2.97(m,2h),2.14-2.05(m,2h),1.30-1.25(m,3h),0.49-0.30(m,4h).lcms(esi):m/z536.4[m+h+].步驟6.在25℃向66-9(80mg,0.149mmol)在dcm(2ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(136mg,0.447mmol)和dipea(77mg,0.596mmol)。將混合物回流加熱20h。除去溶劑并將殘留物溶于dmf(2ml)和諾氟沙星(72mg,0.224mmol)，并在25℃加入diea(96mg,0.745mmol)，并將混合物在25℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性tlc純化(dcm/meoh＝10:1)得到實施例66(23mg,18％).1hnmr(400mhz,mdso-d6)δ15.33(s,1h),10.65(s,1h),8.96(s,1h),8.14(s,1h),8.09(s,1h),7.96-7.81(m,2h),7.62-7.60(m,2h),7.38-7.20(m,8h),6.04-6.00(m,1h),5.48-5.43(m,1h),5.07(s,2h),5.02(s,2h),4.59-4.57(m,2h),4.40-4.31(m,1h),3.61(s,4h),3.32(s,4h),3.03-2.99(m,2h),2.20-2.11(m,2h),1.40(t,j＝7.2hz,3h),1.30-1.23(m,3h),0.48-0.23(m,4h).lcms(esi):m/z881.4[m+h+].實施例67.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)乙酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物67-2(75mg,1mmol)在dme(10ml)中的溶液中加入化合物67-1(310mg,1mmol)和nahco3(252mg,3mmol)在水(10ml)中的溶液。將混合物在室溫攪拌16h。將混合物用etoac洗滌并用10％hcl酸化至ph＝3。將所得的混懸液用etoac萃取。將合并的有機層濃縮得到化合物67-3(270mg,含有雜質).步驟2.在室溫向化合物67-3(200mg,0.74mmol)和化合物67-4(90mg,0.777mmol)在thf(10ml)中的溶液中加入dcc(161mg,0.777mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h。將其濃縮并將濾液濃縮得到67-5(200mg,收率:74％).步驟3.將化合物67-5(200mg,0.53mmol)、化合物67-6(107mg,0.265mmol)溶于dmf(6ml)并將反應混合物在室溫攪拌3h。將混合物濾過并經制備性hplc純化，得到67-7(25mg,收率:6.3％)步驟4.在室溫向化合物67-7(25mg,0.038mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(25mg,0.076mmol)和dipea(15mg,0.114mmol)。將混合物在室溫攪拌1.5h。加入諾氟沙星(30mg,0.076mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa),得到實施例67(20mg,收率:48％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.802min，ms＝501.3[1/2m+1]1hnmr甲醇-d4+cdcl3400mhz,δ8.83(s,1h),7.99(d,j＝13.2hz,2h),7.59(d,j＝6.8hz,2h),7.35(d,j＝8.0hz,2h),7.11(s,1h),5.51(s,1h),5.12(s,2h),4.95(s,1h),4.47(s,2h),3.86(s,2h),3.71(s,4h),3.48-3.44(m,2h),3.31(s,4h),3.25(s,1h),3.15(s,1h),2.67(s,4h),2.26-2.20(m,5h),1.65-1.61(m,6h),1.58-1.52(m,1h),1.33-1.29(m,4h),0.95(d,j＝6.8hz,3h),0.88(d,j＝6.4hz,3h).實施例68.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向粗化合物68-1(500mg,1.24mmol)在1,4-二噁烷/h2o(10ml/5ml)中的溶液中逐滴加入k2co3(428mg,3mmol)和fmoc-cl(416mg,1.6mmol)在二噁烷(10ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其濃縮并經柱色譜純化(15％-20％meoh/dcm)得到化合物68-2(286mg,37％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.709min，ms＝626.1[m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.06(s,1h),7.80-7.78(d,j＝7.2hz,2h),7.67-7.63(t,j＝6.8hz,2h),7.58-7.56(d,j＝8.4hz,2h),7.39-7.27(m,6h),5.6-5.5(m,1h),4.69-4.67(d,j＝7.2hz,1h),4.57(s,2h),4.40-4.36(m,2h),4.25-4.15(m,1h),3.3-3.2(m,1h),3.2-3.1(m,1h),2.35-2.15(m,3h),1.55-1.35(m,2h),0.98-0.97(d,j＝6.8hz,3h),0.90-0.88(d,j＝6.8hz,3h).步驟2.在室溫向化合物68-2(200mg,0.31mmol)在無水dmf(5ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(185mg,0.62mmol)和dipea(0.5ml,3.0mmol)并將混合物在室溫在氮氣下攪拌1.5h。加入諾氟沙星(197mg,0.62mmol)。將混合物在室溫攪拌另外的1h。然后加入哌啶(0.1ml,1mmol)。在30min后，將混合物經制備性hplc純化，得到化合物68-4(250mg,含有4-硝基苯酚)。其無需進一步純化即可用于下一步。步驟3.向化合物68-4(100mg,0.134mmol)在無水dmf(2ml)中的溶液中加入化合物5(50mg,0.162mmol)。將混合物在23℃攪拌2h。將混合物經制備性hplc純化，得到實施例68(20mg,yield16％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.803min，ms＝942.4[m+1],471.8[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ15.3(s,1h),10.60(s,1h),8.94(s,1h),8.1(d,1h)8.01(s,1h),7.94-7.90(dd,j＝12.8hz,1h),7.58-7.56(d,j＝8.8hz,2h),7.34-7.32(d,j＝8.8hz,2h),7.2(d,1h),6.97(s,2h),6.0(m,1h),5.5-5.4(m,1h),5.40(s,2h),5.04(s,2h),4.9-4.85(m,1h),4.6-4.5(m,2h),3.58(s,4h),3.4-3.3(m,6h),3.1-2.9(m,2h),2.2-2.0(m,5h),1.6-1.4(m,7h),1.3-1.2(m,4h),0.80-0.78(d,j＝6.8hz,3h),0.76-0.74(d,j＝6.8hz,3h).實施例69.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)戊基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向aqna2co3(16g,152.5mmol)和69-1(5g,38.1mmol)的混合物中加入cbz-osu(11.4g,45.7mmol)在thf(40ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其調節至ph>10并用etoac(100ml×2)洗滌。將水層用濃hcl酸化至ph<1。將溶液用etoac(200ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥并濃縮得到69-2(9.7g,95.9％)，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.向69-2(9.7g,36.6mmol)、n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(3.9g,40.2mmol)和hatu(20.8g,54.8mmol)在dcm(100ml)中的混合物中加入et3n(21ml,146.2mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將粗物質用水(150ml)吸收并用etoac(150ml×3)萃取。將有機層用飽和nahco3、濃hcl、飽和nacl洗滌并濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到69-3(10.1g,89.6％).步驟3.在-78℃將dibal-h(19.5ml,1m在tol中)逐滴加至69-3(4.0g,13.0mmol)在無水ch2cl2(50ml)中的溶液中。在將反應混合物在-78℃攪拌2h后，將過量的dibal經無水meoh(15ml)淬滅并將混合物溫熱至室溫。將其濃縮得到69-4(3.2g,粗的)，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.在將69-4(3.2g,13.0mmol)、69-5(3.0g,15.6mmol)和k2co3(3.6g,26.0mmol)在meoh(60ml)中的混合物在室溫攪拌16h后，除去溶劑，并將殘留物用etoac(80ml×3)萃取。將有機層用鹽水(60ml)洗滌并經無水na2so4干燥，濃縮，并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到69-6(1.9g,60.3％).步驟5.在0℃將tf2o(3.3ml,19.6mmol)緩慢加至nan3(6.3g,97.8mmol)在h2o(30ml)和ch2cl2(48ml)中的溶液中。在將其攪拌2h后，分離有機相并將水相用ch2cl2(24ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分，并用飽和na2co3洗滌一次且無需進一步純化即可使用。將三氟甲磺酰基疊氮化物在ch2cl2中的溶液加至69-7(1.71g,13.9mmol)、k2co3(2.03g,14.67mmol)和cuso4.5h2o(245mg,0.98mmol)在h2o(54ml)和meoh(108ml)中的混合物中。在將混合物在26℃攪拌12h后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(200ml)稀釋。將混合物用濃hcl酸化至ph6并用磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph6.2,200ml)稀釋，并用etoac(300ml×2)洗滌。然后將水相用濃hcl酸化至ph＝2。將其用萃取(300ml×3)，并將萃取物經na2so4干燥并濃縮得到69-8，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟6.在將69-8(2.0g,9.78mmol)、69-6(1.2g,4.89mmol)和cu(ch3cn)4pf6(273mg,0.73mmol)在dmf(5ml)中的混合物在50℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到69-9(600mg,27.5％).步驟7.在將69-9(600mg,1.34mmol)、69-10(496mg,4.03mmol)和eedq(996mg,4.03mmol)在dcm(15ml)中的混合物在23℃攪拌4h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到69-11(350mg,47.4％)和69-12(23.1mg).1hnmr(400mhz,meod)δ8.02(s,1h),7.54(d,j＝6.8hz,2h),7.34-7.25(m,7h),5.49-5.46(m,1h),5.08(s,2h),4.55(s,2h),3.37-3.33(m,1h),3.24-3.16(m,1h),2.24-1.80(m,3h),1.45-1.43(m,7h),1.41(s,3h).lcms(esi):m/z552.1[m+h+].1hnmr(400mhz,meod)δ10.53(s,1h),8.03(s,1h),7.55(d,j＝9.2hz,1h),7.35(d,j＝4.0hz,2h),7.31-7.26(m,7h),6.04(s,1h),5.50-5.43(m,3h),5.12-5.03(m,3h),4.77-4.73(m,1h),4.44(d,j＝3.2hz,2h),3.08-2.91(m,2h),2.24-2.16(m,2h),1.90-1.71(m,2h),1.35-1.20(m,6h),0.86-0.83(m,3h).lcms(esi):m/z552.2[m+h+].步驟8.將69-11(100mg,0.18mmol)、pnp碳酸鹽(109mg,0.36mmol)和dipea(70mg,0.54mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h。將其濃縮并加至dipea(70mg,0.54mmol)和諾氟沙星(172mg,0.54mmol)在dmf(5ml)中的混合物中。在將其在23℃攪拌4h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例69(69.3mg,43％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.63(s,1h),8.96(s,1h),8.02(s,1h),7.94(d,j＝12.8hz,1h),7.70(d,j＝8.0hz,1h),7.60(d,j＝8.8hz,2h),7.38-7.20(m,8h),6.03(s,1h),5.49-5.42(m,3h),5.07(s,2h),5.04(d,j＝4.0hz,2h),4.72-4.71(m,1h),4.58-4.57(m,2h),3.67(s,4h),3.61(s,4h),3.06-3.01(m,2h),2.12-2.07(m,2h),1.80-1.68(m,2h),1.42-1.38(m,3h),1.34(s,6h),0.84(s,3h).lcms(esi):m/z897.4[m+h+].實施例70:7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4,4a,8a-四氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物70-1(3.0g,25.61mmol)在水(20ml)中的混合物中加入na2co3(2.71g,25.61mmol)。加入cbzcl(4.81g,28.17mmol)并將反應混合物在28℃攪拌16h。將混合物濾過并用etoac(15ml×2)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并減壓濃縮得到化合物70-2(5.9g,92％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.21-7.30(m,5h),5.86(br,1h),5.15(s,2h),4.37-4.34(m,1h),2.28-2.21(m,1h),1.01-0.84(m,6h).步驟2.在28℃向化合物70-2(5.9g,23.48mmol)、n-甲氧基甲胺鹽酸鹽(2.52g,25.83mmol)和et3n(7.13g,70.44mmol)在dcm(60ml)中的溶液中加入hatu(13.4g,35.22mmol)。在將混合物在28℃攪拌3h后，除去溶劑并將殘留物溶于水(30ml)。將水層用etoac(80ml×3)萃取。合并有機層，經na2so4干燥并濃縮。將粗物質經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝2:1)得到化合物70-3(4.5g,65％).lcms(esi):m/z295.1[m+h+].步驟3.在-78℃向化合物70-3(588mg,2.0mmol)在dcm(8ml)中的混合物中逐滴加入dibal-h在甲苯中的溶液(1m,2.4ml,2.4mmol)。在將混合物在-78℃攪拌2h后，逐滴加入meoh(1ml)。將混合物溫熱至室溫。除去溶劑并將粗物質直接用于下一步。向上述粗物質在meoh(5ml)中的溶液中加入k2co3(553mg,4.0mmol)和化合物70-4(461mg,2.4mmol)。將反應混合物在26℃攪拌8h。除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝20:1)得到化合物70-5(300mg,65.2％).lcms(esi):m/z232.1[m+h+].步驟4.在0℃向nan3(2.0g,30.76mmol)在蒸餾水(4.5ml)和dcm(7.5ml)中的混合物中逐滴加入tf2o(1.57g,5.55mmol)。將混合物在0℃攪拌3h。將水層用dcm(4ml×2)萃取，并用飽和na2co3溶液(8ml)洗滌。向化合物70-6(249mg,2.79mmol)、k2co3(578mg,4.19mmol)和cuso45h2o(7mg,27.9umol)在h2o(9ml)和meoh(18ml)中的混合物中逐滴加入三氟甲磺酰基疊氮化物在dcm(15.5ml)中的溶液。在將混合物在26℃攪拌過夜后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(50ml)稀釋。將其用濃hcl酸化至ph6，用磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph6.2,50ml)稀釋，并用etoac(50ml×2)萃取。然后將水相用濃hcl酸化至ph2并用etoac(80ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥并蒸發得到70-7，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟5.向化合物70-7(321mg,2.79mmol)和化合物70-5(278mg,1.2mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入cu(ch3cn)4pf6(67mg,0.18mmol)。將反應混合物在50℃在氮氣下加熱2h。除去溶劑后，將殘留物經硅膠柱色譜純化(2.5-5％meoh/dcm)得到化合物70-8(90mg,22％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.65(s,1h),7.37-7.32(m,5h),5.05(s,2h),4.64(s,1h),3.35(s,4h),2.02(s,1h),0.85-0.67(m,6h).步驟6.在25℃向化合物70-8(1.4g,4.04mmol)和化合物70-9(1.49g,12.12mmol)在dcm(15ml)中的溶液中加入eedq(3.0g,12.12mmol)。在將反應混合物在25℃攪拌2h后，除去溶劑，將殘留物經制備性hplc純化，得到混合物(1.1g)。兩個異構體經sfc分離純化，得到70-10a(250mg)和其他對映異構體70-10b(116mg).1hnmr(400mhz,meod)δ8.03(s,1h),7.57-7.54(m,2h),7.35-7.28(m,7h),5.57(q,j＝7.2hz,1h),5.13-5.06(m,2h),4.72-4.65(m,1h),4.58(s,2h),2.21-2.17(m,1h),1.87(d,j＝7.2hz,3h),0.97(d,j＝6.8hz,3h),0.90(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z452.2[m+h+].步驟7.在25℃向70-10a(100mg,0.221mmol)在thf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(202mg,0.663mmol)和dipea(114mg,0.884mmol)。在將混合物回流加熱24h后，除去溶劑，并將殘留物經硅膠柱色譜純化(dcm/meoh＝20:1)得到中間體(90mg)。向諾氟沙星(70mg,0.219mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入dipea(94mg,0.73mmol)。在將溶液在25℃攪拌15min后，加入上述中間體(90mg,0.219mmol)。將混合物在25℃攪拌2h。除去溶劑并將殘留物經制備性tlc純化(dcm/meoh＝10:1)得到實施例70(26.5mg,23％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.32(s,1h),10.61(s,1h),8.98(s,1h),8.07(s,1h),7.95-7.92(m,1h),7.71-7.58(m,3h),7.38-7.16(m,8h),5.52(m,1h),5.10-5.00(m,4h),4.63-4.52(m,3h),3.60(s,4h),3.30(s,4h),2.10-2.00(m,1h),1.75(d,j＝7.6hz,3h),1.42(t,j＝7.6hz,3h),0.88-0.75(m,6h).lcms(esi):m/z797.6[m+h+].實施例71.7-(4-((4-((2s)-6-氨基-2-(4-(1-(芐基氧基羰基氨基)-2-(噻吩-2-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)己酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物71-1(500mg,1.84mmol)在無水dcm(20ml)中的混合物中加入et3n(559mg,5.52mmol)和hatu(1.049g,2.76mmol)。將混合物在室溫攪拌15min，然后加入nhme(ome)hcl(269mg,2.76mmol)。將反應混合物在室溫攪拌過夜。將混合物用etoac(30ml×3)和水(30ml)萃取，將合并的有機層干燥，濃縮，并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到71-2(500mg,86.4％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.34(d,j＝4.8hz,1h),7.22(d,j＝9.2hz,1h),6.94-6.89(m,2h),4.56(s,1h),3.70(s,3h),3.11(s,3h),3.09-2.95(m,2h),1.35(s,9h).步驟2.將化合物71-2(500mg,1.59mmol)溶于無水ch2cl2(5ml)并在干冰/丙酮浴中冷卻至-78℃。逐滴加入dibal-h(4.8ml,4.77mmol,1.0m在甲苯中)并將所得的溶液在-78℃攪拌3h。將過量的氫化物用meoh(5ml)淬滅并將所得的溶液溫熱至室溫。將溶液蒸發得到化合物71-3，其無需進一步純化。步驟3.向粗化合物71-3(406mg,1.59mmol)、化合物71-4(611mg,3.18mmol)在meoh(20ml)中的溶液中加入k2co3(659mg,4.77mmol)。將反應混合物在室溫攪拌過夜。將混合物真空濃縮，并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝5:1)得到71-5(250mg,62.3％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.45(d,j＝8.4hz,1h),7.35(dd,j＝4.8,1.2hz,1h),6.96-6.92(m,2h),4.35-4.31(m,1h),3.19(d,j＝1.2hz,1h),3.10-3.08(m,2h),1.36(s,9h).步驟4.在0℃向化合物71-5(250mg,0.99mmol)在dcm(5ml)中的溶液中逐滴加入hcl-etoac(5ml,4.0m,20.00mmol)。將反應混合物在0℃攪拌1h。將混合物在25℃真空濃縮得到71-6，其為鹽酸鹽(180mg,96.9％).步驟5.將cbz-cl(287mg,1.68mmol)在thf(2ml)中的溶液逐滴加至化合物71-6(170mg,0.91mmol)在飽和nahco3水溶液(2ml)中的溶液中。將反應混合物在0℃攪拌1h。將混合物用etoac(10ml×3)和h2o(10ml)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥，濾過并濃縮。將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝5:1)得到化合物71-7(250mg,96.3％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.93(d,j＝8.4hz,1h),7.38-7.31(m,6h),6.96-6.93(m,2h),5.02(s,2h),4.45-4.39(m,1h),3.26(d,j＝2.0hz,1h),3.13(dd,j＝6.8,2.0hz,2h).步驟6.向化合物71-7(280mg,0.98mmol)和化合物71-8(400mg,1.47mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入cu(ch3cn)4pf6(37mg,0.1mmol)。將反應混合物在50℃攪拌2h，得到71-9，其直接用于下一步。步驟7.向粗化合物71-9(547mg,0.98mmol)在dmf(5ml)中的混合物中加入eedq(484mg,1.96mmol)和化合物71-10(181mg,1.47mmol)。將反應混合物在室溫在氮氣下攪拌過夜。將混合物經制備性hplc純化，得到71-11(100mg,15.4％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.54(s,1h),8.11–8.06(m,1h),7.90(t,j＝8.4hz,1h),7.53(d,j＝8.8hz,2h),7.36-7.26(m,8h),6.92-6.89(m,1h),6.85(d,j＝3.2hz,1h),6.79(t,j＝4.8hz,1h),5.44-5.40(m,1h),5.14(t,j＝6.0hz,1h),5.06-4.93(m,3h),4.44(d,j＝5.6hz,2h),3.43-3.38(m,1h),3.01-3.24(m,1h),2.90-2.85(m,2h),2.12-2.07(m,2h),1.43-1.39(m,2h),1.37(s,9h),1.18-1.10(m,2h).步驟8.在0℃向化合物71-11(100mg,0.15mmol)在無水dmf(2ml)中的溶液中加入dipea(116mg,0.90mmol)、pnp碳酸鹽(91mg,0.30mmol)。在將反應混合物在0℃攪拌2h后，加入諾氟沙星。將混合物在0℃攪拌另外的1h，并將其經制備性hplc純化，得到化合物71-12(120mg,79.4％).步驟9.向化合物71-12(100mg,0.10mmol)在無水dcm(2.5ml)中的混合物中加入tfa(0.5ml)。將反應混合物在0℃攪拌1h。然后將混合物用dmf稀釋，并用nh3h2o逐滴調節至ph8。將所得的混合物經制備性hplc純化，得到實施例71(63mg,69.4％)。lcms(esi):rt＝0.830min，m/2+h+＝454.8.方法＝5-95/2min.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.84(bs,1h),8.96(s,1h),8.46(s,1h),8.13-8.09(m,1h),7.96-7.89(m,2h),7.61(d,j＝8.8hz,2h),7.38-7.30(m,8h),7.21(d,j＝7.2hz,1h),6.92-6.90(m,1h),6.86(d,j＝2.0hz,1h),5.49-5.45(m,1h),5.08-4.92(m,5h),4.60-4.55(m,2h),3.61(s,4h),3.34-3.26(m,6h),2.70-2.66(m,2h),2.19-2.08(m,2h),1.57-1.49(m,2h),1.42-1.37(m,3h),1.23-1.16(m,2h).實施例72.7-(4-((4-((s)-6-氨基-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-苯基乙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)己酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.向化合物72-1(14.7g,0.1mol)在水(300ml)中的溶液中加入cu2(oh)2co3(38g,0.1mol)。將其回流加熱1h。將固體濾出，并通過加入na2co3將濾液的ph調節至9.0。在0℃逐滴加入alloc-cl(14.4g,0.12mmol)，同時通過加入na2co3將ph保持在9.0。將混合物在室溫攪拌12h。將藍色固體經濾過收集并重新溶于水(300ml)。加入硫代乙酰胺(20mmol)并將溶液在50℃攪拌3h。將溶液用hcl酸化為ph2.0并煮沸10min。將cus濾出，并將溶液濃縮為100ml，并將72-2經濾過收集。1hnmr(400mhz,meod)δ5.94-5.88(m,1h),5.30-5.26(m,1h),5.18-5.15(m,1h),4.55-4.93(m,1h),3.50(brs,1h),3.13-3.09(m,2h),2.00-1.70(m,2h),1.54-1.41(m,4h).步驟2.向nan3(1.78g,27.45mmol)在h2o(5ml)和dcm混合物(7.5ml)中的溶液中加入tf2o(0.93ml,5.55mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，將其用dcm(50ml×3)萃取。將有機層用aq.na2co3洗滌并濃縮為10ml。加入化合物72-2(640mg,2.8mmol)，隨后加入k2co3(577mg,4.19mmol)、cuso4(7mg,0.028mmol)、h2o(9ml)和meoh(18ml)。將混合物在室溫攪拌12h。蒸發有機溶劑，將溶液用水稀釋，并將ph用hcl調節為6.0并用磷酸鹽緩沖液(0.25m,ph6.2,50ml)稀釋。將混合物用etoac(50ml×3)萃取。將有機層干燥得到化合物72-3，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟3.向72-3(560mg,2mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入72-4(1.12g,4.0mmol)和cat.cu(ch3cn)4pf6。將混合物在50℃在氮氣下攪拌3h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到72-5.lcms(esi):m/z536.2[m+h+]步驟4.向72-5(480mg,1.0mmol)在dcm(10ml)中的溶液中加入eedq(247mg,1.0mmol)和72-6(123g,1.0mmol)，并將混合物在0℃在氮氣下攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物用制備性hplc和sfc分離純化，得到72-7and72-8.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.91(s,1h),7.55-7.52(m,2h),7.33-7.15(m,12h),5.89-5.87(m,1h),5.42-5.38(m,1h),5.28-5.23(m,1h),5.15-5.02(m,3h),4.58(s,2h),4.51-4.47(m,2h),3.31-3.05(m,4h),2.20-2.15(m,2h),1.53-1.50(m,2h),1.31-1.21(m,2h).lcms(esi):m/z641.1[m+h+].1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.95(s,1h),7.56(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.17(m,12h),5.95-5.88(m,1h),5.45-5.41(m,1h),5.30-5.26(m,1h),5.18-5.03(m,3h),4.58(s,2h),4.51-4.50(m,2h),3.31-3.23(m,1h),3.15-3.01(m,3h),2.23-2.15(m,2h),1.56-1.53(m,2h),1.32-1.22(m,2h).lcms:m/z641.1[m+h+].步驟5.向72-7(59mg,0.1mmol)在無水dcm(30ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(62mg,0.2mmol)和dipea(1ml)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(5ml)。加入dipea(0.2ml)和諾氟沙星(65mg,0.2mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經柱色譜純化。向中間體在無水thf(10ml)中的溶液中加入pd(pph3)4(116mg,0.1mmol)。將混合物在室溫在氮氣下攪拌12h。除去溶劑后，將殘留物經硅膠柱色譜純化，得到實施例72.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.86(s,1h),8.47(s,1h),8.01-7.93(m,2h),7.59-7.57(m,2h),7.39-7.37(m,2h),7.27-7.14(m,11h),5.41(s,1h),5.14(s,2h),5.09-4.92(m,3h),4.59-4.50(m,2h),3.72-3.71(m,4h),3.30(s,4h),3.21-3.19(m,2h),2.89-2.85(m,2h),2.25-2.23(m,2h),1.69-1.67(m,2h),1.52-1.49(m,3h),1.40-1.20(m,2h).lcms(esi):m/z902.5[m+h+].實施例73:7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-2-(芐基氧基羰基氨基)-3-甲基丁-2-基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)丙酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4,4a,8a-四氫喹啉-3-羧酸步驟1.向aqna2co3(82g,0.78mol)和化合物73-1(20g,0.19mol)的混合物中加入cbz-osu(57g,0.23mol)在thf(150ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其調節至ph>10并將溶液用etoac(400ml×2)萃取。將水層用濃hcl酸化至ph<1并將溶液用etoac(500ml×2)萃取。將有機層經na2so4干燥并濃縮得到化合物73-2(45g,0.19mol)，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.向化合物73-2(20g,84.3mmol)、n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(8.9g,92.7mmol)和hatu(48.1g,126.4mmol)在dcm(200ml)中的混合物中加入et3n(48.7ml,337.2mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物用水(300ml)吸收。將水層用etoac(300ml×3)萃取。將有機層用飽和nahco3(100ml)、濃hcl(100ml)，飽和nacl(100ml)洗滌。除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到化合物73-4(12.9g,46.0mmol).步驟3.在-78℃將dibal(17.8ml,1m在tol中)逐滴加至化合物73-4(4.15g,14.8mmol)在無水ch2cl2(100ml)中的溶液中。將所得的溶液在-78℃攪拌2h并將過量的dibal用無水meoh(5ml)淬滅，并將所得的溶液溫熱至室溫。將溶液濃縮得到化合物73-5(3.27g,14.8mmol)，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.在將化合物75-5(3.27g,14.8mmol)、73-6(2.96g,17.8mmol)和k2co3(4.1g,29.7mmol)在meoh(60ml)中的混合物在室溫攪拌16h后，減壓除去溶劑并將粗殘留物在etoac(200ml)和水(100ml)之間分配。將有機層用鹽水洗滌并經無水na2so4干燥。除去溶劑后，將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到化合物73-7(606mg,2.79mmol).步驟5.歷時5min在0℃向nan3(3.2g,49.3mmol)在蒸餾水(10ml)和ch2cl2(16ml)中的混合物中緩慢加入tf2o(1.7ml,9.9mmol)。在將其攪拌2h后，分離有機相并將水相用ch2cl2(8ml×2)萃取。將含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分用飽和na2co3洗滌一次并加至化合物73-8(0.86g,4.93mmol)、k2co3(1.02g,7.40mmol)和cuso4.5h2o(25mg,0.099mmol)在蒸餾水(18ml)和meoh(36ml)中的混合物中。在將混合物在26℃攪拌12h后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(50ml)稀釋并用濃hcl酸化至ph6，并用0.2mph6.2磷酸鹽緩沖液(50ml)稀釋。將其用etoac(100ml×2)洗滌，然后將水相用濃hcl酸化至ph2。將其用etoac(200ml×3)萃取并將合并的層經na2so4干燥濃縮并無需進一步純化即可用于下一步。步驟6.將化合物73-9(0.99g,4.93mmol)、化合物73-7(0.54g,2.46mmol)和cu(ch3cn)2pf6(115mg,0.37mmol)在dmf(5ml)中的混合物在50℃攪拌2h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到化合物73-10(250mg,23％).步驟7.將化合物73-10(199mg,0.55mmol)、化合物73-11(176mg,1.43mmol)和eedq(353mg,1.43mmol)在dcm(10ml)中的混合物在24℃攪拌2h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到73-12(100mg,39.1％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.98(s,1h),7.54(d,j＝8.4hz,2h),7.33-7.31(m,6h),7.10(s,1h),5.55-5.49(m,1h),4.98(s,2h),4.55(s,3h),2.35(s,1h),1.84(d,j＝6.4hz,3h),1.69(s,3h),0.94(d,j＝6.8hz,3h),0.79(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z465.9[m+h+].步驟8.將73-12(150mg,0.29mmol)、pnp(173mg,0.57mmol)和dipea(111mg,0.86mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h。除去溶劑并且殘留物無需進一步純化即可用于下一步。將混合物(200mg,0.29mmol)、dipea(112mg,0.87mmol)和諾氟沙星(316mg,0.87mmol)在dmf(5ml)中的溶液在25℃攪拌4h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例73(38.9mg,14.8％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.69(s,1h),8.11(d,j＝12.8hz,1h),7.94(s,1h),7.59(s,1h),7.50(d,j＝8.0hz,2h),7.32-7.27(m,6h),6.82(d,j＝6.4hz,1h),5.45(s,1h),5.38-5.37(m,1h).5.10(s,2h),4.97(s,2h),4.34-4.29(m,2h),3.71(d,j＝2.4hz,4h),3.25(s,4h),2.52-2.46(m,1h),1.94-1.91(m,3h),1.74(s,3h),1.58-1.56(m,3h),0.93(d,j＝7.2hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z811.2[m+h+].實施例74.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-(4-氟苯基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4,4a,8a-四氫喹啉-3-羧酸.步驟1.歷時5min在攪拌的同時將tf2o(3.15ml,18.4mmol)緩慢加至冰浴中的nan3(5.93g,91.3mmol)在h2o(18ml)和dcm(30ml)中的溶液中。在將其在0℃攪拌2h后，分離有機相。將含水部分用dcm(30ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分并用飽和na2co3洗滌一次且無需進一步純化即可使用。使化合物74-1(1.6g,9.14mmol)、k2co3(1.90g,13.7mmol)和cuso4.5h2o(46mg,0.183mmol)在h2o(33ml)和meoh(66ml)中混合。加入三氟甲磺酰基疊氮化物在dcm中的溶液并將混合物在20℃攪拌12h。減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(60ml)稀釋，用濃hcl酸化至ph6并用0.2mph6.2磷酸鹽緩沖液(60ml)稀釋。將其用etoac(150ml×2)萃取除去磺酰胺副產物。然后將水相用濃hcl酸化至ph2。將其用etoac(200ml×3)萃取并合并有機層，經na2so4干燥并蒸發得到74-2，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.將74-2(1.84g,9.14mmol)、74-3(1.36g,4.57mmol)和cu(cn)4pf6(213mg,0.687mmol)在dmf(10ml)中的混合物在50℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到74-4(470mg,20.6％).lcms(esi):m/z499.2[m+h+].步驟3.將74-4(300mg,0.602mmol)、74-5(148mg,1.20mmol)和eedq(294mg,1.20mmol)在dcm(10ml)中的混合物在20℃攪拌10h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc和sfc純化，得到74-6(160mg,44.1％)和74-7(95mg,26.2％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.5(s,1h),8.07(s,1h),7.80(d,j＝9.2hz,1h),7.53(d,j＝6.8hz,2h),7.51-7.18(m,8h),7.05-7.00(m,2h),6.03-6.00(m,1h),5.47-5.41(m,3h),5.12-5.09(m,1h),4.99-4.88(m,3h)4.42(d,j＝5.6hz,2h),3.17-2.92(m,4h),2.14-2.05(m,2h),1.28-1.22(m,2h).lcms(esi):m/z604.1[m+h+].1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.56(s,1h),8.03(s,1h),7.81(d,j＝9.2hz,1h),7.51(d,j＝6.8hz,2h),7.28-7.18(m,8h),7.04-7.00(m,2h),6.06-6.03(m,1h),5.49-5.41(m,3h),5.13-5.10(m,1h),4.99-4.87(m,3h)4.42(d,j＝5.6hz,2h),3.18-2.92(m,4h),2.13-2.02(m,2h),1.24-1.23(m,2h).lcms(esi):m/z604.1[m+h+].步驟4.將74-6(50mg,0.082mmol)、pnp(53mg,0.166mmol)和dipea(32mg,0.246mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h。除去溶劑后，殘留物無需進一步純化即可使用。將上述粗產物(110mg,粗的,0.082mmol)、dipea(32mg,0.246mmol)和諾氟沙星(51mg,0.166mmol)在dmf(5ml)中的混合物在20℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例74(25mg,32.1％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.64-15.33(m,1h),10.67(s,1h),8.96(s,1h),8.21-7.03(m,17h),6.08(s,1h),5.47(s,3h),5.08(s,2h),5.01-4.91(m,3h),4.58(s,2h).3.61(s,4h),3.31(s,4h),3.20-2.96(m,4h),2.12(s,2h),1.41-1.24(m,5h).lcms(esi):m/z949.1[m+h+],475.3[m/2+h+].實施例75.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-氨基-3-甲基丁基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.歷時15min將cbz-hosu(22.8g,91.4mmol)在thf(60ml)中的溶液逐滴加至75-1(10.0g,76.2mmol)在水(60ml)和thf(30ml)的混合物中的混合物中。將混合物用na2co3(24.2g,228.6mmol)處理。在將反應混合物在25℃攪拌16h后，除去溶劑并將殘留物用etoac(150ml×3)萃取。將水相用濃hcl酸化至ph＝2，并用etoac(60ml×3)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥并減壓濃縮得到75-2(21.0g粗的)。lcms(esi):m/z288.1[m+na+].步驟2.在25℃向75-2(5.0g,18.85mmol)、n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(2.2g,22.62mmol)和et3n(5.7g,56.55mmol)在dcm(150ml)中的溶液中加入hatu(10.8g,28.28mmol)。在將混合物在25℃攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物用水(80ml)吸收。將水層用etoac(80ml×2)萃取。將有機層用2nhcl溶液(80ml)洗滌并經na2so4干燥，濾過并濃縮。將粗物質經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝2:1)得到75-3(4.1g,71％).lcms(esi):m/z309.2[m+h+].步驟3.在-78℃將dibal-h在甲苯中的溶液(1m,16ml,16mmol)逐滴加至75-3(4.1g,13.3mmol)在dcm(25ml)中的混合物中。在將混合物在-78℃攪拌2h后，逐滴加入meoh(1ml)。將混合物溫熱至25℃，除去溶劑，并溶于meoh(40ml)。在0℃向該溶液中加入k2co3(3.68g,26.6mmol)和75-4(3.07g,16.0mmol)。在將溶液在25℃攪拌16h后，除去溶劑，并將粗物質用1nhcl溶液(30ml)吸收并用etoac(360ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過并真空濃縮。將粗物質經硅膠柱色譜純化(pe/etoac＝20:1)得到75-5(1.9g,58％).lcms(esi):m/z246.1[m+h+].步驟4.在25℃將cu(ch3cn)4pf6(432mg,1.16mmol)加至75-6(3.11g,15.48mmol)和化合物5(1.9g,7.74mmol)在dmf(15ml)中的溶液中。在后將反應混合物在50℃在氮氣下加熱2h，除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到75-7(2.1g,61％).1hnmr(400mhz,dmso–d6)δ7.95(s,1h),7.69(d,j＝8.8hz,1h),7.36-7.29(m,5h),5.96(br,1h),5.38-5.35(m,1h),5.07-4.99(m,2h),4.82-4.77(m,1h),2.94(s,2h),2.16-2.06(m,2h),1.68-1.56(m,3h),1.28-1.05(m,2h),0.92-0.80(m,6h).步驟5.將75-7(500mg,1.12mmol)、75-8(414mg,3.36mmol)和eedq(831mg,3.36mmol)在dcm(10ml)中的混合物在25℃攪拌2h。除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化(dcm/meoh＝5:1)得到75-9(350mg,57％).1hnmr(400mhz,meod)δ8.02(s,1h),7.56-7.54(m,2h),7.33-7.27(m,7h),5.50-5.46(m,1h),5.07(s,2h),4.95-4.91(m,1h),4.55(s,2h),3.25-3.07(m,2h),2.25-2.21(m,2h),1.77-1.64(m,3h),1.44-1.40(m,2h),0.96-0.95(m,6h).lcms(esi):m/z552.2[m+h+].步驟6.在25℃向75-9(120mg,0.218mmol)在thf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(199mg,0.654mmol)和dipea(113mg,0.872mmol)。在將混合物在50℃加熱18h后，除去溶劑，并將殘留物溶于dmf(3ml)。加入諾氟沙星(104mg,0.327mmol)和dipea(141mg,1.09mmol)并將混合物在25℃攪拌6h。除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例75(90mg,46％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.34(s,1h),10.64(s,1h),8.97(s,1h),8.13(s,1h),8.04(s,1h),7.97-7.93(m,1h),7.73-7.70(m,1h),7.61-7.59(m,2h),7.38-7.20(m,8h),6.03(m,1h),5.47-5.43(m,1h),5.07-5.03(m,4h),4.82-4.74(m,1h),4.59-4.57(m,2h),3.61(s,4h),3.34(s,4h),2.90-3.01(m,2h),2.10-2.07(m,2h),1.62-1.56(m,3h),1.42-1.38(m,3h),1.27(m,2h),0.90-0.89(m,6h).lcms(esi):m/z897.4[m+h+].實施例76.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((s)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)-4-甲基戊酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.實施例76使用如實施例57的操作制備，采用來自合成實施例57的中間體。lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.828min，ms＝529.4[1/2m+1]1hnmr甲醇-d4400mhz,δ8.89(s,1h),8.09(s,1h),8.00(d,j＝13.2hz,1h),7.62(d,j＝8hz,2h),7.38(d,j＝8hz,2h),7.20(s,1h),5.51(d,j＝5.2hz,1h),5.15(s,2h),4.96(d,j＝6.8hz,1h),4.88(s,2h),4.60(s,4h),3.73(s,4h),3.46-3.42(m,2h),3.35(s,4h),2.65(s,4h),2.30-2.22(m,4h),1.65-1.56(m,9h),1.54-1.28(m,5h),1.00-0.97(m,12h).實施例77.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((s)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.實施例77使用如實施例59的操作制備，采用來自合成實施例59的中間體。lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.841min，ms＝546.5[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.66(s,1h),8.96(s,1h),8.34(d,j＝9.2hz,1h),8.09(s,1h),8.04(d,j＝8.8hz,1h),7.95(d,j＝12.8hz,1h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.36(d,j＝8.8hz,2h),7.28-7.17(m,6h),6.05(s,1h),5.55-5.48(m,1h),5.43(s,2h),5.07(s,2h),4.90-4.86(m,1h),4.59-4.58(m,3h),3.61(s,4h),3.34-3.23(m,4h),3.04-2.95(m,4h),2.78(s,1h),2.59(s,4h),2.05-1.98(m,4h),1.43-1.22(m,10h),1.04(d,j＝7.2hz,2h),0.77(d,j＝6.8hz,3h),1.42(d,j＝6.8hz,3h),.實施例78.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-((s)-2-(6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸實施例78使用如實施例60的操作制備，采用來自合成實施例60的中間體。步驟1.在室溫向化合物60-5b(50mg,0.072mmol)在無水dmf(3ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(50mg,0.16mmol)和dipea(0.5ml,3mmol)，并將混合物在室溫攪拌1.5h。加入諾氟沙星(50mg,0.16mmol)。將混合物在室溫攪拌額外的1h。將混合物濃縮，濾過并經制備性hplc純化(fa),得到實施例78(38.8mg,收率:52％).lcms:(5-95,ab,1.5min，esi),0.833min，ms＝522.4[1/2m+1]1hnmrdmso-d6400mhz,δ10.1(s,1h),8.93(s,1h),8.25-8.22(d,1h),8.04(s,1h),7.93-7.90(d,1h),7.81-7.79(d,1h),7.58-7.56(d,j＝8.0hz,2h),7.35-7.33(d,j＝8.0hz,2h),7.20-7.18(m,1h),6.0(m,1h),5.5(m,1h),5.40(s,2h),5.04(s,2h),4.9-4.87(m,1h),4.6-4.5(m,2h),4.2-4.1(m,1h),3.6(s,4h),3.2(m,6h),3.05-2.9(m,2h),2.55(s,4h),2.18-2.0(m,5h),1.9-1.8(m,1h),1.5-1.35(m,7h),1.3-1.05(m,4h),0.84-0.77(m,12h).實施例79.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-胍基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向化合物79-1(2g,19.4mmol)在thf(4ml)中的溶液中加入飽和aq.k2co3(30ml)，隨后在0℃加入cbz-cl(3.958g,23.2mmol)。在將反應混合物在28℃攪拌1h后，將其用etoac(20ml×3)和h2o(20ml)萃取。將合并的有機層經na2so4干燥，濾過并濃縮得到化合物79-2(5g,100％)，其無需進一步純化即可用于下一步。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.36-7.31(m,5h),6.92(d,j＝8.8hz,1h),5.01(s,2h),3.39-3.32(m,3h),1.80-1.76(m,1h),0.85-0.80(m,6h).步驟2.在0℃在氮氣下向化合物79-2(6.8g,28.7mmol)在dcm(100ml)中的溶液中加入dmp(14.59mg,343.4mmol)。在5min后，將反應混合物溫熱至室溫并在室溫攪拌1h。將反應混合物冷卻至0℃并用飽和nahco3/na2so3溶液(1:1)洗滌。在分離后，將有機層再洗滌一次。將合并的水層用dcm(30ml×2)萃取。將其經na2so4干燥，濾過并濃縮得到化合物79-3(5.3g,79％)，其無需進一步純化即可用于下一步。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.51(d,j＝0.8hz,1h),7.72-7.61(m,1h),7.43-7.30(m,5h),5.04(s,2h),3.91-3.88(m,1h),2.18-2.13(m,6h),0.94-0.82(m,6h).步驟3.向化合物79-3(粗的,4.9g,12.76mmol)、化合物79-4(4.9g,25.5mmol)在meoh(50ml)中的溶液中加入k2co3(5.28g,38.28mmol)。將反應混合物在室溫攪拌過夜。將混合物濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到預期產物79-5(1.30g,44％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.74(d,j＝8.8hz,1h),7.37-7.29(m,5h),5.01(s,2h),4.09-4.05(m,1h),3.16(d,j＝2.4hz,1h),1.76(d,j＝6.8hz,1h),0.91(d,j＝6.8hz,3h),0.87(d,j＝6.8hz,3h).步驟4.向化合物79-6(2g,3.09mmol)在dcm(30ml)中的溶液中加入化合物79-7(1.6ml,15.4mmol)。在將反應混合物在室溫攪拌16h后，將其真空濃縮，并用mtbe洗滌，濾過得到預期產物79-8(1.315g,100％).步驟5.將nan3(1.6g,15.45mmol)在蒸餾水(5ml)和ch2cl2(10ml)中的混合物在冰浴上冷卻。歷時5min緩慢加入tf2o(1.1ml,6.18mmol)并攪拌2h。除去ch2cl2相并將水相用ch2cl2(5ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分并用飽和na2co3(40ml)洗滌一次且無需進一步純化即可使用。將化合物79-8(1.315g,3.09mmol)、k2co3(641mg,4.635mmol)和cuso4·5h2o(155mg,0.618mmol)加至蒸餾水(10ml)和meoh(20ml)。加入三氟甲磺酰基疊氮化物在ch2cl2中的溶液(50ml)并將混合物在室溫攪拌過夜。減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(50ml)稀釋并用濃hcl酸化至ph6，然后用0.2mph6.2磷酸鹽緩沖液(50ml)稀釋并用etoac(3×100ml)萃取除去磺酰胺副產物。然后將水相用濃hcl酸化至ph2。產物獲得自另外一次etoac/meoh(20:1)萃取(4×100ml)。合并這些etoac/meoh萃取液，經na2so4干燥并蒸發得到化合物79-9，其無需進一步純化(600mg,43％).步驟6.向化合物79-9(500mg,1.1mmol)和79-5(307g,1.33mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入cu(ch3cn)4pf6(165mg,0.44mmol)。將反應混合物在50℃攪拌2h，混合物(79-10)直接用于下一步。步驟7.向化合物79-10(粗的,752mg,1.1mmol)在dmf(5ml)中的混合物中加入eedq(544mg,2.2mmol)和化合物79-11(203g,1.65mmol)。將反應混合物在0℃攪拌并在氮氣下溫熱至室溫過夜。將混合物經制備性hplc和sfc分離純化，得到化合物79-12(250mg,30％).步驟8.向化合物79-12(90mg,0.114mmol)和pnp碳酸鹽(69mg,0.228mmol)在dmf(3ml)中的溶液中加入dipea(45mg,0.342mmol)。將反應混合物在21℃在氮氣下攪拌3h。混合物(79-13)無需進一步純化即可直接用于下一步。步驟9.向來自前面步驟的溶液中加入諾氟沙星(75mg,0.228mmol)。將反應混合物在21℃攪拌1h。將混合物經制備性hplc純化，得到化合物79-14(80mg,62％).步驟10.在0℃向化合物79-14(60mg,0.053mmol)在dcm(5ml)中的溶液中加入tfa(1ml)。將反應混合物在16℃攪拌5h。將混合物經制備性hplc和sfc純化，得到實施例79(30mg,64％).lcms(esi):rt＝0.837min，m+h+＝882.2.方法＝5-95/1.5min.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.94(s,1h),8.48(s,1h),8.12(s,1h),7.92(d,j＝12.4hz,1h),7.76(d,j＝8.8hz,1h),7.61(s,1h),7.34(m,10h),5.07-4.99(m,5h),4.59(d,j＝7.2hz,1h),3.61(s,4h),3.17(m,6h),3.12(s,2h),2.18-2.03(m,4h),1.39(s,5h),0.84(d,j＝6.4hz,3h),0.78(d,j＝6.0hz,3h).實施例80.(s)-7-(4-((4-(2-(4-(2-(芐基氧基羰基氨基)丙-2-基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.步驟1.向cbz-osu(57g,0.23mol)在thf(150ml)中的溶液中加入aqna2co3(82g,0.78mol)和80-1(20g,0.19mol)的混合物。在將其在室溫攪拌16h后，將其調節至ph>10并用etoac(400ml×2)洗滌。收集水層并用濃hcl酸化至ph<1。將其用etoac(500ml×2)萃取。將有機層經na2so4干燥并蒸發得到80-2(45g,97.8％).步驟2.向80-2(20g,84.3mmol)、n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(8.9g,92.7mmol)和hatu(48.1g,126.4mmol)在dcm(200ml)中的混合物中加入et3n(48.7ml,337.2mmol)。將混合物在室溫攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物用水(300ml)吸收。將水層用etoac(300ml×3)萃取并將有機層用飽和nahco3(150ml)、濃hcl(100ml)和飽和nacl(100ml)洗滌。將有機層經na2so4干燥，濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到80-3(12.9g,54.6％).步驟3.在-78℃將dibal-h(17.8ml,1m在甲苯中)逐滴加至80-3(4.15g,14.8mmol)在無水ch2cl2(100ml)中的溶液中并將所得的溶液在-78℃攪拌2h。將過量的dibal經無水meoh(5ml)淬滅并將溶液溫熱至室溫。將溶液濃縮得到80-4(3.27g),其無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.將80-4(3.27g,14.8mmol)、80-5(2.96g,17.8mmol)和k2co3(4.1g,29.7mmol)在meoh(60ml)中的混合物在室溫攪拌16h。減壓除去溶劑并將粗殘留物在etoac(200ml)和水(100ml)之間分配。將有機層用鹽水(50ml)洗滌并經無水na2so4干燥。減壓除去溶劑并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到80-6(606mg,18.9％).步驟5.歷時5min在0℃將tf2o(1.7ml,9.9mmol)緩慢加至nan3(3.2g,49.3mmol)在蒸餾水(10ml)和ch2cl2(16ml)中的溶液中。在將其攪拌2h后，分離有機相，并將水相用ch2cl2(20ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的合并的有機餾分并用飽和na2co3洗滌一次，且無需進一步純化即可使用。向80-7(0.86g,4.93mmol)和k2co3(1.02g,7.40mmol)、cuso4.5h2o(25mg,0.099mmol)在h2o(18ml)和meoh(36ml)中的混合物中加入三氟甲磺酰基疊氮化物在ch2cl2中的溶液(32ml)，并將混合物在26℃攪拌12h。減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(50ml)稀釋。將其用濃hcl酸化至ph6并用磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph6.2,50ml)稀釋并用etoac(100ml×2)洗滌。然后將水相用濃hcl酸化至ph2并用etoac(100ml×2)萃取，經na2so4干燥并濃縮得到80-8，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟6.將80-8(0.99g,4.93mmol)、80-6(0.54g,2.46mmol)和cu(ch3cn)4pf6(115mg,0.37mmol)在dmf(5ml)中的混合物在50℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到80-9(250mg,23％).步驟7.將80-9(199mg,0.48mmol)、80-10(176mg,1.43mmol)和eedq(353mg,1.43mmol)在dcm(10ml)中的混合物在24℃攪拌2h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到80-11(211mg,84％).1hnmr(400mhz,meod)δ8.00(s,1h),7.56(dd,j＝1.6,8.4hz,2h),7.33-7.31(m,7h),5.48-5.44(m,2h),4.99(s,2h),4.56(s,2h),3.23-3.16(m,1h),3.09-3.03(m,1h),2.26-2.20(m,2h),1.68(s,6h),1.51-1.45(m,1h),1.39-1.29(m,1h).lcms(esi):m/z524.3[m+h+].步驟8.在將80-11(150mg,0.29mmol)、pnp碳酸鹽(173mg,0.57mmol)和dipea(111mg,0.86mmol)在dcm(5ml)中的混合物在50℃攪拌12h后，除去溶劑并加至dipea(112mg,0.87mmol)和諾氟沙星(316mg,0.87mmol)在dmf(5ml)中的溶液中，并在25℃攪拌4h。除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例80(113mg,45％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.65(s,1h),8.96(s,1h),7.98-7.93(m,2h),7.63-7.60(m,3h),7.38-7.20(m,9h),6.05(s,1h),5.44(s,3h),5.07(s,2h),4.93(s,2h),4.59-4.57(m,2h),3.61(s,4h),3.02-2.98(m,2h),2.12-2.02(m,2h),1.57(d,j＝4.0hz,6h),1.42-1.38(m,3h),1.28-1.23(m,2h).lcms(esi):m/z869.3[m+h+].實施例81.7-(4-((4-((s)-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-苯基乙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4,4a,8a-四氫喹啉-3-羧酸.步驟1.向cbz-l-苯基丙氨酸(3.0g,10mmol)在dcm(100ml)中的溶液中加入hatu(4.57g,12.0mmol)和dipea(3.87g,30.0mmol)。在將其在室溫攪拌15min后，加入n-甲氧基甲胺鹽酸鹽(1.2g,12mmol)。在將溶液攪拌另外的1h后，將其用dcm(60ml×3)萃取，用10％aq.hcl(60ml)和水(60ml)洗滌。將有機層經na2so4干燥，濃縮并經硅膠柱色譜純化，得到81-2(3.2g,94％).1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36-7.14(m,10h),5.42-5.40(m,1h),5.13-5.02(m,3h),3.69(s,3h),3.18(s,3h),3.11-3.06(m,1h),2.94-2.89(m,1h).步驟2.在-78℃在氮氣下將dibal-h(20ml,1m在甲苯中)加至81-2(3.4g,10mmol)在無水dcm(150ml)中的溶液中。在將溶液在-78℃攪拌6h后，將混合物用meoh(50ml)和水(50ml)淬滅。將其濾過并將濾液經na2so4干燥，濃縮并且81-3無需進一步純化即可直接用于下一步。lcms(esi):m/z284.1[m+h+].步驟3.在0℃向81-3(10mmol)在meoh(100ml)中的溶液中加入k2co3(2.76g,20mmol)和81-4(2.31g,12mmol)。在將反應混合物在0℃攪拌12h后，除去溶劑并將殘留物經硅膠柱色譜純化，得到81-5.lcms(esi):m/z280.1[m+h+].步驟4.向nan3(1.78g,27.45mmol)在h2o(5ml)和dcm混合物(7.5ml)中的溶液中加入tf2o(0.93ml,5.55mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，將其用dcm(60ml×3)萃取。將有機層用aq.na2co3洗滌并濃縮為10ml。然后加入81-6(500mg,2.8mmol)，隨后加入k2co3(577mg,4.19mmol)、cuso4(7mg,0.028mmol)、h2o(9ml)和meoh(18ml)。將混合物在室溫攪拌12h。在蒸發有機溶劑后，將其用水(20ml)稀釋并將ph用hcl調節至6.0，然后用磷酸鹽緩沖液(0.25m,ph6.2,50ml)稀釋。將混合物用etoac(50ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥得到81-7，其直接用于下一步。步驟5.向81-5(560mg,2mmol)在dmf(5ml)中的溶液中加入81-7(804mg,4.0mmol)和cat.cu(ch3cn)4pf6。將混合物在50℃在氮氣下攪拌3h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到81-8.1hnmr(400mhz,meod)δ8.00(s,1h),7.57(d,j＝8.4hz,2h),7.35-7.18(m,12h),5.50-5.45(m,1h),5.14-5.11(m,1h),5.05-5.03(m,2h),4.58(s,2h),3.26-3.24(m,2h),3.13-3.12(m,2h),2.35-2.15(m,2h),1.55-1.35(m,2h).步驟6.在氮氣下向81-8(480mg,1.0mmol)在dcm(10ml)中的溶液中加入eedq(247mg,1.0mmol)和81-9(123g,1.0mmol)并將混合物在0℃攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc和sfc分離純化，得到81-10and81-11.1hnmr(400mhz,meod)δ8.00-7.95(m,1h),7.58-7.56(m,2h),7.35-7.18(m,12h),5.51-5.47(m,1h),5.15-5.09(m,1h),5.55-5.00(m,2h),4.58(s,2h),3.33-3.20(m,2h),3.16-3.09(m,2h),2.25-2.18(m,2h),1.43-1.38(m,2h).lcms(esi):m/z586.0[m+h+].1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(s,1h),7.57(d,j＝8.8hz,2h),7.35-7.18(m,12h),5.52-5.48(m,1h),5.13-4.87(m,3h),4.58(s,2h),3.33-3.15(m,2h),3.14-3.07(m,2h),2.27-2.14(m,2h),1.46-1.31(m,2h).lcms(esi):m/z586.1[m+h+].步驟7.向81-10(59mg,0.1mmol)在無水dcm(30ml)中的溶液中加入pnp碳酸鹽(62mg,0.2mmol)和dipea(1ml)。將混合物回流加熱16h。除去溶劑后，將殘留物溶于dmf(5ml)和dipea(0.3ml)并加入諾氟沙星(65mg,0.2mmol)。將混合物在室溫攪拌1h。除去溶劑后，將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例81.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ15.35(brs,1h),10.66(s,1h),8.97(s,1h),8.10(s,1h),7.95(d,j＝12.8hz,1h),7.85-7.83(m,1h),7.62(d,j＝8.4hz,2h),7.39-7.19(m,13h),6.07-6.02(m,1h),5.51-5.45(m,3h),5.07(s,2h),5.01-4.92(m,3h),4.59(d,j＝7.6hz,2h),3.61(s,4h),3.44-3.38(m,4h),3.21-3.16(m,1h),3.06-2.98(m,3h),2.12-2.00(m,2h),1.45-1.15(m,5h).lcms(esi):m/z931.2[m+h+].實施例82.(s)-7-(4-((4-(2-(4-(1-(芐基氧基羰基氨基)環丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸步驟1.向82-1(10g,98.9mmol)在na2co3水溶液(41.9g,395.6mmol)中的混合物中加入cbz-osu(29.6g,118.7mmol)在thf(150ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其調節至ph>10并將溶液用etoac(200ml×2)洗滌。將水層用濃hcl酸化至ph<1并將溶液用etoac(250ml×2)萃取。將有機層經na2so4干燥并濃縮得到82-2(23g,粗的)，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟2.向82-2(10g,42.5mmol)、n,o-二甲基羥胺鹽酸鹽(4.5g,46.8mmol)和hatu(24.2g,63.8mmol)在dcm(100ml)中的溶液中加入et3n(24.6ml,170.0mmol)。在將混合物在室溫攪拌2h后，除去溶劑，并將粗物質用水(300ml)吸收。將水層用etoac(300ml×3)萃取。將有機層用飽和nahco3、稀hcl、飽和nacl洗滌，濃縮并經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝2:1)得到82-3(10.8g,91.3％).步驟3.在-78℃將dibal-h(22.5ml,1m在甲苯中)逐滴加至82-3(4.2g,15.0mmol)在無水ch2cl2(50ml)中的溶液中。在將混合物在-78℃攪拌2h后，將過量的dibal經無水meoh(15ml)淬滅并將所得的溶液溫熱至室溫。將溶液濃縮得到82-4(3.3g,粗的)，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟4.在將82-4(3.3g,15.0mmol)、82-5(3.0g,18.1mmol)和k2co3(4.1g,30mmol)在meoh(60ml)中的混合物在室溫攪拌16h后，減壓除去溶劑并將粗殘留物在etoac(200ml)和水(100ml)之間分配。將有機層用鹽水洗滌并經無水na2so4干燥。除去溶劑后，將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到82-6(1.8g,55.6％).步驟5.在0℃將tf2o(4.7ml,27.9mmol)緩慢加至nan3(9.2g,139.3mmol)在蒸餾水(30ml)和dcm(48ml)中的混合物中。在將其攪拌2h后，分離dcm層并將含水部分用ch2cl2(24ml×2)萃取。收集含有三氟甲磺酰基疊氮化物的有機餾分并用飽和na2co3洗滌一次，且無需進一步純化即可使用。將三氟甲磺酰基疊氮化物在ch2cl2中的溶液(96ml)加至82-7(2.44g,13.9mmol)、k2co3(2.89g,20.9mmol)和cuso4.5h2o(347mg,1.39mmol)在h2o(54ml)和meoh(108ml)中的混合物中。在將混合物在26℃攪拌12h后，減壓除去有機溶劑并將含水漿液用h2o(200ml)稀釋。將混合物用濃hcl酸化至ph＝6并用磷酸鹽緩沖液(0.2m,ph6.2,200ml)稀釋并用etoac(300ml×2)洗滌。然后將水相用濃hcl酸化至ph＝2。將其用etoac(300ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥并濃縮得到82-8，其無需進一步純化即可用于下一步。步驟6.在將82-8(2.8g,14.0mmol)、82-6(1.5g,7.0mmol)和cu(cn)4pf6(779mg,2.1mmol)在dmf(20ml)中的混合物在50℃攪拌2h后，除去溶劑并將殘留物經制備性hplc純化，得到82-9(200mg,6.9％).步驟7.在將82-9(410mg,0.98mmol)、82-10(364mg,2.95mmol)和eedq(730mg,2.95mmol)在dcm(10ml)中的混合物在24℃攪拌2h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到82-11(350mg,68％).1hnmr(400mhz,meod)δ7.96(s,1h),7.60(d,j＝8.4hz,2h),7.42-7.35(m,7h),5.50-5.46(m,1h),5.14(s,2h),4.61(s,2h),3.24-3.22(m,1h),3.15-3.13(m,1h),2.30-2.15(m,2h),1.46-1.40(m,4h),1.29(s,2h).lcms(esi):m/z522.0[m+h+].步驟8.在將82-11(200mg,0.38mmol)、pnp(234mg,0.77mmol)和dipea(149mg,1.15mmol)在dcm(10ml)中的混合物在50℃攪拌12h后，將其濃縮并加至dipea(149mg,1.15mmol)和諾氟沙星(367mg,1.15mmol)在dmf(8ml)中的溶液中。在將其在23℃攪拌4h后，除去溶劑，并將殘留物經制備性hplc純化，得到實施例82(50mg,15.2％).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.62(s,1h),8.96(s,1h),8.18(s,1h),7.96-7.89(m,2h),7.62-7.60(m,2h),7.38-7.36(m,7h),7.22-7.20(m,1h),6.04(s,1h),5.43(s,3h),5.07(s,2h),5.03(s,2h),4.59-4.57(m,2h),3.67(s,6h),3.30--2.98(m,4h),2.20-2.09(m,2h),1.42-1.38(m,3h),1.25-1.22(s,4h),1.13(s,2h).ms(esi):m/z867.05[m+h+],889.16[m+na+].實施例83.7-(4-((4-((s)-5-氨基-2-(4-((s)-1-(芐基氧基羰基氨基)-2-甲基丙基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)戊酰氨基)芐基氧基)羰基)哌嗪-1-基)-1-乙基-6-氟-4-氧代-1,4-二氫喹啉-3-羧酸.實施例83使用如實施例58的操作制備。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.96(s,1h),8.47-8.39(m,1h),8.08(s,1h),7.94(d,j＝13.2hz,1h),7.74(d,j＝9.2hz,1h),7.61(d,j＝8.4hz,2h),7.38-7.29(m,8h),7.22-7.20(m,1h),5.49-5.47(m,1h),5.07(s,2h),5.02(d,j＝6.0hz,2h),4.62-4.55(m,3h),3.60(s,4h),3.16(s,4h),2.77-2.70(m,2h),2.20-2.15(m,2h),2.09-2.00(m,1h),1.40(t,j＝6.8hz,5h),1.23(s,1h),0.85(d,j＝6.8hz,3h),0.78(d,j＝6.8hz,3h).lcms(esi):m/z840.2[m+h+].制備接頭-藥物化合物的方法制備cbi-pbdld1(11as)-8-(6-((s)-1-(氯甲基)-5-(膦酰氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-6-氨基-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基酯合成方案實施例1.2,2,2-三氟乙酸化合物與(11as)-8-((6-((s)-1-(氯甲基)-5-(膦酰氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-6-氨基-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基酯(1:1)(cbi-pbdld1).在20℃在氮氣氣氛下向苯酚1(3.34g,10.0mmol)在無水dcm(25ml)中的攪拌的均勻溶液中加入4mhcl在二噁烷中的溶液(12.5ml,50.0mmol)。在加入后，將反應混合物在20℃在氮氣下攪拌另外的20h。將混合物用石油醚(250ml)稀釋并在20℃在氮氣下攪拌20min。棄去溶劑并使用石油醚(250ml)重復該操作一次。將所得的固體在25℃真空干燥1h得到化合物2(2.7g,100％)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.80(s,1h),8.15(d,j＝8.3hz,1h),7.87(d,j＝8.2hz,1h),7.58(brt,j＝7.5hz,1h),7.43(brt,j＝7.4hz,1h),6.81(s,1h),4.27-4.17(m,1h),4.01(dd,j＝11.0,3.2hz,1h),3.93-3.74(m,3h),未觀察到2個質子。粗產物無需進一步純化即可用于下一步。在0℃在氮氣氣氛下向胺2(2.7g,10.0mmol)在無水dcm(10ml)和二噁烷(30ml)中的攪拌的均勻混合物中加入三氟乙酸酐(tfaa)(3.4ml,24.0mmol)，隨后加熱二異丙基乙胺(dipea)(8.71ml,50.0mmol)。加入后，將反應混合物在0℃在氮氣下攪拌另外的50min。加入乙酸乙酯(400ml)并在0℃加入1nhcl(200ml)并將混合物在氮氣下攪拌20min。分離乙酸乙酯層，先后用1nhcl(200ml)和水(2x200ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫減壓蒸發得到3(3.3g,100％)，其為綠灰色固體。該物質無需進一步純化即可用于下一步。在20℃在氮氣氣氛下向苯酚3(3.3g,10.0mmol)在無水thf(40ml)中的攪拌的均勻溶液中加入二叔丁基-n,n-二異丙基亞磷酰胺(4.31ml,13.0mmol)。加入后，將反應混合物在20℃在氮氣下攪拌5-10min，然后歷時17min逐滴加入四唑(3％在ch3cn中的溶液,38.0ml,13.0mmol)。將最終反應混合物在20℃在氮氣下攪拌另外的19h。將混合物在冰浴中冷卻并加入30％h2o2(11.3ml,100.0mmol)。加入后，將反應混合物在20℃攪拌另外的1h30min。將混合物用乙酸乙酯(300ml)和10％na2s2o3水溶液(500ml)稀釋并在0℃攪拌20min。分離乙酸乙酯層并先后用水(200ml)、飽和nahco3(200ml)和水(200ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫減壓蒸發得到琥珀色油狀物。經硅膠色譜純化(用乙酸乙酯:石油醚1:3洗脫)得到化合物4(4.7g,90％)，其為無色泡沫狀固體,mp39-42℃；[α]d-61.8°(c1.02,chcl3).分析(c23h28clf3no5p)計算:c,52.93；h,5.41；n,2.68.實測值:c,53.05；h,5.43；n,2.80.向醇5(4.14g,6.95mmol)(j.med.chem.2003,46,2132-2151)在無水dcm(25ml)中的攪拌溶液中加入乙酸酐(3.30ml,34.8mmol)和三乙胺(5.81ml,41.7mmol)。將混合物在20℃攪拌3h30min。加入無水meoh(4.0ml)并將混合物攪拌30min。將混合物在etoac(400ml)和水(400ml)之間分配。分離etoac層，用水(2x200ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并蒸發得到乙酸酯6(4.28g,96％)，其為油狀物；[α]d-57.4°(c0.21,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ7.17(s,1h),6.87(s,1h),6.01-5.87(m,1h),5.32(dd,j＝17.2,1.5hz,1h),5.21(dd,j＝10.4,1.4hz,1h),4.89(s,2h),4.54(d,j＝5.4hz,2h),4.39-4.20(m,3h),3.93(t,j＝6.4hz,2h),3.75(s,3h),3.46-3.27(m,2h),2.13-1.90(m,4h),1.89-1.60(m,7h),1.54-1.40(m,2h),2個質子由dmso峰掩蔽。hrms(esi)m/zc27h36cl3n2o9計算值:637.1481,實測值:637.1475[mh+]；c27h35cl3n2nao9計算值:659.1300,實測值:659.1303[mna+]；c27h35cl3kn2o9計算值:675.1040,實測值:675.1035[mk+].向乙酸酯6(4.27g,6.69mmol)在丙酮(75ml)、水(50ml)和thf(30ml)中的攪拌溶液中加入鋅粉(17.5g,268mmol)和nh4cl(28.6g,535mmol)。將混合物在20℃在氮氣氣氛下攪拌42h。加入丙酮(100ml)，將混合物攪拌10min，并棄去上清液。重復兩次該操作并將合并的上清液減壓蒸發除去丙酮和thf。將殘留物用水(50ml)稀釋并用1nhcl水溶液酸化為ph約為1。將酸性混合物用石油醚(2x200ml)洗滌并用etoac(400ml)萃取。將etoac萃取液用水(200ml)洗滌并干燥(mgso4)且蒸發溶劑得到酸7(2.72g,80％)，其為油狀物；[α]d-73.5°(c1.12,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ11.99(s,可與d2o交換,1h),9.10(s,可與d2o交換,1h),7.17(s,1h),6.87(s,1h),6.00-5.86(m,1h),5.32(dd,j＝17.2,1.5hz,1h),5.20(dd,j＝10.4,1.5hz,1h),4.57-4.52(m,2h),4.37-4.03(m,3h),3.93(t,j＝6.5hz,2h),3.75(s,3h),3.40-3.10(m,2h),2.23(t,j＝7.3hz,2h),2.07-1.93(m,4h),1.89-1.66(m,5h),1.62-1.49(m,2h),1.47-1.34(m,2h)。hrms(esi)m/zc25h35n2o9計算值:507.2337,實測值:507.2340[mh+]；c25h34kn2o9計算值:545.1896,實測值:545.1906[mk+]；c25h34n2nao9計算值:529.2157,實測值:529.2169[mna+].在0℃在氮氣氣氛下向三氟乙酰胺4(1.38g,2.64mmol)在meoh(10ml)中的攪拌溶液中加入cs2co3(1.03g,3.17mmol)。將混合物在0℃攪拌2h30min，然后在etoac(200ml)和水(150ml)之間分配。分離etoac層并再次用水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫減壓蒸發得到不穩定的胺8(1.17g)，其為淡黃色泡沫狀固體。將該粗物質用酸7(1.24g,2.45mmol)、edci.hcl(1.41g,7.35mmol)和對甲苯磺酸(84mg,0.49mmol)在無水dma(14ml)中的溶液在0-20℃處理22h。將混合物在etoac(400ml)和水(300ml)之間分配。分離etoac層并再次用水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并蒸發。經硅膠色譜純化(用etoac:石油醚2:1洗脫)得到酰胺9(1.49g,66％)，其為淡黃色泡沫狀固體,mp55-59℃；[α]d-68.0°(c1.00,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ9.10(s,可與d2o交換,1h),8.56(s,1h),8.03(d,j＝8.1hz,1h),7.92(d,j＝8.4hz,1h),7.57(t,j＝8.1hz,1h),7.47(t,j＝7.6hz,1h),7.19(s,1h),6.86(s,1h),5.99-5.86(m,1h),5.32(dd,j＝17.2,1.6hz,1h),5.20(dd,j＝10.4,1.5hz,1h),4.53(d,j＝5.4hz,2h),4.45-3.84(m,10h),3.74(s,3h),3.44-3.26(m,2h),2.68-2.47(m,2h),2.02(brs,3h),1.93-1.43(m,10h),1.474和1.469(2s,18h)。hrms(esi)m/zc46h62cln3o12p計算值:914.3754,實測值:914.3749[mh+]；c46h61clkn3o12p計算值:952.3313,實測值:952.3381[mk+]；c46h61cln3nao12p計算值:936.3574,實測值:936.3589[mna+].在20℃在氮氣氣氛下向氨基甲酸酯9(548mg,0.60mmol)在dcm(8ml)中的攪拌溶液中加入pd(ph3p)4(17.1mg；9.8％pd)和吡咯烷(0.49ml,6.00mmol)。將混合物在20℃攪拌30min，然后在etoac(200ml)和水(150ml)之間分配。分離etoac層并再次用水(50ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫減壓蒸發。將粗產物經硅膠色譜純化(用etoac:meoh50:1洗脫)得到苯胺10(323mg,65％)，其為淡黃色泡沫狀固體,mp46-49℃；[α]d-85.2°(c0.36,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ8.56(s,1h),8.04(d,j＝8.3hz,1h),7.93(d,j＝8.4hz,1h),7.58(t,j＝8.2hz,1h),7.47(t,j＝8.1hz,1h),6.67(s,1h),6.37(s,1h),5.09(s,可與d2o交換,2h),4.46-3.85(m,10h),3.63(s,3h),3.52-3.34(m,2h),2.69-2.50(m,2h),2.08-1.94(m,1h),2.01(s,3h),1.91-1.61(m,7h),1.58-1.44(m,2h),1.476和1.470(2s,18h)。hrms(esi)m/zc42h58cln3o10p計算值:830.3522,實測值:830.3543[mh+].在20℃在氮氣氣氛下向苯胺10(293mg,0.35mmol)和dmap(202mg,1.65mmol)在無水dcm(7ml)中的攪拌溶液中加入雙光氣在無水dcm中的溶液(0.05m,6.7ml,0.33mmol)。將混合物攪拌25min，然后加入醇11(1.54g,3.54mmol)在無水dcm(20ml)中的溶液。將混合物在20℃在氮氣氣氛下攪拌68h，然后在etoac(300ml)和水(200ml)之間分配。分離etoac層，再次用水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在30℃的浴溫蒸發。將所得的橙色油狀物經硅膠色譜純化(用etoac:meoh:石油醚30:0.5:10洗脫)得到氨基甲酸酯12(385mg,84％)，其為泡沫狀固體,mp72-75℃；[α]d-55.2°(c0.53,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.04(s,可與d2o交換,1h),9.12(brs,可與d2o交換,1h),8.56(s,1h),8.03(d,j＝8.3hz,1h),7.92(d,j＝8.4hz,1h),7.65-7.52(m,3h，在d2o后減少為2h),7.46(t,j＝7.8hz,2h),7.31(d,j＝8.5hz,2h),7.20(brs,1h),6.86(s,1h),6.75(不良拆分的t,可與d2o交換,1h),5.97-5.83(m,1h),5.30(brd,j＝17.3hz,1h),5.17(brd,j＝10.6hz,1h),5.18-4.97(m,2h),4.51-3.85(m,13h),3.74(s,3h),3.43-3.23(m,2h，由水峰部分掩蔽),2.94-2.83(m,2h),2.65-2.50(m,2h，由dmso峰部分掩蔽),2.07-1.91(m,1h),2.01(brs,3h),1.88-1.43(m,11h),1.473-1.468(2s,18h),1.43-1.20(m,4h),1.35(s,9h)。hrms(esi)m/zc65h89cln6o17p計算值:1291.5665,實測值:1291.5705[mh+]；c65h88clkn6o17p計算值:1329.5262,實測值:1329.5264[mk+]；c65h88cln6nao17p計算值:1313.5554,實測值:1313.5524[mna+].將乙酸酯12(366mg,0.28mmol)和k2co3(1.14g,8.24mmol)在dcm(9ml)和meoh(9ml)中的混合物在0℃攪拌3h30min。將混合物與冷的etoac(200ml)和冰水(150ml)攪拌10min。分離etoac層，再次用水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫蒸發得到醇13(343mg,97％)，其為無色泡沫狀固體,mp71-75℃；[α]d-58.2°(c0.57,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.04(s,可與d2o交換,1h),9.11(brs,可與d2o交換,1h),8.56(s,1h),8.03(d,j＝8.3hz,1h),7.92(d,j＝8.4hz,1h),7.65-7.53(m,3h，在d2o后減少為2h),7.46(t,j＝7.6hz,2h),7.32(d,j＝8.6hz,2h),7.27(brs,1h),6.93(s,1h),6.75(不良拆分的t,可與d2o交換,1h),5.97-5.82(m,1h),5.29(brd,j＝17.2hz,1h),5.17(brd,j＝10.5hz,1h),5.03(brs,2h),4.73(t,j＝5.8hz,可與d2o交換,1h),4.50-3.82(m,11h),3.74(s,3h),3.62-3.44(m,2h),3.40-3.21(m,2h，由水峰部分掩蔽),2.95-2.80(m,2h),2.65-2.50(m,2h，由dmso峰部分掩蔽),1.93-1.21(m,16h),1.473-1.468(2s,18h),1.35(s,9h)。hrms(esi)m/zc63h86clkn6o16p計算值:1287.5158,實測值:1287.5113[mk+]；c63h86cln6nao16p計算值:1271.5419,實測值:1271.5381[mna+].在0℃歷時3min向醇13(322mg,0.26mmol)在無水dcm(14ml)中的攪拌溶液中分批加入dess-martin高碘烷(dmp)(131mg,0.31mmol)。將反應混合物在0℃攪拌另外的2h，然后在20℃攪拌50h。將混合物用dcm(40ml)和10％na2s2o3(40ml)稀釋，在20℃攪拌10min，然后在dcm(200ml)和飽和nahco3溶液(150ml)之間分配。分離dcm層并將水層進一步用dcm(2x50ml)萃取。將合并的dcm萃取液用飽和nahco3溶液(2x100ml)和水(2x100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫蒸發。將所得的橙色油狀物經硅膠色譜純化(用chcl3:meoh40:1洗脫)得到14(228mg,71％)，其為淡棕色泡沫狀固體,mp98℃(分解)；[α]d+74.5°(c0.26,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.02(s,可與d2o交換,1h),8.56(s,1h),8.04(d,j＝8.3hz,1h),7.92(d,j＝8.4hz,1h),7.65-7.47(m,5h,在d2o后減少為4h),7.25-7.12(m,2h，brs和1h，在d2o交換時),7.03(s,1h),6.83-6.64(m,2h),6.48(brs,可與d2o交換,1h),5.96-5.80(m,1h),5.52-5.39(m,d在d2o交換時,j＝9.6hz,1h),5.27(brd,j＝16.8hz,1h),5.21-5.10(m,2h),4.81(brd,j＝12.3hz,1h),4.54-3.85(m,8h),3.83-3.70(m,5h),3.53-3.21(m,3h，由水峰部分掩蔽),2.93-2.82(m,2h),2.64-2.47(m,2h，由dmso峰部分掩蔽),2.10-1.20(m,16h),1.470and1.464(2s,18h),1.34(s,9h)。hrms(esi)m/zc63h84clkn6o16p計算值:1285.5002,實測值:1285.4938[mk+]；c63h84cln6nao16p計算值:1269.5262,實測值:1269.5220[mna+].在20℃在氮氣氣氛下向14(125mg,0.10mmol)在dcm(2ml)中的攪拌溶液中加入pd(ph3p)4(2.9mg；9.8％pd)和吡咯烷(0.08ml,1.00mmol)。將混合物在20℃攪拌并經tlc監測(etoac:meoh20:1)。在40min后，加入更多的pd(ph3p)4(5.8mg；9.8％pd)和吡咯烷(0.16ml,2.00mmol)并將混合物攪拌另外的3h。將混合物在etoac(100ml)和水(100ml)之間分配。分離etoac層并再次用水(50ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃的浴溫蒸發。粗產物15(94mg,81％)無需進一步純化即可用于下一步。hrms(esi)m/zc59h81cln6o14p計算值:1163.5231,實測值:1163.5188[mh+].在氮氣氣氛下將15(91mg,0.078mmol)在無水dma(1.0ml)中的溶液用預先形成的(在20℃，10min)酸16(36mg,0.12mmol)、edci.hcl(34mg,0.18mmol)和tsoh(4.0mg,0.023mmol)在無水dma(0.5ml)中的混合物處理20℃。在10min后，加入dipea(0.016ml,0.078mmol)并將反應混合物攪拌23h。將混合物在etoac(100ml)和水(100ml)之間分配。分離etoac層并進一步用飽和nahco3(50ml)、水(50ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。在25℃的浴溫蒸發溶劑得到粗產物，將其經硅膠色譜純化(用chcl3:etoac:meoh30:10:2洗脫)得到17(63mg,56％)，其為淡棕色泡沫狀固體；mp67-70℃；[α]d+23.9°(c2.09,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.05(s,可與d2o交換,1h),8.56(s,1h),8.03(d,j＝8.3hz,1h),7.92(d,j＝8.4hz,1h),7.84-7.71(m,2h，可與d2o交換),7.62-7.52(m,3h),7.46(t,j＝7.7hz,1h),7.22-7.13(m,2h),7.03(brs,1h),6.96(s,2h),6.71(brs,2h，在d2o后減少為1h),6.49(brs,可與d2o交換,1h),5.51-5.41(m,butd在d2o交換時，j＝9.5hz,1h),5.15(d,j＝12.2hz,1h),4.82(brd,j＝12.4hz,1h),4.47-3.85(m,8h),3.77(brs,3h),3.52-3.20(m,3h，由水峰部分掩蔽),3.12-3.20(m,butt在d2o交換時，j＝6.7hz,2h),2.92-2.80(m,2h),2.65-2.50(m,2h，由dmso峰部分掩蔽),2.39(t,j＝7.9hz,2h),2.07-1.24(m,28h),1.469和1.463(2s,18h),1.33(s,9h)。hrms(esi)m/zc74h98cln8nao18p計算值:1475.6317,實測值:1475.6267[mna+].在20℃在氮氣下向17(45mg,0.031mmol)在dcm(1.0ml)中的攪拌溶液中加入tfa(1.0ml)并將混合物攪拌15min。加入石油醚(20ml)并將混合物攪拌30min。棄去上清液并使用etoac:石油醚(1:5)(2×20ml)重復該操作。將所得的固體收集并經制備性hplc純化[synergipolarrp柱；含水tfa(ph＝2.56；90％至2％)/10％水/ch3cn(10％至98％)；梯度洗脫，歷時23min，流速為12ml/min]得到純的cbi-pbdld1(17.5mg,38％)，其為米色固體,純度(hplc):99.1％；[α]d+54.9°(c0.18,meoh)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.20(s,可與d2o交換,1h),8.50(s,1h),8.20-7.78(m,7h,在d2o后減少為1h),8.12(d,j＝9.1hz,1h),7.72-7.47(m,4h，在d2o后減少為3h),7.40(t,j＝7.5hz,1h),7.17(brd,j＝7.3hz,2h),7.03(brs,1h),6.97(s,2h),6.66(brs,可與d2o交換,1h),5.51(brs,1h),5.48(brd,j＝9.7hz,1h),5.32-5.18(m,butd在d2o后,j＝12.6hz,1h),4.75(brd,j＝12.4hz,1h),4.44-3.81(m,8h),3.77(s,3h),3.52-3.21(m,5h,由水峰部分掩蔽),3.04(q,butt在d2o后，j＝6.8hz,2h),2.80-2.68(m,2h),2.39(t,j＝7.7hz,2h),2.12-1.08(m,28h)。hrms(esi)m/zc61h75cln8o16p計算值:1241.4722,實測值:1241.4700[mh+]；c61h74cln8nao16p計算值:1263.4541,實測值:1263.4531[mna+].合成cbi-cbild4(s)-1-(氯甲基)-3-(5-((s)-1-(氯甲基)-5-(膦酰氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-5-氧代戊酰基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-基氨基甲酸4-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基酯合成方案實施例2.((s)-1-(氯甲基)-3-(5-((s)-1-(氯甲基)-5-(膦酰氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-5-氧代戊酰基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-基)氨基甲酸4-((s)-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基酯(cbi-cbild4).在20℃在氮氣下向亞胺18(497mg,1.00mmol)在無水dcm(10ml)和meoh(10ml)中的攪拌溶液中加入4mhcl/二噁烷(0.63ml,2.5mmol)。加入后，將反應混合物在20℃攪拌1h。將揮發物在20℃減壓蒸發得到黃色固體，將其與etoac和石油醚的混合物(1:10)(200ml)在20℃攪拌30min。棄去上清液并重復該操作。將所得的固體與na2co3水溶液(2n,200ml)和dcm(200ml)的混合物在0℃攪拌15min。分離dcm層，用水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃蒸發得到苯胺19(322mg,97％)，其為不穩定的固體；1hnmr[(cd3)2so]δ8.01(d,j＝8.4hz,1h),7.94-7.78(m,2h),7.52(t,j＝7.3hz,1h),7.39(t,j＝7.5hz,1h),4.20-3.72(m,5h),1.54(s,9h),未觀察到2個質子。hrms(esi)m/zc18h22cln2o2計算值:333.1364,實測值:333.1355[mh+]；c18h21clkn2o2計算值:371.0923,實測值:371.0920[mk+]；c18h21cln2nao2計算值:355.1184,實測值:355.1179[mna+]。該物質無需進一步純化即可用于下一步。在20℃在氮氣下向苯胺19(322mg,0.97mmol)和dmap(730mg,6.00mmol)在無水dcm(30ml)中的攪拌的均勻混合物中加入雙光氣在無水dcm(0.10m,11ml,1.10mmol)中的溶液。將混合物攪拌20min，然后加入固體對硝基苯甲醇(1.53g,10.0mmol)。將最終反應混合物在20℃在氮氣下攪拌18h，然后在etoac(300ml)和水(300ml)之間分配。分離etoac層，用鹽水(200ml)洗滌并干燥(mgso4)。在30℃蒸發溶劑得到軟的黃色固體，將其經硅膠色譜純化(用dcm:etoac:石油醚20:1:10洗脫)得到氨基甲酸酯20(411mg,83％)，其為淡黃色固體,mp141-142℃；[α]d-15.0°(c0.20,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ9.85(s,1h),8.36-8.15(m,3h),8.05(d,j＝8.4hz,1h),7.88(d,j＝8.3hz,1h),7.72(d,j＝8.6hz,2h),7.57-7.49(m,1h),7.45-7.36(m,1h),5.35(s,2h),4.27-4.12(m,2h),4.10-3.96(m,2h),3.94-3.81(m,1h),1.52(s,9h)。分析(c26h26cln3o6)計算:c,61.00；h,5.12；n,8.21.實測值:c,61.27；h,5.05；n,8.25.在0℃在氮氣下向20(282mg,0.55mmol)在dcm(6ml)中的攪拌溶液中加入三氟乙酸(tfa)(3ml)。加入后，將反應混合物在0℃攪拌1h15min，然后在dcm(300ml)和冷的na2co3水溶液(2n,300ml)之間分配。分離dcm層，用冷的na2co3水溶液(2n,100ml)和水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃蒸發得到橙色固體。將該固體溶于無水dma(4ml)并用酸21(297mg,0.55mmol)、edci.hcl(317mg,1.65mmol)和tsoh(19mg,0.11mmol)處理。將混合物在20℃在氮氣下攪拌22h，然后在etoac(300ml)和水(300ml)之間分配。分離etoac層，用水(200ml)洗滌，并干燥(mgso4)。在25℃蒸發溶劑得到油狀物，將其經硅膠色譜純化(用dcm:etoac2:1洗脫)得到酰胺22(181mg,35％)，其為粘稠固體,[α]d-26.8°(c0.37,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ9.84(s,1h),8.62(s,1h),8.59(s,1h),8.28(d,j＝8.5hz,2h),8.04(d,j＝8.5hz,2h),7.92(d,j＝8.2hz,2h),7.72(d,j＝8.3hz,2h),7.63-7.57(m,2h),7.51-7.39(m,2h),5.34(s,2h),4.48-4.17(m,6h),4.10-3.97(m,2h),3.97-3.84(m,2h),2.82-2.54(m,4h),2.04-1.91(m,2h),1.49(s,18h)。hrms(esi)m/zc47h51cl2kn4o10p計算值:971.2351,實測值:971.2344[mk+]；c47h51cl2n4nao10p計算值:955.2612,實測值:955.2621[mna+].在0℃在氮氣下向硝基化合物22(47mg,0.05mmol)在丙酮:水:thf(10:5:1)(6ml)中的攪拌溶液中加入鋅粉(65.4mg,1.00mmol)和nh4cl(107mg,2.00mmol)。加入后，將反應混合物在0℃攪拌40min。將反應混合物經硅藻土濾過，用冷的dcm洗滌若干次。將合并的濾液用冷水(50ml)洗滌，然后干燥(mgso4)并在25℃蒸發得到黃色泡沫狀固體。將該固體溶于無水dma(1ml)并加至預先形成的(10min，在20℃)fmoc-l-瓜氨酸(29.8mg,0.075mmol)和eedq(18.5mg,0.075mmol)在dma(0.3ml)中的混合物。將反應混合物在20℃在氮氣下攪拌48h，然后在etoac(100ml)和水(100ml)之間分配。分離etoac層，用水(50ml)洗滌，并干燥(mgso4)。在25℃蒸發溶劑得到油狀物，將其經硅膠色譜純化(etoac:meoh10:1)得到23(24mg,38％)，其為粘稠固體,[α]d-31.9°(c0.28,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.09(s，1h),9.66(s,1h),8.62(s,1h),8.59(s,1h),8.10-7.25(m,21h),6.04-5.94(m,1h),5.53-5.29(m,2h),5.13(s,2h),4.51-4.08(m,10h),4.08-3.82(m,4h),3.11-2.90(m,2h),2.80-2.54(m,4h),2.04-1.92(m,2h),1.80-1.30(m,4h),1.49(s,18h)。hrms(esi)m/zc68h75cl2n7o12p計算值:1282.4583,實測值:1282.4536[mh+]；c68h74cl2kn7o12p計算值:1320.4142,實測值:1320.4119[mk+]；c68h74cl2n7nao12p計算值:1304.4402,實測值:1304.4388[mna+].在0℃在氮氣下向23(86mg,0.067mmol)在無水dma(3ml)中的攪拌溶液中加入哌啶在dma中的溶液(1.00m,0.58ml,0.58mmol)并將混合物在0℃攪拌1h30min。加入etoac和石油醚的混合物(1:10,60ml)并將混合物在0℃攪拌40min。棄去上清液并使用更多的etoac-石油醚(1:3,50ml，然后30ml)重復該操作。將殘留的油狀物在20℃真空干燥1h得到中間體胺24(67mg,94％)，其為粘稠固體。該固體無需進一步純化即可用于下一步。將酸8(30.4mg,0.098mmol)、edci.hcl(25.3mg,0.13mmol)和tsoh(2.2mg,0.013mmol)在無水dma(0.7ml)中的混合物在20℃在氮氣下攪拌10min。向該混合物中加入上述胺24的溶液(67mg,0.060mmol)，隨后加入dipea(0.011ml,0.065mmol)。將反應混合物在20℃在氮氣下攪拌20h。加入冰水(30ml)并將混合物在0℃攪拌30min。將分離的固體濾出，干燥，并經硅膠色譜純化(用dcm:etoac；meoh10:10:1洗脫)得到25(44mg,54％)，其為粘稠固體,[α]d-51.6°(c0.16,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.15(s，可與d2o交換，1h)，9.66(s,可與d2o交換,1h),8.62(s,1h),8.59(s,1h),8.08-7.76(m,6h，在d2o交換后減少為4h),7.69-7.34(m,8h),6.97(s,2h),5.96(t,j＝5.7hz,可與d2o交換,1h),5.40(s,可與d2o交換,2h),5.11(s,2h),4.50-4.15(m,7h),4.02-3.82(m,4h),3.25(t,由水峰部分掩蔽,j＝6.8hz,2h),3.13-2.86(m,4h),2.81-2.56(m,4h),2.45-2.33(m,4h),2.05-1.91(m,2h),1.83-1.09(m,12h),1.49(s,18h)。hrms(esi)m/zc68h83cl2n9o14p計算值:1350.5169,實測值:1350.5170[mh+]；c68h82cl2kn9o14p計算值:1388.4727,實測值:1388.4771[mk+]；c68h82cl2n9nao14p計算值:1372.4988,實測值:1372.4992[mna+].在20℃在氮氣下向25(30.3mg,0.022mmol)在dcm(1.0ml)中的攪拌溶液中加入tfa(1.0ml)。加入后，將混合物在該溫度攪拌1min。加入冷的石油醚(20ml)并將混合物在0℃攪拌15min。棄去上清液并使用etoac-石油醚(1:3,2×20ml)重復該操作。將所得的固體收集并在20℃真空干燥得到cbi-cbild4(25.3mg,93％)，其為米色固體,[α]d-186°(c0.059,meoh)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.13(s，可與d2o交換，1h)，9.66(s,可與d2o交換,1h),8.62(s,1h),8.51(s,1h),8.10(d,j＝8.4hz,1h),8.00(d,j＝8.5hz,1h),7.94-7.73(m,4h，在d2o交換后減少為2h),7.65(d,j＝8.4hz,2h),7.60-7.32(m,6h),6.97(s,2h),6.00(t,j＝5.5hz,可與d2o交換,1h),5.45(brs,可與d2o交換,2h),5.13(s,2h),4.52-4.15(m,7h),4.10-3.82(m,4h),3.28(t,由水峰部分掩蔽,j＝6.9hz,2h),3.13-2.84(m,4h),2.81-2.56(m,4h),2.47-2.34(m,4h),2.08-1.89(m,2h),1.84-1.53(m,4h),1.53-1.09(m,8h),未觀察到2h。hrms(esi)m/zc60h65cl2n9o14p計算值:1236.3771,實測值:1236.3772[m-h]-.制備(11as)-8-((6-((s)-1-(氯甲基)-5-((4-甲基哌嗪-1-羰基)氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-6-氨基-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基酯二(2,2,2-三氟乙酸鹽)(cbi-pbdld2)和(11as)-8-((6-((s)-1-(氯甲基)-5-((4-甲基哌嗪-1-羰基)氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基)氧基)-7,11-二甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-6-氨基-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基酯二(2,2,2-三氟乙酸鹽)(cbi-pbdld3)步驟a:合成化合物15(pct/us2014/042560中的65j):(s)-8-(6-((s)-1-(氯甲基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-2-(烯丙基氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰氨基)芐基酯方案步驟1.(s)-6-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(2-(羥基甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)己酸2,2,2-三氯乙酯54c將由terceletal(2003)j.med.chem46:2132-2151的操作制備的(s)-(2-氨基-4-羥基-5-甲氧基苯基)(2-(羥基甲基)吡咯烷-1-基)甲酮54a(7.6g,28.6mmol)和一縮二碳酸二叔丁酯(12.48g,57.2mmol)在無水thf(140ml)中的混合物在氮氣氣氛下回流攪拌18h。將反應混合物冷卻至室溫并加入2nnaoh(57.2ml,114mmol)和meoh(70ml)。將混合物在室溫攪拌6h。將揮發物在35-40℃(浴溫)減壓蒸發。加入冰水(250ml)并在0℃將ph調節至8-9。將混合物與石油醚-乙酸乙酯(20:1)(2x400ml)在室溫攪拌15min。將有機層分離并棄去。將水層用dcm(4x300ml)萃取并將合并的萃取液干燥(mgso4)并減壓蒸發得到(s)-5-羥基-2-(2-(羥基甲基)吡咯烷-1-羰基)-4-甲氧基苯基氨基甲酸叔丁酯54b，其為粉白色固體(9.36g,89％)；mp154-156℃；1hnmr[(cd3)2so]δ9.51(s,1h),8.90(s,1h),7.27(s,1h),6.91(s,1h),4.73(t,j＝5.8hz,1h),4.16-4.02(m,1h),3.73(s,3h),3.64-3.34(m,4h),1.99-1.60(m,4h),1.43(s,9h)。分析(c18h26n2o6)計算:c,59.00；h,7.15；n,7.65.實測值:c,58.94；h,7.31；n,7.39.向54b(2.88g,7.87mmol)和由terceletal(2003)j.med.chem46:2132-2151中的操作制備的6-溴己酸2,2,2-三氯乙酯(3.86g,11.8mmol)在無水dma(7ml)中的溶液中加入無水k2co3(2.61g,18.9mmol)。將所得的混合物在室溫攪拌68h。將其倒入冰水(600ml)并將產物在乙酸乙酯(600ml)中萃取。將萃取物先后用冷的(0℃)2nna2co3水溶液(2x400ml)和水(400ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。蒸發溶劑得到棕色油狀物，將其經硅膠柱色譜純化(dcm-乙酸乙酯＝2:1)得到純的(s)-6-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(2-(羥基甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)己酸2,2,2-三氯乙酯54c(3.62g,76％)，其為淡黃色泡沫狀物；mp36-39℃；1hnmr[(cd3)2so]δ9.90(s,1h),7.33(s,1h),6.93(s,1h),4.89(s,2h),4.74(t,j＝5.8hz,1h),4.17-4.02(m,1h),3.94(t,j＝6.4hz,2h),3.73(s,3h),3.63-3.26(m,4h),2.55-2.46(m,2h，由dmso峰部分掩蔽),2.00-1.55(m,8h),1.53-1.36(m,11h)。分析(c26h37n2o8)計算:c,51.03；h,6.09；n,4.58.實測值:c,51.33；h,6.21；n,4.35.步驟2:(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-酯58b將(s)-1-(氯甲基)-5-羥基-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-羧酸叔丁酯51a(3.338g,10mmol)、4-甲基哌嗪-1-碳酰氯鹽酸鹽(5.98g,30mmol)、et3n(3.5g,35mmol)和dmap(1.34g,11mmol)在ch2cl2(80ml)中的混合物在室溫攪拌2天。參見圖12。將混合物用水洗滌并將溶劑干燥并真空除去，得到定量收率的(s)-1-(氯甲基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-羧酸叔丁酯58a(bogerd.l.etal,synthesis,(1999),1505-1509):mp98℃；1hnmr(cdcl3)δ8.11(br,1h),7.84(d,j＝8.4hz,1h),7.70(d,j＝8.4hz,1h),7.50(ddd,j＝8.2,6.9,1.1hz,1h),7.37(ddd,j＝8.1,6.9,1.0hz,1h),4.34-4.20(m,1h),4.17-4.10(m,1h),4.01-3.98(m,1h),3.94(dd,j＝9.6,2.4hz,1h),3.87-3.80(br,2h),3.68-3.60(br,2h),3.47(t,j＝10.8hz,1h),2.57-2.48(m,4h),2.83(s,3h),1.58(s,9h)；ms(apci+)m/z461.2mh+.c24h30cln3o4分析計算值:c,62.7；h,6.6；n,9.1.實測值:c,62.5；h,6.8；n,9.2％.將58a(2.30g,5mmol)在ch2cl2(50ml)中的溶液用過量的三氟乙酸(tfa)在0℃處理4h，并將混合物用冷的nh3水溶液中和。用己烷稀釋導致固體沉淀，將其經濾過收集，用水和己烷洗滌，并干燥得到(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-酯58b(1.60g,89％):mp144-147℃；1hnmr(cdcl3)δ7.69(d,j＝8.4hz,1h),7.63(d,j＝8.4hz,1h),7.45(ddd,j＝8.3,6.9,1.2hz,1h),7.25(ddd,j＝8.4,6.8,1.2hz,1h),6.82(s,1h),5.30(s,1h),4.17-4.05(m,2h),4.03-3.96(m,2h),3.89-3.77(m,4h),3.54(t,j＝10.9hz,1h),3.20-2.90(m,4h),2.76(s,3h)。c19h22cln3o2分析計算值:c,63.4；h,6.2；n,11.7.實測值:c,63.2；h,6.2；n,11.5％.步驟3:(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸3-(6-(4-((s)-2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-氨基-2-甲氧基苯氧基)已酰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-酯65d在室溫向(s)-6-(5-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(2-(羥基甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)己酸2,2,2-三氯乙酯54c(1.66g,2.71mmol)在無水dcm(10ml)中的攪拌溶液中加入乙酸酐(1.29ml,13.6mmol)和三乙胺(2.27ml,16.3mmol)。參見圖17。將反應混合物攪拌另外的4h。加入無水meoh(1.5ml)并將混合物攪拌30min。加入乙酸乙酯(200ml)并分離乙酸乙酯層，然后用水洗滌若干次。將乙酸乙酯溶液干燥(mgso4)并蒸發得到(s)-6-(4-(2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲氧基苯氧基)己酸2,2,2-三氯乙酯65a(1.8g,100％)，其為淡黃色膠狀物；1hnmr[(cd3)2so]δ8.82(brs,1h),7.27(s,1h),6.86(s,1h),4.89(s,2h),4.39-4.20(m,3h),3.93(t,j＝6.4hz,2h),3.74(s,3h),3.50-3.33(m,2h),2.10-1.94(m,4h),1.92-1.61(m,7h),1.53-1.42(m,2h),1.43(s,9h),2hobscuredbydmsopeak.hrms(esi)m/zc28h39cl3n2nao9計算值:675.1613,實測值:675.1603[mna+].c28h40cl3n2o9計算值:653.1794,實測值:653.1778[mh+].在氮氣下向65a(1.76g,2.69mmol)在丙酮(30ml)、水(20ml)和thf(12ml)的混合物中的攪拌溶液中加入zn(7.06g,108mmol)和nh4cl(11.6g,216mmol)。將混合物在室溫攪拌23h。加入乙酸乙酯(100ml)并將混合物攪拌15min。將有機層棄去。使用更多的乙酸乙酯(2x100ml)重復該萃取。將合并的有機溶液用水(2x100ml)洗滌，干燥(mgso4)，經硅藻土濾過并蒸發得到(s)-6-(4-(2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲氧基苯氧基)己酸65b(1.36g,96％)，其為粘稠的無色泡沫狀物；1hnmr[(cd3)2so]δ11.49(非常寬的s,1h),8.83(s,1h),7.27(s,1h),6.86(brs,1h),4.39-4.02(m,3h),3.93(t,j＝6.4hz,2h),3.74(s,3h),3.51-3.33(m,2h，由水峰部分掩蔽),2.21(t,j＝7.1hz,2h),2.11-1.93(m,4h),1.90-1.66(m,5h),1.62-1.50(m,2h),1.50-1.35(m,2h),1.43(s,9h)。分析(c26h38n2o9.)計算:c,59.76；h,7.33；n,5.36.實測值:c,59.66；h,7.49；n,5.29.在0℃在氮氣氣氛下向65b(0.87g,2.41mmol)和(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-酯58b(1.26g,2.41mmol)在無水dma(5ml)中的攪拌溶液中加入4mhcl/對二噁烷(1.21ml,4.82mmol)，隨后加入edci.hcl(1.39g,7.23mmol)和無水tsoh(83mg,0.48mmol)。將反應混合物在0℃在氮氣下攪拌21小時，然后在乙酸乙酯(500ml)和水(500ml)之間分配。分離乙酸乙酯層并將水層進一步用更多的乙酸乙酯(200ml)萃取。將合并的乙酸乙酯萃取液先后用水(200ml)、飽和nahco3溶液(2x200ml)和水(200ml)洗滌。將乙酸乙酯層干燥并蒸發得到(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸3-(6-(4-((s)-2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-2-甲氧基苯氧基)已酰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-酯65c(1.66g,80％)，其為米色固體-泡沫狀物；mp84-87℃；1hnmr[(cd3)2so]δ8.84(brs,1h),8.21(s,1h),7.95(d,j＝8.3hz,1h),7.81(d,j＝8.3hz,1h),7.58(brt,j＝7.7,1h),7.46(brt,j＝8.1hz,1h),7.29(s,1h),6.86(s,1h),4.40(t,j＝10.0hz,1h),4.36-3.86(m,10h),3.83-3.74(m,1h),3.73(s,3h),3.54-3.36(m,4h),2.67-2.34(m,6h，由dmso峰部分掩蔽),2.26(s,3h),2.02(brs,3h),1.93-1.62(m,8h),1.60-1.47(m,2h),1.42(s,9h)。分析(c45h58cln5o10·11/2h2o)計算:c,60.63；h,6.90；n,7.86.實測值:c,60.39；h,6.66；n,8.08.在0℃在氮氣氣氛下向65c(2.17g,2.51mmol)在dcm(20ml)中的攪拌溶液中加入tfa(20ml)。加入后，將混合物進一步在該溫度攪拌2.5h。將混合物倒入冷的(0℃)nahco3(50g)、水(700ml)和dcm(500ml)的混合物中并攪拌15min。(ph約為8)。分離dcm層并用更多的nahco3水溶液(200ml)和水(200ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。蒸發溶劑得到(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸3-(6-(4-((s)-2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-氨基-2-甲氧基苯氧基)已酰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-酯65d，其為淡棕色固體-泡沫狀物(1.76g,92％)；mp62℃；1hnmr[(cd3)2so]δ8.21(s,1h),7.95(d,j＝8.3hz,1h),7.81(d,j＝8.3hz,1h),7.57(brt,j＝7.6hz,1h),7.46(brt,j＝7.2hz,1h),6.67(s,1h),6.37(s,1h),5.09(s,2h),4.41(t,j＝9.7hz,1h),4.36-4.20(m,3h),4.17-4.00(m,3h),3.97-3.86(m,3h),3.81-3.70(m,2h),3.63(s,3h),3.54-3.32(m,5h),2.66-2.34(m,6h，由dmso峰部分掩蔽),2.26(s,3h),2.08-1.96(m,1h),2.10(s,3h),1.93-1.63(m,7h),1.57-1.45(m,2h)。分析(c40h50cln5o8·1/2h2o)計算:c,62.13；h,6.65；n,9.06.實測值:c,62.12；h,6.76；n,8.77.步驟4:65g將(s)-2-(烯丙基氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酸65e(3.30g,10.0mmol)和eedq(3.71g,15.0mmol)在無水dma(10ml)中的混合物在室溫在氮氣下攪拌15min。參見圖18。向該預先形成的混合物中加入4-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)甲基)苯胺(由相應的對硝基苯甲醇和tbdmscl在dmf中制備，隨后使用zn/nh4cl還原)(2.37g,10.0mmol)在無水dma(3ml)中的溶液。將最終反應混合物進一步在室溫在氮氣氣氛下攪拌23h。將混合物在乙酸乙酯(500ml)和水(500ml)之間分配。分離乙酸乙酯層并先后用飽和nahco3(2x300ml)和水(300ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。蒸發溶劑得到橙色油狀物，將其經硅膠柱色譜純化(10-35％的石油醚-乙酸乙酯梯度)得到tbdms-保護的賴氨酸65f(4.87g,89％)，其為粘稠的米色固體-泡沫狀物；1hnmr[(cd3)2so]δ9.97(s,1h),7.55(d,j＝8.50hz,2h),7.44(d,j＝7.8hz,1h),7.21(d,j＝8.5hz,2h),6.75(t,j＝5.3hz,1h),5.99-5.82(m,1h),5.28(brd,j＝17.2hz,1h),5.17(brd,j＝10.5hz,1h),4.64(s,2h),4.46(d,j＝5.2hz,2h),4.12-4.02(m,1h),2.93-2.83(m,2h),1.70-1.52(m,2h),1.46-1.20(m,4h),1.35(s,9h),0.89(s,9h),0.06(s,6h)。hrms(esi)m/zc28h47n3nao6si計算值:572.3126,實測值:572.3136[mna+].在室溫向65f(4.81g,8.75mmol)在thf(30ml)中的攪拌溶液中加入1m四丁基氟化銨在thf中的溶液(17.5ml,17.5mmol)。加入后，將混合物在該溫度攪拌另外的2.5h。加入nh4cl水溶液(300ml)并將產物在乙酸乙酯(500ml)中萃取。將乙酸乙酯用水(2x100ml)洗滌并干燥(mgso4)。蒸發溶劑得到苯甲醇賴氨酸65g(3.81g,100％)，其為米色固體；mp101-103℃；1hnmr[(cd3)2so]δ9.94(s,1h),7.52(d,j＝8.4hz,2h),7.44(d,j＝7.8hz,1h),7.23(d,j＝8.4hz,2h),6.76(t,j＝5.4hz,1h),5.97-5.84(m,1h),5.29(brd,j＝17.2hz,1h),5.17(brd,j＝10.4hz,1h),5.08(t,j＝5.7hz,1h),4.47(d,j＝5.3hz,2h),4.43(d,j＝5.7hz,2h),4.13-4.03(m,1h),2.96-2.82(m,2h),1.72-1.52(m,2h),1.46-1.20(m,4h),1.36(s,9h)。hrms(esi)m/zc22h33n3nao6計算值:458.2262,實測值:458.2272[mna+]；c22h33n3ko6計算值:474.2001,實測值:474.1998[mk+].步驟5:(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸3-(6-(4-((s)-2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-((4-((s)-2-(烯丙基氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰氨基)芐基氧基)羰基氨基)-2-甲氧基苯氧基)已酰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-基酯65h在室溫在氮氣下向65d(764mg,1.00mmol)和dmap(367mg,3.00mmol)在無水dcm(15ml)中的攪拌溶液中加入雙光氣在無水dcm中的溶液(0.05mmol/ml,12ml,0.60mmol)，并將混合物攪拌另外的20min。參見圖19。向該混合物中加入65g(3.97g,9.13mmol)在無水dcm(80ml)中的溶液。將最終反應混合物進一步在室溫在氮氣氣氛下攪拌48h。將混合物在乙酸乙酯(500ml)和水(300ml)之間分配。分離乙酸乙酯層并將水層進一步用乙酸乙酯(2x200ml)萃取。將合并的乙酸乙酯溶液用更多的水(2x200ml)洗滌并干燥(mgso4)。在30℃(浴溫)蒸發溶劑得到橙色油狀物，將其經硅膠柱色譜純化(乙酸乙酯-meoh＝10:1)得到(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸3-(6-(4-((s)-2-(乙酰氧基甲基)吡咯烷-1-羰基)-5-((4-((s)-2-(烯丙基氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰氨基)芐基氧基)羰基氨基)-2-甲氧基苯氧基)已酰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-基酯65h(1.04g,85％)，其為淡橙色固體；mp90-93℃；1hnmr[(cd3)2so]δ10.04(s,1h),9.10(brs,1h),8.21(s,1h),7.95(d,j＝8.3hz,1h),7.81(d,j＝8.3hz,1h),7.63-7.53(m,3h),7.51-7.42(m,2h),7.32(d,j＝8.5hz,2h),7.21(brs,1h),6.85(brs,1h),6.79-6.72(m,1h),5.97-5.83(m,1h),5.29(brd,j＝17.2hz,1h),5.17(brd,j＝10.4hz,1h),5.08-4.96(m,2h),4.52-4.37(m,3h),4.37-3.85(m,10h),3.83-3.66(m,2h),3.74(s,3h),3.54-3.41(m,2h),3.41-3.23(m,2h，由水峰部分掩蔽),2.95-2.83(m,2h),2.66-2.34(m,6h，由dmso峰部分掩蔽),2.25(s,3h),2.07-1.92(m,4h),1.87-1.45(m,11h),1.45-1.20(m,4h),1.35(s,9h)。hrms(esi)m/zc63h82cln8o15計算值:1225.5583,實測值:1225.5557[mh+]；c63h81cln8nao15計算值:1247.5402,實測值:1247.5401[mna+]；c63h81clkn8o15計算值:1263.5142,實測值:1263.5141[mk+].將65h(1.01g,0.824mmol)和k2co3(1.14g,8.24mmol)在dcm(20ml)和meoh(10ml)中的混合物在室溫攪拌1小時40min。將混合物用dcm(200ml)稀釋并與冰水(200ml)攪拌10min。分離dcm層并將水層進一步用dcm(2x100ml)萃取。將合并的dcm溶液用更多的水(200ml)洗滌并干燥(mgso4)。在25℃(浴溫)蒸發溶劑得到(s)-4-甲基哌嗪-1-羧酸3-(6-(5-((4-((s)-2-(烯丙基氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰氨基)芐基氧基)羰基氨基)-4-((s)-2-(羥基甲基)吡咯烷-1-羰基)-2-甲氧基苯氧基)已酰基)-1-(氯甲基)-2,3-二氫-1h-苯并[e]吲哚-5-基酯65i(0.94g,96％)，其為米色固體；mp104-107℃；1hnmr[(cd3)2so]δ10.04(s,1h),9.17(brs,1h),8.21(s,1h),7.95(d,j＝8.4hz,1h),7.80(d,j＝8.3hz,1h),7.63-7.53(m,3h),7.51-7.42(m,2h),7.38-7.21(m,3h),6.93(s,1h),5.32(t,j＝5.4hz,1h),5.98-5.83(m,1h),5.30(brd,j＝17.2hz,1h),5.17(brd,j＝11.7hz,1h),5.03(s,2h),4.73(t,j＝5.7hz,1h),4.52-4.36(m,3h),4.36-4.17(m,2h),4.17-3.85(m,6h),3.83-3.66(m,2h),3.73(s,3h),3.61-3.40(m,4h),3.40-3.20(m,2h，由水峰部分掩蔽),2.94-2.83(m,2h),2.67-2.34(m,6h，由dmso峰部分掩蔽),2.25(s,3h),1.96-1.45(m,12h),1.45-1.20(m,4h),1.35(s,9h)。hrms(esi)m/zc61h80cln8o14計算值:1183.5477,實測值:1183.5445[mh+]；c61h79cln8nao14計算值:1205.5296,實測值:1205.5256[mna+]；c61h79clkn8o14計算值:1221.5036,實測值:1221.5026[mk+].在0℃向65i(0.92g,0.78mmol)在無水dcm(20ml)中的攪拌溶液中分批加入(歷時8min)dess-martin高碘烷(dmp,1,1,1-三乙酰氧基-1,1-二氫-1,2-苯并碘氧雜環戊烯-3(1h)-酮,cas登記號.87413-09-0,492mg,1.16mmol)。加入完成后，將反應混合物進一步在0℃攪拌2h，然后在室溫攪拌45h。將混合物用dcm(100ml)稀釋并與10％na2s2o3(100ml)在室溫攪拌10min。將所得的混合物在dcm(400ml)和飽和nahco3溶液(400ml)之間分配。分離dcm層并將水層進一步用dcm(2x100ml)萃取。將合并的dcm溶液進一步用飽和nahco3溶液(200ml)和水(200ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。在25℃(浴溫)蒸發溶劑得到淡棕色固體，將其經硅膠柱色譜純化(梯度dcm-乙酸乙酯-meoh＝15:15:1至15:15:3)得到(s)-8-(6-((s)-1-(氯甲基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-2-(烯丙基氧基羰基氨基)-6-(叔丁氧基羰基氨基)己酰氨基)芐基酯65j(0.64g,70％)，其為淡黃色固體；mp137℃(dec.)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.02(s,1h),8.21(s,1h),7.95(d,j＝8.4hz,1h),7.80(d,j＝8.3hz,1h),7.65-7.38(m,5h),7.18(d,j＝7.0hz,2h),7.03(s,1h),6.82-6.63(m,2h),6.49(不良拆分的d,j＝4.7hz,可與d2o交換,1h),5.96-5.82(m,1h),5.46(不良拆分的dd,j＝9.8,4.7hz,在d2o后變為d,j＝10.1hz,1h),5.27(brd,j＝17.1hz,1h),5.21-5.10(m,2h),4.81(brd,j＝12.3hz,1h),4.51-4.17(m,5h),4.13-3.84(m,4h),3.84-3.67(m,2h),3.77(s,3h),3.55-3.20(m,6h，由水峰部分掩蔽),2.66-2.30(m,6h，由dmso峰部分掩蔽),2.26(s,3h),2.10-1.20(m,16h),1.35(s,9h)。hrms(esi)m/zc61h78cln8o14計算值:1181.5321,實測值:1181.5286[mh+]；c61h77cln8nao14計算值:1203.5140,實測值:1203.5130[mna+]；c61h77clkn8o14計算值:1219.4879,實測值:1219.4861[mk+].步驟b:(11as)-8-((6-((s)-1-(氯甲基)-5-((4-甲基哌嗪-1-羰基)氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-6-氨基-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基酯二(2,2,2-三氟乙酸鹽)(cbi-pbdld2)和(11as)-8-((6-((s)-1-(氯甲基)-5-((4-甲基哌嗪-1-羰基)氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基)氧基)-7,11-二甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-6-氨基-2-(1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)己酰氨基)芐基酯二(2,2,2-三氟乙酸鹽)(cbi-pbdld3)合成cbi-pbdld2和cbi‐pbdpd3合成方案合成cbi‐pbdld2和cbi‐pbdld3合成方案(續)向1-(叔丁氧基羰基)環丁烷羧酸(16)(200mg,1.00mmol)(pctint.appl.2002,wo2002076968a1)、1-(5-氨基戊基)-1h-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(17)(218mg,1.00mmol)(j.med.chem.2013,56,7890-7901)、edci.hcl(576mg,3.00mmol)和tsoh(35mg,0.20mmol)的混合物中加入dma(2ml)。將混合物在20℃攪拌15min并加入dipea(0.17ml,1.00mmol)。將反應混合物進一步攪拌20h并在etoac(200ml)和水(100ml)之間分配。分離etoac層并先后用冷的1nhcl(100ml)、飽和nahco3(100ml)和水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。蒸發溶劑得到1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷羧酸叔丁酯(18)(290mg,80％)，其為淡黃色固體,mp63-65℃；1hnmr[(cd3)2so]δ7.58(t,j＝5.6hz,1h),7.00(s,2h),3.37(t,j＝7.0hz,2h),3.03(q,j＝6.0hz,2h),2.40-2.23(m,4h),1.85-1.64(m,2h),1.55-1.32(m,4h),1.38(s,9h),1.26-1.01(m,2h)。hrms(esi)m/zc19h29n2o5計算值:365.2071,實測值:365.2071[mh+]；c19h28n2nao5計算值:387.1890,實測值:387.1898[mna+]；c19h28kn2o5計算值:403.1630,實測值:403.1629[mk+].向18(794mg,2.18mmol)在dcm(50ml)中的攪拌溶液中加入甲磺酸(2.83ml,43.6mmol)。將渾濁的混合物在20℃攪拌2h30min。將混合物用dcm(200ml)稀釋并用水(2×50ml)洗滌。將dcm溶液干燥(mgso4)并在25℃(浴溫)蒸發得到1-((5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)氨基甲酰基)環丁烷羧酸(19)(636mg,95％)，其為淡黃色固體,mp100-102℃；1hnmr[(cd3)2so]δ12.46(brs,1h),7.63(t,j＝5.4hz,1h),7.00(s,2h),3.37(t,j＝7.0hz,2h),3.02(q,j＝5.9hz,2h),2.42-2.28(m,4h),1.89-1.63(m,2h),1.55-1.32(m,4h),1.29-1.11(m,2h)。分析(c15h20n2o5)計算:c,58.43；h,6.54；n,9.09.實測值:c,58.54；h,6.39；8.84.在20℃在氮氣氣氛下向(11as)-8-((6-((s)-1-(氯甲基)-5-((4-甲基哌嗪-1-羰基)氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-6-氧代己基)氧基)-11-羥基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氫-1h-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮雜-10(5h)-羧酸4-((s)-2-(((烯丙基氧基)羰基)氨基)-6-((叔丁氧基羰基)氨基)己酰氨基)芐基酯(15)(177mg,0.15mmol)(參照提交的專利:genenlaw-#446508)在無水dcm(2ml)中的攪拌的均勻溶液中加入吡咯烷(0.122ml,1.50mmol)，隨后加入pd(ph3p)4(4.28mg,9.8％pd)。加入后，將反應混合物進一步在20℃(n2)攪拌25min。將混合物用石油醚(50ml)稀釋并在20℃(n2)攪拌10min。棄去溶劑并使用dcm-石油醚(1:10)(2×30ml)重復該操作。將留置的固體溶于dcm(100ml)并用水(50ml)、鹽水(50ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。在25℃(浴溫)蒸發溶劑得到游離胺，其為米色固體(140mg,85％)。將一些該物質(110mg,0.10mmol)用預先形成的(在20℃，10min)19(34mg,0.11mmol)、edci.hcl(58mg,0.30mmol)和tsoh(3.4mg,0.02mmol)在無水dma(1ml)中的混合物在20℃(在氮氣氣氛下)處理。在10min后，加入dipea(0.02ml,0.10mmol)并將反應混合物進一步攪拌22h。將混合物在etoac(200ml)和水(100ml)之間分配。分離etoac層并進一步用飽和nahco3(100ml)、水(100ml)洗滌，然后干燥(mgso4)。在25℃(浴溫)蒸發溶劑得到粗產物，將其經硅膠柱色譜純化(dcm-etoac-meoh＝20:10:3)得到20(92mg,66％)，其為淡黃色固體；mp106-109℃；[α]d+43.1°(c0.418,chcl3)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.06(s,可與d2o交換,1h),8.21(s,1h),7.95(d,j＝8.4hz,1h),7.85-7.77(m,2h，在d2o后減少為1h),7.75(d,j＝8.0hz,可與d2o交換,1h),7.65-7.51(m,3h),7.46(t,j＝7.6hz,1h),7.24-7.11(m,2h),7.03(s,1h),6.96(s,2h),6.79-6.66(m,2h，減少為1h在d2o后),6.54-6.43(m,可與d2o交換,1h),5.52-5.41(m,在d2o后butd，j＝9.5hz,1h),5.15(d,j＝12.0hz,1h),4.81(d,j＝12.0hz,1h),4.47-4.18(m,5h),4.08-3.98(m,1h),3.97-3.86(m,2h),3.84-3.67(m,5h),3.56-3.21(m,8h,由水峰部分掩蔽),3.12-3.02(m,在d2o后butt，j＝6.2hz,2h),2.92-2.80(m,2h),2.65-2.33(m,10h，由dmso峰部分掩蔽),2.25(s,3h),2.15-1.12(m,23h),1.33(s,9h)。hrms(esi)m/zc72h92cln10o16計算值:1387.6376,實測值:1387.6319[mh+]；c72h91cln10nao16計算值:1409.6195,實測值:1409.6146[mna+]；c72h91clkn10o16計算值:1425.5935,實測值:1425.5875[mk+].在20℃在氮氣下向20(79mg,0.057mmol)在dcm(5ml)中的攪拌溶液中加入tfa(5ml)。加入后，將混合物進一步在該溫度攪拌20min。加入石油醚(100ml)并將混合物在20℃攪拌30min。除去溶劑并將留置的油狀物與更多的etoac-石油醚(1:10)(3×50ml)攪拌。將殘留的油狀物溶于meoh并將溶液蒸發得到玻璃狀固體(76mg)，將其經制備性hplc純化[synergimaxrp柱,4μ,21×250mm；水-tfa(ph＝2.56；95％至55％)/10％h2o/ch3cn(5％至45％)；梯度時間30min；流速:12ml/min]得到(i)cbi-pbdld2(26.2mg,30％)，其為淡琥珀色固體；hplc純度:98.5％；[α]d+30.0°(c0.233,meoh)；1hnmr[(cd3)2so]δ10.08(s,可與d2o交換,1h),9.82(brs,可與d2o交換,1h),8.27(s,1h),7.97(d,j＝8.4hz,1h),7.92-7.79(m,3h，在d2o后減少為1h),7.67-7.52(m,5h,在d2o后減少為3h),7.46(t,j＝8.0hz,1h),7.21-7.11(m,2h),7.04(s,1h),6.97(s,2h),6.75(s,1h),6.50(brs,1h，可與d2o交換),5.45(brd,在d2o后butd，j＝9.0hz,1h),5.10(brd,j＝13hz,1h),4.87(brd,j＝12hz,1h),4.55-4.10(m,5h),4.50(dd,j＝11.4,3.4hz,1h),4.01-3.88(m,2h),3.76(s,3h),3.39-3.22(m,4h),3.14-3.03(m,2h),2.89(s,3h),2.81-2.69(m,2h),2.65-2.55(m,1h),2.47-2.34(m,4h),2.07-1.13(m,23h),剩余的12h由水和dmso峰掩蔽。hrms(esi)m/zc67h84cln10o14計算值:1287.5852,實測值:1287.5845[mh+]；c67h83cln10nao14計算值:1309.5671,實測值:1309.5654[mna+].還純化得到(ii)cbi-pbdld3(11.2mg,15％)，其為米色固體；hplc純度:92.6％；1hnmr[(cd3)2so]δ10.07(s,可與d2o交換,1h),9.90(brs,可與d2o交換,1h),8.27(s,1h),7.96(d,j＝8.5hz,1h),7.93-7.76(m,3h，在d2o后減少為1h),7.73-7.51(m,5h,在d2o后減少為3h),7.46(t,j＝8.2hz,1h),7.16-7.08(m,2h),7.04(s,1h),6.97(s,2h),6.85(s,1h),5.33(brd,j＝7.8hz,1h),5.07(brd,j＝12hz,1h),4.93(brd,j＝13hz,1h),4.56-4.10(m,5h),3.77(s,3h),3.62-3.23(m,6h),3.44(s,3h),3.15-3.01(m,2h),2.89(s,3h),2.82-2.69(m,2h),2.66-2.55(m,1h),2.46-2.34(m,4h),2.11-1.12(m,23h),剩余13h由水和dmso峰掩蔽。hrms(esi)m/zc68h86cln10o14計算值:1301.6008,實測值:1301.5952[mh+]；c68h85cln10nao14計算值:1323.5827,實測值:1323.5778[mna+].制備(2e,2'e)-3,3'-(2-(3-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)丙酰氨基)-1,4-亞苯基)二丙烯酸方案向2(1.35g,4.34mmol)在無水dmf(20ml)中的攪拌溶液中加入hatu(2.20g,5.79mmol)、diea(1.12g,8.68mmol)。在將混合物在25℃攪拌10min后，加入化合物1(1.0g,2.89mmol)。將反應混合物在25℃在氮氣下攪拌15h。加入水(20ml)并將其用etoac(30ml×3)萃取。將合并的有機相用鹽水洗滌，經na2so4干燥，并濃縮。將其經快速柱純化(pe:etoac＝1:1)得到粗產物3(2.25g)，其為黃色固體。lcms:(5-95ab,1.5min),1.075min，[m-114]+＝527.0.向化合物3(1.95g,3.05mmol)在無水dcm(30ml)中的攪拌溶液中加入哌啶(2.60g,30.5mmol)。將混合物在25℃在氮氣下攪拌2.5h。將其用h2o(20ml×3)、鹽水(15ml)洗滌，并經na2so4干燥。將其濃縮，用pe(20ml×3)洗滌，并干燥得到粗產物4(2.4g)，其為黃色固體。向化合物9(3.0g,17.1mmol)在dme/h2o(40ml/20ml)中的溶液中加入nahco3(2.88g,34.3mmol)。在將混合物在25℃攪拌15min后，加入化合物10(5.54g,20.6mmol)。將混合物在25℃在氮氣下攪拌16h。除去溶劑并加入h2o(5ml)。將其用etoac(30ml×3)萃取。將水相的ph用hcl溶液調節至3，并將其用etoac(120ml×3)萃取。將合并的有機相經na2so4干燥，并濃縮得到粗產物11，其為無色油狀物。向化合物11(5.64g,17.1mmol)在無水thf(120ml)中的溶液中加入hosu(2.07g,17.98mmol)和dcc(3.70g,17.98mmol)。將混合物在25℃在氮氣下攪拌15h。將其濾過并濃縮。將殘留物用pe(30ml×3)洗滌，干燥并濃縮得到粗產物12(8.30g)，其為白色固體。向化合物4(1.65g,3.96mmol)在無水dmf(20ml)中的溶液中加入化合物12(2.03g,4.75mmol)。將混合物在25℃在氮氣下攪拌15h。加入水(30ml)并將其用etoac(30ml×3)萃取。將合并的有機相用鹽水(30ml)洗滌，并經na2so4干燥。將其濃縮得到粗產物，將其用pe(30ml×4)和mtbe/pe(15ml/45ml×2)洗滌，并干燥得到產物5(0.96g,收率:33％)，其為淺黃色固體。向化合物5(0.96g,1.32mmol)在meoh(4ml)、thf(8ml)和h2o(8ml)中的溶液中加入lioh-h2o(111mg,2.64mmol)。將混合物在25℃在氮氣下攪拌30min。減壓除去有機溶劑并加入h2o(10ml)。加入hcl溶液以調節ph為3-4。將其用etoac(50ml×4)萃取，經na2so4干燥，并濃縮得到粗產物。將粗產物用pe(30ml)和mtbe(10ml×3)洗滌，并干燥得到產物6(620mg,收率:67％)，其為白色固體。在0℃向化合物6(620mg,0.89mmol)在無水dmf(10ml)中的溶液中加入diea(573mg,4.43mmol)和bop-cl(248mg,0.97mmol)。加入化合物7(177.59mg,0.97mmol)。在將混合物在0℃在氮氣下攪拌30min后，加入h2o(20ml)并將其用etoac(30ml×3)萃取。將合并的有機相用鹽水(30ml)洗滌，經na2so4干燥，并濃縮得到粗產物.將其用mtbe(10ml×2)和pe(50ml×3)洗滌，并干燥得到產物8(690mg,收率:90％)，其為白色固體。lcms:(5-95ab,1.5min),0.875min，ms＝864.2[m+1]；向化合物8(300mg,0.347mmol)在無水dcm(4.0ml)中的攪拌溶液中逐滴加入tfa(2.0ml)。在將混合物在25℃在氮氣下攪拌30min后，除去溶劑。將殘留物溶于dmf并經制備性hplc純化(hcooh)得到產物(2e,2'e)-3,3'-(2-(3-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)丙酰氨基)-1,4-亞苯基)二丙烯酸(81.4mg,收率:31％)，其為淺黃色粉末。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.93(s,2h),6.13(s,1h),7.82–7.46(m,8h),6.98(s,2h),6.55–6.51(d,j＝16.0hz,2h),5.98(s,1h),5.41(s,2h),4.22(s,1h),3.03–2.90(m,6h),2.67–2.50(m,4h),2.36(s,4h),1.69(s,3h),1.46–1.33(m,7h),1.23–1.16(d,j＝28hz,2h).制備cbi-cbild52,5-二((e)-3-((s)-1-(氯甲基)-5-(膦酰氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-3-氧代丙-1-烯基)苯基氨基甲酸4-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基酯2向在冰浴中冷卻的1(230mg,0.44mmol)在meoh(2ml)中的溶液中加入cs2co3(287mg,0.88mmol)和幾滴水。將混合物在冰浴中攪拌1h，然后重新分散于乙酸乙酯和水之間。將水相用乙酸乙酯萃取三次。將合并的有機萃取液用水和鹽水洗滌，經無水na2so4干燥，經硅藻土濾過，并除去溶劑。將所得的殘留物溶于乙酸乙酯并經florisil填料濾過得到粗的2，其為灰白色膠狀物(188mg,100％)，其無需進一步純化即可直接使用。4向180mg(0.42mmol)2(由如上提及的操作新鮮制備)中加入(2e,2'e)-3,3'-(2-(3-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)丙酰氨基)-1,4-亞苯基)二丙烯酸3(100mg,0.12mmol)、edci.hcl(185mg,0.96mmol)、甲苯磺酸(2.1mg,0.012mmol)和dma(0.5ml)。在將混合物攪拌過夜后，真空除去大部分dma并將殘留物重新分散于乙酸乙酯和nahco3水溶液之間。將水相用乙酸乙酯萃取三次。將合并的有機萃取液用水、隨后鹽水洗滌，經無水na2so4干燥，并經硅藻土填料濾過。除去溶劑并將所得的殘留物溶于最少的dcm中并通過加入庚烷沉淀得到粗產物(207mg)，將其進一步經制備性hplc純化[柱:synergi-maxrp4μ,250×21.20mm；流動相:a/b＝20％至1％(a:甲酸銨ph3.45,b:90％乙腈/水)；流速12ml/min]得到4(65mg,33％)，其為黃色固體。1hnmr(cdcl3)δ9.67(brs,1h),8.67(brs,2h),8.18-7.98(m,4h),7.90-7.72(m,3h),7.66-7.58(m,6h),7.50-7.28(m,8h),6.84-6.62(m,4h),6.66(s,2h,馬來酰亞胺),6.00(brs,1h),5.23-5.13(m,2h),4.80-4.70(m,1h),4.40-3.85(m,6h),3.50-3.40(m,6h),3.20-3.14(m,2h),2.90-2.75(m,2h),2.60-2.45(m,4h),1.92-1.80(m,2h),1.62,1.60,1.57,1.56(4s,36h),1.55-1.40(m,6h),1.30-1.20(m,3h)。31pnmr(cdcl3)δ-15.44(s),15.82(s)。hrms(esi)實測m/z1666.6051(m+na)。c83h101cl2n9nao18p2需要1666.6009.5向在冰浴中冷卻的4(25mg,0.015mmol)在dcm(0.6ml)中的溶液中加入tfa(0.2ml,2.61mmol)。將混合物在冰浴中攪拌0.5h。將所有揮發組分在0℃泵出并將所得的殘留物用乙酸乙酯研磨，然后用thf和石油醚洗滌得到5(cbi-cbild5)，其為黃色固體(19mg,88％)。1hnmr(dmso)δ10.33(brs,1h),9.63(s,1h),8.70(s,1h),8.95(s,1h),8.14-8.11(m,4h),7.96-7.90(m,4h),7.81-7.69(m,6h),7.64-7.54(m,2h),7.50-7.39(m,4h),7.33-7.26(m,2h),6.97(s,2h,馬來酰亞胺),6.13(brs,2h),5.14(s,2h),4.58(s,4h),4.40-4.30(m,4h),4.08-3.95(m,4h),3.29(t,j＝6.9hz,2h),2.99-2.94(m,4h),2.39-2.33(m,2h),1.71-1.67(m,4h),1.40-1.35(m,6h),1.12-1.10(m,3h)。31pnmr(dmso)δ-5.91(s)。hrms(esi)實測m/z1442.3438(m+na)。c67h69cl2n9nao18p2需要1442.3505.cbi-cbild62,5-二((e)-3-((s)-1-(氯甲基)-5-(膦酰氧基)-1h-苯并[e]吲哚-3(2h)-基)-3-氧代丙-1-烯基)苯基氨基甲酸4-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基酯步驟a:(s)-n-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基)-n-(1-(4-(羥基甲基)苯基氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)環丁烷-1,1-二甲酰胺方案操作將化合物1(150g,1.53mol)加至化合物2(201g,1.53mol)在hoac(1000ml)中的攪拌溶液中。在將混合物在室溫攪拌2h后，將其回流加熱8h。減壓除去有機溶劑并將殘留物用etoac(500ml×3)萃取，用h2o洗滌。將合并的有機層經na2so4干燥并濃縮得到粗產物。將其用石油醚洗滌得到化合物3，其為白色固體(250g,77.4％).將dppa(130g,473mmol)和tea(47.9g,473mmol)加至化合物3(100g,473mmol)在t-buoh(200ml)中的溶液中。將混合物在氮氣下回流加熱8h。將混合物濃縮，并將殘留物經硅膠柱色譜純化(pe:etoac＝3:1)得到化合物4(13g,10％).向化合物4(28g,992mmol)在無水etoac(30ml)中的溶液中逐滴加入hcl/etoac(50ml)。在將混合物在室溫攪拌5h后，將其濾過并將固體干燥得到化合物5(16g,73.7％).1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.02(s,2h),6.99(s,2h),3.37-3.34(m,2h),2.71-2.64(m,2h),1.56-1.43(m,4h),1.23-1.20(m,2h).向化合物6(17.50g,0.10mol)在二噁烷和h2o的混合物(50ml/75ml)中的混合物中加入k2co3(34.55g,0.25mol)。在0℃緩慢加入fmoc-cl(30.96g,0.12mol)。歷時2h將反應混合物溫熱至室溫。減壓除去有機溶劑，并將水漿液用6mhcl溶液調節至ph＝3，并用etoac(100ml×3)萃取。將有機層經na2so4干燥，濾過，并減壓濃縮得到預期產物7(38.0g,95.6％)。(化合物7之后變為可商購得到的)向化合物7(4g,10mmol)在dcm和meoh的混合物(100ml/50ml)中的溶液中加入4-氨基-苯基-甲醇(8)(1.6g,13mmol,1.3eq)和eedq(3.2g,13mmol,1.3eq)。在將混合物在室溫在氮氣下攪拌16h后，將其濃縮得到棕色固體。加入mtbe(200ml)并將其在15℃攪拌2h。將固體經濾過收集，用mtbe(50ml×2)洗滌得到粗產物9，其為橙色固體(4.2g,84％).lcms(esi):m/z503.0[m+1].在室溫向化合物9(4.2g,8.3mmol)在無水dmf(20ml)中的攪拌溶液中逐滴加入哌啶(1.65ml,17mmol,2eq)。將混合物在室溫攪拌30min，并形成固體析出物。加入無水dcm(50ml)，并且混合物立即變為透明的。將混合物在室溫攪拌另外的30min，且lcms顯示消耗化合物9。將其減壓濃縮干燥(確保無哌啶殘留)，并將殘留物在etoac和h2o(50ml/20ml)之間分配。將水相用etoac(50ml×2)洗滌并濃縮得到10，其為油狀殘留物(2.2g,94％)(含有少量的dmf).向化合物11(8g,29.7mmol)在dme(50ml)中的溶液中加入化合物10(6.0g,21.4mmol)和nahco3(7.48g,89.0mmol)在水(30ml)中的溶液。在將混合物在室溫攪拌16h后，將其減壓濃縮干燥并將殘留物經柱色譜純化(dcm:meoh＝10:1)得到粗化合物12，其為白色固體(6.4g,68.7％).lcms(esi):m/z435.0[m+1].在室溫向化合物12(6.4g,14.7mmol)在thf和meoh的混合物(20ml/10ml)中的攪拌溶液中加入lioh·h2o(1.2g,28.6mmol)在h2o(20ml)中的溶液。在將反應混合物在室溫攪拌16h后，減壓除去溶劑，將得到的殘留物經制備性hplc純化，得到化合物13(3.5g,收率:58.5％).lcms(esi):m/z406.9[m+1].1hnmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.86(d,j＝8.4hz,2h),8.51(d,j＝8.4hz,2h),5.88-5.85(m,1h),5.78(s,2h),4.54-4.49(m,3h),4.38-4.32(m,1h),3.86-3.75(m,1h),3.84-3.80(m,2h),3.28-3.21(m,1h),3.30-3.24(m,1h),3.00-2.80(m,1h),2.37-2.28(m,2h).在0℃將dipea(1.59g,12.3mmol)和bop-cl(692mg,2.71mmol)加至化合物13(1.0g,2.46mmol)在dmf(10ml)中的溶液中，隨后加入化合物5(592mg,2.71mmol)。將混合物在0℃攪拌0.5h。將反應混合物用檸檬酸溶液(10ml)淬滅，用dcm/meoh(10:1)萃取。將有機層干燥并濃縮，并將殘留物經硅膠柱色譜純化(dcm:meoh＝10:1)得到化合物14(1.0g,71％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ10.00(s,1h),7.82-7.77(m,2h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),7.19(d,j＝8.4hz,2h),6.96(s,2h),5.95(t,j＝6.4hz,1h),5.39(s,2h),5.08(t,j＝5.6hz,1h),4.40-4.35(m,3h),4.09(d,j＝4.8hz,1h),3.01(d,j＝3.2hz,2h),3.05-2.72(m,4h),2.68-2.58(m,3h),2.40-2.36(m,4h),1.72-1.70(m,3h),1.44-1.42(m,1h),1.40-1.23(m,6h),1.21-1.16(m,4h).步驟b:合成(2e,2'e)-3,3'-(2-((4-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基氨基)-1,4-亞苯基)二丙烯酸方案操作向化合物1(1.5g,21.4mmol)在二噁烷(4.0ml)中的溶液中加入化合物2(2.74g,85.6mmol)、dipea(3.45g,107mmol)和pd(t-bu3p)2(0.55g,4.30mmol)。將反應混合物在120℃在微波輻射下攪拌2.0h。將反應重復4次(總計使用6.0g1)。將合并的反應混合物濃縮，用水(20ml)稀釋并用etoac(100.0mlx3)萃取。合并有機層，經na2so4干燥。將其濃縮并經柱色譜純化(pe:etoac＝10:1)得到預期產物(3.8g,47％).向化合物3(3.88g,10.1mmol)在etoh/h2o(120.0ml)中的溶液中加入fe(2.83g,50.7mmol)和nh4cl(5.4g,101mmol)，并將反應混合物在100℃攪拌2.0h。將反應混合物濾過并將濾液濃縮并用etoac(60.0mlx3)萃取。合并有機層，經na2so4干燥并濃縮得到產物(2.5g,72％).向三光氣溶液(224mg,0.76mmol)中逐滴加入冰浴中的化合物4(725mg,2.1mmol)和et3n(530.3mg,5.25mmol)在dcm(5.0ml)中的溶液。將反應混合物在21℃攪拌1.0h直到無起始物質剩余。將反應混合物用水(5.0mlx2)洗滌，并經na2so4干燥。將其濃縮并溶于dcm(5.0ml)。加入化合物5的溶液(1.0g,1.75mmol)并將反應混合物在21℃攪拌3.0h。將反應混合物用meoh(2.0ml)淬滅，并經柱色譜純化(dcm:meoh＝10:1)得到預期產物(380mg,23％)。向化合物6(300.0mg,0.32mmol)在dcm(10.0ml)中的溶液中加入tfa(2.0ml)，并將混合物在21℃攪拌30.0min。將混合物用nh3·h2o調節至ph6。將析出物經濾過收集得到產物(2e,2'e)-3,3'-(2-((4-((s)-2-(1-(5-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)戊基氨基甲酰基)環丁烷甲酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)芐基氧基)羰基氨基)-1,4-亞苯基)二丙烯酸(112.0mg,收率42％).lcms(10-80,ab,2.0min)rt＝0.962min，[m+1]+＝830.0；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.45(br,2h),10.10(s,1h)，9.55(s,1h),7.50-7.81(m,8h),7.34(m,2h),6.95(s,2h),6.47-6.57(m,2h),5.96(s,1h),5.40(s,2h),5.05(s,2h),4.36-4.39(m,1h),2.98-3.06(m,6h),2.35-2.39(m,4h),1.15-1.73(m,13h).步驟c:8向184mg(0.43mmol)2(由如上提及的操作新鮮制備)中加入3(80mg,0.11mmol)、edci.hcl(165mg,0.86mmol)、甲苯磺酸(2.0mg,0.011mmol)和dma(0.5ml)。在將混合物攪拌過夜后，真空除去大部分dma并將殘留物重新分散于乙酸乙酯和nahco3水溶液之間。將水相用乙酸乙酯萃取三次。將合并的有機萃取液用水、隨后鹽水洗滌，經無水na2so4干燥，并經硅藻土填料濾過。除去溶劑并將所得的殘留物溶于最少的dcm中并通過加入庚烷沉淀得到粗產物(195mg)，將其進一步經制備性hplc純化[柱:synergi-maxrp4μ,250×21.20mm；流動相:a/b＝90％至2％(a:甲酸銨ph3.45,b:90％乙腈/水)；流速12ml/min]得到4(56mg,34％)，其為黃色固體。1hnmr(dmso)δ10.02(s,1h),8.67(s,2h),8.14-8.06(m,4h),7.97(d,j＝8.4hz,2h),7.86-7.76(m,4h),7.70(d,j＝15.2hz,1h),7.63-7.59(m,2h),7.53-7.49(m,2h),7.29-7.23(m,2h),6.96(s,2h,馬來酰亞胺),5.91(brs,1h),5.36(brs,2h),4.65-4.50(m,4h),4.44-4.37(m,2h),4.28-4.22(m,2h),4.05-3.95(m,4h),3.60(t,j＝6.6hz,1h),3.07-3.00(m,2h),2.95-2.88(m,2h),2.68-2.58(m,2h),2.42-2.32(m,3h),1.78-1.62(m,4h),1.51,1.50,1.49,1.48(4s,36h),1.49-1.28(m,11h)。31pnmr(cdcl3)δ-15.44(s),15.46(s)。hrms(esi)實測m/z1588.5827(m+na)。c78h99cl2n9nao17p2需要1588.5903.5向在冰浴中冷卻的4(25mg,0.015mmol)在dcm(0.6ml)中的溶液中加入tfa(0.2ml,2.61mmol)。將混合物在冰浴中攪拌0.5h。加入乙醚并將所得的析出物經濾過收集并用乙酸乙酯、thf和石油醚洗滌得到5(cbi-cbild6)，其為棕色固體(18mg,86％)。1hnmr(dmso)δ10.01(brs,1h),8.60(brs,2h),8.16-8.09(m,4h),7.96-7.93(m,2h),7.88-7.58(m,8h),7.46(t,j＝7.7hz,2h),7.30-7.25(m,2h),6.97(s,2h,馬來酰亞胺),6.10(brs,1h),5.35(brs,2h),4.60-4.18(m,6h),4.05-3.95(m,4h),3.45-3.29(m,5h),3.04-2.87(m,4h),2.68-2.60(m,2h),2.40-2.30(m,4h),1.72-1.57(m,4h),1.43-1.28(m,5h),1.20-1.07(m,3h)。31pnmr(dmso)δ-5.82(s)。hrms(esi)實測m/z1342.3562(m+h)。c62h68cl2n9o17p2需要1342.3580.制備adc的方法通過還原和再氧化制備用于綴合的半胱氨酸改造的抗體在某些條件下，可通過用還原劑如dtt(cleland試劑，二硫蘇糖醇)或tcep(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽；getz等(1999)anal.biochem.vol273:73-80；soltecventures，beverly，ma)處理，使半胱氨酸改造的抗體具有反應性以便與本發明的接頭-藥物中間體綴合。在cho細胞中表達的全長半胱氨酸改造的單克隆抗體(thiomab)(gomez等(2010)biotechnologyandbioeng.105(4):748-760；gomez等(2010)biotechnol.prog.26:1438-1445)在室溫例如用約50倍過量的dtt還原過夜，以便還原可在新引入的半胱氨酸殘基與存在于培養基中的半胱氨酸之間形成的二硫鍵。輕鏈氨基酸根據kabat(kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，(1991)第5版，usdeptofhealthandhumanservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md)編號。除了指定為kabat系統的情形外，重鏈氨基酸根據eu編號系統(edelman等(1969)proc.natl.acad.ofsci.63(1):78-85)編號。使用單字母氨基酸縮寫。由于細胞培養條件，在cho細胞中表達的全長、半胱氨酸改造的單克隆抗體(thiomab)攜帶半胱氨酸加合物(胱氨酸)或在改造的半胱氨酸上進行谷胱甘肽化。為釋放改造的半胱氨酸的反應性巰基，將thiomab在約ph8.0的500mm硼酸鈉和500mm氯化鈉中溶解并用約50-100倍過量的1mmtcep(三(2-羧基乙基)膦鹽酸鹽；getz等(1999)anal.biochem.vol273:73-80；soltecventures，beverly，ma)在37℃還原約1-2小時。或者，可使用dtt作為還原劑。通過非還原性sds-page或通過變性反相hplcplrp柱色譜監測鏈間二硫鍵的形成。將還原的thiomab在ph5的10mm乙酸鈉中稀釋并加載到hitrapspff柱上，并用含有0.3m氯化鈉的pbs或者含有150mm氯化鈉的ph7.5的50mmtris-cl洗脫。通過進行再氧化重新產生存在于親代mab中的半胱氨酸殘基間的二硫鍵。對于洗脫的經還原thiomab，在ph7用15x或2mm脫氫抗壞血酸(dhaa)處理3小時，或在50mmtris-cl，ph7.5處理3小時，或用2mm硫酸銅水溶液(cuso4)在室溫處理過夜。可使用本領域已知的其它氧化劑，即氧化試劑和氧化條件。環境空氣氧化也可為有效的。這種適度的部分再氧化步驟有效地形成具有高保真度的鏈內二硫鍵。通過在sephadexg25樹脂上洗脫來更換緩沖液并用含1mmdtpa的pbs洗脫。由溶液在280nm處的吸光度確定還原抗體濃度以及通過與dtnb(aldrich，milwaukee，wi)反應并測定在412nm處的吸光度而確定巰基濃度，由此檢測巰基/ab值。在質量范圍擴大的tsqquantumtriplequadrupoletm質譜儀(thermoelectron，sanjosecalifornia)上進行液相色譜/質譜分析。在加熱至75℃的1000a，微內徑柱(50mmx2.1mm，polymerlaboratories，shropshire，uk)上對樣品進行色譜分析。使用30-40％b的線性梯度(溶劑a：0.05％tfa/水，溶劑b：0.04％tfa/乙腈)并使用電噴射源將洗脫液直接電離。通過數據系統收集數據并使用(novatia，llc，newjersey)進行解卷積。在lc/ms分析之前，將抗體或藥物綴合物(50微克)用pngasef(2單位/ml；prozyme，sanleandro，ca)于37℃處理2小時以除去n連接的碳水化合物。將疏水作用色譜(hic)樣品注入butylhicnpr柱(2.5微米粒度，4.6mm×3.5cm)(tosohbioscience)并以0.8ml/min用0至70％b的線性梯度洗脫(a：1.5m硫酸銨/50mm磷酸鉀，ph7；b：50mm磷酸鉀，ph7，20％異丙醇)。使用配備有多波長檢測儀和chemstation軟件的agilent1100系列hplc系統來解析和定量具有不同藥物/抗體比的抗體種類。本發明的半胱氨酸改造的抗體可根據上述一般方法制備。接頭-藥物中間體與抗體的綴合(步驟1)改造的抗體半胱氨酸以與如在cho細胞中表達的谷胱甘肽和/或半胱氨酸的混合二硫化物的形式被阻斷。這些半胱氨酸在綴合前必須被"解阻斷(deblocked)"。將20mm琥珀酸鹽、150mmnacl、2mmedta中的解阻斷抗體(5-12mg/ml)加至75-100mmtris，ph7.5-8(使用1mtris)。將共溶劑(dmso、dmf或dma)加至所述抗體溶液，然后加入接頭-藥物(在dmso或dmf中)，得到10-13％的最終％-有機溶劑以及相對于抗體濃度2.5-10x的接頭-藥物最終濃度。在室溫進行反應1-12小時(直至實現最大綴合)。通過使用一次性柱的陽離子交換色譜和/或凝膠過濾(分別為smaxi或zeba)純化綴合反應混合物。若根據分析性sec發現粗綴合物顯著聚集(例如，>10％)，則通過制備性凝膠過濾(s200柱)進行額外的純化。隨后使用凝膠過濾或透析將綴合物交換于制劑緩沖液(20mmhis-乙酸鹽，ph5.5，240mm蔗糖)。隨后將tween-20加至經純化綴合物以實現0.02％的最終濃度。最終綴合物濃度范圍為2.4至7.5mg/ml(％收率：34-81％，來自解阻斷抗體)。通過lcms分析綴合物以獲得藥物-抗體比(dar)的測量，其范圍為1.3至2.1(平均：1.8)。還使用分析性sec(zenix或shodex柱)分析綴合物的高分子量聚集物的存在；最終，經純化綴合物顯示出0-10％的聚集。還對綴合物的內毒素污染進行評估，其在所有情況下均不超過1.3eu/mg。游離的未綴合藥物不超過最終綴合物的1％。接頭-藥物中間體與抗體的綴合(步驟2，替代操作)在以上實施例的還原和再氧化操作后，將抗體溶于pbs(磷酸鹽緩沖鹽水)緩沖液中并在冰上冷卻。將過量的約1.5摩爾濃度至20當量的接頭-藥物中間體與巰基反應性官能團如馬來酰亞胺基團或溴-乙酰胺基團溶于dmso中，在乙腈和水中稀釋，并加至pbs中的冷卻的經還原、再氧化的抗體。約1小時后，添加過量馬來酰亞胺以淬滅反應混合物并對任何未反應的抗體巰基封端(cap)。可將綴合混合物裝載并洗脫通過hitrapspff柱以除去過量的藥物-接頭中間體和其它雜質。通過離心超濾濃縮反應混合物并將半胱氨酸改造的抗體藥物綴合物在pbs中洗脫通過g25樹脂來純化和脫鹽，在無菌條件下濾過通過0.2μm濾器，并冷凍供貯存。本發明的adc可根據以上部分中描述的操作制備。測定然后測試所選接頭并發現其在體外和體內測定中具有活性。裂解數據在下表中示出。組織蛋白酶b裂解測定如同肽接頭，預期用于adc的非肽接頭在溶酶體中可裂解以用于適當藥物釋放。作為細胞的一種消化性細胞器，溶酶體富含一些在酸性ph顯示出最佳水解活性的蛋白酶。組織蛋白酶b是一種代表性的溶酶體蛋白酶并已顯示出有助于adc肽接頭(參照)的活化。作為初始篩選，開發使用經純化組織蛋白酶b的測定以鑒定適用于與抗體綴合的可裂解接頭-藥物結構。使用諾氟沙星表示接頭-藥物的藥物成分。在給定時間點以及裂解反應的動力學參數(km和vmax)測量相對于對照肽(例如val-cit)的裂解百分數。以下顯示了所述測定的詳細描述。從該測定鑒定了各種具有蛋白水解活性且結構多樣性的接頭并在之后將其用于制備adc。使用實驗性接頭-藥物作為底物，通過使用lc/ms監測諾氟沙星的釋放，測量組織蛋白酶b裂解活性。在包含20nm組織蛋白酶b(emdmillipore批號#219364，人肝)、10mmmesph6.0、1mmdtt、0.03％chaps和25nm諾氟沙星-d5內標(santacruzbiotechnology，批號#sc-301482)的20ul反應液中培養不同濃度的接頭-藥物(3倍連續稀釋)。在37℃培養反應混合物1小時，然后加入60ul2％甲酸以淬滅反應混合物。通過在watersacquityuplcbehphenyl柱(2.1mmx50mm，waters批號#186002884)上注射2ul終止的反應混合物對樣品進行分析。在wateracquityuplc上使用乙腈、0.1％甲酸的線性2分鐘梯度(0％至80％)純化樣品。使用以陽性mrm模式運行的absciexqtrap5500三重四級桿質譜儀檢測諾氟沙星和諾氟沙星-d5內標(諾氟沙星320→233m/z，諾氟沙星-d5325→233m/z)。將量化的諾氟沙星(用內標標準化)針對接頭-藥物濃度進行作圖，且所得曲線是使用graphpadprism軟件針對動力學常數km和vmax進行米-曼二氏擬合的擬合曲線。體外細胞增殖測定通過使用以下方案的細胞增殖測定來測量adc的效能(celltiterglotm發光細胞存活測定，promegacorp.technicalbulletintb288；mendoza等(2002)cancerres.62:5485-5488)：1.將100μl小份的在培養基中含有104個細胞(skbr-3，bt474，mcf7或mda-mb-468)的細胞培養物置于96孔不透明壁板的各孔中。2.準備包含培養基且無細胞的對照孔。3.將adc加至實驗孔并培養3-5天。4.將板平衡至室溫約30分鐘。5.加入等同于各孔中存在的細胞培養基體積的一定體積的celltiterglotm試劑。6.在定軌振蕩器上混合內容物2分鐘以誘導細胞裂解。7.在室溫培養所述板10分鐘以穩定化發光信號。8.記錄發光并將其在圖中報告為rlu＝相對發光單位。數據繪制為具有標準偏差誤差棒的各組重復測量的發光均值。所述方案是對celltiterglotm發光細胞的修改。培養基：sk-br-3生長在50/50/10％fbs/谷氨酰胺/250μg/mlg-418，ovcar-3生長在rpmi/20％fbs/谷氨酰胺。體內測定1.在hl-60或eol-1(人急性髓細胞性白血病)的小鼠異種移植模型中研究抗cd33抗體-藥物綴合物(adc)的效能。所述hl-60細胞系獲自atcc(americantypeculturecollection；manassas，va)且eol-1細胞系來源于dsmz(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures；braunschweig，germany)。雌性c.b-17scid小鼠(charlesriver實驗室；hollister，ca)在側面區域各自皮下接種五百萬個hl-60或eol-1細胞。當異種移植瘤達到100-300mm3的平均腫瘤體積時(稱作第0日)，將動物隨機分入各自含7-10只小鼠的組中并接受adc的單次靜脈內注射。在給藥adc前約4小時，腹膜內給藥動物過量(30mg/kg)的抗-gd對照抗體以阻斷腫瘤細胞上可能的非特異性抗體結合位點。在整個研究過程中每周測量小鼠腫瘤和體重1-2次。當體重減輕>20％其初始體重時，對小鼠立即進行安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示出即發潰瘍跡象前對所有動物進行安樂死。2.在ovcar3-x2.1(人卵巢癌)的小鼠異種移植模型中研究抗napi2b抗體-藥物綴合物(adc)的效能。所述ovcar3細胞系獲自atcc(americantypeculturecollection；manassas，va)且亞系ovcar3-x2.1在小鼠中最佳生長的genentech產生。雌性c.b-17scid-米色小鼠(charlesriver實驗室；sandiego，ca)在胸部乳腺脂肪墊區域各自接種一千萬個ovcar3-x2.1細胞。當異種移植瘤達到100-300mm3的平均腫瘤體積時(稱作第0日)，將動物隨機分入各自含7-10只小鼠的各組中并接受adc的單次靜脈內注射。在整個研究過程中每周測量小鼠腫瘤和體重1-2次。當體重減輕>20％其初始體重時，對小鼠立即進行安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示出即發潰瘍跡象前對所有動物進行安樂死。3.在bjab-luc(人伯基特淋巴瘤)或wsu-dlcl2(人彌散性大b細胞淋巴瘤)的小鼠異種移植模型中研究抗cd22抗體-藥物綴合物(adc)的效能。所述bjab細胞系獲自dsmz(germancollectionofmicroorganismsandcellcultures；braunschweig，germany)，且亞系bjab-luc在genentech產生以穩定表達熒光素酶基因。所述wsu-dlcl2細胞系也是來源于dsmz。雌性c.b-17scid小鼠(charlesriver實驗室；hollister，ca)在側面區域各自皮下接種2千萬個bjab-luc或wsu-dlcl2細胞。當移植瘤達到100-300mm3的平均腫瘤體積時(稱作第0日)，將動物隨機分入各自含7-10只小鼠的各組中并接受adc的單次靜脈內注射。在整個研究過程中每周測量小鼠腫瘤和體重1-2次。當體重減輕>20％其初始體重時，對小鼠立即進行安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示出即發潰瘍跡象前對所有動物進行安樂死。4.在mmtv-her2founder#5(小鼠乳腺腫瘤)的小鼠同種異體移植模型中研究抗her2抗體-藥物綴合物(adc)的效能。所述mmtv-her2founder#5(fo5)模型(在genentech開發)是一種轉基因小鼠模型，其中人her2基因在小鼠乳腺腫瘤病毒啟動子(mmtv-her2)的轉錄調節下，在乳腺上皮細胞中過表達。所述過表達導致過表達人her2受體的乳腺腫瘤的自發發展。來自于一只founder動物(founder#5，fo5)的乳腺腫瘤已通過連續移植腫瘤碎片而在fvb小鼠(charlesriver實驗室)中傳播。對于效能研究，將所述fo5轉基因乳腺腫瘤以約2mmx2mm大小的腫瘤碎片形式手術移植入雌性nu/nu小鼠(charlesriver實驗室；hollister，ca)的胸部乳腺脂肪墊。當同種異體移植瘤達到100-300mm3的平均腫瘤體積時(稱作第0日)，將動物隨機分入各自含7-10只小鼠的各組中并接受adc的單次靜脈內注射。在整個研究過程中每周測量小鼠腫瘤和體重1-2次。當體重減輕>20％其初始體重時，對小鼠立即進行安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示出即發潰瘍跡象前對所有動物進行安樂死。生物學數據接頭-藥物化合物結構和組織蛋白酶b裂解數據以下接頭-藥物化合物可如下式概述：cap—pm—sp—t其中cap為封端基團，其在組織蛋白酶b測定中保護氨基(例如cbz和乙基)；pm為肽模擬部分；sp為間隔基團，t為藥物部分的取代基。下表中的catb裂解數據顯示了本發明的非肽接頭的裂解速率與肽接頭是相當的(40-56)。肽接頭已經廣泛用于抗體藥物綴合物以釋放活性藥物部分；因此，預期包含本發明非肽接頭的綴合物可實現相似的體外和體內結果。adc接頭-藥物結構序列napi2b人源化抗體:在一個實施方案中，本發明adc的napi2b抗體包含三個輕鏈高變區和三個重鏈高變區(seqidno:1-6)，其序列在以下示出。在一個實施方案中，本發明adc的napi2b抗體包含seqidno:7的可變輕鏈序列和seqidno:8的可變重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的napi2b抗體包含seqidno:9的輕鏈序列和seqidno:10的重鏈序列。抗cd33人源化抗體:在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含三個輕鏈高變區和三個重鏈高變區，其序列(seqidno:11-16)在以下示出。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含seqidno:17的可變輕鏈序列和seqidno:18的可變重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含seqidno:19的輕鏈序列和seqidno:20的重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含三個輕鏈高變區和三個重鏈高變區，其序列(seqidno:19-24)在以下示出。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含seqidno:25的可變輕鏈序列和seqidno:26的可變重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含seqidno:27的可變輕鏈序列和seqidno:28的可變重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含seqidno:29的可變輕鏈序列和seqidno:30的可變重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd33抗體包含seqidno:31的可變輕鏈序列和seqidno:32的可變重鏈序列。抗cd22人源化抗體:在一個實施方案中，本發明adc的抗cd22抗體包含三個輕鏈高變區和三個重鏈高變區(seqidno:41-46)，其序列在以下示出。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd22抗體包含seqidno:47的可變輕鏈序列和seqidno:48的可變重鏈序列。在一個實施方案中，本發明adc的抗cd22抗體包含seqidno:49的輕鏈序列和seqidno:50的重鏈序列。adc體外數據在如上所述的體外測定中測試以下adc并發現其具有活性。所述adc的活性在下表中闡明。napi2badcs用作非靶標對照。編碼抗體ideol-1ic50(ng/ml)napi2bcbi-pbdadc2-110h1.11.4b2187cd33cbi-pbdadc2-215g15.33370napi2bcbi-pbdadc3-110h1.11.4b590cd33cbi-pbdadc3-215g15.3318.1adc體內數據圖1顯示了cd33adc在具有hl-60人急性髓細胞性白血病腫瘤的scid小鼠中的效能比較。cd33cbi-pbdadc3-2相比于媒介物組顯示出腫瘤生長的劑量依賴性抑制。非靶標對照napi2bcbi-pbdadc3-1對于腫瘤生長具有最小作用。圖2顯示了napi2badcs在具有ovcar3x2.1人卵巢腫瘤的scid-beige小鼠中的效能比較。napi2bcbi-pbdadc2-1和adc3-1相比于媒介物組證實了對腫瘤生長的適度抑制。napi2bcbi-pbdadc2-1和adc3-1的抗腫瘤活性是相當的，在3mg/kg抗體劑量(＝73ug/m2的藥物劑量)導致腫瘤生長延遲。當前第1頁12