Ace抑制肽及其應用
【技術領域】：
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體涉及ACE抑制肽及其應用。
【背景技術】：
[0002] 近年來越來越多的研究表明來源于天然食物或動植物的生物活性肽對人體健康 有著積極的作用。這些生物活性肽能夠通過調節人體內各種生理過程從而對人體產生有益 的影響。目前有關生物活性肽的生理功效已被廣泛研究，其免疫調節、抗高血壓、抗氧化、保 護骨骼以及抗高血脂等一系列重要作用相繼見諸報道，在這其中生物活性肽的抗高血壓作 用是目前研究最為廣泛也是最具應用價值的用途之一。
[0003] 高血壓是指人在安靜狀態下舒張壓（DiastolicBloodPressure，DBP)/收縮壓 (SystolicBloodPressure，SBP)持續高于 140/90mmHg，其平均發病率在 15 ~20 % 之 間。作為全球最常見的慢性病，高血壓可以誘發心血管病、中風以及腎臟病等多種疾病， 甚至造成無數患者死亡。相關研究表明人體血壓受到多種因素調節，其中血管緊張素系統 (renin-angiotensinsystem，RAS)和激肽系統（kallikreinkininsystem，KKS)是人體 控制血壓穩定的主要方式。血管緊張素轉化酶（Angiotensinconvertingenzyme，ACE) 在這兩個系統中的作用尤其重要。在RAS系統中，ACE控制著沒有生理活性的血管緊張素 I(AngiotensinI，AngI)向具有升壓活性的血管緊張素II(AngiotensinII，AngII) 的轉化。在KKS系統中，ACE可通過失活血管舒緩激肽，導致血管收縮，引起血壓升高。因 此，ACE是抗高血壓藥物最重要的靶標之一。研究表明具有抗高血壓作用的生物活性肽能 夠通過抑制ACE來實現降血壓功效。且相比傳統降壓藥物這些天然活性肽具有特異性高、 毒副作用小、易吸收、藥效持續時間長等優點。
[0004] 目前已報道具有ACE抑制和抗高血壓作用的生物活性肽已有數百種，其來源十分 廣泛，包含了動物、植物以及乳制品等不同來源。但是，從動植物及乳制品中分離提純生物 活性肽具有步驟繁瑣、成本較高且無法大規模研究等缺點。

【發明內容】
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[0005] 本發明的第一個目的是提供對ACE(血管緊張素轉化酶）的活性具有持續穩定的 抑制作用，具有良好降血壓效果的ACE抑制肽。
[0006] 本發明是利用人工合成技術對長度為2個氨基酸的短肽的ACE抑制活性進行系統 地評價，篩選具有高ACE抑制率的二肽，并進一步研究其在動物體內的降血壓效果。相較傳 統抗高血壓藥物，生物活性肽具有具有毒副作用小、更加安全的優勢。因此，本發明將對抗 高血壓新藥物和保健食品的開發等具有重要意義。
[0007] 本發明的ACE抑制肽，其氨基酸序列為Cl(Cys-Ile)或CK(Cys-Lys)。
[0008] 本發明的第二個目的是提供上述ACE抑制肽在制備ACE抑制藥物中的應用。
[0009] -種ACE抑制藥物，其含有上述ACE抑制肽作為活性成份。
[0010] 本發明的第三個目的是提供上述ACE抑制肽在制備降血壓藥物中的應用。
[0011] -種降血壓藥物，其含有上述ACE抑制肽作為活性成份。
[0012] 本發明的二肽CI或CK對ACE的活性具有持續穩定的抑制作用，并經動物試驗發 現，二肽CI在大鼠體內具有良好的降血壓效果，為合成高血壓治療藥物提供參考。
【附圖說明】：
[0013] 圖1是34種二肽的ACE的抑制率；
[0014] 圖2是二肽CI和CK的ACE抑制活性；
[0015] 圖3是CI灌胃后2小時SHR大鼠血壓改變情況。血壓變化數據以"平均值土標 準誤"形式表示。*P〈〇. 05, **p〈0. 01表示給藥前后血壓值發生顯著變化；
[0016] 圖4是CI灌胃后4小時SHR大鼠血壓改變情況。血壓變化數據以"平均值土標 準誤"形式表示。*P〈〇. 05, **p〈0. 01表示給藥前后血壓值發生顯著變化。
【具體實施方式】：
[0017] 以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。
[0018] 實施例1 :
[0019] 1.實驗部分
[0020] 1. 1實驗材料和儀器
[0021] 實驗材料：合成二肽（由吉爾生化上海有限公司合成）如表1所示，純度 大于95%，共34種；卡托普利（Captoril)西格瑪奧德里奇公司；呋喃丙烯酰三肽 (FAPhe-Gly-Gly，FAPGG)西格瑪奧德里奇公司純度> =98%;ACE西格瑪奧德里奇公司；原 發性高血壓大鼠（SpontaneouslyHypertensiveRats，SHR)雄性31周齡北京維通利華實 驗動物技術有限公司動物許可證號：SCXK(京）2012-0001飼養一周適應環境后按每5只一 組進行分組；生理鹽水。
[0022] 儀器設備：VICTORX多標記酶標儀酶標儀鉑金埃爾默公司；移液器法國吉爾森公 司；BP-98A智能無創血壓儀北京軟隆生物技術有限公司；注射器；灌胃針。
[0023]
[0024]
[0025] 1· 2實驗方法：
[0026] 1· 2. 1ACE抑制率的測定
[0027] 二肽的ACE抑制率使用可見分光光度法進行測定。具體方法是利用FAPGG作為ACE 作用的底物，FAPGG最大吸收峰在340nm附近，用ACE將FAPGG水解成FAP和GG可使340nm 附近處吸光度降低，降低的速率與ACE活性成正比。通過測定FAPGG在340nm附近處吸光 度下降速度可計算出ACE的活性，進而根據添加抑制劑前后ACE酶活的變化間接反映不同 ACE抑制劑的抑制活性。本實驗將二肽樣本用超純水溶解后配置20mg/mL原液，然后稀釋成 20μg/mL濃度的樣品作為實驗組，以0. 0002μg/mL的卡托普利溶液為陽性對照，以生理鹽 水為陰性對照。實驗于37°C下，以340nm為主波長檢測ACE底物FAPGG的吸光度，405nm為 參比波長消除噪音影響，檢測吸光度值的變化，檢測以3分鐘為間隔連續檢測1小時。根據
其中E為樣品孔的ACE酶活（U/L)，計
SsS樣品孔ACE動力學曲線直線段的斜率，Sp為未加抑制劑孔 的ACE動力學曲線直線段的斜率，Sb為空白孔ACE動力學曲線直線段的斜率。
[0028] 1. 2. 2IC5。測定
[0029] 實驗將二肽原液稀釋成200yg/mL濃度的樣品作為試樣，以20yg/L濃度的 Captopril樣品作為陽性對照，對各樣品按3濃度倍梯度進行稀釋，后按1. 2. 1所述方法測 定樣品的ACE抑制率，進而計算IC50值。
[0030] 1.2. 3大鼠降壓實驗
[0031] 購買31周齡的原發性高血壓大鼠，飼養一周適應環境后進行分組實驗。按照如 下劑量：卡托普利（l〇〇mg/kg)、生理鹽水、CI(100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg、10mg/kg、lmg/kg)將相應藥品溶于生理鹽水中利用灌胃方式進行給藥。利用無創血壓儀分別測量大鼠灌 胃前、灌胃后2小時、灌胃后4小時后的舒張壓（DiastolicBloodPressure，DBP)、收縮壓 (SystolicBloodPressure，SBP)和平均動脈壓（MeanBloodPressure，MBP)，取其平均值 作為相應的血壓值。
[0032] 1. 2. 4統計分析
[0033] 數據統計采用R進行兩樣本均值單尾t檢驗，數值均以均值土標準誤表示。
[0034] 2.結果與討論
[0035] 2. 1 34種二肽的ACE抑制率
[0036] 本研究用可見光分光光度法連續監測34種二肽在一小時內對ACE的抑制活性，表 1中的34種二肽均為人工合成，純度在95%以上（表1)。測試結果發現N端為半胱氨酸 (Cys，C)的兩種二肽半胱氨酸-異亮氨酸（Cys-Ile，CI)和半胱氨酸-賴氨