專利名稱：作為ace和nep抑制劑的吡喃衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及新的如下所述的血管肽酶抑制劑，這些抑制劑可以用作血管緊張素轉化酶(ACE)和中性內肽酶(NEP，EC 3.4.24.11)兩者的雙重抑制劑。本發明的化合物特別適合用于治療和/或預防對ACE和NEP抑制作用產生響應的病癥。可以證明本發明的化合物還可抑制內皮肽轉化酶(ECE)，因此可以有效治療和/或預防對ECE抑制作用產生響應的病癥。
本發明涉及式I的雙重ACE和NEP抑制性化合物和這些化合物的藥學上可接受的鹽 其中R表示氫、低級烷基、碳環或雜環芳基-低級烷基或環烷基-低級烷基；R1表示氫、環烷基、碳環或雜環芳基或聯芳基；alk表示低級亞烷基；R3表示氫或酰基；R4表示氧雜環烷基、(硫雜-、氧硫雜-或二氧硫雜)-環烷基、氮雜環烷基或氧雜環烷基-、(硫雜-、氧硫雜-或二氧硫雜)-環烷基-或氮雜環烷基-低級烷基；R5表示氫或低級烷基；R6表示低級烷基、碳環或雜環芳基、(碳環或雜環芳基)-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、聯芳基或聯芳基-低級烷基；R7表示低級烷基、(碳環或雜環芳基)-低級烷基、環烷基-低級烷基或聯芳基-低級烷基；或
R6和R7與它們所連的碳原子一起表示可以被低級烷基或芳基-低級烷基取代或可以與飽和或不飽和碳環5-至7-元環稠合的3-至10-元亞環烷基；或者表示5-或6-元(亞氧雜環烷基、亞硫雜環烷基或亞氮雜環烷基)，它們分別任選被低級烷基或芳基-低級烷基；或者表示2，2-亞降冰片基；COOR2表示羧基或衍生為藥學上可接受的酯形式的羧基；衍生自其中R3是氫的所述化合物的二硫化物衍生物。
本發明還涉及含有所述化合物的藥物組合物、制備所述化合物的方法、中間體以及通過給需要此種治療的哺乳動物施用所述化合物治療哺乳動物中對ACE和NEP抑制作用并且任選地對ECE抑制作用有響應的疾病的方法。
本發明還包括具有游離羧基、巰基或羥基的本發明的化合物的任何前藥衍生物，該前藥衍生物通過溶劑解作用或在生理條件下可轉化為游離羧基、巰基和/或羥基化合物。前藥衍生物是例如游離羧酸的酯和硫醇、醇或酚的S-酰基和O-酰基衍生物，其中酰基具有在此定義的含義。
藥學上可接受的酯優選為前藥酯衍生物，這些衍生物可以通過溶劑解或在生理條件下轉化為式1的游離羧酸。
藥學上可接受的前藥酯優選為，例如，低級烷基酯、芳基-低級烷基酯、α-(低級烷酰氧基)-低級烷基酯如新戊酰氧基甲酯，和α-(低級烷氧基羰基、嗎啉基羰基、哌啶基羰基、吡咯烷基羰基或二-低級烷基氨基羰基)-低級烷基酯。
對于本發明的酸性化合物而言，例如那些其中COOR2表示羧基的化合物，藥學上可接受的鹽是衍生自藥學上可接受的堿的鹽。這些堿是例如堿金屬鹽(例如，鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如，鎂鹽和鈣鹽)、胺鹽(例如，氨丁三醇鹽)。
根據取代基的性質不同，式I的化合物可能具有兩個或多個不對稱碳原子。因此，本發明也包括由這些不對稱碳原子產生的非對映異構體和光學對映體。優選的構型如式Ia所示
其中攜帶取代基-alk-R1和R4的不對稱碳通常具有S-構型。
優選如下定義的式I和Ia的化合物和其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示氫、C5-或C6-環烷基、碳環或雜環芳基或聯芳基；alk表示低級亞烷基；R3表示氫或酰基；R4表示氧雜環烷基或氧雜環烷基-低級烷基；R6和R7表示低級烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示5-或6-元亞環烷基；COOR2表示羧基或衍生為藥學上可接受的酯的形式的羧基；衍生自其中R3是氫的所述化合物的二硫化物衍生物。
進一步優選如下定義的式I和Ia的化合物和其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示碳環或雜環芳基或聯芳基；R3表示氫或任選取代的低級烷酰基；R4表示四氫吡喃基或4-四氫吡喃基甲基；R6和R7表示C1-C4-烷基并且相同；alk表示亞甲基或亞乙基；COOR2表示羧基、低級烷氧基羰基、(二-低級烷基氨基羰基)-低級烷氧基羰基或(嗎啉基羰基、哌啶基羰基或吡咯烷基羰基)-低級烷氧基羰基。
特別優選如下定義的式I或Ia的化合物和其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示碳環芳基或雜環芳基，其中碳環芳基表示苯基或被1或2個羥基、低級烷酰氧基、低級烷基、低級烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基或鹵素取代的苯基，且其中雜環芳基表示吲哚基；R3表示氫或低級烷酰基；R4表示4-四氫吡喃基；R6和R7表示甲基；alk表示亞甲基或亞乙基；且COOR2表示羧基或低級烷氧基羰基。
還優選如下定義的式I或Ia的化合物和其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示苯基、氟苯基、甲氧基苯基、2-噻吩基-5-吡啶基、4-聯苯基或3-吲哚基；R3表示氫或低級烷酰基；R4表示4-四氫吡喃基；R6和R7表示甲基；alk表示亞甲基或亞乙基；且COOR2表示羧基或低級烷氧基羰基。
特別優選如下定義的式Ia的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示苯基，其未被取代或被苯基或C1-C4烷氧基取代；或R1表示被噻吩基取代的吲哚基或吡啶基；R2表示氫或C1-C4烷基；R3表示氫或C2-C5烷酰基；R4表示四氫吡喃基或4-四氫吡喃基甲基；R6和R7表示C1-C4烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示亞環戊基；alk表示C1至C2亞烷基。
在本文中，單獨或結合使用的定義，除非另外說明，在本發明范圍內具有下述含義。
芳基表示碳環或雜環芳基，包括單環的或雙環的。
單環碳環芳基表示任選取代的苯基，優選苯基或被1-3個取代基取代的苯基，所述取代基最好是低級烷基、羥基、低級烷氧基、酰氧基、鹵素、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、低級烷酰基氨基、低級烷基-(硫代、亞磺酰基或磺酰基)、低級烷氧基羰基、一-或二-低級烷基氨基甲酰基或一-或二-低級烷基氨基；或被亞烷二氧基取代的苯基。
雙環碳環芳基表示1-或2-萘基，或優選被低級烷基、低級烷氧基或鹵素的1-或2-萘基。
單環雜環芳基表示優選噻唑基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、噁唑基、異噁唑基、吡咯基、咪唑基或噁二唑基，它們分別任選地被例如低級烷基等取代。
任選取代的呋喃基表示2-或3-呋喃基，或優選被低級烷基取代的2-或3-呋喃基。
任選取代的吡啶基表示2-、3-或4-吡啶基，或優選被低級烷基、鹵素或氰基取代的2-、3-或4-吡啶基。
任選取代的噻吩基表示2-或3-噻吩基，優選被低級烷基取代的2-或3-噻吩基。
二環雜環芳基優選表示任選被羥基、低級烷基、低級烷氧基或鹵素取代的吲哚基或苯并噻唑基，優選3-吲哚基或2-苯并噻唑基。
芳基-低級烷基中的芳基優選為苯基或被1或2個低級烷基、低級烷氧基、羥基、低級烷酰氧基、鹵素、三氟甲基、氰基、低級烷酰基氨基或低級烷氧基羰基取代的苯基；此外還包括任選取代的萘基。
芳基-低級烷基最好是芐基或1-或2-苯乙基，任選在苯基上被1或2個的低級烷基、低級烷氧基、羥基、低級烷酰氧基、鹵素或三氟甲基取代。
在有機基團或化合物中使用的術語“低級”分別定義為具有至多且包括7個、優選至多且包括4個并最優選1或2個碳原子。它們可以是直鏈或支鏈。
任選取代的低級烷基是指低級烷基或被例如鹵素、羥基、低級烷氧基、氨基、(一-或二-低級烷基)氨基、酰基氨基、1-低級烷基-哌嗪基、嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基等取代的低級烷基。
低級亞烷基是指優選具有1-4個碳原子的直鏈或支鏈二價碳鏈，它可以被例如低級烷氧基取代，如-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2-等。
低級烷基優選含有1-4碳原子，其可以是直鏈或支鏈，并且表示例如乙基、丙基、丁基，優選甲基。
低級烷氧基優選含有1-4碳原子，其可以是直鏈或支鏈，且表示例如甲氧基、丙氧基、異丙氧基，優選乙氧基。
環烷基表示飽和環狀烴基，它優選含有5-至7-個環碳原子，優選環戊基或環己基。
氧雜環烷基優選表示5-至7-元氧雜環烷基，例如，四氫吡喃基，例如4-四氫吡喃基。
硫雜環烷基優選表示5-至7-元硫雜環烷基，例如，四氫噻喃基，例如4-四氫噻喃基。
氮雜環烷基優選表示5-至7-元氮雜環烷基，例如，吡咯烷基或哌啶基，其中的氮原子可以被低級烷基或芳基-低級烷基取代，例如任選被低級烷基N-取代的4-哌啶基或3-吡咯烷基。
術語環烷基-低級烷基優選表示(環戊基或環己基)-甲基，1-或2-(環戊基或環己基)乙基，1-、2-或3-(環戊基或環己基)丙基或1-、2-、3-或4-(環戊基或環己基)-丁基。同樣地，(氧雜環烷基(oxacyclyl)、硫雜環烷基或氮雜環烷基)-低級烷基。
低級烷氧基羰基優選在烷氧基部分中含有1-4碳原子，表示例如甲氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基，優選乙氧基羰基。
亞環烷基是3-至10-元、優選5-或6-元的，并且代表環烷烴連接基團，其中兩個連接的基團與該環烷烴環的同一碳相連，例如，亞環戊基或亞環己基。
5-或6-元亞氧雜環烷基表示四氫呋喃或四氫吡喃連接基，即，亞四氫呋喃基或亞四氫吡喃基，其中兩個連接的基團與各環的同一碳原子相連，例如，在其3-或4-位。
5-或6-元亞硫雜環烷基表示四氫噻吩或四氫噻喃連接基，其中兩個連接的基團與各環的同一碳原子相連，例如，在其3-或4-位。
5-或6-元亞氮雜環烷基表示吡咯烷或哌啶連接基，其中兩個連接的基團與各環的同一碳原子相連，例如，在其3-或4-位，并且該氮可以被低級烷基例如甲基取代，或被芳基-低級烷基例如芐基取代。
與環稠合的亞環烷基表示，例如，苯并-稠合的亞環烷基，例如，1，1-或2，2-亞四氫化萘基或1，1-或2，2-亞二氫化茚基。
鹵素(鹵代)優選表示氟或氯，但也可以是溴或碘。
酰基是衍生自羧酸的基團，優選表示任選取代的低級烷酰基、碳環芳基-低級烷酰基、芳酰基、低級烷氧基羰基或芳基-低級烷氧基羰基，優選任選取代的低級烷酰基或芳酰基低級烷酰基優選是乙酰基、丙酰基、丁酰基或新戊酰基。
任選取代的低級烷酰基表示例如低級烷酰基或被例如低級烷氧基羰基、低級烷酰氧基、低級烷酰基硫代、低級烷氧基、低級烷基硫代、羥基、二-低級烷基氨基、低級烷酰基氨基、嗎啉基、哌啶基、吡咯烷基或1-低級烷基哌嗪基取代的低級烷酰基。
芳酰基是碳環或雜環芳酰基，優選單環碳環或單環雜環芳酰基。
單環碳環芳酰基優選為苯甲酰基或被低級烷基、低級烷氧基、鹵素或三氟甲基取代的苯甲酰基。
單環雜環芳酰基優選為吡啶基羰基或噻吩基羰基。
酰氧基優選任選取代的低級烷酰氧基、低級烷氧基羰氧基、單環碳環芳酰氧基或單環雜環芳酰氧基，任選被例如上述的取代基取代。
芳基-低級烷氧基羰基優選單環碳環-低級芳氧基羰基，優選芐氧基羰基。
聯芳基表示基團-Ar-Ar’，其中Ar和Ar’獨立地表示單環碳環或雜環芳基，就是(i)單環碳環芳基-單環碳環芳基(任選取代的聯苯基)，(ii)單環碳環芳基-單環雜環芳基，(iii)單環雜環芳基-單環碳環芳基或(iv)單環雜環芳基-單環雜環芳基。聯芳基中的基團Ar和/或Ar’中的單環雜環芳基優選是任選取代的吡啶基(例如，3-或4-吡啶基)、噻吩基(例如，2-或3-噻吩基)、噁唑基(例如，2-、4-或5-噁唑基)、噻唑基(例如，2-、4-或5-噻唑基)、噁二唑基(例如，3-[1，2，4]噁二唑基)、呋喃基(例如，2-或3-呋喃基)、異噁唑基(例如，4-異噁唑基)或嘧啶基(例如，5-嘧啶基)，特別是吡啶基和噻吩基。實例為4-聯苯基，任選在一個或兩個苯環上被例如低級烷基、低級烷氧基、鹵素或三氟甲基取代；以及任選取代的5-苯基-(2-或3-噻吩基)、5-苯基-(2-或3-呋喃基)、2-苯基-(4-或5-噁唑基)、2-苯基-(4-或5-噻唑基)、5-苯基-(3-[1，2，4]-噁二唑基)或6-苯基-3-吡啶基；以及任選取代的4-(5-異噁唑基)-苯基、4-(2-、3-或4-吡啶基)-苯基、4-(2-或3-吡咯基)-苯基、4-(2-或3-呋喃基)-苯基、4-(2-或3-噻吩基)-苯基或4-(5-嘧啶基)-苯基；以及任選取代的6-(2-或3-噻吩基)-3-吡啶基、6-(3-吡啶基)-3-吡啶基、6-(2-或3-呋喃基)-3-吡啶基或6-(2-噻唑基)-3-吡啶基。苯基上的任選取代基如在聯苯基中所述，雜環芳基上的任選取代基優選是低級烷基，例如甲基。
本發明的新化合物是抑制血管緊張素I向增壓物質血管緊張素II轉化的ACE抑制劑，因此可以降低哺乳動物血壓。此外，還證實本發明的化合物具有NEP的抑制作用，并由此加強心鈉素(ANF)的心血管作用(例如，利尿和促尿鈉排泄)。這種聯合效果有益于哺乳動物中心血管疾病的治療，特別是高血壓、心臟病(例如充血性心衰)和腎衰(包括慢性和急性腎衰)。
上述性質可在體外和體內試驗中加以證實，最好利用哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴)或離體器官、組織及其標本。所述的化合物在體外可以以溶液的形式使用，例如，優選水溶液，在體內可以經腸內或腸道外途經使用，優選經口服或靜脈內(i.v.)，例如，以混懸液或水溶液的形式使用。體外的劑量可以在約10-6摩爾至10-9摩爾濃度的范圍內。根據選擇的給藥途徑的不同，體內劑量可以在約0.01至50mg/kg的范圍內，優選約0.1至25mg/kg。
體外試驗最適合采用本發明的游離羧酸。可以將試驗化合物溶解在二甲基亞砜、乙醇或0.25M碳酸氫鈉溶液中，并且該溶液可以用緩沖液稀釋至所需濃度。
本發明化合物對ACE的體外抑制作用可以通過類似于Biochem.Pharmacol.，Vol.20，p.1637(1971)給出的方法來證實。ACE試驗的緩沖液是300mM NaCl、100mM KH2PO4(pH8.3)。通過將100μL的馬尿酰基-組氨酰基-亮氨酸(2mg/mL)加入到含有酶和藥物的體積為150μL的管內來引發該反應，隨后將該管在37℃下孵育30分鐘。通過向該管內加入0.75mL 0.6N NaOH、100μL新制備的鄰苯二醛溶液(2mg/mL在甲醇中)終止該反應，將內容物混合且在室溫下放置。10分鐘后，加入100μL的6NHCl。將管離心，在360nm下讀取上清液的光密度。將結果相對于藥物濃度繪圖來測定IC50，即產生半數不含藥物的對照樣本的活性時的藥物濃度。
典型地，本發明的化合物對于ACE抑制作用的IC50在約0.1-50nM的范圍內。
例如，本發明的實施例2g的化合物在ACE體外試驗中證實IC50為約5.9nM。
經口服或i.v.給藥，通過在正常血壓大鼠中測量對血管緊張素I誘發的增壓反應的抑制作用來證明體內對ACE的抑制作用。
靜脈內給藥的化合物的體內試驗使用雄性、正常血壓的大鼠，將其用metofan鈉麻醉。在靜脈內給予血管緊張素I和靜脈內或口服給予本發明的化合物時，分別在股骨動脈和股骨靜脈插管用于直接測量血壓。基礎血壓穩定后，在15分鐘間隔下，通過3次靜脈內給予300ng/kg血管緊張素I獲得增壓反應。這種血壓反應通常可在15、30、60和90分鐘時再次獲得，并且在靜脈內或口服給予被測化合物后每小時可以獲得，直至6小時，并與初始反應比較。觀察到的增壓反應的減弱是ACE抑制作用的指征。
例如，本發明的實施例1f的化合物在10mg/kg的口服劑量下，可抑制98％的血管緊張素I誘發的增壓反應達4小時。
NEP(EC 3.4.24.11)的體外抑制作用可以按照下列方法進行測定
利用Orlowski和Wilk(1981)的改進方法，通過底物戊二酰基-Ala-Ala-Phe-2-萘基酰胺(GAAP)的水解，測定NEP 3.4.24.11活性。溫育的混合物(總體積125μL)含有4.2μL的蛋白(通過Maeda等(1983)的方法制備的大鼠腎皮質膜，50mM tris緩沖液，pH7.4，在25℃下)、500μM底物(終濃度)和亮氨酸氨基肽酶M(2.5μg)。將該混合物在25℃下溫育10分鐘，加入100μL的固醬紫(fast garnet)(250μg固醬紫/mL的10％吐溫20在1M醋酸鈉中，pH4.2)。利用分光光度法，在540nm下測定酶活性。一個單位的NEP 24.11活性定義為25℃、pH7.4下每分鐘釋放的1nmol的2-萘基胺。測定IC50值，即抑制50％2-萘基胺的釋放所需的試驗化合物濃度。
典型地，本發明的化合物對NEP抑制作用的IC50在約0.1-50nM的范圍內。
例如，本發明的實施例2g的化合物證實在GAAP的體外試驗中IC50為約4.8nM。
可以測定抗高血壓活性，例如，在自發性高血壓大鼠(SHR)和醋酸脫氧皮質酮(DOCA)-鹽高血壓大鼠中，例如，按照Trapani等在J.Cardiovasc.Pharmacol.，Vol.14，pp.419-424(1989)中所述的方法。
例如，本發明的實施例1(f)的化合物在11.6mg/kg的口服劑量下，使清醒SHR中的平均動脈血壓降低了約16mm Hg。
可以根據標準利尿劑篩選方法測定利尿(saluretic)活性，例如，如同“New Anti-hypertensive Drugs”，Spectrum Publications，pp.307-321(1976)中所述，或通過測定心鈉素在大鼠中誘發的尿鈉排泄和利尿作用的強化。
ECE的體外抑制作用可以例如按照下列方法測定ECE是由豬初級主動脈內皮細胞、通過DE52陰離子交換柱色譜法部分純化且其活性通過RIA按照Anal. Biochem.，Vol.212，pp.434-436(1993)所述定量測定。另外，可以用重組形式的ECE代替天然酶，如同例如Cell，Vol.78，pp.473-485(1994)中所述。人ECE-1據稱有數個研究小組介紹(參見Schmidt等，FEBS Letters，Vol.356，pp.238-243(1994)；Kaw等，4thInt.Conf.on Endothelin；April 23-25，London，UK(1995)C6；Valdenaire等，J.Biol.Chem.，Vol.270，pp.29794-29798(1995)；Shimada等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，Vol.207，pp.807-812(1995))。可以按照Biochem.Mol.Biol.Int.，Vol.31，No.5，pp.861-867(1993)所述的方法，通過RIA測量由巨ET-1形成的ET-1來測定ECE抑制作用。
為了評估抑制劑對ECE-1活性的作用，將10μg的蛋白質與預期濃度的化合物在室溫下于50mM TES(pH7.0)和0.005％Triton X-100中以10μL的體積預溫育20分鐘。隨后加入人體巨ET-1(5μL)達到0.2μM的終濃度，并且將該反應混合物進一步在37℃下溫育2小時。通過加入500μL的RIA緩沖液終止該反應，該緩沖液在磷酸鹽緩沖鹽水中含有0.1％TritonX-100、0.2％牛血清白蛋白和0.02％NaN3。
將由上述酶試驗獲得的稀釋樣本(200μL)在4℃下與各25μL的[125I]ET-1(10000cpm/管)和1∶20000-倍稀釋的兔抗體溫育過夜，所述的抗體特異性識別ET-1的羧基末端的色氨酸。此后向各管內加入與磁珠偶聯的山羊抗兔抗體(70μg)，并且在室溫下將該反應混合物進一步溫育30分鐘。利用磁架使上述珠沉淀。棄去上清液，并且在γ數器中對沉淀中的放射性計數。分別是在不存在非放射性ET-1和抗-ET抗體的條件下測定總的和非特異性的結合。在這些條件下，ET-1和巨ET-1對該抗體表現出[125I]ET-1結合作用且IC50值分別是21±2和260000±66000fmol(平均值±SEM，n＝3-5)。
為了測定抑制劑的IC50值，測定各抑制劑作用的濃度-反應曲線。用ALLFIT程序的IBM-兼容版來將數據擬合為單側模型。
也可以通過體外測量在麻醉或清醒大鼠中巨ET-1-誘發的增壓反應的抑制作用來測定ECE抑制作用，如下所述。所述抑制劑對于由巨ET-1刺激導致的增壓反應的抑制增壓作用是在Sprague-Dawley大鼠中按照Biochem.Mol.Biol.Int.，Vol.31，No.5，pp.861-867(1993)所述方法測定。結果表示為與溶媒相比對巨ET-1-誘發的增壓反應的抑制百分率。
雄性Sprague-Dawley大鼠用仲丁硫巴比妥(Inactin)(100mg/kg i.p.)麻醉并在股骨動脈和靜脈中安裝插管來分別記錄平均動脈壓(MAP)和給予的化合物。實施氣管造口術并將套管插入氣管以確保呼吸道開放。動物的體溫通過加熱毯裝置保持在37±1℃。手術后，使MAP穩定，之后用chlorisondamine(3mg/kg i.v.)阻斷自主性神經傳遞。此后用試驗化合物在10mg/kg i.v下或用溶媒處理大鼠且隨后在15和90分鐘后，用巨ET-1(1nmol/kg i.v.)刺激。通常，數據報告為用試驗化合物或溶媒處理的動物中由巨ET-1產生的MAP的最大增加。
ECE抑制作用也可以體內通過測量清醒SHR中巨ET-1誘發的增壓反應的抑制作用來測定，例如，如Biochem.Biophys.Res.Commun.，Vol.204，pp.407-412(1994)所述的方法。
按照Toxicology Letters，Vols.112/113，PP.453-459(2000)所述的方法，用鼠科膝后彎淋巴結可以測定本發明化合物的非預期免疫刺激效能的程度或不足。
由于本發明的化合物的抑制性質，所以，它們可以有效治療和/或預防心血管疾病，例如高血壓、腎衰(包括水腫和鹽潴留，例如慢性或急性腎衰)、肺水腫、心衰(包括充血性心衰)、動脈粥樣硬化、疼痛、抑郁、某些精神病、認知障礙、絞痛、經前綜合征、梅尼爾氏病、醛甾酮過多癥、高鈣尿癥、腹水、青光眼、哮喘、胃腸道病(例如腹瀉、刺激性腸綜合征和胃酸過多)、腦局部缺血(中風)、蛛網膜下出血、創傷性腦損傷、中樞血管痙攣、動脈增生、再狹窄、雷諾氏病、心肌梗塞、肥胖、前列腺肥大、偏頭痛、糖尿病(例如糖尿病性腎病)、驚厥前期、移植排斥反應(例如在主動脈或實體器官移植)以及勃起障礙。
本發明進一步涉及式I的化合物的中間體，特別是如下所述的式VI的化合物，其中可變基團alk、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7在各種情況中分別具有與式I或Ia的化合物的相應可變基團給出的含義。
可以通過例如下面的方法制備本發明的化合物通過縮合式II的化合物
其中符號alk、R、R1、R6和R7具有上述含義，并且COOR2表示酯化的羧基，與式III的羧酸 或其反應性官能衍生物，其中R4和R5具有上述含義；R3’表示氫或不穩定的S-保護基，例如酰基、叔丁基或任選取代的芐基；或b)通過縮合式IV的化合物 或其反應性官能衍生物，其中符號R3’、R4-R5和R6-R7具有上述含義，與式V的氨基酸酯 其中alk、R和R1具有上述含義，并且COOR2表示酯化的羧基；或c)通過在堿性條件下縮合式VI的化合物 其中符號R、R1、COOR2、R4-R7和alk具有上述含義，并且Y表示反應性酯化的羥基(例如，氯或溴)作為離去基團，與式的化合物R3’SH (VII)或其鹽，其中R3’表示不穩定的S-保護基，例如酰基、叔丁基或任選取代的芐基；和將所得產物轉化為其中R3是氫的式I的化合物；并且在上述方法中，如果臨時地保護任何干擾性反應性基團，那么則先脫除該保護基，隨后再分離得到的本發明化合物；和，如果需要，將任何得到的本發明化合物轉化為本發明的另一種化合物；和/或，如果需要，將游離羧酸官能團轉化為藥學上可接受的酯衍生物，或將得到的酯轉化為游離酸或另一種酯衍生物；和/或，如果需要，將得到的游離化合物轉化為鹽或將所得鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或，如果需要，分離異構體或外消旋體的混合物，和/或，如果需要，將外消旋體拆分為光學異構體。
在以所述方式得到本發明的化合物的起始化合物和中間體中，存在的官能團，例如硫羥基、羧基、氨基和羥基，可以利用制備有機化學中常規的一般保護基進行任選地保護。保護硫羥基、羧基、氨基和羥基的基團是那些可以在溫和條件下轉化為游離硫羥基、羧基、氨基和羥基同時不發生其他不期望的副反應的基團。
引入保護基的目的是保護官能團在進行所需化學轉化的條件下不與反應組分發生不希望的反應。對于特定反應來說，保護基的需要和選擇是所屬領域技術人員公知的且取決于被保護的官能團(硫羥基、羧基、氨基等)的性質、該取代基是其組成部分的分子的結構和穩定性以及反應條件。
符合這些條件的已知保護基及其引入和脫除方法公開在，例如，J.F.W.McOmie，“Protective Groups in Organic Chemistry”，Plenum Press，London，N.Y.(1973)；T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，Wiley，N.Y.3rdEd.(1999)；以及“The Peptides”，Vol.I，Schroeder和Luebke，Academic Press，London，N.Y.(1965)中。
按照方法(a)制備本發明的化合物的方法包括縮合式II的胺與式III酸或其官能反應性衍生物，該方法可以通過肽合成中公知的方法完成。
按照方法(a)，式II的氨基酯與式III的游離羧酸的縮合適宜在單用或合用的縮合劑例如二環己基碳二亞胺、N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺、羥基苯并三唑、1-羥基-7-氮雜苯并三唑、氯二甲氧基三嗪、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸鏻鹽(BOP試劑)或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)和三乙胺或N-甲基嗎啉的存在下、在惰性極性溶劑(例如二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中、優選在室溫下進行。
式II的氨基酯與式III的酸的酰鹵(最好為酰氯)或混和酐形式的反應性官能衍生物的縮合，是在惰性溶劑(例如甲苯或二氯甲烷)中、優選在堿[例如無機堿(如碳酸鉀)或有機堿(如三乙胺、N-甲基嗎啉或吡啶)]的存在下、優選在室溫下進行。
式III的羧酸的反應性官能衍生物優選為酰鹵(例如酰氯)和混合酐(例如新戊酰基或異丁氧基羰基酐)或活化的酯(例如苯并三唑、7-氮雜苯并三唑或六氟苯基酯)。
式II的起始原料可以按照本文所述方法制備且在實施例中舉例說明。
式II的起始原料的制備包括式VIII的酯的酰化 其中alk、R和R1具有上述含義，COOR2表示酯化的羧基(例如，其中R2是低級烷基或芐基)與式IX的適當N-保護的氨基酸(或反應性官能衍生物) 其中R6和R7具有上述含義，R8是不穩定的氨基保護基，例如，叔丁氧基羰基，得到式II的相應N-保護的化合物。
式VIII的化合物與式IX的化合物的縮合是通過肽合成中的已知方法進行，例如，如同上面對于式II的化合物與式III的化合物的縮合的描述。N-保護基按照所屬領域的已知方法進行脫除，例如，叔丁氧基羰基用無水酸脫除，例如三氟乙酸或HCl。
式VIII和IX的化合物的起始氨基酯和酸分別是所屬領域已知的，或者如果是新的，可以按照所屬領域的公知方法制備，例如本文中例舉的方法。式VIII的氨基酸酯優選為S-對映體。
式III的起始物質是已知的，或如果是新的，可以按照常規方法制備。起始原料是由例如相應的外消旋或旋光α-氨基酸，通過其向α-溴衍生物的轉化、隨后通過用式VII的適當硫醇衍生物在堿性條件下將其置換同時反轉構型來制備，例如，按照1993年1月27日公開的歐洲專利申請524,553所述的方法。所得終產物的S-脫芐基化是通過還原性裂解來實現，例如，用乙醇中的Raney鎳。S-去酰化是通過，例如，用稀氫氧化鈉水溶液的堿催化水解來進行。式III的環狀起始原料可以通過用硫在強堿如二乙基氨化鋰的存在下處理環狀羧酸(例如，環戊烷甲酸)來制備。
按照方法(b)，制備本發明的化合物的方法包括式IV的酸與式V的氨基酸酯的縮合，可以類似于方法(a)的方式進行。同樣地，通過式III的酸與相應于式IX的偕-二取代的氨基酸(其中R8現在是氫)的酯在類似于上述那些條件下的縮合，隨后脫除羧基保護基來制成式IV的起始原料。
按照方法(c)，制備本發明的化合物的方法包括式VI的化合物中的離去基團Y被鹽形式的硫醇衍生物R3’-SH置換的反應，可以按照所屬領域的已知方法進行。
由Y表示的反應性酯化的羥基是用強無機或有機酸酯化的羥基。相應的Y特別是鹵素，例如，氯、溴或碘，也可以是磺酰氧基，例如低級烷基-或芳基磺酰氧基，例如(甲烷-、乙烷-、苯-或甲苯-)磺酰氧基和三氟甲磺酰氧基。
該置換反應是在惰性溶劑(例如二甲基甲酰胺或二氯甲烷)中、在堿(例如碳酸鉀、三乙胺、二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉等)的存在下、在室溫或高溫下進行。利用R3’SH的鹽(例如，硫代醋酸鉀)，該反應在堿的存在下、在惰性溶劑(例如四氫呋喃或二甲基甲酰胺)中進行。
同樣地，式VI的起始原料可以通過式II的二肽衍生物與下式的酸 其中R4、R5和Y具有上述含義，在方法(a)所述的條件下反應來制成。
其中Y是鹵素的式X的化合物，例如α-溴代羧酸類是已知的，并且可以按照例如1999年11月4日公開的國際申請WO 99/55726所述的方法制備。
本發明的某些化合物和中間體可以按照所屬領域的已知通用反應相互轉化。
游離硫醇可以通過與羧酸的反應性衍生物(相當于在式I中R3是酰基)，例如酸酐或所述的氯化物，反應轉化為S-酰基衍生物，優選在堿的存在下，例如惰性溶劑(例如乙腈或二氯甲烷)中的三乙胺。
游離醇和酚可以轉化為相應的酰基衍生物，例如，通過與相應酰氯在堿例如三乙胺的存在下反應。
其中R3表示氫的游離硫醇可以氧化為相應的二硫化物，例如，通過空氣氧化反應或適宜溫和的氧化劑，例如碘的醇溶液。相反，二硫化物可以用例如還原劑(例如硼氫化鈉、鋅和乙酸、三丁膦)還原為相應的硫醇。
可以由羧酸通過與例如R2-OH相應的鹵化物在堿的存在下或與過量的醇在酸催化劑的存在下，按照所屬領域的已知方法縮合來制備羧酸酯。
羧酸酯和S-酰基衍生物可以被水解，例如，用含水堿，例如堿金屬碳酸鹽或氫氧化物水溶液。S-酰基和酯基可以選擇性地按照本文所述方法脫除。
優選地并且當可以時，本發明式Ia的優選異構體是由純對映異構體制成。
在得到立體異構體(例如，非對映異構體)的混合物的情況中，這些異構體是通過已知方法分離，例如分級結晶和色譜法(例如，薄層、柱、快速色譜)。外消旋的游離酸可以通過分級結晶拆分為光學異構體d-或l-(α-甲基芐基胺、辛可尼丁、辛可寧、喹寧、奎尼丁、dehydroabiethylamine、士的寧或馬錢子堿番木鱉堿)鹽等。外消旋產物，如果不是非對映異構體，首先可以用旋光試劑(例如旋光醇)轉化為非對映異構體，形成酯，隨后它可以按照上述方法分離，并且，例如，可以水解成各對映體。外消旋產物也可以通過手性色譜法拆分，例如，利用手性吸附劑的高壓液相色譜；還可以通過酶拆分酯，例如，用堿性蛋白酶拆分。
上述反應是按照標準方法，在稀釋劑存在或不存在下進行，稀釋劑優選為例如對反應物呈惰性的稀釋劑且分別是反應物、催化劑、堿性或酸性縮合劑或其他試劑的溶劑；和/或對反應物呈惰性且分別是反應物、催化劑、堿性或酸性縮合或所述其他試劑的溶劑；和/或在惰性氣氛、在低溫、室溫或高溫下(優選接近所用溶劑的沸點)、在大氣壓或高壓下進行。
本發明還包括所述方法的任何變通方案，其中在所述方法的任何階段獲得的中間體產物均可以用作起始原料且完成其余步驟，或者在其任何階段中止該過程，或者其中起始原料是在所述反應條件下形成的，或其中反應組分是以其鹽或光學純異構體的形式使用。在所述反應中，主要采用那些能夠形成那些上面優選的化合物的起始原料。
本發明還涉及含有單用或與一種或多種其他藥學活性物質合用的本發明化合物及其藥學可接受、無毒酸加成鹽的藥物組合物。所述其他藥學活性物質可以是抗高血壓藥、抗動脈粥樣硬化藥、心臟病藥物、利尿藥、降膽固醇藥物等。當與其他治療劑合用時，它們可以分開或以固定的聯合形式給藥。
可以聯合使用的治療劑的實例是血管緊張素II受體拮抗劑，例如纈沙坦、氯沙坦、坎地沙坦、依普羅沙坦、伊貝沙坦、奧美沙坦、沙普利沙坦(saprisartan)、他索沙坦和替米沙坦；β-阻滯劑，例如比索洛爾、普萘洛爾、阿體洛爾、索他洛爾和美托洛爾；腎素抑制劑，例如阿利吉侖、detikiren、特拉吉侖和占吉侖；鈣通道阻斷劑，例如氨氯地平、維拉帕米、地爾硫卓、芐普地爾、非洛地平、伊拉地平、拉西地平、尼卡地平、硝苯地平、尼古地平、尼魯地平、ryosidine、尼莫地平和尼索地平；醛固酮合酶抑制劑/醛固酮拮抗劑，例如依普利酮、(+)-法卓唑(WO 01/76574)、螺內酯、阿那曲唑、依西美坦和坎利酮；利尿劑，例如布美他尼、依他尼酸、速尿、托拉塞米、氫氯噻嗪、吲達帕胺、metazolone、阿米洛利、氫氟噻嗪、methylchlothiazide、美扎拉宗、雙氯非那胺、氨苯喋啶、chlorothialidone和氯噻嗪；后葉加壓素受體拮抗劑，例如OPC 21268、SR 49059、SR 121463A、VPA 985、WAY140288、OPC 31260和YM 087；強心藥，例如依諾西蒙和左西孟旦；內皮素拮抗劑和ECE抑制劑，例如阿曲生坦、波生坦、達盧生坦、西他生坦、替唑生坦、BMS 193884、J 104132、S 0139，TBC 3711、YM 598和公開在WO 99/55726中的化合物；抗動脈粥樣硬化藥，特別是降膽固醇藥，例如膽酸螯合劑(例如，考來烯胺和考來替泊)；膽固醇吸收抑制劑，例如依澤替米貝；貝特類，例如非諾貝特和吉非貝齊；抑制素HMG CoA還原酶抑制劑，例如阿伐他汀、西立伐他汀、compactin、達伐他汀、dihydrocompactin、fluindostatin、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀(、普伐他汀、瑞伐他汀、羅素他汀、velostatin、辛找他汀和匹伐他汀；煙酸衍生物；擬甲狀腺劑，例如公開在美國專利5,569,674和WO 00/58279中的那些；和糖尿病治療劑，例如瑞格列奈、那格列奈、二甲雙胍、羅格列酮、匹格列酮、達格列酮、恩格列酮、環格列酮、AD 5075、AY 31637、BM 13.1246、DN 108、DRF 2189、KRP 297、MCC 555、T 174、YM 268、氨磺丁脲、氯磺丙脲、格列本脲、格列波脲、glibuzole、格列齊特、格列喹酮、格列哌特、格列噻唑、glycopyramide、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲、格列環脲、1-丁基-3-meanylurea、優降糖、格列吡嗪、格列美脲、異亮氨酸-thiazolidide、DPP728、LAF 237、KAF 1229、NH 622、格列美脲、米格列奈、GLP-1(7-36)、GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)NH2、GLN9-GLP-1(7-37)、D-GLN9-GLP-1(7-37)、乙酰基LYS9-GLP-1((7-37)、LYS18-GLP-1((7-37)、GLP-1(7-37)OH、GLY8-GLP-1(7-37)、VAL8-GLP-1(7-37)、THR8-GLP-1(7-37)、Thr16-Lys18-GLP-1(7-37)、MET8-GLP-1(7-37)、4-咪唑丙酰基-GLP-1、exedin-4、糊精、普蘭林肽、CCK 8、米格列醇、伏格列波糖、阿卡糖、胰島素和公開在WO 99/20614中的化合物，特別是具有下列結構的DRF4158 另外，本發明涉及含有本發明的化合物及其藥學可接受、無毒酸加成鹽的藥物組合物，其單用或與一種或多種在本文前面公開的用于治療或預防病癥或疾病的其他藥學活性劑合用。
而且，本發明還涉及式I的化合物，單用或與一種或多種如上所述用于抑制ACE和NEP活性并且選擇性地抑制ECE活性的藥學活性劑合用。
本發明也涉及本發明的化合物或聯合形式在藥物組合物的制備中的用途和分別用于治療和/或預防上述病癥或疾病的藥物組合物。
而且，本發明還涉及一種抑制包括人在內的哺乳動物中血管緊張素轉化酶和中性內肽酶的方法，該方法包括給需要其的哺乳動物單獨或與一種或多種上述其他藥學活性劑聯合施用的有效量的本發明化合物。
本發明的藥物組合物是那些適合腸道內(例如口服或直腸)、透皮和非腸道給予包括人在內的哺乳動物的組合物，該組合物含有有效量的本發明的藥理學活性化合物或其藥學上可接受的鹽，單用或與一種或多種藥學可接受載體合用，以及與也有效治療或預防上述病癥或疾病的其他治療劑的聯合形式。
本發明的藥理學活性化合物適合于生產含有有效量的藥理學活性化合物并且還結合或混合有適合腸道內或腸道外使用的賦形劑或載體的藥物組合物。優選片劑或明膠膠囊，其中含有活性成分，以及a)稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑還有c)粘合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，還可含有d)崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰劑混合物；并且如果需要，還可含有吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。可注射組合物優選為等滲水溶液或混懸液，栓劑適宜由脂肪乳劑或混懸劑制備。該組合物可以滅菌和/或含有助劑，例如防腐劑、穩定劑、濕潤劑或乳化劑、溶解促進劑、調節滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，該組合物還可以含有其他具有治療價值的物質。所述的組合物是分別按照常規混合、制粒或包衣方法來制備，并且含有約0.1-75％、優選約1-50％的活性成分。
適合透皮使用的制劑包括有效量的本發明化合物和載體。適宜的載體包括藥理學上可接受的吸收性溶劑來協助穿過宿主的皮膚。就特征而言，透皮裝置呈繃帶的形式，其中含有襯、所述化合物儲庫、任選包括載體、任選包括控制化合物向宿主皮膚釋放速率的裝置，由此可以在較長時間內以控制和預定速率釋放所述化合物，并且還包括將上述裝置固定在皮膚上的裝置。
對于約50-70kg的哺乳動物來說，單位劑量可以含有約10-200mg的活性成分。活性化合物的劑量依賴于溫血動物(哺乳動物)的種類、體重、年齡和個體狀況以及和給藥的方式。
下列實施例用于舉例說明本發明，而不是用于限制本發明。溫度是以攝氏度給出。如果不另外指出，所有蒸發是在減壓下進行，優選在約15-100mmHg。旋光度(用度數表示)是在室溫下、于589nM(鈉的D線)或實施例中具體規定的波長下測定。化合物的結構通過標準分析法例如質譜、元素分析、NMR、IR光譜等證實。
前綴L、D或R和S用來表示不對稱中性的絕對構型。
通過編碼號、種類或商品名表示的活性劑的結構可以是源自標準綱要“默克索引”的當前版本或源自數據庫，例如國際專利(例如IMS WorldPublications)，所有這些文獻的相應內容在此引入作為參考。所屬技術領域的技術人員完全能夠確定所述的活性劑，并且基于這些參考文獻，還能夠制造并在標準體外和體內試驗模型中測試藥用適應癥和性質。
相應的活性成分或其藥學活性鹽也可以為溶劑化物的形式，例如水合物，或包括用于結晶的其他溶劑。實施例1(a)N-[1-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-L-高苯丙氨酸乙酯 將硫代乙酸鉀(1.66g，14.6mmol)和N-[1-[(R)-2-溴-2-(4-四氫吡喃基)乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-L-高苯丙氨酸乙酯(1.84g，3.52mmol)在50mL的四氫呋喃中的混合物在室溫下攪拌4小時。該混合物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用鹽水洗滌并且隨后用硫酸鎂干燥。過濾該混合物并真空濃縮至干。殘余的油在硅膠上用己烷∶乙酸乙酯(50∶50)層析得到標題化合物，m.p.107-111℃；[αD]-56.27°(c＝0.994，甲醇)。
起始原料制備如下將亞硝酸鈉(4.71g，68.3mmol)在35mL水中的溶液滴加到(D)-α-(4-四氫吡喃基)-甘氨酸(J.Am.Chem.Soc.，Vol.117，pp.9375-9376(1995)(7.05g，44.3mmol)和35mL水中的48％HBr(aq)(70mL)的冷凍(0℃)溶液中。加料完畢后，使該混合物升至室溫，室溫下攪拌3小時。該混合物用乙酸乙酯萃取；有機層依次用水、5％硫代硫酸鈉水溶液和鹽水洗滌，隨后用無水硫酸鎂。過濾該混合物和真空濃縮得到(D)-α-溴-α-(4-四氫吡喃基)-乙酸，其為固體。
其他中間體制備如下將氯化氫氣吹入(L)-高苯丙氨酸(5.13g，28.7mmol)在100mL乙醇中的溶液內5分鐘。室溫下攪拌該混合物16小時。將該混合物真空濃縮得到L-高苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽，其為白色固體。
(L)-高苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(6.87g，28.3mmol)、N-CBZ-環亮氨酸(7.69g，29.2mmol)、1-(3-二乙基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(5.44g，28.5mmol)、1-羥基苯并三唑(3.96g，29.3mmol)和三乙胺(2.90mL，28.7mmol)在150mL的二氯甲烷中的混合物在室溫下攪拌16小時。將該混合物真空濃縮，殘余物溶于乙酸乙酯，該溶液用水、1N HCl(aq)、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，并且隨后用硫酸鎂干燥。過濾該混合物和真空濃縮得到N-(1-CBZ-氨基環戊烷羰基)-(L)-高苯丙氨酸乙酯，其為白色固體；MSM+1＝453。
N-(1-CBZ-氨基環戊烷羰基)-(L)-高苯丙氨酸(4.85g，10.7mmol)在150mL乙醇中的溶液在10％披鈀炭(0.5g)的存在下、在45psi氫壓下、于Parr瓶內氫化3小時。經硅藻土墊過濾該混合物且真空濃縮得到N-(1-氨基環戊烷羰基)-(L)-高苯丙氨酸乙酯；MSM+1＝319。
將N-(1-氨基環戊烷羰基)-(L)-高苯丙氨酸乙酯(3.62g，11.4mmol)、(D)-α-溴-α-(4-四氫吡喃基)乙酸(2.37g，10.7mmol)、1-(3-二乙基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2.07g，0.8mmol)和1-羥基-7-氮雜苯并三唑(1.49g，11.0mmol)在二氯甲烷(100mL)中的混合物在室溫下攪拌16小時。將該混合物真空蒸發至干，殘余物溶于乙酸乙酯，該乙酸乙酯溶液依次用水、1NHCl(aq)、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，隨后用無水硫酸鎂干燥，并且真空蒸發至干。所得固體在硅膠上用己烷和乙酸乙酯(50∶50)層析得到N-[1-[(R)-2-溴-2-(4-四氫吡喃基)乙酰基氨基]環戊烷羰基]-(L)-高苯丙氨酸乙酯；MSM+1＝522。
同樣地制備(b)N-[1-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-色氨酸乙酯；m.p.67-77℃；[α]D-49.13°(c 1.079，DMSO)。
(c)N-[1-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-4-甲氧基苯丙氨酸乙酯，m.p.125-126℃。
(d)N-[1-[2-乙酰基硫代-3-(4-四氫吡喃基)-丙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-高苯丙氨酸乙酯；m.p.33-38℃。
(e)N-[2-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-高苯丙氨酸乙酯；m.p.83-85℃；[α]D-45.48°(c 1.0，甲醇)；用BOC-α-甲基丙氨酸代替CBZ-環亮氨酸。
(f)N-[2-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-4-甲氧基苯丙氨酸乙酯，m.p.39-42℃；[α]D-44.3°(c 1.05，甲醇)。
(g)N-[2-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-4-聯苯基丙氨酸乙酯；m.p.121-122℃。
(h)N-[2-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-[2-(2-噻吩基)-5-吡啶基]-丙氨酸正丁酯；m.p.55-60℃。
(i)N-[1-[2-乙酰基硫代-3-(4-四氫吡喃基)-丙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-高苯丙氨酸乙酯；m.p.33-38℃。
(j)N-[1-[2-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-色氨酸乙酯；m.p.55-63℃。
實施例2(a)N-[1-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-L-色氨酸 在氬氣氛下，將N-[1-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-L-色氨酸(0.54g，1.0mmol)在MeOH(5.0mL)中的溶液用1N NaOH(5.0mL)處理且在室溫下攪拌3小時。該溶液用1N HCl酸化且真空濃縮除去大部分的MeOH。含水殘余物被萃取到EtOAc(3×5.0mL)中且合并萃取液，用水(5.0mL)和鹽水溶液(5.0mL)洗滌。該溶液用Na2SO4干燥，過濾和真空濃縮。產物由叔丁基甲基醚-己烷結晶得到標題化合物；m.p.212-215℃；[α]D-6.58°(c 1.026，DMSO)。
同樣地制備(b)N-[1-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-高苯丙氨酸；m.p.193-195℃；[α]D-23.33°(c 1.05，甲醇)。
(c)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-高苯丙氨酸；m.p.194-195℃；[α]D-8.2°(c 0.3，甲醇)。
(d)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-[2-(2-噻吩基)-5-吡啶基]丙氨酸；m.p.192-193℃。
(e)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-聯苯基丙氨酸；m.p.199-200℃。
(f)N-[1-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-4-甲氧基苯丙氨酸；m.p.220-221℃。
(g)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-4-甲氧基苯丙氨酸；m.p.182-183℃。
(h)N-[1-[(S)-2-巰基-3-(4-四氫吡喃基)-丙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-高苯丙氨酸；m.p.145-147℃。
(i)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-色氨酸；m.p.195-201℃。
實施例3(a)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-L-高苯丙氨酸乙酯 在氬氣氛下，將實施例1(e)的化合物(0.49g，1.0mmol)溶解在無水乙醇(5mL)中，該溶液用1N NaOH(1.0mL，1.0mmol)處理。將該混合物在室溫下攪拌4小時，隨后用1N HCl處理至pH3。蒸發該混合物除去大部分的乙醇且產物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液用水洗滌且隨后用鹽水洗滌。該溶液用硫酸鈉干燥并蒸發至干。產物在甲基-叔丁基醚和己烷中研制，此后通過過濾收集得到標題化合物；m.p.157-158℃；[α]D-21.93°(c.0.66，甲醇)。
同樣地制備(b)N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-色氨酸乙酯；m.p.138-145℃；[α]D-34.31°(c 1.057，DMSO)。
(c)N-[1-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-色氨酸乙酯；m.p.186-190℃；[α]D-25.72°(c 1.01，DMSO)。
(d)N-[1-[2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-丙酰基氨基]-環戊烷羰基]-(L)-高苯丙氨酸乙酯；m.p.92-94℃；[α]D-9.28°(c 1.14，甲醇)。
權利要求
1.下式的化合物或其藥學上可接受的鹽 其中R表示氫、低級烷基、碳環或雜環芳基-低級烷基或環烷基-低級烷基；R1表示氫、環烷基、碳環或雜環芳基或聯芳基；alk表示低級亞烷基；R3表示氫或酰基；R4表示氧雜環烷基、(硫雜-、氧硫雜-或二氧硫雜)-環烷基、氮雜環烷基或氧雜環烷基-、(硫雜-、氧硫雜-或二氧硫雜)-環烷基-或氮雜環烷基-低級烷基；R5表示氫或低級烷基；R6表示低級烷基、碳環或雜環芳基、(碳環或雜環芳基)-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、聯芳基或聯芳基-低級烷基；R7表示低級烷基、(碳環或雜環芳基)-低級烷基、環烷基-低級烷基或聯芳基-低級烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示3-至10-元亞環烷基，其可以被低級烷基或芳基-低級烷基取代或可以稠合于飽和或不飽和5-至7-元碳環；或5-或6-元(亞氧雜環烷基、亞硫雜環烷基或亞氮雜環烷基)，所有這些基團任選被低級烷基或芳基-低級烷基取代；或者表示2，2-亞降冰片基；COOR2表示羧基或衍生為藥學上可接受的酯的形式的羧基；衍生自其中R3是氫的所述化合物的二硫化物衍生物。
2.權利要求1的下式的化合物或其藥學上可接受的鹽 其中攜帶取代基-alk-R1和R4的不對稱碳通常具有S-構型，或衍生自其中R3是氫的所述化合物的二硫化物衍生物。
3.權利要求1的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示氫、C5-或C6-環烷基、碳環或雜環芳基或聯芳基；alk表示低級亞烷基；R3表示氫或酰基；R4表示氧雜環烷基或氧雜環烷基-低級烷基；R6和R7表示低級烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示5-或6-元亞環烷基；COOR2表示羧基或衍生為藥學上可接受的酯的形式的羧基；衍生自其中R3是氫的所述化合物的二硫化物衍生物。
4.權利要求2的式Ia的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示氫、C5-或C6-環烷基、碳環或雜環芳基或聯芳基；alk表示低級亞烷基；R3表示氫或酰基；R4表示氧雜環烷基或氧雜環烷基-低級烷基；R6和R7表示低級烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示5-或6-元亞環烷基；COOR2表示羧基或衍生為藥學上可接受的酯的形式的羧基；衍生自其中R3是氫的所述化合物的二硫化物衍生物。
5.權利要求1的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示碳環或雜環芳基或聯芳基；R3表示氫或任選取代的低級烷酰基；R4表示四氫吡喃基或4-四氫吡喃基甲基；R6和R7表示C1-C4-烷基并且相同；alk表示亞甲基或亞乙基；COOR2表示羧基、低級烷氧基羰基、(二-低級烷基氨基羰基)-低級烷氧基羰基或(嗎啉基羰基、哌啶基羰基或吡咯烷基羰基)-低級烷氧基羰基。
6.權利要求2的式Ia的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示碳環或雜環芳基或聯芳基；R3表示氫或任選取代的低級烷酰基；R4表示四氫吡喃基或4-四氫吡喃基甲基；R6和R7表示C1-C4-烷基并且相同；alk表示亞甲基或亞乙基；COOR2表示羧基、低級烷氧基羰基、(二-低級烷基氨基羰基)-低級烷氧基羰基或(嗎啉基羰基、哌啶基羰基或吡咯烷基羰基)-低級烷氧基羰基。
7.權利要求1的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示碳環芳基或雜環芳基，其中碳環芳基表示苯基或被1或2個的羥基、低級烷酰氧基、低級烷基、低級烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基或鹵素取代的苯基，并且其中雜環芳基表示吲哚基；R3表示氫或低級烷酰基；R4表示4-四氫吡喃基；R6和R7表示甲基；alk表示亞甲基或亞乙基，且COOR2表示羧基或低級烷氧基羰基。
8.權利要求2的式Ia的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示碳環芳基或雜環芳基，其中碳環芳基表示苯基或被1或2個的羥基、低級烷酰氧基、低級烷基、低級烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基或鹵素取代的苯基，并且其中雜環芳基表示吲哚基；R3表示氫或低級烷酰基；R4表示4-四氫吡喃基；R6和R7表示甲基；alk表示亞甲基或亞乙基，且COOR2表示羧基或低級烷氧基羰基。
9.權利要求1的式I的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示苯基、氟苯基、甲氧基苯基、4-聯苯基、2-噻吩基-5-吡啶基或3-吲哚基；R3表示氫或低級烷酰基；R4表示4-四氫吡喃基；R6和R7表示甲基；alk表示亞甲基或亞乙基，且COOR2表示羧基或低級烷氧基羰基。
10.權利要求2的式Ia的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示苯基，其未被取代或被苯基或C1-C4烷氧基取代；或R1表示被噻吩基取代的吲哚基或吡啶基；R2表示氫或C1-C4烷基；R3表示氫或C2-C5烷酰基；R4表示四氫吡喃基或4-四氫吡喃基甲基；R6和R7表示C1-C4烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示亞環戊基；alk表示C1-C2亞烷基。
11.權利要求2的式Ia的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R和R5表示氫；R1表示苯基、氟苯基、甲氧基苯基、4-聯苯基、2-噻吩基-5-吡啶基或3-吲哚基；R3表示氫或低級烷酰基；R4表示4-四氫吡喃基；R6和R7表示甲基；alk表示亞甲基或亞乙基，且COOR2表示羧基或低級烷氧基羰基。
12.權利要求2的化合物，它們是N-[2-[(S)-2-乙酰基硫代-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-4-甲氧基苯丙氨酸乙酯或N-[2-[(S)-2-巰基-2-(4-四氫吡喃基)-乙酰基氨基]-2-甲基丙酰基]-(L)-4-甲氧基苯丙氨酸或其藥學上可接受的鹽。
13.式VI的化合物 其中R表示氫、低級烷基、碳環或雜環芳基-低級烷基或環烷基-低級烷基；R1表示氫、環烷基、碳環或雜環芳基或聯芳基；alk表示低級亞烷基；R4表示氧雜環烷基、(硫雜-、氧硫雜-或二氧硫雜)-環烷基、氮雜環烷基或氧雜環烷基-、(硫雜-、氧硫雜-或二氧硫雜)-環烷基-或氮雜環烷基-低級烷基；R5表示氫或低級烷基；R6表示低級烷基、碳環或雜環芳基、(碳環或雜環芳基)-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、聯芳基或聯芳基-低級烷基；R7表示低級烷基、(碳環或雜環芳基)-低級烷基、環烷基-低級烷基或聯芳基-低級烷基；或R6和R7與它們所連的碳原子一起表示3-至10-元亞環烷基，其可以被低級烷基或芳基-低級烷基取代或可以稠合于飽和或不飽和5-至7-元碳環；或5-或6-元(亞氧雜環烷基、亞硫雜環烷基或亞氮雜環烷基)，它們任選被低級烷基或芳基-低級烷基取代；或者表示2，2-亞降冰片基；COOR2表示羧基或衍生為藥學上可接受的酯的形式的羧基；和Y表示作為離去基團的反應性酯化的羥基、氯、溴、碘或磺酰氧基。
14.一種抑制哺乳動物中血管緊張素轉化酶和中性內肽酶的方法，該方法包括給需要的哺乳動物施用有效量的權利要求1的化合物。
15.權利要求14的方法，該方法還包括對內皮肽轉化酶的抑制。
16.藥物組合物，該組合物含有有效量的與一種或多種藥學可接受載體組合的權利要求1的化合物。
17.權利要求16的藥物組合物，該組合物用于抑制血管緊張素轉化酶和中性內肽酶。
18.權利要求16的藥物組合物，該組合物還抑制內皮肽轉化酶。
19.權利要求16的藥物組合物，該組合物還含有至少一種選自下列的化合物血管緊張素II受體拮抗劑、腎素抑制劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮合酶抑制劑/醛固酮拮抗劑、利尿劑、后葉加壓素受體拮抗劑、強心藥、內皮素拮抗劑、ECE抑制劑、抗動脈粥樣硬化藥、膽固醇吸收抑制劑、貝特類、抑制素類、擬甲狀腺藥物和抗糖尿病藥。
全文摘要
本發明公開下式的化合物，在該式中，R、R
文檔編號C07K5/065GK1555372SQ02818301
公開日2004年12月15日 申請日期2002年9月20日 優先權日2001年9月21日
發明者C·A·芬克, C A 芬克 申請人:諾瓦提斯公司