r Thr Pro Glu Ser Gly Ser Ala Ser Pro Gly SerThr Ser Ser Thr Ala Glu Ser Pro Gly Pro Gly Thr Ser Pro Ser Gly Glu Ser Ser ThrAla Pro Gly Thr Ser Pro Ser Gly Glu Ser Ser Thr Ala Pro Gly Thr Ser Pro Ser GlyGlu Ser Ser Thr Ala Pro
[0011]SEQ ID N0.3
[0012]GGTACTTCTACTCCGGAAAGCGGTTCCGCATCTCCAGGTACTTCTCCTAGCGGTGAATCTTCTACTGCTCCAGGT ACCTCTCCTAGCGGCGAATCTTCTACTGCTCCAGGTTCTACCAGCTCTACCGCTGAATCTCCTGGCCCAGGTTCTACCAGCGAATCCCCGTCTGGCACCGCACCAGGTTCTACTAGCTCTACCGCAGAATCTCCGGGTCCAGGTACTTCCCCTAGCGGTGAATCTTCTACTGCTCCAGGTACCTCTACTCCGGAAAGCGGCTCCGCATCTCCAGGTTCTACTAGCTCTACTGCTGAATCTCCTGGTCCAGGTACCTCCCCTAGCGGCGAATCTTCTACTGCTCCAGGTACCTCTCCTAGCGGCGAATCTTCTACCGCTCCAGGTACCTCCCCTAGCGGTGAATCTTCTACCGCACCATGA
[0013]SEQ ID N0.4
[0014]GGTACCTCTACGCCGGAATCTGGCAGTGCATCCCCGGGTACCTCACCGAGCGGTGAAAGCAGCACCGCTCCGGGTACGAGCCCGTCTGGTGAATCTAGTACCGCCCCGGGTTCCACCAGCAGCACCGCAGAATCACCGGGTCCGGGTAGTACCAGCGAATCACCGAGCGGTACCGCACCGGGTTCTACCAGCAGCACCGCTGAAAGTCCGGGTCCGGGTACCAGCCCGAGCGGCGAATCTAGCACCGCACCGGGTACCAGCACGCCGGAAAGTGGTAGCGCCTCACCGGGCAGCACCAGCAGCACCGCCGAAAGCCCGGGTCCGGGTACCTCGCCGTCTGGCGAAAGCAGCACCGCACCGGGCACGTCTCCGAGTGGCGAATCGTCCACCGCTCCGGGCACCAGTCCGTCGGGCGAATCCTCCACCGCTCCGTAA
[0015]本發明中，所述的白細胞介素-1受體拮抗劑其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示，所述白細胞介素-1受體拮抗劑包括但不限于人白細胞介素-1受體拮抗劑原型及其突變型；
[0016]SEQ ID N0.2
[0017]MRPSGRKSSKMQAFRIWDVNQKTFYLRNNQLVAGYLQGPNVNLEEKIDVVPIEPHALFLGIHGGKMCLSCVKSGDETRLQLEAVNITDLSENRKQDKRFAFIRSDSGPTTSFESAACPGWFLCTAMEADQPVSLTNMPDEGVMVTKFYFQEDE
[0018]本發明中，編碼上述制得的長效白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID N0.5所示；
[0019]SEQ ID N0.5
[0020]ATGCGACCCTCTGGGAGAAAATCCAGCAAGATGCAAGCCTTCAGAATCTGGGATGTTAACCAGAAGACCTTCTATCTGAGGAACAACCAACTAGTTGCCGGATACTTGCAAGGACCAAATGTCAATTTAGAAGAAAAGATAGATGTGGTACCCATTGAGCCTCATGCTCTGTTCTTGGGAATCCATGGAGGGAAGATGTGCCTGTCCTGTGTCAAGTCTGGTGATGAGACCAGACTCCAGCTGGAGGCAGTTAACATCACTGACCTGAGCGAGAACAGAAAGCAGGACAAGCGCTTCGCCTTCATCCGCTCAGACAGTGGCCCCACCACCAGTTTTGAGTCTGCCGCCTGCCCCGGTTGGTTCCTCTGCACAGCGATGGAAGCTGACCAGCCCGTCAGCCTCACCAATATGCCTGACGAAGGCGTCATGGTCACCAAATTCTACTTCCAGGAGGACGAGAATTCAGGTACTTCTACTCCGGAAAGCGGTTCCGCATCTCCAGGTACTTCTCCTAGCGGTGAATCTTCTACTGCTCCAGGTACCTCTCCTAGCGGCGAATCTTCTACTGCTCCAGGTTCTACCAGCTCTACCGCTGAATCT CCTGGCCCAGGTTCTACCAGCGAATCCCCGTCTGGCACCGCACCAGGTTCTACTAGCTCTACCGCAGAATCTCCGGGTCCAGGT
ACTTCCCCTAGCGGTGAATCTTCTACTGCTCCAGGTACCTCTACTCCGGAAAGCGGCTCCGCATCTCCAGGTTCTAC
TAGCTCTACTGCTGAATCTCCTGGTCCAGGTACCTCCCCTAGCGGCGAATCTTCTACTGCTCCAGGTACCTCTCCTA
GCGGCGAATCTTCTACCGCTCCAGGTACCTCCCCTAGCGGTGAATCTTCTACCGCACCATGA
[0021]本發明中，所述的親水性無重復序列多肽可以以SEQ ID N0.1所述氨基酸序列為單位進行重復組合，與白細胞介素-1受體拮抗劑的N-端或C-端進行融合，其組合方式包括但不限于N-端白細胞介素-1受體拮抗劑和C-端親水性無重復序列多肽的組合；
[0022]本發明中，所述白細胞介素-1受體拮抗劑與親水性無重復序列多肽之間或親水性無重復序列多肽之間進行間接融合所需氨基酸序列如SEQ ID N0.6所示；
[0023]SEQ ID N0.6
[0024]GSSGSSGSSGSSG
[0025]本發明還提供了含有所述的編碼親水性無重復序列多肽的核苷酸序列，和編碼所述的長效白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白的核苷酸序列的載體。
[0026]本發明還提供了含有所述的編碼親水性無重復序列多肽的核苷酸序列，和編碼所述的長效白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白的核苷酸序列的宿主細胞。
[0027]本發明的長效白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白通過下述方法制備:
[0028](1)獲得親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白編碼基因;
[0029](2)構建親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白編碼基因表達載體；
[0030](3)構建含有組氨酸標簽的親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白編碼基因表達載體；
[0031](4)表達親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑融合蛋白；
[0032](5)純化親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑融合蛋白；
[0033](6)鑒定親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑融合蛋白；
[0034](7)測定親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑融合蛋白的活性；
[0035](8)檢測親水性非重復序列多肽與白細胞介素-1受體拮抗劑融合蛋白的藥代動力學。
[0036]結果顯示，所述的長效白細胞介素-1受體拮抗劑能減少白細胞介素-1受體拮抗劑的免疫原性，延長白細胞介素-1受體拮抗劑在體內的半衰期；該融合蛋白可在大腸桿菌中高效表達，且制備工藝簡單。
[0037]進一步的，本發明還提供了所述的長效白細胞介素-1受體拮抗劑重組融合蛋白在用于制備治療類風濕性關節炎、糖尿病、動脈粥樣硬化、痛風、炎性腸病、紅斑狼瘡、乳腺癌、黑色素瘤、阿爾茲海默病、多發性硬化等神經退行性疾病、感染性疾病、惡性腫瘤的藥物中的用途。
【附圖說明】
[0038]圖1，編碼親水性非重復序列多肽的目的基因PCR產物.
[0039]圖2，編碼親水性非重復序列多肽的目的基因測序結果。
[0040]圖3，編碼白細胞介素-1受體拮抗劑的目的基因PCR產物。
[0041]圖4，編碼白細胞介素-1受體拮抗劑目的基因的測序結果。
[0042]圖5，編碼親水性非重復序列多肽目的基因回收產物及pET28a_白細胞介素1受體拮抗劑、pET24b-白細胞介素1受體拮抗劑回收產物。
[0043]圖6，編碼重組人白細胞介素-1受體拮抗劑與親水性非重復序列多肽融合蛋白目的基因的測序結果。
[0044]圖7，編碼白細胞介素-1受體拮抗劑-親水性非重復序列多肽的目的基因PCR產物。
[0045]圖8，白細