使用PD-1拮抗劑和dinaciclib的組合治療癌癥的制作方法
【專利說明】使用PD-1拮抗劑和d i nac i c I i b的組合治療癌癥 發明領域
[0001] 本發明涉及可用于治療癌癥的聯合治療。具體地，本發明涉及包含程序性死亡蛋 白質I (PD-I)的詰抗劑和dinaciclib的聯合治療，所述dinaciclib是一種泛細胞周期蛋白 依賴性激酶(CDK )抑制劑。
[0002] 發明背景 ro-Ι被公認在免疫調節和外周耐受維持中起重要作用。PD-I在幼稚T、B和NKT細胞上適 度表達，且通過淋巴細胞、單核細胞和骨髓細胞上的T/B細胞受體信號轉導上調（1)。
[0003] ro-l、PD-Ll (B7-H1)和ro-L2 (B7-DC)的兩種已知配體在多種組織中出現的人癌 癥中表達。在例如卵巢癌、腎癌、結腸直腸癌、胰腺癌、肝癌和黑素瘤的大量樣品集合中，顯 示出ro-Ll表達與不良預后和減少的總體生存相關聯，而與后續治療無關(2-13)。相似地， 發現腫瘤浸潤淋巴細胞上的ro-Ι表達標記了乳腺癌和黑素瘤中失能的T細胞（14-15)，且與 腎癌的不良預后相關聯（16)。因此，已提出表達PD-Ll的腫瘤細胞與表達ro-i的T細胞相互 作用，以減弱T細胞活化且逃避免疫監控，從而造成針對所述腫瘤的受損的免疫應答。
[0004] 抑制PD-I和其配體PD-Ll和PD-L2中之一或兩者相互作用的數種單克隆抗體正處 于治療癌癥的臨床開發中。已提出如果與其它已許可或實驗性的癌癥治療(例如，輻射、手 術、化學治療劑、靶向治療、抑制在腫瘤中異常調節(disregulate)的其它信號通路的藥劑 和其它免疫增強劑)組合施用，此類抗體的功效可能提高。
[0005] 細胞循環控制的異常調節是所有人癌癥的標志，且經常與細胞周期蛋白依賴性激 酶(CDK)的異常活化/調節相關。然而，CDK級聯對以環境依賴的方式維持T細胞的自身功能 是重要的。因此，作為抗癌劑的CDK抑制劑(CKDI)的開發已經由于免疫細胞毒性和隨之產生 的潛在的免疫抑制效果而變得復雜（17) dinaciclib，一種選擇性抑制⑶Kl、CDK2XDK5和 CDK9的泛CDK抑制劑，已經作為在多種癌癥中的潛在治療被研究，其中中性白細胞減少癥是 在臨床試驗中觀察到的最常見的劑量限制性毒性(17、18)。
[0006] 發明概述 本發明是部分基于令人驚訝的發現，即dinaciclib和鼠源化的抗小鼠 PD-I抗體對荷瘤 小鼠的共同施用（concurrent administration)導致了相對于任一種藥劑單獨施用顯著更 高的抗腫瘤功效。這一發現是未曾料到的，因為預期dinaciclib在有力地抑制轉錄和細胞 增殖中的已知活性與抗-PD-I治療的功效相互抵消，據信所述抗-PD-I治療很大程度上涉及 存在于腫瘤中和募集至腫瘤的T細胞的活化和增殖。
[0007] 因此，在一個實施方案中，本發明提供了用于治療個體癌癥的方法，其包括對個體 施用包括I3D-I拮抗劑和dinac i c I ib化合物的聯合治療。
[0008] 在另一個實施方案中，本發明提供了用于治療癌癥的、包含與dinaciclib化合物 組合使用的ro-i的藥物。
[0009] 在還另一個實施方案中，本發明提供了用于治療癌癥的、包含與PD-I拮抗劑組合 使用的dinacicI ib化合物的藥物。
[0010]其它實施方案提供了當與dinaciclib化合物組合施用時PD-I詰抗劑在制備用于 治療個體中癌癥的藥物中的用途，和當與F1D-I詰抗劑組合施用時dinaciclib化合物在制備 用于治療個體中癌癥的藥物中的用途。
[0011]在還進一步的實施方案中，本發明提供了F1D-I詰抗劑和dinaciclib化合物在制備 用于治療個體中癌癥的藥物中的用途。在一些優選的實施方案中，所述藥物包括藥盒，且所 述藥盒還包括包含了使用PD-I詰抗劑與dinaciclib化合物組合以治療個體中癌癥的指導 的包裝說明書。
[0012]在上文的所有治療方法、藥物和用途中，所述TO-I拮抗劑抑制PD-Ll與PD-I結合， 且優選地還抑制ro-L2與ro-i結合。在上文的治療方法、藥物和用途的一些優選的實施方案 中，所述PD-I拮抗劑是單克隆抗體或其抗原結合片段，其特異地結合PD-I或PD-Ll，且阻斷 PD-Li與ro-i結合。在一個特別優選的實施方案中，所述ro-i拮抗劑是抗PD-I抗體，所述抗 體包含重鏈和輕鏈，且其中所述重鏈和輕鏈包含在圖6中顯示的氨基酸序列（SEQ ID NO:21 和SEQ ID NO:22)。
[0013] 在上文的所有治療方法、藥物和用途的實施方案中，所述dinaciclib化合物是式I 的化合物
或式I的化合物的藥學可接受的鹽。
[0014] 在上文的治療方法、藥物和用途的一些實施方案中，所述個體是人且所述癌癥是 實體瘤，且在一些優選的實施方案中所述實體瘤是膀胱癌、乳腺癌、透明細胞腎癌、頭/頸鱗 狀細胞癌、肺鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺 癌、腎細胞癌、小細胞肺癌（SCLC)或二陰性乳腺癌。在一些優選的實施方案中，所述癌癥是 未使用易普利單抗的晚期黑素瘤（ipilimumab-nai：ve advanced melanoma)，而在其它優選 的實施方案中，所述人患有易普利單抗難治的晚期黑素瘤。
[0015] 在上文的治療方法、藥物和用途的其它實施方案中，所述個體是人且所述癌癥是 血紅素惡性腫瘤，且在一些優選的實施方案中，所述血紅素惡性腫瘤是急性淋巴細胞白血 病(ALL)、急性髓細胞性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性髓細胞性白血病 (CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、T細胞/ 富組織細胞-大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多 發性骨髓瘤(MM)、髓樣細胞白血病-1蛋白（MCL-1)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、非霍奇金氏 淋巴瘤(NHL)、或小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)。
[0016] 還在上文任意的治療方法、藥物和用途的優選的實施方案中，所述癌癥表達PD-Ll 和TO-L2之一或兩者。在特別優選的實施方案中，在所述癌癥中ro-Li表達升高。
[0017] 在上文的治療方法、藥物和用途的一個特別優選的實施方案中，所述個體是人且 所述癌癥是表達人ro-Ll的慢性淋巴細胞性白血病(CLL)。
[0018] 附圖簡述 圖1顯示可用于本發明的示例性的抗ro-i單克隆抗體的輕鏈和重鏈CDR的氨基酸序列 (SEQ ID N0s:l-6)。
[0019] 圖2顯示可用于本發明的另一個示例性的抗ro-i單克隆抗體的輕鏈和重鏈⑶R的 氨基酸序列（SEQ ID N0s:7-12)。
[0020] 圖3顯示可用于本發明的示例性的抗ro-ι單克隆抗體的重鏈可變區和全長重鏈的 氨基酸序列（SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14)。
[0021 ]圖4顯示可用于本發明的示例性的抗ro-ι單克隆抗體的可選的輕鏈可變區的氨基 酸序列（SEQ ID NOs: 15-17)。
[0022]圖5顯示可用于本發明的示例性抗ro-Ι單克隆抗體的可選輕鏈的氨基酸序列（SEQ ID NOs:18-20)。
[0023] 圖6顯示MK-3475的重鏈和輕鏈的氨基酸序列（分別為SEQ ID NOs. 21和22)。
[0024] 圖7顯示nivolumab的重鏈和輕鏈的氨基酸序列（分別為SEQ ID NOs. 23和24)。
[0025]圖8闡明了在荷瘤小鼠中F1D-I詰抗劑和dinaciclib共同施用的抗腫瘤效果優于單 獨使用兩者之一的單一治療，圖8A顯示了在使用對照、鼠抗小鼠 PD-I mAb(抗PD-I )、 dinaciclib或抗F1D-I和dinaciclib兩者治療期間不同天數的平均腫瘤體積，且圖8B顯示了 在治療第一天(左側表，第〇天)或在治療25天后(右側表，第25天)在每個治療組中個體小鼠 的腫瘤體積值。在下文實施例1中描述了實驗細節。
[0026] 發明詳述 縮寫.在本發明的所有詳細描述和實例中將使用以下縮寫： ⑶R 互補決定區 CHO 中國倉鼠卵巢 FFPE福爾馬林固定，石蠟包埋 FR 框架區 IgG 免疫球蛋白G IHC 免疫組化或免疫組化的 Q2W 每兩周一劑量 Q3W 每三周一劑量 VH 免疫球蛋白重鏈可變區 VK 免疫球蛋白κ輕鏈可變區。
[0027] I.定義 為了更容易理解本發明，在下文特別定義了某些技術和科學術語。除非在該文件中其 它位置特別定義，在本文中使用的所有其它技術和科學術語具有本發明所屬領域的普通技 術人員通常理解的含義。
[0028] 如在本文所用的(包括所附權利要求），詞語的單數形式諸如"一個"、"一種"和"所 述"包括其相應的復數引用，除非上下文明確地另外指出。
[0029] 當應用于動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，"施用"和"治療" 指的是將外源性藥劑、治療劑、診斷劑或組合物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物 流體進行接觸。細胞的治療包括將試劑與所述細胞接觸，以及將試劑與流體接觸，所述流體 與所述細胞相互接觸。"施用"和"治療"還意為例如，通過試劑、診斷劑、結合化合物，或通過 另一種細胞對細胞進行體外和先體外后體內治療。術語"受試者"包括任何生物體，優選動 物，更優選哺乳動物(例如大鼠、小鼠、狗、貓、兔)且最優選人。
[0030] 如本文使用的，術語"抗體"指的是展示了期望的生物學活性或結合活性的抗體的 任何形式。因此，其以最廣泛含義使用且特別涵蓋，但不限于單克隆抗體(包括全長單克隆 抗體）、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體）、人源化的、全人抗體、嵌合抗體和 駝化單結構域抗體。"親本抗體"是在將抗體修飾用于預期用途之前(諸如用于人治療的抗 體的人源化），通過將免疫系統暴露于抗原獲得的抗體。
[0031] 通常，基本的抗體結構單元包括四聚體。每個四聚體包括兩個相同的多肽鏈對，每 對具有一條"輕"鏈(約25 kDa)和一條"重"鏈(約50-70 kDa)。每條鏈的氨基末端部分包括 約100至110或更多個氨基酸的可變區，其主要負責抗原識別。重鏈的羧基末端可以定義為 恒定區，其主要負責效應器功能。通常，人輕鏈被分類為κ、λ輕鏈。此外，人重鏈通常被分類 為μ、δ、γ、α或ε，且將抗體的同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈中， 所述可變區和恒定區由約12或更多個氨基酸的"J"區相連，所述重鏈區還包括約10或更多 個氨基酸的"D"區。通常參見，Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W·，ed·，2nd ed. Raven Press, Ν·Υ· (1989)〇
[0032] 每個輕鏈/重鏈對的可變區形成抗體的結合位點。因此，通常，完整的抗體具有兩 個結合位點。除了雙功能或雙特異性抗體，所述兩個結合位點通常是相同的。
[0033] 通常，重鏈和輕鏈兩者的可變結構域包括三個高變區，也被稱為互補決定區 (CDR)，其位于相對保守的框架區(FR)中。所述CDR通常通過框架區排列，使得能夠結合特異 性表位。通常，從N-末端至C-末端，輕鏈和重鏈可變結構域均包括FRl、CDRl、FR2、CDR2、 FR3、CDR3和FR4〇通常根據Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, 等人；National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5th ed. ; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat，等人，（1977)了· Biol. Chem. 252:6609-6616; Chothia,等人，（1987) J Mol. Biol. 196:901-917 或 Chothia，等人，（1989) Nature 342:878-883的定義將氨基酸分配至各個結構域。
[0034]如在本文中使用的，術語"高變區"指的是負責抗原結合的抗體的氨基酸殘基。所 述高變區包括來自"互補決定區"或"⑶R"（即，輕鏈可變結構域中的⑶RLl、⑶RL2和⑶RL3和 重鏈可變結構域中的CDRH1、CDRH2和CDRH3)的氨基酸殘基。參見Kabat等人（1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.(通過序列定義抗體CDR區 域）；還參見Chothia和Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917(通過結構定義抗體CDR 區域）。如本文使用的，術語"框架"或"FR"殘基指的是在本文中定義為CDR殘基的除高變區 殘基以外的那些可變結構域殘基。
[0035]如本文使用的，除非另外說明，"抗體片段"或"抗原結合片段"指的是抗體的抗原 結合片段，即保留有特異性結合由全長抗體結合的抗原的能力的抗體片段，例如，保留有一 個或多個CDR區的片段。抗體結合片段的實例包括，但不限于? &13、？&13'、？(&13'）2和?￥片段； 雙體;線性抗體;單鏈抗體分子，例如SC-Fv;由抗體片段形成的納米抗體和多特異性抗體。
[0036] "特異性地結合"特定靶蛋白的抗體是展示出相比于其它蛋白優先結合所述靶標 的抗體，但該特異性不需要絕對的結合特異性。如果抗體的結合對于樣品中靶蛋白的存在 是決定性的（例如，不產生不期望的結果諸如假陽性），則對于意圖的靶標，該抗體被認為是 "特異性的"。可用于本發明的抗體或其結合片段將以比非靶蛋白的親和力高至少2倍，優選 地高至少10倍，更優選地高至少20倍和最優選地至少高100倍的親和力結合靶蛋白。如本文 使用的，所述抗體特異地結合包含給定氨基酸序列的多肽，例如成熟人ro-i或人ro-Li分子 的氨基酸序列(如果其結合包含所述序列的多肽但不結合缺乏所述序列的蛋白）。
[0037] "嵌合抗體"指的是這樣的抗體以及這類抗體的片段（只要所述片段展示了期望的 生物學活性），其重鏈和/或輕鏈的一部分與從特定物種(例如人)衍生的或屬于特定抗體亞 類或亞型的抗體中對應序列相同或同源，而所述鏈的剩余部分與從另一個物種(例如小鼠） 衍生的或屬于另一抗體亞類或亞型的抗體中對應序列相同或同源。
[0038] "人抗體"指的是僅包含人免疫球蛋白蛋白質序列的抗體。如果在小鼠中、小鼠細 胞中或在衍生自小鼠細胞的雜交瘤中產生，人抗體可以含有鼠的碳水化合物鏈。相似地， "小鼠抗體"或"大鼠抗體"指的是僅分別包括小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗體。
[0039] "人源化抗體"指的是含有來自非人(例如鼠）抗體以及人抗體的序列的抗體形式。 這樣的抗體含有盡可能少的衍生自非人免疫球蛋白的序列。通常，所述人源化抗體將包含 至少一種和通常兩種可變結構域的基本全部，其中高變環的全部或基本全部對應于非人免 疫球蛋白的那些，且FR區的全部或基本全部是人免疫球蛋白序列的那些。所述人源化抗體 任選地還將包含免疫球蛋白恒定區(Fe)的至少一部分，其通常為人免疫球蛋白的。當需要 將人源化抗體和親本嚙齒類動物抗體區分時，將前綴"hum"、"hu"或"h"添加至抗體克隆命 名。雖然為增加親和力，增加人源化抗體穩定性或為了其它原因可以包括某些氨基酸取代， 但嚙齒類動物抗體的人源化形式將通常包含親本嚙齒類動物的相同的CDR序列。
[0040] 術語"癌癥"、"癌性的"或"惡性的"指的是或描述的是在哺乳動物中通常表征為不 受調控的細胞生長的生理狀況。癌癥的實例包括但不限于，癌、淋巴瘤、白血病、胚細胞瘤和 肉瘤。此類癌癥的更具體的實例包括鱗狀細胞癌、骨