本發明涉及一種cdk4/6抑制劑(ji)與雌(ci)激素受體拮抗(kang)劑(ji)聯合在制備治(zhi)療乳腺癌的(de)藥物中的(de)用途。

背景技術：

乳腺(xian)癌是(shi)女性(xing)(xing)(xing)最(zui)常見(jian)的(de)(de)惡性(xing)(xing)(xing)腫瘤(liu)之一，具有(you)發(fa)病率高，頗具侵襲性(xing)(xing)(xing)，但病程進展(zhan)緩慢(man)，中(zhong)國(guo)人口(kou)協會(hui)2010年2月1日在北京發(fa)布了(le)(le)《中(zhong)國(guo)乳腺(xian)疾病調查報(bao)告(gao)》，報(bao)告(gao)顯示，我國(guo)城(cheng)市地區乳腺(xian)癌的(de)(de)死亡率增(zeng)長(chang)了(le)(le)38.91％，乳腺(xian)癌已(yi)經(jing)成為(wei)對(dui)婦女健康威脅最(zui)大(da)(da)的(de)(de)疾病，目(mu)前在研和(he)(he)上市的(de)(de)乳腺(xian)癌藥(yao)物至少有(you)156種，其中(zhong)68％為(wei)靶向治(zhi)療藥(yao)物。大(da)(da)量研究發(fa)現腫瘤(liu)與細胞(bao)周期異常相(xiang)關，腫瘤(liu)細胞(bao)中(zhong)有(you)絲分(fen)裂(lie)信號蛋(dan)白的(de)(de)大(da)(da)量突變和(he)(he)抗有(you)絲分(fen)裂(lie)信號蛋(dan)白缺陷導致(zhi)增(zeng)殖紊亂(luan)；同時大(da)(da)部分(fen)腫瘤(liu)都存在基因組(zu)不(bu)穩定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(gin)和(he)(he)染色體(ti)組(zu)不(bu)穩定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(cin)，這三(san)種基本(ben)的(de)(de)細胞(bao)周期缺陷都直接或間(jian)接由(you)cdks的(de)(de)失控引起。周期素依賴(lai)性(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白激(ji)酶(cdk，cyclindependentkinase)抑(yi)制劑日益成為(wei)熱門靶標(biao)。

目前開發(fa)的(de)(de)(de)一代二(er)代cdk抑(yi)制劑很多，最受(shou)關(guan)注的(de)(de)(de)二(er)代藥物包括pfizer公司(si)和(he)onyx公司(si)共同開發(fa)的(de)(de)(de)cdk4/6抑(yi)制劑pd-0332991，其(qi)通過抑(yi)制cdk4/6的(de)(de)(de)活性(xing)(xing)，抑(yi)制rb的(de)(de)(de)磷酸(suan)化，使e2f-rb復合物留滯在胞(bao)漿中，阻斷細胞(bao)周期的(de)(de)(de)啟動。臨床試驗結果(nct00721409)顯(xian)示(shi)，來曲(qu)唑單藥治療(liao)的(de)(de)(de)患者的(de)(de)(de)無(wu)進展(zhan)存活期(progression-freesurvival,pfs)為7.5月，而來曲(qu)唑和(he)pd-0332991藥物聯用治療(liao)的(de)(de)(de)患者其(qi)無(wu)進展(zhan)存活期則延長至26.1月，這一顯(xian)著優(you)勢獲得(de)了(le)廣泛關(guan)注。對于在先接受(shou)過內分泌療(liao)法后疾病(bing)進展(zhan)的(de)(de)(de)激素受(shou)體陽性(xing)(xing)轉移性(xing)(xing)乳腺癌病(bing)人，pd-0332991與氟維司(si)群聯用相比(bi)于氟維司(si)群單用也延長了(le)其(qi)無(wu)進展(zhan)生(sheng)存期(palbociclibinhormone-receptor–positiveadvancedbreastcancer.thenewenglandjournalofmedicine.july16,2015vol.373no.3.)

wo2014183520公開了(le)與pd-0332991結構相似的(de)(de)一(yi)(yi)系(xi)列滿足式(shi)(i)通式(shi)的(de)(de)cdk4/6抑制劑(ji)，具(ju)有顯(xian)著(zhu)的(de)(de)cdk4/6的(de)(de)抑制活性和高(gao)度選擇性，并(bing)預期這些化合(he)物(wu)可(ke)能(neng)用于一(yi)(yi)系(xi)列腫瘤，并(bing)且可(ke)以與一(yi)(yi)系(xi)列現有的(de)(de)抗(kang)腫瘤劑(ji)聯合(he)使用，其中包括如(ru)下所示的(de)(de)式(shi)a化合(he)物(wu)，其化學名(ming)為6-乙酰基(ji)(ji)-8-環戊基(ji)(ji)-5-甲基(ji)(ji)-2-((5-(哌啶-4-基(ji)(ji))吡(bi)啶-2-基(ji)(ji))氨基(ji)(ji))吡(bi)啶并(bing)[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮：

然(ran)而(er)上述文(wen)獻(xian)并(bing)沒有(you)具體(ti)公開(kai)哪一個化合物與哪一種抗腫瘤劑(ji)聯(lian)用(yong)(yong)時可(ke)以取得較好(hao)的效果，更沒有(you)預期一些特定(ding)的聯(lian)用(yong)(yong)方式可(ke)以取得協同作用(yong)(yong)。

技術實現要素：

本發(fa)明(ming)驚奇地發(fa)現，化合(he)物a或其(qi)可藥用鹽與雌激素受體拮抗劑聯合(he)使(shi)用時(shi)取得了(le)顯著的協同作用，從(cong)而完(wan)成了(le)本發(fa)明(ming)。

本發明一方面提(ti)供了化合物(wu)a或其(qi)可藥(yao)用鹽與雌激素受體拮抗(kang)劑聯合在(zai)制備治(zhi)療乳(ru)腺癌的藥(yao)物(wu)中的用途。所述的雌激素受體拮抗(kang)劑可以是(shi)他莫昔芬、氟維司群(qun)，優(you)選氟維司群(qun)。

其中(zhong)所述(shu)的乳(ru)腺(xian)癌優選(xuan)為(wei)(wei)雌(ci)激素受體(ti)陽(yang)性(er+)、和(he)/或(huo)人表皮生(sheng)長因子受體(ti)2陰性(her2-)的乳(ru)腺(xian)癌；更優選(xuan)為(wei)(wei)上述(shu)表型(xing)的局部晚期或(huo)轉移性乳(ru)腺(xian)癌。

在本發明中，化合(he)物a在實際使用時，優選其(qi)可藥用鹽的(de)形(xing)式，可以是各(ge)種有機酸(suan)(suan)或者無機酸(suan)(suan)的(de)加(jia)成鹽，其(qi)中特別(bie)優選羥(qian)乙基磺酸(suan)(suan)鹽，其(qi)結(jie)構(gou)如下所示：

更優(you)選地，本(ben)發明的(de)(de)(de)化合物a的(de)(de)(de)羥乙基磺酸鹽以(yi)(yi)i型(xing)結晶(jing)的(de)(de)(de)形(xing)式存在(zai)(zai)，使用cu-ka輻射，得(de)到以(yi)(yi)2θ角(jiao)度(du)和晶(jing)面間距表示的(de)(de)(de)x-射線(xian)粉(fen)末衍射圖(tu)譜(pu)，所述i型(xing)結晶(jing)具有(you)如圖(tu)1所示的(de)(de)(de)x-射線(xian)粉(fen)末衍射圖(tu)譜(pu)，其中(zhong)在(zai)(zai)約4.17(21.17)，8.26(10.69)，9.04(9.77)，10.78(8.20)，12.38(7.14)，14.01(6.32)，18.50(4.79)，18.89(4.70)，20.69(4.29)，21.58(4.11)，23.87(3.73)和28.15(3.17)有(you)特征峰。

所(suo)述的i晶型(xing)經光照、高溫和高濕條件下(xia)測試，穩定性良好，且溶解性、生物(wu)利用度(du)優于化合物(wu)a本身(shen)。

在本發明中，化(hua)合(he)物(wu)a或其(qi)可(ke)藥(yao)用(yong)鹽(yan)的(de)每日用(yong)量(以化(hua)合(he)物(wu)a計)范圍可(ke)以是0.1mg/kg～1000mg/kg，優(you)(you)選(xuan)0.5～10mg/kg，更優(you)(you)選(xuan)0.5～5mg/kg。對于成年人類(lei)，優(you)(you)選(xuan)以化(hua)合(he)物(wu)a計，每日用(yong)量1mg～1000mg，優(you)(you)選(xuan)10～500mg，最優(you)(you)選(xuan)30至300mg。

在本發明中，對于(yu)成年(nian)人類(lei)，雌激素受體拮抗(kang)劑的每次用量為1～2000mg，優選(xuan)10～1000mg，更優選(xuan)100～1000mg。

本發明中所述的聯合使(shi)用(yong)，并(bing)不限定化合物(wu)a或其可(ke)(ke)藥(yao)用(yong)鹽與(yu)雌激素受(shou)體拮抗劑(ji)同時施用(yong)，也可(ke)(ke)以二者(zhe)先(xian)后施用(yong)；另外，為了(le)用(yong)藥(yao)方便(bian)，還(huan)可(ke)(ke)將化合物(wu)a與(yu)雌激素受(shou)體拮抗劑(ji)制成藥(yao)物(wu)組(zu)合物(wu)。

附圖說明

圖1：顯示化合(he)物a的(de)羥乙(yi)基磺(huang)酸鹽(yan)的(de)i晶型的(de)xrd圖譜；

圖(tu)(tu)2：顯(xian)示化合(he)物a的(de)羥乙基磺(huang)酸(suan)鹽(yan)的(de)i晶型的(de)dsc圖(tu)(tu)譜圖(tu)(tu)；

圖3：pd-0332991、化合物a單(dan)用或與氟維(wei)司群(qun)合用對人乳腺癌mcf-7裸小鼠皮下移植(zhi)瘤(liu)的療效；

圖4：pd-0332991、化合物a單用(yong)(yong)或與氟維司(si)群(qun)合用(yong)(yong)對荷(he)瘤(liu)裸小鼠體(ti)重的(de)影響；

圖5：pd-0332991、化合(he)物a單用(yong)或與氟維司群合(he)用(yong)對人乳(ru)腺癌(ai)mcf-7裸小鼠皮(pi)下移植(zhi)瘤(liu)的療效(腫(zhong)瘤(liu)照片)。

具體實施方式

以下結合實(shi)施(shi)例(li)用于(yu)進一步(bu)描述本(ben)發明(ming)(ming)，但這(zhe)些實(shi)施(shi)例(li)并(bing)非(fei)限制本(ben)發明(ming)(ming)的(de)范(fan)圍。

實驗所用的測試儀器

1、dsc譜

儀器(qi)型號：mettlertoledodsc1stareesystem

吹掃氣：氮氣

升溫速(su)率：10.0℃/min

溫度范圍：40-400℃

2、x-射線衍射譜

儀器型(xing)號：brukerd8focusx-射線粉末(mo)衍(yan)射儀

射線：單色cu-kα射線(λ＝1.5406)

掃描方式：θ/2θ，掃描范(fan)圍：2-40°

電(dian)壓：40kv，電(dian)流(liu)：40ma

實施例1：6-乙(yi)酰(xian)基(ji)(ji)-8-環戊(wu)基(ji)(ji)-5-甲基(ji)(ji)-2-((5-(哌啶-4-基(ji)(ji))吡啶-2-基(ji)(ji))氨基(ji)(ji))吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮羥乙(yi)基(ji)(ji)磺(huang)酸鹽的(de)制(zhi)備

步驟1：6-((6-(1-丁氧(yang)基(ji)(ji)乙烯基(ji)(ji))-8-環戊(wu)基(ji)(ji)-5-甲(jia)基(ji)(ji)-7-羰基(ji)(ji)-7,8-二氫(qing)吡(bi)啶(ding)并(bing)[2,3-d]嘧(mi)啶(ding)-2-基(ji)(ji))氨基(ji)(ji))-5',6'-二氫(qing)-[3,4'-聯吡(bi)啶(ding)]-1'(2'h)-甲(jia)酸叔丁酯的制備

氬氣保護(hu)下，將(10g，29.06mmol)2-氨基(ji)-6-(1-丁(ding)氧乙烯基(ji))-8-環戊(wu)基(ji)-5-甲(jia)(jia)基(ji)吡(bi)啶并(bing)[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮(tong)(按wo2014183520公(gong)開(kai)方法制備)、碳酸(suan)銫(se)(14.22g，43.75mmol)、pd2(dba)3(2.12g，2.31mmol)、4,5-雙二(er)苯基(ji)膦-9,9-二(er)甲(jia)(jia)基(ji)氧雜蒽(en)(2.69g，4.69mmol)和(he)125.00g二(er)氧六環投入(ru)三口(kou)反(fan)應瓶中，攪(jiao)拌(ban)均勻后加熱至回流，緩(huan)慢滴加原(yuan)(yuan)料4-(6-氯(lv)(lv)吡(bi)啶-3-基(ji))-5,6-二(er)氫吡(bi)啶-1(2h)-羧酸(suan)叔丁(ding)酯(zhi)(10.34g，35.00mmol,購(gou)自鹽城市瑞(rui)康醫藥(yao)化工有限公(gong)司)和(he)二(er)氧六環(65.62g，0.74mol)的混合液(ye)(ye)(滴加時間約(yue)(yue)5h)。滴畢繼續回流攪(jiao)拌(ban)反(fan)應1～1.5h，tlc監控原(yuan)(yuan)料2-氨基(ji)-6-(1-丁(ding)氧乙烯基(ji))-8-環戊(wu)基(ji)-5-甲(jia)(jia)基(ji)吡(bi)啶并(bing)[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮(tong)反(fan)應完全(展開(kai)劑：石油醚：乙酸(suan)乙酯(zhi)＝2:1，原(yuan)(yuan)料rf＝0.6，產物rf＝0.7)，終止反(fan)應。反(fan)應液(ye)(ye)冷(leng)卻至室(shi)溫，過濾(lv)，濾(lv)餅用(yong)二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)(jia)烷17.19g×3洗(xi)滌(di)。將濾(lv)液(ye)(ye)于(yu)65℃減(jian)(jian)壓(ya)濃縮(suo)干。殘(can)留物加入(ru)137.50g二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)(jia)烷溶解(jie)，加入(ru)56.25g純(chun)化水，分液(ye)(ye)，水相再用(yong)68.75g二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)(jia)烷萃取。合并(bing)有機相，無水硫(liu)酸(suan)鈉干燥(zao)，過濾(lv)，濾(lv)餅用(yong)23.44g二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)(jia)烷洗(xi)，濾(lv)液(ye)(ye)于(yu)45℃減(jian)(jian)壓(ya)濃縮(suo)至油狀液(ye)(ye)體。加入(ru)150g丙(bing)酮(tong)溶解(jie)，室(shi)溫攪(jiao)拌(ban)約(yue)(yue)2h，冰水浴攪(jiao)拌(ban)約(yue)(yue)3h。過濾(lv)，濾(lv)餅用(yong)冷(leng)丙(bing)酮(tong)25g×4洗(xi)滌(di)，室(shi)溫減(jian)(jian)壓(ya)干燥(zao)8～10h，得固體約(yue)(yue)14.84g，收率：80～92％，hplc檢測(ce)純(chun)度(du)不低于(yu)90％。esi/ms:[m+h]＝601.43。

步驟2：4-(6-((6-乙酰(xian)基-8-環戊基-5-甲基-7-羰基-7,8-二氫吡啶(ding)并[2,3-d]嘧(mi)啶(ding)-2-基)氨(an)基)吡啶(ding)-3-基)哌啶(ding)-1-甲酸叔丁酯的制備

將6-((6-(1-丁(ding)(ding)氧基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)乙(yi)(yi)烯基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))-8-環戊(wu)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)-5-甲基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)-7-羰基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)-7,8-二(er)(er)(er)氫(qing)(qing)吡(bi)啶(ding)(ding)并(bing)[2,3-d]嘧(mi)啶(ding)(ding)-2-基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))氨基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))-5',6'-二(er)(er)(er)氫(qing)(qing)-[3,4'-聯吡(bi)啶(ding)(ding)]-1'(2'h)-甲酸叔丁(ding)(ding)酯(14.84g，24.69mmol)和75g乙(yi)(yi)酸投入(ru)三口(kou)反(fan)(fan)應(ying)瓶(ping)中(zhong)，通氬氣(qi)(qi)保護。加入(ru)10％pd/c(5g)，氫(qing)(qing)氣(qi)(qi)置換三次，攪拌(ban)下于(yu)50～60℃常壓(ya)加氫(qing)(qing)反(fan)(fan)應(ying)30～32h。hplc法監測中(zhong)間(jian)態剩余量(liang)(6-((6-(1-丁(ding)(ding)氧基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)乙(yi)(yi)烯基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))-8-環戊(wu)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)-5-甲基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)-7-羰基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)-7,8-二(er)(er)(er)氫(qing)(qing)吡(bi)啶(ding)(ding)并(bing)[2,3-d]嘧(mi)啶(ding)(ding)-2-基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))氨基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji))-5',6'-二(er)(er)(er)氫(qing)(qing)-[3,4'-聯吡(bi)啶(ding)(ding)]-1'(2'h)-甲酸叔丁(ding)(ding)酯脫掉正丁(ding)(ding)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)保護但雙鍵未被還原(yuan)的中(zhong)間(jian)體)＜0.3％，終止反(fan)(fan)應(ying)。反(fan)(fan)應(ying)液冷卻至室溫(wen)，體系氬氣(qi)(qi)置換后過(guo)濾(lv)(lv)(lv)，濾(lv)(lv)(lv)餅(bing)用(yong)37.50g二(er)(er)(er)氯甲烷洗滌。將濾(lv)(lv)(lv)液于(yu)65℃減壓(ya)濃縮至干。殘(can)留(liu)物氬氣(qi)(qi)保護用(yong)50g無(wu)水乙(yi)(yi)醇回流打漿0.5h，攪拌(ban)下自(zi)然(ran)冷卻至室溫(wen)，冰浴攪拌(ban)約4h。過(guo)濾(lv)(lv)(lv)，濾(lv)(lv)(lv)餅(bing)用(yong)冷無(wu)水乙(yi)(yi)醇12.50g×2洗滌。所(suo)得濕品加入(ru)二(er)(er)(er)氯甲烷31.25g攪拌(ban)，過(guo)濾(lv)(lv)(lv)不(bu)溶物，濾(lv)(lv)(lv)液攪拌(ban)下緩慢(man)加入(ru)異丙醇118.75g，冰浴攪拌(ban)約3h，過(guo)濾(lv)(lv)(lv)后減壓(ya)干燥8～10h得固體約8.75g，產率：60～72％，hplc檢測純(chun)度不(bu)低于(yu)98％。esi/ms:[m+h]＝547.26。

步驟3：6-乙酰基(ji)(ji)-8-環戊基(ji)(ji)-5-甲基(ji)(ji)-2-((5-(哌啶(ding)(ding)(ding)-4-基(ji)(ji))吡(bi)啶(ding)(ding)(ding)-2-基(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji))吡(bi)啶(ding)(ding)(ding)并[2,3-d]嘧啶(ding)(ding)(ding)-7(8h)-酮羥(qian)乙基(ji)(ji)磺酸鹽的制(zhi)備

將4-(6-((6-乙(yi)(yi)酰基(ji)(ji)(ji)(ji)-8-環戊基(ji)(ji)(ji)(ji)-5-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)-7-羰基(ji)(ji)(ji)(ji)-7,8-二氫吡啶(ding)并[2,3-d]嘧啶(ding)-2-基(ji)(ji)(ji)(ji))氨基(ji)(ji)(ji)(ji))吡啶(ding)-3-基(ji)(ji)(ji)(ji))哌啶(ding)-1-甲(jia)(jia)酸叔丁酯(zhi)(8.75g，15.94mmol)和56.25g無(wu)水甲(jia)(jia)醇投入(ru)三口反(fan)(fan)應(ying)瓶中，攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)均勻。將80％羥(qian)乙(yi)(yi)基(ji)(ji)(ji)(ji)磺酸(8.81g，55.94mmol)和水0.94g溶(rong)于13.75g無(wu)水甲(jia)(jia)醇中，滴(di)(di)加(jia)到上述溶(rong)液(ye)中，溶(rong)液(ye)變澄(cheng)清。滴(di)(di)畢加(jia)熱回流攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)反(fan)(fan)應(ying)3～3.5h，tlc檢測(ce)原(yuan)料(liao)反(fan)(fan)應(ying)完(wan)全(石油(you)醚：乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯(zhi)＝1:1，原(yuan)料(liao)rf＝0.3，產物rf＝0)，終止反(fan)(fan)應(ying)，趁熱過濾(lv)。濾(lv)液(ye)攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)下(xia)滴(di)(di)加(jia)三乙(yi)(yi)胺(4.00g，39.38mmol)，滴(di)(di)畢繼續攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)約(yue)1h，冰浴攪(jiao)(jiao)拌(ban)(ban)(ban)約(yue)3h。過濾(lv)，濾(lv)餅用冷無(wu)水甲(jia)(jia)醇7.19g×2洗滌(di)，40℃減壓干燥6～8h得固體約(yue)7.97g，收率：82～93％，hplc檢測(ce)純度(du)不(bu)低(di)于98％。tof-ms:[m+h]＝447.2503(6-乙(yi)(yi)酰基(ji)(ji)(ji)(ji)-8-環戊基(ji)(ji)(ji)(ji)-5-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)(ji)-2-((5-(哌啶(ding)-4-基(ji)(ji)(ji)(ji))吡啶(ding)-2-基(ji)(ji)(ji)(ji))氨基(ji)(ji)(ji)(ji))吡啶(ding)并[2,3-d]嘧啶(ding)-7(8h)-酮結合一個氫離(li)子(zi)的(de)離(li)子(zi)峰)。該結晶(jing)樣品的(de)x-射線衍射譜(pu)圖見(jian)圖1。該結晶(jing)在(zai)約(yue)4.17(21.17)，8.26(10.69)，9.04(9.77)，10.78(8.20)，12.38(7.14)，14.01(6.32)，18.50(4.79)，18.89(4.70)，20.69(4.29)，21.58(4.11)，23.87(3.73)和28.15(3.17)處有特征峰。dsc譜(pu)圖見(jian)圖2，在(zai)324℃附近有熔融吸熱峰，將此晶(jing)型定(ding)義為i晶(jing)型。經(jing)光照(zhao)、高溫和高濕條件(jian)下(xia)測(ce)試，該晶(jing)型的(de)穩定(ding)性良好。

實施例2：化(hua)合(he)物a和pd-0332991單用(yong)或與氟(fu)維(wei)司群合(he)用(yong)對人乳(ru)腺癌(ai)mcf-7裸小鼠皮下移植瘤的(de)療效。

1受試藥物

藥物(wu)名稱(cheng)：pd-0332991的(de)(de)羥乙基磺酸鹽為(wei)黃色(se)結(jie)晶性粉(fen)末，根據(ju)cn1835951b公開的(de)(de)方法制備；化合(he)物(wu)a的(de)(de)羥乙基磺酸鹽為(wei)白色(se)粉(fen)末，由(you)實施例1制備得到；氟維司(si)群為(wei)白色(se)粉(fen)末，由(you)上海恒瑞醫藥有限(xian)公司(si)提供。

配制方法(fa)：化合物a的羥(qian)(qian)乙基(ji)磺酸鹽(yan)用50mm檸(ning)檬酸+0.5％cmc+0.5％tween80配制；pd-0332991的羥(qian)(qian)乙基(ji)磺酸鹽(yan)用含(han)0.1％tween80的蒸(zheng)餾水配制并稀釋；氟維司(si)群用市售大豆(dou)油配制。

2實驗動物

balb/ca-nude裸(luo)小鼠，6-7周，♀，購自上海靈暢生(sheng)物(wu)科技有限公司。生(sheng)產許可證號(hao)：scxk(滬)2013-0018；動物(wu)合(he)格證號(hao)20。飼養環境：spf級。

3實驗步驟

裸小鼠皮下埋植雌激素緩釋片(0.72mg/片,60天釋放，innovativeresearchofamerica)，第二天接種人乳腺癌mcf-7細胞，待腫瘤生長至100-200mm³后(hou)，將動物隨機分組(d0)。給藥劑量和給藥方案見表(biao)1。每周(zhou)測(ce)2-3次(ci)瘤(liu)體積(ji)(ji)，稱(cheng)鼠重，記錄數據。腫瘤(liu)體積(ji)(ji)(v)計算公(gong)式為：

v＝1/2×a×b²其中(zhong)a、b分別表示長、寬。

t/c(％)＝(t-t0)/(c-c0)×100其(qi)中(zhong)t、c為實驗(yan)結(jie)束時(shi)的腫(zhong)(zhong)瘤(liu)體積(ji)；t0、c0為實驗(yan)開(kai)始時(shi)的腫(zhong)(zhong)瘤(liu)體積(ji)。

4試驗結果

化(hua)合(he)(he)物(wu)a(75mg/kg,po,qd16)顯著(zhu)抑制表(biao)達雌激素受(shou)體人乳腺癌(ai)mcf-7裸(luo)小鼠皮下移植瘤(liu)(liu)的(de)生長，抑瘤(liu)(liu)率為130％，有(you)8/8腫瘤(liu)(liu)部分(fen)消退；參比(bi)藥物(wu)pd-0332991相(xiang)同劑量和方案對(dui)(dui)mcf-7的(de)抑瘤(liu)(liu)率為124％，有(you)7/8腫瘤(liu)(liu)部分(fen)消退；氟(fu)維(wei)司(si)群(1mg/只(zhi)，單(dan)(dan)次皮下注射)對(dui)(dui)mcf-7的(de)抑瘤(liu)(liu)率為25％；化(hua)合(he)(he)物(wu)a、pd-0332991與(yu)氟(fu)維(wei)司(si)群合(he)(he)用(yong)(yong)抑瘤(liu)(liu)率均明(ming)(ming)顯提高(gao)，分(fen)別從單(dan)(dan)用(yong)(yong)化(hua)合(he)(he)物(wu)a、pd-0332991時的(de)130％和124％提高(gao)到148％和143％(p<0.05,與(yu)單(dan)(dan)用(yong)(yong)化(hua)合(he)(he)物(wu)a或pd-0332991比(bi)較)。荷瘤(liu)(liu)小鼠對(dui)(dui)以上藥物(wu)均能很(hen)好耐受(shou)，沒(mei)有(you)明(ming)(ming)顯體重減輕(qing)等癥(zheng)狀發生。相(xiang)比(bi)較，無論是單(dan)(dan)用(yong)(yong)還是對(dui)(dui)氟(fu)維(wei)司(si)群的(de)增效作用(yong)(yong)，化(hua)合(he)(he)物(wu)a和pd-0332991對(dui)(dui)mcf-7的(de)療(liao)效相(xiang)當(dang)。