抗her3抗體、其制法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，具體地說，本發明涉及抗肥R3抗體、其制法及其應用。
【背景技術】
[0002] 肥R3 巧rbB-3、ERBB3、c-erbB-3、c-erbB3、受體酪氨酸蛋白質激酶erbB-3、沈Q IDNO. :41)是編碼表皮生長因子受體巧GFR)酪氨酸激酶家族的一名成員，該家族還包括 肥Rl(又稱為EGFR)、肥R2、和肥R4等。肥R3結構包括結合配體的胞外區，α螺旋的跨膜 區，具有酪氨酸激酶結構域和富含酪氨酸的C端磯酸化位點胞內區。其中胞外區又可分為 I(L1)、II(S1)、111化2)和IV(S2)，結構域I和III是配體結合區，而II和IV結構域是結合配 體后發生構象改變暴露的二聚化結構域。化regulin(HRG)是肥R3的特異性配體，肥R3的 表達和功能受到配體時空表達的影響，HRG通過促進肥R3與肥R家族的其他成員形成異二 聚體來激發胞內信號。因此，它能結合此配體，但是不能經由蛋白質磯酸化將信號傳送入細 胞中。然而，它與具有激酶活性的其它肥R家族成員形成異二聚體。異二聚化導致受體介 導的信號傳導途徑的激活及其胞內域的轉磯酸化。肥R家族成員間的二聚體形成擴大HER3 的信號傳導潛力，并且是一種不僅用于信號多樣化，而且用于信號放大的手段。例如，肥R2/ 肥R3異二聚體在肥R家族成員間經由PI3K和AKT途徑誘導最重要的促有絲分裂信號之一， 已經在許多癌癥，包括前列腺、膀脫、和乳腺腫瘤中報告了此基因的擴增和/或其蛋白質的 過表達。已經表征了編碼不同同等型的可變轉錄剪接變體。一種同等型缺乏膜間區，并且 分泌到細胞外。此形式作用為調控膜結合形式的活性。還已經報告了別的剪接變體，但是 它們尚未徹底表征。
[0003]W097/35885涉及肥R3抗體。W02003/013602涉及肥R活性抑制劑，包括肥R抗 體。W02007/077028和W02008/100624也涉及肥R3抗體。但是本領域中仍然缺乏一種針對 肥R3的靈敏性好特異性強的抗體。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種新型的肥R3特異性抗體或其片段。
[0005] 本發明的另一目的是提供上述抗體或其片段的制備方法和用途。
[0006] 本發明的第一方面，提供了一種抗體的重鏈可變區，所述的重鏈可變區包括W下 Η個互補決定區CDR;
[0007] (1)互補決定區CDR1
[0008]所述互補決定區CDR1 選自；SEQIDNO. :17、沈QIDNO. :23、沈QIDNO. :29 和 沈QIDNO. : 35 ;
[0009] 似互補決定區CDR2
[0010]所述互補決定區CDR2 選自；SEQIDNO. :18、沈QIDNO. :24、沈QIDNO. :30 和 沈QIDNO. : 36 ;
[0011] 做互補決定區CDR3
[0012] 所述互補決定區CDR3 選自；SEQIDNO. :19、沈QIDNO. :25、沈QIDNO. :31 和 沈QIDNO. :37。
[0013] 在另一優選例中，所述重鏈可變區的H個互補決定區CDRl、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 17、SEQIDNO. : 18 和沈QIDNO. : 19 所示。
[0014] 在另一優選例中，所述重鏈可變區的Η個互補決定區CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 23、SEQIDNO. : 24 和沈QIDNO. : 25 所示。
[0015] 在另一優選例中，所述重鏈可變區的Η個互補決定區CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 29、SEQIDNO. : 30 和沈QIDNO. : 31 所示。
[0016] 在另一優選例中，所述重鏈可變區的Η個互補決定區CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 35、SEQIDNO. : 36 和沈QIDNO. : 37 所示。
[0017] 在另一優選例中，所述重鏈可變區具有沈QIDNO.:沈QIDNO. :2、6、10或12所 示的氨基酸序列。
[0018] 本發明的第二方面，提供了一種抗體重鏈，所述抗體重鏈具有如權利要求1所述 的抗體的重鏈可變區。
[0019] 在另一優選例中，所述抗體重鏈具有SEQIDNO. :42、43、44或45所示的氨基酸序 列。
[0020] 本發明的第Η方面，提供了一種抗體的輕鏈可變區，其特征在于，所述的輕鏈可變 區包括W下Η個互補決定區CDR;
[0021] (1)互補決定區CDR1'
[0022] 所述互補決定區CDR1' 選自；SEQIDNO. :20、沈QIDNO. :26、沈QIDNO. :32 和 沈QIDNO. : 38 ;
[0023] (2)互補決定區CDR2'
[0024]所述互補決定區CDR2' 選自；SEQIDNO. :21、沈QIDNO. :27、沈QIDNO. :33 和 沈QIDNO. : 39 ;
[00巧](3)互補決定區CDR3'
[0026]所述互補決定區CDR3' 選自；SEQIDNO. :22、沈QIDNO. :28、沈QIDNO. :：34 和 沈QIDNO. : 40。
[0027] 在另一優選例中，所述輕鏈可變區的Η個互補決定區CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 20、SEQIDNO. : 21和沈QIDNO. : 22所示。
[0028] 在另一優選例中，所述輕鏈可變區的Η個互補決定區CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 26、SEQIDNO. : 27和沈QIDNO. : 28所示。
[0029]在另一優選例中，所述輕鏈可變區的Η個互補決定區CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 32、SEQIDNO. : 33和沈QIDNO. : 34所示。
[0030]在另一優選例中，所述輕鏈可變區的Η個互補決定區CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 38、SEQIDNO. : 39和沈QIDNO. : 40所示。
[0031] 在另一優選例中，所述輕鏈可變區具有SEQIDNO. :4、8、12或16所示的氨基酸序 列。
[0032] 本發明的第四方面，提供了一種抗體的輕鏈，所述的輕鏈具有如權利要求3所述 的抗體的輕鏈可變區。
[0033] 在另一優選例中，所述抗體輕鏈具有SEQIDNO. :46、47、48或49所示的氨基酸序 列。
[0034] 在另一優選例中，所述重鏈的恒定區和/或所述輕鏈的恒定區是人源的。
[0035] 本發明的第五方面，提供了一種特異性結合肥R3的單克隆抗體，其特征在于，所 述單克隆抗體具有W下特性：
[0036] (1)與肥R3蛋白親和力常數Μ> 1X10";
[0037] 似結合肥R3胞外區的DI或Dili結構域。
[0038] 在另一優選例中，所述單克隆抗體抑制肥R3與其配體化regulin結合的ICs。值 《3nM。
[0039] 在另一優選例中，所述單克隆抗體與肥R3的結合位點包括選自下組的一個或多 個位點：第125位的絲氨酸、第150位天冬氨酸、151位精氨酸和第467位組氨酸。
[0040] 在另一優選例中，所述單克隆抗體具有：
[0041] (1)如權利要求1所述的重鏈可變區；和/或
[0042] 似如權利要求3所述的輕鏈可變區。
[0043] 在另一優選例中，所述單克隆抗體具有：
[0044] (1)如權利要求2所述的重鏈；和/或
[0045] 似如權利要求4所述的輕鏈。
[0046] 在另一優選例中，所述單克隆抗體包括：單鏈抗體、雙鏈抗體、嵌合抗體（如人鼠 嵌合抗體）、鼠源抗體、人源化抗體或其組合。
[0047] 在另一優選例中，所述的單克隆抗體，為IgG(IgGl)型抗體。
[0048] 本發明的第六方面，提供了一種重組蛋白，所述的重組蛋白具有：
[0049](i)如權利要求1所述的抗體的重鏈可變區、如權利要求2所述的抗體重鏈、如權 利要求3所述的抗體的輕鏈可變區、如權利要求4所述的抗體輕鏈、或如權利要求5所述的 單克隆抗體；W及
[0050](ii)任選的協助表達和/或純化的標簽序列。
[005。 在另一優選例中，所述的標簽序列包括細is標簽。
[0052] 在另一優選例中，所述的重組蛋白特異性抗肥R3。
[0053] 在另一優選例中，所述的重組蛋白選自下組：
[0054] (a)具有SEQIDNO. :42-49所示的氨基酸序列的多膚；
[00巧]化）將（a)中的氨基酸序列經過一個或多個（如1-20個）氨基酸殘基的取代、缺 失或添加而形成的、由（a)衍生的且特異性抗肥R3的多膚。
[0056] 本發明的第走方面，提供了一種免疫偶聯物，該免疫偶聯物含有：
[0057] (a)載體部分，所述載體部分含有如權利要求1所述的抗體的重鏈可變區、如權利 要求2所述的抗體重鏈、如權利要求3所述的抗體的輕鏈可變區、如權利要求4所述的抗體 輕鏈、或如權利要求5所述的單克隆抗體或權利要求7所述的重組蛋白；和
[0058] 化）選自下組的偶聯部分；可檢測標記物、藥物、毒素、細胞因子、放射性核素、或 酶。
[0059] 在另一優選例中，所述偶聯物選自；英光或發光標記物、放射性標記物、MRI(磁共 振成像）或CT(電子計算機X射線斷層掃描技術）造影劑、或能夠產生可檢測產物的酶、放 射性核素、生物毒素、細胞因子（如IL-2等）、抗體、抗體化片段、抗體scFv片段、金納米顆 粒/納米棒、病毒顆粒、脂質體、納米磁粒、前藥激活酶（例如，DT-必肌黃酶值TD)或聯苯 基水解酶-樣蛋白質度?l))、化療劑（例如，順笛）或任何形式的納米顆粒等。
[0060]本發明的第八方面，提供了一種多核巧酸，它編碼選自下組的蛋白質：
[0061]如本發明第一方面所述的抗體的重鏈可變區、如本發明第二方面所述的抗體重 鏈、如本發明第Η方面所述的抗體的輕鏈可變區、如本發明第四方面所述的抗體輕鏈、或如 本發明第五方面所述的單克隆抗體或本發明第六方面所述的所述的重組蛋白。
[0062]在另一優選例中，所述的多核巧酸具有沈QIDNO. :1、3、5、7、9、11、13、15或50-57 所示的DM序列。
[0063]本發明的第九方面，提供了一種載體，它含有本發明第八方面所述的多核巧酸。
[0064]在另一優選例中，所述的載體包括；細菌質粒、瞻菌體、酵母質粒、植物細胞病毒、 哺乳動物細胞病毒如腺病毒、逆轉錄病毒、或其他載體。
[0065]本發明的第十方面，提供了一種遺傳工程化的宿主細胞，它含有本發明第九方面 所述的載體或基因組中整合有本發明第八方面所述的多核巧酸。
[0066]本發明的第十一方面，提供了一種制備重組多膚的制備方法，該方法包含：
[0067] (a)在適合表達的條件下，培養本發明第十方面所述的宿主細胞；
[0068] 化）從培養物中分離出重組多膚，所述的重組多膚是本發明第五方面所述的所述 的單克隆抗體或本發明第六方面所述的所述的重組蛋白。
[0069]本發明的第十二方面，提供了一種藥物組合物，所述組合物中含有：
[0070](i)如權利要求1所述的抗體的重鏈可變區、如權利要求2所述的抗體重鏈、如權 利要求3所述的抗體的輕鏈可變區、如權利要求4所述的抗體輕鏈、或如權利要求5所述的 單克隆抗體或權利要求7所述的重組蛋白；W及
[007