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一種血管緊張素轉化酶抑制肽的提取方法與流程

文(wen)檔序(xu)號:12412491閱讀(du):來源:國知局

技術特征:

1.一種(zhong)血(xue)管緊張素轉化(hua)酶抑制肽(tai)的提取方法,其特(te)征在于,具體(ti)步驟為:

S1、取酶解(jie)液凍(dong)干粉,溶(rong)(rong)于pH為(wei)8.3、濃(nong)度為(wei)0.1mol/L的(de)(de)硼酸鹽緩沖溶(rong)(rong)液中,制成濃(nong)度為(wei)20~100g/L的(de)(de)酶解(jie)液溶(rong)(rong)液;

所述酶(mei)解液凍干粉(fen)為具(ju)有血管緊張素轉化酶(mei)抑制活性的原(yuan)料經(jing)蛋白(bai)酶(mei)水解制得(de)(de)的酶(mei)解液,經(jing)超濾分(fen)級、凍干制得(de)(de);

所述硼酸鹽緩沖溶液中含有(you)濃(nong)度(du)為0.1~0.3mol/L的NaCl;

S2、取固(gu)(gu)定化(hua)血管緊(jin)張(zhang)素(su)轉化(hua)酶(mei)與步驟S1制得的酶(mei)解(jie)液(ye)溶(rong)液(ye)按質量體(ti)積比1:10~20(g/mL)的比例混合,30℃恒溫水浴震蕩(dang)50~120min,抽濾、采用(yong)pH為(wei)8.3的0.1mol/L硼酸鹽緩沖溶(rong)液(ye)沖洗(xi)干凈,收集固(gu)(gu)相,得到(dao)吸(xi)附有血管緊(jin)張(zhang)素(su)轉化(hua)酶(mei)抑制肽的固(gu)(gu)定化(hua)血管緊(jin)張(zhang)素(su)轉化(hua)酶(mei);

S3、將步驟(zou)S3制得的吸(xi)附(fu)有血管緊張素轉化酶(mei)抑制肽的固定化血管緊張素轉化酶(mei)加入到pH為(wei)7、濃度(du)為(wei)2mol/L的NaCl溶液(ye)中(zhong),30℃水(shui)浴30~120min,洗(xi)脫(tuo)(tuo)血管緊張素轉化酶(mei)吸(xi)附(fu)的抑制肽,收集洗(xi)脫(tuo)(tuo)液(ye),凍干,獲得血管緊張素轉化酶(mei)抑制肽。

2.根據權利要求(qiu)1所(suo)(suo)述(shu)(shu)血(xue)管緊張素(su)轉(zhuan)(zhuan)化酶(mei)抑(yi)制(zhi)肽的提取方法,其特征在于(yu),步驟S1所(suo)(suo)述(shu)(shu)具(ju)有血(xue)管緊張素(su)轉(zhuan)(zhuan)化酶(mei)抑(yi)制(zhi)活性的原料經蛋(dan)白(bai)酶(mei)水解制(zhi)得的酶(mei)解液的具(ju)體制(zhi)備(bei)過程為:

取(qu)具有(you)血(xue)管(guan)緊張素轉化(hua)酶(mei)抑(yi)制活性的(de)原料(liao)凍干(gan)制得凍干(gan)粉,將(jiang)所述凍干(gan)粉與水(shui)按1:10~20(g/mL)的(de)質量體積比混合(he),在45℃水(shui)浴中(zhong)預熱5~15min;

調節溶(rong)液pH至7.0,加入中(zhong)性蛋白酶(mei)(mei)的加酶(mei)(mei)量為2500U/g后(hou)開始反(fan)應,反(fan)應過程中(zhong)通過滴加標(biao)準(zhun)堿溶(rong)液或標(biao)準(zhun)酸溶(rong)液,維持反(fan)應液pH為7.0不變(bian),水解2~3h后(hou),沸水浴滅酶(mei)(mei)10~20min,冷(leng)卻;在4℃、10000rpm條件下,離(li)心20~30min,取上清液,得(de)到酶(mei)(mei)解液。

3.根(gen)據權利要求2所述(shu)血管緊張素轉(zhuan)化酶抑制(zhi)肽的提取方法,其特征在于,所述(shu)具(ju)有血管緊張素轉(zhuan)化酶抑制(zhi)活(huo)性的原料(liao)為水泡蛾(e)螺(luo)。

4.根據權(quan)利(li)要求1所述(shu)(shu)血(xue)管緊張(zhang)素轉化(hua)(hua)酶抑制肽的提取方法,其(qi)特征在于,步驟S2所述(shu)(shu)固定化(hua)(hua)血(xue)管緊張(zhang)素轉化(hua)(hua)酶為SBA-15固定化(hua)(hua)血(xue)管緊張(zhang)素轉化(hua)(hua)酶;具體(ti)制備方法為:

取介孔分子篩SBA-15與(yu)血(xue)(xue)管緊張素轉化(hua)酶(mei)溶液按質量體積(ji)比1:5~20(g/mL)的(de)比例(li)混合,45~50℃,在水(shui)浴鍋中水(shui)浴震蕩30~40min,至(zhi)反(fan)應(ying)液中的(de)蛋白含量不變,反(fan)應(ying)結束;抽濾、清洗、除(chu)去未吸(xi)附結合的(de)血(xue)(xue)管緊張素轉化(hua)酶(mei),得到SBA-15固定化(hua)血(xue)(xue)管緊張素轉化(hua)酶(mei);

所述血(xue)管緊張素轉化(hua)酶溶(rong)液采用7.8~9.3硼酸(suan)鹽緩沖(chong)溶(rong)液配置,酶活(huo)為0.17U/mL。

5.根據權利要求4所述血管緊張素轉化酶抑制肽的提取方法,其特征在于,所述介孔分子篩SBA-15為通過直接或間接吸附螯合的方式制得的螯合有Zn2+的SBA-15分子篩;

所述直接螯合的具體操(cao)作為:

將介孔分子篩SBA-15與濃度為0.05mol/L的ZnSO4水溶液按質量體積比1:10g/ml的比例混合,30~40℃水浴震蕩45~65min,獲得直接螯合Zn2+的SBA-15分(fen)子篩;

所述間接螯合(he)的具(ju)體操作(zuo)為:

將介(jie)孔(kong)分子篩(shai)SBA-15加入到無水乙醇(chun)中(zhong),向所述無水乙醇(chun)中(zhong)加入3-(異丁烯(xi)酰氧)丙基(ji)三甲氧基(ji)硅(gui)烷,30℃水浴震蕩10~20h,反應結束后抽濾,收(shou)集固體物(wu)質,洗凈;

所述(shu)介(jie)孔分子(zi)篩SBA-15與(yu)無(wu)水乙醇(chun)、3-(異丁烯酰氧(yang))丙基三甲(jia)氧(yang)基硅烷的質量體積比為1:350~400:20~30(g/mL/mL);

連接亞氨基二乙(yi)酸,將所得固(gu)體(ti)物(wu)質(zhi)與濃度為0.6~0.8mol/L的亞氨基二乙(yi)酸溶液按質(zhi)量體(ti)積(ji)比1:10(g/ml)的比例混合,30~40℃水(shui)浴震(zhen)蕩反(fan)應,反(fan)應結(jie)束后抽(chou)濾,再(zai)次收(shou)集(ji)固(gu)體(ti)物(wu)質(zhi);

將再次收集的固體物質與濃度為0.05mol/L的ZnSO4溶液按質量體積比1:10(g/mL)的比例混合,30~40℃水浴震蕩60~90min,獲得間接螯合Zn2+的SBA-15分子篩。

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