專利名稱：血管緊張素轉換酶活力測定方法及試劑盒的制作方法
技術領域：
本發明屬生物化學檢測領域，特別是一種血管緊張素轉換酶活力測定方法及試劑盒。
血管緊張素轉換酶(ACE)是腎素—血管緊張素系統的關鍵酶、催化血管緊張素II的生成。ACE的活性與體內血管緊張素II的水平成正比，因此，測定ACE的活力可以了解血管緊張素II的水平，監測血管緊張素抑制劑(ACEI)的治療效果。1985年至今，國外Buttery等對ACE的活性自動化測定方法進行了廣泛地研究，其中較簡便、靈敏的方法已被Slgma發展為商品試劑盒。在這個方法中，人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸(FAPGG)經ACE水解造成340nm吸光度下降，通過檢測340nm吸光度變化度量ACE的活性。
然而，Slgma商品試劑盒的靈敏度較低，不能滿足臨床診斷的需要。這也是在此以前ACE測定未被廣泛應用于臨床的原因。國內關于ACE測定方面的研究尚是空白。
本發明的目的在于提供一種血管緊張素轉換酶(ACE)活力測定方法及試劑盒。
本發明采用如下所述的技術解決方案血管緊張素轉換酶(ACE)活力測定方法首先把人工合成底物FAPGG經ACE水解生成的FAP與顯色染料反應得到一黃色化合物；然后再測得所述的黃色化合物在400-410nm處的吸光度增加率ΔA，最后根據公式
計算出血管緊張素轉換酶(ACE)活力。
式中 TV—反應總體積SV—樣本體積ε—黃色化合物摩爾吸光系數d—光徑(cm)血管緊張素轉換酶(ACE)活力測定試劑盒所述試劑盒由顯色染料、FAPGG，Boric acid、Cholic acid組成，其中顯色染料1mmol/L，FAPGG≥1.5mmol/L，Boric acid 80mmol/L，Cholic acid 8mmol/L。
本發明的優點在于1、由于使用了顯色染料，使測定波長由340nm移到400-410nm；2、FAPGG的濃度大于或等于1.5mmol/L；3、測定方法為動力法；4、不測定底物(FAPGG)的減少，而是測定產物(黃色化合物)的增多，避免了分析儀器對底物濃度的限制(Slgma的方法中，FAPGG濃度必須小于1.5mmol/L)，使底物濃度充分提高，反應速度得以接近最大反應速度。因而極度大地提高了試驗的靈敏度(Slgma的靈敏度為0.01A/U.L，本發明的靈敏度為0.1A/U.L)，拓寬了反應線性范圍(Slgma的線性反應范圍為150U/L，本發明的線性反應范圍為300U/L)；5、簡便易行、易于推廣。
下面結合實施例對本發明做進一步描述實施例一血管緊張素轉換酶(ACE)活力測定試劑盒由顯色染料(1-[2-chloroethyl]benzyl-4-oitroallide)、FAPGG、Boric acid、cholic acid組成，其中，顯色染料2mmol/L，FAPGG 1.6mmol/L，Boric acid 85mmol/L，Cbolic acid 9mmol/L。
血管緊張素轉換酶(ACE)活力測定方法首先把人工合成底物FAPGG經ACE水解生成的FAP與前述的顯色染料反應得到黃色化合物(FAP-benzyl-4-nitroallide)，然后再測得所述黃色化合物在408nm處的吸光度增加率ΔA，再根據公式
計算出血管緊張素轉換酶(ACE)活力。(公式中TV為反應總體積，SV為樣本體積，ε為黃色化合物摩爾吸光系數，d為光徑(cm))。
權利要求
1.一種血管緊張素轉換酶活力測定方法，其特征在于先把人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸經血管緊張素轉換酶水解生成的n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酸與顯色染料反應得到一黃色化合物，再測得所述的黃色化合物在400-410nm處的吸光度增加率ΔA，再根據公式ACE(U/L)=ΔA×TV×106SV×ϵ×d]]>計算出血管緊張素轉換酶活力。其中TV——反應總體積SV——樣本體積ε——黃色化合物摩爾吸光系數d——光徑(cm)
2.一種血管緊張素轉換酶活力測定試劑盒，其特征在于所述的試劑盒由顯色染料、人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸、硼酸、膽酸組成，其中顯色染料1-5mmol/L，人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸≥1.5mmol/L，硼酸80-100mmol/L，膽酸8-16mmol/L。
全文摘要
本發明涉及一種血管緊張素轉換酶活力測定方法及試劑盒。其測定方法是先把人工合成底物n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸經血管緊張素轉換酶水解生成的n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酸與顯色染料反應得到一黃色化合物,再測得所述的黃色化合物在400—410nm處的吸光度增加率,再根據公式計算出血管緊張素轉換酶活力。試劑盒由顯色染料、人工合成底物n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸、硼酸、膽酸組成。本發明簡便易行、易于推廣、靈敏度高。
文檔編號G01N21/25GK1258004SQ9812172
公開日2000年6月28日 申請日期1998年12月21日 優先權日1998年12月21日
發明者王太重 申請人:王太重