一種重復性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種血管緊張素轉化酶檢測試 劑盒。
【背景技術】
[0002] 血管緊張素轉化酶（Angiotensin-Converting Enzyme, ACE, EC 3. 4. 15. 1， 系統命名為肽酰二肽水解酶，是一種哺乳動物組織中普遍存在的，含鋅離子的膜結合 外肽酶(羧基端二肽)，催化血管緊張素 I水解生成具有血管收縮作用的血管緊張素 II 或水解具有血管收縮功能的緩激肽生成苯丙-精二肽，在食品和藥品行業廣泛使用。 自1898年發現腎素以來，有關腎素-血管緊張素系（renin-angiotensin system, RAS 或 renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)和激肽釋放酶-激肽系統 (Kallikrein-Kinin System, KKS)的研宄已進行了一百多年，這兩個系統主要通過ACE 對血壓、電解質、體液平衡和心血管系統發育等控制而間接發揮作用，為此，RAS和KKS在 心臟和腎臟疾病中起著至關重要的作用，它所顯示的作用和功能已遠遠超出了人們的設 想。目前 ACEI (Angiotensin-Converting Enzyme inhibitors)已經成為急性心肌梗死 和心力衰竭治療的一類標準藥物(如：卡托普利captopril、依那普利enalapril、西拉普利 cilazapril、貝拉普利cilazapril、賴諾普利lisinopril、雷米普利ramipril)。然而長 期使用ACEI藥物會出現咳嗽、腎功能減退、蛋白尿、高鉀血癥、低血壓、肝功能異常、味覺 和腸胃功能紊亂、皮瘆、血管神經性水腫等不良反應。
[0003] 1954年，Leonard T. Skeggs博士從馬血衆中首次發現ACE，并發現此酶能催化血 管緊張素 I水解去掉羧基端二肽（His-Leu)生成具有血管收縮作用的血管緊張素 II。Ng和 Vane發現體內的ACE催化循環系統（RAS和KKS)定位在肺中，此結果后來被很多研宄驗 證。
[0004] 2000年，在研宄和尋找與心衰相關的新基因時，兩個研宄小組各自采用不同的方 法從特發性擴張性心肌病病人的心臟標本和人淋巴瘤標本中克隆得到同1個新基因，并 分別命名為ACE2和ACEH，隨后統一稱為ACE2。它是迄今為止發現的ACE的第一個同類 酶。在來源分布上，ACE在人體廣泛分布，而ACE2有一定的組織特異性，主要存在于心臟和 腎臟的動脈、小動脈和小靜脈，腎小管內皮，及腎內動脈和冠狀動脈的平滑肌細胞及胃腸系 統。Gembardt等報道ACE2在鼠的肺臟中也有存在。
[0005] ACE通常以三種形式存在，它們是一個基因的不同剪接產物。異構體I在組織 中普遍存在，稱為體細胞ACE (somatic ACE, sACE)，含有1306個氨基酸殘基。異構體 II和異構體III表達于睪丸組織和成熟的精子細胞中，稱為睪丸ACE (testic ACE, tACE)， 分別含有732個氨基酸和739個氨基酸殘基。ACE2由805個氨基酸組成，表觀分子量 120X103Da，其中包括1個由17個氨基酸組成的N-末端信號肽區，1個位于274~378 位氨基酸的金屬蛋白酶鋅結合區HEXXH和1個錨定在細胞膜上的C-末端。ACE2與ACE 在金屬蛋白酶的催化結構域約有42%的同源性。sACE由1306個氨基酸組成，表觀分子量 149X103Da，其中包括N端信號肽30個氨基酸、兩個同源的催化活性中心（N-catalytic domain)和（C-catalyticdomain)、親脂跨膜區1257~1276位氨基酸和細胞內結構域組 成。tACE由732個氨基酸組成，只含1個催化活性中心，其中異構體II表觀分子量為 80X103Da，異構體II表觀分子量 83X103Da。異構體II除了信號肽和N端與sACE稍有差 異，從68個氨基酸殘基開始，它們的序列完全相同。異構體III與異構體II的N完全相同，但 第657個氨基酸開始就有所差異。
[0006] 目前測定血清ACE的方法有放射性核素法、分光光度法、熒光法、毛細管膠束電動 色譜法。放射性核素法易受放射性核素的污染，不適于醫院常規應用。分光光度法操作繁 瑣，無法用于臨床日常測定。熒光法、毛細管膠束電動色譜法由于受到設備限制，無法廣 泛應用。用高效液相色譜法測定組織ACE酶活性，敏感性和特異性大大高于常用的紫外 分光光度法。但是由于受設備限制，推廣難度較大。
[0007] 血管緊張素轉化酶檢測試劑盒（比色法）檢測原理為在ACE催化下，血管緊張素 I 轉化為血管緊張素 II，并使合成底物裂解為氨基酸和二肽。340nm檢測裂解反應，可見吸光 度相應減低。
[0008] 血管緊張素轉化酶檢測試劑盒（比色法）是一種無需預處理樣本，技術和設備要 求不高，而精密度和特異性更高的分析方法，由于該方法不需要昂貴的設備，可以實現自動 化，且可測定大量標本，因此受到臨床廣泛推廣。但是普通的血管緊張素轉化酶檢測試劑由 于重復性不好，會使該試劑的準確性受到影響，不利于對檢測結果的判斷，從而造成誤診的 后果。

【發明內容】

[0009] 針對于常規的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒存在的問題，本發明提供了一種重復 性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒（比色法)，該試劑盒與常規的血管緊張素轉化酶檢測 試劑盒相比，重復性比常規的檢測試劑盒要好，但穩定性和準確度不受影響，有利于提高試 劑的重復性。
[0010] 本發明是通過以下措施實現的： 一種重復性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒（比色法)，包括組分R，組分原料含量如 下： 組分R : FAPGG ( N-[3-(2-呋喃基）丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸） 0· 5mmol/L 氯化鈉 300 mmol/L 硼酸鹽緩沖液（PH 8. 2) 80mM AE0-9 0. 1%-1°/〇 本發明的有益效果： 本發明提供的重復性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒（比色法)，通過在組分中加入 AE0-9,通過分子中不同部分分別對于兩相的親和，使兩相均將其看作本相的成分，分子排 列在兩相之間，使兩相的表面相當于轉入分子內部。從而降低表面張力。由于兩相都將其 看作本相的一個組分，就相當于兩個相與表面活性劑分子都沒有形成界面，就相當于通過 這種方式部分的消滅了兩個相的界面，就降低了表面張力和表面自由能，從而解決了試劑 重復性不好這一難題，卻不會對試劑的穩定性和準確度產生影響，有利于該試劑在市場中 進一步的推廣。
【附圖說明】
[0011] 圖1為實施例2檢測結果與實施例1檢測結果相關性； 圖2為實施例3檢測結果與實施例1檢測結果相關性； 圖3為實施例4檢測結果與實施例1檢測結果相關性。
【具體實施方式】
[0012] 為了更好的理解本發明，下面結合具體實施例來進一步說明。
[0013] 實施例1 組分R : FAPGG 0.5mmol/L 氯化鈉 300 mmol/L 硼酸鹽緩沖液（PH 8. 2) 80mM 本實施例描述的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒（比色法)，在使用時，其測定方法是采 用自動生化分析儀，如東芝120自動分析儀，操作如圖：
【主權項】
1. 一種重復性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒，包括以下含量的組分： FAPGG 0. 5mmol/L 氯化鈉 300mmol/L 硼酸鹽緩沖液，PH8. 2 80mM AE0-9 0. 1%-1°/〇 。
【專利摘要】本發明提供了一種重復性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒，包括以下含量的組分：FAPGG， 0.5mmol/L ；氯化鈉，300 mmol/L；硼酸鹽緩沖液，PH 8.2，80mM；AEO-9；0.1%-1% ；采用本發明提供的試劑盒檢測血管緊張素轉化酶克服了現有技術中重復性差的缺陷。
【IPC分類】G01N21-78
【公開號】CN104792779
【申請號】CN201510169134
【發明人】譚柏清, 董雯, 甘宜梧, 王綺, 包興艷, 肖慧
【申請人】山東博科生物產業有限公司
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年4月10日