本發明屬(shu)于生物技術(shu)領域，尤(you)其涉(she)及一種(zhong)胡蘿卜(bu)葉蛋白的制備方法。

技術背景

胡蘿卜，別名(ming)紅(hong)蘿卜、丁香蘿卜、葫蘆(lu)菔金，又被稱為(wei)胡蘆(lu)菔、紅(hong)菜(cai)頭、黃蘿卜等，有地下“小人參”之稱，是(shi)傘形二年(nian)生草本植物，以呈肉質的根作為(wei)蔬(shu)菜(cai)來食用。

胡(hu)蘿卜葉叢生于短縮(suo)莖上，為三回羽狀復葉。葉柄(bing)細(xi)長，葉色濃(nong)綠，葉面積小，占胡(hu)蘿卜總(zong)體的(de)40%以上。

胡蘿卜的葉子的功效

1、胡蘿卜(bu)葉(xie)子(zi)(zi)可以(yi)治(zhi)便(bian)秘:胡蘿卜(bu)葉(xie)子(zi)(zi)中有(you)一些葉(xie)綠素、膳食(shi)纖維以(yi)及葉(xie)酸存(cun)在，另(ling)外還有(you)多(duo)種維生素，人(ren)們(men)食(shi)用(yong)(yong)胡蘿卜(bu)葉(xie)子(zi)(zi)以(yi)后(hou)，會加快(kuai)胃腸(chang)的運(yun)動，也能讓人(ren)體(ti)生成的大便(bian)軟化，減少(shao)它們(men)在人(ren)體(ti)中積存(cun)的時間，讓大便(bian)快(kuai)速排(pai)出體(ti)外，從(cong)而也就起(qi)到了緩解和治(zhi)療便(bian)秘的作用(yong)(yong)。

2、胡蘿(luo)卜(bu)葉子可理氣止(zhi)痛(tong):理氣止(zhi)痛(tong)也是胡蘿(luo)卜(bu)葉子的(de)(de)重(zhong)要功(gong)效，綜可以(yi)用于人(ren)類的(de)(de)脘腹疼痛(tong)的(de)(de)治(zhi)療，具(ju)體治(zhi)療方法是把干燥以(yi)后的(de)(de)胡蘿(luo)卜(bu)葉子加三十到六十克，另(ling)入(ru)適量的(de)(de)清水，慢慢煎制，煎好藥液(ye)進(jin)行過(guo)濾，一(yi)天(tian)飲用一(yi)次，連用七天(tian)止(zhi)痛(tong)效果出色。

3、胡(hu)蘿卜(bu)(bu)葉(xie)子(zi)可以(yi)(yi)利(li)水(shui):利(li)水(shui)也是胡(hu)蘿卜(bu)(bu)葉(xie)子(zi)的(de)重工功效之一(yi)，它可以(yi)(yi)緩解人類的(de)浮腫和小便不(bu)利(li)以(yi)(yi)及淋痛等多(duo)種疾(ji)病的(de)癥狀，也能預防這些疾(ji)病的(de)發生，想讓胡(hu)蘿卜(bu)(bu)葉(xie)子(zi)起到利(li)水(shui)的(de)作(zuo)用，除(chu)了可以(yi)(yi)煎制飲用以(yi)(yi)外，還可以(yi)(yi)把(ba)它切成碎(sui)末以(yi)(yi)后(hou)放在鍋(guo)中蒸熟后(hou)當配菜食(shi)用。

因此，胡蘿(luo)卜葉具(ju)有很重要的食用(yong)和(he)藥用(yong)價值。但現(xian)實(shi)生活中常被廢棄掉或做為飼料，十分(fen)可惜(xi)。

胡蘿卜葉的(de)粗蛋(dan)白含量可達全葉干重的(de)45.65%，是一種很好的(de)植(zhi)物蛋(dan)白原(yuan)料，目前(qian)尚無對胡蘿卜葉蛋(dan)白利用的(de)報(bao)道(dao)。

技術實現要素：

本發明的(de)目的(de)在(zai)于針對現有技術中存在(zai)的(de)不(bu)足(zu)，提(ti)供了(le)一種胡(hu)蘿卜葉蛋白的(de)制備(bei)方法，其(qi)特征在(zai)于，是(shi)通過(guo)以下步驟實現的(de)：

(1) 打(da)漿、酶(mei)解(jie)、過濾(lv)：采用料液比(bi)1: 3-5，用打(da)漿機將洗凈瀝干的胡蘿(luo)卜葉打(da)漿3-5min，然后(hou)(hou)加入(ru)（胡蘿(luo)卜葉漿質量(liang)0.1-0.3%）蛋白酶(mei)充分攪(jiao)拌(ban)后(hou)(hou)靜置1-2 h 進行酶(mei)解(jie)后(hou)(hou)， 用 800-2000 目濾(lv)網過濾(lv)取上(shang)清液備用。

（2）加熱(re)、發酵(jiao)：將(1) 所取(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)液(ye)(ye)迅速放(fang)入沸水(shui)中加熱(re)到40-45℃后加入保加利亞乳(ru)酸(suan)桿菌((1) 所取(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)液(ye)(ye)質量(liang)0.01-0.03%)、嗜(shi)熱(re)鏈球(qiu)菌((1) 所取(qu)(qu)上(shang)清(qing)(qing)液(ye)(ye)質量(liang)0.01-0.03%)、在(zai)密閉條件下發酵(jiao) 36-48 小時。

（3）膜(mo)分(fen)(fen)離(li)：將經（2）發酵過的(de)胡蘿卜葉液用10000-50000 道(dao)爾(er)頓膜(mo)超濾，分(fen)(fen)離(li)出乳清溶(rong)液和蛋白(bai)溶(rong)液。

（4）吸附、酶氧化(hua)脫色：將經（3）分(fen)離(li)出(chu)的蛋(dan)白溶液中放入活性炭粉(fen)吸附5-10 min，然后過濾將活性炭粉(fen)清除，再加入( 蛋(dan)白溶液質(zhi)量(liang)0.3-0.5%) 脂肪氧合酶充分(fen)攪拌后靜(jing)置1-2 h 進行酶解(jie)。

（5）干(gan)燥：將經(jing)（4）吸附、酶氧化脫(tuo)色(se)后的胡(hu)蘿卜(bu)葉蛋白溶液采用真空冷凍干(gan)燥制得(de)白色(se)胡(hu)蘿卜(bu)葉蛋白粉。凍干(gan)工藝參數：物料厚度(du)8-9 mm，預凍溫(wen)度(du)-35--40℃，預凍時間2-2.5h，升華(hua)時加熱板溫(wen)度(du)45-50℃，干(gan)燥倉(cang)工作壓力22-26Pa，解析(xi)時加熱板溫(wen)度(du)60-65℃。

步驟（1）中的蛋白酶含量為胡蘿卜葉漿質量的0.1-0.3%。

步驟(zou)（2）中保加(jia)利亞乳酸桿菌(jun)含量(liang)(liang)為所(suo)取步驟(zou)(1) 上(shang)清液質(zhi)量(liang)(liang)0.01-0.03%、嗜熱鏈球菌(jun)含量(liang)(liang)為步驟(zou)(1) 所(suo)取上(shang)清液質(zhi)量(liang)(liang)0.01-0.03%。

步驟（4）中脂肪氧合(he)酶含量為蛋白溶液質量的(de)0.3-0.5%。

本發(fa)明的(de)優(you)點 ：本發(fa)明以胡(hu)(hu)蘿(luo)(luo)卜(bu)葉(xie)(xie)為原料經→打漿→酶(mei)解(jie)→過(guo)濾(lv)→加熱→發(fa)酵(jiao)→膜分(fen)離→吸附→酶(mei)氧(yang)化(hua)脫色→真空冷(leng)凍干燥，得到的(de)胡(hu)(hu)蘿(luo)(luo)卜(bu)葉(xie)(xie)蛋(dan)白的(de)提取率為50.32%，胡(hu)(hu)蘿(luo)(luo)卜(bu)葉(xie)(xie)蛋(dan)白得率為7.45%，胡(hu)(hu)蘿(luo)(luo)卜(bu)葉(xie)(xie)蛋(dan)白的(de)顏(yan)色為白色，無草腥味，蛋(dan)白質(zhi)量(liang)分(fen)數為63.24%。

具體實施方式

實施例1

(1) 打(da)漿(jiang)、酶(mei)解、過濾：采用料液比1: 3，用打(da)漿(jiang)機將洗凈瀝干(gan)的(de)胡蘿卜葉(xie)打(da)漿(jiang)3min，然后加入（胡蘿卜葉(xie)漿(jiang)質量0.1%）蛋(dan)白酶(mei)充(chong)分攪(jiao)拌后靜置1h 進行酶(mei)解后， 用 800 目濾網(wang)過濾取上清液備(bei)用。

（2）加(jia)(jia)熱、發(fa)酵：將(jiang)(1) 所取(qu)(qu)上(shang)清(qing)液(ye)迅(xun)速放入沸水中加(jia)(jia)熱到40℃后加(jia)(jia)入保加(jia)(jia)利亞(ya)乳酸桿菌((1) 所取(qu)(qu)上(shang)清(qing)液(ye)質量0.01%)、嗜(shi)熱鏈球菌((1) 所取(qu)(qu)上(shang)清(qing)液(ye)質量0.01%)，在密閉條(tiao)件下發(fa)酵 36 小時。

（3）膜(mo)分離(li)：將經（2）發酵過的胡蘿卜葉液(ye)用10000 道(dao)爾(er)頓膜(mo)超(chao)濾(lv)，分離(li)出乳清溶(rong)液(ye)和蛋(dan)白溶(rong)液(ye)。

（4）吸附、酶氧化脫色：將(jiang)經（3）分(fen)離出(chu)的(de)蛋(dan)白溶(rong)液(ye)中(zhong)放入(ru)活性炭粉吸附5 min，然后(hou)(hou)過濾將(jiang)活性炭粉清除，再加入(ru)( 蛋(dan)白溶(rong)液(ye)質量0.3%) 脂肪氧合酶充(chong)分(fen)攪拌后(hou)(hou)靜置(zhi)1 h進(jin)行酶解。

（5）干燥：將經（4）吸(xi)附(fu)、酶氧化脫色后的(de)胡蘿卜葉(xie)蛋白溶液采用真空冷凍干燥制得白色胡蘿卜葉(xie)蛋白粉。凍干工藝參數(shu)：物料厚度(du)8 mm，預凍溫(wen)度(du)-35℃，預凍時間(jian)2h，升(sheng)華時加熱板溫(wen)度(du)45℃，干燥倉工作壓力22Pa，解析(xi)時加熱板溫(wen)度(du)60℃。

實施例2

(1) 打(da)漿(jiang)(jiang)(jiang)、酶(mei)解、過(guo)濾：采(cai)用(yong)料液比1: 5，用(yong)打(da)漿(jiang)(jiang)(jiang)機將洗凈瀝干的胡蘿(luo)卜葉打(da)漿(jiang)(jiang)(jiang)5min，然后加入（胡蘿(luo)卜葉漿(jiang)(jiang)(jiang)質(zhi)量0.3%）蛋(dan)白酶(mei)充分(fen)攪(jiao)拌后靜(jing)置2 h 進行酶(mei)解后， 用(yong)2000 目濾網(wang)過(guo)濾取上清液備用(yong)。

（2）加(jia)熱、發酵：將(1) 所(suo)取(qu)(qu)上清液(ye)迅(xun)速(su)放入(ru)沸(fei)水中加(jia)熱到45℃后(hou)加(jia)入(ru)保加(jia)利亞乳酸桿菌((1) 所(suo)取(qu)(qu)上清液(ye)質(zhi)量0.02%)、嗜(shi)熱鏈(lian)球菌((1) 所(suo)取(qu)(qu)上清液(ye)質(zhi)量0.02%)，在密閉條件下發酵48 小(xiao)時。

（3）膜分離：將經（2）發(fa)酵(jiao)過的胡蘿卜葉液用50000 道爾(er)頓(dun)膜超濾(lv)，分離出(chu)乳(ru)清溶液和蛋白溶液。

（4）吸附(fu)、酶(mei)氧化脫色(se)：將經（3）分(fen)離出(chu)的蛋(dan)(dan)白溶(rong)(rong)液中放入活性炭(tan)粉(fen)吸附(fu)10 min，然后過(guo)濾將活性炭(tan)粉(fen)清除(chu)，再加(jia)入( 蛋(dan)(dan)白溶(rong)(rong)液質量(liang)0.5%) 脂肪(fang)氧合酶(mei)充分(fen)攪拌后靜(jing)1-2 h進行酶(mei)解。

（5）干(gan)(gan)燥(zao)：將經（4）吸附、酶氧化脫(tuo)色后(hou)的(de)胡(hu)(hu)蘿卜(bu)葉蛋(dan)白溶(rong)液采(cai)用真空冷凍(dong)干(gan)(gan)燥(zao)制得白色胡(hu)(hu)蘿卜(bu)葉蛋(dan)白粉。凍(dong)干(gan)(gan)工(gong)藝參數：物(wu)料(liao)厚度(du)9 mm，預凍(dong)溫(wen)度(du)-40℃，預凍(dong)時(shi)間2.5 h，升華時(shi)加熱(re)板(ban)溫(wen)度(du)50℃，干(gan)(gan)燥(zao)倉工(gong)作壓力(li)26Pa，解析時(shi)加熱(re)板(ban)溫(wen)度(du)65℃。

實施例3

(1) 打(da)漿、酶解、過(guo)濾(lv)：采(cai)用料液(ye)比1: 4，用打(da)漿機將洗(xi)凈瀝(li)干的胡蘿(luo)卜葉(xie)打(da)漿4min，然后加(jia)入（胡蘿(luo)卜葉(xie)漿質量0.2%）蛋白酶充(chong)分攪拌后靜置1.5 h 進行酶解后， 用 1500 目濾(lv)網過(guo)濾(lv)取上(shang)清液(ye)備(bei)用。

（2）加(jia)(jia)(jia)熱、發酵：將(1) 所(suo)取(qu)上(shang)清(qing)液迅(xun)速放入沸水中加(jia)(jia)(jia)熱到42℃后加(jia)(jia)(jia)入保加(jia)(jia)(jia)利亞乳酸桿菌((1) 所(suo)取(qu)上(shang)清(qing)液質量0.03%)、嗜熱鏈球菌((1) 所(suo)取(qu)上(shang)清(qing)液質量0.03%)，在密(mi)閉條件(jian)下(xia)發酵 40 小時。

（3）膜(mo)分(fen)離(li)：將經（2）發酵過的胡蘿(luo)卜葉液(ye)(ye)(ye)用30000 道爾頓膜(mo)超濾，分(fen)離(li)出乳清溶液(ye)(ye)(ye)和蛋白溶液(ye)(ye)(ye)。

（4）吸附(fu)(fu)、酶(mei)(mei)氧化脫色：將(jiang)經（3）分(fen)離出的蛋白(bai)溶液中放入(ru)(ru)活性炭粉吸附(fu)(fu)5-10min，然后(hou)(hou)過濾將(jiang)活性炭粉清除，再(zai)加入(ru)(ru)( 蛋白(bai)溶液質量0.4%) 脂肪氧合(he)酶(mei)(mei)充(chong)分(fen)攪拌后(hou)(hou)靜置1.5 h 進行(xing)酶(mei)(mei)解。

（5）干(gan)燥：將經（4）吸附、酶(mei)氧化(hua)脫(tuo)色(se)后的胡(hu)蘿卜葉(xie)蛋白溶液采用真空(kong)冷(leng)凍干(gan)燥制得白色(se)胡(hu)蘿卜葉(xie)蛋白粉。凍干(gan)工藝參數(shu)：物料厚度(du)8 mm，預(yu)凍溫度(du)-37℃，預(yu)凍時間2 h，升華時加熱板溫度(du)47℃，干(gan)燥倉工作壓力24Pa，解析時加熱板溫度(du)62℃。

以(yi)上關(guan)于(yu)本發(fa)(fa)明的具(ju)體描(miao)述，僅用(yong)于(yu)說(shuo)明本發(fa)(fa)明而并非受限于(yu)本發(fa)(fa)明實施例索描(miao)述的技術方案，本領域的普通技術人員應當理解(jie)，仍然可以(yi)對本發(fa)(fa)明進行修改或(huo)等同替換。