一種梓醇衍生物及其制備方法和用圖
【專利摘要】本發明屬于藥物化學及醫藥技術領域，公開了一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽及其制備方法和用途，結構式如式（I）所示，其中R1為氫原子或C1～C4支鏈或支鏈烷烴。這些化合物或其藥用鹽具有廣泛的藥理作用。
【專利說明】
一種梓醇衍生物及其制備方法和用途
技術領域
[0001] 本發明涉及藥物化學及醫藥技術領域，具體涉及式（I)所示的一種梓醇衍生物或 其藥學上可接受的鹽及其制備方法和在制藥上的用途。
【背景技術】
[0002] 糖尿病一種慢性進行性疾患，近年來呈快速增長和日趨年輕化趨勢，2010年我國 糖尿病患者超過5000萬人，平均年齡為45歲。糖尿病特點是慢性高血糖，伴隨因胰島素分泌 及或作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白質代謝紊亂。其中II型糖尿病占全部糖尿病人的90%以 上。
[0003] 目前臨床用于治療糖尿病的藥物主要為化學藥物，如二甲雙胍、血管緊張素轉換 酶抑制劑、胰島素增敏劑等，但長期服用毒副作用較大，常引起嚴重的肝、腎等功能障礙及 多種慢性并發癥，且易發生耐藥性。我國傳統藥材地黃中的常見成分"梓醇"可以有效治療 糖尿病，其降糖降血脂功效優于傳統的化學藥物。
[0004] 梓醇主要是從中藥地黃根部分離提純得到的一種小分子糖苷，是地黃的主要有效 成分之一，其結構式如下：
研究表明，梓醇具有廣泛的藥理活性。自由基損傷是腦缺血損傷的重要機制之一，神經 細胞產生大量的活性氧和自由基直接作用于線粒體膜，ATP產生迅速減少，Ca2+超載誘發細 胞凋亡。體內外的腦缺血研究表明，梓醇治療后，凋亡細胞顯著減少，同時內源性過氧化酶 活性顯著提高，如谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶等，并且，丙二醛、活性氧自由基的 含量和一氧化氮合酶的活性明顯下降，這說明梓醇通過提高抗氧化酶活性，增加自由基的 清除，抑制線粒體介導的凋亡途徑發揮神經保護功能。腦內的炎癥反應是多種神經退行性 疾病的病理特征之一，炎癥反應中，膠質細胞的過度激活導致大量炎癥因子的釋放，如白介 素、腫瘤壞死因子等，加劇了腦損傷。在應用梓醇干預體外培養的神經炎癥損傷模型中，梓 醇能有效的改善損傷細胞的形態，抑制膠質細胞的大量增生并降低相關炎癥因子的過度表 達。在老年大鼠腦內，神經可塑性的兩種標記物生長相關蛋白43(GAP43)和突觸素表達水 平顯著低于年輕組大鼠，經過梓醇治療后，其海馬GAP43和突觸素的表達顯著提高，進一步 的研究發現梓醇可能是通過激活PKC通路，調節神經可塑性來發揮神經保護作用的。
[0005] 梓醇的化學性質極不穩定，酸度、堿度及熱均可導致分解轉化，臨床運用受到極大 限制。
[0006] 目前，尋找進一步開發梓醇衍生物的可行途徑，以獲得其有效替代物是研究的一 個方向。

【發明內容】

[0007] 本發明的總體目的是在于制備一種梓醇衍生物，以開發具有新藥用生物活性的物 質。
[0008] 對梓醇的構效關系分析研究，我們制備了含氮衍生物、含硫衍生物、氧醚類、醇羥 基官能團酯化等等結構改造，發現梓醇氨解衍生物，具體很好的藥用生物活性，由此完成本 發明。
[0009] 本發明的一個目的是提供一種具有式I或其藥學上可接受的鹽的良好活性的梓醇 衍生物。
[0010] 本發明的另一個目的是提供制備具有式I化合物或其藥學上可接受的鹽的方法。
[0011] 本發明的再一個目的是提供含有式I的化合物或其藥學上可接受的鹽作為有效成 分，以及一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的藥用組合物，及其在治療腦缺 血損傷和糖尿病疾病方面的應用。現結合本發明的目的對本
【發明內容】
進行具體描述。
[0012] 本發明的目的是通過以下措施實現的： 本發明的目的在于提供式I所示的一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽：
其中：Ri為氫原子或支鏈或支鏈烷烴;優選Ri為氫原子或甲基。實施本發明的最 佳形式化合物如下：
制備上述梓醇衍生物的技術路線具體如下：
本發明的又一目的是提供實施本發明的化合物的可藥用鹽選自甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸 鹽、乙二酸鹽、丙二酸鹽、丁酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、馬來酸鹽，苯 甲酸鹽、琥珀酸鹽、苦味酸鹽、酒石酸、檸檬酸鹽、富馬酸鹽，優選富馬酸鹽。
[0013] 上述式I表示的本發明一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽，可以以水合物或 溶劑物的形式存在，無論哪一種都包含在本發明范圍之內。作為獲得的溶劑物的溶劑，有甲 醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙酸乙酯、異丙醚等。
[0014] 上述的制造方法，只表示制造本發明的式I化合物的方法之一例。本發明化合物的 制造方法并不僅限于這些方法，在本說明書的實施例中，由于更具體地說明了本發明化合 物的制造方法，所以，本領域的人員，根據上述說明和具體實施例的說明，根據需要，對此加 以適當的修改，就能制造出包括在上述式I的化合物或它們的鹽。
[0015] 本發明提供了一種藥物組合物，含有治療有效劑量的一種梓醇衍生物或其藥學上 可接受的鹽和藥學上可接受的載體或輔料，優選地，本發明藥物組合物的劑型為注射液、凍 干、顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、丸劑、混懸劑、滴丸劑、微丸劑、口含片、口崩片、膠丸、軟 膠囊、分散片、溶液劑、氣霧劑或噴霧劑，更優選地，所述藥物組合物的劑型為顆粒劑、膠囊 劑、片劑、口服液或滴丸劑。
[0016] 本發明所述式I化合物，可作為有效成分用于在制備治療腦缺血損傷藥物中的運 用，其中治療腦缺血損傷藥物為如下1)~3)中至少一種：1)治療腦水腫的藥物;2)治療腦梗 死的藥物;3)治療神經損傷的藥物。
[0017] 本發明所述式I化合物，也可作為有效成分用于在制備治療糖尿病的藥物中的應 用，優選地，糖尿病為II型糖尿病。本發明所述式I化合物的活性是通過一般動物試驗來驗 證的。
[0018]本發明經過scifinder、reaxys等大量文獻檢索，目前尚沒發現有文獻報道過該化 合物及制備方法和運用。
[0019]本發明的化合物可作為梓醇的替代物。
【具體實施方式】
[0020] 下面的實施例可以對本發明進行進一步的描述，然而，這些實施例不應作為對本 發明范圍的限制。
[0021] 實施例1:化合物h的制備 100ml干燥的三口燒瓶，安裝攪拌器、溫度計，向其中加入梓醇(2.3g，6.35mmol)和干燥 的無水乙腈46ml，攪拌下，緩慢加入二甲胺的甲醇溶液(7ml，8.56mmol)，升溫至45~50°C下 反應6h，TLC鑒別反應終點【薄層展開條件(石油醚-乙酸乙酯：甲醇=2:1:0.1)】，反應完畢，〈 40°C減壓濃縮至干，殘余物加入丙酮-甲基異丙醚重結晶，過濾，固體用適量乙醚洗滌，在35 。(:~40°C真空干燥6h，得淡黃色結晶性粉末狀固體1.97g，收率75.2%，HPLC含量98. lQ/^HPLC 方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，水-乙腈(99:1)為流動相，檢測波長為210nm，流 速為 l.Oml/min，柱溫 25°C。
[0022] 咕一NMR(500MHz，CH3OH-d3/TMS): SH(ppm): 2.17(6H，s)，2.76(lH，d，J = 9.7Hz )，3.61 (lH，d，J = 6.4Hz )，3.89,4.14 (each 2H，dd，J=6.4 Hz，1.8 Hz);4.77(lH，d，J = 6.4Hz )，5.12 (lH，d，J = 9.7Hz )，5.25 (lH，t)，6.30(lH，d，J = 6.4Hz ) 13C-NMR( 100MHz，CH3OH-d3/TMS): Sc(ppm):96.1、142.7、104.5、39.4、42.3、42.3、77.0、62.8、66.7、44.0、61.9、99.2、 75.0、80.1、71.9、79.3、63.4 MS:m/z: 406.2(]?-1)一，235(]\1-1-苷元)一，226(]\1-1-苷元-01〇一。
[0023]實施例2:化合物^富馬酸鹽的制備 10ml三口燒瓶，加入h化合物（0.88，1.96111111〇1)和乙醇51111，室溫下，加入富馬酸 (0.29g，2.5mmo 1)，超聲1 Omin，冷卻至-5 °C~0 °C靜置過夜，過濾，固體用冷的乙醇洗滌，真 空35°C~40°C干燥，得淡黃色粉末狀固體0.79g，HPLC含量99.3%。
[0024]實施例3:化合物12富馬酸鹽的制備 1) 100ml干燥的三口燒瓶，安裝攪拌器、溫度計，向其中加入梓醇(2.3g，6.35mmol) 和干燥的無水乙腈46ml及氯化銨(0.17g，3.175mmol)，攪拌下，加入疊氮化鈉(0.46g， 7. lmmol)，室溫攪拌反應24h，TLC鑒別反應終點【薄層展開條件(石油醚-乙酸乙酯：甲醇=2: 1:0.1)】，反應完畢，過濾，濾液<40°C減壓濃縮至干，殘余物加入丁酮-甲基異丙醚重結晶， 過濾，固體用適量乙醚洗滌，在35 °C~40 °C真空干燥6h，得淡黃色結晶性粉末狀固體2.22g， 收率86.3%，HPLC含量95.6%，直接用于下一步。
[0025] 2)上步產品，加入到50ml無水乙醇中，攪拌下加入三氯化鐵（1.48g，5.48mmol)及 活性炭(〇. 〇66g，5.48mmol)，加熱至55~60°C下，滴加85%水合肼（1.92g，6.0lmmo 1)，滴入完 畢，同溫反應5h，趁熱硅藻土過濾，濾液<45°C減壓濃縮至干，得淡黃色油狀液，直接用于下 一步。
[0026] 3)上步油狀物及乙醇8ml，室溫下，加入富馬酸(0.145g，1.25mmol)，超聲lOmin，冷 卻至-5 °C~0°C靜置過夜，過濾，固體用冷的乙醇洗滌，真空35°C~40°C干燥，得0.64g淡黃 色粉末狀固體目標化合物12，HPLC含量99.7%。
[0027] 咕一NMR(500MHz，CH3OH-d3/TMS): SH(ppm):6,23(2H，d，J=12.8Hz )，2.77(lH，d，J = 9.7Hz )，3.63 (lH，d，J = 6.4Hz )， 3.85,4.13(each 2H，dd，J=6.4 Hz，1.8 Hz);4.74(lH，d，J = 6.4Hz )，5.10 (lH，d，J = 9.7Hz )，5.24(lH，t)，6.30(lH，d，J = 6.4Hz ) 13C-NMR( 100MHz，CH3OH-d3/TMS): Sc(ppm):96.6、142.1、104.0、39.7、77.6、62.4、66.1、44.5、614、99.6、75.7、80.1、 71.8、79.5、63.7、135.2、135.2、164.9、164.9 MS:m/z: 378.3(M-l)- 實施例4:降糖調血脂試驗 1、試驗方法 試驗選用SD大鼠60只，其中10只作為正常對照組（即空白組），其它進行造模，造模組全 部給予高脂飼料喂養，3周后采用腹腔注射鏈脈佐菌素，劑量為40mg/kg，3天后測空腹血糖 (FBG))，FBG >7 . Omo 1 /L為造模成功。將造模成功的大鼠按體重隨機分組，每組10只，雌雄 各半，分為模型組(不給藥）、實施例1組、實施例3組、梓醇組和對照藥(苯乙雙胍)組。樣品組 給藥劑量50mg/kg/天，對照藥組給藥劑量為50mg/kg/天，給藥28天后，測量體重，并在大鼠 禁食不禁水后，剪尾測尾靜脈血糖，乙醚吸入性麻醉后，剖腹，取腹主動脈血約5mL，靜置，離 心后立刻測血脂，最后頸椎脫臼處死大鼠。
[0028] 2、治療后各組空腹血糖的比較 治療后各組空腹血糖的比較見表1: 表1不同樣品組干預前后血糖變化(X ± SD )單位:mmo 1 /L
結果表明，治療后，各藥物組空腹血糖均明顯低于模型組，其中，本發明實施例化合物 及實施例3化合物，顯著低于梓醇組(P〈0.01 )，同時本發明化合物也低于對照藥組，故本發 明化合物降糖效果顯著。
[0029] 3、治療后各組血脂指標的比較 治療后各組血脂指標的比較見表2: 表2不同組別樣品對血脂的影響(X土SD)單位:mmol/L
結果表明，治療后，所有藥物干預組的血清膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)均顯著低于模 型組，其中，本發明實施例化合物及實施例3化合物，顯著低于梓醇組(P〈0.01)，所有藥物干 預組HDL-C和LDL-C均顯著高于模型組。
[0030] 以上研究結果表明，本發明化合物，在對II型糖尿病大鼠的調脂降糖藥理作用方 面均顯著優于梓醇，從而為本發明提供了較好的試驗數據支持。
[0031 ]實施例5:治療腦缺血損傷的藥物的效果評價 本發明采用了線拴法大腦中動脈阻斷模型造成大鼠急性腦缺血再灌損傷模型，并采用 急性治療給藥方式(再灌注期間給藥），從腦梗塞面積、腦水腫程度及動物行為評分三方面 證明本發明化合物對急性腦缺血再灌損傷的急性治療作用和神經康復作用。
[0032] 1、實驗材料與方法 1)動物與分組:Wistar雄性大鼠48只，體重240~260g，實驗分為6組，每組8只。藥物組 分別在再灌后即時和再灌后2小時灌胃給藥，依達拉奉組在同樣時間采用靜脈注射給藥，模 型對照組在造模后相同再灌時間點給予等劑量溶劑(含1 % DMS0的橄欖油），空白對照組為 不插入線栓的假手術動物。
[0033] 2)腦缺血再灌模型的制備:參照Zea Longa等的方法，Wistar雄性大鼠以3%戊巴比 妥鈉lml/kg^1麻醉后仰臥位固定，沿頸正中切開，分離暴露左側頸總動脈（CCA)與頸內 (ICA)、頸外動脈(ECA)，夾閉CCA，于ECA外端0.7cm處結扎并切口，將以多聚賴氨酸處理過 的尼龍線栓線輕輕插入，并順勢經ECA、ICA入顱至大腦中動脈(MCA)分叉處(尼龍線進入CCA 分叉處約18mm)后結扎，阻斷MCA腦血流，同時放開夾閉的CCA進行缺血。缺血2小時后，輕輕 抽出尼龍線實現再灌注。之后將動物傷口縫合，獨籠飼養。整個實驗過程維持動物體溫34 。(：，室溫28°C。
[0034] 3)神經行為評分:各組動物在再灌24小時后取出，按照Bederson方法對動物的行 為缺陷進行分級評分，其標準為:〇分:未觀察到神經癥狀，行為正常；1分:提尾懸空時，動物 的手術對側前肢表現為腕肘屈曲，肩內旋，肘外展，緊貼胸壁;2分:將動物置于光滑平面上， 推手術側肩向對側移動時，阻力降低;3分:動物自由行走時向手術對側環轉或轉圈;4分:軟 癱，肢體無自發活動。
[0035] 4)腦梗塞面積和腦水腫檢測方法如下:動物進行完行為檢測后，斷頭處死，迅速取 出完整大腦，以4 °C的生理鹽水洗去血跡，-20 °C凍lOmin后在距離嗅球5mm、7mm、9mm、11mm和 13mm處將大腦橫斷為5個2mm厚的切片，置1 % TTC溶液中37°C水浴避光染色lOmin，取出后 照相，計算機分析腦梗塞面積和水腫程度。每組8只鼠，結果取平均值。結果見表3:
結果表明，本發明化合物與梓醇相比，對腦缺血再灌損傷有明顯的治療作用，使腦梗死 體積縮小，腦水腫程度明顯降低，同時動物神經行為評分出現明顯好轉，說明本發明化合物 對神經功能有較強的保護作用。
【主權項】
1. 一種式(I)所示的梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽：其中： Ri為氫原子或&~C4支鏈或支鏈烷烴。2. 權利要求1所述的一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于:其中Ri為氫 原子或甲基。3. 權利要求1~2所述的一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于:所述的 化合物優選以下結構：4. 權利要求1~3所述的一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于:所述的 藥學上可接受的鹽為甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、乙二酸鹽、丙二酸鹽、丁酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸 鹽、乙磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、馬來酸鹽，苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、苦味酸鹽、酒石酸、檸檬酸鹽、 富馬酸鹽。5. 權利要求1通式(I)的一種梓醇衍生物或其藥學上可接受的鹽的制備方法，包括：其中Ri的定義同權利要求1。6. -種藥物組合物，其中含有權利要求1~4所述的一種梓醇衍生物或其藥學上可接受 的鹽和藥學上可接受的載體或輔料，優選地，所述藥物組合物的劑型為注射液、凍干、顆粒 劑、膠囊劑、片劑、口服液、丸劑、混懸劑、滴丸劑、微丸劑、口含片、口崩片、膠丸、軟膠囊、分 散片、溶液劑、氣霧劑或噴霧劑，更優選地，所述藥物組合物的劑型為顆粒劑、膠囊劑、片劑、 口服液或滴丸劑。7. 權利要求1至6所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備治療腦缺血損傷藥物中 的運用，所述治療腦缺血損傷藥物為如下1)~3)中至少一種： 1) 治療腦水腫的藥物， 2) 治療腦梗死的藥物， 3) 治療神經損傷的藥物。8. 權利要求1至6所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療糖尿病的藥物 中的應用，優選地，所述糖尿病為II型糖尿病。
【文檔編號】A61P9/10GK105820200SQ201610229503
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年4月14日
【發明人】徐奎, 王瑋, 陶俊鈺
【申請人】安徽省逸欣銘醫藥科技有限公司