一組結核分枝桿菌蛋白及其編碼基因與應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一組蛋白及其編碼基因與應用；特別涉及一組結核分枝桿菌蛋白及其 編碼基因與應用，屬于生物醫藥領域。
【背景技術】
[0002] 多個世紀以來，結核病持續在全球成為一個不容忽視的公共衛生問題。目前全球 已有三分之一的人口攜帶結核分枝桿菌，僅2010年一年就新增結核病病例880萬，死亡145 萬，平均不到22秒即有一人死于肺結核病，結核病高居傳染病死亡人數之首。而我國是全 球22個結核病高負擔國家之一，結核病患者人數高居全球第二位，受感染人數超過5億，僅 2010年一年就有新發病例90~120萬，占據了全球總新增病例的約12%，如不及時采取有 效措施，在未來十年內可能有3000萬人發病，將會導致嚴重的公共衛生問題和社會問題， 所以從國家戰略層面必需盡快實現對肺結核的有效控制。
[0003] 科學表明由于活動性肺結核的極易傳播性，對活動性肺結核的診斷及盡快消除傳 染源，結核病的治療效果評估及控制結核病流行有非常重大的意義。然而肺結核的根治目 前還不能完全做到，據研究表明活動性結核病患者經不同的短程化療治愈后，有1% -9% 的患者將會復發，而在一些特殊人群中，高達20% (Hong Kong Chest Service/British Medical Research Council.Am Rev Respir Dis, 1991，143:700-706)，而且耐藥性結核病 進一步傳播與復發未及時診斷的結核患者有很大的關系。所以關于結核治愈患者的活動性 肺結核診斷對于防治結核的整體戰略具有很大的意義。另外，從臨床治療角度看，結核病的 常規治療方案一般需要6個月的時間，而常規結核病的治療藥物有一定的毒副作用，病人 的依從性并不好。由于個體間的差異，理論上不同病人實際需要的用藥時間可能會有很大 的不同，但對于如何細分病人，目前仍缺乏客觀的判斷指標。通過系統地比較活動性結核病 病人和結核康復人群的血清，有可能發現一批可以準確區分這兩類人群的生物標識物，這 些標識物將可用于康復過程的監控，從而有可能指導活動性結核病病人的個體化用藥，縮 短用藥周期，提高病人對治療的依從性，降低治療費用，提高最終的治療效果。
[0004] 目前活動性判斷應綜合臨床、X線表現和痰菌決定，而主要依據是痰菌和X線。痰 涂片檢查簡便易行，準確性較高，是活動性肺結核確診的金標準，但某些研究中其檢出率甚 至低于10%。基于核酸擴增的診斷方法，如實時定量PCR以及DNA芯片的優點是靈敏度高 且耗時短，其問題在于特異性較難保證，容易導致假陽性結果。而基于抗原抗體反應的血清 學診斷，由于其簡便性、快速性，日益成為重要的活動性肺結核臨床輔助性診斷手段，并且 能滿足區分結核康復人群與活動性肺結核的要求。因此，從長遠角度綜合來看，應致力于發 現敏感性和特異性均較好的結核標志物。
[0005] 理想的結核診斷標志物應符合以下條件：（1)敏感性高；（2)特異性高；（3)存在 于體液，特別是血液中，易于檢測。但是目前肺結核分枝桿菌血清學診斷所針對的抗原如抗 原5、38KD抗原、30/31KD抗原以及抗原60等，均存在陽性檢出率低，與其它分支桿菌的交 叉免疫性等問題，雖然在療效監測、提示復發、判斷預后和高危人群的普查中具有一定的價 值，但目前仍不能用于活動性肺結核的確診及對病人康復過程的監控。為了實現對活動性 肺結核的高靈敏性，高特異性的診斷，及對康復過程的有效監控，急需在分子水平上尋找到 更敏感、更特異的活動性肺結核生物標志物。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的是提供一組結核分枝桿菌蛋白及其編碼基因與應用。
[0007] 本發明提供一組蛋白，由如下（1)-(7)所示的蛋白組成：
[0008] (l)SEQ ID No. 1 所示的蛋白；
[0009] (2) SEQ ID No. 3 所示的蛋白；
[0010] (3) SEQ ID No. 5 所示的蛋白；
[0011] (4) SEQ ID No. 7 所示的蛋白；
[0012] (5) SEQ ID No. 9 所示的蛋白；
[0013] (6) SEQ ID No. 11 所示的蛋白；
[0014] (7) SEQ ID No. 13 所示的蛋白。
[0015] 上述蛋白是用于診斷或輔助診斷活動性肺結核的一組蛋白。
[0016] 上述蛋白的編碼基因也屬于本發明的保護范圍。
[0017] 上述編碼基因中，所述編碼基因為如下（1)-(7)所示的DNA分子：
[0018] (l)DNA 分子 1:
[0019] 1) SEQ ID No. 2 所示的 DNA 分子；
[0020] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 1所示 的蛋白的DNA分子；
[0021] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 1所示的蛋白的DNA分子；
[0022] (2) DNA 分子 2 :
[0023] 1) SEQ ID No. 4 所示的 DNA 分子；
[0024] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 3所示 的蛋白的DNA分子；
[0025] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 3所示的蛋白的DNA分子；
[0026] (3) DNA 分子 3 :
[0027] 1) SEQ ID No. 6 所示的 DNA 分子；
[0028] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 5所示 的蛋白的DNA分子；
[0029] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 5所示的蛋白的DNA分子；
[0030] (4) DNA 分子 4 :
[0031] 1) SEQ ID No. 8 所示的 DNA 分子；
[0032] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 7所示 的蛋白的DNA分子；
[0033] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 7所示的蛋白的DNA分子；
[0034] (5) DNA 分子 5 :
[0035] 1) SEQ ID No. 10 所示的 DNA 分子；
[0036] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 9所示 的蛋白的DNA分子；
[0037] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 9所示的蛋白的DNA分子；
[0038] (6) DNA 分子 6 :
[0039] 1) SEQ ID No. 12 所示的 DNA 分子；
[0040] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 11所示 的蛋白的DNA分子；
[0041] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 11所示的蛋白的DNA分子；
[0042] (7) DNA 分子 7 :
[0043] 1) SEQ ID No. 14 所示的 DNA 分子；
[0044] 2)在嚴格條件下與1)限定的DNA分子雜交且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 13所示 的蛋白的DNA分子；
[0045] 3)與1)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同一性且編碼上述蛋白中SEQ ID No. 13所示的蛋白的DNA分子；
[0046] 含有上述任一所述編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也屬于 本發明的保護范圍。
[0047] -種蛋白質芯片也屬于本發明的保護范圍，包括基片和與其連接的上述的蛋白 質；且每種蛋白單獨成立一個檢測點；
[0048] 所述蛋白質芯片上，每種蛋白點樣形成的檢測點的數量> 2。
[0049] 上述蛋白質芯片中，所述基片為載體玻片；
[0050] 所述蛋白質芯片是分別將所述的蛋白質點樣于所述載體玻片上制成的；
[0051] 所述蛋白質芯片還包括IgG標準品或Cy5標記羊抗人抗體二抗形成的檢測點作為 陽性對照；
[0052] 所述IgG標準品具體購自YEASEN，產品目錄號為36110ES10 ;
[0053] 所述Cy5標記羊抗人抗體二抗具體購自lifeholder，產品目錄號為LH-G11345。
[0054] 含有上述蛋白的試劑盒也屬于本發明的保護范圍。
[0055] 含有上述任一所述的蛋白質芯片的試劑盒也屬于本發明的保護范圍。
[0056] 上述試劑盒中，所述試劑盒還包含使用說明書，說明書中記載內容如下：
[0057] 1)將待檢血清點樣于上述任一所述的蛋白質芯片進行檢測，并用Cy5標記的抗人 二抗進行顯色，將蛋白質芯片在Cy5熒光的發射波長下進行檢測，得到各檢測點的信噪比， 記作SNR ; .SB
[0058] 所述SNR的計算公式為S.NR =- σ
[0059] 所述公式中，S和B分別為蛋白質芯片中檢測點的原始的信號值和背景值，〇代表 檢測點的原始信號的標準差；
[0060] 所述原始的信號值為芯片掃描儀直接顯示的數值；
[0061] 所述背景值為蛋白質芯片上非樣品點制區域的信號值；
[0062] 所述標準差所對應的實驗次數具體為3次；
[0063] 2)如果待檢血清點樣于所述蛋白質芯片上的上述蛋白中所述的SEQ ID No. 1所示 的蛋白的所有檢測點的SNR > 8. 32且彡10. 21，則待檢血清候選判定為上述蛋白中所述的 SEQ ID No. 1所示的蛋白的抗體陽性，如果SNR彡6. 94且彡8. 27,則待檢血清候選判定為 上述蛋白中所述的SEQ ID No. 1所示的蛋白的抗體陰性；
[0064] 如果待檢血清點樣于所述蛋白質芯片上的上述蛋白中所述的SEQ ID No. 3所示的 蛋白的所有檢測點的SNR > 7. 68且< 9. 95,則待檢血清候選判定為上述蛋白中所述的SEQ ID No. 3所示的蛋白的抗體陽性，如果SNR彡6. 31且彡7. 55,則待檢血清候選判定為上述 蛋白中所述的SEQ ID No. 3所示的蛋白的抗體陰性；
[0065] 如果待檢血清點樣于所述蛋白質芯片上的上述蛋白中所述的SEQ ID No. 5所示的 蛋白的所有檢測點的SNR > 7. 16且彡9. 75,則待檢血清候選判定為