本(ben)發明涉及一(yi)種xanthone類化(hua)合物(wu)及其單(dan)(dan)晶的(de)制(zhi)備(bei)方法(fa)與作為抗海(hai)分枝(zhi)桿菌藥物(wu)的(de)應用(yong)，特別是涉及一(yi)種對海(hai)分枝(zhi)桿菌(mycobacteriummarinum)具有極(ji)強的(de)抑制(zhi)作用(yong)的(de)xanthone類化(hua)合物(wu)及其單(dan)(dan)晶制(zhi)備(bei)方法(fa)與應用(yong)。

背景技術：

結核(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)導致(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)結核(he)病(bing)(bing)(bing)(bing)仍然(ran)是(shi)(shi)全(quan)球公共衛生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)的(de)(de)(de)(de)嚴重威(wei)脅。據who最新(xin)報道(dao)，在(zai)2014年，約有(you)(you)960萬新(xin)病(bing)(bing)(bing)(bing)例發生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)，150萬人(ren)死(si)于(yu)該(gai)病(bing)(bing)(bing)(bing)，有(you)(you)48萬人(ren)發展(zhan)為(wei)多(duo)重抗(kang)(kang)藥(yao)性(xing)(xing)結核(he)病(bing)(bing)(bing)(bing)。我國(guo)占有(you)(you)全(quan)世界人(ren)口的(de)(de)(de)(de)20%，結核(he)病(bing)(bing)(bing)(bing)對我國(guo)亦(yi)構成極大的(de)(de)(de)(de)威(wei)脅。然(ran)而，研究(jiu)結核(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)(mycobacteriumtuberculosis)的(de)(de)(de)(de)感(gan)(gan)染(ran)機(ji)制是(shi)(shi)困難的(de)(de)(de)(de)，原因是(shi)(shi)結核(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長緩慢(man)(man)，需較(jiao)高的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)安全(quan)措(cuo)施(shi)，成本(ben)高，動物(wu)(wu)模型(xing)(xing)(xing)少等(deng)。海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)(mycobacteriummarinum)為(wei)一種腐生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)性(xing)(xing)非典型(xing)(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)，天然(ran)宿主為(wei)魚類(lei)、兩棲類(lei)，人(ren)類(lei)感(gan)(gan)染(ran)屬(shu)機(ji)會感(gan)(gan)染(ran)。基因組比較(jiao)分(fen)(fen)(fen)(fen)析表(biao)明海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)(m.marinum)與結核(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)(m.tuberculosis)的(de)(de)(de)(de)親(qin)緣關(guan)系(xi)很近，這兩種病(bing)(bing)(bing)(bing)原菌(jun)(jun)(jun)引起的(de)(de)(de)(de)疾病(bing)(bing)(bing)(bing)特征在(zai)某些方面也很相似，如肉芽(ya)腫。利(li)用(yong)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)對結核(he)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)發病(bing)(bing)(bing)(bing)機(ji)理的(de)(de)(de)(de)決定性(xing)(xing)因素(su)研究(jiu)是(shi)(shi)一種優良(liang)模型(xing)(xing)(xing)，且安全(quan)系(xi)數高。現如今，隨(sui)著在(zai)家庭中通過魚缸養殖觀賞魚的(de)(de)(de)(de)流(liu)行，感(gan)(gan)染(ran)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)幾率也在(zai)增加(jia)(jia)，其(qi)導致(zhi)(zhi)人(ren)類(lei)慢(man)(man)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)皮(pi)膚損(sun)傷，膿毒性(xing)(xing)關(guan)節炎(yan)等(deng)。臨(lin)床(chuang)上(shang)大多(duo)數有(you)(you)效的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)治療為(wei)聯合(he)使(shi)用(yong)利(li)福平、克拉霉素(su)等(deng)抗(kang)(kang)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)素(su)，且需立即(ji)用(yong)藥(yao)。由(you)于(yu)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)感(gan)(gan)染(ran)還(huan)不是(shi)(shi)很普遍，加(jia)(jia)上(shang)多(duo)樣化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)臨(lin)床(chuang)表(biao)現，往往會導致(zhi)(zhi)誤(wu)診或者(zhe)延遲治療，導致(zhi)(zhi)病(bing)(bing)(bing)(bing)情惡化(hua)(hua)(hua)而難以治愈。因而尋找更高效的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)物(wu)(wu)尤其(qi)是(shi)(shi)結構新(xin)穎的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)物(wu)(wu)已(yi)成為(wei)急(ji)需解(jie)決的(de)(de)(de)(de)課題。海(hai)(hai)(hai)洋微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)獨特的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)存環(huan)境(高壓、高鹽、缺氧(yang)、避光(guang)等(deng))，促使(shi)海(hai)(hai)(hai)洋微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)代謝產生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)大量結構新(xin)穎、活性(xing)(xing)很好的(de)(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)，為(wei)開發新(xin)型(xing)(xing)(xing)抗(kang)(kang)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)物(wu)(wu)或者(zhe)潛在(zai)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)結核(he)藥(yao)物(wu)(wu)提供了重要來(lai)源(yuan)。但(dan)是(shi)(shi)關(guan)于(yu)海(hai)(hai)(hai)洋微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)來(lai)源(yuan)的(de)(de)(de)(de)具有(you)(you)抗(kang)(kang)海(hai)(hai)(hai)分(fen)(fen)(fen)(fen)枝(zhi)(zhi)(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)活性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)報道(dao)還(huan)相當少，尤其(qi)是(shi)(shi)具有(you)(you)潛在(zai)開發成為(wei)抗(kang)(kang)結核(he)藥(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)海(hai)(hai)(hai)洋來(lai)源(yuan)化(hua)(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)報道(dao)。(who.globaltuberculosiscontrol2015.robinl.;lalitar.,currentopinioninmicrobiology(2008),11(3),277-283.stinear,t.p.;seemann,t.,etal.genomeresearch(2008),18(5),729741.rieraj.;conesax.,etal.archivesoforthopaedicandtraumasurgery(2016),136(1),131134.babamahmoodif.;nikkhahanb.;babamahmoodia.,iranianredcrescentmedicaljournal(2014),16(2),e10120.fengy.m.;xuh.s.,etal.diagnosticmicrobiologyandinfectiousdisease(2011),71,267272.cheungj.p.;fungb.,etal.journaloforthopaedicsurgery(2010),18(1),98103.andpreviousannualreports)。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種來源于海洋真菌的xanthone類化合物及其單晶的制備方法與作為抗海分枝桿菌活性的應用，它能滿足現有技術的上述需求。菌種保藏信息：保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；保藏日期：2014年4月3日；保藏編號：cgmcc8994；分類命名：penicilliumsp.本發明提供式i化合物1和2或其藥學上可接受的鹽：或(huo)其藥學上(shang)可接受(shou)的(de)鹽。

本發(fa)明提(ti)(ti)供式i化合(he)物1和(he)2的(de)制備(bei)方法，其特征(zheng)在于先在菌(jun)種(zhong)培養(yang)(yang)基中對真菌(jun)penicilliumsp.(ta33-1)進(jin)(jin)行(xing)菌(jun)種(zhong)培養(yang)(yang)，再(zai)在發(fa)酵培養(yang)(yang)基中對該真菌(jun)進(jin)(jin)行(xing)發(fa)酵培養(yang)(yang)，將所得菌(jun)絲(si)體用(yong)氯仿-甲醇混合(he)液(1:1)浸提(ti)(ti)3次減壓(ya)濃縮(suo)后，用(yong)乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯萃取3次得粗浸膏；乙(yi)(yi)酸乙(yi)(yi)酯相粗浸膏分別進(jin)(jin)行(xing)正相硅(gui)膠柱層(ceng)析、sephadexlh-20凝膠柱層(ceng)析后，再(zai)經(jing)hplc高(gao)效(xiao)液相制備(bei)色譜，將所得洗脫液濃縮(suo)，即為化合(he)物1和(he)2。

上述(shu)制(zhi)備方法(fa)中(zhong)菌種培(pei)養基(ji)優(you)(you)(you)選(xuan)含(han)有葡萄糖0.1%–5.0%(重(zhong)量百分比(bi)，下同)、酵母膏0.01%–1%、蛋白胨0.01%–1%、瓊脂0.1%–3.0%、氯化鈉0.05%–5%，其余為(wei)(wei)水，培(pei)養溫度優(you)(you)(you)選(xuan)為(wei)(wei)0–30°c，培(pei)養時(shi)間優(you)(you)(you)選(xuan)為(wei)(wei)3–15天；發(fa)酵培(pei)養基(ji)優(you)(you)(you)選(xuan)含(han)有大米1.0%–80.0%(重(zhong)量百分比(bi)，下同)、氯化鈉0.05%–5%，其余為(wei)(wei)水，培(pei)養溫度優(you)(you)(you)選(xuan)為(wei)(wei)0–30°c，培(pei)養時(shi)間優(you)(you)(you)選(xuan)為(wei)(wei)20–100天；所(suo)(suo)述(shu)的(de)正(zheng)相(xiang)硅(gui)膠柱(zhu)層(ceng)析采用(yong)的(de)固(gu)定相(xiang)優(you)(you)(you)選(xuan)200–300目(mu)硅(gui)膠，流(liu)動(dong)相(xiang)優(you)(you)(you)選(xuan)體(ti)積(ji)比(bi)為(wei)(wei)20%–100%的(de)乙酸乙酯-石油醚混(hun)合溶劑；所(suo)(suo)述(shu)sephadexlh-20凝膠柱(zhu)層(ceng)析采用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)優(you)(you)(you)選(xuan)體(ti)積(ji)比(bi)為(wei)(wei)氯仿:甲醇=1:1的(de)混(hun)合溶劑；所(suo)(suo)述(shu)hplc高效液相(xiang)制(zhi)備色(se)(se)譜(pu)中(zhong)采用(yong)的(de)色(se)(se)譜(pu)柱(zhu)：常規odsc18柱(zhu)，優(you)(you)(you)選(xuan)為(wei)(wei)kromasil10×250mm,5μm，流(liu)速優(you)(you)(you)選(xuan)為(wei)(wei)1.0–5.0ml/min，流(liu)動(dong)相(xiang)優(you)(you)(you)選(xuan)體(ti)積(ji)比(bi)為(wei)(wei)20%–70%的(de)甲醇-水混(hun)合溶劑。

本發明的另一實施方案提供式ⅰ化合物1的晶體，晶體數據：空間群為p-1，晶胞參數為a=7.123(4)?,b=8.069(4)?,c=11.596(6)?,α=93.86(3)o,β=93.56(3)o,γ=102.58(3)o,v=646.99(505)?³,z=2,dc=1.593g/cm³,f(000)=324,μ=1.144mm^–1。

本(ben)發明的另一實(shi)施方案提供(gong)上述式i化(hua)合(he)物(wu)1晶(jing)體的制備方法，其特征在于(yu)將(jiang)式i化(hua)合(he)物(wu)1溶于(yu)甲醇(chun)、乙醇(chun)、水(shui)、四氫呋喃或丙酮中的任一種或幾種，靜置緩慢結晶(jing)即可得到式i化(hua)合(he)物(wu)1的晶(jing)體。

上述晶體的制備方法中靜置緩慢結晶的條件優選在0–30^oc下，靜(jing)置(zhi)1–30天。

本發明從海洋真菌(jun)中獲(huo)得xanthone類化(hua)合物對(dui)海分(fen)枝桿菌(jun)具有(you)強的抑(yi)制活性，可用(yong)作抗海分(fen)枝桿菌(jun)藥物，應用(yong)前景(jing)廣(guang)闊。

本發明的(de)另一實(shi)施(shi)方式中(zhong)提供一種抗海分(fen)(fen)枝桿菌藥物，其(qi)特征(zheng)在于包括式ⅰ化合物1和2或其(qi)藥學上(shang)可接受的(de)鹽(yan)作(zuo)為有效成分(fen)(fen)。

本(ben)發明中術語“藥(yao)學上可接(jie)受的鹽”是指非毒性的無機或有機酸和/或堿(jian)的加成鹽。可參見“saltselectionforbasicdrugs”,int.j.pharm.1986,33,201–217。

附圖說明

圖1為式i化合物1的xrd圖。

上(shang)述的(de)xanthone類化合物在制備抗(kang)海分(fen)枝桿菌藥(yao)物中的(de)應用。

具體實施方式

為了便于對本發明(ming)(ming)(ming)的進(jin)一步理(li)解，下(xia)面(mian)提供(gong)的實施(shi)例對其(qi)做了更(geng)詳細的說(shuo)明(ming)(ming)(ming)。但是這些實施(shi)例僅供(gong)更(geng)好地理(li)解發明(ming)(ming)(ming)而并非用來限定本發明(ming)(ming)(ming)的范圍或實施(shi)原則，本發明(ming)(ming)(ming)的實施(shi)方式不限于以下(xia)內(nei)容(rong)。

實施例1

(1)花柳珊瑚內(nei)生真菌penicilliumsp.(ta33-1)的菌種培養

菌種(zhong)培養所用的培養基(ji)含(han)有葡(pu)萄糖(tang)1.0%(重量百(bai)分比，下同)、酵母膏0.2%、蛋白胨0.2%、瓊脂1.0%、氯(lv)化(hua)鈉3.0%，其(qi)余為水，使用時制成(cheng)試管斜(xie)面，真菌菌株在30°c下培養3天。

(2)花(hua)柳珊(shan)瑚內(nei)生真菌(jun)penicilliumsp.(ta33-1)的發酵

發酵(jiao)培養所用的培養基含有大米40.0%(重(zhong)量百分比，下同)、氯化鈉(na)3.0%，其余(yu)為(wei)水；真菌菌株于(yu)28°c培養90天。

(3)式i化合物1和2的提取分離

取(qu)60瓶步驟(2)得(de)到的(de)菌絲體(ti)，用氯仿-甲(jia)醇(chun)混合(he)液(ye)(1:1)浸(jin)提3次(ci)減壓(ya)濃縮(suo)后，用乙(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)酯萃取(qu)3次(ci)得(de)粗浸(jin)膏；乙(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)酯相(xiang)(xiang)粗浸(jin)膏分別進行正相(xiang)(xiang)硅膠(jiao)柱層(ceng)析(固定相(xiang)(xiang)為200–300目(mu)硅膠(jiao)；流動(dong)相(xiang)(xiang)為100%乙(yi)(yi)酸(suan)乙(yi)(yi)酯溶(rong)劑(ji))、sephadexlh-20凝膠(jiao)柱層(ceng)析(氯仿：甲(jia)醇(chun)=1：1的(de)混合(he)溶(rong)劑(ji)，體(ti)積(ji)比)后，再經hplc高效液(ye)相(xiang)(xiang)制(zhi)備(bei)色譜分離(色譜柱為kromasil10×250mm，5μm，流速(su)為2.0ml/min，流動(dong)相(xiang)(xiang)為35%的(de)甲(jia)醇(chun)-水混合(he)溶(rong)劑(ji)，體(ti)積(ji)比)，將所得(de)洗脫液(ye)濃縮(suo)，得(de)黃色結晶，即為式(shi)i化合(he)物1和2。

式i化合物1和2的結構確證數據：

化合物1:黃色晶體；¹hnmr(500mhz,acetone-d6,δ,ppm,j/hz):13.60(1h,s,h-8),6.80(1h,s,h-4),6.28(1h,d,j=1.5hz,h-5),6.17(1h,d,j=1.5hz,h-7),2.78(3h,s,h-11).¹³cnmr(125mhz,acetone-d6,δ,ppm,j/hz)183.5(c,c-9),165.1(c,c-6),164.8(c,c-8),158.1(c,c-10a),153.5(c,c-4a),152.6(c,c-3),141.8(c,c-2),125.7(c,c-1),112.5(c,c-1a),103.9(c,c-9a),100.9(ch,c-4),98.5(ch,c-7),93.6(ch,c-5),13.9(ch3,c-11).

化合物2:黃色晶體；¹hnmr(500mhz,acetone-d6,δ,ppm,j/hz):13.58(1h,s,h-8),6.32(1h,d,j=2.0hz,h-5),6.16(1h,d,j=2.0hz,h-7),2.73(1h,s,h-1),¹³cnmr(125mhz,acetone-d6,δ,ppm,j/hz):183.1(c,c-9),164.1(c,c-8),163.8(c,c-6),157.1(c,c-10a),141.7(c,c-2),115.4(c,c-1a),111.2(c,c-1),103.1(c,c-9a),97.6(ch,c-7),92.9(ch,c-5),12.3(ch3,c-11).

實施例2

(1)花柳(liu)珊瑚內生真菌penicilliumsp.(ta33-1)的菌種培(pei)養

菌種(zhong)培(pei)養(yang)(yang)所用(yong)的培(pei)養(yang)(yang)基含有葡萄糖0.1%–5.0%(重量百分比(bi)，下同)、酵母膏0.01%–1%、蛋(dan)白胨0.01%–1%、瓊脂0.1%–3.0%、氯化鈉0.05%–5%，其余(yu)為(wei)水，使用(yong)時制成(cheng)試管斜面(mian)，真菌菌株在(zai)0–30°c下培(pei)養(yang)(yang)3–15天。

(2)花(hua)柳(liu)珊瑚內生真菌penicilliumsp.(ta33-1)的發(fa)酵(jiao)

發酵培養(yang)所用的培養(yang)基含有大米1.0%–80.0%(重量百分比，下同)、氯化(hua)鈉0.05%–5%，其(qi)余為(wei)水，真菌(jun)菌(jun)株(zhu)于0–30°c培養(yang)20–100天。

(3)式i化(hua)合物(wu)1和2的提取分(fen)離

取(qu)10–60瓶步驟(2)所得(de)的(de)將(jiang)所得(de)菌絲(si)體用(yong)氯仿-甲醇混合(he)液(1:1)浸提3次減壓濃縮(suo)后，用(yong)乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)萃(cui)取(qu)3次得(de)粗(cu)浸膏；乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)相(xiang)(xiang)粗(cu)浸膏濃縮(suo)后分別進行(xing)正(zheng)相(xiang)(xiang)硅膠(jiao)柱層析(固定(ding)相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)本領(ling)域(yu)常(chang)規正(zheng)相(xiang)(xiang)硅膠(jiao)，流動相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)50%–100%的(de)乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)-石油醚混合(he)溶劑(ji)，體積(ji)比)、sephadexlh-20凝膠(jiao)柱層析(流動相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)氯仿:甲醇=1:1的(de)混合(he)溶劑(ji)，體積(ji)比)后，再經hplc高效(xiao)液相(xiang)(xiang)制備色譜(色譜柱為(wei)(wei)本領(ling)域(yu)常(chang)規odsc18柱，流速為(wei)(wei)1.0–5.0ml/min，流動相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)20%–70%的(de)甲醇-水(shui)混合(he)溶劑(ji)，體積(ji)比)，將(jiang)所得(de)洗(xi)脫液濃縮(suo)，得(de)黃色結(jie)晶，即為(wei)(wei)式i化合(he)物1和2。

其中式ⅰ化(hua)合物1和2的結構確證數據(ju)與實(shi)施例1中相應(ying)數據(ju)一致(zhi)。

實施(shi)例1–2中未具體(ti)指明(ming)的其他菌種培養、發酵條件(jian)，以(yi)及正相(xiang)硅膠柱(zhu)色譜(pu)分(fen)離(li)、sephadexlh-20凝膠柱(zhu)層析分(fen)離(li)、高效液相(xiang)色譜(pu)分(fen)離(li)等其他實驗操作條件(jian)均為本(ben)領域(yu)常規的實驗操作條件(jian)，本(ben)領域(yu)的技術人(ren)員可(ke)以(yi)根據實際需(xu)要，進行合理的選擇(ze)。

實施例3

取(qu)式ⅰ化(hua)合(he)物(wu)11.5mg溶(rong)解在裝有(you)500μl甲醇、乙醇、水、四氫呋喃或丙(bing)酮中任一種(zhong)的(de)小瓶中，于0°c下(xia)靜置30天后，緩慢結(jie)晶(jing)即得式i化(hua)合(he)物(wu)1的(de)晶(jing)體。

實施例4

取式ⅰ化(hua)合(he)物13mg溶(rong)解(jie)在裝有(you)1000μl甲醇、乙醇、四氫(qing)呋喃或丙酮中任一種(zhong)或幾種(zhong)的(de)小瓶中，于(yu)30°c下靜置(zhi)1天后，緩慢結晶(jing)(jing)即得式ⅰ化(hua)合(he)物1的(de)晶(jing)(jing)體(ti)。

上述晶體的晶體數據：空間群為p-1，晶胞參數為a=7.123(4)?,b=8.069(4)?,c=11.596(6)?,α=93.86(3)o,β=93.56(3)o,γ=102.58(3)o,v=646.99(505)?³,z=2,dc=1.593g/cm³,f(000)=324,μ=1.144mm^–1。

實施例5

在(zai)菌種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)中對(dui)(dui)海洋真(zhen)菌penicilliumsp.(ta33-1)進(jin)行菌種(zhong)培(pei)養(yang)，再在(zai)發酵培(pei)養(yang)基(ji)中對(dui)(dui)該真(zhen)菌進(jin)行發酵培(pei)養(yang)，將(jiang)(jiang)所(suo)(suo)得發酵液(ye)過濾(lv)，除去菌體，將(jiang)(jiang)濾(lv)液(ye)濃(nong)(nong)縮(suo)后(hou)，用乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯萃取；萃取液(ye)濃(nong)(nong)縮(suo)后(hou)分(fen)別(bie)進(jin)行正(zheng)相(xiang)硅膠(jiao)柱層(ceng)(ceng)析(xi)(xi)、sephadexlh-20凝(ning)膠(jiao)柱層(ceng)(ceng)析(xi)(xi)后(hou)，再經hplc高(gao)效液(ye)相(xiang)制備(bei)色譜，將(jiang)(jiang)所(suo)(suo)得洗脫液(ye)濃(nong)(nong)縮(suo)，得黃(huang)色晶體，即(ji)為(wei)式ⅰ化(hua)合物1和(he)2，其(qi)結構確證數據(ju)與(yu)實施例(li)1中相(xiang)應數據(ju)一致。其(qi)中所(suo)(suo)述菌種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨(dong)、瓊脂、粗海鹽(yan)、水，所(suo)(suo)述發酵培(pei)養(yang)基(ji)中含有大米、粗海鹽(yan)、蛋白胨(dong)、水；所(suo)(suo)述的色譜分(fen)離(li)為(wei)正(zheng)相(xiang)硅膠(jiao)柱色譜分(fen)離(li)、sephadexlh-20凝(ning)膠(jiao)柱層(ceng)(ceng)析(xi)(xi)和(he)高(gao)效液(ye)相(xiang)色譜分(fen)離(li)。

為了(le)探索更廣泛的(de)適用(yong)(yong)于制備本發(fa)明式ⅰ化合(he)物1和2的(de)方法，本實(shi)施(shi)例(li)中菌種培(pei)養(yang)基、發(fa)酵培(pei)養(yang)基中各成(cheng)分的(de)添(tian)加，均(jun)按(an)本領域中常(chang)(chang)規(gui)比例(li)添(tian)加或按(an)任(ren)意比例(li)添(tian)加，色(se)譜分離時所用(yong)(yong)硅膠的(de)規(gui)格(ge)、sephadexlh-20凝膠的(de)規(gui)格(ge)、色(se)譜柱的(de)型號及(ji)洗脫(tuo)溶(rong)劑的(de)選擇，均(jun)為本領域的(de)常(chang)(chang)規(gui)選擇。實(shi)驗結(jie)果表(biao)明，上述常(chang)(chang)規(gui)選擇的(de)制備方法，均(jun)能得(de)到發(fa)明的(de)黃色(se)晶體，即式ⅰ化合(he)物1和2，其結(jie)構確(que)證(zheng)數據與實(shi)施(shi)例(li)1中相應數據一(yi)致，僅(jin)僅(jin)存在個別化合(he)物在純度及(ji)收率方面(mian)的(de)微小差(cha)異。

實(shi)施例(li)1–3的(de)(de)結(jie)果表明(ming)(ming)，按照本領域常(chang)規的(de)(de)菌種培養(yang)、發(fa)(fa)酵條(tiao)件，常(chang)規的(de)(de)正相硅膠柱色譜(pu)分離(li)(li)、sephadexlh-20凝(ning)膠柱色譜(pu)分離(li)(li)、高效液相色譜(pu)分離(li)(li)的(de)(de)條(tiao)件對海洋真(zhen)菌penicilliumsp.(ta33-1)進行菌種培養(yang)、發(fa)(fa)酵、分離(li)(li)純化，均(jun)能得到本發(fa)(fa)明(ming)(ming)式ⅰ結(jie)構(gou)的(de)(de)化合物1和2。本發(fa)(fa)明(ming)(ming)式ⅰ化合物1和2的(de)(de)制備方法，優選(xuan)實(shi)施例(li)1–2中記載的(de)(de)方法。

實施例6

本發明式ⅰ化(hua)合物1和2的抗(kang)海分枝桿(gan)菌活性按照如下文獻(xian)測(ce)試方法測(ce)試：wangc,wangj,huangy,chenh.,liy.,zhongl.,cheny.,chens.,wangj.,kangj.,pengy.,yangb.,liny.,shez.,laix.,anti-mycobacterialactivityofmarinefungus-derived4-deoxybostrycinandnigrosporin.molecules,2013,18(2):17281740.

試驗結果顯示，本發明制備(bei)的(de)式i化合物1和(he)2對(dui)海分枝桿(gan)菌感染具有(you)很強的(de)抑制作用，其mic分別為40.75μm和(he)50.61μm，陽性藥利福(fu)平(ping)為2.34μm。

實驗表(biao)明，本發(fa)明的(de)xanthone類(lei)化(hua)合物(wu)1和(he)2對海分(fen)枝桿(gan)(gan)菌(jun)感染(ran)具(ju)(ju)有很強的(de)抑(yi)制(zhi)活性，可將其制(zhi)成抗海分(fen)枝桿(gan)(gan)菌(jun)藥物(wu)，甚至抗結核桿(gan)(gan)菌(jun)藥物(wu)，并且花柳珊瑚內生真菌(jun)penicilliumsp.(ta33-1)可進行(xing)大規(gui)模發(fa)酵生產(chan)，保證了式i化(hua)合物(wu)1和(he)2的(de)天然來(lai)源，具(ju)(ju)有廣闊的(de)應用前景。