技術領域

本發明涉(she)及化合物的新用(yong)途，具體涉(she)及二肽meso-DAP-D-Ala和/或四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala的新用(yong)途。

背景技術：

結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)是(shi)一種全球性(xing)的(de)(de)(de)傳染性(xing)極(ji)強的(de)(de)(de)疾病(bing)(bing)，全世界有(you)1/3的(de)(de)(de)人(ren)口感染結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)分(fen)(fen)枝桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)，每年由于結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)導(dao)致的(de)(de)(de)死亡人(ren)數達百萬以上（Andreu N, Fletcher T, Krishnan N, Wiles S, Robertson BD.. J Antimicrob Chemother. 2012, 67: 404–414）。由于結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)分(fen)(fen)枝桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)生(sheng)長(chang)(chang)速(su)度非常(chang)緩慢，在(zai)常(chang)用(yong)的(de)(de)(de)羅氏（Lowenstein-Jensen）固(gu)體培(pei)養(yang)基(ji)中一般需(xu)要(yao)28天的(de)(de)(de)時(shi)間才(cai)能形(xing)成(cheng)肉眼可(ke)見的(de)(de)(de)菌(jun)(jun)(jun)(jun)落，這(zhe)給結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)診斷(duan)(duan)、分(fen)(fen)型(xing)(xing)鑒定及藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)敏試驗(yan)(yan)帶來(lai)很(hen)大的(de)(de)(de)挑戰。近年來(lai)，隨(sui)著(zhu)多(duo)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)耐(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)分(fen)(fen)支(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(MDR-TB)及廣泛耐(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)分(fen)(fen)支(zhi)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(XDR-TB)的(de)(de)(de)大量(liang)出現（Espinal M A, Laszlo A, Simonsen L, et al. N Engl J Med. 2001,344:1294-1303），結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)快(kuai)速(su)診斷(duan)(duan)和藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)敏檢測(ce)顯得尤(you)為重(zhong)要(yao)，這(zhe)樣可(ke)以更(geng)好的(de)(de)(de)管理和治療結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)人(ren)，減少(shao)耐(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)傳播。盡管現代(dai)分(fen)(fen)子生(sheng)物(wu)學技術在(zai)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)研究中發揮著(zhu)越來(lai)越重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)作用(yong)，但(dan)是(shi)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)分(fen)(fen)枝桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)在(zai)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)診斷(duan)(duan)、流行病(bing)(bing)學指標、結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)型(xing)(xing)鑒定、藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)敏試驗(yan)(yan)、結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物(wu)的(de)(de)(de)研究等方面依然有(you)著(zhu)不可(ke)替代(dai)的(de)(de)(de)作用(yong)。因此，開發新的(de)(de)(de)促進結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)分(fen)(fen)枝桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)快(kuai)速(su)生(sheng)長(chang)(chang)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)基(ji)對結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)核(he)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)診斷(duan)(duan)、分(fen)(fen)型(xing)(xing)鑒定及藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)敏試驗(yan)(yan)具有(you)非常(chang)重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)意義。

目前，結(jie)核分(fen)(fen)枝桿菌病的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)主(zhu)要(yao)(yao)有(you)固(gu)(gu)體(ti)(ti)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)和(he)液(ye)(ye)體(ti)(ti)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)兩種。固(gu)(gu)體(ti)(ti)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)主(zhu)要(yao)(yao)有(you)改(gai)良羅氏(shi)（Lownstein-Jenson，L-J）培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)、小川辰次（Tatsujiogawa）雞(ji)蛋培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)和(he)美國(guo)(guo)(guo)Becton-Diskinson（BD）公司研制(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)Middle brook 7H10、7H11等瓊脂培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)等。液(ye)(ye)體(ti)(ti)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)主(zhu)要(yao)(yao)蘇通（Sauton）培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)和(he)美國(guo)(guo)(guo)BD公司的(de)(de)(de)(de)(de)Middle brook 7H9、7H12等液(ye)(ye)體(ti)(ti)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)。其中羅氏(shi)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)和(he)小川辰次雞(ji)蛋培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)是(shi)以雞(ji)卵(luan)液(ye)(ye)為(wei)關鍵成(cheng)分(fen)(fen)，在(zai)制(zhi)備培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)時，要(yao)(yao)充分(fen)(fen)考慮雞(ji)卵(luan)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)新鮮程(cheng)度以及(ji)營(ying)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)成(cheng)分(fen)(fen)是(shi)否受到(dao)破(po)壞，制(zhi)備培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)過程(cheng)繁多而(er)復雜，而(er)且結(jie)核分(fen)(fen)枝桿菌在(zai)其上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)生長速(su)度要(yao)(yao)明顯慢(man)于BD公司的(de)(de)(de)(de)(de)Middle brook 7H10和(he)7H11固(gu)(gu)體(ti)(ti)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)。以蘇通培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)和(he)BD公司的(de)(de)(de)(de)(de) Middle brook系(xi)(xi)列(lie)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)主(zhu)要(yao)(yao)是(shi)由瓊脂、無機(ji)鹽類及(ji)一系(xi)(xi)列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)有(you)機(ji)化(hua)合物等成(cheng)分(fen)(fen)組成(cheng)（Saito H. Laboratory media for the cultivation of tubercle bacillus. Kekkaku,1998,73(5):329-337.WHO. Laboratory services in tuberculosis control,1998.）。目前，美國(guo)(guo)(guo)BD公司的(de)(de)(de)(de)(de)Middle brook系(xi)(xi)列(lie)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)是(shi)國(guo)(guo)(guo)外最常用于結(jie)核桿菌研究(jiu)、診斷和(he)藥敏檢測的(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)，其培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)時間短，越來越受到(dao)國(guo)(guo)(guo)內外學(xue)者的(de)(de)(de)(de)(de)關注。國(guo)(guo)(guo)內的(de)(de)(de)(de)(de)醫(yi)院及(ji)各(ge)級疾病預(yu)防控(kong)制(zhi)中心(xin)主(zhu)要(yao)(yao)還是(shi)采(cai)用傳統的(de)(de)(de)(de)(de)改(gai)良羅氏(shi)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)來進行結(jie)核菌的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)離培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)、傳代培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)及(ji)藥敏檢測培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)。

技術實現要素：

本發明的(de)(de)目的(de)(de)就(jiu)是針對上(shang)述現有(you)技術中的(de)(de)缺陷，通過研究(jiu)結(jie)(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)桿菌(jun)(jun)生(sheng)長(chang)及復蘇機制，從結(jie)(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)桿菌(jun)(jun)減毒(du)株(zhu)H37Ra的(de)(de)培(pei)養(yang)液(ye)中，通過色譜分(fen)離得到具(ju)有(you)促(cu)(cu)進結(jie)(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)桿菌(jun)(jun)快(kuai)速生(sheng)長(chang)活性的(de)(de)化合(he)物(wu)(wu)二(er)肽(tai)(tai)meso-DAP-D-Ala（內消旋二(er)氨(an)(an)基庚二(er)酸(suan)(suan)-D-丙氨(an)(an)酸(suan)(suan)）及四肽(tai)(tai)L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala（L-丙氨(an)(an)酸(suan)(suan)-D-谷氨(an)(an)酸(suan)(suan)-L-賴氨(an)(an)酸(suan)(suan)- D-丙氨(an)(an)酸(suan)(suan)）兩種化合(he)物(wu)(wu)。迄今為(wei)(wei)止，尚未見到有(you)關上(shang)述兩種肽(tai)(tai)類化合(he)物(wu)(wu)有(you)促(cu)(cu)進結(jie)(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)桿菌(jun)(jun)快(kuai)速生(sheng)長(chang)的(de)(de)報道，也未見到以這兩種肽(tai)(tai)類化合(he)物(wu)(wu)中的(de)(de)任意一種或組(zu)合(he)物(wu)(wu)為(wei)(wei)組(zu)分(fen)的(de)(de)結(jie)(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)桿菌(jun)(jun)和卡介苗(miao)(BCG)分(fen)枝(zhi)桿菌(jun)(jun)培(pei)養(yang)基上(shang)市，并依(yi)此提供了二(er)肽(tai)(tai)meso-DAP-D-Ala和/或四肽(tai)(tai)L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala兩種肽(tai)(tai)類化合(he)物(wu)(wu)的(de)(de)新用途。

為了實現上(shang)述目的，本發明提供的技術方案(an)為：二肽meso-DAP-D-Ala和/或四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala在(zai)制備結核分枝桿菌(jun)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)或卡介苗分枝桿菌(jun)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)中的應用。

本發(fa)明(ming)的(de)第二個目的(de)是提(ti)供了二肽(tai)meso-DAP-D-Ala和/或四(si)肽(tai)L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala在制(zhi)備結(jie)核菌診斷(duan)培養(yang)基(ji)(ji)、結(jie)核菌分離傳代培養(yang)基(ji)(ji)或結(jie)核病藥敏檢測培養(yang)基(ji)(ji)中(zhong)的(de)應用。

進(jin)一步的(de)，上述的(de)應用，所(suo)述二肽meso-DAP-D-Ala及四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala的(de)有效濃度(du)為0.1-10μmol/mL。

本發明所述的二肽meso-DAP-D-Ala及四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala是兩種白色粉末狀物質，無氣味,易溶于水，難溶于有機溶劑。其中二肽meso-DAP-D-Ala分子式為C₁₀H₁₉N₃O₅，分子量261；四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala分子式為C₁₇H₃₁N₅O₇，分(fen)子量417。這2種肽(tai)類化(hua)合(he)物最初由結(jie)核分(fen)枝桿菌減毒株H37Ra的培養(yang)液中分(fen)離純(chun)化(hua)得到(dao)，并由上海楚(chu)肽(tai)生物科(ke)技(ji)有(you)限公司化(hua)學合(he)成驗(yan)證，試驗(yan)所用肽(tai)類樣品均由上海楚(chu)肽(tai)生物科(ke)技(ji)有(you)限公司合(he)成，兩種樣品的純(chun)度均為96.5%。

為了獲得二肽meso-DAP-D-Ala及四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala的(de)(de)促進結核分枝桿菌的(de)(de)生長活(huo)性(xing)，本發明采取(qu)了以下技術路(lu)線與步驟：

1、結核(he)分(fen)(fen)枝桿菌(jun)7H9-S液(ye)體培養(yang)(yang)基的(de)配(pei)制：所述的(de)7H9-S培養(yang)(yang)基組成為(wei)0.47% 7H9（購自美(mei)國BD公司，貨號(hao)271310），0.2%甘(gan)油(you)，0.05%吐溫-80,0.085%氯(lv)化(hua)鈉，0.5%小(xiao)牛(niu)血清(qing)組分(fen)(fen)Ⅴ（Roche公司，貨號(hao)），0.2%葡(pu)萄糖，0.003%過(guo)氧化(hua)氫(qing)酶(mei)（Sigma-Aldrich公司，貨號(hao)C9322-1G）。配(pei)制時先(xian)稱取(qu)0.47克(ke)(ke)7H9粉末，0.2ml甘(gan)油(you)，0.05ml吐溫-80，加(jia)入90ml超純水(shui)后(hou)于121℃高壓滅菌(jun)10分(fen)(fen)鐘，然后(hou)加(jia)入用(yong)0.22um無菌(jun)濾膜(mo)除菌(jun)的(de)ADC營(ying)養(yang)(yang)液(ye)10ml（ADC的(de)配(pei)制如下：稱取(qu)0.85克(ke)(ke)氯(lv)化(hua)鈉，5克(ke)(ke)小(xiao)牛(niu)血清(qing)組分(fen)(fen)Ⅴ，2克(ke)(ke)葡(pu)萄糖，0.003克(ke)(ke)過(guo)氧化(hua)氫(qing)酶(mei)，加(jia)入100ml超純水(shui)充分(fen)(fen)溶解，用(yong)0.22um無菌(jun)濾膜(mo)除菌(jun)后(hou)，4℃冰箱保存）。

2、二肽meso-DAP-D-Ala及(ji)四肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala溶(rong)液的配制：

用電子天平分(fen)(fen)別稱取(qu)一定量的(de)上述(shu)2種化合物放入2支試管中，分(fen)(fen)別用無菌水(shui)溶解，濃(nong)度(du)均為50微摩爾/毫升，分(fen)(fen)別用0.22um的(de)無菌濾(lv)膜除菌后裝入2支無菌離(li)心管中，作為促生長試驗用的(de)母液放入4℃冰箱保存。

3、促生長(chang)活(huo)性試(shi)驗用的(de)(de)培養(yang)(yang)基配制：在(zai)配制好的(de)(de)無(wu)菌7H9-S培養(yang)(yang)基中(zhong)分別加入(ru)上述(shu)2種化(hua)合(he)物(wu)母液，每(mei)個化(hua)合(he)物(wu)分別配置4個濃度(du)梯度(du)：即(ji)10微(wei)摩爾/毫升(sheng)(sheng)，5微(wei)摩爾/毫升(sheng)(sheng)，1微(wei)摩爾/毫升(sheng)(sheng)，0.1微(wei)摩爾/毫升(sheng)(sheng)，對照組加入(ru)相等體積的(de)(de)無(wu)菌水。

4、對結核分枝桿菌的促生長試驗：首先從-80℃冰箱取出用甘油保存的結核分枝桿菌減毒株H37Ra,菌液濃度為1.0×10⁸CUF/ml，先4℃放置30分鐘后，取100ul菌(jun)液分別接(jie)種于(yu)(yu)裝有5ml的(de)7H9-S對照(zhao)培(pei)養基(ji)及試(shi)驗組(zu)培(pei)養基(ji)試(shi)管中(zhong)，37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養5天后，用酶標儀于(yu)(yu)OD600下檢測(ce)各(ge)試(shi)驗組(zu)的(de)H37Ra菌(jun)密度，并對各(ge)試(shi)驗組(zu)于(yu)(yu)7H10（購(gou)自美國(guo)BD公司）平(ping)板上進(jin)行菌(jun)落計數。研究結果表明，上述2種化合物在0.1微摩爾/毫(hao)升—10微摩爾/毫(hao)升濃度范(fan)圍內，促(cu)生長活(huo)性非常明顯(xian)，能使(shi)結核(he)分枝桿菌(jun)菌(jun)濃度增加5-10倍，在液體培(pei)養基(ji)中(zhong)菌(jun)群密度遠遠高于(yu)(yu)空白(bai)對照(zhao)組(zu)，在7H10固體培(pei)養基(ji)（7H10購(gou)自美國(guo)BD公司，貨號(hao)262710）上出現肉眼可見的(de)菌(jun)落比空白(bai)對照(zhao)組(zu)提前1周，菌(jun)斑(ban)明顯(xian)大于(yu)(yu)空白(bai)對照(zhao)組(zu)。

本(ben)發明的(de)有益效果為：本(ben)發明提供(gong)的(de)二肽(tai)meso-DAP-D-Ala和/或四肽(tai)L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala作為結(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)(zhi)桿(gan)菌(jun)的(de)生長因子，在開發新型(xing)結(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)(zhi)桿(gan)菌(jun)快速(su)培養基中(zhong)具有很好的(de)應用(yong)前景，可用(yong)于結(jie)核(he)病的(de)快速(su)診斷、分(fen)型(xing)鑒定及藥敏檢測。

附圖說明

圖1為本(ben)發(fa)明用到的(de)式（Ⅰ）-式（Ⅱ）的(de)結構示(shi)意圖。

圖2為7H10固體平板培(pei)養(yang)基上促生長試(shi)驗空白對照組示(shi)意圖。

圖3為7H10固體(ti)平板培養基上促生長試驗(yan)試驗(yan)組示意圖。

具體實施方式

實施例1：

對照(zhao)培養基7H9-S液(ye)體培養基的(de)配制(zhi)：

電子(zi)天平上準確稱取(qu)0.47克(ke)7H9，0.2ml甘(gan)油，0.05ml吐(tu)溫-80，加入(ru)90ml超(chao)純(chun)水后于121℃高壓(ya)滅菌10分(fen)鐘，冷卻至(zhi)室溫，然(ran)后加入(ru)10ml的(de)ADC營養(yang)液，即為配制好的(de)7H9-S液體培養(yang)基。其中ADC營養(yang)液的(de)配制如下：稱取(qu)0.85克(ke)氯(lv)化鈉，5克(ke)小牛血清組分(fen)Ⅴ，2克(ke)葡萄糖，0.003克(ke)過氧化氫酶，加入(ru)100ml超(chao)純(chun)水充分(fen)溶解后，用0.22um無(wu)菌濾膜除菌，得到配制好的(de)ADC營養(yang)液。

實施例2：

活(huo)性(xing)試(shi)驗(yan)組培養基的(de)配制：

用(yong)電(dian)子天(tian)平分(fen)別準(zhun)確稱(cheng)取一定(ding)量的(de)(de)二肽meso-DAP-D-Ala及(ji)四(si)肽L-Ala-D-Glu-L-Lys-D-Ala兩種化合(he)物(wu)放入2支(zhi)試管（試驗所用(yong)樣品均(jun)(jun)(jun)購(gou)自(zi)于生(sheng)工生(sheng)物(wu)工程上海有(you)限公司，2種樣品的(de)(de)純度(du)均(jun)(jun)(jun)為(wei)96.5%），分(fen)別用(yong)無菌(jun)(jun)(jun)水(shui)溶解，濃(nong)度(du)均(jun)(jun)(jun)為(wei)50微(wei)摩(mo)爾/毫升(sheng)(sheng)(sheng)，分(fen)別用(yong)0.22um的(de)(de)無菌(jun)(jun)(jun)濾膜(mo)除菌(jun)(jun)(jun)后(hou)裝入2支(zhi)無菌(jun)(jun)(jun)離心(xin)管中備用(yong)。然(ran)后(hou)將配制好的(de)(de)上述(shu)兩種化合(he)物(wu)溶液，用(yong)配制好的(de)(de)7H9-S液體培養基分(fen)別稀釋至10微(wei)摩(mo)爾/毫升(sheng)(sheng)(sheng)，5微(wei)摩(mo)爾/毫升(sheng)(sheng)(sheng)，1微(wei)摩(mo)爾/毫升(sheng)(sheng)(sheng)，0.1微(wei)摩(mo)爾/毫升(sheng)(sheng)(sheng)共4個濃(nong)度(du)梯度(du)。

實施例3：

促生長活性測定：

從-80℃低溫冰箱中取出用甘油保存的結核分枝桿菌減毒株H37Ra, 先4℃放置30分鐘后,然后用無菌水稀釋至菌液濃度為1.0×10⁸CUF/ml，各(ge)(ge)取100ul分(fen)別接種(zhong)于(yu)裝有5ml的7H9-S對照培(pei)養(yang)基及各(ge)(ge)試(shi)驗(yan)組培(pei)養(yang)基試(shi)管中，37℃培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)5天(tian)后，用(yong)酶標儀于(yu)OD600nm下讀取吸光度值，從而檢測各(ge)(ge)試(shi)驗(yan)組的H37Ra菌株(zhu)(zhu)的生(sheng)長(chang)密度, 并對各(ge)(ge)試(shi)驗(yan)組于(yu)7H10（購(gou)自美國BD公(gong)司，貨號262710）平板(ban)上進(jin)行菌落計數(shu)（其中結核菌減毒(du)株(zhu)(zhu)H37Ra由(you)美國約翰-霍普金(jin)斯大(da)學(xue)分(fen)子微生(sheng)物學(xue)與(yu)免疫學(xue)研究所張穎教授(shou)提供給本實(shi)驗(yan)室）。結果表明，上述2種(zhong)化(hua)合物在0.1微摩(mo)爾/毫(hao)升—10微摩(mo)爾/毫(hao)升濃度范(fan)圍內，促生(sheng)長(chang)活(huo)性非常(chang)顯著(zhu)，能使結核分(fen)枝桿菌菌濃度增加5-10倍，其中二(er)肽meso-DAP-D-Ala組的促生(sheng)長(chang)活(huo)性較強，兩種(zhong)肽類化(hua)合物對結核分(fen)枝桿菌H37Ra的促生(sheng)長(chang)作用(yong)見(jian)表1。

表1

同時，用7H10固(gu)體平(ping)板培(pei)(pei)養(yang)基進行促生長試驗，結(jie)果表(biao)明(ming)加(jia)入(ru)二肽(tai)(tai)和(he)四(si)肽(tai)(tai)后的(de)(de)(de)(de)試驗組(zu)(zu)(zu)(zu)出現肉眼(yan)可(ke)見的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)時間(jian)為18天，空白(bai)對(dui)照組(zu)(zu)(zu)(zu)出現肉眼(yan)可(ke)見的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)時間(jian)為23天，試驗組(zu)(zu)(zu)(zu)固(gu)體培(pei)(pei)養(yang)基出現肉眼(yan)可(ke)見的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)比空白(bai)對(dui)照組(zu)(zu)(zu)(zu)出現肉眼(yan)可(ke)見的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)落(luo)要提(ti)前5天，且試驗組(zu)(zu)(zu)(zu)菌(jun)(jun)斑(ban)明(ming)顯大于空白(bai)對(dui)照組(zu)(zu)(zu)(zu)。固(gu)體培(pei)(pei)養(yang)基上培(pei)(pei)養(yang)18天后的(de)(de)(de)(de)結(jie)果見圖2（空白(bai)對(dui)照組(zu)(zu)(zu)(zu)）、圖3(加(jia)入(ru)二肽(tai)(tai)、四(si)肽(tai)(tai)后的(de)(de)(de)(de)試驗組(zu)(zu)(zu)(zu)）。

最后應(ying)(ying)說(shuo)明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)是(shi)：以(yi)上所(suo)(suo)述(shu)僅為本發(fa)明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)優選實(shi)施(shi)(shi)例(li)而已，并不用于限制(zhi)本發(fa)明(ming)(ming)(ming)(ming)，盡管(guan)參照前述(shu)實(shi)施(shi)(shi)例(li)對本發(fa)明(ming)(ming)(ming)(ming)進(jin)行了詳(xiang)細的(de)(de)說(shuo)明(ming)(ming)(ming)(ming)，對于本領域的(de)(de)技術(shu)人員來說(shuo)，其依然可以(yi)對前述(shu)各(ge)實(shi)施(shi)(shi)例(li)所(suo)(suo)記載的(de)(de)技術(shu)方(fang)案進(jin)行修改(gai)，或者對其中部(bu)分技術(shu)特征(zheng)進(jin)行等同替換。凡在本發(fa)明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)精神和原(yuan)則之內，所(suo)(suo)作的(de)(de)任何修改(gai)、等同替換、改(gai)進(jin)等，均(jun)應(ying)(ying)包含在本發(fa)明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)保護范圍(wei)之內。