本發明屬于(yu)分子生物學領域，涉(she)及一種糖肽類抗生素耐藥基(ji)(ji)因檢測(ce)的并聯(lian)探針、基(ji)(ji)因芯(xin)片、試劑盒與檢測(ce)方法。

背景技術：

在過去的(de)(de)幾(ji)(ji)十年(nian)，抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)廣(guang)(guang)泛用于各種(zhong)感(gan)(gan)染性(xing)疾病的(de)(de)治(zhi)療，但也(ye)正是(shi)由(you)于抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)的(de)(de)廣(guang)(guang)泛使用，導(dao)致新的(de)(de)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)耐(nai)藥形式不斷出現(xian)。糞(fen)腸(chang)球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)、結核(he)分枝桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)、銅(tong)綠假單胞菌(jun)(jun)(jun)對(dui)(dui)臨床(chuang)上(shang)使用的(de)(de)100多種(zhong)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)具(ju)有耐(nai)藥性(xing)，成為目前威脅人類(lei)(lei)生(sheng)命的(de)(de)重要(yao)(yao)的(de)(de)細菌(jun)(jun)(jun)殺手(shou)。糖肽(tai)類(lei)(lei)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)(G1ycopeptides，Dalbahepides)即(ji)D-丙氨酰-D-丙氨酸(suan)結合性(xing)并(bing)具(ju)有七(qi)肽(tai)結構的(de)(de)一類(lei)(lei)抗(kang)生(sheng)素(su)(su)(su)，對(dui)(dui)包(bao)(bao)括(kuo)主要(yao)(yao)病原菌(jun)(jun)(jun)如凝固酶陽性(xing)或陰性(xing)葡(pu)萄球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)、各組鏈球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)、腸(chang)球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)(包(bao)(bao)括(kuo)糞(fen)腸(chang)球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)和屎腸(chang)球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun))、棒桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)、厭氧球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)和單核(he)細胞增生(sheng)利斯特(te)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)在內(nei)的(de)(de)幾(ji)(ji)乎所有的(de)(de)革(ge)蘭氏(shi)陽性(xing)菌(jun)(jun)(jun)都具(ju)有活(huo)性(xing)，在臨床(chuang)上(shang)常用于由(you)革(ge)蘭氏(shi)陽性(xing)菌(jun)(jun)(jun)尤其是(shi)葡(pu)萄球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)、腸(chang)球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)和肺炎(yan)鏈球(qiu)(qiu)(qiu)菌(jun)(jun)(jun)所致嚴(yan)重感(gan)(gan)染性(xing)疾病的(de)(de)治(zhi)療，代(dai)表著(zhu)治(zhi)療這些嚴(yan)重感(gan)(gan)染性(xing)疾病的(de)(de)最后(hou)防(fang)線。

自1988年報道糖肽(tai)(tai)類(lei)抗(kang)菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)腸(chang)球菌(jun)(jun)(jun)以來，在(zai)全球范圍內的(de)(de)(de)(de)(de)醫院(yuan)中(zhong)(zhong)常出現。現已(yi)發(fa)(fa)現主要耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)基因(yin)(yin)(yin)VanA、VanB、VanC、VanH、VanR、VanS和VanX 7個基因(yin)(yin)(yin)型(xing)。糖肽(tai)(tai)類(lei)抗(kang)生素(su)耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)基因(yin)(yin)(yin)可(ke)由轉(zhuan)(zhuan)座(zuo)子、質粒攜帶，通過細(xi)菌(jun)(jun)(jun)間的(de)(de)(de)(de)(de)接合作用來傳遞(di)(di)，使腸(chang)球菌(jun)(jun)(jun)中(zhong)(zhong)糖肽(tai)(tai)耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)率不斷增加，而且(qie)許多萬(wan)(wan)古霉素(su)耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)性(xing)腸(chang)球菌(jun)(jun)(jun)還對(dui)其(qi)它(ta)抗(kang)生素(su)(如(ru)β-內酰胺類(lei)和氨(an)基糖苷類(lei)抗(kang)生素(su))耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)，給(gei)(gei)萬(wan)(wan)古霉素(su)耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)性(xing)腸(chang)球菌(jun)(jun)(jun)感染的(de)(de)(de)(de)(de)臨(lin)(lin)(lin)床治療(liao)造(zao)成很大的(de)(de)(de)(de)(de)困難(nan)。另一方面，已(yi)發(fa)(fa)現一些甲氧西林耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)性(xing)金(jin)黃色葡(pu)萄球菌(jun)(jun)(jun)臨(lin)(lin)(lin)床分(fen)離株(zhu)對(dui)萬(wan)(wan)古霉素(su)和替考拉寧的(de)(de)(de)(de)(de)敏感性(xing)減(jian)弱，在(zai)牛(niu)鏈球菌(jun)(jun)(jun)臨(lin)(lin)(lin)床分(fen)離株(zhu)中(zhong)(zhong)發(fa)(fa)現了可(ke)轉(zhuan)(zhuan)移性(xing)vanB耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)決(jue)定(ding)子，在(zai)環狀芽孢桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)臨(lin)(lin)(lin)床分(fen)離株(zhu)中(zhong)(zhong)發(fa)(fa)現存在(zai)vanA基因(yin)(yin)(yin)簇，說明糖肽(tai)(tai)耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)基因(yin)(yin)(yin)不僅在(zai)腸(chang)球菌(jun)(jun)(jun)間傳播，而且(qie)可(ke)傳遞(di)(di)至腸(chang)球菌(jun)(jun)(jun)外的(de)(de)(de)(de)(de)其(qi)它(ta)細(xi)菌(jun)(jun)(jun)，給(gei)(gei)未來的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)感染治療(liao)帶來了極大的(de)(de)(de)(de)(de)威脅，對(dui)研制和開發(fa)(fa)高效準(zhun)確(que)的(de)(de)(de)(de)(de)糖肽(tai)(tai)耐(nai)(nai)(nai)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)基因(yin)(yin)(yin)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)在(zai)臨(lin)(lin)(lin)床輔助(zhu)治療(liao)具(ju)有(you)重要的(de)(de)(de)(de)(de)意義。

生物(wu)芯片(pian)技(ji)術是(shi)九十年代(dai)發展起來的(de)一項新興生物(wu)技(ji)術。按照檢(jian)(jian)測(ce)(ce)對象來分類，可以分為基因(yin)芯片(pian)和(he)蛋白(bai)質芯片(pian)等兩大(da)類。與蛋白(bai)質芯片(pian)相比，基因(yin)芯片(pian)利(li)用(yong)的(de)是(shi)核苷(gan)酸鏈之間的(de)互補作用(yong)，特異性強，性好。本發明所提供(gong)的(de)糖肽(tai)類抗生素耐藥基因(yin)芯片(pian)與傳統的(de)細菌藥敏(min)性檢(jian)(jian)測(ce)(ce)方(fang)法(fa)相比，直接(jie)針對病原(yuan)體糖肽(tai)類抗生素耐藥基因(yin)進行檢(jian)(jian)測(ce)(ce)，其檢(jian)(jian)測(ce)(ce)通量(liang)大(da)、所需樣(yang)本量(liang)少(shao)、靈(ling)敏(min)度高(gao)(gao)、準(zhun)確性高(gao)(gao)和(he)特異性好等優(you)勢。

技術實現要素：

本發明目的(de)是(shi)提供一種特(te)異性好、結果準確、假陽性率低(di)、檢(jian)(jian)測效率高的(de)糖肽(tai)類抗生素(su)耐藥(yao)基(ji)因檢(jian)(jian)測的(de)并聯探針、基(ji)因芯片(pian)、試劑盒(he)與檢(jian)(jian)測方(fang)法。

本發明(ming)實(shi)現其目的技(ji)術方(fang)案為：

一種糖(tang)肽類抗生素耐藥基(ji)因檢測并聯探(tan)針，包括探(tan)針1~23，其(qi)對應的序列如SEQ ID NO.1~23所示(shi)。

一種糖(tang)肽類抗生(sheng)素(su)耐藥基因(yin)檢(jian)測(ce)芯片，包括(kuo)固體相和權利要求1所述的探(tan)針組。

作為優選地(di)，所(suo)述固(gu)相載(zai)體為氨基(ji)修飾(shi)的(de)玻璃(li)基(ji)片、尼(ni)龍膜或硝酸(suan)纖維素(su)膜。

一種(zhong)糖肽類抗生素耐藥(yao)基(ji)因(yin)檢測試劑盒，包(bao)括前述的(de)基(ji)因(yin)芯片。

在上述(shu)糖肽(tai)類(lei)抗生素(su)耐藥(yao)基因檢(jian)測試劑盒中(zhong)，還(huan)包括糖肽(tai)類(lei)抗生素(su)耐藥(yao)靶(ba)基因擴增引物(wu)對，引物(wu)序列(lie)如(ru)SEQ ID NO.24~39所(suo)示。

作為優選(xuan)地(di)，所述引物(wu)對的下游引物(wu)的5’端含有CY3熒(ying)光染料標記。

作為優選地，上述(shu)糖肽(tai)類抗生素(su)耐藥基因(yin)檢測(ce)試劑盒，還包(bao)括PCR反應體(ti)系、雜交緩沖液、洗滌(di)液。

在上述技術方案中，20 μL 的(de)PCR反應體系包括(kuo)：50~150 ng/μL的(de)擴增(zeng)模板(ban) 2 μL，Premix Taq 10 μL，濃度為8~12 μM的(de)上、下游引物各1 μL，雙蒸水6 μL。

一種糖(tang)(tang)肽(tai)(tai)類(lei)抗生素(su)耐藥基(ji)因檢(jian)測(ce)方法(fa)，使(shi)用前述的(de)(de)糖(tang)(tang)肽(tai)(tai)類(lei)抗生素(su)耐藥基(ji)因檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒進行檢(jian)測(ce)，當(dang)檢(jian)測(ce)對象的(de)(de)三個探(tan)針顯示的(de)(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果一致時(shi)可以判斷樣品是否感染(ran)糖(tang)(tang)肽(tai)(tai)類(lei)抗生素(su)耐藥基(ji)因；當(dang)檢(jian)測(ce)對象的(de)(de)三個探(tan)針顯示的(de)(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果不一致時(shi)，不能判斷該(gai)待(dai)測(ce)樣品為陽性(xing)或(huo)陰性(xing)，建議使(shi)用該(gai)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒重新檢(jian)測(ce)或(huo)者使(shi)用現(xian)有其它檢(jian)測(ce)方法(fa)進一步驗證。

作(zuo)為(wei)優選地，PCR擴(kuo)增(zeng)反應程序為(wei)95℃ 5 min；95℃10 s、55℃ 30 s、72℃30 s、30個循環；72℃ 10 min。

本發明的(de)(de)(de)有(you)益效果(guo)是(shi)：每個耐藥(yao)(yao)基(ji)因(yin)設(she)計3條(tiao)高(gao)特(te)(te)異性(xing)(xing)的(de)(de)(de)探(tan)針，當(dang)3條(tiao)探(tan)針的(de)(de)(de)檢測(ce)結(jie)果(guo)均為陽(yang)性(xing)(xing)時(shi)才判斷該項指標為陽(yang)性(xing)(xing)，能極大的(de)(de)(de)提高(gao)產(chan)品的(de)(de)(de)準(zhun)確性(xing)(xing)和精確性(xing)(xing)，減少其它方(fang)法容易(yi)出(chu)現的(de)(de)(de)假(jia)陽(yang)性(xing)(xing)問題(ti)；本發明通(tong)過(guo)(guo)PCR技術對病原(yuan)體(ti)糖肽類抗生(sheng)(sheng)素耐藥(yao)(yao)基(ji)因(yin)組進行擴(kuo)增(zeng)，檢測(ce)的(de)(de)(de)特(te)(te)異性(xing)(xing)高(gao)，擴(kuo)增(zeng)產(chan)物與(yu)生(sheng)(sheng)物芯片上的(de)(de)(de)寡核苷(gan)酸探(tan)針進行雜交，通(tong)過(guo)(guo)CY3標記的(de)(de)(de)PCR反向擴(kuo)增(zeng)引(yin)物檢測(ce)雜交結(jie)果(guo)。操作(zuo)簡單(dan)、結(jie)果(guo)易(yi)讀，滿(man)足醫療(liao)等現場(chang)檢測(ce)需求(qiu)，為臨床(chuang)醫生(sheng)(sheng)快速診斷患者是(shi)否被感染糖肽類抗生(sheng)(sheng)素耐藥(yao)(yao)基(ji)因(yin)提供(gong)了便(bian)捷、快速和準(zhun)確的(de)(de)(de)理論依據，具有(you)廣闊的(de)(de)(de)臨床(chuang)應用市場(chang)潛(qian)力。

附圖說明

圖(tu) 1 檢測糖肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥基(ji)因的基(ji)因芯片(pian)示意圖(tu)。

圖(tu)2待測樣品糖肽類抗生素(su)耐藥基因擴增后PCR產(chan)物電(dian)泳條帶(dai)圖(tu)；Marker DL2000 （TAKARA）。

具體實施方式

下(xia)(xia)面將結合附圖(tu)，對本(ben)發明(ming)的(de)優(you)選實(shi)(shi)施例進(jin)行(xing)詳細的(de)描(miao)述(shu)。實(shi)(shi)施例中未注明(ming)具體條(tiao)件的(de)實(shi)(shi)驗方法，通常按(an)照常規條(tiao)件，例如分(fen)子克(ke)隆(long)實(shi)(shi)驗指南(nan)（第三版，J. 薩姆布魯克(ke)等著）中所述(shu)的(de)條(tiao)件，或按(an)照制(zhi)造廠商所建(jian)議的(de)條(tiao)件。以下(xia)(xia)實(shi)(shi)施例用(yong)于說明(ming)本(ben)發明(ming)，但不用(yong)于限(xian)制(zhi)本(ben)發明(ming)的(de)范圍。

實施例1目的片段引物與探針設計

查找NCBI數據庫中(zhong)糖肽類抗(kang)生素(su)耐藥(yao)基因(yin)(yin)的(de)基因(yin)(yin)序(xu)列VanA、VanB、VanC、VanH、VanR、VanS和(he)VanX，使(shi)用芯片探(tan)針設計(ji)軟件（ArrayDesigner4.2）針對(dui)(dui)每(mei)個耐藥(yao)基因(yin)(yin)設計(ji)3條探(tan)針，另設計(ji)16sRNA基因(yin)(yin)的(de)探(tan)針作(zuo)為(wei)陽性質控(kong)探(tan)針（PC）與隨機合成一段探(tan)針作(zuo)為(wei)陰(yin)性質控(kong)探(tan)針（NC），對(dui)(dui)應探(tan)針序(xu)列如SEQ ID NO .1~23所示。

使(shi)用(yong)NCBI在(zai)(zai)線設計軟(ruan)件（Primer-BLAST）設計VanA、VanB、VanC、VanH、VanR、VanS和VanX基(ji)(ji)因(yin)的PCR擴增引(yin)物，同時設計16sRNA基(ji)(ji)因(yin)的擴增引(yin)物。為了(le)使(shi)芯片(pian)結(jie)果(guo)更為直觀，在(zai)(zai)反向(xiang)擴增引(yin)物（R）5’端用(yong)CY3熒光染(ran)料(liao)進行標(biao)記，對(dui)應(ying)的引(yin)物序列如SEQ ID NO .24~39所示(shi)。

實施例2 芯片的(de)制備(bei)

將實施(shi)例1中的(de)并(bing)聯(lian)探針按照表1的(de)順序點(dian)樣到氨基修飾的(de)玻璃基片上(shang)，得(de)到含有探針的(de)基因芯片（如圖(tu)1所(suo)示）。探針濃度為30 μM，每個(ge)點(dian)0.2 μL，然(ran)后80℃孵育1.5 h。

實施例3 檢測方法

1、待(dai)測樣品基因組提取

使用細菌基因組(zu)DNA提取(qu)試劑盒(he)，按照操作(zuo)說明(ming)書(shu)的(de)步驟提取(qu)待測樣品的(de)基因組(zu)作(zuo)為擴增(zeng)模板(ban)。

2、PCR擴(kuo)增目的片段

經過(guo)大量實驗摸索，確定Van檢測的靶基因PCR擴增(zeng)(zeng)體系(xi)和PCR反應(ying)程序(xu)。將(jiang)每個Van基因VanA、VanB、VanC、VanH、VanR、VanS、VanX和16SrRNA擴增(zeng)(zeng)的引物，分(fen)別配制PCR擴增(zeng)(zeng)緩沖(chong)液體系(xi)，總體積為20 μL的PCR擴增(zeng)(zeng)體系(xi)中含有試劑分(fen)別為：Premix LATaq 10μL、F引物（10μM）1 μL、F引物（10 μM）1 μL、擴增(zeng)(zeng)模板2 μL、雙蒸水6 μL。

PCR反應程序為：95℃ 5 min；95℃10 s、55℃ 30 s、72℃30 s、30個循環；72℃ 10 min。

3、PCR產(chan)物(wu)與芯片(pian)雜交(jiao)

按照如下步驟操作：

a. 在實施例2中制備(bei)好(hao)的(de)基因芯片上，將待測樣品(pin)的(de)VanA、VanB、VanC、VanH、VanR、VanS、VanX和16SrRNA的(de)PCR擴(kuo)增產物(wu)混勻并點(dian)樣到芯片的(de)檢測槽(cao)中，VanA引(yin)物(wu)的(de)PCR產物(wu)分(fen)(fen)別點(dian)到VanA-1、VanA-2、VanA-3探針(zhen)上，VanB、VanC、VanH、VanR、VanS、VanX引(yin)物(wu)的(de)PCR產物(wu)分(fen)(fen)別對(dui)應點(dian)到探針(zhen)上，16sRNA引(yin)物(wu)的(de)PCR產物(wu)分(fen)(fen)別點(dian)到陽性質控(kong)探針(zhen)（PC）與(yu)陰性質控(kong)探針(zhen)(NC)。具體步驟為：PCR產物(wu)95℃解鏈5分(fen)(fen)鐘，迅(xun)速置于冰上，PCR產物(wu)與(yu)雜交緩沖液(ye)（50%甲酰(xian)胺(an)，10×SSC，0.2%SDS）等(deng)體積混合，每孔點(dian)10 μL混合液(ye)，在濕盒中，于60℃雜交孵育2小時；

b. 取出孵育后的基(ji)因芯片，用洗滌液(ye)（0.3×SSC緩沖(chong)液(ye)）清洗3次(ci)；

c.將芯(xin)片放入激(ji)光(guang)(guang)共聚焦檢測儀（GenePix）在650 nm處掃(sao)描芯(xin)片；軟件分析熒光(guang)(guang)信號強度值，給(gei)出(chu)結果。

實(shi)施(shi)例(li)4 檢測待測樣品(pin)

從第三軍醫(yi)大(da)學獲取糖肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥細(xi)菌感染的樣本5份（膝(xi)關節積液），無糖肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥基(ji)因感染樣本1份（對照組）。按照實施例(li)1和3中的引物(wu)和方(fang)法分別提(ti)取待測樣品的基(ji)因組，進行PCR擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)后，使用實施例(li)2中的基(ji)因芯片進行檢測。PCR擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)后的產物(wu)電(dian)泳條(tiao)帶表明本發明設計的擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)引物(wu)特異性高，能特異、靈敏地(di)擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)出目標基(ji)因（如(ru)圖(tu)2所示(shi)）。

對(dui)于細(xi)菌感染的樣品，激光共(gong)聚焦檢(jian)測(ce)儀（GenePix）在650 nm處掃描芯片，探針點(dian)熒光信號(hao)較強(qiang)（大于20），記為（+），熒光信號(hao)較弱（小于5），則記為（-），熒光信號(hao)強(qiang)度難以分辨（5~20）則記為（*）。檢(jian)測(ce)中同時設計(ji)陽(yang)性(xing)和陰(yin)性(xing)質(zhi)控對(dui)照，只有當陽(yang)性(xing)和陰(yin)性(xing)質(zhi)控對(dui)照的檢(jian)測(ce)結果(guo)同時分為別陽(yang)性(xing)（+）和陰(yin)性(xing)（-），才認為該(gai)組(zu)檢(jian)測(ce)結果(guo)可信。

判斷(duan)檢(jian)測(ce)(ce)(ce)結(jie)果時，當VanA、VanB、VanC、VanH、VanR、VanS、VanX基因(yin)的(de)3個(ge)探(tan)針均顯示(shi)陽性時才(cai)判斷(duan)該樣(yang)本帶有(you)(you)該耐藥(yao)基因(yin)，如(ru)果其(qi)中某一個(ge)或(huo)者兩個(ge)探(tan)針顯示(shi)陽性，則應對該檢(jian)測(ce)(ce)(ce)樣(yang)品(pin)重新(xin)檢(jian)測(ce)(ce)(ce)，3個(ge)探(tan)針結(jie)果須一致才(cai)能(neng)采信(xin)該檢(jian)測(ce)(ce)(ce)結(jie)果。3個(ge)探(tan)針檢(jian)測(ce)(ce)(ce)結(jie)果不一致時，也(ye)可使用現(xian)有(you)(you)其(qi)它技術（比(bi)如(ru)elisa方(fang)法(fa)）進一步檢(jian)測(ce)(ce)(ce)驗證。檢(jian)測(ce)(ce)(ce)結(jie)果如(ru)表2所示(shi)。

表2 樣本檢測結果

結果顯示為(wei)(wei)陽性(xing)(xing)質(zhi)控(kong)對照(zhao)均(jun)(jun)為(wei)(wei)陽性(xing)(xing)（+），陰性(xing)(xing)質(zhi)控(kong)對照(zhao)均(jun)(jun)為(wei)(wei)陰性(xing)(xing)（-），說明檢(jian)測結果可(ke)信。其中5份樣(yang)(yang)本(ben)中均(jun)(jun)檢(jian)測到(dao)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因感(gan)(gan)染(ran)(ran)，樣(yang)(yang)本(ben)1被(bei)(bei)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因VanA感(gan)(gan)染(ran)(ran)，樣(yang)(yang)本(ben)2被(bei)(bei)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因VanR感(gan)(gan)染(ran)(ran)，樣(yang)(yang)本(ben)3被(bei)(bei)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因VanX感(gan)(gan)染(ran)(ran)，樣(yang)(yang)本(ben)4被(bei)(bei)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因VanX感(gan)(gan)染(ran)(ran)，樣(yang)(yang)本(ben)5被(bei)(bei)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因VanR感(gan)(gan)染(ran)(ran)；對照(zhao)樣(yang)(yang)本(ben)均(jun)(jun)未檢(jian)測到(dao)糖(tang)(tang)肽類抗(kang)生素(su)耐(nai)藥(yao)基(ji)(ji)(ji)因，與(yu)實(shi)際(ji)臨床樣(yang)(yang)本(ben)信息情況相符。

本發明公開的探(tan)針、基因芯片、試劑盒，特異性(xing)高(gao)、結果非常準確(que)，檢測快速、工作效率高(gao)，操作簡單，滿足醫院等的現(xian)場檢測需求，為(wei)診斷糖(tang)肽類(lei)抗(kang)生素耐(nai)藥細(xi)菌感(gan)染提供可(ke)靠的實驗依(yi)據。

SEQUENCE LISTING

<110> 重慶威斯騰生物醫藥科技有限責任公(gong)司

<120> 一種糖(tang)肽類抗(kang)生素耐藥基因檢測試劑盒

<130> 2017

<160> 39

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

tttttttttt ttttttgacg tgaaaccggg cagagtattg acttc 45

<210> 2

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序(xu)列

<400> 2

tttttttttt tttttgattt ggtccacctc gccaacagct aacgc  45

<210> 3

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tttttttttt tttttattaa taacccaaaa ggcgggagta gctat 45

<210> 4

<211> 47

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

tttttttttt tttttttttt gaattgtctg gtatccccta tgtaggc 47

<210> 5

<211> 47

<212> DNA

<213> 人(ren)工序列

<400> 5

tttttttttt tttttttccg gcacggtcag gttcgtcctt tggcgta  47

<210> 6

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工(gong)序列

<400> 6

tttttttttt tttttgatca aatccggttg agccacggta tcttc 45

<210> 7

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工(gong)序列

<400> 7

tttttttttt tttttcataa acagaaaata cagccgctat tcgaa  45

<210> 8

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

tttttttttt ttttttctgc cttatgtatg aacaaatggc tgctg  45

<210> 9

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

tttttttttt tttttggcaa cgactctttg actgtcggtg cttgt 45

<210> 10

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tttttttttt tttttggtgt gaaatatatt tctacccgaa gcatc 45

<210> 11

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

tttttttttt tttttgtggt gggaacgggc cagataggca aagcg 45

<210> 12

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工(gong)序列

<400> 12

tttttttttt tttttattat cagccacgaa caaatacaga gaatg 45

<210> 13

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tttttttttt tttttatatt ggacatcatg cttcccggca caagc 45

<210> 14

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工(gong)序(xu)列

<400> 14

tttttttttt tttttgggtt aacaatcggc gcggatgatt atata  45

<210> 15

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

tttttttttt tttttgaaaa tgttatcgtc cactccggcc ttgtc 45

<210> 16

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

tttttttttt tttttgatgt acttattcag aacgaagata aacaa  45

<210> 17

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

tttttttttt tttttggaaa acaggcggtt attcacgccc ccgag 45

<210> 18

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序(xu)列

<400> 18

tttttttttt tttttgccga acaaagaaaa aatgacgttg ttatg  45

<210> 19

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

tttttttttt tttttttgaa ggcaaaagaa ctggctgcta cccaa 45

<210> 20

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序(xu)列(lie)

<400> 20

tttttttttt tttttgcttc aaaatcaagc catagccgcg gcagt 45

<210> 21

<211> 45

<212> DNA

<213> 人(ren)工序列

<400> 21

tttttttttt tttttgcggc aaatggaata tcatgcaatg aagcg 45

<210> 22

<211> 34

<212> DNA

<213> 人(ren)工序(xu)列

<400> 22

tttttttttt tttttccgat agtgaaccag tacc 34

<210> 23

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(lie)

<400> 23

tttttttttt tttttctatc tagctagcta gctagcta 38

<210> 24

<211> 25

<212> DNA

<213> 人(ren)工序列

<400> 24

cgatcaagcg gtcaatcagt tcggg  25

<210> 25

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

cctctgagca acccccaaac agta  24

<210> 26

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gcggttgctc ggaggaacat gatgtgtcg 29

<210> 27

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工(gong)序(xu)列

<400> 27

tatcgccaat gtaatcaggc tgtc 24

<210> 28

<211> 27

<212> DNA

<213> 人(ren)工序列

<400> 28

attcaccgga atacaccgtt tctttag 27

<210> 29

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(lie)

<400> 29

tcttgatagg ataagccgac cgctgc 26

<210> 30

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

tcggcattac tgtttatgga tgtga   25

<210> 31

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

ctcctgtctc ctttcaaaat ccaaacag 28

<210> 32

<211> 26

<212> DNA

<213> 人(ren)工序列

<400> 32

gtggatgatg aacatgaaat tgccga 26

<210> 33

<211> 25

<212> DNA

<213> 人(ren)工序(xu)列

<400> 33

aaccaagtct ggcatcgctg gaagc 25

<210> 34

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

attcgtgttg tatattcgtt caatg  25

<210> 35

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

aaccaagtct ggcatcgctg gaagc  25

<210> 36

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gatgaaatag tacacggtg  19

<210> 37

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

ggggaaatca aaatagctat t 21

<210> 38

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序(xu)列

<400> 38

gagagtttga tyctggctca g 21

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序(xu)列(lie)

<400> 39

aaggaggtga tccarccgca  20