本發明涉及生物
技術領域：
，具體而言，涉及檢測結核分枝桿菌感染的抗原多肽池及其應用。
背景技術：
：結核病是主要經呼吸道傳播的、嚴重危害我國和全世界的重要傳染病之一。據世界衛生組織，全世界有17-20億的結核分枝桿菌感染者，每年至少200萬人死于本病(謝建平，結核分枝桿菌功能基因組研究的方法學，微生物通報.2001.28(5):92-97)。因此，準確篩檢感染者的方法在結核病的防治甚至最終的消滅中扮演極其重要的作用。現有的診斷技術對結核分枝桿菌感染者的診斷非常難。近幾十年來，臨床上采用結核菌素試驗(tst)來診斷結核分枝桿菌感染者。但tst活性成份是純蛋白衍生物(purifiedproteinderivativeoftubercμlin，ppd)，是結核分枝桿菌培養上清液的粗提物，含有200多種成分，與卡介苗(bacilluscalmette-guerin，bcg)接種和環境分枝桿菌感染存在交叉反應。tst檢測結果可被現在臨床廣泛使用的疫苗—卡介苗免疫所干擾[p.andersen，etal.lancet356(2000)1099-1104.]。從1921年及明卡介苗到現在為止，全世界已有35億人接種卡介苗。因此tst對感染者的診斷價值受到很大的影響，導致tst診斷的準確性較低，因此我們無法根據其結果判斷是否真正存在結核分枝桿菌感染。對結核病病人的診斷技術中，痰涂片抗酸染色或痰菌培養，培養困難，耗時較長；肺部x射線檢查肺部病理改變，也僅在具有典型的臨床癥狀后才能診斷；其他血清學診斷方法和分子診斷方法缺乏特異性，假陽性率較高。有關研究人員指出，不同診斷性檢查方法的敏感性和特異性如下：分枝桿菌培養(分別為73％和100％)；pcr(分別為42％和100％)；胸部x線(分別為67％～77％和66％～76％)；結核菌素試驗(分別為94％和20％)；血清學(分別為33％和87％)。由此可見，現有的分枝桿菌檢測方法的敏感性和特異性無法同時達到最優。結核分枝桿菌感染人體后，首先會被人體的免疫系統識別，激活機體的t細胞免疫應答，分泌產生γ干擾素(ifn-γ)，后者發揮抗結核感染作用。部分t細胞轉化為免疫記憶細胞，當再次與結核分枝桿菌相遇后，會再次分泌產生ifn-γ，發揮抗結核感染作用。抗原特異的刺激產生ifn-γ及其產生量與機體是否感染或發病密切相關。因此，如果采用結核分枝桿菌特異的抗原在體外刺激感染者和患者的t細胞，可誘導這些t細胞產生高水平的結核分枝桿菌特異的ifn-γ，而非結核分枝桿菌感染者或非結核病患者產生的ifn-γ的量與未用抗原刺激產生的量相近，從而實現診斷的目的。由此可見，尋找并發現結核分枝桿菌特異性抗原，對發展新一代的診斷試劑具有重要價值和意義。1996年，stover等通過減數雜交的方法確定了bcg在體外傳代過程中丟失的域，定義為缺失區(regionofdifference，rd)，rd區域存在于結核分枝桿菌中，而在bcg和大多數環境分枝桿菌中缺失[程渝,李茂全.結核分枝桿菌的實驗室診斷進展.國外醫學臨床生物化學和檢驗學分冊.2002；23(6)：342-343.]。其中，rd1區域編碼的早期分抗原靶6kd(earlysecretingantigentarget6kd，esat-6)和培養濾液蛋白10kd(cμltufiltrateprotein10kd，cfp-10)是兩種小分子量分泌蛋白，它們是t細胞最主要的抗原之一，可以誘導較強的細胞免疫反應。對于兒童或者免疫低下樣本，有文獻報道，僅以esat-6和cfp-10或其多肽作為刺激原，其靈敏度約為73.5％-88.9％(孫琳，elispot檢測技術在兒童結核病診斷中的應用，標記免疫分析與臨床.2008.6:349-353；鐘華清，干擾素-γ釋放試驗在兒童結核感染中的應用價值，檢驗醫學.2016.3:176-179；李海，應用酶聯免疫斑點法快速診斷兒童結核分枝桿菌感染的研究，中國婦幼保健，2012.11:1703-1706)。對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本，esat-6和cfp-10多肽及衍生物試劑盒結核分枝桿菌樣本檢出依然不高，出現假陰性，不能滿足臨床需求。技術實現要素：針對現有檢測方法對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染結核分枝桿菌樣本的檢出率不足，本發明的目的在于提供一種檢測結核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該特異性抗原多肽池特異性刺激結核分枝桿菌感染的新鮮全血，能特異性的分泌ifn-γ，增加檢測靈敏度。一種檢測結核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該抗原多肽池包括含有氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.26中所示的任八條多肽或任八條以上多肽的組合。如上所述的抗原多肽池，優選地，所述多肽是人工合成的或是天然分離的。如上所述的抗原多肽池，優選地，所述抗原多肽池還包括esat-6和cfp-10。優選地，所述esat-6的氨基酸序列如seqidno.27所示，所述cfp-10的氨基酸序列如seqidno.28所示。如上所述的抗原多肽池，優選地，所述抗原多肽池還包括esat-6-cfp-10。優選地，所述esat-6-cfp-10的氨基酸序列如seqidno.29所示。如上所述的抗原多肽池，優選地，該抗原多肽池包括與所述seqidno.1～seqidno.26中任一所示序列具有85％同源性的多肽。一種檢測結核分枝桿菌感染的試劑盒，該試劑盒包括如上所述的抗原多肽池。一種檢測結核分枝桿菌感染的試劑盒，優選地，該試劑盒還包括ifn-γ的檢測試劑。如上所述的檢測結核分枝桿菌感染的抗原多肽池的應用，采用所述抗原多肽池作為刺激劑刺激全血，檢測產生的ifn-γ。采用本發明提供的抗原多肽池與ifn-γ的特異性抗原蛋白(esat6-cfp10，esat6和cfp10)，用于檢測結核分枝桿菌感染后的全血樣本，具有以下特點：(1)免疫低下樣本陽性檢出率高，靈敏度高。針對現有檢測方法對于一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本或潛伏感染者的檢出不足，本發明提供用于敏感性和特異性高的結核分枝桿菌感染的抗原多肽池，該多肽池合并esat-6和cfp-10可實現對結核病病人或早期感染者或潛伏感染者(未出現結核病病癥)的快速、特異的檢測，在阻斷結核病的傳播和流行，以及對結核病的控制具有重大意義。(2)檢測用時短，操作方便，診斷快速。與傳統結核分枝桿菌檢測相比，利用本發明提供的多肽池合并ifn-γ的特異性抗原蛋白檢測用時短，診斷快速。傳統結核分枝桿菌培養診斷需時間1-2月，tst檢測需要3天，本發明全部檢測時間在1-2天內可完成。(3)對感染結核分枝桿菌能進行早期檢測。由于結核分枝桿菌一旦感染人體，首先就被機體的免疫系統所識別，激活體液和細胞免疫應答，發病時間在感染后1-2個月，因此，利用本發明提供的多肽池合并全血ifn-γ的特異性抗原蛋白的細胞免疫學檢測方法即可快速做出診斷，診斷出樣本是否感染結核分枝桿菌。而現有的技術中，x光片診斷只有在感染者肺部出現明顯的病理改變后才可做出診斷，這通常需要很長的時間。抗原抗體檢測也只有在疾病癥狀處于活動期的情況下檢測，但環境中分枝桿菌廣泛存在，其與結核分枝桿菌的共同抗原，可干擾實驗的診斷結果。可見，本發明對結核分枝桿菌新近感染或免疫低下者的早期檢測有重要意義，對結核病的控制和消滅具有積極的意義。本發明還提供了一種新的可用于結核分枝桿菌感染檢測的檢測試劑，實驗證明，本發明可直接利用外周血進行抗原刺激，無需分離外周血單個核細胞，實驗數據顯示用于結核分枝桿菌感染檢測具有較高的靈敏度和特異性，有效避免假陰性，且操作簡便，成本較低，具有較高的臨床應用價值。具體實施方式為了實現本發明的目的，發明人根據計算機軟件進行多肽預測，綜合優選合適的多肽，通過大量試驗研究驗證，最終獲得氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.26所示的多肽，其中這些多肽的篩選研究是通過如下技術手段確定：1、單多肽刺激有效性篩選：將初步篩得的多肽配制成一定濃度的多肽溶液，刺激新鮮全血，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結核分枝桿菌，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的多肽。2、多肽組合刺激效果：將篩選到有效的多肽隨機8-20個配制成混合多肽溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯免疫法)中進行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。3、合并esat-6和cfp-10刺激效果：將篩選的有效混合多肽溶液合并esat-6和cfp-10配制成刺激劑溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯免疫法)中進行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。4、合并esat-6-cfp-10刺激效果：將篩選的有效混合多肽溶液合并esat-6-cfp-10配制成刺激劑溶液，刺激新鮮全血，37℃孵育20±4小時，離心收集上清，將上清加入人ifn-γ檢測試劑盒(酶聯免疫法)中進行檢測，選擇對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本無非特異性刺激的混合多肽，確定能組合有效的混合多肽序列。本發明中篩選的多肽經驗證均能特異性刺激結核分枝桿菌感染的病人新鮮全血特異性的分泌ifn-γ，具體為致病結核分枝桿菌的特異性蛋白質：ag85b(seqidno.1～seqidno.6)、mpt649(seqidno.7～seqidno.10)、rv1985c(seqidno.11～seqidno.16)、rv1989c(seqidno.17～seqidno.21)、rv3425(seqidno.22～seqidno.26)，篩選的這些蛋白質能針對cd8+淋巴細胞的結合位點的多肽，通過反復的臨床驗證實驗，這些多肽合并esat-6和cfp-10能提高檢測靈敏度，該合并刺激劑可特異性作用于結核分枝桿菌感染樣本的全血中的淋巴細胞表位，通過檢測全血中釋放的細胞因子ifn-γ，從而間接地反應機體是否感染過結核分枝桿菌。該方法提高結核分枝桿菌感染樣本的檢出率，特別是新近感染樣本、兒童、免疫低下感染結核分枝桿菌樣本的檢出靈敏度，有效避免現有檢測技術中易出現的漏檢、錯檢問題。以下結合實施例對本發明作進一步說明，但是本發明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法是按常規實驗方法；所用試劑如無特別說明均為市售購買產品。實施例1單個多肽刺激有效性篩選本發明的多肽序列，其氨基酸序列如seqidno.1～seqidno.26所示，這些可通過人工合成的或是天然分離，本實施例及以下實施例中用的多肽是通過人工合成的。seqidno.1：rlwvycgngtpnelseqidno.2：lmigtaaavvlpglseqidno.3：vqfqsggnnspavyseqidno.4：mpvggqssfysdwyseqidno.5：saaiglsmagssamseqidno.6：pafewyyqsglsivseqidno.7：yqsaipprgtqavvseqidno.8：iqmsdpayninislseqidno.9：kslenyiaqtrdkfseqidno.10：mlvtavvllccsgvseqidno.11：rkafrraitrpthfseqidno.12：mvdpqldgpqlaalseqidno.13：kldspiiaritdtvseqidno.14：rlaaqtallesealseqidno.15：itiavnadsmatwfseqidno.16：rekpcrattagiplseqidno.17：llfpaiyladsaqaseqidno.18：avldlttpqareavseqidno.19：kmleaayrlhtidvseqidno.20：tayeqrtrpgqlqlseqidno.21：grwnppllfpaiylseqidno.22：relaysvettaeslseqidno.23：vswtrsalsdlprwseqidno.24：lsdlprwreppqiyseqidno.25：slffasgqlrelayseqidno.26：alsdlprwreppqi將制備的多肽用無菌低內毒素(內毒素應小于2.5eu/μg)pbs溶解到濃度為250μg/ml。取10例臨床確診結核癥狀人群的新鮮血樣，10例無結核癥狀健康人群的新鮮血樣，(下同)，用已市售的γ干擾素檢測試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司)檢測其是否感染結核分枝桿菌。同時取多肽溶液20μl于無菌培養管中(多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清檢測γ干擾素含量。結果表明，本發明所設計的如seqidno.1～seqidno.26所示的多肽對陽性樣本有刺激效果，且對陰性樣本均無非特異性刺激。需要說明的是，與seqidno.1～seqidno.26中任一多肽具有85％同源性的多肽也可實現上述目的。實施例2合并刺激效果將任取8條多肽溶液合并esat-6和cfp-10配制成刺激劑溶液，其中，esat-6和cfp-10由大腸桿菌基因工程菌重組表達獲得，esat-6序列為seqidno.27：mteqqwnfagieaaasaiqgnvtsihslldegkqsltklaaawggsgseayqgvqqkwdatatelnnalqnlartiseagqamastegnvtgmfa；cfp-10序列為seqidno.28：maemktdaatlaqeagnferisgdlktqidqvestagslqgqwrgaagtaaqaavvrfqeaankqkqeldeistnirqagvqysradeeqqqalssqmgf。本實施例中僅列舉部分多肽的實驗結果，編號為刺激劑1～刺激劑4(刺激劑1：seqidno.1～seqidno.8+esat-6+cfp-10；刺激劑2：seqidno.6～seqidno.13+esat-6+cfp-10；刺激劑3：seqidno.11～seqidno.18+esat-6+cfp-10；刺激劑4：seqidno.19～seqidno.26+esat-6+cfp-10)，取結核分枝桿菌感染的陽性和未感染的陰性樣本進行試驗。取同實施例1中的20例全血樣本，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結核分枝桿菌。同時取刺激劑1～刺激劑4各20μl于無菌培養管中(各多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測,檢測方法及試劑同實施例1，檢測結果見表1，其中，市售試劑盒為武漢海吉力生物科技有限公司的結核分枝桿菌特異性細胞免疫反應檢測試劑盒(酶聯免疫法),下同。表1.混合多肽合并esat-6和cfp-10刺激結果統計市售試劑盒刺激劑1刺激劑2刺激劑3刺激劑410陽性樣本檢出例數89910910陰性樣本檢出例數1010101010結果說明本發明制備的多肽池結合esat-6和cfp-10用于檢測結核分枝桿菌感染的全血，提高了檢測靈敏度，有效避免現有技術檢測的假陰性和漏檢。實施例3合并刺激效果將任取8條多肽溶液合并esat-6-cfp-10配制成刺激劑溶液，其中，esat-6-cfp-10由大腸桿菌基因工程菌重組表達獲得，esat-6-cfp-10序列為seqidno.29：mteqqwnfagieaaasaiqgnvtsihslldegkqsltklaaawggsgseayqgvqqkwdatatelnnalqnlartiseagqamastegnvtgmfanvamaemktdaatlaqeagnferisgdlktqidqvestagslqgqwrgaagtaaqaavvrfqeaankqkqeldeistnirqagvqysradeeqqqalssqmgf，編號為刺激劑5～刺激劑8(刺激劑5：seqidno.1～seqidno.8+esat-6-cfp-10；刺激劑6：seqidno.6～seqidno.13+esat-6-cfp-10；刺激劑7：seqidno.11～seqidno.18+esat-6-cfp-10；刺激劑8：seqidno.19～seqidno.26+esat-6-cfp-10)，取結核分枝桿菌陽性和陰性樣本進行試驗，配制成刺激劑溶液，取同實施例1中的20例全血樣本，用γ干擾素檢測試劑盒檢測其是否感染結核分枝桿菌。同時取刺激劑5～刺激劑8各20μl于無菌培養管中(各多肽的終濃度為100μg/ml)，每管加入1ml新鮮采集全血，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。檢測方法同實施例2，檢測結果見表2。表2.混合多肽合并esat-6-cfp-10刺激結果市售試劑盒刺激劑5刺激劑6刺激劑7刺激劑810陽性樣本檢出例數899101010陰性樣本檢出例數1010101010結果說明本發明制備的多肽池結合esat-6-cfp-10用于檢測結核分枝桿菌感染的全血，提高了檢測靈敏度，有效避免現有技術檢測的假陰性和漏檢。實施例4合并混合多肽檢測靈敏度和特異性樣本：取20例臨床確診結核癥狀人群的新鮮血樣，20例無結核癥狀健康人群的新鮮血樣。采集上述樣本的全血樣本，分別用刺激劑9(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.6～seqidno.13，各100μg/ml))、刺激劑10(esat-6-cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.6～seqidno.13，各100μg/ml))、刺激劑11(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml))、刺激劑12(esat-6-cfp-10(10μg/ml))和刺激劑13(市售試劑盒：武漢海吉力生物科技有限公司的結核分枝桿菌特異性細胞免疫反應檢測試劑盒(酶聯免疫法)各20μl于無菌培養管中，每管加入1ml新鮮采集全血刺激，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用γ干擾素檢測試劑盒檢測。結果見表3。表3.合并混合多肽靈敏度和特異性檢測結果統計結果說明本發明制備的多肽池結合esat-6和cfp-10或esat-6-cfp-10用于檢測結核分枝桿菌感染的全血，其檢測靈敏度可達95％，靈敏度和特異性較強，有效避免現有技術檢測的假陰性和漏檢。實施例5本發明的靈敏度和特異性檢測樣本：取100例臨床確診結核癥狀人群的新鮮血樣，其中65歲年齡及以上樣本21例，6歲以下年齡樣本數18例，hiv樣本51例，男56例，女44例；50例無結核癥狀健康人群的新鮮血樣，其中65歲年齡及以上樣本20例，6歲以下年齡樣本數7例，hiv樣本23例，男26例，女24例。采集上述樣本的全血樣本，分別用刺激劑(esat-6(10μg/ml)和cfp-10(10μg/ml)+混合多肽(seqidno.11～seqidno.18，各100μg/ml))和市售試劑盒(武漢海吉力生物科技有限公司的結核分枝桿菌特異性細胞免疫反應檢測試劑盒(酶聯免疫法))刺激劑各20μl于無菌培養管中，每管加入1ml新鮮采集全血刺激，混合均勻后于37℃烘箱20±4小時，混合血液后，6000rpm離心1min，取上清用市售的γ干擾素檢測試劑盒檢測進行檢測，市售試劑盒按其說明書進行操作。檢測結果見表4和表5。表4.結核分枝桿菌感染樣本的酶聯免疫法檢測結果統計表5.健康樣本的酶聯免疫法檢測結果統計結果說明本發明制備的多肽池結合esat-6和cfp-10及其衍生物可提高對一些特殊樣本，如兒童、免疫低下及新近感染樣本檢出率，靈敏度和特異性較強，有效避免現有技術檢測的假陰性和漏檢。本發明對結核分枝桿菌新近感染或免疫低下者的早期檢測有重要意義，對結核病的控制和消滅具有積極的意義。sequencelisting<110>武漢海吉力生物科技有限公司<120>檢測結核分枝桿菌感染的抗原多肽池及其應用<130><160>29<170>patentinversion3.5<210>1<211>14<212>prt<213>人工合成<400>1argleutrpvaltyrcysglyasnglythrproasngluleu1510<210>2<211>14<212>prt<213>人工合成<400>2leumetileglythralaalaalavalvalleuproglyleu1510<210>3<211>14<212>prt<213>人工合成<400>3valglnpheglnserglyglyasnasnserproalavaltyr1510<210>4<211>14<212>prt<213>人工合成<400>4metprovalglyglyglnserserphetyrserasptrptyr1510<210>5<211>14<212>prt<213>人工合成<400>5seralaalaileglyleusermetalaglyserseralamet1510<210>6<211>14<212>prt<213>人工合成<400>6proalapheglutrptyrtyrglnserglyleuserileval1510<210>7<211>14<212>prt<213>人工合成<400>7tyrglnseralaileproproargglythrglnalavalval1510<210>8<211>14<212>prt<213>人工合成<400>8ileglnmetseraspproalatyrasnileasnileserleu1510<210>9<211>14<212>prt<213>人工合成<400>9lysserleugluasntyrilealaglnthrargasplysphe1510<210>10<211>14<212>prt<213>人工合成<400>10metleuvalthralavalvalleuleucyscysserglyval1510<210>11<211>14<212>prt<213>人工合成<400>11arglysalapheargargalailethrargprothrhisphe1510<210>12<211>14<212>prt<213>人工合成<400>12metvalaspproglnleuaspglyproglnleualaalaleu1510<210>13<211>14<212>prt<213>人工合成<400>13lysleuaspserproileilealaargilethraspthrval1510<210>14<211>14<212>prt<213>人工合成<400>14argleualaalaglnthralaleuleugluserglualaleu1510<210>15<211>14<212>prt<213>人工合成<400>15ilethrilealavalasnalaaspsermetalathrtrpphe1510<210>16<211>14<212>prt<213>人工合成<400>16argglulysprocysargalathrthralaglyileproleu1510<210>17<211>14<212>prt<213>人工合成<400>17leuleupheproalailetyrleualaaspseralaglnala1510<210>18<211>14<212>prt<213>人工合成<400>18alavalleuaspleuthrthrproglnalaargglualaval1510<210>19<211>14<212>prt<213>人工合成<400>19lysmetleuglualaalatyrargleuhisthrileaspval1510<210>20<211>14<212>prt<213>人工合成<400>20thralatyrgluglnargthrargproglyglnleuglnleu1510<210>21<211>14<212>prt<213>人工合成<400>21glyargtrpasnproproleuleupheproalailetyrleu1510<210>22<211>14<212>prt<213>人工合成<400>22arggluleualatyrservalgluthrthralagluserleu1510<210>23<211>14<212>prt<213>人工合成<400>23valsertrpthrargseralaleuseraspleuproargtrp1510<210>24<211>14<212>prt<213>人工合成<400>24leuseraspleuproargtrparggluproproglniletyr1510<210>25<211>14<212>prt<213>人工合成<400>25serleuphephealaserglyglnleuarggluleualatyr1510<210>26<211>14<212>prt<213>人工合成<400>26alaleuseraspleuproargtrparggluproproglnile1510<210>27<211>95<212>prt<213>esat-6<400>27metthrgluglnglntrpasnphealaglyileglualaalaalaser151015alaileglnglyasnvalthrserilehisserleuleuaspglugly202530lysglnserleuthrlysleualaalaalatrpglyglyserglyser354045glualatyrglnglyvalglnglnlystrpaspalathralathrglu505560leuasnasnalaleuglnasnleualaargthrileserglualagly65707580glnalametalaserthrgluglyasnvalthrglymetpheala859095<210>28<211>100<212>prt<213>cfp-10<400>28metalaglumetlysthraspalaalathrleualaglnglualagly151015asnphegluargileserglyaspleulysthrglnileaspglnval202530gluserthralaglyserleuglnglyglntrpargglyalaalagly354045thralaalaglnalaalavalvalargpheglnglualaalaasnlys505560glnlysglngluleuaspgluileserthrasnileargglnalagly65707580valglntyrserargalaaspglugluglnglnglnalaleuserser859095glnmetglyphe100<210>29<211>198<212>prt<213>esat-6-cfp-10<400>29metthrgluglnglntrpasnphealaglyileglualaalaalaser151015alaileglnglyasnvalthrserilehisserleuleuaspglugly202530lysglnserleuthrlysleualaalaalatrpglyglyserglyser354045glualatyrglnglyvalglnglnlystrpaspalathralathrglu505560leuasnasnalaleuglnasnleualaargthrileserglualagly65707580glnalametalaserthrgluglyasnvalthrglymetphealaasn859095valalametalaglumetlysthraspalaalathrleualaglnglu100105110alaglyasnphegluargileserglyaspleulysthrglnileasp115120125glnvalgluserthralaglyserleuglnglyglntrpargglyala130135140alaglythralaalaglnalaalavalvalargpheglnglualaala0asnlysglnlysglngluleuaspgluileserthrasnilearggln165170175alaglyvalglntyrserargalaaspglugluglnglnglnalaleu180185190serserglnmetglyphe195當前第1頁12