本發明涉及藥物領域，具體涉及用于(yu)治療腫瘤的多肽。

背景技術：

腫瘤(liu)治(zhi)(zhi)療(liao)一直是(shi)臨床的(de)(de)熱點和難點問(wen)題。手術、化療(liao)、放療(liao)、靶(ba)(ba)向(xiang)療(liao)法、和免疫(yi)療(liao)法是(shi)當(dang)今癌癥(zheng)治(zhi)(zhi)療(liao)的(de)(de)五大支(zhi)柱(zhu)。其中(zhong)靶(ba)(ba)向(xiang)療(liao)法是(shi)目前(qian)最有發展前(qian)途的(de)(de)治(zhi)(zhi)療(liao)手段。盡管(guan)如此，尋找腫瘤(liu)側治(zhi)(zhi)療(liao)靶(ba)(ba)點，一直是(shi)阻撓腫瘤(liu)靶(ba)(ba)向(xiang)治(zhi)(zhi)療(liao)的(de)(de)瓶頸。

研究發現，MYC癌(ai)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)與(yu)腫瘤(liu)發生密切相關。MYC癌(ai)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)是強(qiang)致癌(ai)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)，可以編(bian)碼MYC致癌(ai)蛋(dan)白。MYC癌(ai)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)調控(kong)著細(xi)(xi)胞(bao)的大(da)約1萬(wan)個基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)和微RNA的表達(da)。MYC通(tong)過影響調控(kong)糖酵解、谷氨酰胺合(he)成、葡萄糖轉運、線粒體(ti)蛋(dan)白合(he)成、核苷酸合(he)成等過程的基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)，改變生物能(neng)量(liang)及(ji)代(dai)謝(xie)，激活(huo)原癌(ai)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)并抑制抑癌(ai)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)，調控(kong)細(xi)(xi)胞(bao)增殖。研究發現，多種腫瘤(liu)，如肺癌(ai)，胃癌(ai)，乳腺癌(ai)，結(jie)腸癌(ai)，宮頸癌(ai)，某(mou)些(xie)神(shen)經母(mu)細(xi)(xi)胞(bao)病，粒細(xi)(xi)胞(bao)性(xing)白血(xue)病，視網膜母(mu)細(xi)(xi)胞(bao)瘤(liu)，成骨肉(rou)瘤(liu)，軟骨肉(rou)瘤(liu)，脊(ji)索瘤(liu)，脂肪肉(rou)瘤(liu)，橫(heng)紋肌肉(rou)瘤(liu)，何杰(jie)金(jin)氏(shi)病及(ji)頭部(bu)腫瘤(liu)等都有myc基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)的擴(kuo)增或過度表達(da)。C-myc基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)主要通(tong)過擴(kuo)增和染(ran)色體(ti)易位重排的方式激活(huo)，與(yu)某(mou)些(xie)組織腫瘤(liu)的發生、發展和演變轉歸(gui)有重要關系。

MYC調控(kong)(kong)的(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)物學活動包括細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)、細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)、細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)、蛋白質合成與新陳代謝、血管(guan)(guan)生(sheng)(sheng)(sheng)成等(deng)。(1)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)和(he)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)：MYC可經Cyc lind1、Cyc lind2、Cycline1、Cyc lina2、CDK4、細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)25A(CDC25A)、E2F1和(he)E2F2的(de)激(ji)(ji)活，啟動細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)演進。細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)的(de)G0/G1向S期(qi)演進必需MYC，MYC激(ji)(ji)活后G1期(qi)常(chang)縮短。MYC消除細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)檢查(cha)點(dian)基(ji)因(yin)(如GADD45和(he)GADD153)的(de)轉錄(lu)。MYC是(shi)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)與細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)命運的(de)調控(kong)(kong)物異位(wei)MYC表達能(neng)(neng)阻斷多(duo)種不(bu)(bu)同(tong)類型細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)。細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)退出細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)周(zhou)(zhou)(zhou)期(qi)，發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)，需要(yao)下調MYC；但MYC也能(neng)(neng)刺(ci)激(ji)(ji)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)。MYC調控(kong)(kong)失常(chang)阻礙細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)和(he)促進細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)遷移(yi)，這導致癌癥分(fen)(fen)(fen)化(hua)(hua)降低、侵襲和(he)轉移(yi)等(deng)變化(hua)(hua)。(2)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)、基(ji)因(yin)組不(bu)(bu)穩定(ding)(ding)性(xing)和(he)血管(guan)(guan)發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)：體(ti)內和(he)體(ti)外實驗研究結果證明(ming)，MYC能(neng)(neng)增(zeng)強腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)和(he)正常(chang)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)的(de)能(neng)(neng)力(li)，MYC充分(fen)(fen)(fen)供給細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)幾類基(ji)本(ben)建構材料(liao)，增(zeng)加(jia)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)代謝與蛋白質合成。當MYC激(ji)(ji)活時(shi)，細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)不(bu)(bu)再限速。研究報(bao)道，MYC調控(kong)(kong)失常(chang)的(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)特異性(xing)基(ji)因(yin)高頻率擴增(zeng)。MYC能(neng)(neng)促進染(ran)色體(ti)不(bu)(bu)穩定(ding)(ding)性(xing)，MYC調控(kong)(kong)失常(chang)伴隨(sui)血管(guan)(guan)生(sheng)(sheng)(sheng)成，MYC表達增(zeng)加(jia)和(he)白介素(su)1β(IL1β)釋放對(dui)于啟動血管(guan)(guan)生(sheng)(sheng)(sheng)成具有決(jue)定(ding)(ding)性(xing)作(zuo)(zuo)用。(3)MYC對(dui)細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)凋亡的(de)調控(kong)(kong)：研究報(bao)道，MYC裸細(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)對(dui)不(bu)(bu)同(tong)凋亡刺(ci)激(ji)(ji)具抵(di)抗性(xing)，這證明(ming)MYC在凋亡過程(cheng)中的(de)決(jue)定(ding)(ding)性(xing)作(zuo)(zuo)用。MYC失調使(shi)ARF上調，并(bing)通(tong)過ARF-MDM2-p53通(tong)路誘發(fa)凋亡。在MYC致瘤(liu)(liu)(liu)(liu)的(de)小鼠模(mo)型，喪失這些腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)抑制(zhi)物可促成腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)生(sheng)(sheng)(sheng)成。ARF-MDM2-p53之外的(de)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)基(ji)因(yin)或致瘤(liu)(liu)(liu)(liu)性(xing)調控(kong)(kong)物如BM I1，TWIST1和(he)CUL7可與MYC合作(zuo)(zuo)從(cong)而發(fa)揮致病作(zuo)(zuo)用。由此可見，MYC癌基(ji)因(yin)是(shi)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)靶向治(zhi)療的(de)重(zhong)要(yao)靶點(dian)。

針(zhen)對這些特點，可以對腫(zhong)瘤進行進一(yi)步的靶向治療(liao)研究。合成針(zhen)對C-myc基(ji)因抑(yi)制(zhi)劑治療(liao)腫(zhong)瘤具有(you)廣闊的發(fa)展前景。目前，沒有(you)成熟開發(fa)的MYC致癌(ai)蛋白制(zhi)劑問(wen)世，用于治療(liao)腫(zhong)瘤。

本發(fa)明人設(she)計出MYC癌(ai)基(ji)因抑制多肽，用于治療(liao)(liao)腫瘤患者(zhe)，為腫瘤患者(zhe)的(de)治療(liao)(liao)找到(dao)新的(de)突破口。

技術實現要素：
：

本發明目(mu)的是針對現有(you)(you)腫瘤患者(zhe)治療(liao)的藥物特點，設計一種MYC癌基因抑制多肽，能(neng)有(you)(you)效治療(liao)腫瘤。

技術方案

一(yi)種MYC癌(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)制多(duo)肽，其(qi)(qi)序列為SEQ ID NO1。所述多(duo)肽的治(zhi)療腫瘤的應(ying)用(yong)。其(qi)(qi)用(yong)途(tu)可通過多(duo)種給藥方(fang)式治(zhi)療腫瘤，包括皮下或肌肉注射，靜(jing)脈(mo)注射或者靜(jing)脈(mo)滴注等(deng)實現。所述MYC癌(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)制多(duo)肽抑(yi)(yi)制MYC致癌(ai)蛋白(bai)表達，及蛋白(bai)活性。

有益結果：

本發(fa)明(ming)中(zhong)的(de)(de)MYC癌基因(yin)抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)多(duo)肽序(xu)(xu)列SEQ ID NO1，為全新的(de)(de)序(xu)(xu)列。可以靶向抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)MYC癌基因(yin)抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)MYC致(zhi)癌蛋白表(biao)達(da)產生的(de)(de)效應(ying)，達(da)到治(zhi)(zhi)療腫(zhong)(zhong)瘤的(de)(de)效果。試(shi)驗結果表(biao)明(ming)：本發(fa)明(ming)能夠抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)體外的(de)(de)多(duo)種(zhong)腫(zhong)(zhong)瘤細胞增(zeng)殖，促(cu)進(jin)腫(zhong)(zhong)瘤細胞中(zhong)MYC蛋白表(biao)達(da)，抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)腫(zhong)(zhong)瘤細胞端粒酶(mei)活性，抑(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)腫(zhong)(zhong)瘤模型裸鼠(shu)體內腫(zhong)(zhong)瘤的(de)(de)生長(chang)，提高荷(he)瘤小鼠(shu)生存率(lv)。達(da)到治(zhi)(zhi)療腫(zhong)(zhong)瘤的(de)(de)效果。

具體實施方式

MYC癌(ai)基因抑制多肽由上海(hai)生工吉爾(er)合成。

實施例1

MYC癌(ai)基因抑制多(duo)肽(tai)的體外細胞增殖(zhi)活性測定(ding)

采用MTT比色法。將對數生長的胃癌細胞株SGC-7901，以1.0×10⁵加(jia)入(ru)(ru)96孔(kong)培(pei)養(yang)板中(zhong)，培(pei)養(yang)24h，實(shi)驗(yan)(yan)孔(kong)、陽性藥(yao)物(wu)對照(zhao)孔(kong)分別加(jia)入(ru)(ru)不同(tong)濃度(du)的實(shi)驗(yan)(yan)藥(yao)物(wu)MYC癌基因抑制(zhi)多肽；空白組加(jia)入(ru)(ru)相同(tong)體積的溶劑。每孔(kong)設五個復孔(kong)，培(pei)養(yang)48h，每孔(kong)加(jia)入(ru)(ru)MTT，作用4h后，加(jia)入(ru)(ru)DMSO，孵育30min，在酶標儀570nm處測定吸(xi)光度(du)A值，按公式細胞生長增殖(zhi)抑制(zhi)率＝(實(shi)驗(yan)(yan)組吸(xi)光值/對照(zhao)組吸(xi)光值-1)×100％。計(ji)算出實(shi)驗(yan)(yan)藥(yao)物(wu)的IC50為(wei)31.21nmol/L。

實施例2

用腫(zhong)瘤模型檢(jian)測(ce)MYC癌基因抑(yi)制多肽的體(ti)內效(xiao)應。

建立結腸癌腫瘤模型，將處于對數生長期的HT29細胞用胰蛋白酶于37℃消化后，收集培養液，生理鹽水清洗2～3次。用生理鹽水將細胞濃度調整為2×10⁷個/mL，接種于C57BL/6裸鼠右前肢腋部皮下，每只0.1mL。1w～2w后裸鼠腫瘤體積長到100～200mm³，剖取其瘤組織在無菌條件下碾磨，制備成1×10⁷個/mL細胞懸液，接種于C57BL/6裸鼠右前肢腋部皮下，每只0.1mL。1w～2w后裸鼠腫瘤體積長到70～100mm³后(hou)，裸(luo)鼠隨(sui)機分成4組(zu)(zu)(zu)，每(mei)組(zu)(zu)(zu)10只。(1)空白組(zu)(zu)(zu)；(2)MYC癌(ai)(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)多(duo)(duo)(duo)肽低劑(ji)(ji)量(liang)組(zu)(zu)(zu)；(3)MYC癌(ai)(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)多(duo)(duo)(duo)肽中(zhong)劑(ji)(ji)量(liang)組(zu)(zu)(zu)；(4)MYC癌(ai)(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)多(duo)(duo)(duo)肽高劑(ji)(ji)量(liang)組(zu)(zu)(zu)。建立(li)結(jie)腸(chang)癌(ai)(ai)腫(zhong)瘤模型，方案為(wei)：空白組(zu)(zu)(zu)加入相(xiang)同體積的溶劑(ji)(ji)，實驗組(zu)(zu)(zu)MYC癌(ai)(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)多(duo)(duo)(duo)肽(上海生(sheng)(sheng)工吉爾合成)設3個(ge)劑(ji)(ji)量(liang)：5、10、20mg/Kg，在腫(zhong)瘤周圍多(duo)(duo)(duo)點注射。連續(xu)給藥21天(tian)后(hou)，觀察裸(luo)鼠存(cun)活數量(liang)，計算存(cun)活率。結(jie)果顯示，MYC癌(ai)(ai)基(ji)因抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)多(duo)(duo)(duo)肽可(ke)有效地保(bao)護裸(luo)鼠，提(ti)高結(jie)腸(chang)癌(ai)(ai)荷瘤裸(luo)鼠的生(sheng)(sheng)存(cun)率，20mg/Kg時，生(sheng)(sheng)存(cun)率達到69.3％。

實施例3

MYC癌基因抑制多肽對胃癌細胞株SGC-7901中MYC蛋白表達的影響：將SGC-7901細胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養基，在37℃、5％CO2的培養箱中培養至90％以上的匯合度時，用0.25％胰蛋白酶消化細胞，計數，3000rpm離心5min收集細胞；加入10％小牛血清的RPMI 1640培養液(5ml)懸浮細胞，細胞計數，調整細胞濃度為5*10⁶個/ml，于6孔培養板中培養。實驗設空白對照組、MYC癌基因抑制多肽各劑量(5、10、20mg/ml)組。各組分別加入SGC-7901細胞懸液600μl/孔后，空白對照組加入1640培養液600μl，MYC癌基因抑制多肽各劑量組在加入不同濃度的多肽。按20μl/1×10⁵個(ge)細胞加(jia)入(ru)蛋白(bai)質提(ti)取(qu)液，吹吸打散細胞，4℃放置30min使(shi)細胞裂解(jie)(jie)，用(yong)于檢測細胞裂解(jie)(jie)液中MYC蛋白(bai)表達(da)量。

結果顯(xian)示(shi)，MYC癌基因抑制多肽處(chu)理的SGC-7901中(zhong)MYC蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表(biao)達(da)(da)明(ming)顯(xian)升高。SGC-7901細胞裂解液中(zhong)MYC蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表(biao)達(da)(da)(229.71±32.89pg/(mg總(zong)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai))(p<0.05)，570.19±120.43pg/(mg總(zong)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai))(p<0.05)，845.62±223.22pg/(mg總(zong)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai))(p<0.05))，與SGC-7901對照組(29.01±16.87pg/(mg總(zong)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)))相比有顯(xian)著性差(cha)異。由(you)此可見，MYC癌基因抑制多肽能促進(jin)人胃癌細胞SGC-7901中(zhong)MYC蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表(biao)達(da)(da)。

實施例4

采用端粒酶活性測定，評價MYC癌基因抑制多肽對胃癌細胞株SGC-7901細胞調亡的影響：將SGC-7901細胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養基，在37℃、5％CO2的培養箱中培養至90％以上的匯合度時，用0.25％胰蛋白酶消化細胞，計數，3000rpm離心5min收集細胞；加入10％小牛血清的RPMI 1640培養液(5ml)懸浮細胞，細胞計數，調整細胞濃度為5*10⁶個/ml，于6孔培養板中培養。實驗設空白對照組、MYC癌基因抑制多肽各劑量(5、10、20mg/ml)組。各組分別加入SGC-7901細胞懸液600μl/孔后，空白對照組加入1640培養液600μl，MYC癌基因抑制多肽各劑量組在加入不同濃度的多肽。按20μl/1×10⁵個細(xi)胞(bao)加入蛋白(bai)質提取液(ye)，吹吸打(da)散細(xi)胞(bao)，4℃放置30min使細(xi)胞(bao)裂(lie)解，采用(yong)端(duan)(duan)粒酶活性檢(jian)測試劑(ji)盒(美國promega)檢(jian)測細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye)中端(duan)(duan)粒酶活性。

結果顯(xian)示(shi)，MYC癌基因抑制多肽(tai)處理的SGC-7901中端(duan)粒酶活(huo)(huo)性明顯(xian)降低。SGC-7901細胞(bao)裂解液中端(duan)粒酶活(huo)(huo)性(54.71±17.07pg/ml(p<0.05)，35.29±18.46pg/ml(p<0.05)，15.62±0.32pg/ml)(p<0.05))，與(yu)SGC-7901對照組(121.6501±16.67pg/(mg總蛋白(bai)))相比有顯(xian)著性差異。由此可見，MYC癌基因抑制多肽(tai)能促進人胃癌細胞(bao)SGC-7901中端(duan)粒酶活(huo)(huo)性，促進細胞(bao)調亡。

SEQUENCE LISTING

<110> 羅瑞(rui)雪

<120> MYC癌基因抑(yi)制多肽(tai)及其(qi)應用

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 34

<212> PRT

<213> 人(ren)工序(xu)列

<400> 1

Val Asn Gln Ser Phe Ile Cys Asp Pro Asp Asp Glu Thr Phe Ile Lys

1 5 10  15

Asn Ile Ile Ile Gln Asp Cys Met Trp Ser Gly Leu Val Ser Glu Lys

 20 25  30

Leu Ala