一種豬血降血壓肽的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種豬血降血壓肽的制備方法。
【背景技術】
[0002]豬血易于獲得，成本低，并且通過血液開發出的產品有各種功能性，因此豬血有著保健品開發的前景，尤其在國外一些發達國家如歐洲一些國家及日本，豬血的利用率已達50%以上，他們主要是開發肽類試劑、肽類藥物以及功能食品和食品添加劑。這些功能性肽類，比人工合成添加劑更安全，更衛生，迎合了社會發展的需要。因此，以豬血為底物開發生物活性肽，可以提高生豬屠宰加工企業產品附加值，顯示出巨大的市場前景。
[0003]降血壓肽(ACEIP)又稱ACE抑制肽，是一類具有顯著降血壓功效的多肽短鏈物質，可競爭性地與ACE結合達到降壓效果。
[0004]天然食品中的降血壓肽通常是由蛋白質水解酶在溫和條件下水解蛋白質而獲得的一類多肽，具有降壓效果且無副作用。研究表明，豬血中具有較強降血壓肽，因此開發研究一種從豬血中提取、純化降血壓肽的成熟方法，可以一舉多得。目前從豬血中提取降血壓肽的技術方法和產品尚未見報道。

【發明內容】

[0005]針對現有技術中存在的不足之處，本發明提供一種成本低、效果好的利用豬血蛋白制取降血壓肽的方法。
[0006]本發明為達到以上目的，是通過這樣的技術方案來實現的:提供一種豬血降血壓肽的制備方法，包括以下步驟:
(1)采集新鮮豬血，以5g/ L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球；將紅血球加入同等體積的生理鹽水沖洗并離心兩次后加入2倍體積的蒸餾水，超聲波細胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r / min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液，于4°C保存備用；
(2)取血紅蛋白溶液，加入適量的胰蛋白酶酶解，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系PH8.0,45-50°C，6-10h ;將酶解反應產物迅速升溫至85°C并保持此溫度10?15分鐘，再迅速冷卻至50°C以下，調節pH值至5.0左右，8000r / min離心15min，獲得上清酶解液，4°C冷減備用；
(3)活性炭用量為酶解液總重的5-30%，溫度55°C，攪拌脫色20-30min;再進行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質量為5kD-2kD超濾膜進行超濾處理，截留5kD-2kD蛋白肽酶解液，得降血壓肽酶解液，_20°C保存。
[0007]以上所述的一種利用豬血紅蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步驟(2)中胰蛋白酶是酶比活力25\10411/^;胰蛋白酶加酶量是20001] / g。
[0008]本發明的一種豬血降血壓肽的制備方法，具有如下優點: 1.本發明所制備的降血壓肽是豬血紅蛋白經生物酶水解而得，屬于天然提取物，具有天然、無毒、無污染、無殘留、無副作用、高效等特點，是一種新型的綠色降血壓藥物。
[0009]2.本發明所采用的原料來源廣泛，價格低廉，經過本發明的技術轉化可以有效的提高豬血副產物的附加值，對繼續促進生豬產業的發展有重要的意義。
[0010]3.本發明的產品可以作為藥品、保健食品、食品、食品添加劑等，工藝科學合理，操作簡單，具有較強的工業實施性。
【具體實施方式】
[0011]實施例1
(I)采集新鮮豬血100L，以5g / L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球約45L (固含30%);在紅血球中加入45L生理鹽水蒸餾水沖洗并離心兩次后加入90體積的蒸餾水，超聲波細胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r /min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液135L。
[0012](2)取適量血紅蛋白溶液，加入IlOg胰蛋白酶酶解(酶比活力為25X 104u/g)，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系pH8.0，50°C，5h ;將酶解反應產物迅速升溫至85°C并保持此溫度15分鐘，再迅速冷卻至O?30°C以終止酶解反應，調節pH值至7.0左右，8000r /min離心15min，獲得上清酶解液130L。
[0013](3)酶解液中加入活性炭用量20kg，溫度55°C，攪拌脫色30min ;再進行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質量為5kD及2KD超濾膜進行處理，收集截留5kD-2kD蛋白肽(降血壓肽)酶解液 65L，-20°C保存。
[0014]檢測結果，所得降血壓肽對血管緊張素轉化酶的抑制率為76.68%，降血壓作用明顯。
[0015]實施例2
(I)采集新鮮豬血50L，以5g / L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球約23L (固含30%);在紅血球中加入23L生理鹽水蒸餾水沖洗并離心兩次后加入46體積的蒸餾水，，超聲波細胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r /min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液69L。
[0016](2)取適量血紅蛋白溶液，加入55g胰蛋白酶酶解(酶比活力為25X 104u/g)，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系pH8.0，50°C，5h ;將酶解反應產物迅速升溫至85°C并保持此溫度15分鐘，再迅速冷卻至50°C以下，調節pH值至7.0左右，8000r / min離心15min，獲得上清酶解液67L。
[0017](3)酶解液中加入活性炭用量10kg，溫度55°C，攪拌脫色30min ;再進行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質量為5kD及2KD超濾膜進行處理，收集截留5kD-2kD蛋白肽(降血壓肽)酶解液 33L，-20°C 保存。
[0018]檢測結果，所得降血壓肽對血管緊張素轉化酶的抑制率為76.42%，降血壓作用明顯。
【主權項】
1.一種豬血降血壓肽的制備方法，其特征是包括以下步驟: (1)采集新鮮豬血，以5g/ L的梓檬酸鈉抗凝，在4°C、8000r / min離心lOmin，收集下層沉淀，以獲得紅血球；將紅血球加入同等體積的生理鹽水沖洗并離心兩次后加入2倍體積的蒸餾水，超聲波細胞破碎輔助溶血20min，然后在4°C、4000r / min離心lOmin，得到血紅蛋白溶液，于4°C保存備用； (2)取血紅蛋白溶液，加入適量的胰蛋白酶酶解，攪拌，2mol/LNaoH溶液維持體系PH8.0,45-50°C，6-10h ;將酶解反應產物迅速升溫至85°C并保持此溫度10?15分鐘，再迅速冷卻至50°C以下，調節pH值至7.0左右，8000r / min離心15min，獲得上清酶解液，4°C冷減備用； (3)活性炭用量為酶解液總重的5-30%，溫度55°C，攪拌脫色20-30min;再進行粗濾處理后得粗濾酶解液；將粗濾酶解液在0.1?0.2Mpa的工作壓力和O?45°C的工作溫度下，采用截留分子質量為5kD-2kD超濾膜進行超濾處理，截留5kD-2kD蛋白肽酶解液，得降血壓肽酶解液，_20°C保存。2.根據權利要求1所述的一種利用豬血紅蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步驟(2)中胰蛋白酶是酶比活力25X 104u/g。3.根據權利要求1所述的一種利用豬血紅蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步驟(2)中胰蛋白酶加酶量是2000U / go
【專利摘要】本發明公開了一種豬血降血壓肽的制備方法，包括以下步驟：將豬全血分離得豬血球，再將豬血球溶血、酶解、脫色、超濾，即得降血壓肽；所述胰蛋白酶的加酶量是2000U／g，在pH8、溫度45℃～50℃條件下，酶解反應時間6～10h，此條件下降血壓肽酶解液對血管緊張素轉化酶的抑制率為75%以上，具有顯著的降血壓作用。
【IPC分類】C07K1/34, C12P21/06
【公開號】CN105112485
【申請號】CN201510620518
【發明人】寧發子, 王玉峰, 鄧軍
【申請人】重慶都好生物科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月26日