本(ben)發明(ming)涉及(ji)生(sheng)物技術領域，具(ju)體指N15多肽在制備(bei)細菌抑(yi)制劑中的用途。

背景技術：

人(ren)(ren)體(ti)中(zhong)存在(zai)著很多種類的(de)細菌(jun)(jun)，其中(zhong)有(you)(you)(you)些(xie)是有(you)(you)(you)益(yi)菌(jun)(jun)，有(you)(you)(you)益(yi)菌(jun)(jun)對維持人(ren)(ren)體(ti)微生環(huan)境有(you)(you)(you)著重(zhong)要的(de)作(zuo)用(yong)，還(huan)有(you)(you)(you)些(xie)細菌(jun)(jun)則是致病(bing)菌(jun)(jun)，能引起(qi)(qi)人(ren)(ren)類疾病(bing)。細菌(jun)(jun)在(zai)人(ren)(ren)體(ti)內(nei)寄生，增殖并(bing)引起(qi)(qi)疾病(bing)的(de)特性(xing)稱為細菌(jun)(jun)的(de)致病(bing)性(xing)或病(bing)原(yuan)性(xing)(pathogenicity)。病(bing)原(yuan)菌(jun)(jun)的(de)致病(bing)作(zuo)用(yong)與其毒力(li)、侵(qin)入(ru)機(ji)體(ti)的(de)數量(liang)、侵(qin)入(ru)途徑及機(ji)體(ti)的(de)免疫狀(zhuang)態密切相關。例如，大(da)腸桿菌(jun)(jun)寄居(ju)于腸道(dao)內(nei)，它的(de)單獨(du)致病(bing)力(li)不(bu)大(da)，若和其他致病(bing)菌(jun)(jun)在(zai)一(yi)起(qi)(qi)時，可造成嚴重(zhong)的(de)混(hun)合感染，常見的(de)致病(bing)菌(jun)(jun)還(huan)有(you)(you)(you)金黃(huang)色葡萄球菌(jun)(jun)、沙(sha)門(men)氏菌(jun)(jun)等(deng)。

藍(lan)藻(zao)(zao)之所(suo)以又稱(cheng)(cheng)(cheng)藍(lan)細(xi)(xi)菌(jun)，是因為(wei)藍(lan)藻(zao)(zao)是最原始、最古老的(de)藻(zao)(zao)類(lei).其結(jie)構(gou)簡(jian)單，無典型(xing)的(de)細(xi)(xi)胞核，所(suo)以又稱(cheng)(cheng)(cheng)藍(lan)細(xi)(xi)菌(jun)，屬于(yu)原核生物。已知藍(lan)藻(zao)(zao)約(yue)2000種(zhong)，中(zhong)國已有(you)記錄的(de)約(yue)900種(zhong)。藍(lan)藻(zao)(zao)有(you)極大(da)的(de)適應性，分(fen)布(bu)很(hen)廣(guang)。在一些營養(yang)豐(feng)富的(de)水(shui)體中(zhong)，有(you)些藍(lan)藻(zao)(zao)常于(yu)夏季(ji)大(da)量繁(fan)殖，并(bing)在水(shui)面形(xing)成一層藍(lan)綠(lv)色而(er)有(you)腥(xing)臭味(wei)的(de)浮(fu)沫，稱(cheng)(cheng)(cheng)為(wei)“水(shui)華(hua)”，大(da)規模(mo)的(de)藍(lan)藻(zao)(zao)爆(bao)發，被稱(cheng)(cheng)(cheng)為(wei)“綠(lv)潮(chao)”(和(he)海洋發生的(de)赤潮(chao)對應)。綠(lv)潮(chao)引起水(shui)質惡化，嚴重時耗盡水(shui)中(zhong)氧氣而(er)造(zao)成魚類(lei)的(de)死亡。

技術實現要素：

本發明的(de)目的(de)在于提供一種多(duo)(duo)肽，該多(duo)(duo)肽能夠抑制(zhi)多(duo)(duo)種致病菌和藍藻生長，具有制(zhi)備細菌抑制(zhi)劑的(de)用途，它已被現(xian)有技術公開(kai)，名為N15多(duo)(duo)肽。

N15多(duo)肽(tai)是一個具有15個氨(an)(an)(an)(an)基酸(suan)的(de)(de)短肽(tai)，其序列為甲硫氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-脯(fu)氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-酪氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-絲氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-蘇氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-谷氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-亮氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-異亮氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-苯(ben)丙(bing)氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-酪氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-異亮氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-谷氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-甲硫氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-天門冬氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)-脯(fu)氨(an)(an)(an)(an)酸(suan)，它具有多(duo)種生(sheng)物學(xue)功能，包(bao)括調節(jie)NF-κB轉錄因子結(jie)合(he)(he)目(mu)的(de)(de)基因的(de)(de)能力，影響NF-κB目(mu)的(de)(de)基因產物蛋白質的(de)(de)轉錄和(he)表達；阻斷PCNA結(jie)合(he)(he)DNA聚(ju)合(he)(he)酶，從而阻止細胞(bao)(bao)DNA合(he)(he)成抑(yi)(yi)制(zhi)細胞(bao)(bao)增殖；抑(yi)(yi)制(zhi)上皮(pi)細胞(bao)(bao)增生(sheng)，調節(jie)表皮(pi)增生(sheng)及分(fen)化，使皮(pi)膚角化過(guo)程(cheng)正常化等。

發(fa)明人發(fa)現在(zai)研究(jiu)中發(fa)現N15可以對多種革(ge)蘭(lan)氏陰性菌(jun)、革(ge)蘭(lan)氏陽性菌(jun)、藍(lan)細(xi)菌(jun)的生(sheng)長產(chan)生(sheng)抑(yi)制(zhi)作(zuo)用。經試驗檢測，N15多肽抑(yi)制(zhi)藍(lan)藻增(zeng)殖可能(neng)是(shi)通(tong)過(guo)抑(yi)制(zhi)DNA復(fu)制(zhi)和異形胞分化基因的表達，起到(dao)抑(yi)制(zhi)藍(lan)藻增(zeng)殖的。

本發(fa)明還提(ti)供了一種N15多肽制(zhi)備的(de)抗(kang)細菌(jun)藥(yao)物(wu)，為(wei)N15多肽的(de)水(shui)溶(rong)液，濃度大于等于100μg/mL。

本發明的有益效果：N15多肽是一種(zhong)結構清(qing)晰，易于工業(ye)化生產的多肽，它可以抑制(zhi)大腸桿菌(jun)、金黃色葡萄球菌(jun)、沙門氏菌(jun)、魚腥藍細菌(jun)等多種(zhong)細菌(jun)的增殖(zhi)，效果好(hao)且(qie)無毒副作(zuo)用。

附圖說明

圖1為N15對大腸桿菌的抑菌曲線。

圖2為流(liu)式細胞儀檢測N15對(dui)金黃色葡(pu)萄球菌DNA含量的影響。

圖3為N15對魚腥藍細(xi)菌PCC 7120的抑菌曲(qu)線。

圖(tu)4為缺(que)氮誘導48小時對(dui)照組和N15實驗組魚腥藍細菌PCC7120異形胞的(de)分(fen)化(hua)情況。

圖(tu)5為熒光(guang)定量RT-PCR檢測N15對藍藻(zao)hetR基因(yin)mRNA表達量的影(ying)響。

圖6為熒光定量RT-PCR檢測N15對(dui)藍藻ntcA基因(yin)mRNA表(biao)達量的影響。

具體實施方式

下面結合附(fu)圖和具體實(shi)驗例(li)對本(ben)發明(ming)作進一步(bu)的論(lun)證說(shuo)明(ming)，以(yi)下實(shi)驗例(li)僅是對本(ben)發明(ming)的解釋而本(ben)發明(ming)并不(bu)局限(xian)于以(yi)下實(shi)驗例(li)。

實驗(yan)例1：N15抑制了大腸桿菌的生長

實驗方法：

在液(ye)體培(pei)養(yang)基中(zhong)，微生(sheng)(sheng)(sheng)物隨(sui)著培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)的(de)(de)增加(jia)而不斷增加(jia)，逐漸使(shi)培(pei)養(yang)基混濁，這一變化(hua)，可以(yi)用分光光度計測(ce)定(ding)，并可根據不同的(de)(de)時(shi)間(jian)里測(ce)定(ding)的(de)(de)數值(zhi)而做出(chu)該種微生(sheng)(sheng)(sheng)物的(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)長曲線。

以LB液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)作(zuo)為(wei)空白，在分(fen)光(guang)(guang)光(guang)(guang)度計(ji)上調零點。從0時開(kai)始，添(tian)加N15至終(zhong)濃(nong)度為(wei)500μg/mL，每隔2h測定(ding)液(ye)體LB培(pei)養(yang)液(ye)的(de)OD600(波(bo)長600nm處的(de)吸(xi)光(guang)(guang)度)，同時設置不添(tian)加N15的(de)菌株(zhu)作(zuo)為(wei)對照。以時間為(wei)橫(heng)坐(zuo)標，以OD值為(wei)縱坐(zuo)標，制作(zuo)曲線(xian)，即為(wei)N15多肽(tai)對大腸桿菌的(de)抑(yi)菌曲線(xian)，結果如圖1所示。

實驗結果表明，加入N15多肽至終濃度為500μg/mL的(de)大腸桿(gan)菌(jun)的(de)生長(chang)和不加入N15的(de)對(dui)照菌(jun)株比較，受N15多肽抑制大腸桿(gan)菌(jun)的(de)生長(chang)較為緩慢，加入N15對(dui)大腸桿(gan)菌(jun)的(de)生長(chang)具有抑制作用。

實驗例2：N15對金(jin)黃色葡萄(tao)球菌的生長(chang)具有抑(yi)制(zhi)作(zuo)用

實驗方法：

取(qu)(qu)金黃色(se)葡萄球菌(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)株接種到牛肉膏蛋白(bai)胨培(pei)養基斜(xie)面上，37℃下活化培(pei)養，用接種環從斜(xie)面上挑菌(jun)(jun)(jun)到無菌(jun)(jun)(jun)水(shui)中(zhong)制(zhi)成菌(jun)(jun)(jun)懸液(ye)，接種培(pei)養無菌(jun)(jun)(jun)操(cao)作下，用取(qu)(qu)液(ye)器吸取(qu)(qu)100μL體積的(de)菌(jun)(jun)(jun)液(ye)到滅菌(jun)(jun)(jun)小離心管中(zhong)，充分混(hun)勻后(hou)，迅速注入到滅菌(jun)(jun)(jun)平(ping)(ping)皿中(zhong)，在平(ping)(ping)板中(zhong)加(jia)入N15多肽，以(yi)同體積的(de)無菌(jun)(jun)(jun)水(shui)的(de)混(hun)合液(ye)注入作空白(bai)，置于37℃恒溫培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養48小時，觀察菌(jun)(jun)(jun)落生長情況，并對菌(jun)(jun)(jun)落計數，結果見表(biao)1。

表(biao)1.N15對金黃(huang)色葡萄(tao)球菌(jun)生(sheng)長(chang)抑制結(jie)果對照表(biao)

結果顯(xian)示，和對(dui)照相比，加入N15多肽的平板上金黃(huang)色葡萄球(qiu)菌的菌落數明顯(xian)減少，N15對(dui)金黃(huang)色葡萄球(qiu)菌的生長(chang)具有抑制效(xiao)應。

實(shi)驗例3：N15對金黃色葡(pu)萄球菌的DNA復制具有抑制效應

實驗方法：

制備YEPD液(ye)體培養基，培養金黃色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)(jun)，并加(jia)入N15到(dao)YEPD液(ye)體培養基中(zhong)，同時設(she)置不加(jia)N15多肽的金黃色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)(jun)作為(wei)對(dui)照(control)，加(jia)入N15多肽(終(zhong)濃度500μg/mL)，在(zai)處(chu)理2小時分別(bie)取樣(yang)2mL金黃色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)體，加(jia)入Sytox-Green染料對(dui)金黃色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)(jun)細(xi)胞DNA染色(se)后，使(shi)用流式(shi)細(xi)胞儀進行金黃色(se)葡(pu)萄(tao)球菌(jun)(jun)的DNA相對(dui)含量進行測定，結果見圖2。

如實(shi)驗結(jie)果所(suo)示，橫坐(zuo)標表示單個金黃色(se)葡萄球(qiu)菌(jun)細(xi)胞內(nei)DNA的(de)(de)含量，縱坐(zuo)標表示酵(jiao)母(mu)細(xi)胞數量。在N15處理2小時內(nei)，N15處理細(xi)胞內(nei)的(de)(de)DNA含量和對照(zhao)細(xi)胞相(xiang)比(bi)沒有(you)顯著(zhu)性差異，而隨著(zhu)時間的(de)(de)增(zeng)加，在N15處理15小時以(yi)后，N15處理細(xi)胞內(nei)的(de)(de)DNA含量和對照(zhao)細(xi)胞相(xiang)比(bi)明(ming)顯減(jian)少(shao)。該結(jie)果表明(ming)N15會引起金黃色(se)葡萄球(qiu)菌(jun)細(xi)胞DNA含量的(de)(de)減(jian)少(shao)。

實驗例4：N15對沙(sha)門氏菌的生長(chang)具有抑制(zhi)作(zuo)用

實驗方法：

取(qu)沙門(men)氏菌(jun)菌(jun)株接(jie)(jie)種(zhong)到牛肉膏蛋白胨培養(yang)基(ji)斜(xie)面上(shang)(shang)，37℃下活化培養(yang)，用接(jie)(jie)種(zhong)環從斜(xie)面上(shang)(shang)挑菌(jun)到無菌(jun)水(shui)中(zhong)制成菌(jun)懸液，接(jie)(jie)種(zhong)培養(yang)無菌(jun)操作下，用取(qu)液器(qi)吸取(qu)100μL體(ti)積(ji)的菌(jun)液到滅(mie)菌(jun)小離心管中(zhong)，充分混勻后，迅速(su)注(zhu)入到滅(mie)菌(jun)平皿(min)中(zhong)，在平板中(zhong)加入N15多肽，以同體(ti)積(ji)的無菌(jun)水(shui)的混合液注(zhu)入作空白，置于(yu)37℃恒(heng)溫培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)48小時，觀(guan)察菌(jun)落(luo)生長情況，并對菌(jun)落(luo)計數，結果(guo)見表2。

表2.N15對(dui)沙門氏(shi)菌生長抑制(zhi)結果(guo)對(dui)照表

結(jie)果顯示，和對(dui)照相比(bi)，加入N15多肽的(de)平板上沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)的(de)菌(jun)落數明顯減少，N15對(dui)沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)的(de)生長具有(you)抑制效應(ying)。

實驗例(li)5：N15抑制了魚腥藍(lan)細菌的生長(chang)

實驗方法：

將魚腥藍細(xi)菌(jun)(jun)PCC 7120在液體BG11培養(yang)基中培養(yang)至OD750(波長(chang)750nm處的吸光(guang)度(du))在0.3～0.4左(zuo)右，添加N15至終濃度(du)為100μg/mL，同時(shi)(shi)設置不添加N15的菌(jun)(jun)株作(zuo)為對照。每(mei)隔24小時(shi)(shi)用分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計測定菌(jun)(jun)液的OD750，連(lian)續測定8天后(hou)根據(ju)數據(ju)繪制N15的抑菌(jun)(jun)曲(qu)線，結果如(ru)圖3所示。

實驗結果表明，加入N15多肽至終濃度為(wei)100μg/mL的(de)魚(yu)(yu)腥(xing)藍(lan)細(xi)菌(jun)PCC 7120的(de)生(sheng)長(chang)(chang)和不加入N15的(de)對(dui)照菌(jun)株比較，受N15多肽抑(yi)制(zhi)(zhi)魚(yu)(yu)腥(xing)藍(lan)細(xi)菌(jun)的(de)生(sheng)長(chang)(chang)較為(wei)緩慢，加入N15對(dui)魚(yu)(yu)腥(xing)藍(lan)細(xi)菌(jun)PCC 7120的(de)生(sheng)長(chang)(chang)具有抑(yi)制(zhi)(zhi)作用。

實驗例6：N15推遲了魚腥(xing)藍細菌的異(yi)形胞(bao)分(fen)化時間

實驗方法：

魚腥(xing)藍(lan)細(xi)菌PCC 7120是一(yi)種絲狀細(xi)菌，其菌絲體能進行(xing)(xing)光合作用。在環境中缺乏氮源(yuan)的(de)(de)(de)條件下，會(hui)分化出(chu)具有固(gu)氮功能的(de)(de)(de)異(yi)形(xing)胞。為(wei)了(le)觀察(cha)N15處(chu)理對異(yi)形(xing)胞發育的(de)(de)(de)影(ying)響，本研(yan)究中在對魚腥(xing)藍(lan)細(xi)菌進行(xing)(xing)缺氮處(chu)理的(de)(de)(de)同時(shi)，加入100ug/mL的(de)(de)(de)N15，同時(shi)設(she)置不加入N15的(de)(de)(de)對照組，誘導后進行(xing)(xing)顯微鏡觀察(cha)。

實驗結果：

魚腥藍(lan)(lan)細菌(jun)PCC 7120的(de)(de)(de)營(ying)養(yang)細胞(bao)(bao)在(zai)(zai)形(xing)(xing)成(cheng)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)過程中(zhong)，產(chan)(chan)氧的(de)(de)(de)光(guang)(guang)(guang)系統II復合物在(zai)(zai)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)中(zhong)失活，因此在(zai)(zai)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡下，只有(you)營(ying)養(yang)細胞(bao)(bao)能夠(gou)發(fa)紅色熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)，而(er)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)沒有(you)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)。在(zai)(zai)進(jin)行(xing)(xing)缺(que)(que)氮誘導(dao)的(de)(de)(de)同(tong)時(shi)加入(ru)100μg/mL的(de)(de)(de)N15，分別在(zai)(zai)24小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)、48小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)候、72小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)、96小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)進(jin)行(xing)(xing)顯(xian)微鏡觀(guan)察(cha)，結果(guo)顯(xian)示對(dui)照組的(de)(de)(de)魚腥藍(lan)(lan)細菌(jun)在(zai)(zai)缺(que)(que)氮誘導(dao)24小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)就有(you)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)產(chan)(chan)生，而(er)加入(ru)N15的(de)(de)(de)魚腥藍(lan)(lan)細菌(jun)直到96小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)以后(hou)才有(you)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)生成(cheng)，缺(que)(que)氮誘導(dao)48小(xiao)(xiao)(xiao)時(shi)的(de)(de)(de)照片如圖4所(suo)示，加入(ru)N15的(de)(de)(de)魚腥藍(lan)(lan)細菌(jun)PCC 7120沒有(you)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)產(chan)(chan)生，菌(jun)絲體的(de)(de)(de)所(suo)有(you)細胞(bao)(bao)在(zai)(zai)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡下都發(fa)紅色熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)，而(er)對(dui)照組菌(jun)絲有(you)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)產(chan)(chan)生，這些異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)在(zai)(zai)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)顯(xian)微鏡下也沒有(you)紅色熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)。由此我(wo)們得知，N15推遲了(le)魚腥藍(lan)(lan)細菌(jun)PCC7120的(de)(de)(de)異(yi)形(xing)(xing)胞(bao)(bao)發(fa)育生成(cheng)的(de)(de)(de)時(shi)間。

實驗例7：N15抑制了異形胞分化(hua)基因(yin)的表達

實驗方法：

為(wei)了(le)觀(guan)察N15處理對異形胞(bao)發育的(de)影響(xiang)，本研究中(zhong)在對魚腥藍細菌進(jin)行缺氮處理的(de)同時，加(jia)入100μg/mL的(de)N15，同時設置不加(jia)入N15的(de)對照組(zu)，分別提取(qu)(qu)0hour、6hour、12hour、24hour的(de)對照組(zu)和實(shi)驗(yan)組(zu)，每(mei)個樣(yang)品收集50mL菌體(ti),提取(qu)(qu)RNA，并且用(yong)(yong)DNasel去(qu)除殘(can)余的(de)基因(yin)組(zu)DNA。利用(yong)(yong)紫(zi)外分光光度計對總RNA定量(liang)(liang)后,使用(yong)(yong)TakaRa公司(si)的(de)反轉(zhuan)錄(lu)試劑(ji)盒(he)反轉(zhuan)錄(lu)RNA合成cDNA。具(ju)體(ti)操作(zuo)步驟(zou)參見產(chan)品說明書。用(yong)(yong)TakaRa公司(si)的(de)試劑(ji)盒(he)PrimeScriptTM RT Reagent Kit(Perfect Real Time)進(jin)行實(shi)時熒光定量(liang)(liang)反轉(zhuan)錄(lu)PCR。具(ju)體(ti)操作(zuo)參見產(chan)品說明書。分析(xi)軟件使用(yong)(yong)ROCHE LightCycler480進(jin)行分析(xi),定量(liang)(liang)方法為(wei)相(xiang)對定量(liang)(liang)法。

實驗結果：

異(yi)形(xing)胞在發育過程中需(xu)要在許多(duo)基因(yin)(yin)的(de)參與，其中hetR和ntcA基因(yin)(yin)是異(yi)形(xing)胞發育的(de)關(guan)鍵基因(yin)(yin)，與異(yi)形(xing)胞發育的(de)多(duo)個后(hou)期(qi)基因(yin)(yin)的(de)轉錄激活依賴于(yu)hetR和ntcA。我們通過實(shi)時熒光定量反轉錄PCR實(shi)驗檢測了N15對(dui)這(zhe)幾個異(yi)形(xing)胞分(fen)化相關(guan)基因(yin)(yin)表達的(de)影響，實(shi)驗結(jie)果如圖(tu)5和6所示。

和對(dui)照組相比，N15加(jia)入6hour、12hour、24hour后，較(jiao)明顯的抑制了魚腥藍(lan)細菌(jun)中hetR和ntcA基因的表(biao)(biao)達(da)，由此我們得知N15對(dui)藍(lan)藻生長(chang)的抑制是通過抑制藍(lan)細菌(jun)中異(yi)形胞分化相關基因的表(biao)(biao)達(da)來實(shi)現的。

N15多(duo)肽的抑菌(jun)(jun)效果可(ke)作用于(yu)革蘭(lan)氏陰性(xing)菌(jun)(jun)、革蘭(lan)氏陽(yang)性(xing)菌(jun)(jun)、藍細菌(jun)(jun)，上述實(shi)施例(li)僅為(wei)對細菌(jun)(jun)抑制劑的舉例(li)，挑選(xuan)了較有(you)代表性(xing)的細菌(jun)(jun)，無法將所有(you)細菌(jun)(jun)種(zhong)類的抑制實(shi)驗例(li)一一列出(chu)，不因此限(xian)制本發明的范圍。