本發(fa)明(ming)涉(she)及(ji)真(zhen)核(he)起(qi)始(shi)(shi)因子(zi)2B抑(yi)制劑多肽及(ji)其應用，具(ju)體(ti)涉(she)及(ji)具(ju)有抑(yi)制真(zhen)核(he)起(qi)始(shi)(shi)因子(zi)2B活性(xing)狀態轉化，治療惡性(xing)腫瘤的多肽。

背景技術：

eIF2B(eukaryotic initiation factor 2B，真核起始(shi)(shi)因子2B)是(shi)(shi)一種參與真核翻(fan)譯起始(shi)(shi)的重要的蛋白質(zhi)，也是(shi)(shi)一種鳥苷酸交換(huan)(huan)因子。其作(zuo)用是(shi)(shi)在翻(fan)譯起始(shi)(shi)過程中，將eIF2上結合的GDP(eIF2·GDP，eIF2的非活性狀(zhuang)態)轉換(huan)(huan)為(wei)GTP(eIF2·GTP，eIF2的活性狀(zhuang)態)，使得eIF2可以重新參與翻(fan)譯起始(shi)(shi)。因此，在細胞(bao)中，eIF2B的作(zuo)用是(shi)(shi)使足量(liang)的eIF2·GTP存在以參與翻(fan)譯起始(shi)(shi)過程。

人(ren)體正常細(xi)胞在(zai)(zai)受到外(wai)(wai)界(jie)刺激(ji)(如病原體刺激(ji)、缺氧(yang)、紫外(wai)(wai)線(xian)照(zhao)射等(deng))的應急(ji)作(zuo)用下，EIF2a的表(biao)達會出現一(yi)過性(xing)的上調(diao)，當(dang)刺激(ji)因(yin)素(su)去除(chu)后即回(hui)復(fu)正常。EIF2a對腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)發(fa)(fa)生有著重(zhong)要(yao)的影響。EIF2a在(zai)(zai)人(ren)類許多惡(e)性(xing)腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)中(zhong)廣(guang)泛(fan)存在(zai)(zai)過度表(biao)達，常見的有胃(wei)(wei)癌(ai)(ai)、結直(zhi)腸(chang)癌(ai)(ai)、甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)癌(ai)(ai)、非小細(xi)胞型肺癌(ai)(ai)、惡(e)性(xing)黑(hei)色素(su)瘤(liu)(liu)(liu)、非何(he)杰(jie)金(jin)淋巴瘤(liu)(liu)(liu)等(deng)。一(yi)項甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)乳頭狀(zhuang)癌(ai)(ai)和(he)(he)侵襲(xi)性(xing)甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)癌(ai)(ai)組(zu)織中(zhong)EIF2a表(biao)達的免疫組(zu)化(hua)(hua)研究(jiu)發(fa)(fa)現，侵襲(xi)性(xing)甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)癌(ai)(ai)EIF2a表(biao)達顯著高于甲(jia)狀(zhuang)腺(xian)乳頭狀(zhuang)癌(ai)(ai)。另一(yi)項研究(jiu)用免疫組(zu)化(hua)(hua)技術(shu)分別檢測(ce)了胃(wei)(wei)癌(ai)(ai)、結腸(chang)癌(ai)(ai)、直(zhi)腸(chang)癌(ai)(ai)和(he)(he)癌(ai)(ai)旁(pang)組(zu)織中(zhong)的EIF2a表(biao)達情(qing)況，結果(guo)顯示每一(yi)組(zu)癌(ai)(ai)組(zu)織中(zhong)EIF2a也明(ming)顯高于癌(ai)(ai)旁(pang)組(zu)織。這(zhe)提示EIF2a在(zai)(zai)胃(wei)(wei)腸(chang)道癌(ai)(ai)的發(fa)(fa)生、發(fa)(fa)展和(he)(he)進(jin)展中(zhong)扮演(yan)了重(zhong)要(yao)作(zuo)用。目前，沒(mei)有成熟開發(fa)(fa)的真核起始(shi)因(yin)子(zi)2B抑制劑多肽問世，用于治療惡(e)性(xing)腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)。

本專利(li)中(zhong)(zhong)的(de)eIF2B抑制劑多肽已(yi)證(zheng)明(ming)在(zai)黑色素腫瘤和(he)肺癌中(zhong)(zhong)有(you)效，具有(you)在(zai)其他惡性(xing)腫瘤模型中(zhong)(zhong)開發的(de)前景。

技術實現要素：

發明目的

本(ben)發明(ming)提(ti)供全新(xin)的序列(lie)，該序列(lie)為真核起(qi)始因子2B抑制劑，對惡性腫瘤具有很好的療效。

技術方案

真核(he)起始因子2B抑制劑多肽，其(qi)特(te)征在(zai)于其(qi)序列為(wei)SEQ ID NO：1。

真核起始因(yin)子2B抑制(zhi)劑多(duo)肽(tai)在(zai)治療惡性腫瘤，如黑色素瘤和肺癌藥(yao)物(wu)中的應(ying)用(yong)。

有益效果

利用固(gu)相合(he)成(cheng)法化學合(he)成(cheng)真核起(qi)始(shi)因(yin)子2B抑(yi)制(zhi)劑(ji)多(duo)肽(tai)(tai)，該(gai)多(duo)肽(tai)(tai)具有(you)全新的(de)序列，該(gai)多(duo)肽(tai)(tai)可抑(yi)制(zhi)真核起(qi)始(shi)因(yin)子2B活性狀態轉(zhuan)化，治療惡性腫(zhong)瘤，如(ru)黑色素瘤和肺(fei)癌。我們發現的(de)真核起(qi)始(shi)因(yin)子2B抑(yi)制(zhi)劑(ji)多(duo)肽(tai)(tai)可以抑(yi)制(zhi)黑色素瘤細胞和肺(fei)癌細胞增殖，并在(zai)體內(nei)試驗(yan)中提高荷瘤小鼠生存率，具有(you)潛在(zai)的(de)新藥(yao)開發價值。

具體實施方式

實施例1

真(zhen)核(he)起始因子2B抑(yi)制劑多肽對(dui)體外培養人黑(hei)色(se)素瘤細胞的(de)生長(chang)和存活(huo)IC50。

采用MTT比色法。將對(dui)(dui)數生(sheng)長(chang)的(de)(de)人黑色素瘤細胞(bao)，以1.0×105加入(ru)96孔(kong)(kong)(kong)培養(yang)板中，培養(yang)24h，實驗孔(kong)(kong)(kong)、陽性藥物對(dui)(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)(kong)分(fen)別(bie)加入(ru)不同濃度的(de)(de)實驗藥物真核起始因子2B抑制(zhi)劑(ji)多肽(上海生(sheng)工合成)和陽性對(dui)(dui)照(zhao)藥物紫杉醇；空(kong)白(bai)組加入(ru)相同體積的(de)(de)溶(rong)劑(ji)。每孔(kong)(kong)(kong)設五個復孔(kong)(kong)(kong)，培養(yang)48h后，每孔(kong)(kong)(kong)加入(ru)MTT，作(zuo)用4h后，加入(ru)DMSO，孵育30min，在酶標儀620nm處測定(ding)吸光(guang)(guang)度A值，按公(gong)式人黑色素瘤細胞(bao)生(sheng)長(chang)抑制(zhi)率(lv)＝(1-實驗組吸光(guang)(guang)值/對(dui)(dui)照(zhao)組吸光(guang)(guang)值)×100％。計算出(chu)實驗藥物的(de)(de)IC50為0.24μM。

實施例2

真核起始因子2B抑(yi)制劑多(duo)肽對體外(wai)培養(yang)人(ren)肺癌細胞的生長(chang)和存活IC50。

采用(yong)MTT比色法(fa)。將對數生長的(de)人肺癌細胞，以1.0×105加(jia)入(ru)(ru)96孔培(pei)養板中，培(pei)養24h，實(shi)驗(yan)孔、陽(yang)性藥(yao)(yao)物(wu)對照孔分別加(jia)入(ru)(ru)不同(tong)濃度的(de)實(shi)驗(yan)藥(yao)(yao)物(wu)真核起(qi)始因子(zi)2B抑制(zhi)劑多肽(上(shang)海生工合成)和陽(yang)性對照藥(yao)(yao)物(wu)紫杉(shan)醇(chun)；空白組(zu)加(jia)入(ru)(ru)相同(tong)體積(ji)的(de)溶劑。每(mei)孔設五個復孔，培(pei)養48h后，每(mei)孔加(jia)入(ru)(ru)MTT，作用(yong)4h后，加(jia)入(ru)(ru)DMSO，孵育30min，在酶標儀620nm處測定吸(xi)光(guang)度A值(zhi)(zhi)，按公式人肺癌細胞生長抑制(zhi)率＝(1-實(shi)驗(yan)組(zu)吸(xi)光(guang)值(zhi)(zhi)/對照組(zu)吸(xi)光(guang)值(zhi)(zhi))×100％。計算出實(shi)驗(yan)藥(yao)(yao)物(wu)的(de)IC50為(wei)12.48μM。

實施例3

用(yong)黑色素瘤腫瘤模型檢測真核起始因子(zi)2B抑制劑(ji)多肽的(de)體(ti)內活力。

建立黑色素瘤腫瘤模型，陽性(xing)對照(zhao)藥物紫杉醇；空白(bai)組加入相同體積的(de)溶劑，實(shi)驗組多肽(tai)(上海生工(gong)合成)設(she)3個劑量：5、10、20mg/Kg。21天后(hou)，觀察小鼠(shu)存活(huo)數量，計算存活(huo)率。結果(guo)顯示，真核起始因(yin)子2B抑制劑多肽(tai)可有(you)效地保(bao)護荷(he)瘤小鼠(shu)，提(ti)高荷(he)瘤小鼠(shu)的(de)生存率，生存率達到72.17％。

實施例4

用肺(fei)癌腫(zhong)瘤模(mo)型檢測真(zhen)核起始因子2B抑制(zhi)劑(ji)多肽的體(ti)內(nei)活(huo)力。

建(jian)立肺癌腫瘤(liu)模(mo)型，陽性對照(zhao)藥物紫杉(shan)醇；空白組加入(ru)相同體(ti)積的溶劑，實(shi)驗組多肽(上海生(sheng)工(gong)合成)設(she)3個劑量(liang)：5、10、20mg/Kg。21天后，觀察小(xiao)鼠(shu)(shu)存活數(shu)量(liang)，計(ji)算存活率。結果顯示(shi)，真核起始因子2B抑(yi)制劑多肽可有效地保護(hu)荷瘤(liu)小(xiao)鼠(shu)(shu)，提高小(xiao)鼠(shu)(shu)的生(sheng)存率，生(sheng)存率達到(dao)80.52％。

SEQUENCE LISTING

<110> 蘇州普羅達(da)生物(wu)科(ke)技(ji)有限公(gong)司

<120> 一種真(zhen)核起始因子2B抑制劑多肽及其應用

<130>

<160> 1

<170> Patent In version 3.3

<210> 1

<211> 37

<212> PRT

<213> 人(ren)工序列

<400> 1

Leu His Pro Pro Asp Ala Glu Glu Asp Glu Asp Asp Gly Glu Phe Ser

1 5 10  15

Asp Asp Ser Gly Ala Asp Gln Glu Lys Asp Lys Val Lys Met Lys Gly

20 25   30

Tyr Asn Pro Ala Glu

35