本(ben)發(fa)明(ming)涉(she)及藥物(wu)化學領域，特(te)別是指(zhi)一種激肽釋放酶7小分子抑制劑及其制備方法與用途(tu)。

背景技術：

特(te)應性皮炎(yan)(yan)(AD)是(shi)一種(zhong)廣(guang)泛傳播的慢性炎(yan)(yan)癥性皮膚(fu)病(bing)(bing)，特(te)點是(shi)干燥、鱗狀皮膚(fu)、炎(yan)(yan)癥、皮膚(fu)滲透性增(zeng)加(jia)，AD病(bing)(bing)人(ren)的皮膚(fu)對環境(jing)中常見(jian)的而對正(zheng)常人(ren)無害的因素也會很敏(min)感從而易于(yu)受到(dao)(dao)表(biao)面感染。在(zai)過去的30年間工業化國家的特(te)應性皮炎(yan)(yan)的發病(bing)(bing)率增(zeng)長了(le)(le)2到(dao)(dao)3倍(bei)，據(ju)估計兒童的特(te)應性皮炎(yan)(yan)患病(bing)(bing)率達到(dao)(dao)了(le)(le)15-30％，成人(ren)的特(te)應性皮炎(yan)(yan)患病(bing)(bing)率達到(dao)(dao)了(le)(le)2-10％。由于(yu)發病(bing)(bing)機制的復雜性，對AD的發病(bing)(bing)機制了(le)(le)解得不多，但皮膚(fu)屏障功(gong)能紊亂已經(jing)被證實是(shi)AD發展過程(cheng)中的關鍵(jian)因素之一。

皮膚(fu)屏障(zhang)的(de)(de)(de)穩定(ding)依賴于(yu)顆(ke)粒(li)(li)(li)層的(de)(de)(de)角(jiao)(jiao)質(zhi)形成細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)分化為角(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)和皮膚(fu)表層角(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)脫落(luo)(即脫屑(xie))之間的(de)(de)(de)平衡，皮膚(fu)的(de)(de)(de)脫屑(xie)過程(cheng)包括(kuo)由KLKs參與(yu)的(de)(de)(de)橋(qiao)粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)降(jiang)解(jie)，由于(yu)橋(qiao)粒(li)(li)(li)是角(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)粘(zhan)連(lian)蛋白，橋(qiao)粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)降(jiang)解(jie)則會導致角(jiao)(jiao)質(zhi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)脫落(luo)而致皮膚(fu)脫屑(xie)。證據顯示(shi)，局部(bu)或暫(zan)時性(xing)的(de)(de)(de)KLKs活性(xing)控制的(de)(de)(de)失調，是AD病人(ren)皮膚(fu)屏障(zhang)穩定(ding)缺失的(de)(de)(de)主(zhu)要原(yuan)因之一。

KLKs(Kallikreins，激(ji)肽(tai)釋放酶)是具有胰蛋白酶或胰凝乳(ru)蛋白酶特(te)異性(xing)的(de)(de)絲氨(an)酸蛋白酶，其(qi)編(bian)碼基因定位于(yu)19q13.4，編(bian)碼15個分泌型絲氨(an)酸蛋白酶KLK 1-KLK 15。已經證明，KLKs存(cun)在(zai)于(yu)正常人(ren)的(de)(de)角質層細(xi)胞中(zhong)，目前發現(xian)，至少(shao)有8種KLK(KLK 5，KLK 6，KLK 7，KLK 8，KLK 10，KLK 11，KLK 13和(he)KLK 14)存(cun)在(zai)于(yu)人(ren)的(de)(de)角質層和(he)汗液中(zhong)。

其中，KLK7占(zhan)總量的(de)40％。KLK7可(ke)(ke)能是皮膚損傷的(de)一(yi)個關鍵酶，而且在(zai)AD病人(ren)中它可(ke)(ke)能參與(yu)一(yi)個系統(tong)性炎(yan)癥反(fan)應，在(zai)AD的(de)角質層KLK7升高最(zui)為突(tu)出(chu)，這提示(shi)KLK7在(zai)AD的(de)發病機制上可(ke)(ke)能是至關重要(yao)的(de)，因此，抑制KLK7的(de)活性對于AD的(de)治(zhi)療顯得最(zui)為重要(yao)。

LEKTI(Lympho-epithelial Kazal-type-related inhibitor,淋巴上皮組織Kazal型相關蛋白(bai)抑制(zhi)(zhi)劑)是由SPINK5基因編碼的(de)(de)(de)絲(si)氨(an)酸蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑家族的(de)(de)(de)成(cheng)員，LEKTI前體包含一個信號肽和彼此隔開的(de)(de)(de)15個絲(si)氨(an)酸蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)域(D1-D15)，表(biao)達(da)后(hou)迅速被弗林蛋白(bai)酶(mei)水解為幾個蛋白(bai)片段，其(qi)中(zhong)包含D6-D9抑制(zhi)(zhi)域的(de)(de)(de)LEKTI能抑制(zhi)(zhi)胰蛋白(bai)酶(mei)、胰凝(ning)乳蛋白(bai)酶(mei)、KLK5和KLK7等酶(mei)的(de)(de)(de)活性(xing)。LEKTI的(de)(de)(de)內(nei)源靶至(zhi)少包括KLK5、KLK7和KLK14，它們(men)共同參與皮膚的(de)(de)(de)脫屑(xie)過程。在AD病(bing)人(ren)，LEKTI表(biao)達(da)水平嚴重降低，導致了KLK7活性(xing)的(de)(de)(de)異常(chang)升高。

盡(jin)管LEKTI是表(biao)皮(pi)內(nei)KLK7的(de)天然抑制劑(ji)，但作為治(zhi)療AD的(de)外用(yong)(yong)(yong)藥(yao)，其不(bu)能透過皮(pi)膚(fu)角質層，同時由于(yu)(yu)其大分子蛋白質的(de)特(te)性(xing)也會(hui)導(dao)致其降(jiang)解速度過快，因而將(jiang)LEKTI作為外用(yong)(yong)(yong)藥(yao)作用(yong)(yong)(yong)非(fei)常有(you)限。并且，到(dao)(dao)目前(qian)為止，還沒有(you)一種有(you)效的(de)KLK7小分子抑制劑(ji)應用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)臨床。因此，如果能得到(dao)(dao)作為皮(pi)膚(fu)外用(yong)(yong)(yong)藥(yao)的(de)KLK7的(de)小分子抑制劑(ji)，將(jiang)有(you)助于(yu)(yu)AD的(de)治(zhi)療。

技術實現要素：

有(you)鑒于此，本(ben)發明的(de)目的(de)在于提出一種激肽釋放酶7小分子(zi)抑制劑及其制備方(fang)法與用(yong)途，其作為小分子(zi)抑制劑能(neng)有(you)效抑制KLK7，具有(you)應用(yong)于制備特應性皮炎(yan)的(de)治療藥物的(de)前景。

本發明通過以(yi)KLK7作(zuo)為(wei)靶分(fen)子，根據KLK7的晶(jing)體結構，以(yi)及藥效團(tuan)模型進行(xing)分(fen)析(xi)與(yu)篩選(xuan)，合成出具(ju)有KLK7抑制作(zuo)用的小(xiao)分(fen)子化合物(wu)，經實驗驗證，該(gai)化合物(wu)具(ju)有顯著的抑制KLK7作(zuo)用。

基于上(shang)述目(mu)的(de)本(ben)發明提供的(de)激肽釋放(fang)酶7小(xiao)分子(zi)抑制劑(ji)的(de)化(hua)合物結(jie)構由式(I)表示(shi)：

基于相同的(de)發明(ming)構思(si)，本(ben)發明(ming)還提供(gong)了(le)激肽(tai)釋放酶7小(xiao)分子抑制劑的(de)制備方法(fa)，包括以下(xia)步(bu)驟(zou)：

步驟1)化(hua)合物(wu)(Ⅱ)、1-氯丙烷、甲(jia)苯、碳酸鉀混(hun)合后，回(hui)流反應3-4小時，過柱分(fen)離得化(hua)合物(wu)(Ⅲ)；

步驟2)化合物(Ⅲ)與二苯醚混合，升溫(wen)(wen)至(zhi)110-130℃，光照下(xia)通入氯氣，控制反(fan)應(ying)溫(wen)(wen)度160-180℃，冷(leng)卻至(zhi)80-100℃，加(jia)入磷酸鋅，再加(jia)入水(shui)及(ji)5-20％(質量分(fen)數)的純堿溶液(ye)，回流1-3小時，過柱分(fen)離得化合物(Ⅳ)；

步驟3)化(hua)合(he)物(wu)(Ⅳ)、40-80％(質量分(fen)數)水合(he)肼(jing)溶液、乙醇混合(he)后(hou)，回流反應8-12小時，過(guo)柱(zhu)分(fen)離得化(hua)合(he)物(wu)(Ⅴ)；

步驟(zou)4)化(hua)合物(wu)(Ⅴ)、中間體化(hua)合物(wu)(Ⅵ)、甲苯、碳酸鉀，回流反應3-5小時(shi)后，過(guo)柱分離得化(hua)合物(wu)(I)。

優選地，步驟1)中所述的(de)(de)化合物(Ⅱ)、1-氯丙烷、碳酸(suan)鉀、甲(jia)苯的(de)(de)摩爾比為0.5～2:0.9～1.3:0.5～2:8～12。

優選地，步驟2)中所述的化合(he)物(Ⅲ)、二苯(ben)醚(mi)、氯氣、磷酸鋅、水(不包括純堿(jian)溶液所含(han)的水)、純堿(jian)的摩爾(er)比為0.5～2:8～12:1.8～2.4:0.001～0.003:1.2～1.6:0.1～0.3。

優選(xuan)地，步(bu)驟3)中所述的化合物(Ⅳ)、水合肼(jing)(折(zhe)100％)、乙醇的摩(mo)爾比為1.0：1.5:10。

優選地，步(bu)驟4)中所述的(de)化合物(Ⅴ)、中間體化合物(Ⅵ)、碳酸鉀、甲(jia)苯的(de)摩爾(er)比為0.5～2:0.9～1.3:0.5～2:8～12。

優選地，所述(shu)中間體化合物(wu)(Ⅵ)的合成包括以下(xia)步驟：化合物(wu)(Ⅶ)、三(san)苯基(ji)氯甲烷、氯仿、三(san)乙胺混合，室溫下(xia)攪(jiao)拌反應，過柱分離得(de)化合物(wu)(Ⅷ)；

化合物(Ⅷ)、對甲基(ji)芐氯、甲苯、碳酸鉀混合，回流反應3-4小(xiao)時，過

化(hua)合物(Ⅸ)與80％(質量(liang)分數(shu))醋酸水溶(rong)液(ye)混合，加熱回流(liu)1小(xiao)時，加入5-20％(質量(liang)分數(shu))氫氧(yang)化(hua)鈉溶(rong)液(ye)，游(you)離出化(hua)合物(X)，過柱分離得化(hua)合物(Ⅹ)；

化(hua)合物(Ⅹ)、乙醚(mi)、三乙胺混合，再(zai)滴(di)加氯(lv)乙酰氯(lv)，室(shi)溫反應，過柱分離(li)得化(hua)合物(Ⅵ)。

基于(yu)相同的發明構思，本發明還提供了(le)上述激肽(tai)釋(shi)(shi)放酶7小分(fen)子抑(yi)制(zhi)劑的應用(yong)，即將(jiang)所述激肽(tai)釋(shi)(shi)放酶7小分(fen)子抑(yi)制(zhi)劑用(yong)于(yu)抑(yi)制(zhi)激肽(tai)釋(shi)(shi)放酶7的活性(xing)，制(zhi)備(bei)治(zhi)療特應性(xing)皮炎的藥物。

基于相同(tong)的(de)發明(ming)(ming)構思(si)，本發明(ming)(ming)還提供了一(yi)種(zhong)治(zhi)療特應(ying)性皮(pi)炎的(de)藥物組合物，其中含有(you)所述的(de)激肽釋放酶7小分(fen)子抑制劑作為有(you)效成分(fen)。

優(you)選地，上述藥物組合物為(wei)外(wai)用膏劑(ji)或(huo)外(wai)用噴霧制劑(ji)。

從上面所述(shu)可以看出，本發明提供(gong)的激肽釋(shi)放酶(mei)7小分子抑(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)及(ji)其(qi)制(zhi)備(bei)(bei)方(fang)法與(yu)用(yong)途，該抑(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)為小分子抑(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)，避免了傳統KLK7的天然抑(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)作為治療AD的外用(yong)藥時由于(yu)分子大而不能(neng)透(tou)過皮膚角(jiao)質層、吸收(shou)慢降(jiang)解(jie)快(kuai)等問題，該小分子抑(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)合成方(fang)法簡單，操作方(fang)便，吸收(shou)快(kuai)，有效抑(yi)(yi)制(zhi)KLK7，具有應(ying)用(yong)于(yu)臨床特應(ying)性皮炎的治療藥物的制(zhi)備(bei)(bei)前景。

附圖說明

圖1為本發明的實施例所涉及的激肽釋放酶7小分子抑制劑的IC₅₀曲線擬合圖；

圖(tu)2為本發明(ming)的(de)實施例所涉及的(de)激(ji)肽(tai)釋放酶7小分子抑制(zhi)劑的(de)核磁(ci)圖(tu)。

具體實施方式

為使本(ben)發明(ming)的目的、技術(shu)方案和優點更加清楚明(ming)白，以下(xia)結合具體(ti)實(shi)施例，并參(can)照附圖，對本(ben)發明(ming)進一步詳細說明(ming)。

實施例(li)1：激肽釋放酶7小分(fen)子抑制劑的制備(bei)

向反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)瓶中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)2-甲(jia)基吲(yin)(yin)哚-3-乙(yi)酸(suan)(Ⅱ)、1-氯丙烷、甲(jia)苯、碳(tan)(tan)(tan)酸(suan)鉀，回流(liu)(liu)反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)4小(xiao)時。其中(zhong)，2-甲(jia)基吲(yin)(yin)哚-3-乙(yi)酸(suan)：1-氯丙烷：碳(tan)(tan)(tan)酸(suan)鉀：甲(jia)苯＝1:1.2：1:10(摩爾比)，過柱(zhu)分(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)。隨(sui)后，向反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)瓶中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)、二苯醚(mi)混合(he)(he)(he)(he)后，升(sheng)溫(wen)至110℃，打開光照，通入(ru)(ru)(ru)氯氣，控制反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)溫(wen)度180℃，通完(wan)氯氣后，冷(leng)卻(que)至80℃，加入(ru)(ru)(ru)磷酸(suan)鋅，再加入(ru)(ru)(ru)水和重(zhong)量濃度為20％的(de)純堿溶(rong)液，回流(liu)(liu)1小(xiao)時，過柱(zhu)分(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)：二苯醚(mi)：氯氣：磷酸(suan)鋅：水(不包(bao)括純堿溶(rong)液中(zhong)的(de)水)：純堿(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩爾比)，過柱(zhu)分(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。向反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)瓶中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)，水合(he)(he)(he)(he)肼溶(rong)液，乙(yi)醇(chun)，回流(liu)(liu)反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)8小(xiao)時。其中(zhong)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)：水合(he)(he)(he)(he)肼：乙(yi)醇(chun)＝1.0:1.5:10(摩爾比)，過柱(zhu)分(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)。向反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)瓶中(zhong)加入(ru)(ru)(ru)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)，甲(jia)苯，碳(tan)(tan)(tan)酸(suan)鉀，回流(liu)(liu)反(fan)應(ying)(ying)(ying)(ying)3小(xiao)時，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)：碳(tan)(tan)(tan)酸(suan)鉀：甲(jia)苯＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩爾比)，過柱(zhu)分(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(I)。圖(tu)(tu)2本(ben)發明的(de)實施例(li)所涉及的(de)激肽(tai)釋放酶7小(xiao)分(fen)(fen)子抑制劑(ji)的(de)核磁圖(tu)(tu)。圖(tu)(tu)2為本(ben)發明的(de)實施例(li)所涉及的(de)激肽(tai)釋放酶7小(xiao)分(fen)(fen)子抑制劑(ji)的(de)核磁圖(tu)(tu)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例2

向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)2-甲基吲哚-3-乙(yi)酸(suan)(Ⅱ)、1-氯丙(bing)烷(wan)(wan)、甲苯(ben)(ben)、碳(tan)酸(suan)鉀，回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)反(fan)應(ying)3小(xiao)(xiao)(xiao)時。其中(zhong)，2-甲基吲哚-3-乙(yi)酸(suan)：1-氯丙(bing)烷(wan)(wan)：碳(tan)酸(suan)鉀：甲苯(ben)(ben)＝1:1:1:10(摩(mo)爾比)，過(guo)(guo)柱(zhu)分(fen)離得(de)化(hua)合物(wu)(Ⅲ)。隨后(hou)，向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)合物(wu)(Ⅲ)、二(er)苯(ben)(ben)醚混合后(hou)，升溫至120℃，打開(kai)光照，通(tong)入(ru)(ru)氯氣，控(kong)制反(fan)應(ying)溫度170℃，通(tong)完氯氣后(hou)，冷卻至90℃，加(jia)(jia)入(ru)(ru)磷(lin)酸(suan)鋅，再加(jia)(jia)入(ru)(ru)水(shui)和(he)重量濃度為20％的純(chun)(chun)堿(jian)(jian)溶(rong)液，回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)2小(xiao)(xiao)(xiao)時，過(guo)(guo)柱(zhu)分(fen)離得(de)化(hua)合物(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)，化(hua)合物(wu)(Ⅲ)：二(er)苯(ben)(ben)醚：氯氣：磷(lin)酸(suan)鋅：水(shui)(不包括純(chun)(chun)堿(jian)(jian)溶(rong)液中(zhong)的水(shui))：純(chun)(chun)堿(jian)(jian)(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩(mo)爾比)，過(guo)(guo)柱(zhu)分(fen)離得(de)化(hua)合物(wu)(Ⅳ)。向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)合物(wu)(Ⅳ)，水(shui)合肼，乙(yi)醇，回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)反(fan)應(ying)9小(xiao)(xiao)(xiao)時。其中(zhong)，化(hua)合物(wu)(Ⅳ)：水(shui)合肼(：乙(yi)醇＝1.0:1.5:10(摩(mo)爾比)，過(guo)(guo)柱(zhu)分(fen)離得(de)化(hua)合物(wu)(Ⅴ)。向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)合物(wu)(Ⅴ)，化(hua)合物(wu)(Ⅵ)，甲苯(ben)(ben)，碳(tan)酸(suan)鉀，回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)反(fan)應(ying)4小(xiao)(xiao)(xiao)時，化(hua)合物(wu)(Ⅴ)：化(hua)合物(wu)(Ⅵ)：碳(tan)酸(suan)鉀：甲苯(ben)(ben)＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩(mo)爾比)，過(guo)(guo)柱(zhu)分(fen)離得(de)化(hua)合物(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例3

向(xiang)(xiang)反(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)2-甲(jia)(jia)基(ji)吲哚(duo)(duo)-3-乙酸(suan)(suan)(Ⅱ)、1-氯丙烷(wan)、甲(jia)(jia)苯(ben)、碳(tan)酸(suan)(suan)鉀(jia)，回(hui)流反(fan)應(ying)(ying)(ying)4小時(shi)。其中(zhong)，2-甲(jia)(jia)基(ji)吲哚(duo)(duo)-3-乙酸(suan)(suan)：1-氯丙烷(wan)：碳(tan)酸(suan)(suan)鉀(jia)：甲(jia)(jia)苯(ben)＝1:1.3:1.5:11(摩(mo)(mo)爾(er)比)，過(guo)柱(zhu)分(fen)(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)。隨后(hou)，向(xiang)(xiang)反(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)、二(er)苯(ben)醚混合(he)(he)(he)(he)(he)后(hou)，升溫(wen)至130℃，打開光照(zhao)，通入(ru)(ru)氯氣(qi)，控制反(fan)應(ying)(ying)(ying)溫(wen)度(du)(du)180℃，通完氯氣(qi)后(hou)，冷卻(que)至100℃，加(jia)入(ru)(ru)磷(lin)(lin)酸(suan)(suan)鋅，再加(jia)入(ru)(ru)水和重(zhong)量濃度(du)(du)為20％的純堿溶液，回(hui)流1小時(shi)，過(guo)柱(zhu)分(fen)(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)：二(er)苯(ben)醚：氯氣(qi)：磷(lin)(lin)酸(suan)(suan)鋅：水(不包括(kuo)純堿溶液中(zhong)的水)：純堿(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩(mo)(mo)爾(er)比)，過(guo)柱(zhu)分(fen)(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。向(xiang)(xiang)反(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)，水合(he)(he)(he)(he)(he)肼(jing)，乙醇(chun)，回(hui)流反(fan)應(ying)(ying)(ying)8-小時(shi)。其中(zhong)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)：水合(he)(he)(he)(he)(he)肼(jing)：乙醇(chun)＝1.0:1.5:10(摩(mo)(mo)爾(er)比)，過(guo)柱(zhu)分(fen)(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)。向(xiang)(xiang)反(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)，甲(jia)(jia)苯(ben)，碳(tan)酸(suan)(suan)鉀(jia)，回(hui)流反(fan)應(ying)(ying)(ying)5小時(shi)，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)：碳(tan)酸(suan)(suan)鉀(jia)：甲(jia)(jia)苯(ben)＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩(mo)(mo)爾(er)比)，過(guo)柱(zhu)分(fen)(fen)(fen)離得(de)化(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例4

向反(fan)(fan)(fan)應瓶(ping)中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)2-甲基吲哚-3-乙(yi)酸(suan)(Ⅱ)、1-氯丙烷(wan)、甲苯(ben)(ben)(ben)、碳(tan)(tan)酸(suan)鉀(jia)(jia)(jia)，回流(liu)反(fan)(fan)(fan)應3.5小(xiao)時(shi)(shi)。其中(zhong)，2-甲基吲哚-3-乙(yi)酸(suan)：1-氯丙烷(wan)：碳(tan)(tan)酸(suan)鉀(jia)(jia)(jia)：甲苯(ben)(ben)(ben)＝1:1:1:10(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱分離(li)得(de)(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅲ)。隨后(hou)(hou)(hou)，向反(fan)(fan)(fan)應瓶(ping)中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅲ)、二苯(ben)(ben)(ben)醚(mi)混(hun)合(he)(he)(he)(he)(he)后(hou)(hou)(hou)，升溫至110℃，打開光(guang)照，通(tong)入(ru)氯氣，控制(zhi)反(fan)(fan)(fan)應溫度(du)180℃，通(tong)完氯氣后(hou)(hou)(hou)，冷(leng)卻至80℃，加(jia)(jia)入(ru)磷(lin)酸(suan)鋅，再加(jia)(jia)入(ru)水(shui)(shui)(shui)(shui)和重(zhong)量濃度(du)為20％的純(chun)堿(jian)溶(rong)液(ye)，回流(liu)1小(xiao)時(shi)(shi)，過(guo)(guo)柱分離(li)得(de)(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅲ)：二苯(ben)(ben)(ben)醚(mi)：氯氣：磷(lin)酸(suan)鋅：水(shui)(shui)(shui)(shui)(不包括純(chun)堿(jian)溶(rong)液(ye)中(zhong)的水(shui)(shui)(shui)(shui))：純(chun)堿(jian)(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱分離(li)得(de)(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅳ)。向反(fan)(fan)(fan)應瓶(ping)中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅳ)，水(shui)(shui)(shui)(shui)合(he)(he)(he)(he)(he)肼(jing)，乙(yi)醇，回流(liu)反(fan)(fan)(fan)應8小(xiao)時(shi)(shi)。其中(zhong)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅳ)：水(shui)(shui)(shui)(shui)合(he)(he)(he)(he)(he)肼(jing)：乙(yi)醇＝1.0:1.5:10(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱分離(li)得(de)(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅴ)。向反(fan)(fan)(fan)應瓶(ping)中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅴ)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅵ)，甲苯(ben)(ben)(ben)，碳(tan)(tan)酸(suan)鉀(jia)(jia)(jia)，回流(liu)反(fan)(fan)(fan)應5小(xiao)時(shi)(shi)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅴ)：化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(Ⅵ)：碳(tan)(tan)酸(suan)鉀(jia)(jia)(jia)：甲苯(ben)(ben)(ben)＝0.5:0.9:0.7:9(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱分離(li)得(de)(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例5

向反(fan)應瓶(ping)中(zhong)(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入2-甲(jia)基吲(yin)哚-3-乙(yi)(yi)酸(suan)(Ⅱ)、1-氯丙烷、甲(jia)苯(ben)(ben)、碳酸(suan)鉀，回(hui)(hui)流(liu)反(fan)應3小(xiao)時。其中(zhong)(zhong)(zhong)，2-甲(jia)基吲(yin)哚-3-乙(yi)(yi)酸(suan)：1-氯丙烷：碳酸(suan)鉀：甲(jia)苯(ben)(ben)＝1:0.9:1:10(摩(mo)爾(er)(er)比)，過(guo)柱(zhu)(zhu)分(fen)(fen)離(li)得(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)。隨(sui)后，向反(fan)應瓶(ping)中(zhong)(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)、二(er)苯(ben)(ben)醚混合(he)(he)(he)(he)后，升(sheng)溫(wen)至110℃，打開光(guang)照，通(tong)入氯氣(qi)，控(kong)制反(fan)應溫(wen)度160℃，通(tong)完(wan)氯氣(qi)后，冷卻至80℃，加(jia)(jia)入磷酸(suan)鋅，再加(jia)(jia)入水和重量濃(nong)度為20％的純堿溶(rong)液(ye)，回(hui)(hui)流(liu)1小(xiao)時，過(guo)柱(zhu)(zhu)分(fen)(fen)離(li)得(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)(zhong)(zhong)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)：二(er)苯(ben)(ben)醚：氯氣(qi)：磷酸(suan)鋅：水(不(bu)包括(kuo)純堿溶(rong)液(ye)中(zhong)(zhong)(zhong)的水)：純堿(100％)＝0.8:9:1.8:0.002:1.5:0.2(摩(mo)爾(er)(er)比)，過(guo)柱(zhu)(zhu)分(fen)(fen)離(li)得(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)。向反(fan)應瓶(ping)中(zhong)(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)，水合(he)(he)(he)(he)肼，乙(yi)(yi)醇，回(hui)(hui)流(liu)反(fan)應10小(xiao)時。其中(zhong)(zhong)(zhong)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)：水合(he)(he)(he)(he)肼：乙(yi)(yi)醇＝1.0:1.5:10(摩(mo)爾(er)(er)比)，過(guo)柱(zhu)(zhu)分(fen)(fen)離(li)得(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)。向反(fan)應瓶(ping)中(zhong)(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅵ)，甲(jia)苯(ben)(ben)，碳酸(suan)鉀，回(hui)(hui)流(liu)反(fan)應3.5小(xiao)時，化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅵ)：碳酸(suan)鉀：甲(jia)苯(ben)(ben)＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩(mo)爾(er)(er)比)，過(guo)柱(zhu)(zhu)分(fen)(fen)離(li)得(de)化(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例6：中間體化合物(Ⅵ)的合成

向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加入化(hua)(hua)合(he)物(Ⅶ)、三(san)(san)苯基氯(lv)甲(jia)烷、氯(lv)仿、三(san)(san)乙胺(an)、室溫(wen)下攪拌反(fan)應(ying)，過(guo)柱分(fen)離得化(hua)(hua)合(he)物(Ⅷ)。其中(zhong)，化(hua)(hua)合(he)物(Ⅶ)：三(san)(san)苯基氯(lv)甲(jia)烷：三(san)(san)乙胺(an)：氯(lv)仿＝1.0:1.2:1.2:10.0(摩爾比)。

向反應瓶中加入化(hua)(hua)合物(wu)(Ⅷ)、對甲(jia)(jia)基芐(xia)氯、甲(jia)(jia)苯、碳(tan)酸(suan)鉀(jia)，回流反應3-4小(xiao)時。其中，化(hua)(hua)合物(wu)(Ⅷ)：對甲(jia)(jia)基芐(xia)氯：碳(tan)酸(suan)鉀(jia)：甲(jia)(jia)苯＝1.0:1.2:1.0:10.0(摩(mo)爾比)，過柱分離得化(hua)(hua)合物(wu)(Ⅸ)。

向反應(ying)瓶中加(jia)(jia)(jia)入化(hua)(hua)合(he)物(wu)(Ⅸ)及80％醋酸水溶(rong)液，加(jia)(jia)(jia)熱回流1小時，加(jia)(jia)(jia)入氫氧化(hua)(hua)鈉(na)溶(rong)液，游離出(chu)堿(jian)性化(hua)(hua)合(he)物(wu)，過柱分離得化(hua)(hua)合(he)物(wu)(Ⅹ)。其中，化(hua)(hua)合(he)物(wu)(Ⅸ)：醋酸(折100％)＝1.0:10.0(摩爾比)。

向反應(ying)瓶中加入化合物(Ⅸ)、乙(yi)醚、三乙(yi)胺，再滴加氯(lv)乙(yi)酰(xian)氯(lv)，室溫(wen)反應(ying)2小時。其(qi)中，化合物(Ⅵ)：乙(yi)醚：三乙(yi)胺：氯(lv)乙(yi)酰(xian)氯(lv)＝1:5:1.2:1(摩爾比)，過(guo)柱(zhu)分離得化合物(Ⅵ)。

實施(shi)例7：激肽釋(shi)放(fang)酶7小分子(zi)抑制(zhi)劑的制(zhi)備

向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅱ)、1-氯丙(bing)烷、甲(jia)苯、碳酸(suan)鉀，回(hui)流反(fan)應(ying)4小(xiao)時(shi)。其(qi)(qi)(qi)中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅱ)：1-氯丙(bing)烷：碳酸(suan)鉀：甲(jia)苯＝1:1.2:1:10(摩爾比(bi))，過(guo)柱分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)。隨(sui)后，向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)、二苯醚(mi)混(hun)合(he)(he)(he)(he)后，升溫至110℃，打(da)開光照，通入(ru)(ru)氯氣(qi)(qi)，控制反(fan)應(ying)溫度180℃，通完氯氣(qi)(qi)后，冷卻(que)至80℃，加(jia)(jia)入(ru)(ru)磷(lin)酸(suan)鋅，再(zai)加(jia)(jia)入(ru)(ru)水(shui)(shui)(shui)和20％(質(zhi)量(liang)分(fen)數)的(de)(de)純(chun)堿溶液(ye)，回(hui)流1小(xiao)時(shi)，過(guo)柱分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)。其(qi)(qi)(qi)中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)：二苯醚(mi)：氯氣(qi)(qi)：磷(lin)酸(suan)鋅：水(shui)(shui)(shui)(不包括(kuo)純(chun)堿溶液(ye)中(zhong)的(de)(de)水(shui)(shui)(shui))：純(chun)堿(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩爾比(bi))，過(guo)柱分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)。向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)，40％(質(zhi)量(liang)分(fen)數)的(de)(de)水(shui)(shui)(shui)合(he)(he)(he)(he)肼溶液(ye)，乙醇，回(hui)流反(fan)應(ying)8小(xiao)時(shi)。其(qi)(qi)(qi)中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)：水(shui)(shui)(shui)合(he)(he)(he)(he)肼(折100％)：乙醇＝1.0:1.5:10(摩爾比(bi))，過(guo)柱分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)。向反(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅵ)，甲(jia)苯，碳酸(suan)鉀，回(hui)流反(fan)應(ying)3小(xiao)時(shi)，化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(Ⅵ)：碳酸(suan)鉀：甲(jia)苯＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩爾比(bi))，過(guo)柱分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(I)。圖2為本發明的(de)(de)實施(shi)例所涉及的(de)(de)激肽釋放酶7小(xiao)分(fen)子抑制劑的(de)(de)核磁圖。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例8

向反(fan)應(ying)(ying)瓶中(zhong)(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅱ)、1-氯(lv)丙烷(wan)、甲苯(ben)、碳(tan)酸(suan)鉀(jia)，回流(liu)反(fan)應(ying)(ying)3小(xiao)時(shi)(shi)。其中(zhong)(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅱ)：1-氯(lv)丙烷(wan)：碳(tan)酸(suan)鉀(jia)：甲苯(ben)＝1:1:1:10(摩(mo)(mo)爾比(bi))，過(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)分離得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)。隨后(hou)，向反(fan)應(ying)(ying)瓶中(zhong)(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)、二(er)(er)苯(ben)醚(mi)混合(he)(he)后(hou)，升溫(wen)(wen)至120℃，打開(kai)光照，通入(ru)氯(lv)氣，控制反(fan)應(ying)(ying)溫(wen)(wen)度(du)170℃，通完氯(lv)氣后(hou)，冷卻至90℃，加(jia)入(ru)磷酸(suan)鋅，再加(jia)入(ru)水(shui)和20％(質量分數(shu))的純堿(jian)溶液(ye)，回流(liu)2小(xiao)時(shi)(shi)，過(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)分離得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)：二(er)(er)苯(ben)醚(mi)：氯(lv)氣：磷酸(suan)鋅：水(shui)(不(bu)包括純堿(jian)溶液(ye)中(zhong)(zhong)的水(shui))：純堿(jian)(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩(mo)(mo)爾比(bi))，過(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)分離得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。向反(fan)應(ying)(ying)瓶中(zhong)(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)，50％(質量分數(shu))水(shui)合(he)(he)肼(jing)溶液(ye)，乙醇(chun)，回流(liu)反(fan)應(ying)(ying)9小(xiao)時(shi)(shi)。其中(zhong)(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)：水(shui)合(he)(he)肼(jing)(折100％)：乙醇(chun)＝1.0:1.5:10(摩(mo)(mo)爾比(bi))，過(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)分離得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)。向反(fan)應(ying)(ying)瓶中(zhong)(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)，甲苯(ben)，碳(tan)酸(suan)鉀(jia)，回流(liu)反(fan)應(ying)(ying)4小(xiao)時(shi)(shi)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)：碳(tan)酸(suan)鉀(jia)：甲苯(ben)＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩(mo)(mo)爾比(bi))，過(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)分離得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例9

向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅱ)、1-氯(lv)丙烷(wan)、甲(jia)苯、碳(tan)酸(suan)鉀，回流反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)4小(xiao)(xiao)時(shi)。其(qi)(qi)中，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅱ)：1-氯(lv)丙烷(wan)：碳(tan)酸(suan)鉀：甲(jia)苯＝1:1.3:1.5:11(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)。隨后(hou)(hou)，向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)、二(er)苯醚混(hun)合(he)(he)(he)(he)(he)后(hou)(hou)，升(sheng)溫至130℃，打(da)開光照，通(tong)入(ru)(ru)氯(lv)氣，控制反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)溫度180℃，通(tong)完(wan)氯(lv)氣后(hou)(hou)，冷卻至100℃，加(jia)入(ru)(ru)磷酸(suan)鋅，再加(jia)入(ru)(ru)水(shui)和(he)20％(質量分(fen)數)的純堿(jian)(jian)溶(rong)液(ye)，回流1小(xiao)(xiao)時(shi)，過(guo)(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。其(qi)(qi)中，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)：二(er)苯醚：氯(lv)氣：磷酸(suan)鋅：水(shui)(不包括純堿(jian)(jian)溶(rong)液(ye)中的水(shui))：純堿(jian)(jian)(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)，60％(質量分(fen)數)水(shui)合(he)(he)(he)(he)(he)肼溶(rong)液(ye)，乙(yi)醇，回流反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)8小(xiao)(xiao)時(shi)。其(qi)(qi)中，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)：水(shui)合(he)(he)(he)(he)(he)肼(折100％)：乙(yi)醇＝1.0:1.5:10(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)。向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)，甲(jia)苯，碳(tan)酸(suan)鉀，回流反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)5小(xiao)(xiao)時(shi)，化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)：碳(tan)酸(suan)鉀：甲(jia)苯＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩(mo)爾比(bi)(bi))，過(guo)(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)分(fen)離(li)得化(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例10

向反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅱ)、1-氯(lv)丙烷、甲苯(ben)(ben)(ben)(ben)、碳(tan)酸鉀(jia)，回流(liu)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)3.5小(xiao)(xiao)時(shi)。其中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅱ)：1-氯(lv)丙烷：碳(tan)酸鉀(jia)：甲苯(ben)(ben)(ben)(ben)＝1:1:1:10(摩(mo)爾(er)比)，過柱(zhu)分(fen)離(li)得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)。隨后(hou)，向反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)、二(er)苯(ben)(ben)(ben)(ben)醚混合(he)(he)后(hou)，升(sheng)溫(wen)至110℃，打開光照，通入(ru)氯(lv)氣(qi)，控制反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)溫(wen)度180℃，通完氯(lv)氣(qi)后(hou)，冷卻(que)至80℃，加(jia)入(ru)磷酸鋅，再加(jia)入(ru)水和20％(質量分(fen)數(shu))的純(chun)堿(jian)溶(rong)液(ye)，回流(liu)1小(xiao)(xiao)時(shi)，過柱(zhu)分(fen)離(li)得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)。其中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅲ)：二(er)苯(ben)(ben)(ben)(ben)醚：氯(lv)氣(qi)：磷酸鋅：水(不包括純(chun)堿(jian)溶(rong)液(ye)中(zhong)的水)：純(chun)堿(jian)(100％)＝1.0:10.0:2.2:0.001:1.4:0.3(摩(mo)爾(er)比)，過柱(zhu)分(fen)離(li)得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)。向反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)，40％(質量分(fen)數(shu))水合(he)(he)肼溶(rong)液(ye)，乙醇，回流(liu)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)8小(xiao)(xiao)時(shi)。其中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅳ)：水合(he)(he)肼(折(zhe)100％)：乙醇＝1.0:1.5:10(摩(mo)爾(er)比)，過柱(zhu)分(fen)離(li)得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)。向反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)瓶(ping)中(zhong)加(jia)入(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅵ)，甲苯(ben)(ben)(ben)(ben)，碳(tan)酸鉀(jia)，回流(liu)反(fan)(fan)應(ying)(ying)(ying)5小(xiao)(xiao)時(shi)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(Ⅵ)：碳(tan)酸鉀(jia)：甲苯(ben)(ben)(ben)(ben)＝0.5:0.9:0.7:9(摩(mo)爾(er)比)，過柱(zhu)分(fen)離(li)得(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實施例11

向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅱ)、1-氯(lv)丙烷、甲苯、碳(tan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)鉀(jia)，回(hui)(hui)(hui)流(liu)反(fan)(fan)應(ying)3小(xiao)時(shi)。其(qi)(qi)中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅱ)：1-氯(lv)丙烷：碳(tan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)鉀(jia)：甲苯＝1:0.9:1:10(摩爾比)，過(guo)(guo)柱分(fen)(fen)(fen)(fen)離得(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)。隨后，向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)、二(er)苯醚(mi)混合(he)(he)后，升溫(wen)(wen)至(zhi)110℃，打開光照，通入(ru)(ru)氯(lv)氣(qi)，控(kong)制(zhi)反(fan)(fan)應(ying)溫(wen)(wen)度160℃，通完氯(lv)氣(qi)后，冷卻至(zhi)80℃，加(jia)入(ru)(ru)磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)鋅(xin)，再(zai)加(jia)入(ru)(ru)水(shui)(shui)和20％(質量(liang)分(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu))的純堿溶液(ye)(ye)，回(hui)(hui)(hui)流(liu)1小(xiao)時(shi)，過(guo)(guo)柱分(fen)(fen)(fen)(fen)離得(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。其(qi)(qi)中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅲ)：二(er)苯醚(mi)：氯(lv)氣(qi)：磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)鋅(xin)：水(shui)(shui)(不包括純堿溶液(ye)(ye)中(zhong)的水(shui)(shui))：純堿(100％)＝0.8:9:1.8:0.002:1.5:0.2(摩爾比)，過(guo)(guo)柱分(fen)(fen)(fen)(fen)離得(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)。向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)，40％(質量(liang)分(fen)(fen)(fen)(fen)數(shu))水(shui)(shui)合(he)(he)肼溶液(ye)(ye)，乙醇(chun)，回(hui)(hui)(hui)流(liu)反(fan)(fan)應(ying)10小(xiao)時(shi)。其(qi)(qi)中(zhong)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅳ)：水(shui)(shui)合(he)(he)肼(折100％)：乙醇(chun)＝1.0:1.5:10(摩爾比)，過(guo)(guo)柱分(fen)(fen)(fen)(fen)離得(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)。向(xiang)反(fan)(fan)應(ying)瓶中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)，甲苯，碳(tan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)鉀(jia)，回(hui)(hui)(hui)流(liu)反(fan)(fan)應(ying)3.5小(xiao)時(shi)，化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅴ)：化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(Ⅵ)：碳(tan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)鉀(jia)：甲苯＝1.0:1.1:1.0:10.0(摩爾比)，過(guo)(guo)柱分(fen)(fen)(fen)(fen)離得(de)(de)(de)化(hua)(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(I)。

¹H NMR[(CD₃)₂SO，500MHz]，δ(ppm)：7.15-8.78(m，9H，Ar-H)，4.81(s，2H，COCH₂N)，0.82(t，3H，NCH₂CH₂CH₃)，2.29(s，3H，Ph-CH₃)，1.15-4.74(m，16H，RCH₂R，1H，C₃CH)。

實(shi)施例12：中(zhong)間體化合(he)物(Ⅵ)的合(he)成

向反應瓶中(zhong)加入化(hua)合(he)(he)物(wu)(Ⅶ)、三苯(ben)基氯(lv)甲(jia)烷、氯(lv)仿、三乙(yi)胺、室(shi)溫下攪拌反應，過柱分(fen)離得化(hua)合(he)(he)物(wu)(Ⅷ)。其中(zhong)，化(hua)合(he)(he)物(wu)(Ⅶ)：三苯(ben)基氯(lv)甲(jia)烷：三乙(yi)胺：氯(lv)仿＝1.0:1.2:1.2:10.0(摩爾比)。

向反應(ying)瓶中(zhong)加入化合(he)物(wu)(Ⅷ)、對甲(jia)(jia)基(ji)芐氯、甲(jia)(jia)苯、碳酸鉀(jia)，回流反應(ying)3-4小(xiao)時。其中(zhong)，化合(he)物(wu)(Ⅷ)：對甲(jia)(jia)基(ji)芐氯：碳酸鉀(jia)：甲(jia)(jia)苯＝1.0:1.2:1.0:10.0(摩爾比)，過柱(zhu)分(fen)離得化合(he)物(wu)(Ⅸ)。

向(xiang)反應瓶中加(jia)入化(hua)(hua)合(he)(he)(he)物(Ⅸ)及80％(質(zhi)量分數(shu))醋酸水溶液，加(jia)熱回(hui)流1小(xiao)時，加(jia)入5-20％(質(zhi)量分數(shu))氫氧化(hua)(hua)鈉(na)溶液游(you)離出化(hua)(hua)合(he)(he)(he)物(X)，過柱分離得化(hua)(hua)合(he)(he)(he)物(Ⅹ)。其(qi)中，化(hua)(hua)合(he)(he)(he)物(Ⅸ)：醋酸(折100％)＝1.0:10.0(摩爾比)。

向反應(ying)瓶中加入化合物(X)、乙(yi)醚、三(san)乙(yi)胺，再滴(di)加氯乙(yi)酰氯，室溫(wen)反應(ying)2小時。其中，化合物(X)：乙(yi)醚：三(san)乙(yi)胺：氯乙(yi)酰氯＝1:5:1.2:1(摩(mo)爾比)，過(guo)柱(zhu)分離得化合物(Ⅵ)。

實施例13：激肽釋放酶7小分(fen)子(zi)抑制劑對(dui)KLK7的抑制效果分(fen)析

KLK7分(fen)(fen)別與200μM和(he)50μM的激肽釋放酶7小分(fen)(fen)子抑(yi)制劑(ji)作用(yong)15分(fen)(fen)鐘，然后加入KLK7的熒光底物MCa-R-P-K-P-V-E-Nval-W-R-K(Dnp)-NH2，并作用(yong)15分(fen)(fen)鐘，測(ce)酶活性，計算抑(yi)制率，抑(yi)制率＝(1-a/b)×100％，其中，a為(wei)待(dai)測(ce)樣品的酶活，b為(wei)陰性對照的酶活。

1.配制激肽釋(shi)放酶7小分子抑(yi)制劑溶液

1)將上述(shu)實(shi)施(shi)例1-5和實(shi)施(shi)例7-11合成的(de)激肽(tai)釋(shi)放酶7小分(fen)子抑制劑(ji)按順序(xu)放好并編號(hao)；

2)對抑(yi)制劑粉末采用高(gao)精度天平(ping)稱取0.5-1mg；

3)根據(ju)各個分子(zi)稱(cheng)取的(de)質量及其(qi)分子(zi)量計算需要(yao)加(jia)入溶劑的(de)體積，使最終濃度(du)為5mM；

4)采用(yong)高純度DMSO(>99％)將各個抑制劑分子溶解使最終濃(nong)度為(wei)5mM，放入-20℃冰箱儲(chu)存。

2.激肽釋放酶7小(xiao)分子抑制劑(ji)對KLK7的抑制效果分析

實驗總(zong)體積(ji)100μL，其中(zhong)(zhong)KLK7最終濃度5nM，底物(wu)最終濃度為30μM，其中(zhong)(zhong)DMSO最終濃度不(bu)超過3％(v/v)，熒光底物(wu)的濃度為4.5mM。

抑(yi)制(zhi)劑、酶(mei)和底物作用的(de)順序(xu)為：

1)在(zai)KLK7活性buffer中讓(rang)酶和抑制劑分子在(zai)37℃作(zuo)用15分鐘。

2)15min后加入適量(liang)底物，隨后在37℃下測KLK7的(de)活性15分鐘，與不(bu)含抑制(zhi)劑分子的(de)陰性樣本(ben)對(dui)照，計算抑制(zhi)率＝(1-a/b)×100％，a為(wei)待測樣品的(de)酶活，b為(wei)陰性對(dui)照的(de)酶活。

其中，KLK7激活buffer是經0.6057g Tris，0.11098g CaCl₂，0.8775g NaCl，0.05g Brij-35，10mL ddH₂0溶解，再定容至100mL，調節pH 7.5配(pei)制(zhi)而(er)成。

所述KLK7活性buffer是經0.6057g Tris，0.585g NaCl，10mL ddH₂0溶解(jie)，再定容至100mL，調節pH 8.5配制而成。

3.抑制劑濃(nong)度(du)為200μM和50μM時(shi)的抑制率：

1)200μM濃度下實施(shi)例(li)1-5和實施(shi)例(li)7-11制備的激肽釋(shi)放酶7小分子(zi)抑制劑對KLK7抑制效率均為100％；

2)將化(hua)合(he)物(I)的(de)反應濃(nong)度降低至50μM，檢(jian)測在50μM濃(nong)度時，實施(shi)例1-5和(he)實施(shi)例7-11制(zhi)(zhi)備(bei)的(de)激(ji)肽(tai)釋(shi)放酶(mei)7小分子(zi)抑(yi)制(zhi)(zhi)劑對KLK7的(de)抑(yi)制(zhi)(zhi)效率分別為53.68％。

實施例14：激肽釋放酶7小分子抑制劑的IC₅₀的測定

將實施例7合成的激肽釋放酶7小分子抑制劑設置成6.5、12.5、25、50、100和200μ/mol等6個濃度梯度，分別與KLK7作用15分鐘，然后加入KLK7的熒光底物MCa-R-P-K-P-V-E-Nval-W-R-K(Dnp)-NH₂，并作用15分鐘，測酶活性。如圖1所示，得到該化合物的IC₅₀為36.078。

化合物(I)檢(jian)測數據

可見，本發明提(ti)供的激肽釋放(fang)酶7小分(fen)子抑制(zhi)劑(ji)及(ji)其制(zhi)備方法與用(yong)途，該抑制(zhi)劑(ji)為小分(fen)子抑制(zhi)劑(ji)，有效避免了傳統KLK7的天然抑制(zhi)劑(ji)作為治療(liao)AD的外用(yong)藥時(shi)由于(yu)分(fen)子大(da)而不能透過皮(pi)膚角(jiao)質層、吸收慢降解(jie)快等問題，該小分(fen)子抑制(zhi)劑(ji)合成(cheng)方法簡單，操作方便，吸收快，有效抑制(zhi)KLK7，具有應用(yong)于(yu)臨床特應性皮(pi)炎的治療(liao)藥物(wu)的制(zhi)備前景(jing)。

所(suo)屬領域的(de)普通技術(shu)人員應當理解：以(yi)(yi)上任何實施例(li)的(de)討(tao)論(lun)僅為(wei)示例(li)性的(de)，并非旨在暗示本公(gong)開的(de)范圍(wei)(包括(kuo)權利要(yao)求(qiu))被限于這些例(li)子；在本發(fa)明的(de)思路下，以(yi)(yi)上實施例(li)或者不同(tong)實施例(li)中(zhong)的(de)技術(shu)特征之(zhi)間也(ye)可(ke)以(yi)(yi)進(jin)行組合(he)，步驟可(ke)以(yi)(yi)以(yi)(yi)任意順序實現(xian)，并存在如上所(suo)述的(de)本發(fa)明的(de)不同(tong)方面(mian)的(de)許多其它變化，為(wei)了簡明它們沒有在細節(jie)中(zhong)提供。因此，凡在本發(fa)明的(de)精神和原則之(zhi)內，所(suo)做的(de)任何省略(lve)、修改、等同(tong)替換、改進(jin)等，均(jun)應包含(han)在本發(fa)明的(de)保護(hu)范圍(wei)之(zhi)內。