本發明涉及生物技(ji)術(shu)領(ling)域，具(ju)體指N15多肽在(zai)制備金(jin)黃色葡萄球菌抑制劑中的(de)用途。

背景技術：

金(jin)(jin)黃色(se)葡(pu)萄球(qiu)菌致(zhi)病(bing)力(li)最強，主要產(chan)生(sheng)溶血素、殺(sha)白(bai)細胞素和(he)(he)血漿凝固(gu)酶等，造成(cheng)許多種感(gan)染，如癤、癰、膿(nong)腫和(he)(he)傷口感(gan)染等。金(jin)(jin)黃色(se)葡(pu)萄球(qiu)菌感(gan)染的特點(dian)是局限(xian)性組織壞死，膿(nong)液(ye)稠厚(hou)、黃色(se)、不臭(chou)。也能(neng)引起全(quan)身性感(gan)染，影響人體健康,威(wei)脅人類(lei)生(sheng)命安全(quan)。為了抑(yi)制(zhi)和(he)(he)消(xiao)滅病(bing)原(yuan)真菌,人們一直致(zhi)力(li)于尋(xun)找有效的抗病(bing)原(yuan)細菌藥物。

技術實現要素：

本(ben)發明的目的在(zai)于提供一種多(duo)肽(tai)，該(gai)多(duo)肽(tai)能夠抑制(zhi)金黃色葡(pu)萄球菌(jun)(jun)的生長，具有在(zai)制(zhi)備病原細(xi)菌(jun)(jun)抑制(zhi)劑中的用途，它(ta)已被現有技術公開，名為N15多(duo)肽(tai)。

N15多肽(tai)是一個具(ju)有15個氨(an)(an)(an)基酸(suan)(suan)(suan)的(de)短肽(tai)，其序列為甲(jia)硫氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-脯氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-酪氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-絲氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-蘇(su)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-谷氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-亮(liang)(liang)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-異亮(liang)(liang)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-苯丙氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-酪氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-異亮(liang)(liang)氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-谷氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-甲(jia)硫氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-天門冬氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)-脯氨(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)，它(ta)具(ju)有多種(zhong)生物學(xue)功(gong)能，包括(kuo)調(diao)節(jie)NF-κB轉(zhuan)錄因子結(jie)合(he)目的(de)基因的(de)能力，影(ying)響NF-κB目的(de)基因產物蛋(dan)白質(zhi)的(de)轉(zhuan)錄和表(biao)(biao)達(da)；阻(zu)(zu)斷PCNA結(jie)合(he)DNA聚合(he)酶，從而(er)阻(zu)(zu)止細(xi)胞(bao)(bao)DNA合(he)成抑制(zhi)(zhi)細(xi)胞(bao)(bao)增殖；抑制(zhi)(zhi)上皮細(xi)胞(bao)(bao)增生，調(diao)節(jie)表(biao)(biao)皮增生及分化，使皮膚角化過程正常化等。

發明人發現在研究中發現N15多肽能夠對各種病原細菌的生長產生抑制作用。

前期研究表(biao)明，在(zai)金黃色葡(pu)(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)中加入(ru)N15會(hui)起到抑制金黃色葡(pu)(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)增殖的(de)(de)(de)效果(guo)(guo)。通(tong)過(guo)檢測金黃色葡(pu)(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)內(nei)DNA含量發現，N15會(hui)引起金黃色葡(pu)(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)內(nei)的(de)(de)(de)DNA含量的(de)(de)(de)減少，因此N15抑制金黃色葡(pu)(pu)萄球(qiu)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)增殖可(ke)(ke)能(neng)是(shi)通(tong)過(guo)抑制基因組DNA復制而(er)實現的(de)(de)(de)。此外(wai)，實驗(yan)結(jie)果(guo)(guo)還表(biao)明N15可(ke)(ke)以(yi)抑制沙(sha)門(men)氏菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)生長。

本發明還提供了(le)一(yi)種N15多肽制(zhi)備的(de)抗真菌藥物，為N15多肽的(de)水溶液，濃度大(da)于等(deng)于500μg/mL。

本發明的有益效果(guo)：N15多(duo)肽(tai)(tai)是一種(zhong)結構(gou)清晰，易于工(gong)業化生產的多(duo)肽(tai)(tai)，它可(ke)以抑制多(duo)種(zhong)病原(yuan)細菌的增(zeng)殖，效果(guo)好且(qie)無(wu)毒副作(zuo)用(yong)。

附圖說明

圖1為流(liu)式(shi)細胞儀檢測(ce)N15對金黃色葡萄(tao)球(qiu)菌DNA含(han)量的(de)影響。

具體實施方式

下(xia)面結合附圖和(he)具體(ti)實驗例對本(ben)發明作進一步的論證說明，以(yi)下(xia)實驗例僅是對本(ben)發明的解(jie)釋而(er)本(ben)發明并不局(ju)限于以(yi)下(xia)實驗例。

實驗例1：N15對金黃色葡萄(tao)球(qiu)菌的生長具有抑制作用

實驗方法：

取(qu)金(jin)黃色葡(pu)萄球菌(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)株接種到(dao)牛肉膏蛋白胨(dong)培(pei)(pei)養基斜面上，37℃下活(huo)化(hua)培(pei)(pei)養，用接種環從斜面上挑菌(jun)(jun)(jun)到(dao)無(wu)菌(jun)(jun)(jun)水(shui)中(zhong)制成菌(jun)(jun)(jun)懸液，接種培(pei)(pei)養無(wu)菌(jun)(jun)(jun)操作(zuo)下，用取(qu)液器吸取(qu)100μL體積(ji)的(de)菌(jun)(jun)(jun)液到(dao)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)小(xiao)離心管(guan)中(zhong)，充分混勻后(hou)，迅速注入到(dao)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)平皿中(zhong)，在平板中(zhong)加入N15多(duo)肽(tai)，以同體積(ji)的(de)無(wu)菌(jun)(jun)(jun)水(shui)的(de)混合(he)液注入作(zuo)空白，置(zhi)于37℃恒(heng)溫培(pei)(pei)養箱中(zhong)培(pei)(pei)養48小(xiao)時，觀察(cha)菌(jun)(jun)(jun)落(luo)生長情況，并對菌(jun)(jun)(jun)落(luo)計(ji)數(shu)，結(jie)果(guo)見表1。

表1.N15對金黃色葡萄(tao)球菌生長抑制結果對照表

結果(guo)顯(xian)(xian)示，和對照相比，加入N15多肽的平板上金(jin)(jin)黃(huang)色葡萄球(qiu)菌的菌落(luo)數明顯(xian)(xian)減少，N15對金(jin)(jin)黃(huang)色葡萄球(qiu)菌的生長具有抑制(zhi)效應。

實驗例2：N15對金黃色葡(pu)萄球菌的(de)DNA復制(zhi)(zhi)具有抑制(zhi)(zhi)效應

實驗方法：

制備YEPD液體(ti)(ti)培養(yang)基(ji)，培養(yang)金(jin)黃(huang)(huang)色(se)葡萄(tao)球(qiu)菌(jun)，并加(jia)入(ru)(ru)N15到YEPD液體(ti)(ti)培養(yang)基(ji)中(zhong)，同時設置不加(jia)N15多(duo)肽的金(jin)黃(huang)(huang)色(se)葡萄(tao)球(qiu)菌(jun)作為對照(control)，加(jia)入(ru)(ru)N15多(duo)肽(終濃度500μg/mL)，在處理(li)2小時分別取樣2mL金(jin)黃(huang)(huang)色(se)葡萄(tao)球(qiu)菌(jun)菌(jun)體(ti)(ti)，加(jia)入(ru)(ru)Sytox-Green染料對金(jin)黃(huang)(huang)色(se)葡萄(tao)球(qiu)菌(jun)細胞DNA染色(se)后，使用流式細胞儀進(jin)行金(jin)黃(huang)(huang)色(se)葡萄(tao)球(qiu)菌(jun)的DNA相對含量進(jin)行測定，結(jie)果見圖(tu)1。

如實驗結果所示(shi)，橫(heng)坐標表(biao)示(shi)單(dan)個金黃色(se)(se)葡(pu)萄球菌細(xi)(xi)(xi)胞內DNA的含(han)(han)量(liang)，縱坐標表(biao)示(shi)酵母細(xi)(xi)(xi)胞數量(liang)。在N15處(chu)理2小時(shi)內，N15處(chu)理細(xi)(xi)(xi)胞內的DNA含(han)(han)量(liang)和對照細(xi)(xi)(xi)胞相(xiang)比(bi)沒有顯(xian)著性差異，而隨著時(shi)間的增(zeng)加(jia)，在N15處(chu)理15小時(shi)以(yi)后，N15處(chu)理細(xi)(xi)(xi)胞內的DNA含(han)(han)量(liang)和對照細(xi)(xi)(xi)胞相(xiang)比(bi)明顯(xian)減少。該結果表(biao)明N15會引起(qi)金黃色(se)(se)葡(pu)萄球菌細(xi)(xi)(xi)胞DNA含(han)(han)量(liang)的減少。