本(ben)發明涉及(ji)含唑雜環的嘧啶類化合物，組合物及(ji)其用途，屬于醫藥(yao)技術領域。

背景技術：

蛋(dan)白(bai)酪(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激酶(mei)(protein tyrosine kinase,PTKs)通過(guo)控制細胞(bao)的信號傳導通路調(diao)節細胞(bao)的生長、分化(hua)(hua)、凋亡等一(yi)系列生理生化(hua)(hua)過(guo)程。受體型酪(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激酶(mei)是一(yi)類橫跨細胞(bao)膜(mo)相對(dui)較(jiao)大的激酶(mei)，其(qi)具有配體結(jie)合(he)的胞(bao)外結(jie)構域(yu)(yu)、跨膜(mo)結(jie)構域(yu)(yu)和起激酶(mei)作用—在磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)(hua)特定(ding)酪(lao)氨(an)酸(suan)(suan)殘(can)基并且由此影(ying)響細胞(bao)增殖(zhi)的胞(bao)內結(jie)構域(yu)(yu)。在一(yi)般(ban)人(ren)類癌(ai)癥中(如肺癌(ai)、乳腺癌(ai)、胃癌(ai)、卵(luan)巢癌(ai)、淋巴瘤(liu))已發(fa)現所述激酶(mei)的異常表達。蛋(dan)白(bai)酪(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激酶(mei)已成為抗腫瘤(liu)藥物研(yan)究開發(fa)的重要(yao)靶點之一(yi)。

表皮生(sheng)長因(yin)子受體(ti)酪氨(an)酸(suan)(suan)激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase，EGFR)是最(zui)早發現(xian)的(de)蛋白(bai)酪氨(an)酸(suan)(suan)激酶之一，EGFR的(de)胞(bao)(bao)內區(qu)有(you)ATP結合位點(dian)，EGFR抑制劑(ji)可以競爭性(xing)(xing)(xing)與ATP結合位點(dian)相結合，從(cong)而(er)抑制EGFR的(de)磷酸(suan)(suan)化過(guo)程，阻斷(duan)下游信號(hao)的(de)傳導，進而(er)抑制腫(zhong)瘤細(xi)胞(bao)(bao)的(de)生(sheng)長、分化和(he)轉(zhuan)移(Yun,et al.Cancer Cell 2007,11,217-227)。EGFR作為抗腫(zhong)瘤靶點(dian)的(de)生(sheng)化過(guo)程已(yi)被闡明，其(qi)晶體(ti)結構和(he)活性(xing)(xing)(xing)部(bu)位也已(yi)比較(jiao)清楚，以此為靶點(dian)的(de)藥(yao)(yao)物吉非替(ti)尼(gefitinib)、埃羅替(ti)尼(erlotinib)、阿法替(ti)尼(afatinib)等(deng)已(yi)經應用于臨床，且隨著EGFR結構和(he)活性(xing)(xing)(xing)關系的(de)深入(ru)研究，許多(duo)效果更(geng)(geng)佳優秀(xiu)的(de)EGFR抑制劑(ji)(EP0566226、WO9961428、WO0051587、WO0375947、WO0132651、WO9633980、WO9630347、US7709479、US6716847、US6593333、US6251912、CN201080060451.4、CN201110191525.4等(deng))已(yi)被發現(xian)。然而(er)這些藥(yao)(yao)物不(bu)可避免地存(cun)在著抗耐(nai)藥(yao)(yao)性(xing)(xing)(xing)差的(de)問題。研究表明：氨(an)基酸(suan)(suan)The790到Met790的(de)突變(T790M)是此類藥(yao)(yao)物產生(sheng)耐(nai)藥(yao)(yao)性(xing)(xing)(xing)的(de)主要誘(you)因(yin)。有(you)臨床案例數(shu)據顯(xian)示，大約有(you)60％的(de)患者獲得性(xing)(xing)(xing)耐(nai)藥(yao)(yao)都源(yuan)于T790M位點(dian)的(de)突變所致。因(yin)此開發抗耐(nai)藥(yao)(yao)性(xing)(xing)(xing)更(geng)(geng)強、毒性(xing)(xing)(xing)更(geng)(geng)小、活性(xing)(xing)(xing)更(geng)(geng)強的(de)新型(xing)EGFR抑制劑(ji)具有(you)非常重要現(xian)實價值。

Osimertinib(AZD9291)是口服不可逆的，T790M突變選擇性EGFR抑制劑，在LoVo細胞中對Exon 19缺失的EGFRL858R/T790M和EGFR^WT的IC₅₀分別為11.44和493.8nM，于2015年12被美國FDA批準上市(WO2013014448)用于治療EGFR^T790M耐藥型肺癌。Rociletinib(CO-1686,AVL-301)是另一種不可逆的，突變選擇性EGFR^T790M抑制劑，在無細胞試驗中作用于EGFR^T790M和EGFR^WT的IC₅₀分別為21.5nM和303.3nM，目前(qian)處(chu)于(yu)臨床Ⅲ期研究(jiu)研究(jiu)(WO 2012061299)。其它如HM61713，EGF816，PF-06747775，Avitinib，ASP8273也是(shi)進(jin)入臨床研究(jiu)的新(xin)型(xing)EGFR抑制劑(Ma et al.,J.Med.Chem.,2016，DOI:10.1021/acs.jmedchem.5b00840.)，涉及的專利(li)如：US20120157426、US8563568B2、CN102740847、CN102083800。

鑒于治療癌(ai)癥的(de)(de)(de)迫切需(xu)要，本(ben)領域有必要開發新的(de)(de)(de)效果(guo)更(geng)佳良好的(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)。

技術實現要素：

本發明的(de)目的(de)之(zhi)一在于提(ti)供一種含唑(zuo)雜環的(de)嘧啶類化合(he)物(wu)或其藥學(xue)上可接受的(de)鹽，該類化合(he)物(wu)具有良好(hao)的(de)抗腫瘤活性。

本發明的(de)另一目的(de)在于提供含所述(shu)含唑雜(za)環的(de)嘧啶類(lei)化合(he)物或其藥學上可接(jie)受的(de)鹽(yan)的(de)藥物組合(he)物。

本發明的再一目(mu)的在于提供所(suo)述含唑雜環的嘧啶類化合(he)物(wu)或(huo)(huo)其藥學上可接受的鹽，或(huo)(huo)所(suo)述組合(he)物(wu)的用途。

為此(ci)，一方(fang)面，本發明提(ti)供(gong)一種通(tong)式(shi)(Ⅰ)所示的化合物或(huo)其藥學(xue)上可接(jie)受的鹽(yan)，所述通(tong)式(shi)(Ⅰ)所示的化合物具有如下結構：

其中，

R¹選(xuan)自(zi)選(xuan)氯、氫、氟(fu)(fu)、三氟(fu)(fu)甲(jia)基或硝基；

R²選自氫、氯(lv)、氟(fu)、甲(jia)基(ji)或甲(jia)氧基(ji)；

Z選自-OCH₂CH₂-、-CH₂-、-NHC(＝O)CH₂-、直接的單鍵、-OCH₂CH₂CH₂-，當Z兩(liang)端含有雜原(yuan)子O或N時(shi)，該(gai)雜原(yuan)子與苯環相連；

X選自CH或N；

Y選自CH或N。

作為(wei)本(ben)發明(ming)的一種具(ju)體實施(shi)方式，本(ben)發明(ming)所述通(tong)式(Ⅰ)所示(shi)的化合物具(ju)有I-1～I-39所示(shi)的結構(gou)：

如上所示結構化合物為含唑雜環的嘧啶類化合物，本發明抗腫瘤活性篩選顯示，大部分此類化合物具有較強的抑制非小細胞肺癌(NSCLC)細胞增殖能力，部分化合物顯示出比Rociletinib更加優良的抗EGFR^T790M活性。作為一類(lei)結(jie)構新(xin)穎的(de)分子，本發明中的(de)化(hua)合物具有開(kai)發成新(xin)型(xing)高效EGFR抑制劑的(de)潛力，對治療相關的(de)腫瘤疾病尤其是非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺癌、小(xiao)細胞(bao)肺癌有較大的(de)應用價值。

前述I-1～I-39所示的結構分別具有如下名稱：

(I-1)N-[3-[[5-氯(lv)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)(an)；

(I-2)N-[3-[[5-氯-2-[[4-[2-(1H-三唑基(ji))乙(yi)氧(yang)基(ji)]苯基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-3)N-[3-[[5-氟-2-[[4-[2-(1H-咪(mi)唑基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-4)N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲氧基(ji)(ji)-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji)(ji))苯(ben)基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧(mi)啶(ding)基(ji)(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-5)N-[3-[[5-氯-2-[[4-[(1H-咪唑(zuo)基)乙氧(yang)基]苯基]胺]-4-嘧啶(ding)基]胺]苯基]-2-丙烯酰(xian)胺；

(I-6)N-[3-[[5-氟-2-[[4-[(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯(ben)基(ji)]-2-丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺；

(I-7)N-[3-[[5-硝(xiao)基(ji)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙酰氨基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-8)N-[3-[[5-硝基-2-[[4-[(1H-咪唑(zuo)基)]苯基]胺]-4-嘧(mi)啶(ding)基]胺]苯基]-2-丙烯酰胺；

(I-9)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)-2-[[4-[3-(1H-咪唑基(ji)(ji))丙氧(yang)基(ji)(ji)]苯(ben)基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-10)N-[3-[[5-硝基-2-[[4-[3-(1H-四氮唑基)丙氧基]苯基]胺(an)]-4-嘧啶基]胺(an)]苯基]-2-丙烯酰(xian)胺(an)；

(I-11)N-[3-[[5-氯(lv)-2-[[2-甲基(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧(mi)啶基(ji)(ji)]胺(an)(an)]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰(xian)胺(an)(an)；

(I-12)N-[3-[[5-氯(lv)-2-[[3-氯(lv)-4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji)(ji)(ji))乙(yi)氧基(ji)(ji)(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)(ji)(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺；

(I-13)N-[3-[[5-氯-2-[[3-甲氧基(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-14)N-[3-[[5-氟-2-[[2-甲(jia)基(ji)(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪(mi)唑基(ji)(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧(mi)啶基(ji)(ji)(ji)]胺(an)]苯基(ji)(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-15)N-[3-[[5-氟-2-[[3-氯(lv)-4-[2-(1H-咪(mi)唑基(ji)(ji))乙(yi)氧(yang)基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-16)N-[3-[[5-氟(fu)-2-[[3-甲氧基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙(yi)氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-17)N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲氧(yang)基(ji)-4-[2-(1H-咪(mi)唑基(ji))乙(yi)氧(yang)基(ji)]苯(ben)(ben)基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯(ben)(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-18)N-[3-[[5-氟-2-[[2-甲(jia)氧(yang)基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧(yang)基(ji)]苯基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯基(ji)]-2-丙(bing)烯酰(xian)胺(an)；

(I-19)N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲基(ji)(ji)-4-(1H-咪(mi)唑-1-亞甲基(ji)(ji))苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶(ding)基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-20)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氯-4-(1H-咪唑-1-亞甲(jia)基)苯(ben)基]胺(an)(an)]-4-嘧啶基]胺(an)(an)]苯(ben)基]-2-丙烯酰胺(an)(an)；

(I-21)N-[3-[[5-氯-2-[[3-甲氧(yang)基(ji)(ji)-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji)(ji))苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-22)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[2-甲(jia)基(ji)-4-(1H-咪唑(zuo)-1-亞甲(jia)基(ji))苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-23)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[3-氯-4-(1H-咪(mi)唑(zuo)-1-亞甲基(ji))苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-24)N-[3-[[5-硝基-2-[[3-甲氧基-4-(1H-咪唑(zuo)-1-亞甲基)苯(ben)基]胺(an)]-4-嘧啶基]胺(an)]苯(ben)基]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-25)N-[3-[[5-硝(xiao)基(ji)-2-[[2-甲氧(yang)基(ji)-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji))苯基(ji)]胺]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-26)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)(ji)-2-[[2-甲基(ji)(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪(mi)唑基(ji)(ji)(ji))乙(yi)氧(yang)基(ji)(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺；

(I-27)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)-2-[[3-氯-4-[2-(1H-咪(mi)唑(zuo)基(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)]苯(ben)基(ji)(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺(an)(an)]苯(ben)基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)(an)；

(I-28)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[2-甲氧基(ji)-4-[2-(1H-咪唑(zuo)基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺(an)]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

(I-29)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)-2-[[3-甲氧基(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)]苯(ben)基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧啶(ding)基(ji)(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)(ji)]-2-丙烯酰(xian)胺(an)；

(I-30)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[2-甲基(ji)-4-[3-(1H-咪唑(zuo)基(ji))丙氧(yang)基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-31)N-[3-[[5-硝(xiao)基(ji)-2-[[3-氯-4-[3-(1H-咪唑基(ji))丙(bing)氧(yang)基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙(bing)烯酰(xian)胺；

(I-32)N-[3-[[5-硝基-2-[[3-甲氧基-4-[3-(1H-咪(mi)唑基)丙氧基]苯(ben)基]胺(an)]-4-嘧(mi)啶(ding)基]胺(an)]苯(ben)基]-2-丙烯(xi)酰(xian)胺(an)；

(I-33)N-[3-[[5-三(san)氟甲(jia)基(ji)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙(yi)氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

(I-34)N-[3-[[2-[[4-[2-(1H-咪唑基)乙氧(yang)基]苯基]胺(an)]-4-嘧啶基]胺(an)]苯基]-2-丙烯酰(xian)胺(an)；

(I-35)N-[3-[[5-三(san)氟甲基(ji)-2-[[4-[(1H-咪唑(zuo)基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯(xi)酰(xian)胺(an)；

(I-36)N-[3-[[2-[[4-[(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)(ben)基(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)(an)]苯(ben)(ben)基(ji)]-2-丙烯酰(xian)胺(an)(an)；

(I-37)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氟-4-(1H-咪唑-1-亞甲基)苯基]胺]-4-嘧(mi)啶基]胺]苯基]-2-丙烯酰胺；

(I-38)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氯-4-[2-(1H-咪唑基)乙氧基]苯基]胺]-4-嘧啶基]胺]苯基]-2-丙(bing)烯酰(xian)胺；

(I-39)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氟-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧(yang)基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

另一(yi)方面(mian)，本發(fa)明(ming)(ming)提供一(yi)種藥物(wu)組合(he)物(wu)，其含有有效劑量的(de)本發(fa)明(ming)(ming)所(suo)述通式(shi)(Ⅰ)所(suo)示(shi)的(de)化合(he)物(wu)或其藥學(xue)上可接(jie)受(shou)的(de)鹽，及藥用載體。

本(ben)(ben)發明所(suo)(suo)述(shu)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)由于它們在藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)中(zhong)(zhong)的(de)可(ke)能(neng)用(yong)(yong)(yong)途，式(Ⅰ)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)優選藥(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)可(ke)接受的(de)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)。本(ben)(ben)發明的(de)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)(wu)(wu)為(wei)堿(jian)(jian)(jian)，其中(zhong)(zhong)所(suo)(suo)需鹽(yan)(yan)(yan)(yan)形式可(ke)以通過本(ben)(ben)領域已知(zhi)的(de)合(he)(he)適方法(fa)制備，包括用(yong)(yong)(yong)無(wu)機(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)處理游離堿(jian)(jian)(jian)，所(suo)(suo)述(shu)無(wu)機(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)例(li)(li)(li)(li)如(ru)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、氫(qing)溴酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、硫(liu)(liu)(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、硝(xiao)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)等(deng)；或(huo)用(yong)(yong)(yong)有機(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)處理游離堿(jian)(jian)(jian)、所(suo)(suo)述(shu)有機(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)例(li)(li)(li)(li)如(ru)乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、三氟乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、馬來酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、琥珀酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、扁桃酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、富馬酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、丙(bing)(bing)二(er)(er)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、丙(bing)(bing)酮酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、草酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、羥(qian)基(ji)(ji)乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、水楊酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、吡喃糖苷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(pyranosidy1acid)，例(li)(li)(li)(li)如(ru)葡糖醛(quan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)半乳糖醛(quan)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，α-羥(qian)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，例(li)(li)(li)(li)如(ru)檸檬(meng)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)酒石(shi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，氨基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，例(li)(li)(li)(li)如(ru)天冬(dong)氨酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)谷氨酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，芳香酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，例(li)(li)(li)(li)如(ru)苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)肉(rou)桂(gui)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，例(li)(li)(li)(li)如(ru)p-甲(jia)(jia)(jia)苯(ben)(ben)(ben)磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甲(jia)(jia)(jia)磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、乙(yi)(yi)磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)等(deng)。藥(yao)學(xue)上(shang)可(ke)接受的(de)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)的(de)實(shi)施例(li)(li)(li)(li)包括硫(liu)(liu)(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、焦硫(liu)(liu)(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、硫(liu)(liu)(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)氫(qing)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、亞硫(liu)(liu)(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、亞硫(liu)(liu)(liu)(liu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)氫(qing)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、磷酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、氯(lv)化(hua)物(wu)(wu)(wu)(wu)、溴化(hua)物(wu)(wu)(wu)(wu)、碘化(hua)物(wu)(wu)(wu)(wu)、乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、丙(bing)(bing)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、癸酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、辛酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、丙(bing)(bing)烯酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、異丁酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、己酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、庚酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、丙(bing)(bing)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)(propiolates)、草酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、丙(bing)(bing)二(er)(er)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、氯(lv)苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、甲(jia)(jia)(jia)基(ji)(ji)苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、二(er)(er)硝(xiao)基(ji)(ji)苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、羥(qian)基(ji)(ji)苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、甲(jia)(jia)(jia)氧基(ji)(ji)苯(ben)(ben)(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、鄰苯(ben)(ben)(ben)二(er)(er)甲(jia)(jia)(jia)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、苯(ben)(ben)(ben)基(ji)(ji)乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、苯(ben)(ben)(ben)基(ji)(ji)丙(bing)(bing)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、苯(ben)(ben)(ben)基(ji)(ji)丁酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)(phenylbutrates)、檸檬(meng)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、乳酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、γ-羥(qian)基(ji)(ji)丁酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、羥(qian)基(ji)(ji)乙(yi)(yi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、酒石(shi)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、苦杏仁(ren)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)和磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、例(li)(li)(li)(li)如(ru)二(er)(er)甲(jia)(jia)(jia)苯(ben)(ben)(ben)磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、甲(jia)(jia)(jia)磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、丙(bing)(bing)磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)、萘-1-磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)和萘-2-磺(huang)(huang)(huang)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)(yan)。

本發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)藥物(wu)(wu)組合(he)(he)物(wu)(wu)通常含(han)(han)有一種本發(fa)明(ming)化合(he)(he)物(wu)(wu)。然而，在一些實施方案中(zhong)，本發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)藥物(wu)(wu)組合(he)(he)物(wu)(wu)含(han)(han)有超過一種本發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)化合(he)(he)物(wu)(wu)。另外，本發(fa)明(ming)的(de)(de)(de)藥物(wu)(wu)組合(he)(he)物(wu)(wu)還可(ke)任選包括一種或(huo)多種其它藥學活性(xing)化合(he)(he)物(wu)(wu)。

本發明還(huan)提供所(suo)述含唑(zuo)雜環的(de)嘧啶(ding)類化合物或(huo)其藥(yao)學上可接受(shou)的(de)載體(ti)，所(suo)述藥(yao)物組合物通過抑(yi)制(zhi)EGFR表皮(pi)因子受(shou)體(ti)酪氨酸激酶進而抑(yi)制(zhi)腫(zhong)瘤增殖的(de)用(yong)途。具體(ti)地(di)，該(gai)用(yong)途主要(yao)為制(zhi)備用(yong)于治療(liao)非小細胞(bao)肺(fei)(fei)癌、小細胞(bao)肺(fei)(fei)癌的(de)藥(yao)物中的(de)用(yong)途。

本發明(ming)提供所(suo)(suo)示的化合(he)物(wu)(wu)或(huo)其藥(yao)學上(shang)可接受(shou)的鹽，或(huo)本發明(ming)所(suo)(suo)述的藥(yao)物(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)在制備EGFR表皮(pi)因子受(shou)體蛋白酪氨(an)酸激酶抑制劑(ji)中(zhong)的應用。

本發明(ming)(ming)提供所述通(tong)式(Ⅰ)所示(shi)的(de)化合物或其藥學(xue)上可接(jie)受的(de)鹽或本發明(ming)(ming)所述的(de)藥物組合物在制(zhi)備治(zhi)療腫(zhong)瘤的(de)藥物中的(de)用(yong)途(tu)。優選地(di)，所述腫(zhong)瘤選自非(fei)小細胞(bao)肺癌或小細胞(bao)肺癌，進(jin)一步優選非(fei)小細胞(bao)肺癌。更優選地(di)，所述用(yong)途(tu)主要通(tong)過抑制(zhi)EGFR表皮因子(zi)受體蛋(dan)白酪氨酸激酶(mei)實現的(de)。

附圖說明

圖1為化合物I-5在50nmol/L濃度下引起H1975細(xi)胞凋亡的結果。

圖2為空白條件下(xia)引(yin)起(qi)H1975細胞凋亡(wang)的結果。.

圖3為(wei)化合物I-5在(zai)500nmol/L濃度(du)下引起H1975細胞凋亡的結果(guo)。

圖4為化合物I-5在200nmol/L濃(nong)度下(xia)引起H1975細胞凋亡的結果。

圖5為(wei)空白條(tiao)件及(ji)化合物I-5在5～15μM/L下(xia)引起H1975細胞凋亡的結(jie)果。

具體實施方式

以下結(jie)合具體實(shi)施(shi)例進一(yi)步描(miao)述解釋本發明，但這些實(shi)施(shi)例并非意味著(zhu)限制本發明的范(fan)圍。

本發明(ming)實施例中未注明(ming)具(ju)體(ti)條件的(de)實驗方法，通常(chang)(chang)按照常(chang)(chang)規(gui)條件，或按照原料(liao)或商品制造廠商所建議(yi)的(de)條件。未注明(ming)具(ju)體(ti)來源的(de)試劑(ji)，為(wei)市場購買的(de)常(chang)(chang)規(gui)試劑(ji)。

實(shi)施例1目標(biao)分子的(de)制備

薄(bo)層(ceng)層(ceng)析(xi)硅(gui)膠板使用煙(yan)臺(tai)黃海HSGF254或青島GF254硅(gui)膠板，薄(bo)層(ceng)色譜法(TLC)使用的硅(gui)胺板采(cai)用的規(gui)格(ge)是0.15mm-0.2mm，薄(bo)層(ceng)層(ceng)析(xi)分離純化產品采(cai)用的規(gui)格(ge)是0.4mm-0.5mm。

本發明(ming)使用的原料主要購(gou)自(zi)可(ke)購(gou)買自(zi)國藥集團化學試(shi)劑有(you)限公(gong)(gong)司，北京偶合科技有(you)限公(gong)(gong)司、阿拉(la)丁化學試(shi)劑有(you)限公(gong)(gong)司、達瑞化學品等公(gong)(gong)司。

實施(shi)例(li)中無特殊(shu)說明，溶(rong)液(ye)是(shi)指水溶(rong)液(ye)。

實施例(li)中無特殊說(shuo)明，反應的溫度(du)為室溫，為20℃-30℃。

本發明采用(yong)的(de)技術方案如(ru)下：

化合物(Ⅰ)的合成路線.試劑及條件:(a)間硝基苯胺,DIPEA,1,4-二氧六環,rt,2h,91％；b)DIPEA,1,4-二氧六環,60℃,2h,49–72％；(c)Fe-NH₄Cl,MeOH-H₂O,80℃至rt,62–85％；(d)丙烯酰氯,NaHCO₃,丙酮,10min,43–68％，上述路線中各取代基(ji)的定義同上。

I-b的合成

取I-a(23.44mmol)和DIPEA(4.5g,35.16mmol)于50mL二氧六環中，慢(man)慢(man)加入3-硝基(ji)苯胺(an)(3.8g,23.44mmol)，升溫60℃，反應(ying)5小時后，反應(ying)完畢，冷卻，加入400mL水，析出黃白(bai)色固(gu)體，抽濾，烘干，得白(bai)色固(gu)體，未純化直接下一步反應(ying)。

I-c的合成

取(qu)I-b(23.44mmol)和(he)(he)三氟乙酸(4.5g,35.16mmol)于2-BuOH(50ml)中，慢慢加入(ru)取(qu)代(dai)芳(fang)胺(an)(I-f,3.44mmol)，升溫100℃，反應8小時后，反應完畢，冷(leng)卻(que)，倒入(ru)飽和(he)(he)碳酸氫(qing)鈉溶液中，析出固體(ti)，抽(chou)濾，水洗，烘干(gan)硅膠(jiao)柱層析分離(li)，得淺褐色固體(ti)。

I-d的合成

取I-c(1.9g,6.8mmol)和(he)氯化銨(an)(0.73g,13.6mmol)于反應瓶，加入(ru)MeOH(15mL)和(he)水(15mL)，攪(jiao)拌下加入(ru)鐵粉(1.5g,27.2mmol)，升溫(wen)60℃反應2小時，趁熱抽濾，水相用乙酸(suan)(suan)乙酯萃取(100mL×3)，合并乙酸(suan)(suan)乙酯層，飽和(he)食鹽(yan)水洗一(yi)次(ci)，無(wu)水硫(liu)酸(suan)(suan)鈉干(gan)燥，減(jian)壓蒸干(gan)得黃色半固體I-d。

目標物(Ⅰ)的合成

取I-d(2.1g,9.7mmol)溶于20mL乙腈中，加(jia)入(ru)碳酸(suan)(suan)(suan)氫(qing)鈉(na)(na)(1.6g,19.4mmol)，和甲(jia)基哌嗪(1.2g,11.64mmol)，升溫60℃反(fan)應5小時，反(fan)應完畢后(hou)抽干溶劑，加(jia)水(shui)200mL，未析出固(gu)體，水(shui)相用乙酸(suan)(suan)(suan)乙酯(zhi)萃取(100mL×3)，合并乙酸(suan)(suan)(suan)乙酯(zhi)層，飽和食鹽(yan)水(shui)洗滌一次，無水(shui)硫酸(suan)(suan)(suan)鈉(na)(na)干燥(zao)，減壓蒸干得目標分子(zi)(Ⅰ)。

根據以上(shang)方(fang)法合(he)成了目標(biao)分(fen)子(zi)，所合(he)成目標(biao)分(fen)子(zi)的理化(hua)數據如下：

(I-1)N-[3-[[5-氯-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji))乙(yi)氧基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧啶(ding)基(ji)(ji)]胺(an)]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯(xi)酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 476.16[M+H]⁺。

(I-2)N-[3-[[5-氯-2-[[4-[2-(1H-三唑基)乙氧基]苯(ben)基]胺]-4-嘧啶基]胺]苯(ben)基]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.07(s,2H),4.26(s,2H),5.70(d,J＝12.0Hz,1H),6.19(d,J＝16.8Hz,1H),6.39(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.64(s,2H),6.84(s,1H),7.17(s,1H),7.24-7.29(m,2H),7.44-7.48(m,2H),7.61(s,1H),7.82(s,1H),8.05(s,1H),8.84(s,1H),9.13(s,1H),10.15(s,1H).MS(ESI)m/z 475.15[M+H]⁺。

(I-3)N-[3-[[5-氟(fu)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯(xi)酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(t,J＝4.0Hz,2H)),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.74(d,J＝8.0Hz,2H),6.91(s,1H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),7.29(d,J＝12.0Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.69(s,1H),7.93(s,1H),8.07(s,1H),9.01(s,1H),9.39(s,1H),10.15(s,1H).MS(ESI)m/z 460.19[M+H]⁺。

(I-4)N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲氧基-4-(1H-咪唑-1-亞甲基)苯(ben)基]胺(an)]-4-嘧啶基]胺(an)]苯(ben)基]-2-丙烯酰(xian)胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.78(s,3H),5.05(s,2H),5.74(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.24(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.42(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.66(d,J＝8Hz,1H),6.88(s,1H),6.97(s,1H),7.15(s,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.79(s,1H),7.91(d,J＝6.0Hz,1H),7.92(s,1H),8.11(s,1H),8.95(s,1H),10.14(s,1H).MS(ESI)m/z 476.16[M+H]⁺。

(I-5)N-[3-[[5-氯-2-[[4-[2-(1H-咪唑(zuo)基)乙(yi)氧基]苯基]胺(an)]-4-嘧啶基]胺(an)]苯基]-2-丙烯(xi)酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ5.02(s,2H),5.75(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.25(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.47(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.86(s,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(s,1H),7.30(d,J＝6.0Hz,2H),7.50(d,J＝6.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,2H),7.67(s,1H),7.85(s,1H),8.14(s,1H),8.97(s,1H),9.37(s,1H),10.18(s,1H).MS(ESI)m/z 446.14[M+H]⁺。

(I-6)N-[3-[[5-氟(fu)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧(mi)啶基(ji)(ji)]胺(an)]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ5.04(s,2H),5.76(dd,J＝2.0,10.0Hz,1H),6.26(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.50(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.88(s,1H),7.03(d,J＝8.4Hz,2H),7.09(s,1H),7.27(d,J＝6.0Hz,1H),7.43(d,J＝6.0Hz,1H),7.51(d,J＝6.0Hz,1H),7.64(s,1H),7.69(s,1H),7.93(s,1H),8.11(s,1H),9.24(s,1H),9.46(s,1H),10.16(s,1H).MS(ESI)m/z 430.17[M+H]⁺。

(I-7)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)-2-[[4-[2-(1H-咪唑(zuo)基(ji)(ji))乙酰氨(an)基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ5.07(s,2H),5.71(d,J＝10.0Hz,1H),6.21(d,J＝16.8Hz,1H),6.40(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.88(s,1H),7.01(s,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,2H),7.27(d,J＝6.0Hz,1H),7.44(d,J＝6.0Hz,1H),7.52(d,J＝6.0Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.69(s,1H),7.83(s,1H),7.95(s,1H),8.51(s,1H),9.04(s,1H),10.32(s,1H).MS(ESI)m/z 500.17[M+H]⁺。

(I-8)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ5.67(d,J＝10.0Hz,1H),6.19(d,J＝16.8Hz,1H),6.29(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.39(s,1H),6.64(d,J＝8.4Hz,2H),6.84(s,1H),7.01(s,1H),7.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(d,J＝6.0Hz,1H),7.38(d,J＝6.0Hz,1H),7.41(s,1H),7.43(s,1H),7.86(s,1H),8.02(s,1H),8.96(s,1H),9.23(s,1H),10.29(s,1H).MS(ESI)m/z 443.15[M+H]⁺。

(I-9)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))丙(bing)氧(yang)基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.86(m,2H),4.07(t,J＝4.0Hz,2H),4.57(t,J＝4.0Hz,2H),5.72(d,J＝10.0Hz,1H),6.17(d,J＝16.8Hz,1H),6.21(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.39(s,1H),6.64(d,J＝8.4Hz,2H),6.84(s,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.82(s,1H),8.05(s,1H),9.03(s,1H),9.45(s,1H),10.27(s,1H).MS(ESI)m/z 501.20[M+H]⁺。

(I-10)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[4-[2-(1H-四氮唑(zuo)基(ji))丙氧基(ji)]苯基(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)(an)]苯基(ji)]-2-丙烯酰(xian)胺(an)(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.87(m,2H),4.10(t,J＝4.0Hz,2H),4.62(t,J＝4.0Hz,2H),5.75(d,J＝10.0Hz,1H),6.18(d,J＝16.8Hz,1H),6.25(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.45(s,1H),6.67(d,J＝8.4Hz,1H),6.87(s,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.28(d,J＝6.0Hz,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.71(s,1H),7.88(s,1H),8.15(s,1H),9.13(s,1H),9.55(s,1H),10.26(s,1H).MS(ESI)m/z 525.17[M+H]⁺。

(I-11)N-[3-[[5-氯(lv)-2-[[2-甲基(ji)-4-[2-(1H-咪唑(zuo)基(ji))乙(yi)氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺]-4-嘧(mi)啶基(ji)]胺]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.66(s,3H),4.13(s,2H),4.35(s,2H),5.76(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.19(s,1H),10.28(s,1H).MS(ESI),m/z:490.17[M+H]⁺。

(I-12)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氯-4-[2-(1H-咪唑基)乙氧基]苯基]胺]-4-嘧啶(ding)基]胺]苯基]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.19(s,2H),4.41(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.76(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.96(s,1H),9.28(s,1H),10.26(s,1H).MS(ESI),m/z:510.11[M+H]⁺。

(I-13)N-[3-[[5-氯-2-[[3-甲(jia)氧基(ji)(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.27(s,2H),4.42(s,2H),5.33(s,1H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.89(s,1H),8.15(s,1H),8.97(s,1H),9.28(s,1H),10.36(s,1H).MS(ESI),m/z:506.16[M+H]⁺。

(I-14)N-[3-[[5-氟-2-[[2-甲基-4-[2-(1H-咪唑基)乙氧(yang)基]苯基]胺]-4-嘧啶基]胺]苯基]-2-丙烯酰(xian)胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.76(s,3H),4.23(s,2H),4.35(s,2H),5.76(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.77(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.14(s,1H),10.18(s,1H).MS(ESI),m/z:474.20[M+H]⁺。

(I-15)N-[3-[[5-氟-2-[[3-氯-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)(an)]苯基(ji)]-2-丙烯(xi)酰胺(an)(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.09(s,2H),4.26(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.76(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.74(s,1H),7.89(s,1H),8.20(s,1H),8.96(s,1H),9.28(s,1H),10.36(s,1H).MS(ESI),m/z:494.14[M+H]⁺。

(I-16)N-[3-[[5-氟-2-[[3-甲氧基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙(yi)氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧(mi)啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.17(s,2H),4.33(s,2H),5.43(s,1H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.89(s,1H),8.15(s,1H),9.05(s,1H),9.18(s,1H),10.27(s,1H).MS(ESI),m/z:490.19[M+H]⁺。

(I-17)N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲氧(yang)基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙(yi)氧(yang)基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.17(s,2H),4.42(s,2H),5.53(s,1H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.89(s,1H),8.15(s,1H),8.99(s,1H),9.18(s,1H),10.18(s,1H).MS(ESI),m/z:506.16[M+H]⁺。

(I-18)N-[3-[[5-氟-2-[[2-甲氧基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.09(s,2H),4.22(s,2H),5.37(s,1H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.76(s,1H),7.90(s,1H),8.15(s,1H),8.99(s,1H),9.21(s,1H),10.24(s,1H).MS(ESI),m/z:490.19[M+H]⁺。

(I-19)N-[3-[[5-氯-2-[[2-甲基(ji)-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji))苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ2.89(s,3H),5.02(s,2H),5.75(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.25(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.47(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.86(s,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(s,1H),7.30(d,J＝6.0Hz,2H),7.50(d,J＝6.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(s,1H),7.85(s,1H),8.14(s,1H),8.97(s,1H),9.37(s,1H),10.18(s,1H).MS(ESI),MS(ESI),m/z:46016[M+H]⁺。

(I-20)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氯-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji)(ji))苯基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧(mi)啶基(ji)(ji)]胺(an)]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ5.02(s,2H),5.75(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.25(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.47(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.86(s,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,2H),7.58(d,J＝6.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(s,1H),7.89(s,1H),8.14(s,1H),8.97(s,1H),9.49(s,1H),10.28(s,1H).MS(ESI),m/z:480.10[M+H]⁺。

(I-21)N-[3-[[5-氯(lv)-2-[[3-甲(jia)氧基(ji)-4-(1H-咪(mi)唑-1-亞甲(jia)基(ji))苯基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.78(s,3H),5.05(s,2H),5.74(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.24(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.42(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.66(d,J＝8Hz,1H),6.88(s,1H),6.97(s,1H),7.15(s,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.79(s,1H),7.91(d,J＝6.0Hz,1H),7.92(s,1H),8.11(s,1H),8.95(s,1H),10.14(s,1H).MS(ESI)m/z 476.16[M+H]⁺。

(I-22)N-[3-[[5-硝基-2-[[2-甲基-4-(1H-咪唑-1-亞甲基)苯(ben)基]胺]-4-嘧(mi)啶(ding)基]胺]苯(ben)基]-2-丙(bing)烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ2.89(s,3H),5.02(s,2H),5.75(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.25(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.47(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.86(s,1H),7.04(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(s,1H),7.30(d,J＝6.0Hz,2H),7.50(d,J＝6.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.97(s,1H),8.05(s,1H),8.64(s,1H),9.17(s,1H),9.78(s,1H),10.38(s,1H).MS(ESI),m/z:471.18[M+H]⁺。

(I-23)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)-2-[[3-氯-4-(1H-咪唑-1-亞甲(jia)基(ji)(ji))苯(ben)基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺]苯(ben)基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ5.02(s,2H),5.75(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.25(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.47(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.86(s,1H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),7.20(s,1H),7.39(d,J＝6.0Hz,2H),7.58(d,J＝6.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(s,1H),7.89(s,1H),8.14(s,1H),8.97(s,1H),9.69(s,1H),10.39(s,1H).MS(ESI),m/z:491.13[M+H]⁺。

(I-24)N-[3-[[5-硝(xiao)基(ji)-2-[[3-甲氧基(ji)-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji))苯(ben)(ben)基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯(ben)(ben)基(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.58(s,3H),5.15(s,2H),5.79(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.24(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.42(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.66(d,J＝8Hz,1H),6.88(s,1H),6.97(s,1H),7.15(s,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.79(s,1H),7.99(d,J＝6.0Hz,1H),8.02(s,1H),8.51(s,1H),9.15(s,1H),10.34(s,1H).MS(ESI),m/z:487.18[M+H]⁺。

(I-25)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[2-甲氧基(ji)-4-(1H-咪唑-1-亞甲基(ji))苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.78(s,3H),5.05(s,2H),5.74(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.24(dd,J＝2.0,16.8Hz,1H),6.42(dd,J＝10.0,17.2Hz,1H),6.66(d,J＝8Hz,1H),6.88(s,1H),6.97(s,1H),7.15(s,1H),7.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(s,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.79(s,1H),7.91(d,J＝6.0Hz,1H),7.92(s,1H),8.11(s,1H),8.95(s,1H),10.14(s,1H).MS(ESI),m/z:487.18[M+H]⁺。

(I-26)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)(ji)(ji)-2-[[2-甲基(ji)(ji)(ji)(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji)(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.76(s,3H),4.19(s,2H),4.38(s,2H),5.76(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.86(s,1H),7.97(s,1H),8.40(s,1H),8.99(s,1H),9.49(s,1H),10.38(s,1H).MS(ESI),m/z:501.19[M+H]⁺。

(I-27)N-[3-[[5-硝基(ji)(ji)-2-[[3-氯-4-[2-(1H-咪唑(zuo)基(ji)(ji))乙(yi)氧(yang)基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧(mi)啶基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.29(s,2H),4.41(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.76(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.97(s,1H),8.40(s,1H),8.96(s,1H),9.48(s,1H),10.36(s,1H).MS(ESI),m/z:521.14[M+H]⁺。

(I-28)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[2-甲氧基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯(xi)酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.27(s,2H),4.66(s,2H),5.73(s,1H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.86(s,1H),8.02(s,1H),8.65(s,1H),9.10(s,1H),9.37(s,1H),10.40(s,1H).MS(ESI),m/z:517.19[M+H]⁺。

(I-29)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[3-甲(jia)氧(yang)基(ji)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧(yang)基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺(an)

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.17(s,2H),4.33(s,2H),5.43(s,1H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,1H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.89(s,1H),8.15(s,1H),9.05(s,1H),9.18(s,1H),10.27(s,1H).MS(ESI),m/z:517.19[M+H]⁺。

(I-30)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[2-甲基(ji)-4-[3-(1H-咪唑基(ji))丙氧基(ji)]苯(ben)基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯(ben)基(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.91(m,2H),4.09(t,J＝4.0Hz,2H),4.57(t,J＝4.0Hz,2H),5.72(d,J＝10.0Hz,1H),6.17(d,J＝16.8Hz,1H),6.21(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.39(s,1H),6.64(d,J＝8.4Hz,2H),6.84(s,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.82(s,1H),8.05(s,1H),9.18(s,1H),9.64(s,1H),10.37(s,1H).MS(ESI),m/z:515.21[M+H]⁺。

(I-31)N-[3-[[5-硝基(ji)-2-[[3-氯-4-[3-(1H-咪唑基(ji))丙氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧(mi)啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.77(m,2H),4.09(t,J＝4.0Hz,2H),4.67(t,J＝4.0Hz,2H),5.78(d,J＝10.0Hz,1H),6.20(d,J＝16.8Hz,1H),6.29(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.39(s,1H),6.64(d,J＝8.4Hz,2H),6.84(s,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.82(s,1H),8.05(s,1H),9.03(s,1H),9.55(s,1H),10.38(s,1H).MS(ESI),m/z:535.15[M+H]⁺。

(I-32)N-[3-[[5-硝基-2-[[3-甲氧基-4-[3-(1H-咪唑基)丙(bing)氧基]苯基]胺]-4-嘧啶基]胺]苯基]-2-丙(bing)烯酰胺

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ3.66(m,2H),4.12(t,J＝4.0Hz,2H),4.77(t,J＝4.0Hz,2H),5.79(d,J＝10.0Hz,1H),6.18(d,J＝16.8Hz,1H),6.26(dd,J＝10.0,16.8Hz,1H),6.39(s,1H),6.64(d,J＝8.4Hz,2H),6.84(s,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.61(s,1H),7.82(s,1H),8.05(s,1H),9.13(s,1H),9.49(s,1H),10.29(s,1H).MS(ESI),m/z:531.20[M+H]⁺。

(I-33)N-[3-[[5-三氟甲基(ji)(ji)(ji)-2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji)(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)(ji)]苯(ben)基(ji)(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶(ding)基(ji)(ji)(ji)]胺]苯(ben)基(ji)(ji)(ji)]-2-丙烯(xi)酰胺；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 510.18[M+H]⁺。

(I-34)N-[3-[[2-[[4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺(an)(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)(an)]苯基(ji)]-2-丙烯(xi)酰(xian)胺(an)(an)；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.77(dd,J＝4.0Hz,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 442.19[M+H]⁺。

(I-35)N-[3-[[5-三氟甲基(ji)-2-[[4-[(1H-咪唑(zuo)基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)]胺(an)]苯基(ji)]-2-丙烯(xi)酰胺(an)；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 480.17[M+H]⁺。

(I-36)N-[3-[[2-[[4-[(1H-咪唑基(ji)(ji))乙氧基(ji)(ji)]苯基(ji)(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,3H),7.66(s,1H),7.77(dd,J＝4Hz,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 412.18[M+H]⁺。

(I-37)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氟-4-(1H-咪(mi)唑(zuo)-1-亞甲基(ji)(ji))苯基(ji)(ji)]胺(an)]-4-嘧啶基(ji)(ji)]胺(an)]苯基(ji)(ji)]-2-丙烯酰胺(an)；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,2H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 464.13[M+H]⁺。

(I-38)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氯-4-[2-(1H-咪唑(zuo)基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙烯酰胺；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(s,2H),4.31(s,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.90(s,1H),7.22(s,1H),7.29-7.31(m,2H),7.44-7.49(m,2H),7.66(s,1H),7.87(s,1H),8.10(s,1H),8.90(s,1H),9.18(s,1H),10.20(s,1H).MS(ESI)m/z 510.11[M+H]⁺。

(I-39)N-[3-[[5-氯-2-[[3-氟(fu)-4-[2-(1H-咪唑基(ji))乙氧基(ji)]苯基(ji)]胺]-4-嘧啶(ding)基(ji)]胺]苯基(ji)]-2-丙(bing)烯酰胺；

¹H NMR(400MHz,d₆-DMSO):δ4.12(t,J＝4.0Hz,2H)),4.31(t,J＝4.0Hz,2H),5.75(d,J＝12.0Hz,1H),6.24(d,J＝16.8Hz,1H),6.44(dd,J＝12.0,16.8Hz,1H),6.74(d,J＝8.0Hz,2H),6.91(s,1H),7.24(d,J＝6.0Hz,1H),7.29(d,J＝12.0Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(s,1H),7.93(s,1H),8.07(s,1H),9.01(s,1H),9.39(s,1H),10.15(s,1H).MS(ESI)m/z 494.14[M+H]⁺。

目標分子成鹽的方法

無(wu)機(ji)酸(suan)鹽(yan)(yan)的(de)(de)制備方法：取目標分(fen)子(zi)(1mmol)溶于10mL無(wu)水甲醇(chun)中，冰浴下，慢慢滴加無(wu)機(ji)酸(suan)(1mmol)的(de)(de)5mL無(wu)水甲醇(chun)溶液，滴加完畢，于此溫(wen)度下攪拌(ban)30分(fen)鐘，然后常溫(wen)蒸除甲醇(chun)，即得目標分(fen)子(zi)的(de)(de)無(wu)機(ji)酸(suan)鹽(yan)(yan)。通過該方法制備了化(hua)合物I-5的(de)(de)鹽(yan)(yan)酸(suan)鹽(yan)(yan)(I-5-1)、氫(qing)溴酸(suan)鹽(yan)(yan)(I-5-2)、硫酸(suan)鹽(yan)(yan)鹽(yan)(yan)(I-5-3)及(ji)氫(qing)溴酸(suan)鹽(yan)(yan)(I-5-4)；

有機酸鹽(yan)的(de)(de)制備方(fang)法：取(qu)目(mu)(mu)標(biao)分子(zi)(1mmol)溶于10mL無水甲醇中，冰浴下，慢慢滴加(jia)有機酸(1mmol)的(de)(de)5mL干燥(zao)乙(yi)醚，滴加(jia)完畢(bi)，于此溫度下攪拌30分鐘，然后(hou)常溫蒸除溶劑，即(ji)得目(mu)(mu)標(biao)分子(zi)的(de)(de)有機酸鹽(yan)。通過該(gai)方(fang)法制備了化(hua)合物I-9的(de)(de)馬來(lai)酸鹽(yan)(I-9-5)、琥(hu)珀(po)酸鹽(yan)(I-9-6)及富(fu)馬酸鹽(yan)(I-9-7)。

兩個目標分子(zi)混合(he)物(wu)的制(zhi)備

取等摩爾量(1mmol)的上述(shu)兩個(ge)目(mu)標分(fen)子于無水甲醇中(5mL)，室溫(wen)攪拌10分(fen)鐘，常溫(wen)蒸除溶(rong)劑(ji)，即得目(mu)標分(fen)子的混合物(wu)。通過該方法制備(bei)了(I-5)-(I-6)、(I-5)-(I-9)、(I-6)-(I-10)三個(ge)組合物(wu)。

實施例2目標分子生物(wu)活性評價

1、體外(wai)對受體酪氨酸激酶(mei)抑(yi)制活性測試方法

制備激酶檢測緩沖液

①在室(shi)溫融(rong)解激酶檢(jian)測(ce)緩沖液(ye)(Kinase Detection Buffer)，觀察是否(fou)有沉淀。

②如(ru)果出現(xian)沉(chen)淀，就在(zai)37℃孵育(Kinase Detection Buffer)15分(fen)鐘并經(jing)常搖動(dong)，溶解(jie)沉(chen)淀。或者(zhe)，小心吸走(zou)上清(qing)，去(qu)除(chu)沉(chen)淀。

制備激酶檢測試劑

①使(shi)用前在室溫平(ping)衡激酶檢測緩沖液(Kinase Detection Buffe)和(Kinase Detection Substrate)。

②將激酶檢測緩沖液(ye)(Kinase Detection Buffer)全部倒進裝有激酶檢測底物(Kinase Detection Substrate)的(de)棕色瓶(ping)中，使凍(dong)干粉底物溶解，這樣就制成(cheng)了(le)激酶檢測試劑。

③輕輕震蕩、渦旋(xuan)或(huo)顛(dian)倒混勻(yun)，成為均質溶液，底(di)物應在1分鐘內溶解。

④激酶檢(jian)測試劑(ji)配好后應立即使用，或分裝存(cun)于-20℃，我們認為配好的試劑(ji)經過幾次凍(dong)融后循環信號活性(xing)都(dou)沒有損失。

制作(zuo)ATP轉(zhuan)化(hua)成ADP的標準曲(qu)線

①用(yong)1×激(ji)酶反應緩沖液(kinase reaction buffer)稀釋試(shi)劑盒提供(gong)的Ultra Pure ATP和ADP，制成900μL 50μM ATP和500μL 50μM ADP。

②將上一(yi)步(bu)配好(hao)的(de)50μM ATP和50μM ADP溶液按表1所示在384孔板A1-A12中混合(he)，模擬每個轉化(hua)百分比的(de)ATP和ADP的(de)濃度，混合(he)好(hao)。

表(biao)1.制備50μM系列ATP+ADP標準品

③每孔加入5μL的ADP-Glo^TM試(shi)劑(ji)來終止激(ji)酶反(fan)應。在(zai)室溫(wen)孵(fu)育40分(fen)鐘。

④每孔加(jia)入10μL激酶檢測試劑(Kinase Detection Reagent)將ADP轉化成ATP，并引進螢光素酶和螢光素來檢測ATP。

⑤在室溫孵育(yu)30-60分鐘，用多(duo)功能酶標儀測量螢光并記錄螢光值。

⑥繪(hui)制ATP轉化(hua)成ADP的標準曲(qu)線(xian)。

確定激酶抑制物的IC₅₀值

①按照promega試(shi)劑盒(he)說明書配制1×激酶反應(ying)緩沖(chong)液(kinase reaction buffer)，2.5×50ng/μL激酶和(he)2.5×0.5μg/μL底物和(he)125μM ATP。

②在無(wu)酶(mei)對照(zhao)(zhao)孔中(zhong)加入(ru)(ru)3μL 1×激酶(mei)反(fan)應緩沖(chong)液(kinase reaction buffer)，2μL2.5×0.5μg/μL底物和(he)125μM ATP。在陰(yin)性對照(zhao)(zhao)孔中(zhong)加入(ru)(ru)1μL 1×激酶(mei)反(fan)應緩沖(chong)液(kinase reaction buffer)，2μL 2.5×50ng/μL激酶(mei)，2μL 2.5×0.5μg/μL底物和(he)125μM ATP。在測試孔中(zhong)加入(ru)(ru)1μL 5×待測藥物，2μL 2.5×50ng/μL激酶(mei)，2μL 2.5×0.5μg/μL底物和(he)125μM ATP。

③混(hun)合好平板，孵育60分(fen)鐘。

④每孔加入5μL的ADP-Glo^TM試劑來終止激酶反應。在(zai)室溫(wen)孵育40分鐘。

⑤每(mei)孔加入10μL激酶檢測(ce)試(shi)劑(Kinase Detection Reagent)將ADP轉化成ATP，并引進螢光(guang)素(su)酶和(he)螢光(guang)素(su)來檢測(ce)ATP。在室溫孵育(yu)30-60分(fen)鐘，用多功能酶標儀(yi)測(ce)量螢光(guang)并記錄(lu)螢光(guang)值。

⑥結(jie)果(guo)分(fen)析，結(jie)果(guo)是表2所示(shi)。

2、細胞(bao)生長實(shi)驗(yan)(MTT檢(jian)測法)

細胞接種：收集對數生長期細胞，調整細胞懸液濃度,以每孔7×10³個細胞,每孔(kong)(kong)體積100μL接(jie)種到96孔(kong)(kong)板(ban)，每組設(she)4個復孔(kong)(kong)(邊緣孔(kong)(kong)用無菌PBS填充)；

細胞培養：細胞貼壁后，0％FBS RPMI-1640饑餓8h,對照組用10％FBSRPMI-1640培養,，37℃，5％CO₂培(pei)養箱(xiang)中繼續培(pei)養(按實(shi)驗要求分別培(pei)養不(bu)同(tong)時間(jian))；

呈色：三(san)組細胞分別(bie)于培養72h后(hou)加(jia)入10μL MTT溶液(5mg/mL)，4h后(hou)終止培養，每孔加(jia)入100μL三(san)聯液，于搖床(chuang)上低速(su)振蕩10min，使結晶充分溶解；

比(bi)色(se)：在(zai)酶聯免(mian)疫(yi)檢(jian)測(ce)(ce)儀上測(ce)(ce)定各孔光度(du)值(zhi)(OD值(zhi))，選擇570nm波(bo)長，以無細(xi)胞(bao)的即RPMl-1640培養(yang)液空(kong)白孔調零，測(ce)(ce)各孔的吸光度(du)值(zhi)。實驗重復三次(ci)

記錄結果(guo)：細(xi)胞生長抑制率＝(對照組吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值一(yi)實(shi)驗(yan)組吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值)/對照組吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值×100％，細(xi)胞增(zeng)殖率＝(實(shi)驗(yan)組吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值/對照組吸(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值)×100；

繪制細胞(bao)生長曲線：以時(shi)間為(wei)橫坐標，抑(yi)制率/增殖率為(wei)縱坐標繪制細胞(bao)生長曲線。

在GraphPad軟件中的GraphPad Prism作圖軟件中針對抑制劑濃度做圖，以便由log[抑制劑]相對于反應，可變斜率模型估算出IC₅₀。

測試結果如表2所示，表2顯示所獲得的化合物在抑制EGFR酪氨酸激酶和抗腫瘤細胞增殖中的活性效果^a。

表2

表3

a:H1975為EGFR^T790M突變細胞株，A431EGFR^WT細胞.b:IC₅₀：半數有效抑制濃度(du).

3、細胞凋亡(流式(shi)細胞術)

3.1實驗材料和試劑

H1975細胞，RAPI1640基礎培養基(Hyclone公司，cat:SH30022.01B)，FBS胎牛血清(GIBCO公司，cat:16400-044)，雙抗(北京夏斯生物科技有限公司，prospeccat:SV30010)，低速離心機(上海貝恩生物科技有限公司，cat:TDZ4B-WS)，CO₂培養(yang)箱(上海(hai)博訊，cat:BC-J160S)，超凈工作臺(上海(hai)博訊型(xing)號SW-CJ-2FD)，倒置熒光電子顯微鏡(Leica DMI3000B)。

3.2實驗方法

3.2.1擴大培養(yang)H1975細胞；

3.2.2藥物(wu)(wu)處(chu)理(li)：用不同濃度藥物(wu)(wu)處(chu)理(li)細(xi)胞48小時(shi)。

3.2.3藥物處理后細胞用不含EDTA的胰酶消化收集，PBS洗滌細胞兩次，收集細胞1～5×10⁵細胞；

3.2.4加入(ru)500μL的(de)AnnexinV結合(he)緩沖(chong)液(Binding Buffer)懸浮細胞；

3.2.5加入5μL AnnexinV-FITC混勻(yun)后，加入5μL碘(dian)化丙錠(Propidium Iodide，(周期檢測(ce)只加5uL碘(dian)化丙錠)，混勻(yun)；

3.2.6避光、室溫反應(ying)10min；

3.2.7用流(liu)式細(xi)胞(bao)(bao)儀檢測(Ex＝488nm；Em＝530nm)細(xi)胞(bao)(bao)凋亡和(he)周期的情況。

測試結果(guo)如圖(tu)1～圖(tu)5所示(shi)，下圖(tu)顯示(shi)所獲得的化合(he)物I-5在不(bu)同濃度下引起H1975細胞凋亡的結果(guo)。

以上生物活性結果表明，本發明中的分子對EGFR和EGFR^T790M激酶有強烈的抑制效果，大部分化合物達到納摩爾水平的活性級別，且有將近一半的化合物的有效抑制濃度IC₅₀值小于100nM，化合物I-3(9.1nM)，I-5(3.3nM)，I-6(9.0nM)對EGFR^T790M的IC₅₀更(geng)(geng)是達(da)到10nM以(yi)下，明顯優于吉非(fei)替尼和(he)Rociletinib，此外，本發(fa)明所涉及的(de)(de)(de)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)在激酶選(xuan)擇(ze)性(xing)(xing)(xing)上(shang)較(jiao)好，尤其(qi)(qi)是化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)I-5(SI＝303)，其(qi)(qi)選(xuan)擇(ze)性(xing)(xing)(xing)是先導化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)Rociletinib(SI＝21.9)的(de)(de)(de)13.8倍，結(jie)果(guo)預(yu)示(shi)著(zhu)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)I-5作用(yong)更(geng)(geng)專一，因此可(ke)能(neng)的(de)(de)(de)毒副(fu)作用(yong)會更(geng)(geng)小。抗細(xi)胞(bao)(bao)(bao)增(zeng)殖活性(xing)(xing)(xing)結(jie)果(guo)揭(jie)示(shi)，大部分(fen)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)對肺(fei)癌耐藥型(xing)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)H1975有非(fei)常(chang)有效的(de)(de)(de)抑(yi)(yi)制(zhi)作用(yong)，其(qi)(qi)中化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)I-5(118nM)和(he)I-9(129nM)明顯優于Rociletinib(137nM)的(de)(de)(de)活性(xing)(xing)(xing)，另外，大部分(fen)化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)對人正常(chang)支(zhi)氣(qi)管上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)HBE的(de)(de)(de)抑(yi)(yi)制(zhi)作用(yong)較(jiao)弱，在其(qi)(qi)發(fa)揮抑(yi)(yi)制(zhi)H1975細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)有效濃度下，幾乎對正常(chang)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)沒有影(ying)響，證(zheng)明此類化合(he)(he)(he)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)毒性(xing)(xing)(xing)更(geng)(geng)小，流式細(xi)胞(bao)(bao)(bao)凋亡的(de)(de)(de)結(jie)果(guo)揭(jie)示(shi)I-5能(neng)夠對H1975引起(qi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)凋亡，且凋亡數目呈現劑量依賴性(xing)(xing)(xing)。預(yu)示(shi)此類分(fen)子(zi)有極大可(ke)能(neng)開發(fa)成新型(xing)高效EGFR抑(yi)(yi)制(zhi)劑的(de)(de)(de)潛力，對治療相(xiang)關的(de)(de)(de)腫瘤疾病(bing)尤其(qi)(qi)是非(fei)小細(xi)胞(bao)(bao)(bao)肺(fei)癌和(he)小細(xi)胞(bao)(bao)(bao)肺(fei)癌有較(jiao)大的(de)(de)(de)應(ying)用(yong)價值。

以上所述僅是本(ben)發明的優(you)先實施方式，應(ying)當指出(chu)，對于(yu)本(ben)技(ji)術領域的普通技(ji)術人員(yuan)來說，在(zai)不(bu)脫離本(ben)發明技(ji)術原理的前提下，還可以做出(chu)若干改(gai)(gai)進和(he)潤(run)飾，這些改(gai)(gai)進和(he)潤(run)飾也應(ying)視為本(ben)發明的保(bao)護范(fan)圍。