一種l?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發明公開了一種L?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用，其特征在于：通過1,3?偶極環加成方法在L?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素結構中C5和C6位引入吡唑環，與色酮衍生物反應導入色酮結構，合成含有色酮結構的吡唑類L?苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物對于腫瘤細胞株具有良好的抑制作用，其中對于人肝癌細胞具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業應用前景。
【專利說明】
一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用
技術領域：
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，是涉及含有色酮結構的吡唑類L-苯丙氨酸取代去甲斑 蝥素衍生物及其制備方法與應用。
【背景技術】：
[0002] L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素，化學結構式如下：
[0003]
[0004] L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素 R=(S)-CH2Ph;
[0005] 1，3-偶極環加成反應以其良好的區域和主體選擇性而成為合成五元雜環化合物 最主要的方法，也是雜環藥物化學研究中較為活躍的一類反應。近幾年來，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關注。所以，無論是從藥理學還是從合 成角度考慮，這類雜環化合物都有很高的合成價值。
【發明內容】
：
[0006] 本發明的第一方面目的是提供一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物。
[0007] 本發明采取的技術方案如下：
[0008] 一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，其結構式如下：
[0009]
[0010]式中：R=(s)_CH2Ph。
[0011] 該化合物相關實驗數據如下：
[0012]
[0013]
【申請人】經研究發現:在L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環的基礎上導入 了色酮的結構可以改變藥理活性。通過進一步實驗確定:使用色酮衍生物在吡唑的結構上 進行取代，對L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素進行結構改造，制備的含色酮結構吡唑類L-苯丙 氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，具有非常好的藥物活性。
[0014]本發明的第二方面目的是提供一種上述L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制 備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0015] (1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0016] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發生Diels-Alder反應，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0017] (2)、L_苯丙氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0018] 將去甲去氫斑蝥素4 · 2克(25mmol)和L-苯丙氨酸4 · 13克(25mmol)加入經過分子篩 干燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和 氯化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋 干，用乙酸乙酯重結晶得白色固體產物(化合物3);
[0019] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0020] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現。連 續沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得6-溴 代色酮苯腙，黃紅色針狀產物；用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產物6-溴代色酮苯腙(化 合物4);
[0021] (4)、導入色酮結構：
[0022] 將lmmol L-苯丙氨酸取代去甲斑蜜素和1. lmmol6_溴代色酮苯腙于20mL乙醇中， 再加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉 淀用甲醇重結晶，真空干燥后得到產物(化合物5)。
[0023]本發明涉及的反應方程式如下：
[0024]
[0025]本發明的第三方面目的是提供一種L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物在制備抗 腫瘤藥物方面的應用。通過實驗驗證:上述化合物，對于不同瘤株如人肝癌細胞、口腔癌細 胞、胃癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞、腸癌細胞等，均具有抑制作用，其中對于Bel7402 (人肝癌細胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分 與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業應用前景。
[0026]本發明的有益效果如下：
[0027]
【申請人】通過研究發現:在L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環的基礎上導 入了色酮的結構，產生的衍生物，具有良好的藥物活性，經進一步實驗及分析，研究不同雜 環在同一分子中聚集而對藥理活性所產生的影響，用1，3-偶極環加成方法在L-苯丙氨酸取 代去甲斑蝥素結構中C5和C6位引入吡唑環，與色酮衍生物反應導入色酮結構，合成含有色酮 結構的吡唑類L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物在制備抗腫瘤藥物方面，具有 非常好的工業應用前景。
【具體實施方式】：
[0028]以下結合實施例對本發明做進一步描述，但實施例不應解釋為限定本發明的范 圍。
[0029] 實施例1:
[0030] (1 )、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0031] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發生Diels-Alder反應，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0032] (2)、L_苯丙氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0033] 將去甲去氫斑蝥素4 · 2克(25mmol)和L-苯丙氨酸4 · 13克(25mmol)加入經過分子篩 干燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋，飽和 氯化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機相用無水硫酸鎂干燥，過濾后的有機相減壓蒸餾旋 干，用乙酸乙酯重結晶得白色固體產物(化合物3);
[0034] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0035] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現。連 續沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得苯腙， 黃紅色針狀產物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產物6-溴代色酮苯腙(化合物4)。
[0036] (4)、導入色酮結構：
[0037] 將lmmol L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素和1. lmm〇16-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中， 再加入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉 淀用甲醇重結晶，真空干燥后得到產物(化合物5)。
[0038] 化合物5名稱:L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物；
[0039] 化學式：C33H23BrN3〇7;
[0040] 物化參數:黃色結晶，產率71.5%，m.p.l05-106°C;
[0041 ]結構確認：
[0042] 咕匪R(CD30D)S :7.32-7 · 16(m，13H，Ar-H)，6.47(s，lH，C = C-H)，5· 16(d，J = 9·60Ηζ，1Η，Η5)，4.74(d，J= 17.60Hz，1H，H4)，4.56(d，J= 17.60Hz，1H，H1)，4.02(d，J = 9.60Hz，1H，H6)，3.43((1, J = 7.20Hz，lH，H3)，3.29(d，J = 7.20Hz，lH，H2)，3.17-3.27(m，2H， PhCH2)；
[0043] IR 3457(N-C = 0)，3085(ArH)，1720(C = 0)，1575(C = N)，1293(C-0-C)cm_1;
[0044] m/e :652( 100.0% ), 654(97.5%)；
[0045] Anal.calcd.for C33H23BrN3〇7:C，60.65;H，3.57;N，6.41 〇
[0046] 應用實施例:采用MTT法檢測受試化合物對不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0047]將上述實施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株（腫瘤細胞Bel_7402、KB、 SGC7901、H08901、HL-60、ECA109)為實驗對象，測試化合物（5)對于不同瘤株的體外抑制作 用:實驗采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法），活性用半數抑制濃度表示（IC50)。
[0048]具體實驗步驟如下：
[0049] 將化合物5用DMS0溶解，稀釋，腫瘤細胞Bel-7402(人肝癌細胞）、KB(口腔癌細 胞）、SGC7901 (胃癌細胞）、H08901 (卵巢癌細胞）、HL-60(白血病細胞）、ECA109(腸癌細胞)在 96孔板上種入4000個/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μ Μ，共同于37°C、5%C02細胞培養箱中孵育72小時，以DMS0(1 % )為空白對照。72小時后，加入 終濃度為〇. 25mg/mL的MTT，置于37°C、5 %C02細胞培養箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入 100μ1 DMS0，用酶聯免疫儀于570nm處測定吸光度(0D值），所得數據用于計算IC5Q值。不同濃 度的受試化合物用96孔板進行粗篩，根據所得的抑制率，計算IC 5Q值，結果見下表。
[0050] 表1、L-苯丙氨酸取代去甲斑蝥素衍生物對六種腫瘤細胞株的1(：50值
[0051]
[0052]通過上表數據可以看出：本發明制備的化合物，對于多種腫瘤細胞株均具有抑制 作用，其中對于Bel7402(人肝癌細胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨制備抗腫瘤藥 物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業應用前 景。
【主權項】
1. 一種z-苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物，其結構式如下：式中：.:R=(S>CH評h。2. -種苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征在于，包括W下步驟:將 順下締二酸酢和乙酸反應合成去甲去氨斑莖素，去甲去氨斑莖素和苯丙氨酸反應合成 苯丙氨酸取代去甲斑莖素，然后采用6-漠代色酬與苯阱脫水反應合成6-漠代色酬苯腺，最 后將苯丙氨酸取代去甲斑莖素和6-漠代色酬苯腺進行偶極加成反應，合成苯丙氨酸取 代去甲斑莖素衍生物。3. 根據權利要求2所述的一種苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征 在于，包括W下步驟： (1) 、去甲去氨斑莖素的合成： 將順下締二酸酢研細，加入乙酸，室溫條件下攬拌至溶解，滴入巧喃，室溫攬拌24~48小 時，巧喃與順下締二酸酢發生Diels-Alder反應，制得去甲去氨斑莖素； (2) α-苯丙氨酸取代去甲斑莖素的合成： 將去甲去氨斑莖素4.2克和苯丙氨酸4.13克加入經過分子篩干燥的DMF溶劑15毫升 中，攬拌回流12小時，冷卻至室溫后加入乙酸乙醋60毫升稀釋，飽和氯化錠溶液洗涂6次，每 次30毫升，有機相用無水硫酸儀干燥，過濾后的有機相減壓蒸饋旋干，用乙酸乙醋重結晶得 白色固體產物； (3) 、6-漠代色酬苯腺的合成： 取2mmol的苯阱加入盛有10 mL四氨巧喃的燒瓶中，沸水浴回流攬拌至溶解，然后緩慢 滴加入20mL溶有2mmol 6-漠代色酬的無水乙醇溶液，繼續沸水浴回流攬拌化，滴加10滴鹽 酸，有淡黃色沉淀出現;連續沸水浴回流攬拌化，停止水浴，加人20mL蒸饋水攬拌，淡黃色沉 淀顏色變深，抽濾得6-漠代色酬苯腺，黃紅色針狀產物；用無水乙酸沖洗多次，真空干燥得 產物6-漠代色酬苯腺； (4) 、導入色酬結構： 將Immol 苯丙氨酸取代去甲斑莖素和1. Immoie-漠代色酬苯腺于20mL乙醇中，再加 入1.2mL氯胺T，回流9小時，TLC檢測反應完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過濾出沉淀，沉淀用 甲醇重結晶，真空干燥后得到產物苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物。4. 一種苯丙氨酸取代去甲斑莖素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應用。
【文檔編號】A61P35/02GK106083873SQ201610539747
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月6日
【發明人】鄧莉平, 王瑋, 陳國慶, 楊群, 高曉忠, 周玉波, 胡純琦, 吳春雷, 沈潤溥, 吳永華
【申請人】紹興文理學院