本(ben)發明涉(she)及(ji)(ji)醫藥化學領域(yu),具體涉(she)及(ji)(ji)一種(zhong)具有抗腫瘤活性(xing)的(de)高(gao)烏甲素氮(dan)雜肉(rou)桂酸雜合(he)體及(ji)(ji)其(qi)合(he)成方法(fa)。
背景技術：
腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)已(yi)嚴重威脅到人類的(de)健康,尋(xun)找有(you)效(xiao)安全、毒副作用小的(de)抗腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)藥(yao)物(wu)一直是腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)藥(yao)物(wu)研(yan)發工作者孜孜以求的(de)目標。隨著藥(yao)物(wu)化學的(de)發展,尋(xun)找高效(xiao)低(di)毒的(de)天然抗腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)化合物(wu)或(huo)進行(xing)結構(gou)改造合成(cheng)其衍生(sheng)物(wu)成(cheng)為當前抗腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)藥(yao)物(wu)研(yan)究中的(de)一個重要趨勢。
高烏(wu)甲素[(1α,14α,16β)-20-乙基(ji)-1,14,16-三甲氧烏(wu)頭(tou)烷-4,8,9-三醇4-[2-(乙酰氨(an)基(ji))]苯甲酸酯]是從毛茛科植物高烏(wu)頭(tou)(Aconitumsinomotanum Nakai)的(de)(de)根中提取的(de)(de)一種生物堿(中國科學院植物研究(jiu)所,中國高等植物圖(tu)鑒(jian)(第一冊)[M].北(bei)京：科學出版社,1992,688)。其(qi)結構見下式(shi)。藥理實驗證明具有較強(qiang)的(de)(de)中樞鎮痛作用(yong)及(ji)解熱、消腫和(he)局部麻醉等作用(yong)。毒(du)性(xing)實驗表明,本品對各(ge)種組織均無損害(hai),無致畸作用(yong)。
肉(rou)(rou)桂酸(suan)(suan)是一種(zhong)天(tian)然的(de)芳香(xiang)脂肪酸(suan)(suan),廣泛存(cun)在(zai)于蜂膠、咖啡、水果和(he)(he)酒中。肉(rou)(rou)桂酸(suan)(suan)有廣泛的(de)藥(yao)(yao)理性質,如抗癌(ai)、抗氧化、和(he)(he)抗菌。最近的(de)研(yan)究(jiu)表明,肉(rou)(rou)桂酸(suan)(suan)具有潛(qian)在(zai)抗腫瘤(liu)活(huo)性,如黑色素瘤(liu)、惡性膠質瘤(liu)、胃細(xi)胞(bao)(bao)腺(xian)癌(ai)、前列腺(xian)癌(ai)和(he)(he)肺癌(ai)細(xi)胞(bao)(bao),它能誘導細(xi)胞(bao)(bao)凋亡和(he)(he)細(xi)胞(bao)(bao)骨架的(de)破壞。此外,肉(rou)(rou)桂酸(suan)(suan)具有α,β-不飽和(he)(he)酮羰基,在(zai)新藥(yao)(yao)的(de)設計中發揮重要(yao)作用,特別是抗腫瘤(liu)藥(yao)(yao)物,抗病毒(du)藥(yao)(yao)物等(deng)。
近年來,含氮雜環化(hua)合物(wu)(wu)及其衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu)尤(you)(you)其較好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)性已(yi)在醫藥(yao)、農藥(yao)、燃料等領域的(de)(de)(de)(de)(de)(de)廣(guang)泛應用,受到越來越多的(de)(de)(de)(de)(de)(de)關注。在藥(yao)品的(de)(de)(de)(de)(de)(de)開(kai)發過程中,含氮雜環化(hua)合物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)應用尤(you)(you)為廣(guang)泛,從具(ju)有劃時代意義的(de)(de)(de)(de)(de)(de)青(qing)霉素(su)到現在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第(di)四代頭孢菌素(su),抗(kang)(kang)高(gao)血壓藥(yao)利(li)血平,具(ju)有抗(kang)(kang)腫瘤活(huo)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)嘧啶拮抗(kang)(kang)物(wu)(wu),巴(ba)比妥類鎮靜催眠(mian)藥(yao)物(wu)(wu),合成類鎮痛(tong)藥(yao)物(wu)(wu)等各(ge)(ge)方(fang)面,含氮雜環化(hua)合物(wu)(wu)及其衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu)都擔當著重要的(de)(de)(de)(de)(de)(de)角色(se)。并且(qie),對于抗(kang)(kang)腫瘤活(huo)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)高(gao)烏甲素(su)衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu),藥(yao)物(wu)(wu)化(hua)學家和(he)生(sheng)物(wu)(wu)學家進行了大量的(de)(de)(de)(de)(de)(de)研究,合成篩選(xuan)出各(ge)(ge)種不同基團修飾(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)有抗(kang)(kang)腫瘤活(huo)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)高(gao)烏甲素(su)衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu),為進一步開(kai)發有效低毒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)腫瘤藥(yao)物(wu)(wu)打(da)下了堅實基礎。
因此,發明者決定在(zai)現(xian)有研究基礎上,以高(gao)烏甲(jia)素(su)、氮雜肉桂酸(suan)及其衍生(sheng)物為原料,設計合成一種結構新穎的高(gao)烏甲(jia)素(su)氮雜肉桂酸(suan)酯類化(hua)合物,并在(zai)細胞水平上進(jin)行抗腫瘤活(huo)性研究。
技術實現要素：
為(wei)了克服上述現有技術的(de)(de)(de)不(bu)足，本發明目的(de)(de)(de)是提供一種具(ju)(ju)有抗腫瘤活(huo)性的(de)(de)(de)高烏(wu)甲素氮雜肉桂酸(suan)雜合(he)體(ti)及(ji)其合(he)成方(fang)法，具(ju)(ju)有原(yuan)料環保,生(sheng)產成本低(di),操作安全性高,反應(ying)條件溫和的(de)(de)(de)特點，可(ke)實現反應(ying)原(yuan)料的(de)(de)(de)充分利用(yong),適(shi)用(yong)于工業化(hua)生(sheng)產。對(dui)探究(jiu)該類化(hua)合(he)物(wu)的(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)活(huo)性與總結構效(xiao)關系具(ju)(ju)有重要的(de)(de)(de)理論價值和應(ying)用(yong)價值。
為了實(shi)現上述目的(de)，本發(fa)明(ming)采用的(de)技術方(fang)案是:
一種具抗腫瘤(liu)活性的高(gao)烏甲素氮雜肉(rou)桂酸雜合體,其(qi)特征在于，該化合物(wu)結構式(Ⅰ)如下：
其(qi)中(zhong)，X選(xuan)自(zi)C、N，R1、R2、R3選(xuan)自(zi)氫,低級烷烴。
一種具抗腫瘤(liu)活性的高烏(wu)甲(jia)素(su)氮(dan)雜肉桂酸雜合體的合成(cheng)方法，以高烏(wu)甲(jia)素(su)、氮(dan)雜肉桂酸及其衍生物為原料(liao),在DMF作為反應(ying)溶劑的條件下(xia)進行(xing)合成(cheng)，合成(cheng)路線如下(xia)：
其中,R1、R2、R3與通式(I)中的限定(ding)相(xiang)同(tong)；
詳細步驟如下：
1)向反應(ying)器(qi)中(zhong)加入高烏甲素(su)和(he)2％的鹽酸，摩爾比為(wei)1:5,以乙醇為(wei)溶劑,置于磁(ci)力(li)攪拌器(qi)上室溫(wen)攪拌。薄層(ceng)色譜(pu)追蹤(zong)反應(ying)進度,反應(ying)完(wan)全后,減壓(ya)蒸出溶劑；
2)向(xiang)步驟(1)中，按(an)投料比為1:1～1:2加入氮雜肉桂酸(suan)或(huo)其衍(yan)生物,加DMF混(hun)合(he)均勻,加入催化(hua)量的(de)DCC,加熱到50℃～90℃,在(zai)攪拌條(tiao)件下回流(liu)反(fan)應。反(fan)應過程中使用薄層色譜(pu)追蹤(zong),及(ji)時(shi)監測反(fan)應的(de)進行程度；
3)反應(ying)結束加(jia)入水淬滅反應(ying)DCM萃取；
4)將上述(shu)反應體系的混合物經減壓濃縮后,過濾,柱層(ceng)析分離提純(chun),干燥得到(dao)目標(biao)產(chan)物。
所述的步驟1)中的催化劑(ji)為2％的鹽(yan)酸。
所述的步驟2)中的投料比，高烏甲素：肉(rou)桂酰氯或(huo)其衍生物的摩爾比范(fan)圍為(wei)1:1.2～1:1.5。
所述(shu)的(de)步驟2)中的(de)溶劑為DMF。
所(suo)(suo)述的步驟2)所(suo)(suo)中的溫度為60℃～80℃。
所述的一(yi)種具抗腫(zhong)瘤(liu)活性(xing)的高(gao)烏甲素氮雜肉桂酸雜合體應用于治療人前列腺(xian)癌、胃癌、肺癌、乳腺(xian)癌、肝癌。
結(jie)(jie)構(gou)式(I)部(bu)分優選實施(shi)方(fang)案中的(de)化(hua)合物結(jie)(jie)構(gou)式如下所示：
本發明的有益效果是：
采用(yong)(yong)“一鍋(guo)煮”的(de)方法制備高(gao)烏(wu)甲素氮雜肉桂酸(suan)雜合(he)體,減(jian)少了(le)實驗步驟(zou),操作簡單,轉化率(lv)高(gao)。原料(liao)環(huan)保(bao),生(sheng)產成(cheng)本低(di),操作安(an)全性(xing)高(gao),反(fan)應條件溫和,可實現反(fan)應原料(liao)的(de)充分利用(yong)(yong),適(shi)用(yong)(yong)于工業化生(sheng)產。對(dui)探究該類化合(he)物的(de)生(sheng)物活性(xing)與總結(jie)構效關系具有重要的(de)理論價(jia)值和應用(yong)(yong)價(jia)值。
具體實施方式
下面結合具體實施例(li)對本發明作進(jin)一步敘述，但本發明不局限于以下實施例(li)。
實施例1
高烏甲(jia)素與4-氮雜(za)肉桂(gui)酸(suan)
向25ml雞(ji)心(xin)瓶中(zhong)，加(jia)(jia)入高烏甲素50mg和5ml乙醇，加(jia)(jia)適量2％的(de)鹽酸，置于(yu)磁力攪(jiao)拌(ban)器(qi)上(shang)室溫攪(jiao)拌(ban)。TLC監控(kong)反(fan)(fan)(fan)應完全后(hou)，50℃減(jian)壓(ya)蒸干(gan)溶劑，殘余固體加(jia)(jia)入適量DMF溶解(jie)，加(jia)(jia)入4-氮雜肉桂酸17.20mg和催化量的(de)DCC，加(jia)(jia)熱到70℃攪(jiao)拌(ban)反(fan)(fan)(fan)應。TLC中(zhong)控(kong)完全后(hou)停止加(jia)(jia)熱,向上(shang)述所得的(de)反(fan)(fan)(fan)應體系中(zhong)加(jia)(jia)入水(shui)淬滅反(fan)(fan)(fan)應,DCM萃取。有機相減(jian)壓(ya)濃(nong)縮，經柱層析分(fen)離提(ti)純,干(gan)燥得到白色結(jie)晶粉末(29.64mg),總收率54.69％。目標(biao)產物的(de)結(jie)構及其表征如下：
白色結晶粉末,M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.54(2H,d),7.30-8.30(4H,m),7.47(2H,d),7.35(1H,s),7.19(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,1 67.1,149.6,144.5,141.4,140.3,133.2,130.1,125.4,124.2,123.0,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C38H47N3O8[M+H]+,673.3367；found,673.7965.
實施例2
高烏甲素與3-氮雜肉(rou)桂酸(suan)
向25ml雞心瓶中，加入高(gao)烏甲素50mg和(he)5ml乙醇，加適量2％的鹽(yan)酸，置于磁力攪(jiao)拌(ban)器上(shang)室溫(wen)攪(jiao)拌(ban)。TLC監控反應(ying)完(wan)全后(hou)，50℃減壓(ya)蒸干溶(rong)(rong)劑，殘(can)余固體加入適量DMF溶(rong)(rong)解，加入3-氮雜(za)肉桂酸17.20mg和(he)催化量的DCC，加熱到70℃攪(jiao)拌(ban)反應(ying)。TLC中控完(wan)全后(hou)停止加熱,向上(shang)述所得的反應(ying)體系中加入水淬滅反應(ying),DCM萃(cui)取。有(you)機相(xiang)減壓(ya)濃縮，經柱(zhu)層析分(fen)離提純,干燥得到白色結晶粉末(30.04mg),總收率55.42％。目標產物(wu)的結構(gou)及(ji)其表(biao)征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.84(2H,s),8.33(1H,d),7.30-8.30(4H,m),7.98(1H,d),7.71(1H,s),7.55(1H,t),6.89(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,149.5,148.1,140.3,136.6,133.2,132.5,130.1,129.6,124.8,124.2,123.8,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C38H47N3O8[M+H]+,673.3367；found,673.7965.
實施例3
高(gao)烏甲素與(yu)2-氮雜肉桂酸
向(xiang)25ml雞心瓶中，加(jia)(jia)入(ru)高烏甲素50mg和5ml乙(yi)醇，加(jia)(jia)適量2％的(de)鹽酸(suan)，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。TLC監控(kong)反(fan)(fan)應(ying)完全后，50℃減(jian)壓(ya)蒸干(gan)溶劑，殘余固(gu)體加(jia)(jia)入(ru)適量DMF溶解(jie)，加(jia)(jia)入(ru)2-氮雜肉(rou)桂酸(suan)17.20mg和催化量的(de)DCC，加(jia)(jia)熱到70℃攪拌反(fan)(fan)應(ying)。TLC中控(kong)完全后停(ting)止加(jia)(jia)熱,向(xiang)上述所得(de)的(de)反(fan)(fan)應(ying)體系中加(jia)(jia)入(ru)水淬(cui)滅反(fan)(fan)應(ying),DCM萃(cui)取。有機相減(jian)壓(ya)濃(nong)縮，經柱層析分離提純,干(gan)燥(zao)得(de)到白(bai)色結晶粉末(28.96mg),總收率(lv)53.43％。目標產物的(de)結構及其(qi)表征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.45(1H,d),7.30-8.30(4H,m),7.76(1H,s),7.50(1H,s),7.43(1H,d),7.41(1H,t),7.29(1H,t),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,154.7,148.8,140.3,138.2,137.0,133.2,130.1,124.5,124.3,124.2,122.7,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,13.6；HRMS(ESI)calcd.fo rC38H47N3O8[M+H]+,673.3367；found,673.7965.
實施例4
高(gao)烏甲素與3-(3-吡啶基)-3-甲基丙烯酸
向25ml雞心瓶中，加入(ru)高烏甲(jia)(jia)素50mg和5ml乙醇，加適(shi)量2％的鹽(yan)酸，置(zhi)于磁力攪(jiao)拌器上室溫攪(jiao)拌。TLC監控(kong)反(fan)應完全后，50℃減(jian)壓蒸干(gan)溶劑，殘余固體(ti)加入(ru)適(shi)量DMF溶解，加入(ru)3-(3-吡啶基)-3-甲(jia)(jia)基丙烯酸18.64mg和催化量的DCC，加熱到70℃攪(jiao)拌反(fan)應。TLC中控(kong)完全后停止(zhi)加熱,向上述(shu)所得的反(fan)應體(ti)系中加入(ru)水淬滅反(fan)應,DCM萃(cui)取。有機相減(jian)壓濃縮，經柱層析分離提純,干(gan)燥得到白色結晶(jing)粉(fen)末(27.96mg),總收率47.53％。目標產(chan)物的結構及其(qi)表征如下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.47(1H,s),8.33(1H,d),7.30-8.30(4H,m),7.70(1H,d),7.29(1H,t),6.56(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s)，2.42(3H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m,),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.8(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.1,166.0,154.2,153.0,149.5,140.3,133.9,133.2,130.1,124.2,123.8,121.8,119.2,118.4,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4, 24.0,13.6,13.0；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例5
高烏(wu)甲素與(yu)3-(5-甲基(ji)(ji)-3-吡(bi)啶基(ji)(ji))丙烯酸
向(xiang)25ml雞心瓶(ping)中(zhong)，加(jia)入(ru)高烏甲素(su)50mg和5ml乙醇，加(jia)適(shi)量2％的鹽酸，置(zhi)于磁力攪(jiao)拌器上室溫攪(jiao)拌。TLC監控(kong)反應(ying)完全(quan)(quan)后，50℃減壓蒸(zheng)干(gan)溶劑，殘余固(gu)體(ti)加(jia)入(ru)適(shi)量DMF溶解，加(jia)入(ru)3-(5-甲基-3-吡(bi)啶基)丙烯酸18.64mg和催化(hua)量的DCC，加(jia)熱到70℃攪(jiao)拌反應(ying)。TLC中(zhong)控(kong)完全(quan)(quan)后停止加(jia)熱,向(xiang)上述所(suo)得的反應(ying)體(ti)系中(zhong)加(jia)入(ru)水淬滅反應(ying),DCM萃取。有機(ji)相減壓濃(nong)縮，經柱層析分離(li)提(ti)純,干(gan)燥得到白色結晶粉末(mo)(27.54mg),總收率46.82％。目標(biao)產(chan)物的結構及其表征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.82(1H,s),7.30-8.30(4H,m),8.29(1H,s),7.73(1H,s),7.71(1H,s),6.89(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.31(3H,s),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,166.0,151.2,150.0,140.3,16.6,133.9,132.9,130.1,129.0,124.8,124.2,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,18.4,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例6
高烏甲素與3-(6-甲基(ji)-3-吡(bi)啶基(ji))丙(bing)烯醛
向(xiang)25ml雞心瓶中，加(jia)入(ru)高烏甲素50mg和5ml乙醇，加(jia)適量(liang)2％的鹽酸，置于磁(ci)力攪拌器上室溫攪拌。TLC監控反(fan)應(ying)完全后，50℃減壓(ya)蒸干溶(rong)劑，殘余固體加(jia)入(ru)適量(liang)DMF溶(rong)解，加(jia)入(ru)3-(6-甲基-3-吡啶基)丙烯醛18.64mg和催化(hua)量(liang)的DCC，加(jia)熱(re)到70℃攪拌反(fan)應(ying)。TLC中控完全后停止加(jia)熱(re),向(xiang)上述所(suo)得(de)的反(fan)應(ying)體系中加(jia)入(ru)水淬(cui)滅反(fan)應(ying),DCM萃取。有機相減壓(ya)濃縮(suo)，經柱層析分(fen)離提(ti)純,干燥得(de)到白色結晶(jing)粉末(23.93mg),總收(shou)率(lv)40.68％。目(mu)標產物的結構及其表(biao)征(zheng)如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.48(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.99(1H,d),7.71(1H,s),6.97(1H,d),6.89(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(5H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,150.0,145.8,143.9,140.3,137.8,133.1,130.1,126.7,124.8,124.2,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,19.2,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例7
高烏甲(jia)素與3-(4-甲(jia)基-3-吡啶基)丙烯醛
向(xiang)25ml雞(ji)心瓶中，加入高烏甲(jia)素50mg和(he)5ml乙醇，加適量(liang)2％的(de)(de)鹽(yan)酸，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。TLC監控反(fan)應(ying)完全后，50℃減壓蒸(zheng)干(gan)溶(rong)劑(ji)，殘余固體(ti)加入適量(liang)DMF溶(rong)解，加入3-(4-甲(jia)基(ji)-3-吡啶基(ji))丙(bing)烯醛(quan)18.64mg和(he)催化(hua)量(liang)的(de)(de)DCC，加熱(re)到70℃攪拌反(fan)應(ying)。TLC中控完全后停止加熱(re),向(xiang)上述所(suo)得(de)的(de)(de)反(fan)應(ying)體(ti)系中加入水淬滅(mie)反(fan)應(ying),DCM萃(cui)取。有機相減壓濃縮(suo)，經柱(zhu)層析分離提純,干(gan)燥(zao)得(de)到白色結晶粉末(22.68mg),總收率38.56％。目標產物的(de)(de)結構及其(qi)表征如(ru)下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.32(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.71(1H,s),7.64(1H,d),7.13(1H,d),6.89(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.53(3H,s),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,160.8,149.6,140.3,136.6,133.2,132.9,130.1,128.6,124.8,124.2,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,23.9,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例8
3-(5-乙基(ji)(ji)-3-吡啶(ding)基(ji)(ji))丙(bing)烯醛
向25ml雞心瓶中(zhong)，加(jia)(jia)(jia)入(ru)高烏甲素(su)50mg和5ml乙(yi)醇，加(jia)(jia)(jia)適(shi)量(liang)2％的(de)(de)鹽(yan)酸(suan)，置于(yu)磁力攪拌器上(shang)室溫攪拌。TLC監控反(fan)應(ying)完(wan)(wan)全后(hou)，50℃減(jian)壓蒸干溶(rong)劑，殘余固體加(jia)(jia)(jia)入(ru)適(shi)量(liang)DMF溶(rong)解，加(jia)(jia)(jia)入(ru)3-(5-乙(yi)基-3-吡啶基)丙烯醛(quan)20.08mg和催化量(liang)的(de)(de)DCC，加(jia)(jia)(jia)熱到70℃攪拌反(fan)應(ying)。TLC中(zhong)控完(wan)(wan)全后(hou)停止加(jia)(jia)(jia)熱,向上(shang)述(shu)所得的(de)(de)反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)加(jia)(jia)(jia)入(ru)水淬滅反(fan)應(ying)，DCM萃取。有(you)機相減(jian)壓濃縮，經柱(zhu)層析分離提純(chun),干燥得到白(bai)色結晶粉末(25.13mg)，總收率41.87％。目標產(chan)物的(de)(de)結構(gou)及其表征如下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.82(1H,s),8.29(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.73(1H,s),7.71(1H,s),6.89(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.73(2H,q)，2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s)，1.45(2H,q),1.25(3H,t),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,150.8,149.5,140.3,139.4,136.6,133.4,130.1,129.4,124.8,124.2,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,26.3,24.0,14.5,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C40H51N3O8[M+H]+,701.8482；found,701.3676.
實施例9
高烏(wu)甲(jia)素與3-(4-吡(bi)啶(ding)基(ji))-3-甲(jia)基(ji)丙烯(xi)醛
向25ml雞(ji)心(xin)瓶中，加(jia)入高(gao)烏甲(jia)(jia)素50mg和(he)5ml乙醇，加(jia)適量(liang)2％的(de)鹽酸(suan)，置于磁力攪(jiao)(jiao)拌(ban)器上(shang)室溫攪(jiao)(jiao)拌(ban)。TLC監控(kong)反(fan)應(ying)完全后，50℃減(jian)(jian)壓(ya)蒸(zheng)干(gan)溶劑，殘(can)余固體加(jia)入適量(liang)DMF溶解，加(jia)入3-(4-吡啶(ding)基(ji))-3-甲(jia)(jia)基(ji)丙烯醛(quan)18.64mg和(he)催化量(liang)的(de)DCC，加(jia)熱(re)到(dao)(dao)70℃攪(jiao)(jiao)拌(ban)反(fan)應(ying)。TLC中控(kong)完全后停止加(jia)熱(re),向上(shang)述(shu)所得(de)的(de)反(fan)應(ying)體系中加(jia)入水淬滅(mie)反(fan)應(ying),DCM萃取。有機相(xiang)減(jian)(jian)壓(ya)濃縮，經柱層(ceng)析分(fen)離提(ti)純,干(gan)燥得(de)到(dao)(dao)白色結晶粉末(23.14mg),總收(shou)率39.34％。目標(biao)產物的(de)結構及其(qi)表(biao)征如下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.54(2H,d),7.30-8.30(4H,m),7.47(2H,d),7.35(1H,s),7.19(1H,s),6.86(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.1,166.3,153.9,149.6,144.3,140.3,133.2,130.1,125.4,124.2,123.0,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,13.6,13.0；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例10
高烏甲素與(yu)3-(4-吡(bi)啶(ding)基)-2-甲基丙烯醛
向(xiang)25ml雞心(xin)瓶中(zhong)，加(jia)(jia)(jia)入(ru)高烏(wu)甲素50mg和5ml乙醇，加(jia)(jia)(jia)適量2％的(de)鹽酸(suan)，置于(yu)磁力攪(jiao)(jiao)拌器(qi)上室(shi)溫攪(jiao)(jiao)拌。TLC監控(kong)反(fan)應(ying)完全后，50℃減壓蒸干溶劑，殘余固體加(jia)(jia)(jia)入(ru)適量DMF溶解，加(jia)(jia)(jia)入(ru)3-(4-吡啶(ding)基)-2-甲基丙烯醛18.64mg和催化量的(de)DCC，加(jia)(jia)(jia)熱到70℃攪(jiao)(jiao)拌反(fan)應(ying)。TLC中(zhong)控(kong)完全后停止加(jia)(jia)(jia)熱,向(xiang)上述所(suo)得的(de)反(fan)應(ying)體系中(zhong)加(jia)(jia)(jia)入(ru)水淬滅反(fan)應(ying)，DCM萃取(qu)。有(you)機(ji)相減壓濃(nong)縮，經(jing)柱層析分離提純，干燥(zao)得到白色結晶粉(fen)末(25.78mg)，總收率43.83％。目標產物的(de)結構及其表征(zheng)如(ru)下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.61(2H,d), 7.30-8.30(4H,m),7.40(2H,d),7.35(1H,s),7.24(1H,s),6.86(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.53(3H,s),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.52(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.1,166.3,153.9,149.6,144.5,140.3,137.9,133.2,130.1,127.5,124.2,123.0,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,13.613.0；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例11
3-(3-甲基-4-吡啶基)-丙烯醛
向(xiang)(xiang)25ml雞心瓶中，加入(ru)(ru)高烏甲素50mg和5ml乙醇(chun)，加適量2％的(de)鹽酸(suan)，置于磁力(li)攪拌器上(shang)室溫(wen)攪拌。TLC監控反(fan)應(ying)完全后，50℃減壓(ya)蒸干溶(rong)劑，殘余固體(ti)加入(ru)(ru)適量DMF溶(rong)解，加入(ru)(ru)3-(3-甲基-4-吡啶基)-丙(bing)烯醛18.64mg和催化量的(de)DCC，加熱到70℃攪拌反(fan)應(ying)。TLC中控完全后停止加熱,向(xiang)(xiang)上(shang)述所得的(de)反(fan)應(ying)體(ti)系中加入(ru)(ru)水淬滅反(fan)應(ying)，DCM萃取。有機相減壓(ya)濃縮(suo)，經(jing)柱層(ceng)析分離提純(chun)，干燥(zao)得到白(bai)色結晶粉(fen)末(22.51mg)，總收率38.27％。目標(biao)產物的(de)結構及其表征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.54(2H,d),7.30-8.30(4H,m),7.47(2H,d),7.35(1H,s),7.24(1H,s),6.86(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.43(3H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.5(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,161.4,148.9,142.2,141.4,140.3,133.2,130.1,125.4,124.2,119.2,118.9115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3497；found,687.8164.
實施例12
高烏甲素與3-(3-乙基(ji)-4-吡啶(ding)基(ji))-丙烯醛
向25ml雞心瓶中(zhong)(zhong)，加(jia)(jia)入高(gao)烏甲素50mg和(he)5ml乙醇，加(jia)(jia)適量(liang)2％的(de)鹽酸，置(zhi)于(yu)磁力攪拌器上(shang)(shang)室溫攪拌。TLC監控反應(ying)完全后(hou)，50℃減壓蒸(zheng)干(gan)溶劑，殘余(yu)固(gu)體加(jia)(jia)入適量(liang)DMF溶解，加(jia)(jia)入3-(3-乙基-4-吡啶基)-丙烯醛20.08mg和(he)催化量(liang)的(de)DCC，加(jia)(jia)熱(re)到70℃攪拌反應(ying)。TLC中(zhong)(zhong)控完全后(hou)停(ting)止加(jia)(jia)熱(re),向上(shang)(shang)述所得(de)的(de)反應(ying)體系中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入水淬(cui)滅(mie)反應(ying)，DCM萃取(qu)。有機(ji)相減壓濃(nong)縮，經(jing)柱層析分離提純(chun)，干(gan)燥得(de)到白色結晶粉(fen)末(26.11mg)，總收率43.50％。目(mu)標(biao)產(chan)物的(de)結構(gou)及其(qi)表(biao)征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.54(2H,d),7.30-8.30(4H,m),7.47(2H,d),7.35(1H,s),7.24(1H,s),6.86(1H,s),3.65(2H,s),3.40(2H,q),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.50(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.25(3H,t),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,160.1,148.6,142.2,141.4,140.3,133.2,130.1,125.4,124.2,119.2,118.9,117.5,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,30.9,26.9,26.4,24.0,13.6,13.0；HRMS(ESI)calcd.for C40H51N3O8[M+H]+,701.8482；found,701.3676.
實施例13
高烏甲素與(yu)3-(3,5-二(er)甲基-4-吡啶(ding)基)-丙烯醛(quan)
向(xiang)25ml雞(ji)心瓶中(zhong)，加(jia)入高烏甲(jia)素50mg和(he)5ml乙醇(chun)，加(jia)適量2％的鹽酸(suan)，置(zhi)于磁力攪(jiao)拌(ban)器上(shang)(shang)室溫攪(jiao)拌(ban)。TLC監(jian)控(kong)反(fan)(fan)應(ying)(ying)完全后，50℃減壓(ya)蒸干溶劑，殘余固體(ti)加(jia)入適量DMF溶解，加(jia)入3-(3,5-二甲(jia)基(ji)-4-吡啶基(ji))-丙(bing)烯(xi)醛20.08mg和(he)催(cui)化量的DCC，加(jia)熱(re)到70℃攪(jiao)拌(ban)反(fan)(fan)應(ying)(ying)。TLC中(zhong)控(kong)完全后停止加(jia)熱(re),向(xiang)上(shang)(shang)述(shu)所得的反(fan)(fan)應(ying)(ying)體(ti)系中(zhong)加(jia)入水淬滅(mie)反(fan)(fan)應(ying)(ying)，DCM萃取。有機相減壓(ya)濃縮(suo)，經柱層析分離提純(chun)，干燥(zao)得到白色結晶(jing)粉末(34.09mg)，總收率56.79％。目標(biao)產物(wu)的結構及其表征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.35(1H,s),7.24(2H,s),7.19(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.53(6H,t),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,157.9,142.4,141.4,140.3,133.2,130.1,125.4,124.2,119.2,115.7,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,20.4,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C40H51N3O8[M+H]+,701.3676；found,701.8482.
實施例14
高烏甲(jia)素與3-(5-甲(jia)基-2-吡啶基)-丙烯醛
向25ml雞心瓶中(zhong)(zhong)，加(jia)(jia)入(ru)高烏甲(jia)素50mg和5ml乙醇，加(jia)(jia)適(shi)量2％的(de)鹽酸，置于磁(ci)力攪(jiao)拌(ban)(ban)器上室溫攪(jiao)拌(ban)(ban)。TLC監控反(fan)應(ying)完全后(hou)，50℃減壓(ya)蒸(zheng)干溶劑，殘余(yu)固體(ti)加(jia)(jia)入(ru)適(shi)量DMF溶解(jie)，加(jia)(jia)入(ru)3-(5-甲(jia)基-2-吡(bi)啶基)-丙烯醛18.64mg和催化量的(de)DCC，加(jia)(jia)熱(re)到70℃攪(jiao)拌(ban)(ban)反(fan)應(ying)。TLC中(zhong)(zhong)控完全后(hou)停止(zhi)加(jia)(jia)熱(re),向上述所(suo)得的(de)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入(ru)水淬滅(mie)反(fan)應(ying)，DCM萃(cui)取。有機相減壓(ya)濃縮，經柱層析分離提純，干燥得到白色結(jie)晶粉末(35.22mg)，總(zong)收率(lv)59.87％。目標產物的(de)結(jie)構及其表征如下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.46(1H,d),7.30-8.30(4H,m),7.76(1H,s),7.50(1H,s),7.39(1H,s),7.34(1H,d),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(4H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,155.2,148.3,147.0,140.3,138.2,133.2,130.1,127.1,124.5,124.2,119.2,115.7,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,21.7,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3520；found,687.8217.
實施例15
高烏甲素(su)與3-(5-乙基-2-吡啶基)-丙烯醛
向25ml雞心(xin)瓶中，加(jia)(jia)入(ru)高(gao)烏甲素(su)50mg和5ml乙(yi)醇，加(jia)(jia)適量2％的(de)鹽酸(suan)，置于磁(ci)力攪(jiao)拌(ban)器(qi)上室(shi)溫攪(jiao)拌(ban)。TLC監控(kong)反應(ying)(ying)完全(quan)后，50℃減壓蒸干溶劑，殘余固體加(jia)(jia)入(ru)適量DMF溶解，加(jia)(jia)入(ru)3-(5-乙(yi)基-2-吡(bi)啶基)-丙烯醛(quan)20.08mg和催化量的(de)DCC，加(jia)(jia)熱(re)(re)到(dao)70℃攪(jiao)拌(ban)反應(ying)(ying)。TLC中控(kong)完全(quan)后停止加(jia)(jia)熱(re)(re),向上述所得的(de)反應(ying)(ying)體系中加(jia)(jia)入(ru)水淬滅反應(ying)(ying)，DCM萃取。有機相(xiang)減壓濃縮(suo)，經柱層析(xi)分離提(ti)純，干燥得到(dao)白色結(jie)晶粉末(33.70mg)，總收率56.15％。目(mu)標產物的(de)結(jie)構及其表征如下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.46(1H,d),7.30-8.30(4H,m),7.76(1H,s),7.50(1H,s),7.39(1H,s),7.34(1H,d),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.60(2H,q),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.25(3H,t),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.1,155.3,154.6,149.7,146.4,137.2,133.8,130.7,126.0,124.4,122.5,117.0,113.4,109.9,91.7,91.4,84.5,66.7,61.0,57.7,57.4,54.4,50.8,46.7,45.5,41.6,40.3,37.5,37.3,32.3,28.6,27.8,27.2,26.1,14.5,14.4,13.3；HRMS(ESI)calcd.for C40H51N3O8[M+H]+,701.3676；found,701.8482.
實施例16
高烏(wu)甲素與3-(3,5-二甲基-2-吡啶基)-丙烯醛
向25ml雞心瓶(ping)中，加入高(gao)烏甲(jia)素50mg和5ml乙醇，加適量2％的鹽(yan)酸，置于磁力攪(jiao)拌(ban)器上(shang)室溫(wen)攪(jiao)拌(ban)。TLC監(jian)控反(fan)(fan)(fan)應完(wan)(wan)全后(hou)，50℃減壓蒸干溶(rong)劑，殘余固體加入適量DMF溶(rong)解，加入3-(3,5-二甲(jia)基-2-吡啶基)-丙烯醛20.08mg和催化量的DCC，加熱到70℃攪(jiao)拌(ban)反(fan)(fan)(fan)應。TLC中控完(wan)(wan)全后(hou)停(ting)止加熱,向上(shang)述所得(de)的反(fan)(fan)(fan)應體系中加入水淬滅反(fan)(fan)(fan)應，DCM萃取。有機相(xiang)減壓濃縮，經柱層析分(fen)離(li)提純，干燥得(de)到白色(se)結(jie)晶粉末(30.07mg)，總(zong)收率(lv)51.15％。目(mu)標產物的結(jie)構及(ji)其(qi)表征如下(xia)：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),7.76(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.50(1H,s),7.28(1H,s),7.23(1H,s),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.53(3H,s),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(4H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,158.3,154.8,146.6,140.3,138.2,133.2,130.1,124.5,124.2,123.6,122.6,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.0,2 2.0,20.4,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C40H51N3O8[M+H]+,701.3676；found,701.8482.
實施例17
高(gao)烏甲素與3-(5-異(yi)丙(bing)基(ji)-2-吡啶基(ji))-丙(bing)烯醛
向(xiang)25ml雞心瓶中，加入(ru)(ru)高烏甲素50mg和5ml乙醇，加適量2％的鹽(yan)酸，置于磁力(li)攪拌(ban)器上室溫攪拌(ban)。TLC監(jian)控(kong)反應完全(quan)后(hou)，50℃減壓蒸干溶劑，殘余固(gu)體加入(ru)(ru)適量DMF溶解，加入(ru)(ru)3-(5-異丙基(ji)(ji)-2-吡啶基(ji)(ji))-丙烯(xi)醛21.52mg和催化量的DCC，加熱到(dao)70℃攪拌(ban)反應。TLC中控(kong)完全(quan)后(hou)停止加熱,向(xiang)上述所得的反應體系中加入(ru)(ru)水淬滅反應，DCM萃(cui)取(qu)。有機相(xiang)減壓濃縮，經柱層析(xi)分離提純，干燥(zao)得到(dao)白色結晶粉末(27.99mg)，總收(shou)率46.63％。目標產物的結構及其表征(zheng)如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),8.46(1H,s),7.76(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.50(1H,s),7.39(1H,s),7.34(1H,d),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.87(1H,m),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.20(6H,t),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,158.1,155.1,146.9,140.3,138.2,133.2,130.1,124.5,124.2,123.0,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,33.6,31.9,26.9,26.4,24.0,23.3,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C41H53N3O8[M+H]+,715.3833；found,715.8748.
實施例18
高烏(wu)甲(jia)(jia)素與(yu)3-(3-甲(jia)(jia)基-2-吡啶基)-2-甲(jia)(jia)基丙(bing)烯(xi)醛(quan)
向(xiang)25ml雞心(xin)瓶(ping)中，加(jia)(jia)入(ru)(ru)高烏甲(jia)素50mg和(he)5ml乙(yi)醇，加(jia)(jia)適(shi)量2％的(de)(de)(de)鹽酸(suan)，置于磁力攪(jiao)拌器上室溫攪(jiao)拌。TLC監控反(fan)應完全(quan)后，50℃減(jian)壓蒸干溶劑，殘余固體加(jia)(jia)入(ru)(ru)適(shi)量DMF溶解，加(jia)(jia)入(ru)(ru)3-(3-甲(jia)基(ji)-2-吡(bi)啶基(ji))-2-甲(jia)基(ji)丙烯醛20.08mg和(he)催化量的(de)(de)(de)DCC，加(jia)(jia)熱到70℃攪(jiao)拌反(fan)應。TLC中控完全(quan)后停(ting)止(zhi)加(jia)(jia)熱,向(xiang)上述所得的(de)(de)(de)反(fan)應體系中加(jia)(jia)入(ru)(ru)水(shui)淬(cui)滅反(fan)應，DCM萃取。有機相減(jian)壓濃縮，經柱層(ceng)析分離(li)提(ti)純，干燥得到白色結(jie)(jie)晶粉末(24.87mg)，總(zong)收率41.43％。目標(biao)產物的(de)(de)(de)結(jie)(jie)構及其表征如下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.55(1H,d),7.48(1H,s),7.27(1H,d),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.53(3H,s),2.50(2H,s),2.43(1H,s)，2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:167.1,163.8,157.8,154.3,140.3,137.2,133.2,131.0,126.6,124.2,122.9,121.3,19.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24..3,24.0,11.9,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C40H51N3O8[M+H]+,701.8482；found,701.3676.
實施例19
高烏(wu)甲(jia)(jia)素(su)與3-(3-甲(jia)(jia)基-2-吡啶基)-丙烯醛
向(xiang)(xiang)25ml雞心瓶中(zhong)，加(jia)(jia)(jia)入高烏甲素50mg和(he)(he)5ml乙醇(chun)，加(jia)(jia)(jia)適量2％的(de)(de)(de)鹽(yan)酸，置于磁力攪拌器上室溫攪拌。TLC監(jian)控(kong)(kong)反應完(wan)全后，50℃減壓蒸干溶劑(ji)，殘余固(gu)體(ti)加(jia)(jia)(jia)入適量DMF溶解，加(jia)(jia)(jia)入3-(3-甲基-2-吡啶(ding)基)-丙烯(xi)醛18.64mg和(he)(he)催(cui)化量的(de)(de)(de)DCC，加(jia)(jia)(jia)熱到70℃攪拌反應。TLC中(zhong)控(kong)(kong)完(wan)全后停止加(jia)(jia)(jia)熱,向(xiang)(xiang)上述(shu)所得(de)的(de)(de)(de)反應體(ti)系中(zhong)加(jia)(jia)(jia)入水淬(cui)滅反應，DCM萃取(qu)。有機相減壓濃縮，經柱層析(xi)分離提純，干燥得(de)到白色結(jie)晶粉(fen)末(31.70mg)，總收率53.89％。目標(biao)產物的(de)(de)(de)結(jie)構及其(qi)表征(zheng)如(ru)下：
白色結晶粉末，M.P.182-184℃.1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.12(1H,s),7.30-8.30(4H,m),7.76(1H,s),7.55(1H,d),7.51(1H,t),7.50(1H,s),7.27(1H,d),3.65(2H,s),3.30(9H,s),2.85(1H,d),2.78(1H,q),2.77(1H,t),2.75(2H,s),2.54(2H,d),2.53(3H,s),2.50(2H,s),2.40(2H,q),2.36(1H,m),2.13(4H,m),1.99(1H,t),1.95(2H,t),1.88(4H,m),1.80(2H,d),1.73(1H,t),1.70(4H,m),1.55(2H,d),1.48(1H,s),1.45(2H,q),1.02(3H,t)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:168.0,167.1,157.8,154.3,140.3,138.2,137.2,133.2,130.1,124.5,124.2,122.9,121.3,119.2,115.4,92.2,88.6,86.1,84.5,80.1,77.2,69.9,58.5,58.0,57.7,57.4,51.0,48.6,47.6,44.9,42.9,41.6,31.9,26.9,26.4,24.3,24.0,13.6；HRMS(ESI)calcd.for C39H49N3O8[M+H]+,687.3520；found,687.8217.
實施例20
本發(fa)明化合物的(de)抗腫(zhong)瘤活性測試
對本發明的化合(he)物(wu)進(jin)行了腫瘤細胞增殖抑(yi)制試驗(yan),試驗(yan)方法采用常規的MTT法。
細(xi)胞(bao)株選用：人(ren)前(qian)列腺癌(PC-3),人(ren)胃腺癌細(xi)胞(bao)(SGC-7901),人(ren)肺癌細(xi)胞(bao)(A-549)。培養液(ye)為DMEM+15％NBS+雙(shuang)抗。
樣品液(ye)的(de)(de)配(pei)制：用DMSO(Merck)溶解后,加入PBS(-)配(pei)成的(de)(de)100μmol/L的(de)(de)溶液(ye)或者均(jun)勻(yun)的(de)(de)混(hun)懸液(ye),然后用DMSO的(de)(de)PBS(-)稀(xi)釋,最終濃度分(fen)別為0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/L。
將抗腫瘤(liu)藥(yao)物(wu)5-氟尿嘧啶(ding)(5-FU)以(yi)同樣的條(tiao)件配成對照(zhao)品(pin)溶液。
細胞培養：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養于含10％滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬U/L)的1640培養液中,置于37℃,5％CO2,飽和濕度的二氧化(hua)碳(tan)培養(yang)(yang)箱中培養(yang)(yang)。細胞(bao)貼(tie)壁生長,每2～3天傳代1次(ci),傳代時首先倒出培養(yang)(yang)液(ye),PBS洗2次(ci),胰(yi)酶消(xiao)化(hua)后,加(jia)入新(xin)鮮(xian)的培養(yang)(yang)液(ye)吹打均勻(yun),調整細胞(bao)至適當濃(nong)度移入新(xin)的培養(yang)(yang)瓶(ping)中,添加(jia)培養(yang)(yang)液(ye)至適量。取對數生長期細胞(bao)用于實驗。
MTT法檢測細胞活性及IC50的測定：
實驗原理：活細(xi)(xi)胞線粒(li)體中脫氫酶能(neng)將黃色(se)(se)的MTT還原成(cheng)不溶于水的藍紫色(se)(se)產物甲臜(MTT formazan),并沉積在細(xi)(xi)胞中,生成(cheng)的量與(yu)活細(xi)(xi)胞數(shu)目成(cheng)正比(bi),而(er)死(si)細(xi)(xi)胞沒有這種功能(neng)。DMSO能(neng)溶解藍紫色(se)(se)結晶物,顏(yan)色(se)(se)深淺與(yu)所含的量成(cheng)正比(bi),因此用酶標(biao)儀測(ce)定(ding)的光(guang)吸收值可(ke)反映細(xi)(xi)胞存活率。
實驗方法：取對數生長期細胞,消化、計數,以3×105/mL的密度接種于96孔培養板中,每孔100μl。培養24小時后,將待測化合物以0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/L濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔,以含0.4％DMSO的培養液作對照。藥物作用48小時后,去上清,每孔加入100μl MTT(2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽)(1mg/mL),繼續培養4小時,棄上清,每孔加入100μl DMSO,振蕩混勻,用酶標儀在570nm處測定吸光度值,采用IC50計算軟件求出半數抑制濃度(IC50)。
試驗結果(guo)詳(xiang)見(jian)表1,其中(zhong),樣(yang)品(pin)是指(zhi)相應實施(shi)(shi)例中(zhong)制備(bei)的(de)巖(yan)白菜素氮雜肉(rou)桂酸酯類化(hua)合物,樣(yang)品(pin)編號對應制備(bei)實施(shi)(shi)例中(zhong)所得到(dao)的(de)化(hua)合物的(de)具體編號。
表1化合物對不同腫瘤細胞的半數抑制濃度IC50(單位：μmol/L)
表(biao)(biao)1結(jie)果(guo)顯(xian)(xian)示,化(hua)合(he)物(wu)(wu)1-19在所測(ce)試的3種細胞(bao)株中均表(biao)(biao)現出了(le)不同(tong)程度的抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)活(huo)(huo)性,其中化(hua)合(he)物(wu)(wu)11、12和5的活(huo)(huo)性較好,對(dui)細胞(bao)呈現較強的抑制(zhi)效果(guo),在特定細胞(bao)株中抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)活(huo)(huo)性優于(yu)或等同(tong)于(yu)5-氟尿(niao)嘧啶,對(dui)不同(tong)腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)株具(ju)有明顯(xian)(xian)選(xuan)擇性。綜(zong)上,本發(fa)明的高烏甲素氮雜肉桂酰胺類化(hua)合(he)物(wu)(wu)可(ke)作為(wei)抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)候選(xuan)藥物(wu)(wu)進一(yi)步進行(xing)臨床前研(yan)究,也可(ke)以做為(wei)抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)先導(dao)化(hua)合(he)物(wu)(wu)進一(yi)步研(yan)究。