本發明屬于藥物(wu)(wu)化學的合(he)成技(ji)術領(ling)域，具(ju)體涉及一種具(ju)有生物(wu)(wu)活性的哌啶(ding)酮鏈接鄰氟苯化合(he)物(wu)(wu)的制備方法

背景技術：

含(han)氮雜(za)環(huan)化(hua)合(he)(he)物因其(qi)具(ju)(ju)(ju)(ju)有(you)(you)(you)良好的(de)(de)(de)(de)生物活性(xing)(xing)(xing)而(er)在醫藥(yao)(yao)和農(nong)藥(yao)(yao)等人類(lei)健康和農(nong)業(ye)生產中(zhong)(zhong)發揮(hui)著重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)。近年來(lai)，這類(lei)物質在醫藥(yao)(yao)和農(nong)藥(yao)(yao)發展中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)日(ri)益明顯，大多數雜(za)環(huan)類(lei)的(de)(de)(de)(de)新(xin)農(nong)藥(yao)(yao)對(dui)溫血動(dong)物毒性(xing)(xing)(xing)很(hen)小(xiao)，對(dui)鳥類(lei)、魚(yu)類(lei)的(de)(de)(de)(de)毒性(xing)(xing)(xing)也很(hen)低，這為(wei)新(xin)型(xing)農(nong)藥(yao)(yao)醫藥(yao)(yao)的(de)(de)(de)(de)研發提供(gong)了(le)極(ji)其(qi)廣闊的(de)(de)(de)(de)應用(yong)前景。哌啶(ding)衍生物是(shi)重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)(de)農(nong)藥(yao)(yao)和醫藥(yao)(yao)中(zhong)(zhong)間體，比如在農(nong)藥(yao)(yao)行業(ye)中(zhong)(zhong)可以合(he)(he)成(cheng)一(yi)(yi)種名為(wei)哌草丹的(de)(de)(de)(de)稻田除草劑，它是(shi)一(yi)(yi)種選擇性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)非(fei)激(ji)素型(xing)硫(liu)代(dai)氨基(ji)甲酸(suan)類(lei)除草劑，具(ju)(ju)(ju)(ju)有(you)(you)(you)很(hen)大的(de)(de)(de)(de)發展空間；在醫藥(yao)(yao)行業(ye)可以用(yong)于合(he)(he)成(cheng)鹽酸(suan)乙酰羅沙(sha)替丁(是(shi)一(yi)(yi)種消化(hua)系統(tong)藥(yao)(yao)物)，雙密(mi)達莫心(是(shi)一(yi)(yi)種血管(guan)疾(ji)病(bing)藥(yao)(yao)物)等。因此(ci)，探(tan)索具(ju)(ju)(ju)(ju)有(you)(you)(you)哌啶(ding)基(ji)團的(de)(de)(de)(de)新(xin)型(xing)化(hua)合(he)(he)物對(dui)于合(he)(he)成(cheng)新(xin)的(de)(de)(de)(de)農(nong)藥(yao)(yao)及醫藥(yao)(yao)等先導化(hua)合(he)(he)物具(ju)(ju)(ju)(ju)有(you)(you)(you)重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)(de)現實意義。本課(ke)題組設計(ji)并合(he)(he)成(cheng)了(le)一(yi)(yi)系列新(xin)型(xing)哌啶(ding)酮鏈接鄰氟苯化(hua)合(he)(he)物，并對(dui)其(qi)進行了(le)相關活性(xing)(xing)(xing)測試。

技術實現要素：

本發(fa)明解(jie)決(jue)的技(ji)術問題是(shi)提供了一種合(he)(he)成方(fang)法簡單，分子結(jie)構新穎的具有(you)抗真菌(jun)活性的哌(pai)啶酮鏈接鄰(lin)氟苯(ben)化合(he)(he)物的制備(bei)方(fang)法。

本發明為解決(jue)上述技(ji)術問題采用如下技(ji)術方(fang)案，一種新(xin)型的哌啶酮鏈接鄰氟苯化合(he)物制(zhi)備方(fang)法，其特征在于具體步驟為：

a、n-boc-4-哌啶酮(tong)(tong)與(yu)碳酸(suan)二甲酯在叔丁醇(chun)鉀的作用下反(fan)應得到n-boc-3-甲酸(suan)甲酯-4-哌啶酮(tong)(tong)

b、n-boc-3-甲酸(suan)甲酯(zhi)(zhi)-4-哌(pai)啶酮(tong)在乙酸(suan)銨(an)作用下，酮(tong)羰(tang)基氧化還原(yuan)成(cheng)氨(an)基，得到化合(he)物n-boc-3-甲酸(suan)甲酯(zhi)(zhi)-4-氨(an)基-3-烯-哌(pai)啶

c、n-boc-3-甲(jia)酸(suan)甲(jia)酯-4-氨(an)基-3-烯(xi)-哌(pai)啶(ding)(ding)與氯甲(jia)酰(xian)乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯在tea作用下發生取(qu)代反應得到化合物(wu)n-boc-3-甲(jia)酸(suan)甲(jia)酯-4-氨(an)基甲(jia)酰(xian)乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯-3-烯(xi)-哌(pai)啶(ding)(ding)

d、n-boc-3-甲酸甲酯-4-氨基甲酰乙酸乙酯-3-烯-哌啶在叔丁醇鉀的作用下發生分子內成環得到化合物然后在酸性條件下該化合物進行分子內氫轉移和羰基還原得到化合物

e、在強酸條件下，加熱脫去酯基和boc基團，得到化合物

f、在三氯氧磷作用下，羥基被氯取代得到化合物

g、在濃鹽酸作用下使氯代碳氮雙鍵變為酰胺鍵得到化合物

h、在堿性條件下，進行boc氨基保護得到化合物

i、在碳酸銫作用下與碘甲烷反應得到化合物

j、在磷酸鉀作用下與鄰氟苯硼酸反應生成

k、脫去boc基團得到化合物

l、與羧酸化合物在堿性條件進行酰化和脫甲基反應得到

進(jin)一步限定，步驟a的(de)具體(ti)過程為：在(zai)反應(ying)瓶中，把1eq的(de)n-boc-4-哌啶酮加入到(dao)(dao)10v體(ti)積的(de)甲苯中，再(zai)加入2eq的(de)碳酸(suan)二甲酯(zhi)和2eq的(de)叔丁醇鉀，加熱至70℃反應(ying)1h，冷卻至室溫，加水(shui)(shui)淬滅，用1mol/l的(de)hcl調(diao)節反應(ying)液ph為7，乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)萃取，無水(shui)(shui)硫酸(suan)鈉干燥(zao)后，旋干得到(dao)(dao)黃色(se)油狀(zhuang)物(wu)n-boc-3-甲酸(suan)甲酯(zhi)-4-哌啶酮

進一步限定，步驟b的(de)(de)(de)具體(ti)(ti)過程為：將1eq的(de)(de)(de)n-boc-3-甲(jia)酸(suan)甲(jia)酯-4-哌(pai)啶酮(tong)加(jia)入到(dao)10倍體(ti)(ti)積的(de)(de)(de)甲(jia)醇中(zhong)，再(zai)加(jia)入3eq的(de)(de)(de)乙酸(suan)銨，反(fan)應過夜，旋干(gan)甲(jia)醇，加(jia)入3倍體(ti)(ti)積的(de)(de)(de)水，二氯甲(jia)烷(wan)萃取反(fan)應液后(hou)用無水硫(liu)酸(suan)鈉干(gan)燥，旋干(gan)后(hou)得到(dao)紅(hong)的(de)(de)(de)油狀液體(ti)(ti)n-boc-3-甲(jia)酸(suan)甲(jia)酯-4-氨基(ji)-3-烯(xi)-哌(pai)啶

進(jin)一步限定，步驟c的具體過程為：將1eq的n-boc-3-甲(jia)(jia)酸甲(jia)(jia)酯(zhi)-4-氨(an)基(ji)-3-烯-哌啶加入到8倍(bei)體積的dcm中，再加入1.05eq的tea，冷卻至10℃，滴加1.05eq的4-氯甲(jia)(jia)酰乙酸乙酯(zhi)，室溫反應(ying)過夜，再加入8倍(bei)體積的dcm稀(xi)釋反應(ying)液，水(shui)洗兩次，無水(shui)硫酸鈉干燥，旋干既得紅色油狀產物n-boc-3-甲(jia)(jia)酸甲(jia)(jia)酯(zhi)-4-氨(an)基(ji)甲(jia)(jia)酰乙酸乙酯(zhi)-3-烯-哌啶

進一步限定，步驟d的具體過程為：把1eq的n-boc-3-甲酸甲酯-4-氨基甲酰乙酸乙酯-3-烯-哌啶加入到10倍體積的thf中，再分批加入2.0eq的t-buok，反應溫度控制在小于25℃，反應1h后加入冰水淬滅，用2mol/l的hcl調節反應液ph為3，過濾，真空干燥得到類白色固體產品

進一步限定，步驟e的具體過程為：在10eq6mol/l的hcl溶液中，分批加入1.0eq的加熱至100℃，反應過夜，旋干反應溶劑，再用乙醚洗滌，真空干燥得到類白色固體

進一步限定，步驟f的具體過程為：向5eqpocl3中分批加入1.0eq的加熱至100℃，反應過夜，旋干pocl3得到紅色油狀產物

進一步限定，步驟g的具體過程為：把加入到4倍體積的1,4-二氧六環中，再加入4倍體積的濃鹽酸，加熱至100℃，回流反應2天，旋干溶劑后加入10倍體積的乙酸乙酯，水洗三次，干燥旋干后得到棕色固體

進一步限定，步驟h的具體過程為：把1eq的加入到10倍體積的1,4-二氧六環和10倍體積的水中，再分批加入3.0eq的碳酸鈉和1.5eq的(boc)2o，室溫反應10h后，過濾，再用乙酸乙酯洗滌濾餅后用乙酸乙酯萃取反應液，再用氯化鈉溶液洗滌，干燥，旋反應液得到

進一步限定，步驟i的具體過程為：把1.0eq的加入到10倍體積的dmf中，再加入1.5eq的cs2co3，1.3eq的碘化鉀，室溫反應過夜，加入冰水淬滅反應液，乙酸乙酯萃取反應液，氯化鈉溶液洗滌，干燥，旋干，再用乙醚打漿，過濾，真空干燥得到白色固體

進一步限定，步驟j的具體過程為：將1.0eq的加入到20倍體積的thf中，再加入3eq的1mol/l的磷酸鉀和1.2eq的鄰氟苯硼酸，加熱至100℃，反應過夜，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干后柱層析分離得到

進一步限定，步驟k的具體過程為：1.0eq的加入到10倍體積的甲醇和10體積的12mol/l的hcl/1,4-二氧六環中，室溫反應過夜，旋干，乙醚洗滌，得到

進一步限定，步驟l的具體過程為：在反應瓶中，把加入到dmf中，再加入三乙胺和羧酸化合物，加熱到70℃，反應一段時間，同時進行酰化和脫甲基得到化合物

本發明所述(shu)的具有生物活性的哌啶酮鏈接鄰氟(fu)苯化合物合成路線為(wei)：

本(ben)發(fa)(fa)明通過對(dui)(dui)哌(pai)啶(ding)酮分子進行了改造，合成(cheng)了一(yi)系列(lie)哌(pai)啶(ding)酮鏈接鄰氟苯(ben)化(hua)合物(wu)并進行了抗真菌(jun)活性測(ce)試，發(fa)(fa)現該(gai)類化(hua)合物(wu)對(dui)(dui)白(bai)假絲酵(jiao)母菌(jun)具有(you)較好的(de)抑制活性。

具體實施方式

以下通過實(shi)施例對本(ben)發(fa)(fa)(fa)明的(de)上(shang)述內容做進一步詳(xiang)細說明，但不應(ying)該將此理解為本(ben)發(fa)(fa)(fa)明上(shang)述主(zhu)題的(de)范(fan)圍僅限于以下的(de)實(shi)施例，凡基于本(ben)發(fa)(fa)(fa)明上(shang)述內容實(shi)現的(de)技(ji)術均屬于本(ben)發(fa)(fa)(fa)明的(de)范(fan)圍。

實施例1

在反應瓶中，把n-boc-4-哌啶酮20g(0.1mol)加入到甲苯200ml中，再加入碳酸二甲酯18g(0.2mol)和叔丁醇鉀22g(0.2mol)，加熱至70℃反應1h，冷卻至室溫，加水100ml淬滅，用1mol/l的hcl調節反應液ph為7，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥后，旋干得到黃色油狀物n-boc-3-甲酸甲酯-4-哌啶酮24g；¹hnmr(400mhz,cd3cl)δ:3.81(s,1h),3.71(d,j＝8.4hz,1h),3.68(d,j＝8.4hz,1h),3.45(s,3h),3.07-3.05(m,2h),2.76-2.73(m,2h),1.37(s,9h).ms-esi(m/z):258.3[m+h⁺]。

實施例2

在反應瓶中，將n-boc-3-甲酸甲酯-4-哌啶酮25g(0.1mol)加入到甲醇300ml中，再加入乙酸銨22g(0.3mol)，反應過夜，tlc監控原料反應完全，旋干甲醇，加入水900ml，用二氯甲烷300ml萃取反應液三次，合并有機相后用無水硫酸鈉干燥，旋干后得到紅的油狀液體n-boc-3-甲酸甲酯-4-氨基-3-烯-哌啶22g；¹hnmr(400mhz,cd3cl)δ:8.56(s,2h),3.93(s,2h),3.77(s,3h),3.57-3.55(m,2h),2.16-2.13(m,2h),1.37(s,9h).ms-esi(m/z):257.3[m+h⁺]。

實施例3

在反應瓶中，將n-boc-3-甲酸甲酯-4-氨基-3-烯-哌啶26g(0.1mol)加入到二氯甲烷200ml中，再加入tea11g(0.11mol)，冷卻至10℃，緩慢滴加4-氯甲酰乙酸乙酯16g(0.105mol)，室溫反應過夜，tlc監控原料反應完全，再加入二氯甲烷200ml稀釋反應液，水洗兩次，無水硫酸鈉干燥，旋干既得紅色油狀產物n-boc-3-甲酸甲酯-4-氨基甲酰乙酸乙酯-3-烯-哌啶23g；¹hnmr(400mhz,cd3cl)δ:4.71(s,2h),3.93(s,2h),3.79(s,3h),3.57-3.55(m,2h),3.53(s,2h),2.16-2.13(m,2h),1.37(s,9h),1.29(s,3h).ms-esi(m/z):371.4[m+h⁺]。

實施例4

在反應瓶中，把n-boc-3-甲酸甲酯-4-氨基甲酰乙酸乙酯-3-烯-哌啶37g(0.1mol)加入到thf400ml中，再分批加入t-buok23g(0.2mol)，反應溫度控制在小于25℃，反應1h后加入冰水300ml淬滅，用2mol/l的hcl調節反應液ph為3，過濾，真空干燥得到類白色固體產品32g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.51(s,1h),5.35(s,1h),4.71(s,2h),4.33(d,j＝4.0hz,2h),3.66-3.62(m,2h),3.25(d,j＝12.0hz,2h),1.41-1.39(m,9h),1.33-1.32(m,3h)。

實施例5

在反應瓶中，加入在6mol/l的hcl溶液200ml，再分批加入34g(0.1mol)，加熱至100℃，反應過夜，旋干反應溶劑，再用乙醚洗滌，真空干燥得到類白色固體15g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.47(s,1h),5.95(s,1h),5.41(s,1h),3.86-3.85(m,2h),3.71(d,j＝12.0hz,2h),3.11-3.09(m,2h),1.90(s,1h)。

實施例6

在密閉的反應瓶中，向三氯氧磷50g(0.5mol)中分批加入16g(0.1mol)，緩慢加熱至100℃，反應過夜，真空旋干三氯氧磷得到紅色油狀產物16g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.61(s,1h),3.81(s,2h),3.37(d,j＝12.0hz,2h),3.13-3.12(m,2h),1.87(s,1h)。

實施例7

在帶有溫度計和攪拌的反應瓶中，把20g加入到1,4-二氧六環100ml中，再緩慢加入濃鹽酸100ml，加熱至100℃，回流反應2天，旋干溶劑后加入10倍體積的乙酸乙酯，水洗三次，干燥旋干后得到棕色固體17g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:8.17(s,1h),6.62(s,1h),3.35(s,2h),2.96(d,j＝12.0hz,2h),2.07-2.05(m,2h).ms-esi(m/z):185.6[m+h⁺]。

實施例8

在反應瓶中，把18g(0.1mol)加入到1,4-二氧六環200ml和水200ml中，再分批加入碳酸鈉30g(0.3mol)和(boc)2o33g(0.15mol)，室溫反應10h后，tlc監控原料反應完全，過濾反應液，再用乙酸乙酯100ml洗滌濾餅后用乙酸乙酯200ml萃取反應液三次，再用氯化鈉溶液洗滌，干燥，旋反應液得到20g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:6.61(s,1h),3.93(s,2h),3.54(s,3h),3.57(d,j＝12.0hz,2h),2.07-2.05(m,2h),1.39(s,9h)。

實施例9

在反應液中，把28g(0.1mol)加入到dmf300ml中，再加入碳酸銫50g(0.15mol)，碘化鉀20g(0.13mol)，室溫反應過夜，tlc監控原料反應完全，加入冰水100ml淬滅反應液，乙酸乙酯200ml萃取反應液三次，飽和氯化鈉溶液200ml洗滌反應液，干燥，旋干，再用乙醚打漿，過濾，真空干燥得到白色固體26g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:6.61(s,1h),3.94(s,2h),3.54(s,3h),3.55(d,j＝8.0hz,2h),2.07-2.05(m,2h),1.38(s,9h).ms-esi(m/z):299.8[m+h⁺]。

實施例10

在反應液中，將30g(0.1mol)加入到無水thf500ml中，再加入1mol/l的磷酸鉀70ml(0.3mol)和2-氟苯硼酸17g(0.12mol)，加熱至100℃，反應過夜，再用乙酸乙酯300ml萃取反應液兩次，合并有機相干燥，旋干有機相后經柱層析分離得到39g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.47-7.41(m,4h),5.71(s,1h),3.96(s,2h),3.57(s,3h),3.51(d,j＝12.0hz,2h),2.11-2.10(m,2h),1.39(s,9h)。

實施例11

在反應瓶中，將36g(0.1mol)加入到甲醇400ml和12mol/l的hcl/1,4-二氧六環400ml中，室溫反應過夜，tlc監控原料反應完全，旋干，乙醚洗滌濃縮物，得到22g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.63-7.59(m,2h),7.19-7.17(m,2h),5.71(s,1h),3.93(s,2h),3.55(d,j＝12.0hz,2h),3.54(s,3h),2.95-2.93(m,2h),2.07-2.05(m,2h)。

實施例12

在反應瓶中，把26g(0.1mol)加入到dmf中，再加入三乙胺20g(0.2mol)和苯甲酸12g(0.1mol)，加熱到70℃，反應3h后經tlc監控原料反應完全，把反應液倒入水中，用氯仿200ml萃取反應液三次，合并有機相后旋干得到化合物31g；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:8.11(s,1h),8.01-7.89(m,3h),7.70-7.66(m,2h),7.12-7.09(m,2h),7.02(d,j＝4.0hz,1h),5.71(s,1h),3.93(s,2h),3.55(d,j＝12.0hz,2h),2.07-2.05(m,2h)。

實施例13

生物活性測定

根據國標(biao)gb15979-2002，測(ce)定(ding)了(le)藥(yao)物質(zhi)(zhi)量(liang)濃度(du)為(wei)0.1ml/l時，目標(biao)化(hua)合(he)物對(dui)(dui)(dui)(dui)白假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)和光(guang)(guang)滑(hua)(hua)假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)標(biao)準(zhun)(zhun)菌(jun)株的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)菌(jun)活性(xing)。以質(zhi)(zhi)量(liang)濃度(du)為(wei)0.1mg/l的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)化(hua)合(he)物對(dui)(dui)(dui)(dui)白假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)和光(guang)(guang)滑(hua)(hua)假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活性(xing)測(ce)試(shi)過(guo)程為(wei)例(li)，測(ce)試(shi)步驟如下：(1)取(qu)(qu)實驗(yan)樣(yang)(yang)品0.05mg，加(jia)入3mldmso和2ml蒸餾水，配(pei)成質(zhi)(zhi)量(liang)分(fen)數(shu)為(wei)10mg/l的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品溶(rong)(rong)液(ye)；(2)菌(jun)液(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)配(pei)置(zhi)：用(yong)(yong)棉簽蘸取(qu)(qu)適量(liang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)白假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)或光(guang)(guang)滑(hua)(hua)假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)，溶(rong)(rong)入到裝(zhuang)有緩沖液(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)準(zhun)(zhun)試(shi)管中(zhong)(zhong)混勻(yun)，與比(bi)濁(zhuo)(zhuo)管對(dui)(dui)(dui)(dui)比(bi)，濁(zhuo)(zhuo)度(du)與比(bi)濁(zhuo)(zhuo)管相(xiang)當即(ji)為(wei)所需濃度(du)；(3)取(qu)(qu)實驗(yan)樣(yang)(yang)品管和含(han)有相(xiang)同體積相(xiang)同溶(rong)(rong)劑(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)對(dui)(dui)(dui)(dui)照液(ye)各1管，高壓滅菌(jun)；(4)分(fen)別(bie)(bie)用(yong)(yong)移(yi)液(ye)槍移(yi)去步驟(2)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)菌(jun)懸液(ye)100μl，分(fen)別(bie)(bie)加(jia)入盛有實驗(yan)樣(yang)(yang)品液(ye)和對(dui)(dui)(dui)(dui)照樣(yang)(yang)液(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)試(shi)管中(zhong)(zhong)，混勻(yun)，作(zuo)用(yong)(yong)20min；(5)分(fen)別(bie)(bie)取(qu)(qu)0.5ml樣(yang)(yang)品溶(rong)(rong)液(ye)，加(jia)入含(han)4.5ml緩沖溶(rong)(rong)液(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)試(shi)管內，用(yong)(yong)混勻(yun)器混勻(yun)，取(qu)(qu)3個稀釋(shi)度(du)；(6)分(fen)別(bie)(bie)取(qu)(qu)0.5ml稀釋(shi)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品溶(rong)(rong)液(ye)，置(zhi)于(yu)兩個材料、規格相(xiang)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿(min)中(zhong)(zhong)，在其中(zhong)(zhong)加(jia)入約(yue)15ml溫(wen)度(du)為(wei)40～50℃的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)沙氏培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，輕輕轉動培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿(min)，使培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)在培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿(min)中(zhong)(zhong)厚度(du)均勻(yun)，待(dai)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)凝固后翻轉平板，置(zhi)于(yu)37℃培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)72h；(7)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)完畢，取(qu)(qu)出培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿(min)數(shu)菌(jun)落個數(shu)，計算抑(yi)菌(jun)率。經過(guo)實驗(yan)發(fa)現(xian)該類化(hua)合(he)物苯環取(qu)(qu)代基(ji)(ji)上，間(jian)位(wei)為(wei)吸(xi)電子取(qu)(qu)代基(ji)(ji)時對(dui)(dui)(dui)(dui)光(guang)(guang)滑(hua)(hua)假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)制作(zuo)用(yong)(yong)普遍優(you)于(yu)對(dui)(dui)(dui)(dui)白假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)制作(zuo)用(yong)(yong)，當間(jian)位(wei)為(wei)給(gei)電子取(qu)(qu)代基(ji)(ji)時對(dui)(dui)(dui)(dui)白假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)制作(zuo)用(yong)(yong)普遍優(you)于(yu)對(dui)(dui)(dui)(dui)光(guang)(guang)滑(hua)(hua)假絲(si)(si)(si)(si)酵(jiao)母(mu)(mu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)制作(zuo)用(yong)(yong)。

以上(shang)(shang)(shang)實施例描(miao)述了本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)的基本(ben)(ben)(ben)原理、主(zhu)要特征及優點，本(ben)(ben)(ben)行業的技術(shu)人員應(ying)該了解(jie)，本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)不受上(shang)(shang)(shang)述實施例的限制，上(shang)(shang)(shang)述實施例和說(shuo)明(ming)書中描(miao)述的只是說(shuo)明(ming)本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)的原理，在不脫離本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)原理的范圍下，本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)還(huan)會有各種變化(hua)和改(gai)進(jin)，這些變化(hua)和改(gai)進(jin)均(jun)落入本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)保(bao)護的范圍內。