本(ben)發明屬藥物(wu)化(hua)學(xue)領域，具(ju)體涉(she)及一類具(ju)有吡唑(zuo)環結構的(de)(de)小分子化(hua)合物(wu)的(de)(de)合成及其用于制備抗菌藥物(wu)和抗腫(zhong)瘤藥物(wu)的(de)(de)應(ying)用。
背景技術：
對于由細菌(jun)等(deng)引起的感染性(xing)疾病(bing)，隨著(zhu)抗生素及其(qi)他抗菌(jun)藥物的廣泛應用甚至濫用，細菌(jun)的耐(nai)藥性(xing)問(wen)題也越來越突(tu)出。臨床上已(yi)發(fa)現許(xu)多新的耐(nai)藥菌(jun)，包括嚴重危(wei)及臨床治療的耐(nai)甲(jia)氧西林的金(jin)黃色葡(pu)萄球菌(jun)（mrsa）和耐(nai)萬古霉素的腸(chang)球菌(jun)（vre），因此開發(fa)新的高效(xiao)抗感染藥具有重要意(yi)義。
雜(za)環化(hua)(hua)合物以其(qi)獨特的(de)(de)結(jie)構和性(xing)質成為新藥(yao)發現(xian)的(de)(de)重(zhong)要源泉。本發明提供了新的(de)(de)具有吡唑(zuo)環母核的(de)(de)化(hua)(hua)合物實(shi)體(ti)，這些化(hua)(hua)合物具有抗菌(jun)活性(xing)，還具有一定的(de)(de)抗腫(zhong)瘤活性(xing)。
技術實現要素：
本發明的目的之(zhi)一在于(yu)提(ti)供2個吡唑類化合物(wu)(wu)在制備(bei)抗菌藥物(wu)(wu)中(zhong)的應用。
本發(fa)明(ming)的(de)另一(yi)目的(de)是提供一(yi)種用(yong)于抗菌的(de)藥(yao)物組合物，其中含(han)有治療有效量(liang)的(de)權利要(yao)求1所(suo)述(shu)的(de)化合物及其藥(yao)學上可(ke)接(jie)受的(de)鹽和藥(yao)用(yong)輔料(liao)。
具(ju)體而言，本(ben)發明所(suo)述2個(ge)吡(bi)唑類(lei)化合(he)物(wu)為如下(xia)所(suo)述結構：
本發明的又(you)一目(mu)的是提供所示化合物h15和h16除具有抗(kang)菌作用外，還具有在制(zhi)備抗(kang)腫瘤藥物中(zhong)的應用。
本發明的(de)(de)又一(yi)目的(de)(de)是提供一(yi)種用于抗腫瘤的(de)(de)藥(yao)物組合物，其(qi)中(zhong)含有治療(liao)有效量的(de)(de)權利要求(qiu)1所(suo)述的(de)(de)化(hua)合物及(ji)其(qi)藥(yao)學上可接受的(de)(de)鹽和(he)藥(yao)用輔料。
化(hua)(hua)合物h15的分子(zi)式(shi)為(wei)(wei)c23h21n3o3，化(hua)(hua)學名(ming)稱為(wei)(wei)：4-(4,5,6,7-四氫-3-(5-甲(jia)氧基吲哚-3-基)吲唑-2-基)苯甲(jia)酸。h16的分子(zi)式(shi)為(wei)(wei)c30h22n4o2，化(hua)(hua)學名(ming)稱為(wei)(wei)：4-(3,5-二((e)-2-(吲哚-3-乙(yi)烯基)-1h-吡唑-1-基)苯甲(jia)酸。
本發(fa)明(ming)的化合物，其反應方程式如(ru)下所示，其中化合物h15經歷了一個由(you)咪(mi)唑(zuo)啉(lin)自發(fa)脫(tuo)氫的過程：
具體實施方式
本(ben)(ben)發明(ming)在以下的(de)實(shi)施例中進(jin)一步(bu)說明(ming)。這些實(shi)施例僅(jin)為了說明(ming)的(de)目的(de)而非限制本(ben)(ben)發明(ming)的(de)范圍(wei)。
實施例1.化合(he)物的合(he)成。
化合物h15：4-(4,5,6,7-四氫(qing)-3-(5-甲氧基吲哚-3-基)吲唑-2-基)苯(ben)甲酸(suan)。
4-(4,5,6,7-tetrahydro-3-(5-methoxy-1h-indol-3-yl)indazol-2-yl)benzoicacid。
取0.51g(2mmol)2-(3-(5-甲氧基吲哚)亞甲基)環己酮，0.31g(2mmol)對羧基苯肼和30ml甲醇于50ml干燥的圓底燒瓶中。隨后加入4ml的乙酸并攪拌，升高溫度至50℃反應。反應8h后，停止加熱，繼續攪拌10h。減壓蒸除甲醇和乙酸，得油狀物。將油狀物倒入攪拌的冰水中，有固體析出，抽濾，水洗后得粗產物。干法柱層析，得純產品0.50g。產品為白色固體，產率65.0%，熔點：250-252℃。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.90(s,1h),11.36(s,1h),7.80(d,j=8.6hz,2h),7.46(d,j=2.4hz,1h),7.42(d,j=8.5hz,2h),7.29(d,j=8.8hz,1h),6.68(dd,j=8.8hz,2.2hz,1h),6.26(d,j=1.7hz,1h),3.40(s,3h),2.71(t,j=5.9hz,2h),2.48-2.50(m,2h),1.82(d,j=5.1hz,2h),1.72(d,j=4.7hz,2h)。esi-ms[m+1]+(m/z:388.2)。
化合物h16：4-(3,5-二((e)-2-(吲哚-3-乙烯基(ji))-1h-吡唑-1-基(ji))苯甲酸(suan)。
4-(3,5-bis((e)-2-(1h-indol-3-yl)vinyl)-1h-pyrazol-1-yl)benzoicacid。
取0.35g(1.0mmol)1,7-(3-吲哚基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮和0.23g(1.5mmol)對羧基苯肼于100ml干燥的三口瓶中，隨后加入30ml甲醇到反應瓶中。在n2保護下，加入4ml的乙酸并攪拌，升高溫度至50℃，反應20h。反應結束后，冷卻，減壓蒸除甲醇和乙酸，得到紅黑色油狀物。將油狀物倒入攪拌的冰水中，有固體析出，抽濾，隨后用過量的水洗滌濾餅，干燥后得粗產物。干法柱層析，得純產品0.32g。產品為淡黃色固體，產率68.0%。熔點：275-278℃。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:13.13(s,1h),11.48(s,1h),11.38(s,1h),8.15(d,j=8.6hz,2h),7.95(d,j=7.6hz,1h),7.71-7.77(m,5h),7.54(d,j=6.0hz,1h),7.50(d,j=6.4hz,1h),7.45(d,j=7.8hz,2h),7.10-7.20(m,5h),7.05(d,j=16.6hz,1h),6.94(d,j=16.2hz,1h)。esi-ms[m-1]-(m/z:469.2)。
實施例(li)2.化合(he)物的抗菌活性測定
采用抑菌圈測定法對所合成的類似物進行抗菌活性測定，并以黃藤素作為陽性對照藥。選用n,n-二甲基甲酰胺(dmf)為溶劑，將黃藤素和所合成的化合物配置成濃度為2×10－3mol/l的溶液(ye)。在此濃度下(xia)來比較各化合物對(dui)大腸桿菌(jun)、枯草桿菌(jun)和金黃(huang)色葡萄球菌(jun)的抑制活性。
用1ml無菌蒸餾水將已活化好的菌株洗出并稀釋搖勻，制成菌液，使其含菌數為106-107cfu/ml。在超凈工作臺(tai)中，移取1ml的(de)(de)(de)菌(jun)液(ye)于(yu)已滅菌(jun)的(de)(de)(de)瓊(qiong)脂培(pei)(pei)(pei)養基上，使(shi)用(yong)玻璃涂布環均勻的(de)(de)(de)把菌(jun)液(ye)涂布在瓊(qiong)脂平板(ban)上，倒置培(pei)(pei)(pei)養1h，隨后將含有10μl樣(yang)品(pin)的(de)(de)(de)直徑為(wei)(wei)(wei)6mm的(de)(de)(de)濾(lv)紙(zhi)(zhi)片(pian)(pian)放(fang)在平板(ban)上。每(mei)個(ge)平板(ban)放(fang)3個(ge)濾(lv)紙(zhi)(zhi)片(pian)(pian)，其中1個(ge)濾(lv)紙(zhi)(zhi)片(pian)(pian)為(wei)(wei)(wei)含有dmf的(de)(de)(de)濾(lv)紙(zhi)(zhi)片(pian)(pian)，作空白對照試(shi)驗。把平板(ban)放(fang)入恒溫(wen)培(pei)(pei)(pei)養箱中，設定(ding)溫(wen)度為(wei)(wei)(wei)37℃，在濕(shi)潤的(de)(de)(de)環境下培(pei)(pei)(pei)養24h。培(pei)(pei)(pei)養孵化后，用(yong)直尺測(ce)(ce)得(de)每(mei)個(ge)濾(lv)紙(zhi)(zhi)片(pian)(pian)的(de)(de)(de)抑菌(jun)圈直徑，并(bing)計(ji)算樣(yang)品(pin)抑菌(jun)圈直徑的(de)(de)(de)平均值。抗(kang)菌(jun)活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)大(da)小(xiao)可(ke)通(tong)過抑菌(jun)圈直徑的(de)(de)(de)大(da)小(xiao)來(lai)判斷。一般判定(ding)結果為(wei)(wei)(wei)：<10mm表(biao)示輕度敏感(gan)(gan)，10-15mm表(biao)示中度敏感(gan)(gan)，>15mm表(biao)示高度敏感(gan)(gan)。最(zui)終實(shi)驗測(ce)(ce)得(de)的(de)(de)(de)抑菌(jun)圈數據如(ru)表(biao)1所示。
表1受試化合物的抑菌作用
從表1的結果可以看出，在樣品濃度為2×10－3mol/l時，化(hua)合物h15和(he)h16對大腸桿(gan)菌(jun)(革(ge)蘭氏陰性菌(jun))、枯草(cao)桿(gan)菌(jun)(革(ge)蘭氏陽性菌(jun))和(he)金黃色(se)葡萄球菌(jun)(革(ge)蘭氏陽性菌(jun))均有較顯著的(de)抑制作(zuo)用(yong)，在同(tong)等(deng)條件下對這三種試驗菌(jun)的(de)抑制作(zuo)用(yong)均比黃藤素強(qiang)，具有較強(qiang)的(de)應用(yong)價(jia)值。
實施例(li)3.化(hua)合物的抗腫瘤活性(xing)測定
采用mtt法測定。將待測的腫瘤細胞常規接種于完全培養基中，在37℃和5%的co2飽和濕度下，對細胞進行培養、擴增。細胞經過0.25%胰蛋白酶消化后，向其中加入培養液將其稀釋成1×105個/ml瘤細(xi)胞(bao)懸液(ye)(胎盼藍染色(se)，活細(xi)胞(bao)數均＞95%)，供試驗(yan)用。
在(zai)96孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)無菌培(pei)(pei)養板上分別設陰性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)、陽性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)和待(dai)(dai)測(ce)(ce)物的(de)(de)不同(tong)濃(nong)(nong)度(du)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，用(yong)dmso將(jiang)待(dai)(dai)測(ce)(ce)化(hua)合物配成各種(zhong)不同(tong)濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)稀(xi)液(ye)，同(tong)時每個濃(nong)(nong)度(du)設3個復孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)。在(zai)96孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)無菌培(pei)(pei)養板上分別接種(zhong)制備(bei)好(hao)的(de)(de)細胞懸液(ye)，培(pei)(pei)養24h后，向其中加(jia)入(ru)(ru)不同(tong)濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)待(dai)(dai)測(ce)(ce)化(hua)合物及陽性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)藥。將(jiang)等(deng)量的(de)(de)培(pei)(pei)養液(ye)加(jia)入(ru)(ru)到陰性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)內，隨后在(zai)培(pei)(pei)養箱中繼續培(pei)(pei)養。分別于72h后取(qu)出，每孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)加(jia)入(ru)(ru)mtt(四甲基偶(ou)氮(dan)唑藍)20μl，繼續培(pei)(pei)養4h，取(qu)出后，將(jiang)其放入(ru)(ru)離心機(ji)，然后離心，棄掉上清液(ye)。在(zai)每孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)中分別加(jia)入(ru)(ru)150μl的(de)(de)dmso，震動(dong)后，將(jiang)紫藍色甲瓚結(jie)晶徹底(di)溶解。用(yong)酶標(biao)儀與562nm處測(ce)(ce)定各孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)的(de)(de)od值(zhi)(zhi)，并最終通過計(ji)算得出ic50值(zhi)(zhi)。
選(xuan)用細(xi)胞株(zhu)為食管癌ec109和胃癌mgc803，以5-fu(5-氟尿嘧啶)和順鉑為陽性對(dui)(dui)照藥(yao)。最(zui)終各(ge)化合(he)物(wu)對(dui)(dui)細(xi)胞株(zhu)的ic50值見表2。
表2受(shou)試(shi)化(hua)合物對腫(zhong)瘤細胞增殖的抑制作用
從表2可(ke)以看出，化(hua)合(he)物(wu)(wu)h15對(dui)ec109食管癌細胞(bao)株有一定的抑制作用，化(hua)合(he)物(wu)(wu)h16則(ze)對(dui)兩(liang)種細胞(bao)株均(jun)有一定的抑制作用且其ic50值(zhi)接近(jin)陽性對(dui)照(zhao)藥，說明化(hua)合(he)物(wu)(wu)有較(jiao)強的抗腫(zhong)瘤(liu)活性。