本發明屬于抗腫瘤藥物(wu)(wu)的(de)(de)合成技術領域，具體涉及(ji)一類新型的(de)(de)靛紅(hong)腙雜合4-芳(fang)氨基-6-(5-甲(jia)酰(xian)基呋喃-2-基)喹唑啉合成的(de)(de)靛紅(hong)衍生物(wu)(wu)，以及(ji)它(ta)們(men)的(de)(de)制備方法和它(ta)們(men)在制備抗腫瘤藥物(wu)(wu)中的(de)(de)用途(tu)。

背景技術：

癌(ai)癥是(shi)人(ren)(ren)類(lei)健(jian)康的(de)威脅因(yin)素之一，傳統的(de)抗癌(ai)藥(yao)多是(shi)細(xi)(xi)胞(bao)毒(du)類(lei)藥(yao)物(wu)，這(zhe)類(lei)藥(yao)物(wu)在殺傷癌(ai)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)同時，對(dui)正常的(de)人(ren)(ren)體(ti)組織細(xi)(xi)胞(bao)也有極大(da)的(de)毒(du)副作(zuo)(zuo)用，為(wei)了提高藥(yao)物(wu)對(dui)癌(ai)細(xi)(xi)胞(bao)作(zuo)(zuo)用的(de)選擇(ze)性，人(ren)(ren)們已(yi)開(kai)始關注針對(dui)關鍵基因(yin)、調控分子和特定細(xi)(xi)胞(bao)受體(ti)為(wei)治療(liao)靶(ba)點(dian)的(de)藥(yao)物(wu)的(de)研究。

研究表明，當酪氨(an)酸激酶(mei)過度活化(hua)(hua)時，細胞生長調控失去控制(zhi)，死亡受阻(zu)，始(shi)終處(chu)于增殖狀(zhuang)態(tai)，最后導致惡性腫瘤的發生。因此，抑制(zhi)酪氨(an)酸激酶(mei)活性，阻(zu)斷其活化(hua)(hua)的信號傳導路徑成為治療腫瘤的新途徑之一。

表皮生長因子受體(EGFR)酪(lao)(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激(ji)酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)在腫(zhong)(zhong)瘤(liu)的(de)治(zhi)療中已發揮(hui)了重要的(de)作用，其通過與ATP競(jing)爭(zheng)性地與受體酪(lao)(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激(ji)酶(mei)結合，使酪(lao)(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激(ji)酶(mei)的(de)催化(hua)活性和酪(lao)(lao)氨(an)酸(suan)(suan)激(ji)酶(mei)自身酪(lao)(lao)氨(an)酸(suan)(suan)殘基的(de)磷(lin)酸(suan)(suan)化(hua)受到(dao)抑(yi)制(zhi)，從而(er)(er)阻斷下游信號(hao)轉導通路，進而(er)(er)抑(yi)制(zhi)腫(zhong)(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)增(zeng)殖，加速腫(zhong)(zhong)瘤(liu)細(xi)胞(bao)凋亡，抑(yi)制(zhi)腫(zhong)(zhong)瘤(liu)浸(jin)潤和轉移。

人們已經發(fa)(fa)現了一(yi)些小分子(zi)(zi)表(biao)皮(pi)生(sheng)長因子(zi)(zi)(EGFR)酪(lao)氨(an)(an)酸(suan)激(ji)酶(mei)(mei)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)，如黃酮、異黃酮類(lei)(lei)、喹(kui)唑啉(lin)(lin)類(lei)(lei)、喹(kui)啉(lin)(lin)類(lei)(lei)、嘧啶類(lei)(lei)、吲哚類(lei)(lei)和(he)吲唑類(lei)(lei)等(deng)(deng)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)。其(qi)中(zhong)(zhong)，活(huo)(huo)性(xing)(xing)較(jiao)高、選擇(ze)性(xing)(xing)較(jiao)好(hao)的(de)(de)一(yi)類(lei)(lei)小分子(zi)(zi)酪(lao)氨(an)(an)酸(suan)激(ji)酶(mei)(mei)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)是4-芳氨(an)(an)基喹(kui)唑啉(lin)(lin)類(lei)(lei)化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)，如已上(shang)市(shi)的(de)(de)抗(kang)腫(zhong)(zhong)瘤化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)拉帕替(ti)(ti)尼(Lapatinib)、埃羅(luo)替(ti)(ti)尼(Erlotinib，Tarceva)、吉非替(ti)(ti)尼(Gefitinib，Iressa)和(he)EKB-2569等(deng)(deng)。這些藥(yao)(yao)物(wu)(wu)在腫(zhong)(zhong)瘤的(de)(de)治(zhi)療(liao)(liao)(liao)中(zhong)(zhong)發(fa)(fa)揮(hui)了良好(hao)的(de)(de)作(zuo)(zuo)用(yong)，但長期(qi)使用(yong)后會產生(sheng)明顯的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)耐受性(xing)(xing)，給腫(zhong)(zhong)瘤的(de)(de)后期(qi)治(zhi)療(liao)(liao)(liao)帶來(lai)困難。因此，發(fa)(fa)現新的(de)(de)抗(kang)腫(zhong)(zhong)瘤化(hua)合(he)(he)物(wu)(wu)以(yi)降低藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)毒副作(zuo)(zuo)用(yong)和(he)克(ke)服(fu)腫(zhong)(zhong)瘤細胞(bao)的(de)(de)耐藥(yao)(yao)性(xing)(xing)仍具有(you)重要(yao)的(de)(de)意義(yi)。近年來(lai)，以(yi)EGFR酪(lao)氨(an)(an)酸(suan)激(ji)酶(mei)(mei)為(wei)(wei)作(zuo)(zuo)用(yong)靶點(dian)設計合(he)(he)成(cheng)抗(kang)腫(zhong)(zhong)瘤藥(yao)(yao)物(wu)(wu)成(cheng)為(wei)(wei)研究熱點(dian)之(zhi)一(yi)。其(qi)中(zhong)(zhong)，拉帕替(ti)(ti)尼作(zuo)(zuo)為(wei)(wei)一(yi)種(zhong)新型的(de)(de)可(ke)逆酪(lao)氨(an)(an)酸(suan)激(ji)酶(mei)(mei)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)，在治(zhi)療(liao)(liao)(liao)多種(zhong)惡(e)性(xing)(xing)腫(zhong)(zhong)瘤尤其(qi)是晚期(qi)的(de)(de)乳腺癌(ai)方(fang)面具有(you)較(jiao)好(hao)的(de)(de)療(liao)(liao)(liao)效(xiao)(xiao)。靛紅是一(yi)個(ge)很重要(yao)的(de)(de)醫藥(yao)(yao)中(zhong)(zhong)間體與原料，靛紅及其(qi)衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu)具有(you)多種(zhong)生(sheng)理(li)活(huo)(huo)性(xing)(xing)。C-3取代靛紅衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu)的(de)(de)生(sheng)理(li)活(huo)(huo)性(xing)(xing)包(bao)括抗(kang)癌(ai)、抗(kang)病(bing)毒、抗(kang)驚(jing)厥等(deng)(deng)。當C-3為(wei)(wei)腙或(huo)亞胺取代時，可(ke)以(yi)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)酪(lao)氨(an)(an)酸(suan)激(ji)酶(mei)(mei)活(huo)(huo)性(xing)(xing)。藥(yao)(yao)效(xiao)(xiao)基團的(de)(de)雜合(he)(he)是一(yi)種(zhong)有(you)效(xiao)(xiao)的(de)(de)、常用(yong)的(de)(de)發(fa)(fa)現新藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)方(fang)法(fa)，兩個(ge)或(huo)兩個(ge)以(yi)上(shang)的(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)片段(duan)的(de)(de)雜合(he)(he)，有(you)互(hu)補的(de)(de)藥(yao)(yao)效(xiao)(xiao)功(gong)能或(huo)不同的(de)(de)作(zuo)(zuo)用(yong)機制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，通常表(biao)現出協同的(de)(de)作(zuo)(zuo)用(yong)。

技術實現要素：

本發明所要(yao)解決的(de)技術問題在于(yu)提供(gong)一類(lei)新(xin)的(de)具有抗腫瘤活(huo)性的(de)靛紅腙雜合(he)4-芳氨基(ji)-6-(5-甲酰基(ji)呋喃-2-基(ji))喹唑啉合(he)成的(de)靛紅衍生(sheng)物，以及(ji)這些化(hua)合(he)物在制備抗腫瘤藥物中的(de)用(yong)途。

解決上述(shu)技術問題所(suo)采用的技術方案(an)是：這類靛紅衍生物的結構式(shi)如下所(suo)示：

式中(zhong)X代(dai)表氫、氟(fu)、氯(lv)、溴、碘中(zhong)的任(ren)意(yi)一種，Ar代(dai)表3-乙炔基(ji)苯(ben)(ben)基(ji)、4-(E)-丙烯基(ji)苯(ben)(ben)基(ji)、3-氯(lv)-4-(3-氟(fu)芐氧(yang)基(ji))苯(ben)(ben)基(ji)、3-氯(lv)-4-氟(fu)苯(ben)(ben)基(ji)中(zhong)的任(ren)意(yi)一種。

上(shang)述靛紅衍生物(wu)優選下列化合物(wu)A～L中的任(ren)意一(yi)種(zhong)：

A：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-乙炔苯氨基(ji))喹(kui)唑(zuo)啉-6-基(ji))呋喃-2-基(ji))亞甲基(ji))亞肼(jing)基(ji))吲哚啉-2-酮

B：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-乙炔(gui)苯氨(an)基)喹(kui)唑啉-6-基)呋(fu)喃-2-基)亞甲基)亞肼(jing)基)-5-氟(fu)吲哚啉-2-酮

C：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-乙炔苯氨(an)基(ji))喹唑啉(lin)(lin)-6-基(ji))呋喃-2-基(ji))亞(ya)甲基(ji))亞(ya)肼基(ji))-5-氯吲哚啉(lin)(lin)-2-酮

D：(E)-3-(((E)-(5-(4-(4-(E)-丙烯基(ji)苯氨(an)基(ji))喹(kui)唑啉-6-基(ji))呋喃-2-基(ji))亞(ya)甲(jia)基(ji))亞(ya)肼基(ji))吲哚啉-2-酮(tong)

E：(E)-3-(((E)-(5-(4-(4-(E)-丙烯基苯氨基)喹(kui)唑啉(lin)-6-基)呋喃-2-基)亞(ya)甲基)亞(ya)肼基)-5-氟(fu)吲哚啉(lin)-2-酮

F：(E)-3-(((E)-(5-(4-(4-(E)-丙烯(xi)基(ji)(ji)苯氨基(ji)(ji))喹唑啉(lin)(lin)-6-基(ji)(ji))呋喃-2-基(ji)(ji))亞甲基(ji)(ji))亞肼基(ji)(ji))-5-氯吲哚啉(lin)(lin)-2-酮

G：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯(lv)-4-(3-氟芐氧基)苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞(ya)(ya)甲(jia)基)亞(ya)(ya)肼基)吲哚(duo)啉-2-酮(tong)

H：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-(3-氟(fu)芐氧基(ji)(ji))苯氨(an)基(ji)(ji))喹唑啉(lin)-6-基(ji)(ji))呋(fu)喃-2-基(ji)(ji))亞甲基(ji)(ji))亞肼基(ji)(ji))-5-氟(fu)吲(yin)哚啉(lin)-2-酮

I：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-(3-氟芐氧基(ji)(ji))苯(ben)氨基(ji)(ji))喹唑啉-6-基(ji)(ji))呋喃-2-基(ji)(ji))亞甲基(ji)(ji))亞肼基(ji)(ji))-5-氯吲(yin)哚啉-2-酮(tong)

J：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-氟苯氨基)喹唑啉-6-基)呋喃-2-基)亞甲基)亞肼基)吲哚(duo)啉-2-酮

K：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-氟(fu)苯氨基(ji)(ji)(ji)(ji))喹唑啉(lin)-6-基(ji)(ji)(ji)(ji))呋(fu)喃-2-基(ji)(ji)(ji)(ji))亞甲基(ji)(ji)(ji)(ji))亞肼基(ji)(ji)(ji)(ji))-5-氟(fu)吲哚啉(lin)-2-酮

L：(E)-3-(((E)-(5-(4-(3-氯-4-氟(fu)苯(ben)氨(an)基(ji))喹唑啉(lin)-6-基(ji))呋喃-2-基(ji))亞(ya)甲基(ji))亞(ya)肼基(ji))-5-氯吲哚啉(lin)-2-酮(tong)

上述靛紅衍(yan)生(sheng)物的合成(cheng)路線(xian)和合成(cheng)方法如下：

將式2所(suo)示的靛(dian)(dian)紅腙與式1所(suo)示的4-芳氨基(ji)-6-(5-甲酰基(ji)呋喃-2-基(ji))喹唑啉在(zai)醋(cu)酸存在(zai)下(xia)縮合即可得到式3所(suo)示的靛(dian)(dian)紅衍生物。

本(ben)發(fa)明靛(dian)紅腙(zong)雜合4-芳(fang)氨基-6-(5-甲酰(xian)基呋喃-2-基)喹唑啉合成的靛(dian)紅衍生物在(zai)制(zhi)(zhi)備抗腫瘤藥(yao)物中的用(yong)途，其按常規藥(yao)用(yong)制(zhi)(zhi)劑，與藥(yao)學上可接受(shou)的載體按照各(ge)種制(zhi)(zhi)劑的常規制(zhi)(zhi)備工藝制(zhi)(zhi)成，可以是(shi)片劑、顆粒劑、膠囊劑等(deng)。

上述的(de)腫瘤為(wei)人(ren)(ren)皮膚鱗(lin)狀癌(ai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)A431、人(ren)(ren)肺癌(ai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)NCI-H1975、人(ren)(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)SW480、人(ren)(ren)非小細(xi)(xi)胞(bao)(bao)肺癌(ai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)A549中的(de)任意一種(zhong)。

本發明(ming)(ming)靛(dian)紅衍(yan)生(sheng)物(wu)的(de)合成方法簡單，對腫瘤細(xi)胞(bao)的(de)增(zeng)殖具有(you)良好(hao)的(de)抑(yi)制(zhi)(zhi)作用(yong)(yong)，可用(yong)(yong)于制(zhi)(zhi)備抗腫瘤藥(yao)物(wu)，既可以(yi)獨(du)自用(yong)(yong)藥(yao)，也可與其它藥(yao)物(wu)聯合使(shi)用(yong)(yong)；其中化合物(wu)A、B、C、G、H對人(ren)皮膚鱗狀細(xi)胞(bao)癌細(xi)胞(bao)株A431的(de)增(zeng)殖具有(you)明(ming)(ming)顯(xian)的(de)抑(yi)制(zhi)(zhi)作用(yong)(yong)，其效果明(ming)(ming)顯(xian)優于臨床使(shi)用(yong)(yong)的(de)抗腫瘤藥(yao)物(wu)拉帕替尼。

具體實施方式

下面結合實施例對本(ben)發明作(zuo)進(jin)一步詳(xiang)細(xi)說明，但本(ben)發明的保護范(fan)圍不(bu)僅(jin)限于(yu)這些實施例。

下面(mian)實(shi)施例中(zhong)所(suo)用(yong)(yong)的(de)4-(3-乙炔基(ji)(ji)(ji)苯(ben)(ben)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji))-6-(5-甲(jia)酰(xian)基(ji)(ji)(ji)呋(fu)(fu)喃(nan)-2-基(ji)(ji)(ji))喹唑啉、4-[4-(E)-丙(bing)烯基(ji)(ji)(ji)苯(ben)(ben)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)]-6-(5-甲(jia)酰(xian)基(ji)(ji)(ji)呋(fu)(fu)喃(nan)-2-基(ji)(ji)(ji))喹唑啉及4-(3-氯-4-氟苯(ben)(ben)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji))-6-(5-甲(jia)酰(xian)基(ji)(ji)(ji)呋(fu)(fu)喃(nan)-2-基(ji)(ji)(ji))喹唑啉參(can)考文獻(xian)[化(hua)學(xue)通報，2016,79(4):360～365]中(zhong)的(de)方(fang)法(fa)合成；4-[3-氯-4-(3-氟芐氧(yang)基(ji)(ji)(ji))苯(ben)(ben)氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)]-6-(5-甲(jia)酰(xian)基(ji)(ji)(ji)呋(fu)(fu)喃(nan)-2-基(ji)(ji)(ji))喹唑啉參(can)考文獻(xian)[中(zhong)國藥科(ke)大學(xue)學(xue)報,2010,41(4):317～320]中(zhong)的(de)方(fang)法(fa)合成。其它所(suo)用(yong)(yong)試劑均為(wei)分析純。化(hua)合物結構確定(ding)(ding)所(suo)用(yong)(yong)的(de)核(he)磁(ci)共(gong)振(zhen)數(shu)(shu)據(ju)由Bruker Avance300、400、600超導(dao)核(he)磁(ci)共(gong)振(zhen)儀(yi)測(ce)定(ding)(ding)，TMS作(zuo)為(wei)內標；紅外光譜(pu)數(shu)(shu)據(ju)采用(yong)(yong)Nicolet170SXFT-IR紅外光譜(pu)儀(yi)測(ce)定(ding)(ding)；熔點采用(yong)(yong)X-6顯微熔點測(ce)定(ding)(ding)儀(yi)(北京泰克儀(yi)器有限公司)測(ce)定(ding)(ding)(溫度未進行校正)；質譜(pu)數(shu)(shu)據(ju)用(yong)(yong)Bruker Esquire3000plus質譜(pu)儀(yi)測(ce)定(ding)(ding)。

實施例1

合成化合物A

將0.17g(0.5mmol)4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉、0.08g(0.5mmol)(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮、0.5mL醋酸、10mL乙醇和2mL N,N-二甲基甲酰胺加入到反應瓶中，在80℃下回流反應6小時，反應完后冷卻至室溫，抽濾，用乙醇沖洗濾餅，將濾餅在二甲亞砜中重結晶，得到紅色固體即化合物A0.18g，其收率為73.5％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₂₉H₁₈N₆O₂)m/z[M+H]⁺:483.1581(計算值483.1569)；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.85(s,1H),10.15(s,1H),9.02(s,1H),8.68(s,2H),8.35(d,J＝8.0Hz,2H),8.08(s,1H),8.02(d,J＝8.3Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.59(d,J＝3.4Hz,1H),7.47(d,J＝4.6Hz,1H),7.42(d,J＝4.6Hz,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,1H),7.28(d,J＝7.5Hz,1H),7.06(t,J＝7.4Hz,1H),6.91(d,J＝7.9Hz,1H),4.25(s,1H)；¹³C NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.2,158.2,157.2,155.4,152.1,151.9,150.4,149.7,145.3,139.8,134.1,130.1,129.8,129.4,129.3,127.3,127.2,125.3,123.1,122.9,122.8,122.3,119.5,117.2,116.0,111.1,111.0,83.8,81.1；IR ν_max(KBr)cm^-1:3545,3417,3235,2062,1639,1617,1487,1396,1174,623。

實施例2

合成化合物B

在實施例1中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氟吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物B 0.18g，其收率為72.6％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₂₉H₁₇FN₆O₂)m/z[M+H]⁺:501.1491(計算值501.1475)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.83(s,1H),10.05(s,1H),9.00(s,1H),8.67(s,1H),8.63(s,1H),8.26(d,J＝8.8Hz,1H),8.07(d,J＝9.2Hz,2H),7.95(d,J＝8.3Hz,1H),7.85(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(d,J＝3.3Hz,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,2H),7.26(d,J＝7.9Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,1H),6.86(dd,J＝8.4,4.1Hz,1H),4.20(s,1H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.8,158.4,157.7,157.0,155.9(d,¹J_C-F＝277.9Hz),152.3,151.6(d,⁴J_C-F＝2.5Hz),150.0,149.1,141.1,139.2,129.0,128.9,128.8,127.0,126.7,125.2,122.9,121.8,120.0,119.9,119.2,117.2(d,³J_C-F＝9.2Hz),116.2(d,²J_C-F＝26.4Hz),115.4(d,²J_C-F＝12.5Hz),111.6(d,³J_C-F＝7.7Hz),110.6,83.4,80.6；IRν_max(KBr)cm^-1:3563,3416,3235,2061,1718,1698,1616,1519,1035,624。

實施例3

合成化合物C

在實施例1中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氯吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物C 0.20g，其收率為76.3％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₂₉H₁₇ClN₆O₂)m/z[M+H]⁺:517.1182(計算值:517.1180)；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.90(s,1H),9.96(s,1H),8.93(s,1H),8.64(s,1H),8.59(s,1H),8.33(s,1H),8.24(d,J＝8.7Hz,1H),8.00(s,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,1H),7.50(s,1H),7.42(t,J＝7.9Hz,1H),7.37(s,2H),7.26(d,J＝7.4Hz,1H),6.84(d,J＝8.2Hz,1H),4.20(s,1H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.5,157.8,157.0,155.6,155.0,152.4,150.0,149.1,143.5,143.4,139.2,132.9,129.1,128.9,127.1,127.0,126.7,126.1,126.0,125.4,123.2,121.8,119.3,118.0,115.5,112.2,110.5,83.4,80.6；IRν_max(KBr)cm^-1:3555,3416,3235,2062,1719,1638,1616,1396,1174,623。

實施例4

合成化合物D

在實施例1中，所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉用等摩爾的4-[4-(E)-丙烯基苯氨基]-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物D 0.18g，其收率為72.1％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₃₀H₂₂N₆O₂)m/z[M+H]⁺:499.1900(計算值:499.1882)；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.85(s,1H),10.08(s,1H),8.98(s,1H),8.64(s,1H),8.60(s,1H),8.30(d,J＝8.0Hz,2H),7.87(d,J＝8.7Hz,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,2H),7.56(d,J＝3.3Hz,1H),7.41(d,J＝8.6Hz,3H),7.36(d,J＝7.7Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.8Hz,1H),6.41(d,J＝15.9Hz,1H),6.25(dq,J＝13.3,6.1Hz,1H),1.86(d,J＝6.1Hz,3H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.8,164.3,157.7,156.7,154.9,151.6,151.1,149.6,149.2,144.9,137.6,133.6,133.3,130.4,129.6,129.1,128.5,126.7,125.8,124.5,122.7,122.5,122.4,122.0,119.1,116.8,115.5,110.6,110.4,18.2；IRν_max(KBr)cm^-1:3416,3001,2062,1617,1518,1487,1397,1175,787,622。

實施例5

合成化合物E

在實施例4中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氟吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例4相同，得到紅色固體即化合物E 0.20g，其收率為75.8％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₃₀H₂₁FN₆O₂)m/z[M+H]⁺:517.1795(計算值:517.1788)；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.84(s,1H),10.00(s,1H),9.00(s,1H),8.67(s,1H),8.58(s,1H),8.25(d,J＝9.9Hz,1H),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.59(d,J＝3.6Hz,1H),7.42(d,J＝3.7Hz,1H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(t,J＝8.9Hz,1H),6.89(dd,J＝8.5,4.2Hz,1H),6.41(d,J＝15.7Hz,1H),6.26(dq,J＝13.3,6.3Hz,1H),1.86(d,J＝6.3Hz,3H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.8,158.4,157.6,157.1,156.8,155.1,152.3,150.7(d,¹J_C-F＝250.0Hz),149.1,141.2,137.6,133.2,130.4,128.7(d,²J_C-F＝16.6Hz),126.6,125.7,125.6,124.5,122.9,122.6(d,²J_C-F＝17.3Hz),120.0,119.9,119.3,117.2(d,³J_C-F＝9.1Hz),116.2,116.1,115.5,111.6(d,³J_C-F＝8.1Hz),110.5,18.2；IRν_max(KBr)cm^-1:3417,2986,2062,1617,1486,1397,1173,1003,787,622。

實施例6

合成化合物F

在實施例4中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氯吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例4相同，得到紅色固體即化合物F 0.21g，其收率為79.3％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₃₀H₂₁ClN₆O₂)m/z[M+H]⁺:533.1509(計算值:533.1493)；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.96(s,1H),10.03(s,1H),9.04(s,1H),8.71(s,1H),8.59(s,1H),8.41(s,1H),8.32(d,J＝7.7Hz,1H),7.85(d,J＝8.2Hz,1H),7.78(d,J＝6.7Hz,2H),7.58(s,1H),7.43-7.38(m,4H),6.91(d,J＝8.0Hz,1H),6.43(d,J＝15.8Hz,1H),6.28(dd,J＝15.8,5.6Hz,1H),1.87(d,J＝5.6Hz,3H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.5,157.8,157.1,152.3,149.9,149.0,143.5,141.3,140.7,140.2,133.3,132.9,130.4,129.1,128.8,128.6,126.6,126.1,125.7,124.5,123.5,122.8,122.7,122.6,119.5,119.4,118.1,112.2,110.4,18.2；IRν_max(KBr)cm^-1:3448,3409,2990,1722,1614,1515,1394,1178,786,624。

實施例7

合成化合物G

在實施例1中，所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉用等摩爾的4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)苯氨基]-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物G 0.21g，其收率為69.3％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₃₄H₂₂ClFN₆O₃)m/z[M+H]⁺:617.1512(計算值:617.1504)；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.85(s,1H),10.07(s,1H),8.97(s,1H),8.65(s,1H),8.61(s,1H),8.31(m,2H),8.03(d,J＝2.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.79(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.57(d,J＝3.6Hz,1H),7.49(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.9Hz,1H),7.43(d,J＝3.6Hz,1H),7.36–7.33(m,2H),7.29(d,J＝9.0Hz,1H),7.19(t,J＝8.5Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.7Hz,1H),5.27(s,2H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.3,162.7(d,¹J_C-F＝243.8Hz),158.2,157.3,155.5,152.1,151.7,150.4,150.3,149.7,145.4,140.1(d,³J_C-F＝7.5Hz),134.1,133.6,131.0(d,³J_C-F＝8.3Hz),130.2,129.7,129.3,127.2,124.5,123.8(d,⁴J_C-F＝2.5Hz),122.9,122.7,121.6,119.4,117.3,115.9,115.2(d,²J_C-F＝20.8Hz),114.8,114.7,114.5(d,²J_C-F＝22.0Hz),111.1,110.9,69.9；IR ν_max(KBr)cm^-1:3550,3416,2062,1638,1617,1487,1396,1174,787,622。

實施例8

合成化合物H

在實施例7中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氟吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例7相同，得到紅色固體即化合物H 0.23g，其收率為72.1％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₃₄H₂₁ClF₂N₆O₃)m/z[M+H]⁺:635.1418(計算值:635.1410)；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.85(s,1H),9.99(s,1H),8.95(s,1H),8.66(s,1H),8.58(s,1H),8.24(d,J＝8.6Hz,1H),8.08(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),8.01(d,J＝2.0Hz,1H),7.82(d,J＝8.6Hz,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,1H),7.57(d,J＝3.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.3Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H)，7.40(d,J＝3.3Hz,1H),7.36–7.30(m,2H),7.26(d,J＝9.0Hz,1H),7.19(d,J＝8.9Hz,1H),6.88(dd,J＝8.4,4.2Hz,1H),5.25(s,2H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.8,162.2(d,¹J_C-F＝243.6Hz),158.4,157.6,157.0,155.9(d,¹J_C-F＝265.2Hz),152.3,151.7,149.8,149.7,149.1,141.1,139.6(d,³J_C-F＝7.9Hz),132.9,130.5(d,³J_C-F＝8.4Hz),128.8(d,²J_C-F＝30.9Hz),126.6,124.2,123.3(d,⁴J_C-F＝2.6Hz),122.9,122.4,121.1,120.0(d,⁴J_C-F＝2.6Hz),119.9(d,²J_C-F＝24.1Hz),119.1,117.2(d,³J_C-F＝9.6Hz),116.3,115.3,114.7(d,²J_C-F＝21.1Hz),114.2,114.0(d,²J_C-F＝21.9Hz),111.5(d,³J_C-F＝7.4Hz),110.4,69.4；IR ν_max(KBr)cm^-1:3549,3416,3235,2062,1638,1617,1488,1396,1174,623。

實施例9

合成化合物I

在實施例7中，所用的(Z)-3-腙吲哚啉-2-酮用等摩爾的(Z)-3-腙-5-氯吲哚啉-2-酮替換，其他步驟與實施例7相同，得到紅色固體即化合物I 0.26g，其收率為78.7％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₃₄H₂₁Cl₂FN₆O₃)m/z[M+H]⁺:651.1118(計算值:651.1114)；¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.93(s,1H),9.93(s,1H),8.92(s,1H),8.66(s,1H),8.55(s,1H),8.36(s,1H),8.24(d,J＝9.1Hz,1H),7.97(s,1H),7.78(d,J＝8.7Hz,1H),7.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(d,J＝3.4Hz,1H),7.50(d,J＝7.7Hz,1H),7.47(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.37–7.33(m,2H),7.26(d,J＝8.9Hz,1H),7.19(t,J＝8.9Hz,1H),6.87(d,J＝8.3Hz,1H),5.26(s,2H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.5,162.2(d,¹J_C-F＝243.7Hz),157.7,157.0,155.0,152.5,151.6,149.8,148.9,143.4,139.6(d,³J_C-F＝7.4Hz),132.9,132.7,130.5(d,³J_C-F＝8.4Hz),129.2,128.6(d,²J_C-F＝24.2Hz),126.5,126.0,124.3,123.4,123.3(d,⁴J_C-F＝2.6Hz),122.5,121.0,119.2,118.0,115.3,114.7(d,²J_C-F＝20.8Hz),114.3,114.2,114.1,113.9,112.0,110.3,69.4；IR ν_max(KBr)cm^-1:3551,3417,2062,1617,1487,1397,1174,1002,787,622。

實施例10

合成化合物J

在實施例1中，所用的4-(3-乙炔基苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉用等摩爾的4-(3-氯-4-氟苯氨基)-6-(5-甲酰基呋喃-2-基)喹唑啉替換，其他步驟與實施例1相同，得到紅色固體即化合物J 0.21g，其收率為82.5％，m.p.>280℃，結構表征數據為：HRMS(C₂₇H₁₆ClFN₆O₂)m/z[M+H]⁺:511.1101(計算值:511.1085)；¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.85(s,1H),10.22(s,1H),9.01(s,1H),8.67(s,2H),8.36(d,J＝9.2Hz,1H),8.32(d,J＝7.9Hz,1H),8.19(d,J＝7.5Hz,1H),7.92(t,J＝9.8Hz,2H),7.59(d,J＝3.2Hz,1H),7.51(d,J＝9.2Hz,1H),7.47(d,J＝3.2Hz,1H),7.39(t,J＝7.4Hz,1H),7.04(t,J＝7.5Hz,1H),6.90(d,J＝7.6Hz,1H)；¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.8,157.2(d,¹J_C-F＝159.9Hz),154.9,152.7,151.6,151.2,150.0,149.9,149.3,144.9,136.3,133.7,129.7,129.4,128.9,127.4,127.0,126.9,123.7,122.5(d,³J_C-F＝6.8Hz),122.4,122.3(d,⁴J_C-F＝3.8Hz),118.9,116.7(d,³J_C-F＝6.8Hz),116.6,115.4,110.6(d,²J_C-F＝15.1Hz)；IRν_max(KBr)cm^-1:3554,3508,3382,2986,1622,1498,1413,929,788,611。

實施例11

本(ben)發(fa)明吲(yin)哚(duo)啉-2-酮(tong)衍生物及其在制(zhi)備抗腫瘤藥物中的應用

發明人(ren)分別將(jiang)上述(shu)實(shi)施例合成的(de)化(hua)(hua)合物(wu)A～J作為受(shou)試(shi)(shi)化(hua)(hua)合物(wu)，測(ce)試(shi)(shi)其(qi)對對腫(zhong)瘤細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長(chang)抑制的(de)作用，具體試(shi)(shi)驗情況如下(xia)：

1、細胞株

人皮膚鱗狀癌(ai)(ai)細胞A431、人肺癌(ai)(ai)細胞NCI-H1975、人結腸癌(ai)(ai)細胞SW480、人非小(xiao)細胞肺癌(ai)(ai)細胞A549，均(jun)購自(zi)中國科學(xue)院上海(hai)細胞庫(ku)。

2、試劑和材料

MTT(MPBIO)、96孔(kong)細胞培(pei)養板(CorningCostar)、胎牛血(xue)清(Gibco)、DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle Medium powder,high glucose,Gibco BRL,Gibco)、青霉素、鏈霉素(碧云(yun)天(tian))、胰蛋白酶(mei)消化液(碧云(yun)天(tian))、酶(mei)標儀(PE Enspire)。

3、實驗步驟

(1)細胞培養

A431、NCI-H1975、SW480和A549細胞在完全培養基(含有10％(v/v)胎牛血清、100units/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素和2mnol/L L-谷氨酰胺的DMEM培養基)中，置于飽和濕度、37℃、5％CO₂溫箱(xiang)中培養(yang)。每隔2～3天(tian)傳代一次。

(2)抗(kang)腫(zhong)瘤活性檢測

化合物A～J對腫瘤細胞的生長抑制活性利用MTT法進行測定。分別取對數生長期的人腫瘤細胞，用0.25％的胰蛋白酶消化液消化、離心、重懸后計數，制備細胞懸液，調整細胞懸液濃度為2.0×10⁴～5×10⁴個/mL。取細胞懸液接種于96孔培養板中(100μL/孔)，置飽和濕度、37℃和5％CO₂培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)24h。用(yong)(yong)完(wan)全培(pei)養(yang)基(ji)稀釋(shi)受(shou)試化合物至所需濃(nong)度(du)，加(jia)入(ru)已(yi)接種(zhong)人腫瘤細(xi)胞的96孔(kong)(kong)培(pei)養(yang)板中(zhong)(100μL/孔(kong)(kong))，DMSO終濃(nong)度(du)為(wei)0.5％，置于(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)72h。將MTT加(jia)入(ru)96孔(kong)(kong)板中(zhong)(20μL/孔(kong)(kong))，培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)反應4h。吸棄孔(kong)(kong)內液體，加(jia)入(ru)DMSO(150μL/孔(kong)(kong))，搖(yao)床上震蕩(dang)10min，使甲臜完(wan)全溶解。然后用(yong)(yong)酶(mei)標儀測定570nm波(bo)長處的吸光(guang)度(du)(OD值)，630nm波(bo)長處的吸光(guang)度(du)作為(wei)參比，以相應溶劑作為(wei)對照，計算(suan)細(xi)胞生長抑制率。

受試化(hua)合物(wu)對腫瘤細胞生(sheng)長抑(yi)制率的(de)計算(suan)方式如下：

腫瘤細胞生長抑制率％＝[1-(ODs-OD_NC)/(OD_PC-OD_NC)]×100％

其中：OD_S表示樣品孔的吸光度值(細胞+待測化合物+MTT)；OD_PC表示對照孔的吸光度值(細胞+DMSO+MTT)；OD_NC表示調零孔的吸光度值(完全培養基+DMSO+MTT)；ODs＝OD_570s-OD_630s；OD_PC＝OD_570PC-OD_630PC；OD_NC＝OD_570NC-OD_630NC。

受試化合物對腫瘤細胞生長抑制曲線的擬合及IC₅₀的計算：

采用Graphpad Prism5擬合受試化合物對腫瘤細胞生長的抑制曲線，并得出IC₅₀值。每組設置(zhi)3個復(fu)孔，至少重復(fu)3次。

4、實驗結果

以(yi)臨床使用的抗(kang)腫(zhong)瘤藥物拉帕替尼為陽性(xing)對照(zhao)，實驗結果(guo)如表1所示。

表1受試化合物抑制腫瘤細胞增殖的IC₅₀(μmol/L)

由表1中實驗數據(ju)可見，受(shou)(shou)試(shi)化合物A、B、C、G、H對(dui)人皮膚鱗狀細胞(bao)癌(ai)(ai)細胞(bao)株A431的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)殖具有(you)明顯的(de)(de)(de)抑制(zhi)(zhi)作用，其效果明顯優于拉帕替尼。同時(shi)，受(shou)(shou)試(shi)化合物A對(dui)人肺(fei)癌(ai)(ai)細胞(bao)株A549的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)殖具有(you)明顯的(de)(de)(de)抑制(zhi)(zhi)作用，受(shou)(shou)試(shi)化合物C對(dui)人結腸(chang)癌(ai)(ai)細胞(bao)株SW480和人非小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)(ai)細胞(bao)株NCI-H1975的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)殖具有(you)明顯的(de)(de)(de)抑制(zhi)(zhi)作用。