)
[0033] (2)
[0034] Winitial drug為總的藥物里Wfree drug為未被包載的游1?藥物里Wpolymer為聚合材料 的量。
[0035] 2、粒徑分布、多分散系數(口〇17(1丨8口6^;^7；[11(161，1301)和26七3電位的測定
[0036] 將納米粒用去離子水稀釋，用Zeta電位及激光粒度分析儀測定粒徑、Zeta電位及 PDI，粒徑為IOOnm左右的納米粒容易透過粘膜被吸收，而粒徑較大的納米粒(>200nm)則主 要停留在粘膜表面，透膜吸收較差。
[0037]四、參數考察
[0038] (1)聚合物的種類和濃度對納米粒的影響
[0039] 在其他條件不變的情況下，以納米粒外觀和粒徑為指標，篩選mPEG-PLGA和Mal-PEG-PLGA的型號（PLGA端的PLA: PGA，MW; 50:50，28000; 50:50，38000; 70: 25，38000)以及聚 合物用量。經考察，降低聚合物濃度可使粒徑減小，但是聚合物濃度若低于15mg/ml，則會影 響納米粒的成形性，聚合物的濃度為20mg/ml，型號為PLA = PGA 50: 50MW 38000時粒徑顯著 小于其他型號的化合物(P〈〇.05)，見表1所示。
[0040]表 1
L〇〇42J (2)乳化劑的種類和用量對納米粒性能參數的影響
[0043]考察PVA和膽酸鈉兩種乳化劑并篩選其用量。若將外水相中的乳化劑由膽酸鈉換 成PVA或將擴散相中的穩定劑由膽酸鈉換成PVA，則納米粒均不成形，因此選用膽酸鈉為外 水相中的乳化劑和擴散相中的穩定劑，將外水相中由1.5 % (w/v)的膽酸鈉降低為I % (w/ V)，對粒徑無明顯影響(P>0.05)，因此外水相中膽酸鈉濃度選擇為1%-1.5% (w/v)。
[0044] (3)內水相體積對納米粒性能參數的影響
[0045]內水相分別為50,100,200μ1時，對納米粒成形和粒徑無明顯影響(P>0.05)，若想 加大投藥量，可以選擇200μ1的內水相。
[0046 ] (4)投藥量對納米粒性能參數的影響
[0047] 取200μ1的內水相，NR2B9c水溶液的濃度為0-35mg/ml即投藥量為0-7mg時，均能形 成納米粒。但隨著投藥量增加，納米粒粒徑逐漸增大，包封率降低。因此，需要綜合所需藥量 和粒徑選擇適宜投藥量，結果見表2:
[0048]表 2
[0050] (5)修飾材料對載藥聚合物納米粒的性能考察：
[0051 ] WGA修飾使納米粒的粒徑增加(P〈0.05)，但保持在150nm以內，符合要求，這與透射 電鏡的結果一致;Zeta電位、包封率和載藥量無明顯變化;PDI均小于0.2，符合要求，見表3 所示。
[0052]表 3
[0054] 五、體內分布試驗及評價指標
[0055] SD大鼠隨機分成4組，采用10%水合氯醛(360mg/kg)腹腔注射麻醉后，分別鼻腔給 予NR2B9c溶液（i · η · NR2B9c)、NR2B9c-NPs(i · η · NR2B9c-NPs)和NR2B9c-WGA-NPs膠體溶液 (i . η. NR2B9c-WGA-NPs)，尾靜脈注射NR2B9c溶液（i . v. NR2B9c)，給藥劑量為0.3mg NR2B9c/ kg。大鼠給藥后，分別于0.25、0.5、l、2、4h心臟取血后用生理鹽水灌流，再取出腦組織并分 離出嗅球、嗅束、海馬、大腦、小腦-80°C凍存。每個時間點3只大鼠。測定樣品的NR2B9c含量。 采用3p97軟件擬合血漿和腦組織中的藥時曲線，得到峰濃度(C max)、達峰時間（Tmax)及藥時 曲線下面積（AUC〇-4h)等藥動學參數。按公式（3)計算不同納米粒的腦革El向效率（Dr ug targeting efficiency，DTE) ;NR2B9c鼻腔給藥后亦有少量通過血液循環進入腦部，扣除這 部分，可由公式(3)、（3)推導出公式(5)，經公式(5)計算NR2B9C納米粒經鼻入腦的直接轉運 百分率（Directtransport percentage ,DTP) 〇
[0056]
(I)
[0057] (2)
[0058] (3)
[0059] 其中，Piv，Biv分別表示靜注溶液后血漿和腦中的AUCo-4h;P in，Bir^1j表示鼻腔給藥 后血漿和腦中的AUCo-4h;B x表示鼻腔給藥后通過血液循環進入腦中那部分藥物的AUCo-4h。
[0060] 表4是大鼠鼻腔給予NR2B9C溶液，NR2B9c-NPs和NR2B9C-WGA-NPS，尾靜脈注射 NR2B9c溶液后，在各腦組織（嗅球、嗅束、海馬、大腦、小腦)和血漿中NR2B9c的藥動學參數及 腦靶向性評價指標。
[0061] 表 4
[0063] aP〈0.05，bP〈0.01，CP〈0.001，與尾靜脈注射NR2B9c溶液組相比有顯著差異； dP〈 0.05，eP〈0.01，fP〈0.001，與鼻腔給予NR2B9c溶液組相比有顯著差異； gP〈0.05，hP〈0.01，與 鼻腔給予NR2B9c-NPs組相比有顯著差異。
[0064] 從上述結果中可以看出，尾靜脈注射NR2B9c溶液（i . V. NR2B9c組）后，僅有少部分 藥物可迅速跨越血腦屏障到達腦部，在各腦組織中30min以內均出現峰濃度，隨后逐漸消 除，在各腦組織中NR2B9c的濃度都非常低。鼻腔給予同樣量的NR2B9c溶液后（i . n.NR2B9c 組），在各腦組織中30min以內也均達峰，平均峰值較注射組均有所提高，特別是在嗅球部位 15min就已達峰，達峰時間比注射組有所提前，且C max是注射組的3倍，此外，嗅球、嗅束和大 腦皮層部位NR2B9c的AUCo-4h也明顯高于注射組(P〈0.05)，而在血漿中的AUCo-4h卻低于注射 組(P〈0.05)，結果說明鼻腔給藥后，可增加 NR2B9C的腦部轉運量，其可沿鼻腦通路直接轉運 入腦，但NR2B9c溶液鼻腔給藥后進入腦部的量依然比較低，且消除較快，這也表明單獨的 NR2B9C溶液鼻腔給藥吸收能力不足，而且容易被降解。
[0065] 鼻腔給予載NR2B9c的納米粒(修飾和未修飾組)后，在各腦組織及血漿中NR2B9c的 達峰時間除嗅球、嗅束仍然在30min以內（30min)，其余均延遲至1-2h，在各腦組織中的平均 峰濃度較鼻腔給予NR2B9c溶液組和尾靜脈給予NR2B9c溶液組均有所提高，且在嗅球、嗅束、 海馬、大腦皮層和小腦部位NR2B9c的AUCo-4h也顯著高于兩個NR2B9c溶液組斤〈0.05)，而在 血漿中的AUCo-4h和鼻腔給予NR2B9c溶液組類似，都低于注射NR2B9c溶液組(P〈0.05)，實驗 結果進一步印證了鼻腦通路的存在，納米粒包載NR2B9c后能夠促進NR2B9c在鼻腔的吸收， 提高N R 2 B 9 c的穩定性，延緩消除，進而提高N R 2 B 9 c的腦轉運量。W G A修飾的載藥納米粒 (i .n.NR2B9c-WGA-NPs)比未經修飾載藥納米粒更能提高NR2B9c的入腦量(P〈0.05)，說明納 米粒表面修飾的WGA在鼻腔中與其糖基受體(N-乙酰-D-氨基萄糖)結合，增加了嗅區粘膜對 納米粒的攝取，從而遞送了更多的NR2B9c入腦。鼻腔給予NR2B9c溶液組在嗅球、嗅束和大腦 皮層的腦靶向效率明顯高于尾靜脈注射NR2B9c溶液組(P〈0.05)，載NR2B9c的納米粒(修飾 和未修飾)組的腦靶向效率均顯著高于鼻腔給予NR2B9C溶液組和尾靜脈給予NR2B9C溶液組 (P〈0.05)，在嗅球、嗅束、大腦皮層和小腦WGA修飾的納米粒組的腦靶向效率顯著高于未修 飾組(P〈0.05)，這些結果表明NR2B9c-WGA-NPs鼻腔給藥具有很好的腦部遞藥特性。
[0066] NR2B9c溶液經鼻入腦的直接轉運百分率(DTP)比較低，主要原因是NR2B9c跨膜吸 收較差，還有就是NR2B9c的降解，納米粒特別是WGA修飾的納米粒可明顯提高NR2B9c經鼻入 腦的直接轉運百分率，這些結果都說明了納米粒可促進NR2B9C經鼻腦通路轉運入腦，WGA修 飾的納米粒更是高效的經鼻入腦藥物載體。
[0067]上述【具體實施方式】不以任何形式限制本發明的技術方案，凡是采用等同替換或等 效變換的方式所獲得的技術方案均落在本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒，其特征在于，所述的水溶性小 肽是NR2B9C，所述的聚合物是馬來酰亞胺聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物和單甲氧基聚 乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物的混合物，所述的聚合物納米粒采用復乳法制備;該聚合物 納米粒的平均粒徑為140nm，包封率達到50%，載藥量達到11 %。2. 權利要求1所述的攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒的制備方法， 其特征在于，步驟如下： (1) 、內水相的制備：將NR2B9c溶解于水中，獲得濃度為0-35mg/ml且大于0的NR2B9c水 溶液，備用； (2) 、油相的制備：將馬來酰亞胺聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物和單甲氧基聚乙二 醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物按質量比1:9溶于油相二氯甲烷中，所得聚合物濃度為15-20mg/ ml，備用； ⑶、W/0初乳的制備:按照1:5的體積比將內水相加入到油相中，超聲得到W/0初乳； (4) 、W/0/W復乳的制備:按照3:5的體積比，將W/0初乳加入含有乳化劑的外水相中，超 聲得到W/0/W復乳； (5) 聚合物納米粒的制備：按照1:5的體積比，將W/0/W復乳分散到擴散相溶液中，攪拌 均勻，加入巰基化WGA，馬來酰亞胺聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物和巰基化WGA的質量比 為5:1，低速攪拌孵育4小時，減壓旋蒸除有機溶劑，置超濾離心管中冷凍離心，即得WGA修飾 的聚合物納米粒。3. 根據權利要求2所述的攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒的制備方 法，其特征在于步驟(1)中內水相體積為50-20yL。4. 根據權利要求2所述的攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒的制備方 法，其特征在于步驟(2)中單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物和馬來酰亞胺聚乙二 醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物中PLGA端PLA: PGA的比例以及PLGA端分子量為：50: 50，28000、 50:50,38000^70:25,38000〇5. 根據權利要求2所述的攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒的制備方 法，其特征在于步驟(4)中外水相為1 %-1.5w/v%的膽酸鈉溶液。6. 根據權利要求2所述的攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒的制備方 法，其特征在于步驟(5)中擴散相為0.5w/v%的膽酸鈉溶液。
【專利摘要】本發明涉及攜載水溶性小肽的麥胚凝集素修飾的聚合物納米粒及其制備方法，納米粒的平均粒徑為140 nm，包封率達到50%，載藥量達到11%。制備方法是：（1）、將NR2B9c溶解于水中，獲得內水相；（2）將聚合材料溶于二氯甲烷中，獲得油相；（3）、將內水相加入到油相中，超聲得到W/O初乳；（4）、將W/O初乳加入含有乳化劑的外水相中，超聲得到W/O/W復乳；（5）將W/O/W復乳分散到擴散相溶液中，加入巰基化WGA，低速攪拌孵育，去除有機溶劑，冷凍離心，即得包載NR2B9c的WGA修飾的聚合物納米粒，鼻腔給藥具有很好的腦部靶向性。
【IPC分類】A61K38/08, A61K47/42, A61K47/34, A61K9/51, A61P9/10
【公開號】CN105688183
【申請號】CN201610069463
【發明人】李 瑞, 陳立, 黃元, 張明晚, 周美玲, 蘇平
【申請人】南京醫科大學
【公開日】2016年6月22日
【申請日】2016年1月30日