一種鹿骨和甜瓜子為原料的注射制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種鹿骨和甜瓜子為原料的注射制劑。
【背景技術】
[0002] 以鹿骨和甜瓜子為原料的藥物制劑，主要是鹿瓜多肽注射制劑，該制劑具有調節 骨代謝、刺激成骨細胞增殖、促進新骨形成的作用，亦可調節鈣鱗代謝、增加骨鈣沉積、防止 骨質疏松，并具有抗炎、鎮痛、抗風濕等作用，已在臨床廣泛使用。臨床應用表明，以鹿骨和 甜瓜子為原料的注射制劑是治療骨折不愈合、骨質疏松癥、風濕、類風濕性關節炎、腕舟狀 骨缺血性壞死和軟組織損傷等的有效藥物，在骨科的應用前景廣闊。
[0003] 中國專利CN 02125357. 9公開了以鹿骨和甜瓜子為原料制備注射劑，該專利方法 為：分別對鹿骨和甜瓜子進行提取、酸調pH值、堿調pH值，合并提取液后再超濾制備成注 射制劑；中國專利CN200410013602. 7公開了鹿骨和甜瓜子為原料制備成注射制劑，該專 利的方法為：鹿骨進行提取、酸調pH值、堿調pH值、超濾，甜瓜子提取、超濾，合并提取液 制備成注射劑；中國專利200510108157. 7公開了鹿瓜多肽注射劑的制備方法，該方法為： 鹿骨提取，經過三次超濾，甜瓜子提取、三次超濾，合并提取液，制備成注射劑；中國專利 CN200910167155. 3公開了鹿瓜多肽注射劑的制備方法，該方法為：分別將鹿骨和甜瓜子提 取、酸調PH值、加熱后超濾、離心、堿調pH值、離心、調pH值、三步超濾、超濾液制備成注射 劑；中國專利CN201210328858. 1公開了鹿瓜多肽注射劑的制備方法，該方法為：鹿骨提取 后，經過三次超濾，甜瓜子提取后，經過三次超濾，合并提取液制備成注射制劑。上述方法雖 然可以獲得鹿瓜多肽注射劑，但都沒有充分考慮鹿瓜多肽中無效成分的含量，因此，上述 制備方法有待商榷。
[0004] 鹿瓜多肽注射劑是多組分生化藥品，該制劑的活性成分為多肽類成分，將其質量 進一步提高，將會給患者帶來巨大的福音。
【發明內容】
[0005] 基于上述原因，申請人通過多次創造性的研究，獲得一種新的鹿瓜多肽注射制劑， 該制劑中游離氨基酸以及高分子量物質含量變化較小，通過篩選獲得新的鹿瓜多肽注射 制劑，該注射制劑的工藝方法為：該注射制劑是原料為鹿骨和甜瓜子，其中鹿骨提取液制 備方法為：取鹿骨，加入復合酶，采用高溫水提取，酸調pH值，加熱，20-30°C靜置，濃縮后 20-30°C靜置，堿調pH值，濃縮后20-30°C靜置，酸調pH值，梯度超濾，低溫保存，獲得鹿骨提 取液；其中甜瓜子提取液制備方法為：取甜瓜子采用高溫水提取，酸調PH值，20-30°C靜置， 濃縮后離心、超濾、堿調PH值，梯度溫度冷凍保存，解凍后濃縮，離心，離心后酸調pH值，梯 度超濾，低溫保存，獲得甜瓜子提取液；將鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超濾，制備成 注射制劑。
[0006] 本發明所述的鹿骨提取液的方法優勢如下：采用復合酶處理鹿骨原料，提高得率 的基礎上，降低提取次數；酸調一定pH值后，通過加熱使鹿骨中蛋白質分解成多肽較完全 (提高得率）；酸調pH之后，20-30°C靜置，條件溫和，避免劇烈條件使無效成分快速沉淀而 裹挾多肽類成分，濃縮后再靜置，可以進一步去除無效成分；堿調PH值后，20-30°C靜置，條 件溫和，避免劇烈條件使無效成分快速沉淀而裹挾多肽類成分；鹽酸調至一定PH值后，通 過10萬、1萬、8千梯度超濾后，在保證多肽類成分的基礎上，最大限度的去除高分子量物 質。上述方法是將一定的PH數值與不同方法結合，從而達到去除高分量物質以及游離氨基 酸的目的，并且進一步提尚得率。
[0007] 本發明所述的甜瓜子提取液的方法優勢如下：酸調一定pH值，溫度25-35Γ離心， 離心液超濾，可以很好的得到目標產物；堿調PH值后，梯度低溫冷凍，濃縮后在離心，可以 很好的去除游離氨基酸以及高分子量物質；離心液調至一定pH值，通過10萬、1萬、8千梯 度超濾后，在保證多肽類成分的基礎上，最大限度的去除高分子量物質。上述方法是將一定 PH數值與不同方法有機結合，從而達到去除高分量物質以及游離氨基酸的目的，并且進一 步提尚得率。
[0008] 本發明通過下述技術方案實現的。
[0009] -種鹿骨和甜瓜子為原料的注射制劑，注射制劑包括注射液和粉針劑，該注射制 劑的制備方法為：鹿骨經過提取得到鹿骨提取液，甜瓜子經過提取得到甜瓜子提取液；鹿 骨提取液制備方法為：取鹿骨，加入復合酶，采用高溫水提取，酸調PH值，加熱，20-30°C靜 置，濃縮后20-30 °C靜置，堿調pH值，濃縮后20-30 °C靜置，酸調pH值，梯度超濾，低溫保存， 獲得鹿骨提取液；其中甜瓜子提取液制備方法為：取甜瓜子采用高溫水提取，酸調PH值， 20-30°C靜置，濃縮后離心、超濾、堿調pH值，梯度溫度冷凍保存，解凍后濃縮，離心，離心后 酸調PH值，梯度超濾，低溫保存，獲得甜瓜子提取液；將鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合 后，超濾，制備成注射制劑。
[0010] 其中鹿骨提取液的制備方法包括：取鹿骨，去除骨髓，稱重，加2-3倍鹿骨投料量 的水，加入鹿骨重量2 % -3%的復合酶，保存1-2小時，121-130°C提取，保持60分鐘，提取 液在除油罐中，靜置，撇去上浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加1-3摩爾/升鹽酸溶 液，調pH值至3. 0-3. 5,加熱至80-KKTC，保持25-35分鐘，20-30°C靜置12小時-18小時， 取上清液，棄去底部沉淀，濃縮至鹿骨投料量的0. 2-0. 4倍，20-30°C靜置12-18小時，取上 清液，棄去底部沉淀，用30 μ m預處理柱過濾，濾液用4-6摩爾/升氫氧化鈉溶液調pH值至 8. 5-8. 9,濃縮至鹿骨投料量0. 2-0. 4倍，20-30°C靜置12-18小時，取上清液，棄去底部沉 淀，上清液加入1-3摩爾/升鹽酸溶液調pH值至6. 0-6. 4后，依次用截取分子量十萬超濾 系統、截取分子量一萬超濾系統、截取分子量八千超濾機組，進行超濾，保留透過液，得到鹿 骨提取液，轉入冷庫零下15至零下20°C保存。
[0011] 其中復合酶為外切酶和胃蛋白酶，外切酶與胃蛋白酶的重量比為1:0. 35-0. 70。
[0012] 其中甜瓜子提取液制備方法包括：取甜瓜子每次加1-3倍量的水，經121-130°C 提取三次，每次60分鐘，合并提取液，得到甜瓜子初提液；甜瓜子初提液加入1-3摩爾/升 鹽酸溶液溶液，調pH值至3. 0-3. 5, 20-30°C靜置12-18小時，濃縮至甜瓜子投料量的2-4 倍，降溫至25-35Γ，用離心機離心，離心液再用截取分子量十萬超濾系統超濾，保留透過 液，得甜瓜子酸處理液；甜瓜子酸處理液加4-6摩爾/升氫氧化鈉溶液溶液，調pH值至 8. 5-8. 9,得甜瓜子堿處理液，堿處理液先在-25°C至_30°C冷庫凍12-18小時，再轉入-15°C 至-20°C冷庫冷凍保存72-96小時；將甜瓜子堿處理液解凍后，濃縮至投料量的2-4倍，降 溫至25-35°C，離心，離心液中加入1-3摩爾/升鹽酸溶液，調pH值至6. 0-6. 4,得甜瓜子中 和液；甜瓜子中和液依次用截取分子量十萬超濾系統、截取分子量一萬超濾系統、截取分子 量八千超濾機組，進行超濾，保留透過液，得甜瓜子提取液，轉入冷庫零下15至零下20°C保 存。
[0013] 其中注射液的制備方法為：取鹿骨提取液和甜瓜子提取液解凍后，按照多肽含量 重量比1-3 :0. 5-1混合混合制得鹿瓜多肽提取液，加入活性炭，過濾，濾液用截取分子量 8000的超濾膜超濾，保留透過液，透過液經0. 22 μ m濾芯過濾，濃縮至多肽含量為3-6mg/ ml，灌裝，得到注射液。
[0014] 其中粉針劑的制備方法為：按照多肽含量重量比1-3 :0. 5-1混合鹿骨提取液和 甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，過濾，濾液用截取分子量8000的超濾膜超濾，保留 透過液，透過液經0. 22 μ m濾芯過濾，濃縮至多肽含量為3-6mg/ml，灌裝，冷凍干燥，得到凍 干粉針劑。
[0015] 本發明所述鹿骨為：為經檢疫合格的東北地區成年（年齡2~4年）健康的鹿骨。 本發明所述甜瓜子為：為萌蘆科植物甜瓜Cucumis melo L.的干燥成熟種子。
[0016] 本發明下述試驗是在多次創造性試驗基礎上，針對本發明保護的技術方案進行的 結論性試驗。
[0017] 一、篩選試驗
[0018] 試驗1組：取鹿骨，去除骨髓，稱重，加2. 5倍鹿骨投料量的水，加入鹿骨重量 2. 5%的外切酶，保存1. 5小時，125°C提取，保持60分鐘，提取液在除油罐中，靜置，撇去上 浮油脂，得到鹿骨初提液，鹿骨初提液加2摩爾/升鹽酸溶液，調pH值至2. 5, (TC靜置16小 時，取上清液，棄去底部沉淀，濃縮至鹿骨投料量的〇. 3倍，(TC靜置16小時，取上清液，棄去 底部沉淀，用30 μ m預處理柱過濾，濾液用5摩爾/升氫氧化鈉溶液調pH值至9. 5,濃縮至 鹿骨投料量〇. 4倍，(TC靜置16小時，取上清液，棄去底部沉淀，上清液加入2摩爾/升鹽酸 溶液調PH值至6. 5后，依次用截取分子量十萬超濾系統、截取分子量一萬超濾系統、截取分 子量八千超濾機組，進行超濾，保留透過液，得到鹿骨提取液，轉入