本發明屬于藥物制(zhi)劑領域，具體(ti)涉及一種包載難溶(rong)性抗腫(zhong)瘤藥物姜黃素(su)聚合物膠束及其制(zhi)備方法和(he)應用。

背景技術：

姜黃(huang)素(Curcumin)是從姜科姜黃(huang)屬(shu)(Curcuma longa L)植物(wu)的(de)根部中(zhong)提取的(de)一種天然有(you)效(xiao)成(cheng)分，屬(shu)于(yu)多(duo)酚類(lei)化合物(wu)，具有(you)抗(kang)炎、抗(kang)腫瘤、抗(kang)氧化和抗(kang)微生物(wu)等多(duo)種作用(yong)(yong)，且(qie)毒副作用(yong)(yong)小，作為藥物(wu)具有(you)廣(guang)闊(kuo)的(de)應用(yong)(yong)前(qian)景，目前(qian)關于(yu)姜黃(huang)素最主要研究還是在于(yu)抗(kang)癌制劑的(de)開發。

姜黃素結構式為C₂₁H₂₀O₆，分子量：368.37，結構式(shi)如下：

姜黃素難溶于水(2.99×10^-8mol/L)，普通口服給藥(yao)(yao)不吸收，且存在(zai)(zai)嚴重的(de)肝(gan)臟首過效應(ying)，即(ji)經胃腸(chang)道(dao)給藥(yao)(yao)后，在(zai)(zai)尚未(wei)吸收進入(ru)血(xue)循(xun)(xun)環(huan)之(zhi)前(qian)即(ji)由肝(gan)臟代謝，而使(shi)進入(ru)血(xue)循(xun)(xun)環(huan)的(de)藥(yao)(yao)量極度減少；并(bing)且姜(jiang)黃(huang)素(su)(su)在(zai)(zai)體(ti)內(nei)的(de)新陳代謝及(ji)清除速率較快，所(suo)以一般給藥(yao)(yao)下(xia)，姜(jiang)黃(huang)素(su)(su)的(de)生(sheng)物利用率(<1％)很低，穩定性差(在(zai)(zai)堿(jian)性條件下(xia)不穩定，易發生(sheng)降(jiang)解)，并(bing)且姜(jiang)黃(huang)素(su)(su)作為一種(zhong)抗腫瘤(liu)藥(yao)(yao)物，最關(guan)鍵(jian)的(de)就是藥(yao)(yao)物在(zai)(zai)腫瘤(liu)組織達(da)到(dao)最大(da)富集(ji)。因(yin)此需要(yao)制(zhi)備(bei)合(he)適的(de)藥(yao)(yao)物遞送(song)系(xi)統以解決上述問題，在(zai)(zai)有效提高(gao)姜(jiang)黃(huang)素(su)(su)水(shui)溶性的(de)同時(shi)，也要(yao)防止藥(yao)(yao)物進入(ru)生(sheng)物體(ti)后被水(shui)解、氧化(hua)而失活，同時(shi)能夠(gou)保證姜(jiang)黃(huang)素(su)(su)在(zai)(zai)達(da)到(dao)腫瘤(liu)部位之(zhi)前(qian)不被清除。

技術實現要素：

本(ben)發明的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)是克(ke)服現(xian)有技(ji)術所存在的(de)(de)(de)缺(que)陷與不足，提(ti)供一種包(bao)(bao)載(zai)(zai)難溶性抗(kang)腫(zhong)瘤藥物(wu)(wu)姜(jiang)黃(huang)素(su)聚合物(wu)(wu)膠(jiao)(jiao)束(shu)(shu)及其制備方法和應(ying)用，該混(hun)合膠(jiao)(jiao)束(shu)(shu)能有效地增加姜(jiang)黃(huang)素(su)的(de)(de)(de)溶解度(du)，提(ti)高姜(jiang)黃(huang)素(su)的(de)(de)(de)生物(wu)(wu)利用率，同時包(bao)(bao)載(zai)(zai)姜(jiang)黃(huang)素(su)的(de)(de)(de)聚合物(wu)(wu)膠(jiao)(jiao)束(shu)(shu)能夠在腫(zhong)瘤組織(zhi)達到最大富集。

為(wei)了達(da)到上述目的(de)，本發明方法采(cai)用(yong)的(de)技術方案是：

采用薄膜分散法，以普(pu)朗尼克為載(zai)體(ti)，將(jiang)姜(jiang)黃素(su)(su)包載(zai)在普(pu)朗尼克的疏水內核PPO中，制得包載(zai)難溶性(xing)抗腫瘤藥(yao)物姜(jiang)黃素(su)(su)聚(ju)合物膠束(shu)。

進一步地，包括(kuo)以下具(ju)體(ti)步驟：

(1)將普朗(lang)尼克和姜黃素按質量比為(10～100)：1溶(rong)(rong)于有機溶(rong)(rong)劑(ji)中(zhong)，形成均勻(yun)的混合(he)溶(rong)(rong)液(ye)；

(2)將混(hun)合(he)溶液旋(xuan)轉蒸發(fa)除去有機溶劑，制得以普朗尼(ni)克為(wei)載(zai)體的姜黃素薄膜；

(3)將以普朗尼克為載體的(de)姜(jiang)黃素(su)(su)薄膜(mo)進行溶脹水化，制得包載難溶性抗腫瘤藥物姜(jiang)黃素(su)(su)聚(ju)合物膠束。

進(jin)一步地，步驟(1)中(zhong)的普(pu)(pu)(pu)朗(lang)(lang)尼(ni)克(ke)是(shi)普(pu)(pu)(pu)朗(lang)(lang)尼(ni)克(ke)F127與(yu)普(pu)(pu)(pu)朗(lang)(lang)尼(ni)克(ke)P123按任意比例混合得(de)到的；普(pu)(pu)(pu)朗(lang)(lang)尼(ni)克(ke)F127是(shi)由兩端PEO與(yu)中(zhong)間PPO形(xing)成的三嵌段共聚物，分子量(liang)為12600；普(pu)(pu)(pu)朗(lang)(lang)尼(ni)克(ke)P123是(shi)由兩端PEO與(yu)中(zhong)間PPO形(xing)成的三嵌段共聚物，分子量(liang)為332.48。

進一步(bu)地，包(bao)載難(nan)溶性抗(kang)腫(zhong)(zhong)瘤藥(yao)物(wu)(wu)(wu)姜(jiang)黃素聚(ju)合(he)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)通過(guo)后(hou)處(chu)理(li)制得姜(jiang)黃素聚(ju)合(he)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)凍干(gan)(gan)劑(ji)，后(hou)處(chu)理(li)步(bu)驟具體為：向包(bao)載難(nan)溶性抗(kang)腫(zhong)(zhong)瘤藥(yao)物(wu)(wu)(wu)姜(jiang)黃素聚(ju)合(he)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)中加入凍干(gan)(gan)保護(hu)劑(ji)，過(guo)濾(lv)除菌；冷(leng)凍干(gan)(gan)燥(zao)除去(qu)水(shui)分(fen)，制得姜(jiang)黃素聚(ju)合(he)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)凍干(gan)(gan)劑(ji)。

進(jin)一步(bu)地，凍干保(bao)護(hu)(hu)劑為甘露(lu)糖、乳糖、葡萄糖、氨基酸、蔗糖和聚乙(yi)二醇中的一種或(huo)者任意兩種以上的混合物(wu)，凍干保(bao)護(hu)(hu)劑的添(tian)加量(liang)是包載難溶性抗腫瘤藥(yao)物(wu)姜黃素聚合物(wu)膠(jiao)束質量(liang)的1～5％；過濾除菌采用0.22μm的微孔濾膜進(jin)行。

進一步地(di)，步驟(1)中的(de)有機溶劑為甲(jia)醇、四(si)氫呋喃、乙醚、二(er)甲(jia)基亞砜或乙腈。

進一步地，步驟(zou)(1)中普(pu)朗尼(ni)克和有機溶劑(ji)的比為300mg：4mL。

進一(yi)步(bu)(bu)地，步(bu)(bu)驟(zou)(2)中旋(xuan)轉蒸發以及(ji)步(bu)(bu)驟(zou)(3)中溶(rong)脹水化(hua)的(de)溫(wen)度均為(wei)37～60℃；步(bu)(bu)驟(zou)(3)溶(rong)脹水化(hua)中加入的(de)去離子水和(he)步(bu)(bu)驟(zou)(1)中普朗尼克的(de)比為(wei)(2～12)mL：300mg。

一種利用如上所(suo)述(shu)包(bao)載難溶(rong)性(xing)抗腫(zhong)瘤藥物(wu)姜黃素聚(ju)合物(wu)膠束制備方法制得(de)的包(bao)載難溶(rong)性(xing)抗腫(zhong)瘤藥物(wu)姜黃素聚(ju)合物(wu)膠束。

如(ru)上(shang)所述的包載難(nan)溶性抗腫瘤(liu)藥(yao)物姜黃素聚合物膠(jiao)束在(zai)制備抗腫瘤(liu)藥(yao)物中的應用。

與現(xian)有技術相比，本發(fa)明具有以下有益的技術效果：

本發(fa)明采用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)普朗(lang)尼克(ke)(Pluronic)是一種多功能(neng)(neng)藥用(yong)(yong)(yong)輔料，由聚(ju)(ju)氧乙烯-聚(ju)(ju)氧丙烯-聚(ju)(ju)氧乙烯(PEO-PPO-PEO)三嵌(qian)段構成(cheng)。研(yan)究發(fa)現，具(ju)有(you)相似(si)疏(shu)水嵌(qian)段的(de)(de)聚(ju)(ju)合(he)物(wu)可形(xing)成(cheng)混(hun)合(he)膠束(shu)(shu)。Pluronic系列的(de)(de)分子量均小于15000Da，其(qi)單體(ti)(ti)可由腎臟(zang)排泄，具(ju)有(you)良(liang)好(hao)的(de)(de)生物(wu)相容性(xing)。其(qi)PPO鏈可以形(xing)成(cheng)疏(shu)水內(nei)核用(yong)(yong)(yong)于包(bao)載難(nan)溶性(xing)抗腫瘤藥物(wu)，增(zeng)加溶解(jie)度、提(ti)高體(ti)(ti)內(nei)外穩(wen)定(ding)性(xing)；PEO鏈可形(xing)成(cheng)親水外殼，具(ju)有(you)空間穩(wen)定(ding)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)和滲(shen)透(tou)滯(zhi)留效應，避免(mian)網狀內(nei)皮系統的(de)(de)吞(tun)噬，延長體(ti)(ti)循(xun)環(huan)時間，增(zeng)強被(bei)動(dong)靶向(xiang)能(neng)(neng)力。本發(fa)明的(de)(de)聚(ju)(ju)合(he)物(wu)膠束(shu)(shu)能(neng)(neng)有(you)效地增(zeng)加姜黃素(su)(su)的(de)(de)溶解(jie)度，可以避免(mian)體(ti)(ti)內(nei)網狀內(nei)皮細胞(bao)系統的(de)(de)吞(tun)噬，從(cong)而提(ti)高其(qi)在血液中的(de)(de)循(xun)環(huan)時間，有(you)效提(ti)高姜黃素(su)(su)的(de)(de)生物(wu)利用(yong)(yong)(yong)率；同時普朗(lang)尼克(ke)載體(ti)(ti)可以增(zeng)強被(bei)動(dong)靶向(xiang)能(neng)(neng)力作(zuo)用(yong)(yong)(yong)，提(ti)高姜黃素(su)(su)的(de)(de)抗腫瘤效果(guo)。

進一(yi)步(bu)地(di)，本發(fa)明中普(pu)(pu)朗尼克(ke)由普(pu)(pu)朗尼克(ke)P123和普(pu)(pu)朗尼克(ke)F127組成，疏(shu)水(shui)PPO嵌段數目非常相似，可以形成同一(yi)疏(shu)水(shui)核心(xin)，利于形成混合膠束。

經實驗證明(ming)，本發明(ming)包載姜黃素的聚合物(wu)膠束在小鼠體內具有一定(ding)的長循環性質，證明(ming)姜黃素的生物(wu)利用率得到有效提(ti)高；并且能(neng)夠在腫瘤(liu)組織達到最大(da)富(fu)集(ji)。

【附圖說明】

圖1為本發(fa)明姜黃(huang)素(su)Pluronic F127/P123混(hun)合(he)膠束的(de)粒徑(jing)分布圖。

圖2為姜(jiang)黃素Pluronic F127/P123混合膠束的透射(she)電(dian)鏡照(zhao)片。

圖3為(wei)膠束材料生物相容性考察；

圖4為(wei)姜黃素Pluronic F127/P123混合(he)膠束對人乳腺(xian)癌(ai)MD-MBA-231細胞的生長抑(yi)制趨勢圖。

圖5為姜黃素Pluronic F127/P123混合膠(jiao)束在MD-MBA-231細胞(bao)中的藥物攝取圖。

圖6為(wei)游離姜(jiang)黃(huang)(huang)素與姜(jiang)黃(huang)(huang)素Pluronic F127/P123混(hun)合(he)膠束在小鼠中的血液中藥物代謝圖。

圖(tu)7為(wei)Pluronic F127/P123混合膠束在乳(ru)腺癌移植瘤小(xiao)鼠各組織藥(yao)物分(fen)布圖(tu)。

【具體實施方式】

本(ben)發明采(cai)用薄(bo)膜分散法，以(yi)普(pu)朗(lang)(lang)尼克為載體，將姜黃(huang)素包載在普(pu)朗(lang)(lang)尼克的(de)疏水內核PPO中，制成包載姜黃(huang)素的(de)聚(ju)合(he)物膠束，也(ye)可以(yi)稱(cheng)為載有姜黃(huang)素的(de)普(pu)朗(lang)(lang)尼克F127/P123混(hun)合(he)膠束。本(ben)發明包括以(yi)下步驟：

(1)將普朗尼(ni)(ni)克(ke)與(yu)(yu)姜(jiang)黃素按質(zhi)量比(bi)(bi)(bi)為(wei)(10～100)：1溶(rong)于(yu)有機溶(rong)劑中，使普朗尼(ni)(ni)克(ke)與(yu)(yu)姜(jiang)黃素形成均勻的混合溶(rong)液Ⅰ，普朗尼(ni)(ni)克(ke)和(he)有機溶(rong)劑的比(bi)(bi)(bi)為(wei)300mg：4mL；其中，普朗尼(ni)(ni)克(ke)是普朗尼(ni)(ni)克(ke)F127與(yu)(yu)普朗尼(ni)(ni)克(ke)P123按質(zhi)量比(bi)(bi)(bi)為(wei)100:1～1:100(即任意(yi)質(zhi)量比(bi)(bi)(bi))混合得到的；有機溶(rong)劑為(wei)甲(jia)(jia)醇、四氫呋喃、乙醚(mi)、二(er)甲(jia)(jia)基亞砜或乙腈。

(2)將混合溶(rong)液Ⅰ旋轉蒸(zheng)發除去有(you)機溶(rong)劑，制得以普朗尼克(ke)為載體的(de)姜黃素(su)薄膜；其中旋轉蒸(zheng)發溫度(du)為37～60℃。

(3)將薄膜置于37～60℃環境下溶(rong)(rong)脹后水化，制(zhi)得包(bao)載難溶(rong)(rong)性抗(kang)腫瘤藥物姜黃素(su)聚合物膠束；水化中(zhong)加入的去離子(zi)水和(he)步驟(1)中(zhong)普朗尼克的比(bi)為(2～12)mL：300mg；

(4)向包載難溶性抗腫(zhong)瘤藥(yao)物姜黃素聚(ju)合物膠(jiao)束(shu)中加入其(qi)質量(liang)1％～5％的(de)凍干保(bao)護劑，經(jing)過0.22μm的(de)微孔濾(lv)膜過濾(lv)除菌；凍干保(bao)護劑為(wei)甘露糖(tang)、乳糖(tang)、葡萄糖(tang)、氨基酸、蔗糖(tang)和聚(ju)乙(yi)二醇中的(de)一(yi)種(zhong)或者(zhe)任(ren)意兩種(zhong)以上的(de)混合物；

(5)置于(yu)-80℃預凍(dong)(dong)過(guo)夜(ye)，然后(hou)放入冷凍(dong)(dong)干燥(zao)機(ji)中凍(dong)(dong)干36h，除去(qu)水分，制得干燥(zao)的姜黃素聚(ju)合物膠束(shu)凍(dong)(dong)干劑。

本發(fa)明中(zhong)采用的(de)普(pu)朗(lang)尼(ni)克F127，即泊洛(luo)沙姆(mu)407(Poloxamer 407)，由兩(liang)端(duan)PEO與中(zhong)間PPO形成的(de)三嵌段(duan)共聚物，其中(zhong)每段(duan)PEO約(yue)為(wei)100個(ge)重(zhong)復單(dan)位，PPO約(yue)為(wei)65個(ge)重(zhong)復單(dan)位，分子量為(wei)12600。

本發明(ming)中(zhong)采用的普(pu)朗(lang)尼克(ke)P123，即泊洛(luo)沙姆403(Poloxamer 403)，由兩端PEO與中(zhong)間PPO形成(cheng)的三嵌段共聚物，其中(zhong)每段PEO約為20個重復單位(wei)，PPO約為69個重復單位(wei)，分子量為332.48。

本發(fa)明包載姜(jiang)黃素的(de)(de)(de)聚合(he)物膠(jiao)束(shu)(shu)是(shi)姜(jiang)黃素的(de)(de)(de)新劑型(xing)，具(ju)體是(shi)姜(jiang)黃素普(pu)朗(lang)尼(ni)(ni)克F127/P123混(hun)合(he)膠(jiao)束(shu)(shu)，該混(hun)合(he)膠(jiao)束(shu)(shu)能(neng)有效地(di)增加(jia)姜(jiang)黃素的(de)(de)(de)溶解度，并且可以(yi)避(bi)免(mian)體內(nei)網狀內(nei)皮(pi)細胞系統的(de)(de)(de)吞噬，從(cong)而提(ti)高其在血液中的(de)(de)(de)循(xun)環(huan)(huan)時(shi)間，同(tong)時(shi)普(pu)朗(lang)尼(ni)(ni)克作為載體可以(yi)增強(qiang)被動靶向能(neng)力作用，提(ti)高姜(jiang)黃素的(de)(de)(de)抗腫瘤(liu)效果(guo)。其中普(pu)朗(lang)尼(ni)(ni)克P123具(ju)有較強(qiang)的(de)(de)(de)增溶能(neng)力，普(pu)朗(lang)尼(ni)(ni)克F127具(ju)有良好的(de)(de)(de)生物相容性(xing)(xing)、長循(xun)環(huan)(huan)性(xing)(xing)質(zhi)。由于P123(PPO，69)與F127(PPO，65)的(de)(de)(de)疏(shu)水PPO嵌段數目非常相似，可以(yi)形成(cheng)同(tong)一疏(shu)水核心，利于形成(cheng)混(hun)合(he)膠(jiao)束(shu)(shu)。

下面通過具體的實施(shi)例對(dui)本發明做(zuo)進一步詳細說(shuo)明

實施例1

稱取60mg P123、240mgF127、10mg姜(jiang)(jiang)黃(huang)素，使得(de)普(pu)朗尼(ni)克與(yu)姜(jiang)(jiang)黃(huang)素按(an)質量比為30：1；加入4mL四氫呋喃，水浴超聲(sheng)10min使載體材料(liao)與(yu)藥物充分溶解。將(jiang)該溶液置于旋轉蒸發儀37℃旋蒸1h，真空干燥(zao)過(guo)夜，得(de)到橙(cheng)黃(huang)色薄膜。將(jiang)薄膜置于37℃溶脹15min，加入8mL 37℃去離子(zi)水水化，攪拌30min,用0.22μm的微孔(kong)濾(lv)膜過(guo)濾(lv)除菌(jun)即得(de)到姜(jiang)(jiang)黃(huang)素Pluronic F127/P123混合膠束制劑。

實施例2

稱(cheng)取80mgP123、220mg F127、8mg姜(jiang)(jiang)黃素，加入4ml甲醇(chun)，水(shui)浴超聲(sheng)10min使載體材料與藥物(wu)充分溶解。將(jiang)該(gai)溶液置于旋(xuan)轉蒸發(fa)儀(yi)37℃旋(xuan)蒸1h，真空干燥過夜，得到橙(cheng)黃色薄膜(mo)。將(jiang)薄膜(mo)置于37℃溶脹(zhang)15min，加入6mL 37℃去(qu)離子水(shui)水(shui)化，攪(jiao)拌(ban)30min，用0.22μm的微孔(kong)濾膜(mo)過濾除菌即得到姜(jiang)(jiang)黃素Pluronic F127/P123混合(he)膠束(shu)制劑。

實施例3

稱(cheng)取(qu)100mgP123、200mg F127、6mg姜(jiang)黃素，加(jia)(jia)入4ml丙酮，水(shui)浴(yu)超(chao)聲10min使(shi)載體材料(liao)與(yu)藥物充分溶(rong)解。將(jiang)該溶(rong)液置于(yu)旋轉(zhuan)蒸發(fa)儀37℃旋蒸1h，真空干燥過(guo)夜，得(de)到橙黃色薄(bo)膜。將(jiang)薄(bo)膜置于(yu)37℃溶(rong)脹15min，加(jia)(jia)入4mL 37℃去離子水(shui)水(shui)化(hua)，攪拌30min，用0.22μm的微(wei)孔濾膜過(guo)濾除菌即得(de)到姜(jiang)黃素Pluronic F127/P123混合膠(jiao)束制劑。

實施例4

稱取120mgP123、180mg F127、12mg姜黃(huang)(huang)素，加入(ru)4ml四氫(qing)呋喃(nan)，水(shui)浴(yu)超聲(sheng)10min使載體材(cai)料與藥物充分溶(rong)解。將(jiang)該(gai)溶(rong)液置(zhi)于旋轉蒸發儀37℃旋蒸1h，真空干(gan)燥過(guo)夜，得到(dao)橙(cheng)黃(huang)(huang)色(se)薄膜。將(jiang)薄膜置(zhi)于45℃溶(rong)脹15min，加入(ru)10mL 45℃去離(li)子水(shui)水(shui)化，攪拌30min，用0.22μm的微孔濾膜過(guo)濾除菌即得到(dao)姜黃(huang)(huang)素Pluronic F127/P123混(hun)合膠束制劑(ji)。

實施例5

稱取150mgP123、150mg F127、15mg姜黃素，加入(ru)(ru)4ml四氫(qing)呋喃(nan)，水浴超聲(sheng)10min使(shi)載體材料(liao)與藥物充分溶(rong)解。將該溶(rong)液置(zhi)于(yu)旋(xuan)轉蒸發儀50℃旋(xuan)蒸1h，真空干燥(zao)過夜(ye)，得到橙黃色薄(bo)(bo)膜(mo)。將薄(bo)(bo)膜(mo)置(zhi)于(yu)50℃溶(rong)脹15min，加入(ru)(ru)12mL 50℃去離子水水化(hua)，攪拌30min，用0.22μm的微(wei)孔濾(lv)膜(mo)過濾(lv)除(chu)菌即得到姜黃素Pluronic F127/P123混合膠束制劑。

實施例6

稱(cheng)取180mgP123、120mg F127、15mg姜黃素(su)，加入4ml四氫呋喃(nan)，水(shui)(shui)浴超聲10min使載體材料與藥物充分(fen)溶(rong)解。將該(gai)溶(rong)液置于旋(xuan)(xuan)轉蒸(zheng)(zheng)發儀(yi)50℃旋(xuan)(xuan)蒸(zheng)(zheng)1h，真空(kong)干燥(zao)過(guo)夜，得到橙黃色薄膜(mo)(mo)。將薄膜(mo)(mo)置于60℃溶(rong)脹15min，加入5mL 60℃去離子水(shui)(shui)水(shui)(shui)化，攪拌(ban)30min，用0.22μm的微孔濾膜(mo)(mo)過(guo)濾除菌即得到姜黃素(su)Pluronic F127/P123混合膠(jiao)束制劑。

實施例7

稱取200mgP123、100mg F127、15mg姜黃(huang)(huang)(huang)素，加入(ru)4ml四氫呋(fu)喃，水(shui)浴超聲(sheng)10min使(shi)載體(ti)材料與藥物充分(fen)溶解。將該溶液置于旋轉蒸(zheng)發儀50℃旋蒸(zheng)1h，真(zhen)空干燥過夜，得到橙黃(huang)(huang)(huang)色薄膜(mo)(mo)。將薄膜(mo)(mo)置于50℃溶脹(zhang)15min，加入(ru)5mL 50℃去(qu)離子水(shui)水(shui)化，攪(jiao)拌30min，用0.22μm的(de)微孔(kong)濾膜(mo)(mo)過濾除菌(jun)即得到姜黃(huang)(huang)(huang)素Pluronic F127/P123混合膠(jiao)束制(zhi)劑。

實施例8

稱(cheng)取210mgP123、90mg F127、15mg姜黃(huang)素，加入4ml四氫(qing)呋(fu)喃，水(shui)(shui)浴超聲(sheng)10min使載體材料與(yu)藥物充分溶解。將(jiang)該溶液置于旋轉蒸發(fa)儀(yi)50℃旋蒸1h，真(zhen)空干燥(zao)過夜，得(de)到橙黃(huang)色薄膜。將(jiang)薄膜置于50℃溶脹15min，加入5mL 50℃去離(li)子(zi)水(shui)(shui)水(shui)(shui)化，攪拌30min，用0.22μm的微孔濾(lv)膜過濾(lv)除菌(jun)即(ji)得(de)到姜黃(huang)素Pluronic F127/P123混(hun)合(he)膠束制(zhi)劑。

實施例9

稱取150mgP123、150mg F127、3mg姜黃(huang)素，加(jia)入(ru)4ml四(si)氫呋喃，水(shui)(shui)浴(yu)超聲(sheng)10min使載體材料(liao)與(yu)藥物充分溶解。將(jiang)該溶液置(zhi)于旋轉(zhuan)蒸(zheng)發儀50℃旋蒸(zheng)1h，真空(kong)干(gan)燥過夜(ye)，得到(dao)橙黃(huang)色薄膜(mo)。將(jiang)薄膜(mo)置(zhi)于50℃溶脹15min，加(jia)入(ru)10mL 50℃去離子(zi)水(shui)(shui)水(shui)(shui)化，攪拌30min，加(jia)入(ru)1％蔗糖，過濾除菌，裝于西林瓶中，置(zhi)于冰箱-80℃預凍(dong)過夜(ye)，然后放入(ru)冷凍(dong)干(gan)燥機中凍(dong)干(gan)36h，得到(dao)混合膠(jiao)束凍(dong)干(gan)劑(ji)(ji)，凍(dong)干(gan)劑(ji)(ji)中加(jia)入(ru)適量去離子(zi)水(shui)(shui)可在30s內完全(quan)復(fu)溶。

實施例10

稱取210mgP123、90mg F127、30mg姜黃(huang)素(su)，加入4ml四氫呋喃，水(shui)浴超聲10min使載體材料與(yu)藥物(wu)充分溶解(jie)。將該溶液置(zhi)于(yu)(yu)旋轉蒸發儀60℃旋蒸1h，真空干(gan)燥過(guo)(guo)夜，得(de)到橙黃(huang)色薄膜。將薄膜置(zhi)于(yu)(yu)60℃溶脹(zhang)15min，加入2mL 60℃去(qu)離子(zi)水(shui)水(shui)化，攪拌30min，加入5％葡萄(tao)糖，過(guo)(guo)濾除菌(jun)，裝于(yu)(yu)西林瓶(ping)中，置(zhi)于(yu)(yu)冰箱-80℃預凍(dong)過(guo)(guo)夜，然后放(fang)入冷(leng)凍(dong)干(gan)燥機中凍(dong)干(gan)36h，得(de)到混合膠束凍(dong)干(gan)劑，凍(dong)干(gan)制劑加入適量(liang)去(qu)離子(zi)水(shui)可在(zai)30s內完全復溶。

通過對比空白膠(jiao)(jiao)束、游離姜(jiang)黃(huang)素(su)和本發明制得(de)的包載姜(jiang)黃(huang)素(su)Pluronic F127/P123混合膠(jiao)(jiao)束的外觀(guan)，游離姜(jiang)黃(huang)素(su)難溶于(yu)水，在(zai)(zai)水中(zhong)(zhong)呈現渾濁狀態，而本發明混合膠(jiao)(jiao)束在(zai)(zai)水中(zhong)(zhong)具有(you)很好的溶解性(xing)。

通過改(gai)變旋蒸溫(wen)度分(fen)別為20℃和70℃，發現沒有(you)在37～60℃內所制得的(de)膠束(shu)穩定性好。

采用動態光散射法測定本發明(ming)制(zhi)得的混合膠束(shu)的粒徑，如圖1所示其粒徑大(da)約為(wei)23nm左右。

采用(yong)透(tou)射電鏡觀察(cha)本發明制得的(de)(de)混合膠束的(de)(de)形態(tai)；如圖2所示，制備的(de)(de)姜黃素Pluronic F127/P123混合膠束分散均勻(yun)，且無團聚現象。

實施例11

采用MTT考察本(ben)發(fa)明制得(de)的包載(zai)姜黃素的Pluronic F127/P123混合膠束載(zai)體對人乳腺癌(ai)MDA-MB-231細胞生長抑制實驗。

待MDA-MB-231細胞生長匯合度達到90％時，用0.25％胰蛋白酶消化，2×10⁵密度接種在96培養板中，于37℃下，5％CO₂條件(jian)下培養12小時；棄掉(diao)培養液，加(jia)入一定(ding)濃度的(de)姜(jiang)(jiang)黃素、包載(zai)姜(jiang)(jiang)黃素Pluronic F127/P123混合(he)膠束(shu)(shu)，繼(ji)續孵育(yu)(yu)(yu)24小時。待(dai)孵育(yu)(yu)(yu)結束(shu)(shu)后(hou)(hou)，加(jia)入20μl MTT((5mg/mL)，37℃下繼(ji)續孵育(yu)(yu)(yu)4小時，孵育(yu)(yu)(yu)完畢(bi)后(hou)(hou)，以酶(mei)聯免疫(yi)儀在570nm測定(ding)OD值，計算細胞抑制率，結果顯示：與游離姜(jiang)(jiang)黃素相比，包載(zai)姜(jiang)(jiang)黃素Pluronic F127/P123混合(he)膠束(shu)(shu)對MDA-MB-231細胞具(ju)有(you)良好(hao)的(de)抑制作用(參(can)見圖4)，且空白(bai)膠束(shu)(shu)顯示具(ju)有(you)良好(hao)的(de)生物相容性，參(can)見圖3。

實施例12

采(cai)用流式細(xi)胞儀考察包載姜黃素(su)Pluronic F127/P12對細(xi)胞攝取藥物(wu)影響實(shi)驗，如圖(tu)5所示，結果表明，包載姜黃素(su)Pluronic F127/P123顯著提高姜黃素(su)的蓄(xu)積。

實施例13

取(qu)(qu)體重為(wei)20g左右的(de)BABL/c小鼠12只，隨機分(fen)為(wei)2組(zu)，每(mei)組(zu)6只，分(fen)別給予(yu)姜(jiang)黃(huang)(huang)素注射液以(yi)及(ji)相同濃(nong)(nong)度(du)的(de)包載(zai)姜(jiang)黃(huang)(huang)素Pluronic F127/P123混合膠束，以(yi)50mg/kg的(de)劑(ji)量尾靜脈注射給藥，分(fen)別于給藥后0.5、1、3、6、12、24、48取(qu)(qu)血(xue)，處理血(xue)漿后測(ce)定姜(jiang)黃(huang)(huang)素的(de)血(xue)藥濃(nong)(nong)度(du)，結(jie)果如圖6所示，混合膠束具(ju)有明(ming)顯的(de)長循環性質，且相比于游離的(de)姜(jiang)黃(huang)(huang)素，混合膠束明(ming)顯提高了姜(jiang)黃(huang)(huang)素的(de)藥物濃(nong)(nong)度(du)。

實施例14

利用(yong)(yong)小動物(wu)活(huo)體(ti)(ti)成像觀察混合(he)膠束(shu)在BABL/c小鼠(shu)體(ti)(ti)內各組織的富集(ji)情況，同時(shi)利用(yong)(yong)近(jin)紅外染料DIR來作為指示。

取體重為20g左右的BABL/c小(xiao)鼠(shu)6只(zhi)，分別于(yu)小(xiao)鼠(shu)左腋外側(ce)中(zhong)部(bu)皮(pi)下接(jie)種乳腺癌腫(zhong)瘤(liu)細胞(bao)，待(dai)腫(zhong)瘤(liu)直徑達到4-6mm時，尾靜脈注(zhu)射(she)帶有熒(ying)光(guang)標記的Pluronic F127/P123混(hun)合膠束，于(yu)注(zhu)射(she)后12h，取小(xiao)鼠(shu)的各(ge)(ge)組織(zhi)，利用小(xiao)動物活體成像觀察各(ge)(ge)組織(zhi)熒(ying)光(guang)強(qiang)度，結果(guo)如圖7顯示，在尾靜脈給藥(yao)12h之后，相比于(yu)其他各(ge)(ge)組織(zhi)，小(xiao)鼠(shu)腫(zhong)瘤(liu)熒(ying)光(guang)強(qiang)度最大，藥(yao)物在腫(zhong)瘤(liu)中(zhong)具有較(jiao)大的富集，說明該混(hun)合膠束可(ke)以(yi)通過滲透滯留(liu)效應，增強(qiang)藥(yao)物在腫(zhong)瘤(liu)組織(zhi)中(zhong)的富集。