本發明屬于生物(wu)技(ji)術領(ling)域，更具(ju)體地(di)說，尤其涉及一種陰離子/非(fei)離子型PAM中丙烯酰(xian)胺殘留量(liang)的檢測方法(fa)。

背景技術：

PAM是丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)均聚物和各種(zhong)(zhong)共聚物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)統稱(cheng)，是重要(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)水溶性聚合(he)物，并兼具絮(xu)凝性、增稠性、耐剪切性、降阻(zu)性、分(fen)(fen)散性等性能，作為一(yi)(yi)種(zhong)(zhong)高技術(shu)含(han)量(liang)(liang)、高附加值的(de)(de)(de)(de)(de)(de)重要(yao)化工產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)品(pin)，已廣泛應用在(zai)采(cai)油、化工、造紙、紡織、制糖、醫藥(yao)、環(huan)保、建(jian)材、農業(ye)(ye)生(sheng)產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)等部門和領域(yu)并已滲透到人們的(de)(de)(de)(de)(de)(de)日常(chang)生(sheng)活中(zhong)(zhong)(zhong)。我們知道PAM在(zai)工業(ye)(ye)化生(sheng)產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)過程中(zhong)(zhong)(zhong)受外界(jie)干(gan)擾因素較(jiao)(jiao)多(duo)，導致(zhi)合(he)成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)品(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)單(dan)體丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)(liang)難以控制，而丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)又(you)是公認的(de)(de)(de)(de)(de)(de)致(zhi)癌物質(zhi)和神經致(zhi)毒劑(ji)(ji)，世界(jie)衛(wei)生(sheng)組織的(de)(de)(de)(de)(de)(de)《環(huan)境衛(wei)生(sheng)標準(zhun)49-丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)》對(dui)(dui)此(ci)作出了嚴格要(yao)求。為了防(fang)止丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)進入環(huan)境，危害人們的(de)(de)(de)(de)(de)(de)身體健康(kang)，必須對(dui)(dui)PAM中(zhong)(zhong)(zhong)殘(can)留(liu)丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)嚴格檢(jian)測。目前較(jiao)(jiao)為準(zhun)確的(de)(de)(de)(de)(de)(de)對(dui)(dui)丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)檢(jian)測方法，是使(shi)(shi)用高效液(ye)相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)和氣(qi)相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)進行檢(jian)測，其中(zhong)(zhong)(zhong)高效液(ye)相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)法執行的(de)(de)(de)(de)(de)(de)GB/T22312-2008《塑料聚丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)殘(can)留(liu)丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)含(han)量(liang)(liang)測定(ding)方法》。該方法中(zhong)(zhong)(zhong)樣品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)前處理時(shi)(shi)(shi)間較(jiao)(jiao)長，其原理是利(li)用萃(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)劑(ji)(ji)對(dui)(dui)樣品(pin)長時(shi)(shi)(shi)間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)浸(jin)取(qu)(qu)(qu)(qu)，當(dang)產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)品(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)單(dan)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)(liang)和萃(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)劑(ji)(ji)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)(liang)，形成一(yi)(yi)個(ge)動(dong)態(tai)平衡時(shi)(shi)(shi)，丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)得以充分(fen)(fen)釋放到萃(cui)取(qu)(qu)(qu)(qu)劑(ji)(ji)中(zhong)(zhong)(zhong)，達到最大值。如果(guo)沒(mei)有外界(jie)條(tiao)件干(gan)預的(de)(de)(de)(de)(de)(de)話，這一(yi)(yi)浸(jin)取(qu)(qu)(qu)(qu)時(shi)(shi)(shi)間通常(chang)在(zai)24小時(shi)(shi)(shi)以上，然后再通過高效液(ye)相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)分(fen)(fen)析(xi)。這一(yi)(yi)方法樣品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)前處理復雜，時(shi)(shi)(shi)間長，誤(wu)差比較(jiao)(jiao)大，色譜(pu)(pu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)離效果(guo)不理想，對(dui)(dui)于生(sheng)產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)PAM的(de)(de)(de)(de)(de)(de)企(qi)業(ye)(ye)，使(shi)(shi)用該方法檢(jian)測產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)品(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)丙(bing)(bing)烯(xi)(xi)(xi)(xi)酰(xian)(xian)(xian)(xian)胺(an)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)(liang)，難以適(shi)應企(qi)業(ye)(ye)對(dui)(dui)產(chan)(chan)(chan)(chan)(chan)品(pin)檢(jian)測快(kuai)速、準(zhun)確分(fen)(fen)析(xi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)要(yao)求。

技術實現要素：

本發(fa)明(ming)的(de)目的(de)是為了(le)解決(jue)現有技(ji)術中存在的(de)檢測時間長，繁瑣，工序步驟(zou)較(jiao)多等缺陷，而提出的(de)一種陰離(li)子(zi)/非離(li)子(zi)型PAM中丙烯酰胺殘留(liu)量(liang)的(de)檢測方(fang)法(fa)。

為實(shi)現上述目的(de)，本發明提供如下技術方案：

一種陰離子/非離子型PAM中丙烯酰胺殘留(liu)量(liang)的(de)檢(jian)測方法，包括如下步驟：

S1、酸(suan)洗多(duo)(duo)壁碳納(na)(na)米管(guan)(guan)：多(duo)(duo)壁碳納(na)(na)米管(guan)(guan)的(de)(de)活化為了除去多(duo)(duo)壁碳納(na)(na)米管(guan)(guan)在生產過(guo)(guo)程殘留的(de)(de)催化劑及其(qi)他雜質，并且在多(duo)(duo)壁碳納(na)(na)米管(guan)(guan)表(biao)面添加上羧基(ji)(-COOH)和羥基(ji)(-OH)，將2.0g多(duo)(duo)壁碳納(na)(na)米管(guan)(guan)溶于100mlL的(de)(de)混(hun)合酸(suan)中，加熱攪(jiao)拌3.0h后過(guo)(guo)濾；

S2、過濾后純(chun)化的多壁碳納米管用(yong)超(chao)純(chun)水洗(xi)至中性，置于60℃的真(zhen)空干燥箱中，干燥12h；

S3、殼聚糖交聯(lian)多(duo)壁碳納米管的合成：以多(duo)壁碳納米管為支撐載體，將殼聚糖交聯(lian)于多(duo)壁碳納米管表面；

S4、殼聚(ju)糖交聯多(duo)壁碳納米管(guan)MSPD-HPLC聯用檢(jian)測陰離子/非離子型PAM中(zhong)丙烯酰(xian)胺殘留量；液(ye)相(xiang)色譜條件：采用VP-ODS C18反相(xiang)柱(zhu)4.6mm×150mm的柱(zhu)進(jin)行分離；流動相(xiang)比例色譜甲醇/DDW＝20/80，流速0.8mL/min，柱(zhu)溫箱40℃，進(jin)樣量20微升，檢(jian)測波長204nm。

優選的，所(suo)述殼聚糖交聯(lian)多壁(bi)碳納米管的合成(cheng)具體步驟如下：

a首(shou)先，將100mg的(de)(de)多壁碳(tan)納米(mi)管溶解(jie)于20mL一定濃度(du)的(de)(de)殼(ke)聚糖乙酸(suan)溶液中(乙酸(suan)含量為2％)，為了(le)提高多壁碳(tan)納米(mi)管的(de)(de)分散效果(guo)，加(jia)入0.1g的(de)(de)SDS；

b其次，將混合物超(chao)聲30min后加入一定量1％的戊二醛；

c再次，混合物繼續超聲120min后(hou)將(jiang)其在轉速10000rmp的離心(xin)機(ji)離心(xin)分離,30min，在DDW/甲(jia)醇＝1/1的條(tiao)件下產品索(suo)氏清(qing)洗8h；

d最后，將制備好的(de)多壁碳納米管(guan)在60℃真空條件下干燥(zao)24h。

優選的，在S4中，檢測(ce)陰離子/非離子型PAM中丙烯(xi)酰胺(an)殘留量的預(yu)先處理具體(ti)過程如(ru)下：

a殼聚糖(tang)交(jiao)聯多壁(bi)碳納米管(guan)作為(wei)基(ji)(ji)質(zhi)分散固相(xiang)萃取(qu)吸附(fu)劑，對陰離(li)(li)子/非離(li)(li)子型PAM中丙烯(xi)酰胺殘留(liu)量的提取(qu)分離(li)(li)效果，將1.0g基(ji)(ji)質(zhi)分別與(yu)1.0g，2.0g，3.0g，4.0g的吸附(fu)劑混合，在研缽(bo)內充分研磨5min后，將混合物移入空的UCT SPE柱中；

b然后用2.0mL的(de)(de)正(zheng)己(ji)烷與2.0ml的(de)(de)甲(jia)醇(chun)/DDW＝40/60淋洗(xi)除雜，再選取不同組成和體積的(de)(de)洗(xi)脫液進行洗(xi)脫；

c最后洗脫液收集后用(yong)氮吹至(zhi)干，再用(yong)0.3mL的DDW復(fu)溶，0.22gm的濾頭過濾后進高效(xiao)液相色譜檢測(ce)，進樣(yang)量為20微(wei)升。

優選(xuan)的，所述混合酸為98％的濃(nong)(nong)硫(liu)酸與(yu)65％的濃(nong)(nong)硝酸，且濃(nong)(nong)硫(liu)酸體(ti)與(yu)濃(nong)(nong)硝酸的積比1:3。

本(ben)(ben)發明(ming)的(de)技(ji)術(shu)效果(guo)和優點：本(ben)(ben)發明(ming)提(ti)供(gong)的(de)一種陰離子(zi)(zi)/非離子(zi)(zi)型PAM中(zhong)丙烯酰胺殘留量(liang)的(de)檢測方法，與傳統技(ji)術(shu)相比，本(ben)(ben)發明(ming)以殼聚糖交(jiao)聯多壁碳(tan)納(na)米(mi)管為吸附(fu)劑的(de)MSPD-HPLC技(ji)術(shu)集樣品的(de)萃取(qu)與富集于一體提(ti)高了(le)(le)對目標物的(de)提(ti)取(qu)效率、降低了(le)(le)提(ti)取(qu)過(guo)程中(zhong)的(de)損(sun)失，并且該萃取(qu)方法大大縮短萃取(qu)所用(yong)時間、節省有機溶劑使(shi)用(yong)量(liang)。

附圖說明

圖1為陰離(li)子聚丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺萃取(qu)液色譜(pu)圖。

具體實施方式

為了使(shi)本(ben)發(fa)明(ming)的(de)目的(de)、技術(shu)方案及(ji)優點(dian)更(geng)加清楚明(ming)白，以下結合具體(ti)實施(shi)例(li)，對本(ben)發(fa)明(ming)進行進一步詳(xiang)細說明(ming)。應當理解，此(ci)處所(suo)描述的(de)具體(ti)實施(shi)例(li)僅僅用以解釋本(ben)發(fa)明(ming)，并(bing)不用于限定本(ben)發(fa)明(ming)。基于本(ben)發(fa)明(ming)中(zhong)的(de)實施(shi)例(li)，本(ben)領(ling)域普通(tong)技術(shu)人(ren)員在沒有(you)做出(chu)創造性勞動前提下所(suo)獲得(de)的(de)所(suo)有(you)其(qi)他實施(shi)例(li)，都屬于本(ben)發(fa)明(ming)保(bao)護(hu)的(de)范圍。

實施例1

一種陰離子/非離子型PAM中(zhong)丙烯酰(xian)胺殘留量的檢測方法，包(bao)括如下步驟：

S1、酸(suan)(suan)洗多(duo)(duo)壁(bi)碳納(na)米管(guan)：多(duo)(duo)壁(bi)碳納(na)米管(guan)的(de)(de)活(huo)化(hua)為了除去多(duo)(duo)壁(bi)碳納(na)米管(guan)在生產過程殘留的(de)(de)催化(hua)劑(ji)等雜(za)質，并且在多(duo)(duo)壁(bi)碳納(na)米管(guan)表面(mian)添加上(shang)羧基(ji)(-COOH)和羥基(ji)(-OH)，將2.0g多(duo)(duo)壁(bi)碳納(na)米管(guan)溶于100mlL的(de)(de)混合酸(suan)(suan)(98％的(de)(de)濃硫酸(suan)(suan)與65％的(de)(de)濃硝酸(suan)(suan)，且濃硫酸(suan)(suan)體與濃硝酸(suan)(suan)的(de)(de)積比1:3)中，加熱攪拌(ban)3.0h后過濾；

S2、過濾后純化的多壁碳納米管用超純水洗至中性，置于(yu)60℃的真空(kong)干燥(zao)箱(xiang)中，干燥(zao)12h；

S3、殼聚(ju)(ju)糖交聯多(duo)壁碳(tan)(tan)納(na)米管的合成：以多(duo)壁碳(tan)(tan)納(na)米管為(wei)支撐載體，將殼聚(ju)(ju)糖交聯于多(duo)壁碳(tan)(tan)納(na)米管表面；

S4、殼聚(ju)糖交聯(lian)多壁(bi)碳納米管(guan)MSPD-HPLC聯(lian)用(yong)檢測(ce)陰離子(zi)/非離子(zi)型(xing)PAM中丙烯(xi)酰(xian)胺殘留量(liang)；液相色譜條件(jian)：采(cai)用(yong)VP-ODS C18反相柱4.6mm×150mm的柱進(jin)行分離；流動(dong)相比例色譜甲醇/DDW＝20/80，流速0.8mL/min，柱溫箱40℃，進(jin)樣量(liang)20微升，檢測(ce)波長(chang)204nm。

所述殼聚糖交(jiao)聯多壁碳(tan)納米管的合成具體步驟如下：

a首先，將100mg的多壁碳納(na)米管(guan)溶解(jie)于20mL一定(ding)濃(nong)度的殼聚糖乙酸溶液中(乙酸含量為2％)，為了提高多壁碳納(na)米管(guan)的分散效果，加入0.1g的SDS；

b其次，將混合(he)物(wu)超聲30min后(hou)加入一定量1％的戊二(er)醛；

c再次，混合物繼續超聲120min后將其在轉速10000rmp的離心(xin)機離心(xin)分離,30min，在DDW/甲醇＝1/1的條件下(xia)產品索氏清洗8h；

d最(zui)后，將制備好的多壁碳納米管在60℃真空(kong)條件下(xia)干燥24h。

在(zai)S4中，檢測陰(yin)離子(zi)/非離子(zi)型PAM中丙烯(xi)酰胺殘留量(liang)的預先處(chu)理具(ju)體過程如下：

a殼(ke)聚糖交(jiao)聯(lian)多(duo)壁(bi)碳納(na)米管作為(wei)基質(zhi)分(fen)散固相萃取(qu)吸附劑，對陰離(li)子/非(fei)離(li)子型PAM中丙(bing)烯酰(xian)胺殘留(liu)量(liang)的提取(qu)分(fen)離(li)效果，將(jiang)1.0g基質(zhi)分(fen)別與1.0g，2.0g，3.0g，4.0g的吸附劑混(hun)合，在(zai)研缽內(nei)充分(fen)研磨5min后，將(jiang)混(hun)合物(wu)移(yi)入(ru)空(kong)的UCT SPE柱(zhu)中；

b然后用2.0mL的正己烷與2.0ml的甲醇(chun)/DDW＝40/60淋洗除雜，再(zai)選取(qu)不同組成和體積的洗脫液進行洗脫；

c最后洗脫液收集后用氮(dan)吹至干，再用0.3mL的DDW復溶，0.22gm的濾頭過濾后進(jin)高效(xiao)液相色譜檢測，進(jin)樣量為20微升。

每個(ge)(ge)小批(pi)號取1個(ge)(ge)樣(yang)進行測(ce)試，測(ce)試結果見圖1。測(ce)得(de)丙烯酰胺(an)含量為(wei)0.01603mg/mL，代入公式(shi)AM％＝(0.01603×30×10/3.0×1000×0.92)×100％＝0.1742％；

其(qi)中AM含量計算(suan)公式(shi)：

AM％＝(C×V×a)/m×1000×n×100％；

式中(zhong)：C—檢測的濃度，mg/mL；V—加(jia)入萃取(qu)劑的體(ti)積，mL；a—稀釋倍數；m—稱取(qu)PAM的質量，g；n—固(gu)含量(一般不(bu)計)。

最(zui)后應說明(ming)的(de)是：以上所(suo)述僅為本(ben)(ben)發(fa)(fa)明(ming)的(de)優選實(shi)施(shi)(shi)例而已(yi)，并不用于限制本(ben)(ben)發(fa)(fa)明(ming)，盡管(guan)參(can)照前(qian)述實(shi)施(shi)(shi)例對本(ben)(ben)發(fa)(fa)明(ming)進(jin)(jin)行了詳細的(de)說明(ming)，對于本(ben)(ben)領域的(de)技術人員來說，其依然可以對前(qian)述各實(shi)施(shi)(shi)例所(suo)記載的(de)技術方案進(jin)(jin)行修改，或者(zhe)對其中部分技術特征進(jin)(jin)行等同替換,凡(fan)在本(ben)(ben)發(fa)(fa)明(ming)的(de)精神和原則之內，所(suo)作(zuo)的(de)任何修改、等同替換、改進(jin)(jin)等，均(jun)應包(bao)含在本(ben)(ben)發(fa)(fa)明(ming)的(de)保護范圍(wei)之內。