專利名稱：一種中藥提取的g6凝集素及其在排毒穩壓、軟化血管、防并發中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及中藥領域，特別涉及一種中藥提取的G6凝集素及其在排毒穩壓、軟化血管、防并發中的用途。
背景技術：
凝集素(lectin)是動物細胞和植物細胞都能夠合成和分泌的糖蛋白或結合糖的蛋白，因其能凝集紅血球(含血型物質)，故名凝集素。常用的為植物凝集素(Phytoagglutin, PNA),通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina, ConA)、麥胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等,凝集素是它們的總稱。凝集素在細胞識別和粘著反應中起重要作用，主要是促進細胞間的粘著。凝集素最大的特點在于它們能識別糖蛋白和糖肽中，特別是細胞膜中復雜的碳水化合物結構，即細胞膜表面的碳脂化合物決定簇。一種凝集素具有對某一種特異性糖基專一性結合的能力，因此，凝集素可以作為一種探針來研究細胞膜上特定的糖基。另一方面，凝集素具有多價結合能力，能與熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結合，從而在光鏡與/或電鏡水平顯示其結合部位。凝集素不僅具有凝集諸如血細胞、淋巴細胞、精子細胞等作用，而且參與了生物體內一些重要的生理和藥理過程，因此是研究生物體內細胞癌變、受精、分化及分子識別等生命過程極其有用的工具，同時在臨床醫學檢驗上有著重要地位，而且是抗腫瘤藥物生產所需的促有絲分裂原。近年來還報道某些凝集素對艾滋病毒等也有抑制作用，并應用于實驗性治療。但是到目前為止，還未見凝集素在高血壓以及其他心腦血管疾病治療中作用的研究報道。盡管國內現有的 高血壓治療方式多種多樣包括中藥，西藥，理療儀器，但令人遺憾的是每種方式都有其弊端，西藥降壓快速但穩壓效果不好，毒副作用巨大，不能阻止高血壓并發癥的發生，我國目前有接近2億高血壓人群，而服用西藥的人群占所有高血壓人群的四分之三，大多數患者知道西藥的副作用及弊端，可在無藥可選的情況下，只有選擇西藥；而中藥服用不便，藥效流失嚴重；理療儀只能緩解一時的癥狀。因此，找到一種既能夠平穩降壓，又能夠降低降壓西藥帶來的毒副作用的生物分子已成當務之急。

發明內容
本發明要解決的技術問題為針對現有技術中高血壓患者服用降壓西藥毒副作用無法排除，且易有并發癥發生的問題，提供一種具有排毒穩壓、通血管、防止并發癥作用的中藥提取G6凝集素。為解決上述技術問題，本發明提供的G6凝集素為從中藥三七、杜仲、葛根、地黃、
丹參、昆布中通過提取得到，且含有丹參酸、丹參黃酮、三七皂苷、地黃皂苷、地黃素、昆布素、葛根黃酮、杜仲萜烯成分。
該凝集素的制備方案為步驟I)按相同質量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50 100目藥物混合粉末；步驟2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4°C下浸泡12小時，離心，取上清；步驟3)將上述得到的上清利用高滲凝集的方法過濾，去除雜質，得到含有植物凝集素的濾液；步驟4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。本發明提供的G6凝集素是以祖 國中醫傳統組方為基礎，選用對高血壓，心腦血管有很好治療作用的三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布六種中藥原料提取獨有的G6凝集素，不但具有植物凝集素的特性，同時具有恢復人體交感神經系統的調節功能，在穩定高血壓及其并發癥的改善上有著全新的突破。其中三七又名田七，是我國特有的名貴中藥材。清朝藥學著作《本草綱目拾遺》中記載“人參補氣第一，三七補血第一，味同而功亦等，故稱人參三七，為中藥中之最珍貴者。”三七具有擴張血管、降低血壓，改善微循環，增加血流量，預防和治療心腦組織缺血、缺氧癥的功能與作用。杜仲為杜仲科植物杜仲的干燥樹皮，是中國名貴滋補藥材。具補肝腎、強筋骨、降血壓、安胎等諸多功效。《神農本草經》列為上品。謂其“主治腰膝痛，補中，益精氣，堅筋骨，除陰下癢濕，小便余浙。久服，輕身耐老。”杜仲是中國特有藥材，其藥用歷史悠久，在臨床有著廣泛的應用。葛根，為豆科植物野葛，含多種黃酮成分如異黃酮成分葛根素、葛根素木糖甙、大豆黃酮、大豆黃酮甙及谷留醇、花生酸，又含多量淀粉。明朝著名的醫學家李時珍對葛根進行了系統的研究，認為葛根的莖、葉、花、果、根均可入藥。《本草綱目》載葛根，性涼、氣平、味甘，具清熱、降火、排毒諸功效。現代醫學研究表明葛根中的異黃酮類化合物葛根素對聞血壓、聞血脂、聞血糖和心腦血管疾病有一定療效。地黃為玄參科多年生草本植物,味甘、苦,性寒。化學成分以式類為主，其中又以環烯醚萜甙類為主。現代醫學實驗證明，地黃70%甲醇提取物抑制ADP引起的大鼠血小板聚集，并有抗凝血酶作用，對內毒素引起的大鼠彌漫性血管內凝血有對抗作用，因此對各類心腦血管疾病有輔助治療作用。丹參又名赤參，紫丹參，紅根等。其主要含有脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸成分，還含黃酮類，三萜類，留醇等其他成分。現代藥理學實驗表明，丹參具有加強心肌收縮力、改善心臟功能，不增加心肌耗氧量，擴張冠脈，增加心肌血流量；擴張外周血管，使血流增加的功效，并且，丹參能夠改善微循環，提高纖溶酶活性；延長出、凝血時間；抑制血小板聚集。丹參能使主動脈粥樣斑塊形成面積明顯減少，血清總膽固醇、甘油三酯、均有一定程度的降低。丹參可抑制高脂膳食家兔的血脂上升。通過研究發現丹參素還能抑制細胞內源性膽固醇的合成，降低血脂。昆布為海帶科植物海帶的葉狀體或者翅藻科植物，其化學成分含有藻膠素、甘露醇、半乳聚糖、海帶氨酸、海帶聚糖、谷氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、維生素B1、C、P和磺、鉀等。昆布具有降血脂和抗凝作用，昆布中的海帶多糖經多次灌胃，能明顯地抑制高血脂雞血清總膽固醇、甘油三酯的含量上升，并能減少雞主動脈內膜粥樣斑塊的形成及發展。本發明提供的G6凝集素是從上述六味中藥中，利用現代高滲凝集技術提取出來的生物活性物分子。目前國內現有的中藥提純技術不外乎水煎醇沉、過濾、濃縮，酶解等幾種方式，這些傳統提純工藝已經越來越多的暴露出問題，如耗費原料巨大，藥效流失，純度不能保證等
坐寸ο而G6凝集素的提純工藝采用的是國際上先進的高滲凝集技術，徹底避免了這些問題的出現，高滲凝集技術能夠準確的選擇出中藥中對疾病有益的成分，將其準確識別，提純，凝集出來，且采用該技術提取的G6凝集素，具有極高的滲透性，便于人體吸收，利用，能大大提高其對疾病的輔助治療效果。高滲凝集技術以其高效、節能、環保和分子級分離等特性，已廣泛地應用于醫藥、食品加工等領域，成為現代提純技術領域最先進的技術之一。被公認為21世紀最重大產業技術之一的高滲凝集技術，是一種新興的綠色工業科技。與常規的離心分離、沉降、過濾、萃取等方法相比，高滲凝集技術具有的明顯潛在優勢。隨著近幾年來人們對高滲凝集技術的大力開發以來，已開發出適合高血壓，心腦血管，腫瘤等各種疾病的治療產品。尤其是針對高血壓開發出了極具代表性的G6凝集素，克服了傳統中藥，西藥作用不全面，藥效單一等弊端。中藥所含化學成分很復雜，通常有糖類、氨基酸、蛋白質、油脂、蠟、酶、色素、維生素、有機酸、鞣質、無機鹽、揮發油、生物堿、甙類等。這些成分中即有有效成分，又有無效雜質，如不盡量去除雜質，會影響制劑的質量和穩定性，而高滲凝集技術則具有極高的識別性和選擇性可以將其中對疾病有益的成分完整的分離出來。高滲凝集技術采 用階梯式過濾分離藥液，合理地運用多次分離方法去除藥液中的非藥用等雜質。并對分離出的藥液進行有效的純化，濾除蛋白質、淀粉、果膠、鞣質等大分子物質以及微生物，減少水溶性有效成分的損失，使中藥有效成分基本無截留。采用高滲凝集技術對藥液進行精密過濾以去除鞣質、淀粉等雜質，取代一次醇沉，減少醇沉次數，直至無醇化生產。從而替代了傳統的水提醇沉法工藝，縮短生產周期，達到藥液澄明及無醇化，純度高，利于人體吸收的目的。本發明提供的G6凝集素包含有多種有效成分，其中包括丹參酸、丹參黃酮、三七皂苷、地黃皂苷、地黃素、昆布素、葛根黃酮和杜仲萜烯。本發明實施例中，發明人對制備的G6凝集素進行了活性測定，結果表明，用本發明方法制備的G6凝集素具有使紅細胞凝集的活力，并且在效果上要優于大豆凝集素標準品O在本發明的實施例中，發明人還對G6凝集素的降壓作用和對降壓藥所帶來毒副作用的抑制效果進行了研究。結果表明，本發明制備的G6凝集素單獨使用具有很好的降壓作用；當與降壓藥聯合使用時，其降壓效果更好，并與空白對照組有顯著差異，且優于單獨使用降壓藥的情況；當與降壓藥聯合使用時，能夠消除降壓藥所帶來的毒副作用。本發明的主要優點如下I)本發明從六味具有降壓排毒、通血管、防治高血壓并發癥的中藥中提取了 G6凝集素，其不但有植物凝集素的特性，與西藥一起服用還能解除西藥給人體帶來的肝腎損傷，同時具有恢復人體交感神經系統的調節功能，在穩定血壓、控制并發癥上有良好的功效；2)本發明所采用的高滲凝集技術能夠準確的選擇出中藥中對疾病有益的成分，將其準確識別，提純，凝集出來，且采用該技術提取的G6凝集素，具有極高的滲透性，便于人體吸收，利用，能大大提高其對疾病的輔助治療效果；3)本發明提供的G6凝集素因其是純天然的植物制劑，是通過對患者身體狀況的整體調理來達到最終穩定血壓，防止心腦血管疾病發生的目的，因此對高血壓及心腦血管并發癥的改善效果平穩、循序漸進。
具體實施例方式本發明公開了一種中藥提取的G6凝集素，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。本發明提供的技術方案為步驟I)按相同質量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50 100目藥物混合粉末； 步驟2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4°C下浸泡12小時，離心，取上清；步驟3)將上述得到的上清利用高滲凝集的方法過濾，去除雜質，得到含有植物凝集素的濾液；

步驟4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。實施例1 :G6凝集素的制備稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥各50克，研成50目細粉，加入5倍體積的 Tris 緩沖液(50mmoI /T, Tris-HCl, Immol /T, MgCl2, Immol /T, CaCl2, ρΗ8· O),勻衆,4°C下浸泡12小時。4°C, 3000rpm離心15min,取上清。用高滲凝集的方法將所得上清進行過濾，濾除蛋白質、淀粉、果膠、鞣質等大分子物質以及微生物，取濾液，用50倍體積的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小時，濃縮，干燥，得到G6凝集素。對所得蛋白質進行定量分析，結果為300g中成藥粉末得到G6凝集素蛋白250mg。實施例2 G6凝集素的制備稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥各100克,研成100目細粉,加入5倍體積的 Tris 緩沖液(50mmoI /T, Tris-HCl, Immol/!,MgCI2,1 mmol /T, CaCl2,ρΗ8· O),勻衆,4°C下浸泡12小時。4°C, 3000rpm離心15min,取上清。用高滲凝集的方法將所得上清進行過濾，濾除蛋白質、淀粉、果膠、鞣質等大分子物質以及微生物，取濾液，用50倍體積的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小時，濃縮，干燥，得到G6凝集素。對所得蛋白質進行定量分析，結果為600g中成藥粉末得到G6凝集素蛋白550mg。實施例3 G6凝集素的制備稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥各70克，研成80目細粉，加入5倍體積的 Tris 緩沖液(50mmoI /T, Tris-HCl, lmmol/LMgCl2, lmmol/L CaCl2,ρΗ8· O),勻衆,4°C下浸泡12小時。4°C, 3000rpm離心15min,取上清。用高滲凝集的方法將所得上清進行過濾，濾除蛋白質、淀粉、果膠、鞣質等大分子物質以及微生物，取濾液，用50倍體積的pH7. 4的O. 5mol/L PBS 4°C透析24小時，濃縮，干燥，得到G6凝集素。對所得蛋白質進行定量分析，結果為420g中成藥粉末得到G6凝集素蛋白370mg。實施例4 G6凝集素活力測定本發明采用兔紅細胞凝集實驗檢測凝集素的凝集活力。 陽性對照Sigma大豆凝集素標準品(溶液A)樣品實施例1制備的G6凝集素(溶液B)，實施例2制備的G6凝集素(溶液C)，實施例3制備的G6凝集素(溶液D)陰性對照0·5mol/L PBS (溶液 E)抽取家兔耳源靜脈血，采集紅細胞，用生理鹽水配成2%的紅細胞懸液。在V型凝血板上，將陽性對照和樣品分別按不同比例稀釋，每孔加25ul，在加入2%新鮮紅細胞懸液25ul，震蕩搖勻后，25°C放置2小時，肉眼觀察，無凝集現象時紅細胞沉積在V型孔底部呈大紅點狀，有凝集現象時呈網 狀不下沉。收集不同稀釋倍數時凝集情況，結果見表I所示。結果表明，實施例1-3所制備的G6凝集素活力與陽性對照無顯著差異(P > O. 05)，說明利用本發明所述方法得到的G6凝集素具有使紅細胞凝集的活力，而陰性對照組無凝集。特別值得注意的是，本發明實施例中制備的G6凝集素在稀釋倍數較低的情況下仍具有很好的凝集活力，說明本發明所得G6凝集素在效果上要優于大豆凝集素標準品。表I不同樣品兔紅細胞凝集效價比較
權利要求
1.一種G6凝集素，其特征在于，從中藥三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布中通過提取得到，且含有丹參酸、丹參黃酮、三七皂苷、地黃皂苷、地黃素、昆布素、葛根黃酮、杜仲萜烯成分。
2.一種制備如權利要求1所述G6凝集素的方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟I)按相同質量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50 100目藥物混合粉末； 步驟2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4°C下浸泡12小時，離心，取上清； 步驟3)將所得上清利用高滲凝集的方法過濾，去除雜質，得到含有植物凝集素的濾液； 步驟4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟2)所述離心的轉速為3000rpm，時間為15min，溫度為40C ο
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟4)所述透析使用的透析液為磷酸鹽緩沖液。
5.如權利要求1所述G6凝集素在制備防治心腦血管疾病藥物中的用途。
6.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述心腦血管疾病為高血壓。
全文摘要
本發明公開了一種從中藥三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布中提取的G6凝集素，該凝集素的制備方法為1)按相同質量稱取三七、杜仲、葛根、地黃、丹參、昆布干藥，研成50～100目藥物混合粉末；2)將上述得到的藥物混合粉末加入5倍體積的Tris緩沖液，勻漿，4℃下浸泡12小時，離心，取上清；3)將所得上清利用高滲凝集的方法過濾，去除雜質，得到含有植物凝集素的濾液；4)將上述濾液透析、濃縮、干燥，得到G6凝集素。本發明提供的G6凝集素不但具有植物凝集素的特性，同時具有恢復人體交感神經系統的調節功能，在穩定高血壓及其并發癥的改善上有著全新的突破。
文檔編號A61K36/804GK103055011SQ201110321989
公開日2013年4月24日 申請日期2011年10月20日 優先權日2011年10月20日
發明者王學英 申請人:王學英