本發明涉及腦啡(fei)肽酶抑(yi)制劑(ji)、血管緊張(zhang)素Ⅱ受(shou)體阻斷劑(ji)與葉酸的藥(yao)物組合物及其用途(tu)，屬(shu)于藥(yao)學領域(yu)。
背景技術：
高(gao)血(xue)壓(ya)(ya)是(shi)最常(chang)見的慢(man)性(xing)疾(ji)病(bing)(bing)之(zhi)一(yi)，也是(shi)心腦血(xue)管(guan)病(bing)(bing)最主(zhu)要(yao)的危險(xian)因素，其腦卒(zu)中(zhong)、心肌梗塞、心力(li)衰(shuai)竭及慢(man)性(xing)腎臟(zang)病(bing)(bing)等主(zhu)要(yao)并發癥的致殘、致死率(lv)高(gao)，嚴重消耗醫療資源，給家庭和社會帶來沉重負擔。高(gao)血(xue)壓(ya)(ya)的主(zhu)要(yao)治療目標(biao)是(shi)最大限(xian)度地降低心血(xue)管(guan)并發癥的發生與死亡的總體危險(xian)，需要(yao)治療所有可逆性(xing)心血(xue)管(guan)危險(xian)因素、亞臨床(chuang)靶器官損(sun)害以及各種并存(cun)的臨床(chuang)疾(ji)病(bing)(bing)【中(zhong)國高(gao)血(xue)壓(ya)(ya)防治指南修訂委員會.中(zhong)國高(gao)血(xue)壓(ya)(ya)防治指南2010.中(zhong)華心血(xue)管(guan)病(bing)(bing)雜(za)志(zhi)，2011；39(7)：579】。
心(xin)力衰(shuai)(shuai)竭(jie)(jie)(簡稱心(xin)衰(shuai)(shuai))是(shi)高血(xue)壓后期的(de)常見并發(fa)癥，其病理機制是(shi)心(xin)室泵血(xue)或充盈功能(neng)低下，心(xin)排血(xue)量(liang)不能(neng)滿足(zu)機體(ti)代(dai)謝的(de)需要，組織、器官血(xue)液灌注(zhu)不足(zu)，出現(xian)肺循(xun)(xun)環(huan)(huan)和/或體(ti)循(xun)(xun)環(huan)(huan)淤(yu)血(xue)，其實也是(shi)各種心(xin)臟病發(fa)展到(dao)嚴重(zhong)階段的(de)臨床(chuang)綜合癥，也稱為充血(xue)性心(xin)力衰(shuai)(shuai)竭(jie)(jie)。心(xin)衰(shuai)(shuai)的(de)特點(dian)是(shi)左室肥厚或擴張，導致神(shen)經(jing)內分泌失常、循(xun)(xun)環(huan)(huan)功能(neng)異常，出現(xian)典型的(de)臨床(chuang)癥狀(zhuang)，如心(xin)悸氣促、呼吸困難、體(ti)液潴留(浮腫(zhong))、乏(fa)力(特別是(shi)運動時)等。慢性心(xin)衰(shuai)(shuai)是(shi)指持續存在的(de)心(xin)力衰(shuai)(shuai)竭(jie)(jie)狀(zhuang)態，可以穩定、惡化(hua)或失代(dai)償。
心(xin)衰(shuai)(shuai)是心(xin)血管病(bing)患(huan)(huan)者喪失勞動(dong)力及(ji)死亡的(de)重要原因之(zhi)一，全球估計(ji)有2600萬人(ren)患(huan)(huan)有心(xin)衰(shuai)(shuai)。據世界衛(wei)生(sheng)(sheng)組織的(de)統(tong)(tong)計(ji)資料，心(xin)衰(shuai)(shuai)的(de)發(fa)生(sheng)(sheng)率已達(da)1.9％，人(ren)類終生(sheng)(sheng)患(huan)(huan)病(bing)幾率達(da)20％，心(xin)衰(shuai)(shuai)的(de)兩年病(bing)死率為37％，6年死亡率高達(da)82％。在美國，衛(wei)生(sheng)(sheng)統(tong)(tong)計(ji)顯示(shi)國家醫療費用(yong)支出的(de)1-2％用(yong)于心(xin)衰(shuai)(shuai)治療。我國心(xin)衰(shuai)(shuai)發(fa)病(bing)率亦比較(jiao)高，心(xin)衰(shuai)(shuai)患(huan)(huan)病(bing)率預計(ji)在1.26％，估計(ji)約400萬人(ren)左右。
臨床上治療心衰的常用藥物包括利尿劑、強心苷類、非苷類正性肌力藥、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)抑制劑、β受體阻斷劑等。血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(AngiotensinⅡReceptor Blocker,ARB)本是治療高血壓的常用藥物，主要通過阻斷血 管緊張素Ⅱ(AngⅡ)與相應受體AT1的結合而發揮藥理作用。AngⅡ是RAAS中最關鍵的一種生物學效應物，它和特異性受體AT1的結合可介導血管平滑肌收縮、抗利尿激素及醛固酮分泌釋放(鈉水潴留)、交感神經兒茶酚胺釋放增多等一系列生物學作用,導致血壓升高。因此，選擇性阻斷AT1受體是治療高血壓的有效途徑(jing)之一。目前臨床上(shang)ARB類藥(yao)物主要有：氯(lv)沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Losartan)、纈沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Valsartan)、厄貝沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Irbesartan)、替米沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Telmisartan)、坎地沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Candesartan)、奧美沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Olmesartan Medoxomil)、他索(suo)沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Tasosartan)和依(yi)普沙(sha)坦(tan)(tan)(tan)(tan)(tan)(Eprosartan)等。
心(xin)衰(shuai)的病理(li)生理(li)機制(zhi)(zhi)涉及RAAS激活(huo)、醛(quan)固酮增加(jia)等(deng)，故ARB不僅用(yong)于(yu)治療(liao)高(gao)血(xue)壓(ya)，同時也是(shi)治療(liao)心(xin)衰(shuai)(尤其是(shi)伴(ban)有(you)低射血(xue)分(fen)數時)的基礎藥物。左心(xin)室(shi)肥厚(hou)(hou)是(shi)心(xin)衰(shuai)的重(zhong)要(yao)病理(li)基礎，ARB亦(yi)能逆轉高(gao)血(xue)壓(ya)患者(zhe)的心(xin)臟肥厚(hou)(hou)，其逆轉心(xin)室(shi)重(zhong)構(gou)作用(yong)主要(yao)通過降低心(xin)室(shi)前后負荷(he)、抑制(zhi)(zhi)AngⅡ的增生作用(yong)和交感神(shen)經活(huo)性、抑制(zhi)(zhi)醛(quan)固酮誘導的心(xin)臟肥厚(hou)(hou)等(deng)【中(zhong)華醫學(xue)會心(xin)血(xue)管病學(xue)分(fen)會.中(zhong)國慢性心(xin)力衰(shuai)竭診斷治療(liao)指南2007.中(zhong)華心(xin)血(xue)管病雜志，2007,35(12)：1～29】。
2015年7月上旬美國FDA批準諾華公司的LCZ696上市，該藥由纈沙坦(valsartan)和沙庫比曲(sacubitril，又稱AHU377)以1：1摩爾比組成固定劑量組合，是一個口服有效、雙重作用的血管緊張素受體-腦啡肽酶抑制劑(angiotensin receptor-neprilysin inhibitor,ARNi)，用于治療高血壓和心衰。LCZ696有血流動力學和神經激素效應，其中纈沙坦則通過阻斷特異受體AT1而抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)AngⅡ的(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)，而沙(sha)庫(ku)比(bi)曲(又稱(cheng)AHU377)是(shi)一種(zhong)腦(nao)啡(fei)肽酶(mei)(mei)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)前藥，可(ke)增強利(li)鈉(na)肽(又稱(cheng)心鈉(na)素，簡稱(cheng)ANP)、緩(huan)(huan)激肽的(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)。腦(nao)啡(fei)肽酶(mei)(mei)是(shi)一種(zhong)中性內(nei)肽酶(mei)(mei)，降(jiang)(jiang)解幾(ji)種(zhong)內(nei)源(yuan)性血管活(huo)性肽，包(bao)括(kuo)ANP、緩(huan)(huan)激肽和腎上腺(xian)髓質素。抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)腦(nao)啡(fei)肽酶(mei)(mei)即可(ke)以(yi)增加這(zhe)些(xie)物(wu)質的(de)(de)(de)(de)(de)水平(ping)，對(dui)抗血管收縮、鈉(na)潴(zhu)留、心肌重(zhong)構和神經內(nei)分泌的(de)(de)(de)(de)(de)過度激活(huo)。目前市場(chang)上的(de)(de)(de)(de)(de)腦(nao)啡(fei)肽酶(mei)(mei)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)口服制(zhi)劑(ji)(ji)有(you)(you)消旋卡多曲，主要(yao)用(yong)(yong)于治療(liao)兒童腹(fu)瀉(xie)，也有(you)(you)企業在開發用(yong)(yong)于鎮(zhen)痛的(de)(de)(de)(de)(de)腦(nao)啡(fei)肽酶(mei)(mei)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)。腦(nao)啡(fei)肽酶(mei)(mei)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)重(zhong)要(yao)效應是(shi)ANP的(de)(de)(de)(de)(de)濃度增加，ANP具有(you)(you)強大的(de)(de)(de)(de)(de)擴(kuo)血管、排鈉(na)、利(li)尿、抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)RAAS和抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)交感神經系統(tong)興(xing)奮進而降(jiang)(jiang)低循環血量(liang)、減輕心臟負荷(he)以(yi)及調節水電解質平(ping)衡的(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)，是(shi)體(ti)內(nei)最重(zhong)要(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)RAAS拮抗激素。
LCZ696的(de)Ⅲ期(qi)臨床(chuang)試驗是(shi)有史以(yi)來在(zai)心(xin)衰(shuai)患(huan)者(zhe)中開展(zhan)的(de)最大(da)規模臨床(chuang)研究(jiu)，其數據顯示，LCZ696可(ke)顯著(zhu)降低心(xin)血管死亡或心(xin)衰(shuai)住院風(feng)險。但(dan)是(shi)，該臨床(chuang)試驗受(shou)試人(ren)群中NYHA分(fen)級為4級的(de)患(huan)者(zhe)只有不(bu)(bu)到1％，這可(ke)能(neng)會限制其在(zai)晚期(qi)心(xin)衰(shuai)患(huan)者(zhe)中的(de)使(shi)用； 其次，受(shou)試者(zhe)中只有約(yue)7％的(de)患(huan)者(zhe)進行心(xin)臟再同(tong)步化治(zhi)療(liao)(liao)(CRT)，這使(shi)人(ren)們不(bu)(bu)得不(bu)(bu)質(zhi)疑受(shou)試者(zhe)是(shi)否在(zai)隨機化分(fen)配時已接受(shou)了最佳(jia)的(de)心(xin)衰(shuai)治(zhi)療(liao)(liao)。因此(ci)，LCZ696雖然為心(xin)衰(shuai)的(de)治(zhi)療(liao)(liao)帶來新的(de)希望，但(dan)尚存(cun)在(zai)一些(xie)不(bu)(bu)足(zu)。
由于導(dao)(dao)致(zhi)循環系統的(de)(de)(de)淤血(xue)(xue)或(huo)血(xue)(xue)流(liu)緩慢(man)，持續存(cun)(cun)在的(de)(de)(de)慢(man)性(xing)心(xin)(xin)力衰竭可能產生(sheng)一(yi)些并發(fa)癥，如(ru)血(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)形成(cheng)，這可進一(yi)步演變成(cheng)血(xue)(xue)栓(shuan)(shuan)脫(tuo)落和栓(shuan)(shuan)塞，如(ru)發(fa)生(sheng)部(bu)位(wei)在腦(nao)(nao)部(bu)，則易導(dao)(dao)致(zhi)腦(nao)(nao)卒中。而高(gao)(gao)血(xue)(xue)壓本身即(ji)是(shi)(shi)腦(nao)(nao)卒中的(de)(de)(de)重要(yao)危(wei)險(xian)因(yin)(yin)素(su)。無論是(shi)(shi)慢(man)性(xing)心(xin)(xin)衰還是(shi)(shi)高(gao)(gao)血(xue)(xue)壓，其(qi)治(zhi)療目的(de)(de)(de)主要(yao)是(shi)(shi)降低心(xin)(xin)血(xue)(xue)管并發(fa)癥的(de)(de)(de)危(wei)險(xian)，也即(ji)是(shi)(shi)說靶(ba)器(qi)官保護是(shi)(shi)最終目標，需要(yao)治(zhi)療各種可逆的(de)(de)(de)心(xin)(xin)血(xue)(xue)管危(wei)險(xian)因(yin)(yin)素(su)、靶(ba)器(qi)官損害(hai)或(huo)并存(cun)(cun)的(de)(de)(de)疾病。因(yin)(yin)此，如(ru)何進一(yi)步提(ti)高(gao)(gao)LCZ696及同(tong)類藥(yao)物對(dui)慢(man)性(xing)心(xin)(xin)衰的(de)(de)(de)療效或(huo)獲(huo)益/風險(xian)比，以及如(ru)何提(ti)高(gao)(gao)對(dui)高(gao)(gao)血(xue)(xue)壓伴心(xin)(xin)衰患者的(de)(de)(de)靶(ba)器(qi)官保護、從(cong)而降低腦(nao)(nao)卒中事(shi)件風險(xian)，無論從(cong)臨床意義(yi)抑(yi)或(huo)社會意義(yi)來說，都(dou)是(shi)(shi)值得(de)研究和需要(yao)解決的(de)(de)(de)問題。
葉(xie)(xie)酸類化合物(wu)包括葉(xie)(xie)酸、5-甲基四氫葉(xie)(xie)酸、甲酰四氫葉(xie)(xie)酸、亞(ya)葉(xie)(xie)酸、左(zuo)亞(ya)葉(xie)(xie)酸鈣等，它們均屬于水溶性維生(sheng)素，經由腸(chang)道吸(xi)收(shou)，由尿排出體(ti)外，在人體(ti)內存留時間(jian)短(duan)暫，很少(shao)蓄積，所(suo)以必須經常(chang)從體(ti)外攝取(qu)以滿(man)足營養和代謝需要。人體(ti)內葉(xie)(xie)酸缺乏時影響同(tong)型半胱氨酸的(de)代謝，目前認為(wei)(wei)高同(tong)型半胱氨酸血癥是一種心血管(guan)危(wei)險因(yin)(yin)素，與血管(guan)內皮(pi)損傷、誘(you)導血栓形成等有關，也是腦卒中(zhong)的(de)危(wei)險因(yin)(yin)素之一。因(yin)(yin)此，在“腦啡肽(tai)酶抑制(zhi)劑+ARB”基礎(chu)上增加(jia)葉(xie)(xie)酸類化合物(wu)將可能改(gai)進前者組(zu)合的(de)功效，提(ti)高其作為(wei)(wei)治療心衰(尤其基礎(chu)疾(ji)病為(wei)(wei)高血壓時)藥物(wu)的(de)臨床價值。
技術實現要素：
本發明(ming)的(de)目的(de)是克服LCZ696類藥物存在的(de)不足，提供(gong)一種(zhong)在靶器(qi)官保護及降低腦卒中事件危險性(xing)方面表現更優的(de)復方藥物組合(he)物。
為(wei)實(shi)現上述目的，本(ben)發(fa)明采(cai)用以下技(ji)術方(fang)案：
一種藥物組合物，包括：
(1)藥用劑(ji)量的腦啡(fei)肽酶(mei)抑制劑(ji)；
(2)藥用劑量的血管緊張素Ⅱ受體阻斷劑(ARB)；
(3)藥(yao)用劑量(liang)的葉酸(suan)類化合物；
(4)藥(yao)劑學上可接受的載(zai)體。
上述的(de)“藥(yao)用劑量”是指(zhi)《中國(guo)慢性心力衰(shuai)竭診(zhen)斷(duan)治療指(zhi)南2007》中相對應(ying)的(de)各種具體藥(yao)物的(de)推薦(jian)劑量，或(huo)各藥(yao)品(pin)說明(ming)書規定的(de)劑量范(fan)圍。
所(suo)述腦啡(fei)肽酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑選自沙庫(ku)比曲(AHU377)，含量為10～100mg。
所述(shu)ARB選自纈沙(sha)(sha)坦(tan)、坎地(di)沙(sha)(sha)坦(tan)、替米(mi)沙(sha)(sha)坦(tan)、厄貝沙(sha)(sha)坦(tan)、奧美(mei)沙(sha)(sha)坦(tan)、他(ta)索(suo)沙(sha)(sha)坦(tan)、依普沙(sha)(sha)坦(tan)、氯沙(sha)(sha)坦(tan)及其(qi)活性代謝產物、酯類(lei)或鹽(yan)類(lei)的一種，含量為(wei)4～600mg。
通過進一(yi)步研究(jiu)，ARB的含量(liang)(liang)分(fen)別(bie)為纈沙(sha)坦(tan)(tan)(80～320mg)、坎(kan)地沙(sha)坦(tan)(tan)(4～32mg)、替米沙(sha)坦(tan)(tan)(20～120mg)、厄貝(bei)沙(sha)坦(tan)(tan)(75～300mg)、奧美(mei)沙(sha)坦(tan)(tan)(20～80mg)、他索沙(sha)坦(tan)(tan)(25～300mg)、依普(pu)沙(sha)坦(tan)(tan)(200～600mg)、氯(lv)沙(sha)坦(tan)(tan)(25～100mg)，上(shang)(shang)述(shu)物(wu)質(zhi)活性代謝產物(wu)、酯類或(huo)鹽類含量(liang)(liang)與相應的上(shang)(shang)述(shu)物(wu)質(zhi)含量(liang)(liang)等同。
所(suo)述葉酸的含量為0.1～5.0mg，更(geng)加優選0.2～2.0mg。
在(zai)本發(fa)明中，引(yin)起(qi)心(xin)衰的基(ji)礎(chu)疾病以原(yuan)發(fa)性高血(xue)壓(ya)為主，由它(ta)引(yin)起(qi)的靶(ba)器(qi)官損害包(bao)括左(zuo)心(xin)室肥厚、腎(shen)功能不全(quan)、動脈痙攣(luan)和(he)硬化(hua)等。當靶(ba)器(qi)官損害仍不能給予有(you)效控(kong)制，則(ze)發(fa)展成(cheng)為更(geng)嚴(yan)重的后果，尤其動脈硬化(hua)，在(zai)高血(xue)壓(ya)基(ji)礎(chu)上(shang)可(ke)進一步(bu)導致腦(nao)(nao)血(xue)管事件，包(bao)括腦(nao)(nao)出血(xue)或腦(nao)(nao)梗塞(sai)，兩(liang)者通常合稱為腦(nao)(nao)卒中。
本發(fa)(fa)明人在研究中發(fa)(fa)現(xian)，由腦啡肽酶抑制劑AHU377、ARB與葉酸組成的(de)復方(fang)藥(yao)物除對心衰模型動(dong)物有極佳(jia)的(de)治療作(zuo)(zuo)(zuo)用外，還具(ju)有顯(xian)著改(gai)善血管內皮功(gong)能、動(dong)脈彈(dan)性及減少尿蛋(dan)白等功(gong)效，提示對靶器(qi)官(guan)的(de)顯(xian)著保護作(zuo)(zuo)(zuo)用。即(ji)當AHU377、ARB與葉酸合用時能協同增(zeng)強對患者的(de)靶器(qi)官(guan)保護作(zuo)(zuo)(zuo)用，且這一協同作(zuo)(zuo)(zuo)用明顯(xian)強于(yu)LCZ696。
本(ben)發明還提供該(gai)藥物組(zu)合物在用于制(zhi)備降(jiang)低高血壓引起的腦(nao)血管(guan)事(shi)件(jian)危險(xian)性的藥物中(zhong)的用途,主要指降(jiang)低腦(nao)卒中(zhong)的發生(sheng)風險(xian)。
術語(yu)“藥用劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)”是(shi)指(zhi)為達到有(you)效控(kong)制或(huo)(huo)治療(liao)疾病(bing)(bing)(bing)的(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)，臨床醫(yi)生根據患(huan)(huan)病(bing)(bing)(bing)個(ge)體病(bing)(bing)(bing)情嚴(yan)重程度對(dui)(dui)患(huan)(huan)病(bing)(bing)(bing)個(ge)體施與藥物(wu)的(de)(de)(de)劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)。應(ying)當理解本發明(ming)提供的(de)(de)(de)藥物(wu)藥用劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)不是(shi)對(dui)(dui)本發明(ming)的(de)(de)(de)限制，而(er)是(shi)對(dui)(dui)本發明(ming)的(de)(de)(de)優選，通常情況(kuang)下，在該劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)優選范(fan)圍(wei)(wei)內，該藥物(wu)能夠對(dui)(dui)患(huan)(huan)病(bing)(bing)(bing)個(ge)體產生有(you)效的(de)(de)(de)治療(liao)效果。患(huan)(huan)病(bing)(bing)(bing)個(ge)體是(shi)指(zhi)患(huan)(huan)有(you)疾病(bing)(bing)(bing)的(de)(de)(de)獨(du)立(li)存在的(de)(de)(de)生命體，在本發明(ming)中(zhong)，生命體尤(you)指(zhi)人(ren)類。應(ying)當理解，現(xian)有(you)技術中(zhong)，人(ren)類藥用劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)或(huo)(huo)藥用劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)范(fan)圍(wei)(wei)可與哺(bu)乳動物(wu)，如(ru)大鼠、小鼠等進行換算以得出適合相應(ying)動物(wu)適用的(de)(de)(de)藥用劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)或(huo)(huo)劑(ji)(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)(liang)范(fan)圍(wei)(wei)。
本發明提供的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組(zu)合(he)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)化合(he)物(wu)(wu)(wu)在(zai)(zai)相(xiang)同(tong)(tong)(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)劑(ji)(ji)中(zhong)可(ke)(ke)以(yi)(yi)同(tong)(tong)(tong)時施與(yu)患病(bing)個(ge)(ge)體(ti)(ti)，也可(ke)(ke)分(fen)(fen)別(bie)地相(xiang)繼施與(yu)患病(bing)個(ge)(ge)體(ti)(ti)。若是(shi)(shi)相(xiang)繼施與(yu)患病(bing)個(ge)(ge)體(ti)(ti)，則第二(er)個(ge)(ge)(或附加的(de)(de)(de)(de)(de))活(huo)性成分(fen)(fen)施與(yu)的(de)(de)(de)(de)(de)延遲不應(ying)當導致活(huo)性成分(fen)(fen)聯合(he)帶(dai)來的(de)(de)(de)(de)(de)有益(yi)效果的(de)(de)(de)(de)(de)損失。若是(shi)(shi)同(tong)(tong)(tong)時施與(yu)患病(bing)個(ge)(ge)體(ti)(ti)，組(zu)合(he)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)化合(he)物(wu)(wu)(wu)可(ke)(ke)以(yi)(yi)混(hun)合(he)存在(zai)(zai)于同(tong)(tong)(tong)一個(ge)(ge)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)制(zhi)劑(ji)(ji)形(xing)(xing)式(shi)(shi)中(zhong)，也可(ke)(ke)以(yi)(yi)以(yi)(yi)同(tong)(tong)(tong)樣的(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)劑(ji)(ji) 形(xing)(xing)式(shi)(shi)分(fen)(fen)別(bie)獨立存在(zai)(zai)。若是(shi)(shi)以(yi)(yi)同(tong)(tong)(tong)樣的(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)劑(ji)(ji)形(xing)(xing)式(shi)(shi)分(fen)(fen)別(bie)獨立存在(zai)(zai)，則藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組(zu)合(he)物(wu)(wu)(wu)可(ke)(ke)以(yi)(yi)變通(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)“組(zu)合(he)藥(yao)盒”形(xing)(xing)式(shi)(shi)存在(zai)(zai)。“組(zu)合(he)藥(yao)盒”是(shi)(shi)一種(zhong)盒狀(zhuang)容器，內置一種(zhong)或多種(zhong)劑(ji)(ji)量形(xing)(xing)式(shi)(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組(zu)合(he)及(ji)其使用說(shuo)明書，在(zai)(zai)本發明中(zhong)優選所述的(de)(de)(de)(de)(de)腦啡肽酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)AHU377、ARB類(lei)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)一種(zhong)與(yu)葉酸類(lei)化合(he)物(wu)(wu)(wu)。
本發明(ming)的(de)(de)另一個目(mu)的(de)(de)是提(ti)供(gong)含有藥(yao)(yao)用(yong)(yong)劑量的(de)(de)AHU377或其(qi)它腦啡肽(tai)酶抑(yi)制(zhi)劑的(de)(de)一種、藥(yao)(yao)用(yong)(yong)劑量的(de)(de)ARB及其(qi)活性代(dai)謝產物(wu)或其(qi)鹽(yan)類中的(de)(de)一種、葉(xie)酸類化合(he)物(wu)和可藥(yao)(yao)用(yong)(yong)載體的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)組合(he)物(wu)在用(yong)(yong)于(yu)制(zhi)備(bei)治(zhi)療(liao)心衰(shuai)的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)中的(de)(de)用(yong)(yong)途，更具(ju)體地說，是提(ti)供(gong)在用(yong)(yong)于(yu)制(zhi)備(bei)治(zhi)療(liao)心衰(shuai)(尤其(qi)由高血壓(ya)引起的(de)(de)心衰(shuai))、預防(fang)腦卒(zu)中的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)中的(de)(de)用(yong)(yong)途。
本發明提供的藥物(wu)組合物(wu)的劑(ji)(ji)(ji)(ji)型(xing)包括但不限于普通(tong)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、雙(shuang)層片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、多層片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、緩釋(shi)(shi)(shi)(shi)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、單室(shi)(shi)控(kong)釋(shi)(shi)(shi)(shi)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、雙(shuang)室(shi)(shi)控(kong)釋(shi)(shi)(shi)(shi)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、微(wei)孔(kong)型(xing)控(kong)釋(shi)(shi)(shi)(shi)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、舌下含片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)、口腔速崩片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)、分散片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)、腸溶片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)、顆粒(li)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、丸(wan)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、腸溶膠囊(nang)(nang)、延遲釋(shi)(shi)(shi)(shi)放片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)、定時(shi)/位釋(shi)(shi)(shi)(shi)放片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)、普通(tong)膠囊(nang)(nang)、緩釋(shi)(shi)(shi)(shi)膠囊(nang)(nang)、控(kong)釋(shi)(shi)(shi)(shi)膠囊(nang)(nang)、含有微(wei)丸(wan)或(huo)小(xiao)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)的膠囊(nang)(nang)、含有微(wei)丸(wan)或(huo)小(xiao)片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)的pH依賴型(xing)膠囊(nang)(nang)、顆粒(li)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、口服液(ye)、膜劑(ji)(ji)(ji)(ji)或(huo)貼劑(ji)(ji)(ji)(ji)等劑(ji)(ji)(ji)(ji)型(xing)，其中優選片(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)(pian)劑(ji)(ji)(ji)(ji)、膠囊(nang)(nang)或(huo)顆粒(li)劑(ji)(ji)(ji)(ji)。
本發明的(de)有益效果是：本發明提(ti)供(gong)(gong)的(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)(wu)具有明顯(xian)協同作用(yong)，即協同治療慢(man)性(xing)心力衰(shuai)竭(jie)、預(yu)防腦卒(zu)中的(de)作用(yong)。本發明還提(ti)供(gong)(gong)了上述藥(yao)用(yong)劑量的(de)AHU377或其它(ta)腦啡肽酶抑(yi)制劑、ARB和葉酸類(lei)化(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)組成的(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)(wu)在用(yong)于(yu)(yu)制備治療心力衰(shuai)竭(jie)的(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)中的(de)用(yong)途；進一步，本發明提(ti)供(gong)(gong)了上述藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)(wu)在用(yong)于(yu)(yu)制備預(yu)防基礎疾病—高血壓引(yin)起的(de)腦卒(zu)中的(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)中的(de)用(yong)途。
下面結合具體(ti)實施方式(shi)對(dui)本(ben)(ben)發明做(zuo)進(jin)一步(bu)說明，并非對(dui)本(ben)(ben)發明的限定，凡依照本(ben)(ben)發明內容進(jin)行的任何(he)本(ben)(ben)領域的等同替(ti)換，均屬于本(ben)(ben)發明的保護范(fan)圍。
具體實施方式
實施例1.制備AHU377 20mg/纈沙坦80mg/葉酸(suan)0.4mg片(pian)(1000片(pian)量)
制(zhi)(zhi)備方法(fa)：將輔料粉(fen)碎過(guo)80目篩，干(gan)燥(zao)備用。取20g AHU377、80g纈沙(sha)坦、0.4g葉酸(suan)按照等(deng)量(liang)遞(di)增(zeng)法(fa)混(hun)(hun)合(he)均勻(yun)，按照處方量(liang)分別加入微(wei)晶纖維(wei)素、膠態二氧化硅和(he)交聯聚維(wei)酮，用2％羥丙基(ji)甲基(ji)纖維(wei)素溶液制(zhi)(zhi)成軟材(cai)，20目篩制(zhi)(zhi)粒(li)(li)(li)，40℃干(gan)燥(zao)約2h，20目篩整粒(li)(li)(li)，控制(zhi)(zhi)顆粒(li)(li)(li)的含水量(liang)為2-3％，將干(gan)燥(zao)后的顆粒(li)(li)(li)與硬脂酸(suan)鎂、滑石(shi)粉(fen)混(hun)(hun)合(he)均勻(yun)，半成品進行檢測，測定(ding)含量(liang)，用壓片機壓制(zhi)(zhi)成1000片。制(zhi)(zhi)備過(guo)程中注意避光(guang)，制(zhi)(zhi)成的片劑需鋁(lv)塑(su)泡(pao)罩(zhao)包(bao)裝，避光(guang)保存。
實(shi)施例2.制備AHU377 40mg/坎(kan)地沙坦16mg/葉酸0.8mg片(1000片)
制備(bei)方法(fa)：輔料為直壓輔料，干燥備(bei)用。取處方量的(de)葉酸、坎地(di)沙坦(tan)及微晶(jing)纖維(wei)素30g按照等(deng)量遞增(zeng)法(fa)混合均勻，得(de)(de)到混粉1；稱(cheng)取剩(sheng)余處方量的(de)微晶(jing)纖維(wei)素、乳糖、交聯羧甲基(ji)纖維(wei)素鈉、二(er)氧化硅，與AHU377按等(deng)量遞增(zeng)法(fa)充分混勻，得(de)(de)到混粉2；將混粉1和混粉2與處方量的(de)山(shan)愈酸甘油酯混合均勻，得(de)(de)最終混粉中(zhong)間(jian)體(ti)，檢測(ce)混粉中(zhong)間(jian)體(ti)，壓制成(cheng)1000片(pian)。制備(bei)過程中(zhong)注意避(bi)光，制成(cheng)的(de)片(pian)劑需(xu)鋁塑泡罩包裝(zhuang)，避(bi)光保存。
實施例(li)3.制備AHU377 50mg/替米沙坦(tan)60mg/葉酸0.8mg膠囊(1000粒量)
制(zhi)備(bei)方法：將原輔料粉碎80目(mu)篩(shai)，干燥(zao)備(bei)用。取50g AHU377、60g替米沙坦、0.8g葉酸按照等量遞(di)增法混(hun)合均(jun)(jun)勻，分別加(jia)入(ru)乳糖、預膠(jiao)(jiao)化淀(dian)粉、微晶(jing)纖維素(su)、羧甲基(ji)淀(dian)粉鈉和低取代羥丙(bing)基(ji)纖維素(su)，混(hun)合均(jun)(jun)勻，用2％羥丙(bing)甲纖維素(su)溶液制(zhi)成(cheng)軟材(cai)，20目(mu)篩(shai)制(zhi)粒(li)(li)(li)，40℃干燥(zao)約(yue)2h，18目(mu)篩(shai)整粒(li)(li)(li)，控(kong)制(zhi)顆粒(li)(li)(li)的(de)含水(shui)量為(wei)2-3％，將干燥(zao)后的(de)顆粒(li)(li)(li)與硬脂(zhi)酸鎂混(hun)合均(jun)(jun)勻，半成(cheng)品進行(xing)檢(jian)測，測定含量，裝(zhuang)入(ru)空心膠(jiao)(jiao)囊(nang)即得。
實施例4.AHU377/纈(xie)沙坦/葉酸(suan)組方(fang)對(dui)心衰(shuai)大(da)鼠的治(zhi)療作用
一、方法：
1.動(dong)物：Wistar大(da)鼠40只(zhi)，雌雄各(ge)半，體重(zhong)200--240g，購(gou)自中國科學院上海(hai)實驗(yan)動(dong)物中心。
2.造模方法：采(cai)用腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)縮窄(zhai)法(心(xin)臟后負荷增加)制作慢(man)(man)(man)性心(xin)衰(shuai)大(da)鼠模型。大(da)鼠行4％戊巴比(bi)妥鈉腹(fu)腔注射(she)麻醉，每公斤(jin)體重注射(she)40mg，劍突下腹(fu)正中切口(kou)，分層打開腹(fu)腔，在腎動(dong)(dong)脈(mo)分支以(yi)上鈍(dun)性游離腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)，將7#注射(she)器針頭平行置于腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)上，用4#手(shou)(shou)術(shu)絲(si)線將腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)和注射(she)器一(yi)同(tong)(tong)結扎，然后緩慢(man)(man)(man)將注射(she)器撤出，關(guan)腹(fu)，分層縫(feng)合。使大(da)鼠腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)直徑(jing)縮窄(zhai)為0.7mm。正常(chang)對照組(zu)開腹(fu)后將手(shou)(shou)術(shu)絲(si)線穿(chuan)過腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)，除不縮窄(zhai)腹(fu)主(zhu)(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)以(yi)外，其他操作與手(shou)(shou)術(shu)組(zu)完全(quan)相(xiang)同(tong)(tong)。正常(chang)喂養(yang)3周，測定血液動(dong)(dong)力學(xue)指(zhi)標，以(yi)確定慢(man)(man)(man)性心(xin)衰(shuai)模型是否成功。
3.分(fen)組(zu)給(gei)藥及指標檢測(ce)(ce)：將上述造模成功后(hou)的心(xin)衰大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)隨機分(fen)組(zu)，另(ling)設正常(chang)對(dui)照組(zu)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)10只，各組(zu)給(gei)藥劑量情況見表2。采(cai)用(yong)灌胃給(gei)藥，每天(tian)1次(ci)，連續3周。分(fen)別測(ce)(ce)定給(gei)藥前、給(gei)藥后(hou)不(bu)同(tong)時(shi)間大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)心(xin)率(lv)(HR)、射血(xue)前期(PEP)、左室舒(shu)張時(shi)間(LVET)、每搏心(xin)輸(shu)出量(SV)、每分(fen)心(xin)輸(shu)出量(CO)。采(cai)用(yong)無創性心(xin)功能血(xue)流動力學監(jian)測(ce)(ce)系(xi)統(tong)。接好心(xin)電(dian)圖(tu)的肢體(ti)導聯(lian)，同(tong)步記錄心(xin)電(dian)圖(tu)和(he)心(xin)阻抗—階微分(fen)圖(tu)。記錄8-10個心(xin)動周期，求其平(ping)均值。系(xi)統(tong)自動采(cai)用(yong)Kubicek公(gong)式計算相關(guan)指標。另(ling)取大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)靜脈(mo)血(xue)1ml，用(yong)來檢測(ce)(ce)血(xue)漿ANP濃度(ELISA法(fa))。
4.統計(ji)學處(chu)理：所(suo)有實驗數據，計(ji)量資料用(yong)(yong)均數±標準差(X±S)表示(shi)，兩組間均數比較用(yong)(yong)t檢(jian)驗，計(ji)數資料用(yong)(yong)卡(ka)方檢(jian)驗。全部數據采用(yong)(yong)SPSS 10.0軟件進行分析。
二、結果：
1、造模情況：(1)一般情況：于手術后第3周觀察大鼠一般情況，以評價心衰程度，結果顯示：腹主動脈縮窄法造成大鼠3周后出現明顯心衰癥狀，模型組大鼠活動明顯減少，爪背紫紺，水腫，尿量減少，與正常對照組有顯著差異。(2)流動力學變化：第3周手術組和對照組大鼠心功能變化情況見表2。模型組HR由381±52.4次/分上升到471±57.8次/分，LVET由80.3±24.0ms縮短至52.5±22.3ms，SV和CO均顯著下降，提示模型組大鼠手術后3周心臟功能明顯下降，而對照組心功能各項指標均無變化。組間比較HR、LVET、CO、SV均有顯著性差異，說明模型組造模成功。(3)病理觀察：模型組電鏡所見：心肌T—管及肌漿網池均呈高度至極度擴張成大串，有處大串連接成蔟。心肌線粒體于肌膜下增生成蔟、有的線粒體灶性溶解。心肌肌膜局部溶解、水腫，局部肌纖維溶解。散在的肌纖維有小灶性溶解。心肌束間微血管擴張，內皮細胞胞飲泡增多。正常對照組電鏡所見：為正常心肌(ji)(ji)組織(zhi)，均(jun)符合下列條件：核(he)(he)常染(ran)(ran)色(se)(se)質和(he)異(yi)染(ran)(ran)色(se)(se)質分明，有大(da)圓(yuan)核(he)(he)仁(ren)。有豐富核(he)(he)仁(ren)協同染(ran)(ran)色(se)(se)質，有染(ran)(ran)色(se)(se)質周圍及間(jian)顆粒(li)。核(he)(he)周間(jian)隙狹窄而(er)一致。線粒(li)體(ti)完(wan)整，大(da)而(er)嵴清晰。心肌(ji)(ji)T—管及肌(ji)(ji)漿網少而(er)不擴(kuo)張。肌(ji)(ji)膜下無水腫。
表1 第(di)3周手術(shu)組(zu)和對照組(zu)大鼠心功能變(bian)化(hua)情況
每組第3周測量值分別與本組第1周比較：*P＜0.05，**P＜0.01；
模型組與對照組的比較：△P＜0.05,△△P＜0.01。
2、AHU377/纈(xie)(xie)沙坦/葉酸與(yu)(yu)LCZ696的(de)比(bi)較(jiao)(jiao)：經3周治(zhi)療(liao)(liao)后，與(yu)(yu)模型組(zu)(zu)比(bi)較(jiao)(jiao)，LCZ696組(zu)(zu)、AHU377/纈(xie)(xie)/葉組(zu)(zu)心衰(shuai)大鼠(shu)第6周的(de)血(xue)流動力學(xue)均得到顯著(zhu)改善(shan)，表現為心率(lv)及PEP下降、LVET及CO上升(sheng)，LCZ696組(zu)(zu)、AHU377/纈(xie)(xie)/葉組(zu)(zu)大鼠(shu)的(de)血(xue)漿ANP濃度亦明(ming)顯增高，均提示(shi)對(dui)心衰(shuai)的(de)顯著(zhu)治(zhi)療(liao)(liao)作用(yong)。此外，與(yu)(yu)LCZ696組(zu)(zu)比(bi)較(jiao)(jiao)，AHU377/纈(xie)(xie)/葉組(zu)(zu)PEP下降、CO上升(sheng)更為顯著(zhu)，提示(shi)對(dui)心衰(shuai)的(de)治(zhi)療(liao)(liao)作用(yong)有一定優勢。
表(biao)2 第(di)6周各(ge)組(zu)大(da)鼠(shu)心功能(neng)及血漿ANP情況比較(jiao)(n＝10)
【注】AHU377/纈(xie)/葉組(zu)表示AHU377+纈(xie)沙坦+葉酸組(zu)。
與對照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較：▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；
與LCZ696組比較：#P＜0.05。
三、討論：
本研(yan)究采(cai)用腹(fu)主(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)(mo)縮窄法制(zhi)作(zuo)慢性(xing)(xing)(xing)心衰(shuai)大(da)鼠模(mo)型。心衰(shuai)時(shi)(shi)血(xue)液動(dong)(dong)力(li)(li)學異常是產生臨床(chuang)充(chong)血(xue)癥狀(zhuang)的病理(li)生理(li)基礎。左(zuo)(zuo)室(shi)功能障礙引(yin)起CO降(jiang)低和左(zuo)(zuo)室(shi)舒(shu)張時(shi)(shi)間延長，前者(zhe)導(dao)致(zhi)組(zu)織器(qi)官血(xue)液灌注不足，后者(zhe)引(yin)起肺血(xue)管嵌壓(ya)升(sheng)高。采(cai)用縮窄大(da)鼠腹(fu)主(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)(mo)，造(zao)成壓(ya)力(li)(li)負荷病理(li)性(xing)(xing)(xing)增高，心臟作(zuo)功增加(jia)，引(yin)起左(zuo)(zuo)心衰(shuai)，最終導(dao)致(zhi)全(quan)心衰(shuai)。實驗結果顯(xian)示：腹(fu)主(zhu)動(dong)(dong)脈(mo)(mo)縮窄3周(zhou)后出(chu)現明(ming)顯(xian)心衰(shuai)癥狀(zhuang)，與(yu)正常對照組(zu)有顯(xian)著(zhu)(zhu)性(xing)(xing)(xing)差異。模(mo)型組(zu)大(da)鼠活動(dong)(dong)明(ming)顯(xian)減(jian)少，爪背(bei)紫紺、水腫，與(yu)對照組(zu)比較(jiao)有顯(xian)著(zhu)(zhu)性(xing)(xing)(xing)差異。提示造(zao)模(mo)組(zu)大(da)鼠心功能下降(jiang)，全(quan)身(shen)血(xue)液灌注減(jian)少。心臟功收縮和舒(shu)張功能障礙分別引(yin)起CO降(jiang)低和左(zuo)(zuo)室(shi)舒(shu)張末壓(ya)力(li)(li)(LVEDP)增高。隨著(zhu)(zhu)心輸出(chu)量的減(jian)少，激活了(le)各種神經內分泌的調節機制(zhi)，使外周(zhou)循(xun)環阻力(li)(li)增加(jia)，外周(zhou)血(xue)液重新分配。
實(shi)驗(yan)結(jie)果顯(xian)示：模(mo)(mo)型(xing)(xing)組HR顯(xian)著加快(kuai)；LVET縮短(duan)，SV和(he)CO均顯(xian)著下(xia)(xia)降(jiang)，提示模(mo)(mo)型(xing)(xing)組大(da)鼠(shu)(shu)手(shou)術后(hou)3周心(xin)(xin)臟(zang)功(gong)(gong)(gong)能(neng)明顯(xian)下(xia)(xia)降(jiang)，而對(dui)照組心(xin)(xin)功(gong)(gong)(gong)能(neng)各項指(zhi)標(biao)均無變化，說明造模(mo)(mo)成功(gong)(gong)(gong)。本實(shi)驗(yan)采用無創(chuang)性(xing)心(xin)(xin)功(gong)(gong)(gong)能(neng)血流(liu)動力(li)學監測(ce)系統，在大(da)鼠(shu)(shu)清(qing)醒狀(zhuang)態下(xia)(xia)測(ce)量(liang)心(xin)(xin)功(gong)(gong)(gong)能(neng)血液動力(li)學指(zhi)標(biao)，克服了在麻(ma)醉(zui)狀(zhuang)態下(xia)(xia)使(shi)用創(chuang)傷性(xing)測(ce)量(liang)方(fang)法，從而避免了動物所處狀(zhuang)態(清(qing)醒或麻(ma)醉(zui))以及(ji)操作方(fang)法(有(you)創(chuang)或無創(chuang))不同而造成的對(dui)大(da)鼠(shu)(shu)心(xin)(xin)功(gong)(gong)(gong)能(neng)的干(gan) 擾。模(mo)(mo)型(xing)(xing)組大(da)鼠(shu)(shu)手(shou)術3周后(hou)心(xin)(xin)臟(zang)收縮和(he)舒張(zhang)功(gong)(gong)(gong)能(neng)均明顯(xian)降(jiang)低，說明模(mo)(mo)型(xing)(xing)組大(da)鼠(shu)(shu)心(xin)(xin)臟(zang)收縮和(he)舒張(zhang)功(gong)(gong)(gong)能(neng)明顯(xian)下(xia)(xia)降(jiang)。
本研究(jiu)初(chu)步證(zheng)實(shi)AHU377+纈沙坦+葉酸三(san)聯組(zu)(zu)(zu)方組(zu)(zu)(zu)在對心(xin)衰(shuai)(shuai)的(de)(de)顯(xian)著(zhu)(zhu)療(liao)效：經3周(zhou)治療(liao)后，與模型組(zu)(zu)(zu)比較，AHU377/纈/葉組(zu)(zu)(zu)心(xin)衰(shuai)(shuai)大鼠第6周(zhou)的(de)(de)血流動力(li)學均得(de)到(dao)顯(xian)著(zhu)(zhu)改善，表現為心(xin)率(lv)及(ji)PEP下降(jiang)(jiang)、LVET及(ji)CO上升，大鼠血漿ANP濃度亦明顯(xian)增高(gao)，這(zhe)些結果的(de)(de)綜合提示對心(xin)衰(shuai)(shuai)的(de)(de)顯(xian)著(zhu)(zhu)治療(liao)作(zuo)用(yong)。此外，與LCZ696組(zu)(zu)(zu)比較，AHU377/纈/葉組(zu)(zu)(zu)PEP下降(jiang)(jiang)、CO上升更為顯(xian)著(zhu)(zhu)，提示本組(zu)(zu)(zu)方對心(xin)衰(shuai)(shuai)的(de)(de)治療(liao)作(zuo)用(yong)還有一定優勢(shi)。
實施例5.AHU377/坎地(di)沙(sha)坦/葉酸對卒中易感型高血壓(ya)大(da)鼠靶器官的(de)保(bao)護作用
一、方法：
8周(zhou)齡左(zuo)右雄性卒(zu)中易感型自發(fa)性高血(xue)壓(SHR-SP)大(da)鼠共60只，根據是否給(gei)予治療(liao)干(gan)預，分為(wei)(wei)模型組、坎地沙坦+AHU377+葉酸組(相應劑量(liang)(liang)：2.4+5+0.08mg/kg)、坎地沙坦+AHU377組(相應劑量(liang)(liang)：2.4+5mg/kg)。飼養條件：室(shi)溫22±2℃；相對濕(shi)度(du)50％；飲(yin)用水為(wei)(wei)純凈水。另設WKY對照(zhao)組，20只。灌(guan)胃給(gei)藥(yao)，每(mei)(mei)(mei)天1次，每(mei)(mei)(mei)周(zhou)稱(cheng)重(zhong)一(yi)次，根據體(ti)重(zhong)調(diao)整藥(yao)量(liang)(liang)，連續(xu)(xu)8周(zhou)。觀(guan)察(cha)(cha)指標：(1)每(mei)(mei)(mei)日觀(guan)察(cha)(cha)動(dong)(dong)物(wu)飲(yin)食(shi)、存(cun)活(huo)情況及行為(wei)(wei)活(huo)動(dong)(dong)，于8周(zhou)記錄(lu)各組動(dong)(dong)物(wu)腦卒(zu)中發(fa)生情況。(2)神(shen)(shen)經功能(neng)(neng)分級(ji)參照(zhao)Bederson的神(shen)(shen)經功能(neng)(neng)分級(ji)標準，分為(wei)(wei)如下5級(ji)，每(mei)(mei)(mei)周(zhou)觀(guan)察(cha)(cha)一(yi)次：0級(ji)(正(zheng)常(chang))：無神(shen)(shen)經功能(neng)(neng)缺損癥狀；1級(ji)(輕(qing)微)：前肢(zhi)(zhi)蜷縮(suo)或(huo)屈曲(qu)(qu),主要是持(chi)續(xu)(xu)性腕(wan)屈曲(qu)(qu)或(huo)肩內收伴(ban)肘(zhou)部伸展；2級(ji)(中度(du))：前肢(zhi)(zhi)持(chi)續(xu)(xu)性蜷縮(suo)或(huo)屈曲(qu)(qu),可見腕(wan)、肘(zhou)全部屈曲(qu)(qu)、肩部內收或(huo)內旋(xuan)；3級(ji)(嚴重(zhong))：持(chi)續(xu)(xu)性肢(zhi)(zhi)體(ti)蜷縮(suo)或(huo)屈曲(qu)(qu),一(yi)側肢(zhi)(zhi)體(ti)推(tui)力體(ti)抗持(chi)續(xu)(xu)性減弱(ruo),自主活(huo)動(dong)(dong)時(shi)不伴(ban)肢(zhi)(zhi)體(ti)劃圈(quan)(quan)行為(wei)(wei)；4級(ji)(甚(shen)重(zhong))：雙側肢(zhi)(zhi)體(ti)持(chi)續(xu)(xu)性蜷縮(suo)或(huo)屈曲(qu)(qu),一(yi)側肢(zhi)(zhi)體(ti)推(tui)力體(ti)抗持(chi)續(xu)(xu)性減弱(ruo),自主活(huo)動(dong)(dong)時(shi)出(chu)(chu)現(xian)肢(zhi)(zhi)體(ti)劃圈(quan)(quan)行為(wei)(wei)。(3)病(bing)理(li)學觀(guan)察(cha)(cha)：所有存(cun)活(huo)動(dong)(dong)物(wu)及死(si)亡后可取得病(bing)理(li)組織的大(da)鼠均取腦組織，切片、HE染(ran)色，觀(guan)察(cha)(cha)腦出(chu)(chu)血(xue)或(huo)腦梗塞(sai)情況，計算各組大(da)鼠腦卒(zu)中發(fa)生率。
二、結果：
本實驗(yan)過程(cheng)中，模(mo)型(xing)組(zu)(zu)大鼠(shu)卒(zu)中后出現明(ming)顯(xian)(xian)精(jing)神(shen)萎靡，嗜睡，毛(mao)發蓬松、干枯或脫落、無光(guang)澤，體(ti)重(zhong)(zhong)下(xia)降，主(zhu)動(dong)活動(dong)明(ming)顯(xian)(xian)減(jian)少，行動(dong)遲緩，肢體(ti)呈(cheng)不(bu)同程(cheng)度癱瘓，部(bu)分大鼠(shu)發病同時伴(ban)有(you)抽搐(chu)、腹瀉(xie)、小便失禁、眼球出血等癥狀(zhuang)，病情嚴重(zhong)(zhong)者數小時內(nei)死(si)亡。治療組(zu)(zu)的大部(bu)分動(dong)物(wu)神(shen)經功(gong)能缺(que)損(sun)較模(mo)型(xing)組(zu)(zu)輕微，精(jing)神(shen)狀(zhuang)態明(ming)顯(xian)(xian)優于模(mo)型(xing)組(zu)(zu)， 自(zi)主(zhu)活動(dong)增加，主(zhu)動(dong)覓食、飲水，體(ti)重(zhong)(zhong)下(xia)降不(bu)明(ming)顯(xian)(xian)，毛(mao)發也較模(mo)型(xing)組(zu)(zu)順滑有(you)光(guang)澤。
模型組有2只(zhi)、坎地(di)沙坦(tan)(tan)+AHU377+葉酸組有1只(zhi)、坎地(di)沙坦(tan)(tan)+AHU377組有1只(zhi)動物死亡后被其他動物食掉(diao)，未能取(qu)腦組織進行(xing)病理檢查(cha)。
模型(xing)組(zu)(zu)20只(zhi)(zhi)(zhi)大鼠中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)有16只(zhi)(zhi)(zhi)發(fa)(fa)生腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)，其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)死(si)亡(wang)5只(zhi)(zhi)(zhi)，除2只(zhi)(zhi)(zhi)動(dong)物(wu)(wu)于(yu)夜間死(si)亡(wang)后未能及(ji)時(shi)取得組(zu)(zu)織(zhi)外(wai)，其(qi)他(ta)18只(zhi)(zhi)(zhi)動(dong)物(wu)(wu)均(jun)(jun)(jun)進行了病(bing)(bing)(bing)理(li)組(zu)(zu)織(zhi)學觀察(cha)，共16只(zhi)(zhi)(zhi)有腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)病(bing)(bing)(bing)理(li)表現發(fa)(fa)生，其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)腦(nao)出血(xue)5只(zhi)(zhi)(zhi)，腦(nao)梗死(si)6只(zhi)(zhi)(zhi)，混合(he)性中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)風5只(zhi)(zhi)(zhi)。腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)灶及(ji)周圍均(jun)(jun)(jun)可見小動(dong)脈透明(ming)(ming)變性或纖維素樣壞死(si)，管(guan)(guan)壁增厚，管(guan)(guan)腔(qiang)狹窄(zhai)，有的管(guan)(guan)腔(qiang)內(nei)可見微血(xue)栓形成，管(guan)(guan)周滲(shen)血(xue)。坎(kan)地(di)沙(sha)坦+AHU377組(zu)(zu)20只(zhi)(zhi)(zhi)大鼠有12只(zhi)(zhi)(zhi)發(fa)(fa)生腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)，于(yu)實驗結束時(shi)死(si)亡(wang)2只(zhi)(zhi)(zhi)，其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)1只(zhi)(zhi)(zhi)動(dong)物(wu)(wu)未能取得病(bing)(bing)(bing)理(li)組(zu)(zu)織(zhi)，其(qi)他(ta)19只(zhi)(zhi)(zhi)動(dong)物(wu)(wu)均(jun)(jun)(jun)進行了病(bing)(bing)(bing)理(li)組(zu)(zu)織(zhi)學觀察(cha)，9只(zhi)(zhi)(zhi)有腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)病(bing)(bing)(bing)理(li)表現，與模型(xing)組(zu)(zu)比(bi)較腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)發(fa)(fa)生率(lv)明(ming)(ming)顯降(jiang)低(P<0.05)。坎(kan)地(di)沙(sha)坦+AHU377+葉酸20只(zhi)(zhi)(zhi)大鼠中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)有8只(zhi)(zhi)(zhi)發(fa)(fa)生腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)，實驗結束時(shi)死(si)亡(wang)2只(zhi)(zhi)(zhi)，其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)1只(zhi)(zhi)(zhi)動(dong)物(wu)(wu)未能取得病(bing)(bing)(bing)理(li)組(zu)(zu)織(zhi)，其(qi)他(ta)19只(zhi)(zhi)(zhi)動(dong)物(wu)(wu)均(jun)(jun)(jun)進行了病(bing)(bing)(bing)理(li)組(zu)(zu)織(zhi)學觀察(cha)，8只(zhi)(zhi)(zhi)有腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)病(bing)(bing)(bing)理(li)表現，其(qi)腦(nao)卒(zu)(zu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)發(fa)(fa)生率(lv)明(ming)(ming)顯降(jiang)低，與模型(xing)組(zu)(zu)比(bi)較均(jun)(jun)(jun)具有極顯著差異(P<0.01)，見表3。
表3 坎(kan)地沙坦+AHU377+葉(xie)酸給藥(yao)8周(zhou)對SHR-SP大鼠腦卒中的影響(xiang)
注：與對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與坎地沙坦+AHU377組比較，#P<0.05。
經(jing)(jing)4周(zhou)、8周(zhou)的(de)(de)(de)給藥(yao)干預后(hou)(hou)，與(yu)模型組(zu)(zu)比較(jiao)，坎地(di)沙坦+AHU377+葉(xie)酸(suan)組(zu)(zu)及坎地(di)沙坦+AHU377組(zu)(zu)大(da)鼠的(de)(de)(de)神經(jing)(jing)功(gong)(gong)能分級均有明(ming)顯改善(P<0.05或0.01)。鑒于表(biao)3已(yi)非常明(ming)確顯示模型組(zu)(zu)與(yu)對照(zhao)組(zu)(zu)之間腦卒中(zhong)發(fa)生率的(de)(de)(de)巨大(da)差異(說明(ming)造模成功(gong)(gong))，故(gu)在(zai)下(xia)表(biao)4、表(biao)5分析中(zhong)模型組(zu)(zu)與(yu)對照(zhao)組(zu)(zu)將不需比較(jiao)，而重點是比較(jiao)后(hou)(hou)三(san)組(zu)(zu)間神經(jing)(jing)功(gong)(gong)能分級3-4級的(de)(de)(de)差異。結(jie)果表(biao)明(ming)，兩個治療組(zu)(zu)在(zai)4周(zhou)時的(de)(de)(de)神經(jing)(jing)功(gong)(gong)能改善作用基本相當，而8周(zhou)時坎地(di)沙坦+AHU377+葉(xie)酸(suan)組(zu)(zu)的(de)(de)(de)改善作用更為顯著(表(biao)5)。
表4 坎地沙(sha)坦+AHU377+葉酸給藥4周對SHR-SP大鼠腦卒中神經功能分級比較(只)
注：與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
表5 坎地沙坦(tan)+AHU377+葉酸給藥8周對SHR-SP大鼠(shu)腦卒(zu)中神經(jing)功能分(fen)級比較(只)
注：與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與坎地沙坦+AHU377組比較，#P<0.05。
通過本實驗研究可(ke)得出初步結論：坎地(di)沙坦+AHU377+葉酸(suan)的三聯組(zu)(zu)方能夠明顯降(jiang)低(di)卒中(zhong)易感型自發(fa)性高(gao)血(xue)壓(SHR-SP)大鼠腦卒中(zhong)的發(fa)生率(lv)及(ji)促進腦卒中(zhong)后神經功能的恢復，其效果優(you)于坎地(di)沙坦+AHU377的二(er)聯組(zu)(zu)方，提示葉酸(suan)發(fa)揮一(yi)定藥理作(zuo)用(yong)。