本發(fa)明涉及(ji)(ji)制藥(yao)領域，具體涉及(ji)(ji)一種包含二硫雜(za)環戊(wu)烯并吡咯酮衍(yan)生物的組合物及(ji)(ji)其(qi)抗腫瘤用(yong)途。

背景技術：

惡性腫瘤(liu)是影響人類健康和(he)生命(ming)的(de)最主(zhu)要的(de)疾(ji)病之一。化(hua)療、放療與手術治(zhi)(zhi)療并用(yong)(yong)(yong)，是目(mu)前治(zhi)(zhi)療惡性腫瘤(liu)的(de)主(zhu)要手段。惡性腫瘤(liu)的(de)化(hua)學治(zhi)(zhi)療藥(yao)(yao)物(wu)(wu)中，在現(xian)階(jie)段細(xi)胞(bao)毒類藥(yao)(yao)物(wu)(wu)仍(reng)然占主(zhu)要地位(wei)。由于該類藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)選(xuan)擇(ze)性不強，絕大(da)多數(shu)對(dui)骨髓都(dou)有(you)著不同程度的(de)抑(yi)制作(zuo)用(yong)(yong)(yong)。此外，針(zhen)對(dui)惡性腫瘤(liu)采用(yong)(yong)(yong)細(xi)胞(bao)毒類藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)大(da)劑量沖擊化(hua)療以及多周期及長期應用(yong)(yong)(yong)后，腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)經常對(dui)于所(suo)應用(yong)(yong)(yong)的(de)細(xi)胞(bao)毒類抗(kang)癌藥(yao)(yao)物(wu)(wu)產生耐藥(yao)(yao)性。

在先前(qian)的(de)申請號為200710045600.X的(de)專利中(zhong)公開(kai)了(le)一類(lei)二硫雜(za)環(huan)戊烯并吡(bi)咯酮類(lei)化(hua)合物(wu)，其實一類(lei)含(han)有1,2-二硫雜(za)環(huan)戊烯[4,3-b]吡(bi)咯-5(4H)-酮環(huan)的(de)化(hua)合物(wu)。并報道了(le)該類(lei)二硫雜(za)環(huan)戊烯并吡(bi)咯酮類(lei)化(hua)合物(wu)具(ju)備(bei)升高外周(zhou)白細胞(bao)的(de)活性。

迄今(jin)為(wei)止(zhi)，還沒(mei)有公開將此類化(hua)合(he)物應用于與(yu)其他抗癌藥(yao)物形成組(zu)合(he)物的研究報道。

技術實現要素：

一方面，本發明(ming)公開(kai)了一種包(bao)含結構式為ZL-004的二硫雜環戊烯并吡咯(ge)酮衍生物(wu)的組合(he)物(wu)，該組合(he)物(wu)還包(bao)含細胞毒類藥物(wu)。

在一種優(you)選(xuan)實(shi)施(shi)方(fang)式中，本發明組合(he)物中的所述細(xi)胞毒(du)類藥物選(xuan)自(zi)順鉑(bo)、環磷酰(xian)胺或(huo)氟尿嘧啶等(deng)。

另一(yi)方面(mian)，本(ben)發明還公開了上(shang)述包含結構式為ZL-004的(de)二硫雜環(huan)戊烯并吡咯(ge)酮衍生物的(de)組合物在制備抗腫瘤藥物的(de)用(yong)途。

在一種優選(xuan)實施方(fang)式中，本發明上述(shu)包含結(jie)構式為(wei)ZL-004的(de)二硫雜環(huan)戊烯并吡咯酮衍生物(wu)的(de)組合物(wu)在制(zhi)備抗腫瘤(liu)藥物(wu)的(de)用途，所述(shu)腫瘤(liu)為(wei)實體瘤(liu)。

在(zai)一種優選實施方式中，本發明(ming)上(shang)述(shu)包含結構式為ZL-004的二硫雜(za)環戊(wu)烯(xi)并吡咯酮衍(yan)生物的組合(he)物在(zai)制備(bei)抗腫瘤藥物的用途，所述(shu)實體瘤包括肝癌(ai)、肺癌(ai)、胃癌(ai)、乳(ru)腺(xian)癌(ai)、卵巢癌(ai)、 腸癌(ai)、胰腺(xian)癌(ai)、白血病等(deng)。

本(ben)發明(ming)的有益效果是：實施例中，表(biao)1的數據表(biao)明(ming)二硫雜環(huan)戊烯并吡咯酮衍生物ZL-004本(ben)身雖然在體內(nei)未顯示(shi)明(ming)確的抗(kang)腫瘤作用，但是在與順鉑(bo)、環(huan)磷酰胺和(he)5-氟(fu)嘧啶制成組合物時，不僅有使原(yuan)來抗(kang)腫瘤效果增強了，而且(qie)顯示(shi)了優于單一給予抗(kang)腫瘤藥物的效果。

此(ci)外，由(you)于(yu)ZL-004溶解度(du)差，口(kou)服生物利(li)用(yong)(yong)度(du)低，發明人(ren)通過采用(yong)(yong)ZL-004的納米(mi)顆粒可以明顯升高(gao)其生物利(li)用(yong)(yong)度(du)。

由于抗(kang)(kang)腫瘤藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)作(zuo)用機制不(bu)同(tong)，不(bu)同(tong)的(de)抗(kang)(kang)腫瘤藥(yao)(yao)物(wu)(wu)所引起的(de)副作(zuo)用，特(te)別是(shi)(shi)抗(kang)(kang)腫瘤藥(yao)(yao)物(wu)(wu)無論是(shi)(shi)細胞毒(du)類抗(kang)(kang)癌藥(yao)(yao)物(wu)(wu)還是(shi)(shi)靶點特(te)異(yi)性(xing)(xing)抗(kang)(kang)癌藥(yao)(yao)物(wu)(wu)，癌細胞都(dou)非常容(rong)易(yi)產生(sheng)耐藥(yao)(yao)性(xing)(xing)。本發(fa)明(ming)的(de)二(er)硫(liu)雜(za)環(huan)戊烯(xi)(xi)并吡咯酮衍生(sheng)物(wu)(wu)ZL-004與細胞毒(du)類藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)組合物(wu)(wu)，使得二(er)硫(liu)雜(za)環(huan)戊烯(xi)(xi)并吡咯酮衍生(sheng)物(wu)(wu)ZL-004發(fa)生(sheng)協同(tong)作(zuo)用，用藥(yao)(yao)后(hou)，癌細胞也較不(bu)容(rong)易(yi)產生(sheng)耐藥(yao)(yao)性(xing)(xing)，這樣(yang)可以(yi)推遲耐藥(yao)(yao)性(xing)(xing)產生(sheng)。

具體實施方式

通過以(yi)(yi)下(xia)(xia)實(shi)施例(li)進一步說明(ming)本(ben)發明(ming)，以(yi)(yi)下(xia)(xia)實(shi)施例(li)僅用于更(geng)具體地說明(ming)本(ben)發明(ming)優選的(de)實(shi)施方(fang)(fang)案(an)，不用于對(dui)本(ben)發明(ming)的(de)技術方(fang)(fang)案(an)進行限(xian)定。上述(shu)本(ben)發明(ming)的(de)方(fang)(fang)案(an)均為可實(shi)現本(ben)發明(ming)目(mu)的(de)之技術方(fang)(fang)案(an)。以(yi)(yi)下(xia)(xia)實(shi)施例(li)所采用溫度和試劑，均可以(yi)(yi)用上述(shu)相應溫度和試劑替(ti)代以(yi)(yi)實(shi)現本(ben)發明(ming)之目(mu)的(de)。

在本發(fa)明的(de)以下的(de)實施例中，縮寫具備以下的(de)含義：CTX是(shi)(shi)指(zhi)環(huan)磷酰(xian)胺、5-Fu是(shi)(shi)指(zhi)5-氟尿嘧啶(ding)(也(ye)可以寫作5氟尿嘧啶(ding)或氟尿嘧啶(ding))、PT是(shi)(shi)指(zhi)順鉑。KM小(xiao)鼠是(shi)(shi)指(zhi)昆明小(xiao)鼠。iv是(shi)(shi)指(zhi)靜脈(mo)注射、ip是(shi)(shi)指(zhi)腹腔給(gei)藥、im是(shi)(shi)指(zhi)肌肉注射。

實施例1、ZL-004的納米顆粒的制備

參照專(zhuan)利(li)CN201210195057.2，可(ke)以(yi)(yi)制(zhi)備得到ZL-004的(de)納(na)(na)米(mi)顆(ke)粒。例如：該專(zhuan)利(li)的(de)說明書第4頁(ye)第[0070]段至(zhi)第11頁(ye)第[0213]段的(de)實施例1-8中(zhong)就公開(kai)了(le)制(zhi)備二硫(liu)雜環(huan)戊(wu)烯并吡咯酮(tong)衍生物ZL-004的(de)納(na)(na)米(mi)粒的(de)方法。納(na)(na)米(mi)粒，也可(ke)以(yi)(yi)成為納(na)(na)米(mi)顆(ke)粒；有(you)的(de)還是納(na)(na)米(mi)結晶粒。

實施例2、ZL-004納米顆粒體內抗腫瘤試驗

取生長(chang)旺(wang)盛期的S180腹(fu)水瘤小鼠，頸椎脫臼致死后，無菌(jun)條(tiao)件下(xia)(xia)抽取腹(fu)水，記數細胞(bao)，用生理鹽水稀(xi)釋(shi)為1-2×107個(ge)/ml，按0.2ml/只(zhi)給小鼠腋(ye)下(xia)(xia)皮下(xia)(xia)接種，然后隨機(ji)分組。于接種后次(ci)日給藥。

取(qu)KM小鼠(shu)40只(zhi)，按上述方法造模后(hou)，隨機分為(wei)5組，每組8只(zhi)，分別(bie)為(wei)5mg/kg、3mg/kg、1mg/kg組，以(yi)上各組靜脈(mo)注(zhu)(zhu)射相應濃度(du)的ZL-004納(na)米顆粒每天一(yi)次(ci)，連(lian)續(xu)給(gei)藥(yao)7天，環磷酰(xian)胺(以(yi)下簡(jian)稱CTX)陽(yang)性對(dui)照組(30mg/kg)靜脈(mo)注(zhu)(zhu)射，每天一(yi)次(ci)，連(lian)續(xu)給(gei)藥(yao)7天，模型對(dui)照組(以(yi)等容積的生理鹽(yan)水代替),連(lian)續(xu)給(gei)藥(yao)7天。末(mo)次(ci)給(gei)藥(yao)后(hou)次(ci)日處(chu)死動物(wu)，解剖取(qu)瘤，稱重，計(ji)算抑(yi)瘤率(lv)，并進行統計(ji)學(t檢驗)處(chu)理。抑(yi)瘤率(lv)計(ji)算方法見如下公式。

表1：ZL-004口服給藥對小鼠S180移植瘤的影響

Tab2：Inhibition of ZL-004on S180tumor in vivo

說明ZL-004納米(mi)顆(ke)粒本身并不具有(you)抗腫(zhong)瘤效果。

實施例3.ZL-004納米顆粒與CTX、5-Fu以及順鉑分別制成組合物(或稱為組合物)

將(jiang)ZL-004納米顆粒(li)分(fen)別與CTX、5-Fu以(yi)及順(shun)(shun)鉑(bo)混(hun)合(he)，溶于不同濃度的磷酸緩沖液中，得(de)到(dao)ZL-004納米顆粒(li)分(fen)別與CTX、5-Fu以(yi)及順(shun)(shun)鉑(bo)的組合(he)物。

不同(tong)PH值(zhi)的磷(lin)(lin)酸緩沖液的制(zhi)備方法是通過用(yong)磷(lin)(lin)酸鹽或(huo)磷(lin)(lin)酸氫(qing)鹽與氫(qing)氧化(hua)鈉/鉀，調節PH值(zhi)用(yong)并用(yong)PH計測(ce)量得(de)到(dao)。例如：

磷酸鹽緩沖(chong)液(pH5.0)：取0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液一定量,用氫氧化鈉試(shi)液調(diao)節(jie)pH值(zhi)至5.0，即(ji)得(de)。

磷(lin)酸鹽(yan)緩沖液(pH6.8)：取0.2mol/L磷(lin)酸二氫(qing)鉀溶(rong)液250ml，加0.2mol/L氫(qing)氧化(hua)鈉(na)溶(rong)液118ml，用(yong)水稀釋(shi)至1000ml，搖(yao)勻，即得。

磷酸鹽緩(huan)沖液(含(han)胰酶)(pH6.8)：取磷酸二(er)氫鉀6.8g,加水(shui)500ml使溶解,用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至6.8；另取胰酶10g，加水(shui)適量使溶解，將兩(liang)液混合后,加水(shui)稀釋至1000ml，即(ji)得。

磷酸鹽緩沖液(pH7.8～8.0)：取磷酸氫(qing)二鉀5.59g與磷酸二氫(qing)鉀0.41g，加(jia)水使(shi)溶解成(cheng)1000ml，即得(de)。

以下表2-4中，注明了ZL-004與(yu)環磷酰胺CTX、ZL-004與(yu)5-氟尿(niao)嘧啶(ding)5-Fu及ZL-004與(yu)順鉑形成(cheng)的組合(he)物配比。這(zhe)些(xie)組合(he)物通過實施例1所(suo)述方法(fa)制備得到的ZL-004的納米顆粒(li)與(yu)CTX、5-Fu及順鉑分別混合(he)得到。

表2、ZL-004與CTX的組合物配比

表3、ZL-004與5-Fu的(de)組合物(wu)配比

表4、ZL-004與(yu)順鉑的組合物配比

實驗表明：ZL-004在酸性條件下與(yu)其(qi)它抗(kang)(kang)癌藥(yao)物(wu)混合后溶(rong)解度較好，但如需應(ying)用到臨(lin)床，則選擇pH值接近中性的濃度。因此，pH值為6.8的溶(rong)液中，可與(yu)其(qi)他抗(kang)(kang)癌藥(yao)物(wu)組(zu)成(cheng)組(zu)合物(wu)。

實施例4.ZL-004納米顆粒和其它抗瘤藥物形成的組合物的抑瘤試驗

取生長(chang)旺盛(sheng)期(qi)的小鼠(shu)S180腹水(shui)瘤，無菌(jun)條(tiao)件下抽(chou)取，用生理鹽水(shui)按1：5稀釋，按0.2ml/只給小鼠(shu)腋皮下接種。次日將小鼠(shu)隨機均分為9組，每組10只。

設置環磷酰胺(以下簡稱CTX)15mg、CTX 15mg-ZL-0045mg、5-氟尿(niao)嘧啶(以下簡稱5-Fu)12.5mg、5-Fu 12.5mg-ZL-0045mg、順鉑(bo)1mg、順鉑(bo)1mg-ZL-0045mg、ZL-0045mg7個試驗組。

陽(yang)性對照組順鉑劑量為2mg/kg。

另設空白對照組。

動物接(jie)種(zhong)次(ci)日(ri)開始(shi)按體重(zhong)給藥(yao)，0.5ml/20g，連(lian)續(xu)給藥(yao)9天，接(jie)種(zhong)后第10天處死，取瘤塊稱重(zhong)，按照以下公式計算抑瘤率：

給藥方式為(wei)：靜脈注射(she)

結(jie)果：實驗期間各組動物均(jun)未(wei)見死亡。

備注：以下表5-7中，i.vx9qd是(shi)指靜(jing)脈(mo)注射(she)，每天一次(ci)，連續9天；

瘤重取值，即平均數(shu)±標(biao)準(zhun)差(cha)；

表(biao)5、ZL-004與CTX組合物對(dui)小鼠S180的抑(yi)制(zhi)作用

表6、ZL-004與順鉑組合物對小鼠S180的抑制作用

表7、ZL-004與5-Fu組合物對小鼠S180的抑制作(zuo)用

注(zhu)：以接種當天(tian)為第(di)0天(tian)；

**表示與Control相比P值(zhi)＜0.01

根據計算(suan)協同作(zuo)用(yong)公(gong)式1－(1－a)×(1－b)≤ab；其(qi)中：a與b分別指(zhi)兩(liang)個單一(yi)藥物使用(yong)后的(de)作(zuo)用(yong)效(xiao)果(guo)，ab指(zhi)兩(liang)個藥物聯合使用(yong)后的(de)作(zuo)用(yong)效(xiao)果(guo)。若測得值大于理論值，說(shuo)明有協同作(zuo)用(yong)。

1－(1－CTX15mg)×(1－ZL-0045mg/kg)×100％＝59.94％＜68.18％

1－(1－5-Fu12.5mg)×(1－ZL-0045mg/kg)×100％＝55.00％＜60.21％

1－(1－順鉑1mg)×(1－ZL-0045mg/kg)×100％＝51.52％＜59.93％

由以上實(shi)驗(yan)結果，得(de)出(chu)結論為：

ZL-004納米顆粒與(yu)順鉑、5氟脲(niao)嘧(mi)啶以及(ji)環磷酰胺形成的組合(he)物，抗腫瘤效果優于單一抗腫瘤藥物。

ZL-004納米顆(ke)粒在于(yu)順鉑、環磷酰(xian)胺(an)等有代表性的(de)細胞周期非特異性的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)藥(yao)物(wu)和5-氟(fu)尿嘧啶(ding)等細胞周期特異性的(de)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)藥(yao)物(wu)都優(you)于(yu)單一使(shi)用抗(kang)(kang)腫瘤(liu)藥(yao)物(wu)。而(er)且ZL-004有升(sheng)高外周血白細胞的(de)作(zuo)用，對(dui)于(yu)化(hua)療所(suo)產生(sheng)的(de)白細胞下(xia)降有治(zhi)療作(zuo)用。因此(ci)，該組合(he)物(wu)有一定(ding)臨床應用意義。

實施例5、ZL-004急性毒性實驗(KM小鼠LD50的測定)

取KM小鼠(shu)15只,隨機分(fen)為5組，每組3只,單次給予(yu)ZL-004口服灌胃，選擇(ze)濃度間距較大的(de)一系列劑量，觀察出現(xian)的(de)癥狀并記錄死(si)亡(wang)(wang)(wang)數(shu)，直至引(yin)出0％死(si)亡(wang)(wang)(wang)率(lv)(lv)(可縮(suo)寫為LD0)和(he)100％死(si)亡(wang)(wang)(wang)率(lv)(lv)劑量的(de)所在范(fan)圍。類似地，LD50是(shi)指50％死(si)亡(wang)(wang)(wang)率(lv)(lv)的(de)劑量。

ZL-004的參考計量(liang)：LD100為(wei)400mg/kg、LD0為(wei)80mg/kg，ZL-004的參考計量(liang)：LD100為(wei)720mg/kg、LD0為(wei)160mg/kg。

在預試驗所(suo)獲得的(de)0％和100％致死(si)量的(de)范圍(wei)內，選擇5個劑量組(zu)，每組(zu)20只小鼠，雌雄各半，隨(sui)機分配。單次給予ZL-001(劑量按(an)1：0.7設(she)置，即(ji)400mg/kg、280mg/kg、196mg/kg、137mg/kg、96mg/kg)ZL-004口服灌胃(劑量按(an)1：0.7設(she)置，即(ji)720mg/kg、504mg/kg、352mg/kg、247mg/kg、173mg/kg)。觀察14天。

ZL-004樣品經bliss法計算出LD50值為356mg/kg，說明(ming)ZL-004在(zai)臨床應用方(fang)面有較寬(kuan)的治(zhi)療窗(chuang)，在(zai)和其他抗癌藥物(wu)形(xing)成組合物(wu)方(fang)面有較好(hao)的安全(quan)性。