本發明涉(she)及(ji)醫藥(yao)領域(yu)，具體地，涉(she)及(ji)藥(yao)物組合(he)物及(ji)其制備方(fang)法和用途。

背景技術：

癌(ai)(ai)癥，亦稱惡性腫(zhong)瘤，為由(you)控制(zhi)細胞(bao)生長增殖機制(zhi)失常(chang)而引起的疾病。癌(ai)(ai)細胞(bao)除了生長失控外，還會局部侵(qin)入(ru)周遭正(zheng)常(chang)組織(zhi)甚至經由(you)體內循(xun)環系(xi)統(tong)或淋巴系(xi)統(tong)轉移到身體其(qi)他部分。

癌(ai)細胞(bao)的(de)特(te)點是無(wu)限制、無(wu)止境地增生，使患(huan)者(zhe)(zhe)體內(nei)的(de)營養物質被大(da)量(liang)消(xiao)耗；癌(ai)細胞(bao)釋放出(chu)多種毒素，使人體產生一(yi)系列癥(zheng)狀；癌(ai)細胞(bao)還(huan)可轉(zhuan)(zhuan)移到全身各處生長繁殖，導致(zhi)人體消(xiao)瘦、無(wu)力、貧血(xue)、食欲不振、發熱以及嚴重的(de)臟(zang)器功能受損等(deng)等(deng)。與之相對的(de)有良性(xing)腫(zhong)瘤(liu)，良性(xing)腫(zhong)瘤(liu)則容易清除干凈，一(yi)般(ban)不轉(zhuan)(zhuan)移、不復發，對器官、組(zu)織只有擠壓(ya)和阻塞作用，但癌(ai)癥(zheng)(惡性(xing)腫(zhong)瘤(liu))還(huan)可破壞(huai)組(zu)織、器官的(de)結構和功能，引起壞(huai)死出(chu)血(xue)合并感染(ran)，患(huan)者(zhe)(zhe)最終由于器官功能衰竭而死亡(wang)。

化療是癌(ai)癥治(zhi)療不可(ke)或缺的重要手段(duan)。然而，癌(ai)癥化療的手段(duan)有待大(da)幅(fu)改進。

技術實現要素：

本發(fa)明(ming)旨(zhi)在至(zhi)少在一(yi)定程度上解決相關技(ji)術(shu)中的(de)(de)技(ji)術(shu)問題(ti)之一(yi)。為(wei)此，本發(fa)明(ming)的(de)(de)一(yi)個目的(de)(de)在于提出一(yi)種能夠有效治療(liao)或預防癌癥的(de)(de)手(shou)段。

本發(fa)明是基于發(fa)明人的(de)下列發(fa)現而完成的(de)：

發明人發現紫(zi)杉(shan)醇(chun)，多(duo)西紫(zi)杉(shan)醇(chun)，卡巴(ba)他賽或其他紫(zi)杉(shan)醇(chun)類似物(wu)；和(he)刺(ci)猬(Hedgehog，簡稱(cheng)Hh)信號(hao)通路抑制劑(ji)或者激酶(mei)抑制劑(ji)聯(lian)用，能夠有效地提高(gao)針對癌(ai)癥的(de)(de)(de)治療效果，優于(yu)單一(yi)(yi)藥物(wu)對癌(ai)癥的(de)(de)(de)治療效果，并(bing)且對抗藥的(de)(de)(de)腫(zhong)瘤有效。同(tong)時，聯(lian)合制劑(ji)具備比單一(yi)(yi)制劑(ji)更(geng)好(hao)的(de)(de)(de)物(wu)理穩(wen)定性，更(geng)好(hao)的(de)(de)(de)腫(zhong)瘤抑制效果，更(geng)好(hao)的(de)(de)(de)藥代(dai)動力(li)學表現，以及較低的(de)(de)(de)毒副作用。

由此(ci)，在本發(fa)明的第一方面，本發(fa)明提出了一種藥物組合物，根據本發(fa)明的實施例(li)，該藥物組合物包含：紫杉(shan)醇或(huo)其類(lei)似物；和刺(ci)猬(wei)信號通(tong)路(lu)抑(yi)制(zhi)(zhi)劑(ji)或(huo)者激(ji)酶抑(yi)制(zhi)(zhi)劑(ji)。

Hedgehog基(ji)因(yin)(yin)(yin)是(shi)一種(zhong)分節極性基(ji)因(yin)(yin)(yin)，因(yin)(yin)(yin)突(tu)變的(de)(de)果蠅胚(pei)胎呈多毛團狀，酷似(si)受(shou)(shou)驚刺猬(wei)而(er)得(de)名。Hh信號傳(chuan)遞受(shou)(shou)靶(ba)細胞(bao)膜上兩種(zhong)受(shou)(shou)體(ti)(ti)(ti)Patched(Ptc)和(he)Smoothened(Smo)的(de)(de)控制(zhi)(zhi)。受(shou)(shou)體(ti)(ti)(ti) Ptc由腫瘤抑制(zhi)(zhi)基(ji)因(yin)(yin)(yin)Patched編碼(ma)。受(shou)(shou)體(ti)(ti)(ti)Smo由原癌基(ji)因(yin)(yin)(yin)Smothened編碼(ma)。Smo是(shi)Hh信號傳(chuan)遞所(suo)必需的(de)(de)受(shou)(shou)體(ti)(ti)(ti)。在無Hh、Ptc的(de)(de)情況下，激活(huo)Smo可導致Hh靶(ba)基(ji)因(yin)(yin)(yin)的(de)(de)活(huo)化；基(ji)因(yin)(yin)(yin)Smo突(tu)變時，可出現與(yu)Hh基(ji)因(yin)(yin)(yin)突(tu)變相同(tong)的(de)(de)表征。目前發現的(de)(de)參與(yu)Hh信號轉導的(de)(de)核內因(yin)(yin)(yin)子(zi)包括轉錄因(yin)(yin)(yin)子(zi)Ci/Gli、絲(si)氨酸(suan)/蘇氨酸(suan)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)激酶Fused(Fu)、Fu抑制(zhi)(zhi)劑(SuFu)、類運動蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)Costal-2(Cos2)、蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)激酶A(PKA)等。其(qi)(qi)中(zhong)Ci/Gli、Fu起正調控作用，Cos 2、PKA起負調控作用。其(qi)(qi)中(zhong)，Gli蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)家族成員是(shi)較大(da)的(de)(de)多功能的(de)(de)轉錄因(yin)(yin)(yin)子(zi)，屬于C2H2型鋅指結構蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)。

在正常情況下(xia)，Ptc抑制(zhi)Smo蛋(dan)(dan)白(bai)活(huo)(huo)性，從而(er)抑制(zhi)下(xia)游(you)通路，這時下(xia)游(you)的Gli蛋(dan)(dan)白(bai)在蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)體(Proteasome)內被(bei)截(jie)斷(duan)，并以(yi)羧基端被(bei)截(jie)斷(duan)的形(xing)式進入(ru)細胞核內，抑制(zhi)下(xia)游(you)靶基因的轉(zhuan)錄(lu)。當Ptc和(he)Hh結合以(yi)后，解除對Smo的抑制(zhi)作用，促使Gli蛋(dan)(dan)白(bai)與PKA及一些未知因子與微管形(xing)成大分子復合物(wu)，使得全長Gli蛋(dan)(dan)白(bai)進入(ru)核內激活(huo)(huo)下(xia)游(you)靶基因轉(zhuan)錄(lu)。Hh-Gli通路可以(yi)誘導Ptc的轉(zhuan)錄(lu)，形(xing)成負反(fan)饋的調控環。

激酶(mei)(mei)(mei)(mei)抑制(zhi)劑：激酶(mei)(mei)(mei)(mei)抑制(zhi)劑的(de)主要靶(ba)點是(shi)蛋白酪(lao)氨酸(suan)激酶(mei)(mei)(mei)(mei)。蛋白酪(lao)氨酸(suan)激酶(mei)(mei)(mei)(mei)可分(fen)為受體型(xing)和(he)非(fei)(fei)受體型(xing)兩種，它們的(de)主要功能(neng)是(shi)催化(hua)(hua)ATP的(de)磷酸(suan)基團轉(zhuan)移(yi)到(dao)蛋白質(zhi)底物的(de)酪(lao)氨酸(suan)殘基上，使蛋白激酶(mei)(mei)(mei)(mei)從非(fei)(fei)活(huo)化(hua)(hua)構象轉(zhuan)變(bian)為活(huo)化(hua)(hua)構象，完成(cheng)細(xi)胞(bao)生(sheng)(sheng)物信號的(de)傳導(dao)(dao)。大部分(fen)的(de)原癌(ai)(ai)基因(yin)(yin)和(he)癌(ai)(ai)基因(yin)(yin)產物都具有(you)(you)異常的(de)蛋白激酶(mei)(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)(xing)(xing)，它們的(de)異常表達或非(fei)(fei)調控活(huo)性(xing)(xing)(xing)增高將直(zhi)接導(dao)(dao)致細(xi)胞(bao)增殖調節發(fa)生(sheng)(sheng)紊(wen)亂(luan)，與(yu)腫(zhong)瘤(liu)的(de)侵襲和(he)轉(zhuan)移(yi)、腫(zhong)瘤(liu)新生(sheng)(sheng)血管的(de)生(sheng)(sheng)成(cheng)、腫(zhong)瘤(liu)的(de)化(hua)(hua)療(liao)抗性(xing)(xing)(xing)密切相(xiang)關。激酶(mei)(mei)(mei)(mei)抑制(zhi)劑以這種激酶(mei)(mei)(mei)(mei)為靶(ba)點，對正常細(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)(xing)(xing)較小(xiao)，因(yin)(yin)此與(yu)傳統細(xi)胞(bao)毒(du)類抗腫(zhong)瘤(liu)藥物相(xiang)比有(you)(you)相(xiang)當的(de)競爭(zheng)優勢，在腫(zhong)瘤(liu)治療(liao)領域有(you)(you)著(zhu)毋庸置疑(yi)的(de)價值。

2001-2010年間FDA先后(hou)批準了(le)11種激酶(mei)抑制劑(ji)類的(de)小分子靶(ba)向藥(yao)物用(yong)于不同類型(xing)的(de)腫瘤，其中具有(you)(you)代(dai)表性的(de)藥(yao)物，比如索拉菲尼被批準用(yong)于治療(liao)腎癌(ai)和(he)肝癌(ai)，后(hou)續還有(you)(you)針對其他適應(ying)癥的(de)臨床試驗在進行(xing)中。

紫衫醇具有下(xia)面的化學式：

紫杉醇是一種已(yi)知的癌癥治療(liao)藥(yao)物，其對(dui)非小細胞肺癌(NSCLC)比較(jiao)有效。關于(yu)紫 杉醇的類似物，可以采用的包括：多西紫杉醇(多西他賽)、卡(ka)巴他賽。

在本發明(ming)之前，并未有(you)人(ren)嘗試將紫杉醇(chun)(chun)與(yu)刺(ci)猬(wei)(wei)信(xin)號(hao)(hao)通(tong)(tong)路抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)組合使(shi)用，發明(ming)人(ren)在研究過(guo)(guo)程中，意外發現(xian)，通(tong)(tong)過(guo)(guo)將紫杉醇(chun)(chun)與(yu)刺(ci)猬(wei)(wei)信(xin)號(hao)(hao)通(tong)(tong)路抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)組合使(shi)用，能夠有(you)效(xiao)(xiao)地提(ti)高(gao)治(zhi)療(liao)(liao)癌癥的(de)療(liao)(liao)效(xiao)(xiao)，降低了(le)藥(yao)物的(de)毒副(fu)作用，提(ti)高(gao)了(le)納米制(zhi)劑(ji)的(de)穩定性(xing)(xing)，解決(jue)了(le)抗(kang)藥(yao)性(xing)(xing)，體現(xian)出了(le)協同效(xiao)(xiao)果。發明(ming)人(ren)認為可(ke)能是(shi)通(tong)(tong)過(guo)(guo)采用刺(ci)猬(wei)(wei)信(xin)號(hao)(hao)通(tong)(tong)路抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)劑(ji)，能夠有(you)效(xiao)(xiao)地影響腫(zhong)瘤的(de)微環境(比如(ru)，抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)腫(zhong)瘤的(de)血(xue)管(guan)增生，或(huo)者(zhe)促進(jin)腫(zhong)瘤周圍(wei)的(de)纖維(wei)化(hua)基(ji)質消減，從而針對(dui)腫(zhong)瘤例如(ru)胰腺(xian)腫(zhong)瘤或(huo)者(zhe)肺(fei)癌腫(zhong)瘤諸(zhu)如(ru)非(fei)小細胞肺(fei)癌的(de)療(liao)(liao)效(xiao)(xiao)有(you)優(you)于單獨(du)紫杉醇(chun)(chun)給藥(yao)的(de)效(xiao)(xiao)果。進(jin)一步，發明(ming)人(ren)通(tong)(tong)過(guo)(guo)下(xia)面的(de)實驗過(guo)(guo)程證明(ming)了(le)發明(ming)人(ren)的(de)觀(guan)點：

(1)發明人選用(yong)人肺癌(ai)細胞H1975、A549植入到(dao)裸(luo)鼠體(ti)(ti)(ti)內得到(dao)的腫(zhong)(zhong)瘤模型(xing)評估兩種(zhong)(zhong)聯合用(yong)藥(yao)(yao)體(ti)(ti)(ti)系(xi)(xi)(膠束和(he)白(bai)蛋白(bai)納米顆粒(li))是(shi)否比單獨的紫(zi)杉醇體(ti)(ti)(ti)系(xi)(xi)有更強的抗腫(zhong)(zhong)瘤作用(yong)。兩種(zhong)(zhong)聯合給藥(yao)(yao)體(ti)(ti)(ti)系(xi)(xi)和(he)單獨紫(zi)杉醇的兩種(zhong)(zhong)體(ti)(ti)(ti)系(xi)(xi)各(ge)高、低兩個(ge)劑量組參與(yu)比較(jiao)。連續給藥(yao)(yao)一周(zhou)，觀(guan)(guan)察(cha)腫(zhong)(zhong)瘤體(ti)(ti)(ti)積變化，最(zui)后(hou)一次給藥(yao)(yao)后(hou)，解剖小鼠，做組織學染(ran)色觀(guan)(guan)察(cha)癌(ai)變部位(wei)結構變化。

(2)發(fa)明人(ren)將人(ren)源胰腺癌(ai)細胞，或者(zhe)將胰腺癌(ai)組織(zhi)從胰腺癌(ai)病(bing)人(ren)中移植到(dao)小鼠(shu)上得(de)到(dao)小鼠(shu)胰腺癌(ai)模型，用于(yu)觀(guan)(guan)察兩(liang)種聯合用藥體(ti)系(膠束和白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納米(mi)顆粒)是(shi)否比單獨(du)的(de)紫杉(shan)醇白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納米(mi)粒體(ti)系有更強的(de)消減(jian)胰腺癌(ai)周圍(wei)纖維(wei)狀基質的(de)作用并能使腫瘤體(ti)積減(jian)小。選用高、中、低三個(ge)劑量組連續給藥四周，觀(guan)(guan)察腫瘤體(ti)積變(bian)化，最后一次給藥后，解剖小鼠(shu)，做組織(zhi)學染色觀(guan)(guan)察癌(ai)變(bian)部(bu)位(wei)結(jie)構變(bian)化，重點觀(guan)(guan)察纖維(wei)狀基質是(shi)否減(jian)小。

另外(wai)(wai)，有(you)(you)些(xie)刺(ci)猬信號通路抑制劑，例如伊曲(qu)(qu)康(kang)唑(zuo)，由于其結晶(jing)速度(du)快，不能夠(gou)(gou)有(you)(you)效(xiao)地被兩(liang)親高分子包裹而形成膠束(shu)。發明人意外(wai)(wai)地發現，當將伊曲(qu)(qu)康(kang)唑(zuo)與紫杉醇或其類似物組(zu)合后，伊曲(qu)(qu)康(kang)唑(zuo)能夠(gou)(gou)有(you)(you)效(xiao)地形成粒徑均一的(de)膠束(shu)，并(bing)且(qie)該膠束(shu)能夠(gou)(gou)保持長時間的(de)穩定性。

根(gen)據本(ben)發明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)實(shi)施(shi)例(li)，在本(ben)發明(ming)(ming)(ming)(ming)中可以(yi)(yi)采用(yong)(yong)的(de)(de)刺猬(wei)信(xin)號通(tong)路抑(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)類(lei)(lei)型并(bing)不受特別限(xian)制(zhi)。根(gen)據本(ben)發明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)具(ju)體實(shi)施(shi)例(li)，可以(yi)(yi)采用(yong)(yong)的(de)(de)刺猬(wei)信(xin)號通(tong)路抑(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)為選自環巴胺及其(qi)類(lei)(lei)似(si)物、 環王巴明(ming)(ming)(ming)(ming)及其(qi)類(lei)(lei)似(si)物，伊曲康唑及其(qi)類(lei)(lei)似(si)物/衍(yan)生物、維莫德吉(ji)及其(qi)類(lei)(lei)似(si)物、他汀類(lei)(lei)藥(yao)物中的(de)(de)至少一(yi)種。根(gen)據本(ben)發明(ming)(ming)(ming)(ming)的(de)(de)實(shi)施(shi)例(li)，可以(yi)(yi)采用(yong)(yong)的(de)(de)刺猬(wei)信(xin)號通(tong)路抑(yi)制(zhi)劑(ji)(ji)可以(yi)(yi)為具(ju)有(you)下列化(hua)學式的(de)(de)化(hua)合物的(de)(de)至少之一(yi)：

根據本發明(ming)的實(shi)施例，優選所述刺猬信號通路抑制劑為伊曲(qu)康(kang)唑(zuo)。由(you)此，可以進一步提高藥物組(zu)合物治療(liao)癌癥，例如胰(yi)腺(xian)腫瘤或者肺(fei)癌腫瘤諸如胰(yi)腺(xian)導管癌和非(fei)小細胞肺(fei)癌的治療(liao)效果。

根據本發明的實施例，所述紫杉醇或其(qi)類(lei)似(si)物(wu)與所述刺猬(wei)信號(hao)通路抑制劑的重量比例為1:10–10:1，優選1:3-3:1。由此(ci)，可以(yi)進一步(bu)提高(gao)藥物(wu)組合物(wu)治(zhi)(zhi)療(liao)癌(ai)癥，例如胰腺(xian)(xian)腫瘤(liu)或者(zhe)肺癌(ai)腫瘤(liu)諸(zhu)如胰腺(xian)(xian)導管癌(ai)和非小細胞肺癌(ai)的治(zhi)(zhi)療(liao)效果(guo)，并且(qie)能(neng)夠(gou)進一步(bu)提高(gao)紫杉醇或其(qi)類(lei)似(si)物(wu)與所述刺猬(wei)信號(hao)通路抑制劑在制備(bei)為膠束時的穩定(ding)性，從而進一步(bu)提高(gao)了(le)藥物(wu)的生物(wu)利(li)用(yong)度(du)。

根(gen)據本發(fa)明(ming)的(de)(de)實(shi)施(shi)(shi)例(li)，在本發(fa)明(ming)中可(ke)(ke)(ke)以(yi)采用的(de)(de)激(ji)酶抑(yi)(yi)制(zhi)劑類型并不受特別限制(zhi)。根(gen)據本發(fa)明(ming)的(de)(de)實(shi)施(shi)(shi)例(li)，可(ke)(ke)(ke)以(yi)采用的(de)(de)激(ji)酶抑(yi)(yi)制(zhi)劑為選自伊(yi)(yi)曲(qu)康唑(伊(yi)(yi)曲(qu)康唑被發(fa)現可(ke)(ke)(ke)以(yi)同時是刺猬通路抑(yi)(yi)制(zhi)劑和(he)表(biao)皮生長因子受體酪氨酸激(ji)酶抑(yi)(yi)制(zhi)劑)，及其類似(si)物/衍生物，索(suo)拉(la)菲尼(ni)，瑞格菲尼(ni)，伊(yi)(yi)馬替(ti)尼(ni)，吉非替(ti)尼(ni)，厄洛替(ti)尼(ni)，舒尼(ni)替(ti)尼(ni)，達沙替(ti)尼(ni)，拉(la)帕(pa)替(ti)尼(ni)，尼(ni)羅替(ti)尼(ni)和(he)帕(pa)唑帕(pa)尼(ni)中的(de)(de)至(zhi)少(shao)一種(zhong)。由此，可(ke)(ke)(ke)以(yi)提高藥物組合物治(zhi)療癌(ai)(ai)癥，例(li)如胰腺(xian)腫瘤或者(zhe)肺癌(ai)(ai) 腫瘤諸如胰腺(xian)導管癌(ai)(ai)和(he)非小(xiao)細胞肺癌(ai)(ai)的(de)(de)治(zhi)療效果。根(gen)據本發(fa)明(ming)的(de)(de)一個具體實(shi)施(shi)(shi)例(li)，可(ke)(ke)(ke)以(yi)采用的(de)(de)激(ji)酶抑(yi)(yi)制(zhi)劑為索(suo)拉(la)菲尼(ni)，其結構式如下(xia)：

根據本(ben)發明的(de)實施例，所述(shu)紫杉醇或(huo)其類似(si)物與(yu)所述(shu)激(ji)酶(mei)抑制(zhi)劑的(de)重量比例為(wei)1:10–10:1。由此，可以進(jin)一(yi)步(bu)提(ti)高藥物組合物治療(liao)癌(ai)(ai)(ai)癥，例如(ru)胰(yi)腺腫(zhong)瘤或(huo)者肺癌(ai)(ai)(ai)腫(zhong)瘤諸如(ru)胰(yi)腺導(dao)管癌(ai)(ai)(ai)和(he)非小(xiao)細胞肺癌(ai)(ai)(ai)的(de)治療(liao)效(xiao)果。

根(gen)據本發明(ming)的實(shi)施例(li)，所(suo)述(shu)藥物組合(he)物呈(cheng)膠束、白(bai)蛋(dan)白(bai)納米粒(li)或脂質(zhi)體(ti)的形(xing)式(shi)。如(ru)前所(suo)述(shu)，單(dan)獨的刺(ci)(ci)猬(wei)信(xin)號通路抑(yi)制(zhi)劑，例(li)如(ru)伊曲康唑(zuo)(zuo)不能(neng)夠有效地(di)形(xing)成(cheng)膠束形(xing)式(shi)的藥物劑型，發明(ming)人意(yi)外地(di)發現(xian)，當將刺(ci)(ci)猬(wei)信(xin)號通路抑(yi)制(zhi)劑與紫杉醇組合(he)后(hou)，刺(ci)(ci)猬(wei)信(xin)號通路抑(yi)制(zhi)劑例(li)如(ru)伊曲康唑(zuo)(zuo)能(neng)夠有效地(di)形(xing)成(cheng)粒(li)徑(jing)均一(yi)的膠束，并(bing)且該膠束能(neng)夠保持(chi)(chi)長(chang)時間(jian)的穩定性(xing)。紫杉醇白(bai)蛋(dan)白(bai)納米粒(li)在低濃度(du)下(xia)裂解為10nm的小顆粒(li)，加(jia)入(ru)伊曲康唑(zuo)(zuo)后(hou)的白(bai)蛋(dan)白(bai)納米粒(li)在同(tong)樣(yang)濃度(du)下(xia)仍保持(chi)(chi)130nm的粒(li)徑(jing)。另外，同(tong)時加(jia)入(ru)紫杉醇或其類似物和刺(ci)(ci)猬(wei)信(xin)號通路抑(yi)制(zhi)劑例(li)如(ru)伊曲康唑(zuo)(zuo)，能(neng)夠形(xing)成(cheng)粒(li)徑(jing)合(he)適、穩定性(xing)良好的脂質(zhi)體(ti)。

在(zai)本發明(ming)(ming)的第(di)二方面(mian)，本發明(ming)(ming)還提出了前面(mian)所(suo)述(shu)(shu)的藥(yao)物組(zu)合物在(zai)制備藥(yao)物中的用(yong)(yong)途(tu)，所(suo)述(shu)(shu)藥(yao)物用(yong)(yong)于治療癌癥，優選(xuan)地，所(suo)述(shu)(shu)癌癥為(wei)肺(fei)癌或(huo)者胰(yi)腺癌，更優選(xuan)地，所(suo)述(shu)(shu)胰(yi)腺癌為(wei)胰(yi)腺導管癌，所(suo)述(shu)(shu)肺(fei)癌為(wei)非(fei)小(xiao)細胞肺(fei)癌。

肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)是最(zui)常(chang)見(jian)的肺(fei)原發(fa)性(xing)惡性(xing)腫瘤，絕大多數(shu)肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)起源于支氣管粘膜(mo)上(shang)皮(pi)，故亦稱支氣管肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)。肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)的在吸煙人(ren)群中發(fa)病(bing)(bing)率高，近50多年來，世(shi)界各國特(te)別是工(gong)業發(fa)達國家，肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)的發(fa)病(bing)(bing)率和病(bing)(bing)死(si)(si)率均迅速(su)上(shang)升，死(si)(si)于癌(ai)(ai)(ai)(ai)病(bing)(bing)的男性(xing)病(bing)(bing)人(ren)中肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)已居首位。非小細胞(bao)肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)(Non-small-cell carcinoma)是最(zui)為常(chang)見(jian)的肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)，占肺(fei)癌(ai)(ai)(ai)(ai)總數(shu)的80％。

胰(yi)(yi)腺(xian)癌(ai)(ai)(ai)是(shi)(shi)一種惡性程度很高，診(zhen)斷(duan)和(he)(he)(he)治(zhi)療都很困難(nan)的(de)(de)癌(ai)(ai)(ai)癥，是(shi)(shi)美國(guo)第(di)四大(da)、中國(guo)第(di)六大(da)致人死亡的(de)(de)癌(ai)(ai)(ai)癥。在胰(yi)(yi)腺(xian)癌(ai)(ai)(ai)患者中，80-85％患有胰(yi)(yi)腺(xian)導(dao)管(guan)(guan)(guan)癌(ai)(ai)(ai)(PDA)，1-2％為腺(xian)泡細胞癌(ai)(ai)(ai)，1-2％為神經內分泌腫(zhong)(zhong)瘤(PNET)。其(qi)中，胰(yi)(yi)腺(xian)導(dao)管(guan)(guan)(guan)癌(ai)(ai)(ai)(PDA)由(you)于(yu)(yu)其(qi)診(zhen)療更為困難(nan)且占比例(li)巨(ju)大(da)而在近年來(lai)引起越(yue)來(lai)越(yue)多的(de)(de)關注。胰(yi)(yi)腺(xian)導(dao)管(guan)(guan)(guan)癌(ai)(ai)(ai)(PDA)早(zao)期(qi)并沒有明顯癥狀，一經發現，即為中晚期(qi)，患者的(de)(de)5年存活率(lv)不足5％。胰(yi)(yi)腺(xian)導(dao)管(guan)(guan)(guan)癌(ai)(ai)(ai)(PDA)的(de)(de)診(zhen)治(zhi)困難(nan)主要由(you)胰(yi)(yi)腺(xian)的(de)(de)位(wei)(wei)置及其(qi)特殊的(de)(de)腫(zhong)(zhong)瘤微環(huan)境造成的(de)(de)。胰(yi)(yi)腺(xian)位(wei)(wei)于(yu)(yu)腹后壁，位(wei)(wei)于(yu)(yu)胃部(bu)的(de)(de)正下方，與(yu)十 二(er)指(zhi)腸直接相連，這對手術(shu)切除(chu)造成了(le)一定的(de)(de)難(nan)度。胰(yi)(yi)腺(xian)導(dao)管(guan)(guan)(guan)癌(ai)(ai)(ai)隨(sui)著病(bing)情的(de)(de)惡化，腫(zhong)(zhong)瘤周(zhou)(zhou)(zhou)圍會形成一層纖(xian)維化的(de)(de)基質，并且使腫(zhong)(zhong)瘤周(zhou)(zhou)(zhou)圍的(de)(de)血管(guan)(guan)(guan)密(mi)度明顯降低。這使腫(zhong)(zhong)瘤部(bu)位(wei)(wei)對化療和(he)(he)(he)放療的(de)(de)敏(min)感(gan)度遠(yuan)(yuan)遠(yuan)(yuan)小于(yu)(yu)周(zhou)(zhou)(zhou)圍的(de)(de)正常(chang)組織和(he)(he)(he)器官(guan)。

本(ben)發明的技術方案為(wei)癌(ai)癥，例如胰(yi)腺腫(zhong)瘤或者肺癌(ai)腫(zhong)瘤諸如胰(yi)腺導管癌(ai)和(he)非小細胞肺癌(ai)提供了比較好的治療方案。

在本發明(ming)的第三(san)方面，本發明(ming)還提出了一種(zhong)制備膠(jiao)束形式的藥物(wu)(wu)組(zu)合物(wu)(wu)的方法(fa)，包(bao)括(kuo)：

(1)將兩親(qin)性聚合物(wu)、紫杉醇或其類似(si)物(wu)和刺猬信號通路抑制(zhi)(zhi)劑(ji)或者激酶抑制(zhi)(zhi)劑(ji)(比如，伊曲(qu)康(kang)唑，索拉菲尼(ni)等)溶于有機溶劑(ji)；

(2)將步驟(1)中所得到的混合物(wu)進行旋轉蒸發以除去所述有(you)機(ji)溶劑，形成藥物(wu)組合物(wu)的聚合物(wu)膜(mo)；

(3)向所述(shu)藥物(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)的聚(ju)合(he)物(wu)(wu)膜中加入60℃去離(li)子水(shui)，得到所述(shu)膠束形式(shi)的藥物(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)的水(shui)溶液；

(4)將步驟(3)中所得(de)到(dao)的水溶液(ye)進行冷凍(dong)干燥，以便(bian)獲得(de)所述膠束(shu)形(xing)式的藥物組(zu)合(he)物。

根(gen)據(ju)本發(fa)明(ming)的(de)實施例，制備膠(jiao)束形式(shi)的(de)藥物組合(he)物的(de)方(fang)法中，所(suo)述兩(liang)親性聚(ju)合(he)物為兩(liang)親性聚(ju)合(he)物聚(ju)乙二醇(chun)聚(ju)乳(ru)酸嵌段共聚(ju)物。由此(ci)，安(an)全(quan)無毒，能夠有效用于臨床(chuang)治療。

根據本發明的(de)實施例，制備膠束形(xing)式的(de)藥物(wu)組合物(wu)的(de)方法中，所述(shu)有機溶劑為乙腈，由(you)此可以(yi)通過一定的(de)速(su)度揮(hui)發溶劑，從(cong)而有利于藥物(wu)和(he)高(gao)(gao)分(fen)子(zi)形(xing)成高(gao)(gao)度均勻的(de)膜。

根(gen)據本(ben)發明的(de)實施例，制備(bei)膠束形式的(de)藥物(wu)組合物(wu)的(de)方法(fa)中(zhong)，所(suo)述(shu)(shu)刺猬信號(hao)通路(lu)抑制劑或者激酶抑制劑和所(suo)述(shu)(shu)紫(zi)杉(shan)醇或其類似物(wu)的(de)質量(liang)比為10:1-1:10。優選地，所(suo)述(shu)(shu)伊曲康唑和所(suo)述(shu)(shu)紫(zi)杉(shan)醇的(de)質量(liang)比為1:1，由此形成的(de)膠束高度分散且(qie)粒(li)徑最為穩定。

發(fa)明人發(fa)現，利用(yong)本(ben)發(fa)明的該方法能夠有(you)(you)效地(di)同時抑制(zhi)伊(yi)曲康(kang)唑(zuo)和(he)紫杉醇結晶，從而使得制(zhi)備出的膠束(shu)有(you)(you)長(chang)期的穩定性。

在本(ben)發明的(de)第四方(fang)面(mian)，本(ben)發明還提出了一(yi)種(zhong)制備白蛋白形式的(de)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)的(de)方(fang)法，包(bao)括：

(1)將(jiang)紫(zi)杉(shan)醇(chun)或(huo)其(qi)類似(si)物，和刺猬信號通路抑制劑或(huo)者激酶(mei)抑制劑(比如伊曲(qu)康(kang)唑和紫(zi)杉(shan)醇(chun))溶于有(you)機溶劑，再(zai)加入至(zhi)白蛋白水溶液中；

(2)將步驟(1)中所得到(dao)的混合(he)物(wu)(wu)(wu)進(jin)行高壓均質后(hou)旋(xuan)轉蒸發，以除(chu)去所述有機溶劑，得到(dao)所述白蛋白形(xing)式(shi)的藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)(wu)的水溶液；

(3)將(jiang)步驟(2)中所得(de)到的(de)(de)水溶液進行冷(leng)凍干燥，以便(bian)獲(huo)得(de)所述白(bai)蛋(dan)白(bai)形式的(de)(de)藥物組合物。

根據本(ben)發明的實施例，制備白蛋白形式的藥物組合物的方(fang)法(fa)中，所(suo)述制劑(ji)(ji)不含有機(ji)試劑(ji)(ji)。因此(ci)，制劑(ji)(ji)安全無毒，能(neng)夠有效用于(yu)臨(lin)床治(zhi)療。

根據本(ben)發明的(de)實施例，制備白(bai)蛋白(bai)形式的(de)藥物(wu)組合物(wu)的(de)方(fang)法中，所述有(you)機(ji)溶劑(ji)為氯仿和(he)乙醇(chun)的(de)混合溶劑(ji)，體積比(bi)為9:1，由此可(ke)以有(you)效地形成粒徑均(jun)一(yi)的(de)白(bai)蛋白(bai)納米(mi)粒。后(hou)續的(de)凍干工藝可(ke)以大規模工業化生產白(bai)蛋白(bai)納米(mi)粒制劑(ji)，并且(qie)使得其在較長時間內(nei)保持穩定性。

發明人(ren)發現，利用本發明的(de)(de)該(gai)方法能夠制(zhi)備穩(wen)定的(de)(de)兩(liang)藥聯合的(de)(de)白蛋白納(na)米粒凍干制(zhi)劑(ji),有利于大規模(mo)工業化生(sheng)產。

在本(ben)發明的(de)第五方面(mian)，本(ben)發明提供了(le)一種制(zhi)備脂質體形式的(de)藥(yao)物組合物的(de)方法，包括：

(1)將脂質體(ti)組(zu)成材料(liao)(包括但(dan)不(bu)限于磷脂，膽(dan)固醇(chun)等)、紫杉(shan)醇(chun)或(huo)其類(lei)似物(wu)，和刺猬信號通路抑(yi)制劑(ji)(ji)或(huo)者(zhe)激酶(mei)抑(yi)制劑(ji)(ji)溶于有機溶劑(ji)(ji)；

(2)將步驟(1)中所(suo)得到的(de)混合物(wu)進(jin)行(xing)旋轉(zhuan)蒸(zheng)發以除去(qu)所(suo)述(shu)有機溶劑(ji)，形成藥(yao)物(wu)組合物(wu)的(de)薄膜；

(3)向所(suo)述藥(yao)物組合(he)物的薄膜(mo)中加入30-60℃去(qu)離(li)子水，得到所(suo)述脂質體形(xing)式的藥(yao)物組合(he)物的水溶液；

(4)可以(yi)將步驟(3)中所得到的(de)水(shui)溶液進(jin)行冷凍干燥，以(yi)便獲得固態的(de)所述脂質體(ti)形式的(de)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)。

根(gen)據(ju)本發明的實施(shi)例，為(wei)了(le)控(kong)制制備獲(huo)得(de)的脂(zhi)質(zhi)(zhi)體的粒徑，在(zai)進行步(bu)(bu)驟(4)之(zhi)前，可以對(dui)步(bu)(bu)驟(3)中獲(huo)得(de)的水溶液進行超聲或者薄膜擠出處(chu)理，以獲(huo)得(de)具(ju)有合適粒徑的脂(zhi)質(zhi)(zhi)體。且本領域技術人員(yuan)可以理解，根(gen)據(ju)實際應用情況的不同，技術人員(yuan)可以根(gen)據(ju)需(xu)要選擇制備不同粒徑的脂(zhi)質(zhi)(zhi)體。

根據本發(fa)明的實施(shi)例，在脂(zhi)質(zhi)體形式的藥物組合(he)物中(zhong)，所述刺(ci)猬信(xin)號通路抑(yi)制劑(ji)或者激(ji)酶抑(yi)制劑(ji)和(he)所述紫杉醇或其類似(si)物的質(zhi)量比為10:1-1:10。由此形成的脂(zhi)質(zhi)體高度分散且粒(li)徑最為穩定，且可以進一(yi)步提高藥物組合(he)物的治療效(xiao)果(guo)。

附圖說明

圖1顯示了根據本(ben)發(fa)明的一個實施(shi)例，伊(yi)曲康唑與紫杉醇藥物組合物的不同配比膠束的照片(pian)、顯微鏡照片(pian)和粒徑(jing)分(fen)布圖；

圖(tu)2顯示(shi)了根據本發明的一個實(shi)施例，伊(yi)曲康唑與紫杉醇(chun)藥(yao)物(wu)組合物(wu)的不同(tong)配比(bi)膠束在放(fang)置24小時(shi)后的照片和粒徑分布圖(tu)；

圖(tu)3顯示了根據本發明的一(yi)個實施例(li)，伊曲康唑與紫(zi)杉(shan)醇藥(yao)物組合物的膠(jiao)束、同濃(nong)度紫(zi)杉(shan)醇膠(jiao)束、空膠(jiao)束的臨界膠(jiao)束濃(nong)度；

圖4顯(xian)示(shi)了(le)根據本發明的一個實施例，伊曲康唑與(yu)卡(ka)巴他賽(sai)藥物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)的膠(jiao)束及4℃放(fang)置48小時后的粒徑(jing)分布圖。

圖5顯示了根據本發明的一個實施例，索拉菲尼(ni)與卡(ka)巴(ba)他賽藥物組(zu)合物的膠束(shu)照(zhao)片及室(shi)溫放置5小時后(hou)的粒徑分(fen)布(bu)圖。

圖(tu)6顯示了根據本(ben)發明的(de)一個實施(shi)例，伊曲康唑(zuo)與紫(zi)杉醇(chun)藥物組合(he)物的(de)白蛋白納米粒(li)的(de)照片及粒(li)徑分布圖(tu)。

圖7顯示了根(gen)據本(ben)發明的一(yi)個(ge)實施例，紫杉(shan)醇/伊曲康唑呈(cheng)膠束形式的藥物(wu)組(zu)合物(wu)，與紫杉(shan)醇單一(yi)藥物(wu)膠束對紫杉(shan)醇耐(nai)藥型肺癌腫(zhong)瘤細(xi)胞的抑制結果圖。

圖(tu)8顯示了根據(ju)本發明的(de)一個實施(shi)例，伊(yi)曲康唑單(dan)一藥物(wu)膠束(shu)、紫(zi)杉(shan)醇單(dan)一藥物(wu)膠束(shu)和伊(yi)曲康唑與紫(zi)杉(shan)醇藥物(wu)組合(he)物(wu)的(de)膠束(shu)對非小細胞肺癌腫瘤(liu)的(de)抑(yi)制(zhi)結(jie)果圖(tu)。

圖9顯示了根據本發明(ming)的一(yi)個實(shi)施(shi)例(li)，空白膠束(shu)、伊(yi)曲(qu)康唑單一(yi)藥物膠束(shu)、紫杉醇單一(yi)藥物膠束(shu)、伊(yi)曲(qu)康唑與紫杉醇藥物組合物的膠束(shu)、紫杉醇白蛋白納米粒對非小細(xi)胞肺癌腫(zhong)瘤的抑制結(jie)果圖。

圖(tu)10顯示了根據本發明的一個實(shi)施例(li)，白蛋(dan)白溶液、紫(zi)(zi)杉醇白蛋(dan)白納米粒(li)、伊曲康唑白蛋(dan)白納米粒(li)、紫(zi)(zi)杉醇/伊曲康唑白蛋(dan)白納米粒(li)和紫(zi)(zi)杉醇膠束(shu)對動物(wu)毒副(fu)作用結果圖(tu)。

圖11顯示了根據(ju)本(ben)發明的一個(ge)實(shi)施例，白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)溶液、紫(zi)杉醇(chun)(chun)白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納(na)米(mi)粒、伊曲康(kang)唑(zuo)白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納(na)米(mi)粒、紫(zi)杉醇(chun)(chun)/伊曲康(kang)唑(zuo)白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納(na)米(mi)粒和紫(zi)杉醇(chun)(chun)膠束對(dui)人胰腺癌腫瘤抑制作用結果圖。

具體實施方式

實施例1 紫杉醇/刺猬信號(hao)通(tong)路抑制(zhi)劑藥物組(zu)合(he)物膠(jiao)束的(de)制(zhi)備

將150mg PEG-PLA(2K-2K，或者(zhe)5K-5K聚(ju)乙二(er)醇聚(ju)乳(ru)酸二(er)嵌(qian)段共(gong)聚(ju)物(wu))、20mg伊(yi)曲(qu)康唑(zuo)和20mg紫(zi)(zi)杉(shan)醇溶(rong)于8mL乙腈，于60℃旋轉蒸(zheng)發除去(qu)有機溶(rong)劑，得(de)透明藥物(wu)聚(ju)合物(wu)混合膜，加入10mL 60℃去(qu)離子水(shui)水(shui)化，超聲5min得(de)到(dao)同時包含2mg/mL伊(yi)曲(qu)康唑(zuo)和2mg/mL紫(zi)(zi)杉(shan)醇聚(ju)合物(wu)載藥膠束的水(shui)溶(rong)液(照片見圖(tu)1)，冷凍干燥。

圖1中，各縮寫表示含(han)義如下：IM:伊(yi)曲(qu)康(kang)唑(zuo)膠束(shu)(shu)；PM:紫(zi)(zi)杉醇(chun)膠束(shu)(shu)；9I1PM：伊(yi)曲(qu)康(kang)唑(zuo)和(he)紫(zi)(zi)杉醇(chun)載藥比(bi)為(wei)(wei)9/1(w/w)的膠束(shu)(shu)；7I3PM：伊(yi)曲(qu)康(kang)唑(zuo)和(he)紫(zi)(zi)杉醇(chun)載藥比(bi)為(wei)(wei)7/3(w/w)的膠束(shu)(shu)；5I5PM：伊(yi)曲(qu)康(kang)唑(zuo)和(he)紫(zi)(zi)杉醇(chun)載藥比(bi)為(wei)(wei)5/5(w/w)的膠束(shu)(shu)。

對(dui)制備獲得膠(jiao)(jiao)束(shu)進(jin)行形貌(mao)觀察，粒(li)徑(jing)(jing)檢測、及臨(lin)界膠(jiao)(jiao)束(shu)濃度檢測，檢測結(jie)果如圖(tu)1-3所示(shi)，伊(yi)曲康唑不能(neng)夠(gou)有(you)效地(di)形成膠(jiao)(jiao)束(shu)，但當其與(yu)紫(zi)杉(shan)醇組合(he)后，兩者能(neng)夠(gou)有(you)效地(di)形成粒(li)徑(jing)(jing)均一(yi)的(de)(de)膠(jiao)(jiao)束(shu)，其中在(zai)質量比(bi)(bi)1:1時最為穩定(圖(tu)1)；并且該膠(jiao)(jiao)束(shu)能(neng)夠(gou)保(bao)持長時間(24h) 的(de)(de)穩定性(xing)(圖(tu)2)；和紫(zi)杉(shan)醇膠(jiao)(jiao)束(shu)、空膠(jiao)(jiao)束(shu)相比(bi)(bi)，伊(yi)曲康唑和紫(zi)杉(shan)醇藥(yao)物組合(he)物的(de)(de)膠(jiao)(jiao)束(shu)體(ti)系有(you)更小的(de)(de)臨(lin)界膠(jiao)(jiao)束(shu)濃度，從而具備更好(hao)的(de)(de)物理(li)穩定性(xing)(圖(tu)3)。

實施例2 紫杉醇類似物(wu)/刺猬信號(hao)通路抑制劑組合物(wu)膠束的(de)制備(bei)

本實施例選用的紫杉醇類似物(wu)為(wei)卡(ka)巴他(ta)賽(sai)(sai)(CAB)，選用的刺猬(wei)信號通路(lu)為(wei)伊(yi)曲康唑(ITA)。將30mg PEG-PLA(5K-5K，聚(ju)乙(yi)(yi)二醇聚(ju)乳酸二嵌段(duan)共聚(ju)物(wu))、3mg伊(yi)曲康唑和3mg卡(ka)巴他(ta)賽(sai)(sai)溶(rong)于5mL乙(yi)(yi)腈，于60℃旋轉20min蒸發除去有機(ji)溶(rong)劑，得透明藥物(wu)聚(ju)合(he)物(wu)混合(he)膜，加入3mL 60℃去離子(zi)水(shui)水(shui)化，超聲5min得到同時包含1mg/mL伊(yi)曲康唑和1mg/mL卡(ka)巴他(ta)賽(sai)(sai)聚(ju)合(he)物(wu)載藥膠束的水(shui)溶(rong)液。

制備獲得的(de)膠(jiao)束的(de)照片(pian)及粒徑(jing)檢測結果如(ru)圖4所示，伊(yi)曲康唑不能夠有(you)效(xiao)地形(xing)成(cheng)粒徑(jing)分(fen)(fen)布均(jun)一(yi)的(de)膠(jiao)束，薄(bo)膜水化(hua)后(hou)立即(ji)呈現(xian)渾濁狀態，但當其(qi)與紫杉醇按質量比1:1組(zu)合(he)后(hou)，兩者能夠有(you)效(xiao)地形(xing)成(cheng)外觀良好的(de)膠(jiao)束，并且用激(ji)光粒度分(fen)(fen)析(xi)儀(yi)表(biao)征(zheng)該(gai)膠(jiao)束的(de)粒徑(jing)分(fen)(fen)布發現(xian)，該(gai)膠(jiao)束能夠保持長時間(48h)的(de)穩定性(xing)。

實施例3 紫杉醇類似物(wu)(wu)/激(ji)酶抑制(zhi)劑組合物(wu)(wu)膠束的制(zhi)備(bei)

本(ben)實施例選(xuan)用(yong)的(de)紫杉醇類似物為(wei)卡巴他(ta)賽(sai)(CAB)，選(xuan)用(yong)的(de)激(ji)酶抑制劑為(wei)索(suo)拉(la)菲(fei)(fei)尼(SOR)將40mg PEG-PLA(5K-5K，聚(ju)(ju)乙二醇聚(ju)(ju)乳酸二嵌段共(gong)聚(ju)(ju)物)、4mg索(suo)拉(la)菲(fei)(fei)尼和(he)4mg卡巴他(ta)賽(sai)溶(rong)于(yu)5mL乙腈，于(yu)60℃旋轉20min蒸發除去(qu)有機(ji)溶(rong)劑，得(de)透明藥(yao)物聚(ju)(ju)合物混合膜，加入4mL 60℃去(qu)離子水水化，超聲5min得(de)到同(tong)時包含(han)1mg/mL索(suo)拉(la)菲(fei)(fei)尼和(he)1mg/mL卡巴他(ta)賽(sai)聚(ju)(ju)合物載藥(yao)膠束的(de)水溶(rong)液。

制備獲得的(de)膠(jiao)束(shu)的(de)照片及粒徑(jing)檢測結果如圖5所示，卡巴他賽(sai)不能夠有效(xiao)地(di)形(xing)成(cheng)粒徑(jing)分布均一的(de)膠(jiao)束(shu)，4℃靜置2h后(hou)瓶(ping)底即出現藥物沉淀，隨(sui)著時(shi)間的(de)推移(yi)，藥物析出的(de)量逐漸(jian)增多。但當其與(yu)索(suo)拉菲尼(ni)按質(zhi)量比1:1組合后(hou)，兩者能夠有效(xiao)地(di)形(xing)成(cheng)膠(jiao)束(shu)，并且該膠(jiao)束(shu)能夠在室(shi)溫(wen)條件下(xia)保持長時(shi)間(5h)的(de)穩定性，粒徑(jing)分布均一。

實施例4 白(bai)蛋白(bai)納米粒形式的藥(yao)物組合物的制備

將伊曲(qu)康唑(zuo)和紫(zi)杉醇各50mg溶(rong)于氯仿:乙醇(9:1)混(hun)合溶(rong)劑(ji)3mL中，加入(ru)至白蛋(dan)白水溶(rong)液50mL，高(gao)壓均質后(hou)于60℃水浴旋(xuan)轉蒸發去除有機溶(rong)劑(ji)，得到白蛋(dan)白納米粒水溶(rong)液，冷凍(dong)干燥。

制備獲得的(de)(de)(de)白(bai)蛋(dan)(dan)白(bai)納米(mi)粒(li)(li)的(de)(de)(de)粒(li)(li)徑檢測(ce)結果(guo)如圖(tu)6所(suo)示(shi)，其中，Nab-paclitaxel表示(shi)單(dan)獨的(de)(de)(de)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)白(bai)蛋(dan)(dan)白(bai)納米(mi)粒(li)(li)，PTX/ITA BSA-NP表示(shi)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)和(he)(he)伊曲康唑藥物(wu)組合(he)物(wu)的(de)(de)(de)白(bai)蛋(dan)(dan)白(bai)納米(mi)粒(li)(li)，由圖(tu)6可以看出(chu)，單(dan)獨的(de)(de)(de)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)白(bai)蛋(dan)(dan)白(bai)納米(mi)粒(li)(li)在低(di)濃度(0.02mg/ml)下(xia)，130nm的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)裂解為10nm左(zuo)右(you)的(de)(de)(de)小顆粒(li)(li)；而紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)和(he)(he)伊曲康唑藥物(wu)組合(he)物(wu)的(de)(de)(de)白(bai)蛋(dan)(dan)白(bai)納米(mi)粒(li)(li)在 0.002mg/ml濃度下(xia)粒(li)(li)徑仍保持130nm。

實驗例5 藥效評價

1、紫杉醇耐(nai)藥型肺癌腫瘤細胞(bao)的培養(yang)

紫(zi)杉醇耐藥型人源非小細胞(bao)肺癌細胞(bao)A549(國(guo)外合作實驗室贈(zeng)送)用RPMI1640或DMEM培(pei)養基(含10％胎牛血(xue)清以及1％青霉(mei)素(su)和鏈(lian)霉(mei)素(su))培(pei)養，待(dai)生長至對(dui)數(shu)期后進行實驗。

2、比較

按照(zhao)與實施(shi)例1相同(tong)的條件分別制備紫(zi)杉醇(chun)(chun)/伊曲康唑呈膠束形式的藥物組合物，與紫(zi)杉醇(chun)(chun)單一(yi)藥物膠束進行比較，按照(zhao)一(yi)定的濃度梯度將兩種膠束分別加至紫(zi)杉醇(chun)(chun)耐(nai)藥型A549細胞(bao)株的培養液中，一(yi)段時(shi)間后，用DNA檢(jian)測(ce)法或MTT檢(jian)測(ce)法檢(jian)驗細胞(bao)存活率。

3、結果分析

實驗結(jie)果見圖7，由圖7可以看出(chu)，對(dui)于紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)耐藥(yao)(yao)的(de)(de)(de)人源(yuan)非小細(xi)胞(bao)(bao)肺癌細(xi)胞(bao)(bao)A549，紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)單一(yi)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)膠(jiao)束在紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)濃度為(wei)8μM時仍不(bu)能使A549細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)相對(dui)生存(cun)率降(jiang)低(di)(di)；而(er)紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)/伊(yi)曲康唑(zuo)呈(cheng)膠(jiao)束形式的(de)(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)組(zu)合物(wu)(wu)降(jiang)低(di)(di)紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)耐藥(yao)(yao)型(xing)A549相對(dui)生存(cun)率的(de)(de)(de)IC50約為(wei)2.6μM。這(zhe)說(shuo)明，紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)/伊(yi)曲康唑(zuo)呈(cheng)膠(jiao)束形式的(de)(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)組(zu)合物(wu)(wu)對(dui)紫(zi)杉(shan)(shan)(shan)醇(chun)(chun)耐藥(yao)(yao)型(xing)A549細(xi)胞(bao)(bao)有很(hen)好的(de)(de)(de)抑制和(he)殺滅作用。

實驗(yan)例6 藥效評價(H1975人(ren)源非小(xiao)細胞肺(fei)癌皮下移植(zhi)瘤)

1、小鼠肺(fei)癌模型(xing)的建立

選用(yong)人源非小細胞(bao)肺(fei)癌細胞(bao)H1975(來自(zi)美國模(mo)式培養物(wu)集存庫ATCC)植入到(dao)BALB/C裸鼠體內得到(dao)的腫(zhong)瘤原位模(mo)型：將一定量人非小細胞(bao)肺(fei)癌腫(zhong)瘤細胞(bao)H1975直接注射到(dao)裸鼠的肺(fei)部，2-4周(zhou)CT或MRI確認(ren)成型。

2、比較

按照(zhao)與(yu)(yu)實施例1相同的條件分別制備紫(zi)杉(shan)醇/伊(yi)曲(qu)康(kang)唑呈膠束(shu)形式的藥物(wu)組(zu)(zu)(zu)合物(wu)(15mg/kg)，與(yu)(yu)伊(yi)曲(qu)康(kang)唑單(dan)一(yi)(yi)藥物(wu)膠束(shu)、紫(zi)杉(shan)醇單(dan)一(yi)(yi)藥物(wu)膠束(shu)進行比較，將空白(bai)膠束(shu)作(zuo)為對(dui)照(zhao)，共4組(zu)(zu)(zu)，每(mei)組(zu)(zu)(zu)6只小鼠(shu)(具(ju)體(ti)見表(biao)1)。連續給(gei)藥一(yi)(yi)周(3次(ci))，觀察腫瘤體(ti)積變化(hua)，最(zui)后(hou)一(yi)(yi)次(ci)給(gei)藥后(hou)，解剖小鼠(shu)，做組(zu)(zu)(zu)織學(xue)染色觀察癌(ai)變部位結構(gou)變化(hua)。

表1

3、結果分析

試驗結果見(jian)圖8，圖8是給藥(yao)3次后的(de)實(shi)驗結果，可以(yi)看(kan)出伊(yi)曲康(kang)(kang)(kang)唑單(dan)(dan)一(yi)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(第(di)(di)3組(zu)(zu))對腫瘤(liu)的(de)生長無抑(yi)制(zhi)(zhi)作用，對動物(wu)(wu)(wu)也沒有明顯副作用；而伊(yi)曲康(kang)(kang)(kang)唑與(yu)紫杉(shan)(shan)醇(chun)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)組(zu)(zu)合物(wu)(wu)(wu)的(de)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)體系(xi)(xi)(第(di)(di)4組(zu)(zu))對腫瘤(liu)有抑(yi)制(zhi)(zhi)作用；紫杉(shan)(shan)醇(chun)單(dan)(dan)一(yi)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(第(di)(di)2組(zu)(zu))作為陽性對照對腫瘤(liu)有抑(yi)制(zhi)(zhi)作用。非常值得注意到(dao)是，第(di)(di)4組(zu)(zu)紫杉(shan)(shan)醇(chun)/伊(yi)曲康(kang)(kang)(kang)唑膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)體系(xi)(xi)，只(zhi)有一(yi)半的(de)紫杉(shan)(shan)醇(chun)劑量，而其抑(yi)制(zhi)(zhi)腫瘤(liu)的(de)效果優(you)于(yu)雙倍(bei)紫杉(shan)(shan)醇(chun)劑量的(de)單(dan)(dan)一(yi)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(第(di)(di)2組(zu)(zu))，且副作用較小。

實驗(yan)例7 藥效(xiao)評價(A549人源非小(xiao)細胞肺(fei)癌皮下移植瘤)

1.小鼠肺癌模(mo)型的建立(li)

選用人源非小細胞肺癌細胞A549(來自美國模式培養物集存庫ATCC)植入到BALB/C裸鼠體內得到的腫瘤原位模型：將一定量人非小細胞肺癌腫瘤細胞A549直接注射到裸鼠的肺部，2-4周腫瘤的體積達到200mm³。

2.比較

按照與(yu)實施例1相同的(de)條件分別制(zhi)備(bei)紫(zi)杉醇/伊(yi)曲康(kang)唑呈膠(jiao)束(shu)形式的(de)藥(yao)物(wu)組合物(wu)(30mg/kg)，與(yu)伊(yi)曲康(kang)唑單(dan)一藥(yao)物(wu)膠(jiao)束(shu)、紫(zi)杉醇單(dan)一藥(yao)物(wu)膠(jiao)束(shu)進行(xing)比(bi)較，將空白膠(jiao)束(shu)作為(wei)對(dui)照，共6組，每組5只小鼠(shu)(具體見(jian)表2)。連續(xu)給藥(yao)4周(4次)，觀察(cha)腫瘤(liu)體積(ji)變化。

表2

3、結果分析

實驗(yan)(yan)結果(guo)見圖9，圖9是給藥(yao)3次后的(de)實驗(yan)(yan)結果(guo)，可以看出伊曲康(kang)(kang)唑單(dan)一(yi)藥(yao)物(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(shu)(第2組)對腫(zhong)瘤(liu)的(de)生長無抑制(zhi)作(zuo)用，但(dan)有(you)(you)明顯促進腫(zhong)瘤(liu)生長的(de)作(zuo)用；而(er)伊曲康(kang)(kang)唑與紫(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)藥(yao)物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)的(de)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(shu)體(ti)系(第5、6組)對腫(zhong)瘤(liu)有(you)(you)抑制(zhi)作(zuo)用；紫(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)單(dan)一(yi)藥(yao)物(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(shu)和紫(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)白蛋白納米(mi)粒(第3、4組)作(zuo)為陽性對照對腫(zhong)瘤(liu)有(you)(you)抑制(zhi)作(zuo)用。非常值得注意到是，第5、6組紫(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)/伊曲康(kang)(kang)唑膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(shu)體(ti)系，其抑制(zhi)腫(zhong)瘤(liu)的(de)效果(guo)優于(yu)紫(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)劑量的(de)單(dan)一(yi)藥(yao)物(wu)(wu)膠(jiao)束(shu)(shu)(shu)(shu)或(huo)者白蛋白納米(mi)粒(第3、4組)。

實(shi)驗例8 藥效評價(Mia PaCa-2人源胰腺癌皮下(xia)移(yi)植瘤)

1、小鼠胰腺癌模型的建立(li)

選用(yong)人胰腺(xian)癌細(xi)胞MIA PaCa-2(來自美(mei)國(guo)模式培養物集存庫ATCC)植入到(dao)BALB/C裸鼠體內得(de)到(dao)的皮下腫瘤(liu)模型：將一定(ding)量人胰腺(xian)癌腫瘤(liu)細(xi)胞MIA PaCa-2直接注射到(dao)裸鼠的皮下，2-4周CT或(huo)MRI確認成型。

2、比較

按(an)照與實施例(li)2相(xiang)同(tong)的(de)條件分(fen)別(bie)制備紫杉醇/伊(yi)(yi)曲(qu)康(kang)唑呈白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納(na)米粒形式的(de)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)組(zu)(zu)合物(wu)(wu)(15mg/kg)，與伊(yi)(yi)曲(qu)康(kang)唑單(dan)一藥(yao)(yao)物(wu)(wu)白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納(na)米粒、紫杉醇單(dan)一藥(yao)(yao)物(wu)(wu)白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)納(na)米粒進行比較(jiao)，將白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)溶液作(zuo)為(wei)空(kong)白(bai)(bai)對照，將紫杉醇單(dan)一藥(yao)(yao)物(wu)(wu)膠束(30mg/kg)作(zuo)為(wei)陽性對照，共5組(zu)(zu)，每組(zu)(zu)6只(zhi)小鼠(具體見表(biao)3)。連續給藥(yao)(yao)三周(每周一次)，觀察腫瘤(liu)體積(ji)變化(hua)，最后(hou)一次給藥(yao)(yao)后(hou)，解剖小鼠，做組(zu)(zu)織(zhi)學染色觀察癌變部位結(jie)構變化(hua)。

表3

3、結果分析

實(shi)驗(yan)結果(guo)(guo)見圖(tu)(tu)10和(he)圖(tu)(tu)11，圖(tu)(tu)10和(he)圖(tu)(tu)11是(shi)給(gei)藥3次后的(de)(de)(de)實(shi)驗(yan)結果(guo)(guo)，可以(yi)看出伊曲康(kang)唑單(dan)一(yi)藥物白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)納(na)米粒(li)(第(di)(di)(di)3組(zu)(zu)(zu))同白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)溶液相(xiang)比，對(dui)(dui)(dui)腫(zhong)瘤的(de)(de)(de)生(sheng)長有一(yi)定的(de)(de)(de)減緩作(zuo)用； 而(er)(er)伊曲康(kang)唑與紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)藥物組(zu)(zu)(zu)合物的(de)(de)(de)白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)納(na)米粒(li)(第(di)(di)(di)4組(zu)(zu)(zu))和(he)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)納(na)米粒(li)(第(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu))對(dui)(dui)(dui)腫(zhong)瘤有非常明顯的(de)(de)(de)抑制(zhi)作(zuo)用；紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)單(dan)一(yi)藥物膠(jiao)(jiao)束(第(di)(di)(di)5組(zu)(zu)(zu))作(zuo)為陽(yang)性對(dui)(dui)(dui)照對(dui)(dui)(dui)腫(zhong)瘤有抑制(zhi)作(zuo)用。非常值(zhi)得注意到是(shi)，第(di)(di)(di)4組(zu)(zu)(zu)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)/伊曲康(kang)唑白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)納(na)米粒(li)，只有一(yi)半的(de)(de)(de)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)劑量，而(er)(er)其抑制(zhi)腫(zhong)瘤的(de)(de)(de)效(xiao)果(guo)(guo)與雙倍(bei)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)劑量的(de)(de)(de)單(dan)一(yi)藥物膠(jiao)(jiao)束(第(di)(di)(di)5組(zu)(zu)(zu))和(he)雙倍(bei)紫(zi)(zi)(zi)杉(shan)醇(chun)(chun)(chun)(chun)劑量的(de)(de)(de)單(dan)一(yi)藥物白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)納(na)米粒(li)(第(di)(di)(di)2組(zu)(zu)(zu))相(xiang)似。從動物的(de)(de)(de)體重(zhong)上來看，這些(xie)劑型均沒有明顯的(de)(de)(de)毒副作(zuo)用。

在(zai)(zai)本說明(ming)(ming)書的(de)(de)(de)(de)描述(shu)中，參考術(shu)語“一個實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)”、“一些實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)”、“示(shi)(shi)例(li)”、“具體(ti)示(shi)(shi)例(li)”、或(huo)(huo)“一些示(shi)(shi)例(li)”等的(de)(de)(de)(de)描述(shu)意(yi)指(zhi)結(jie)(jie)合(he)(he)(he)該實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)或(huo)(huo)示(shi)(shi)例(li)描述(shu)的(de)(de)(de)(de)具體(ti)特(te)(te)(te)(te)征(zheng)、結(jie)(jie)構、材料或(huo)(huo)者(zhe)特(te)(te)(te)(te)點包含于本發明(ming)(ming)的(de)(de)(de)(de)至少一個實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)或(huo)(huo)示(shi)(shi)例(li)中。在(zai)(zai)本說明(ming)(ming)書中，對上述(shu)術(shu)語的(de)(de)(de)(de)示(shi)(shi)意(yi)性(xing)表述(shu)不(bu)必須針對的(de)(de)(de)(de)是(shi)相(xiang)同(tong)(tong)的(de)(de)(de)(de)實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)或(huo)(huo)示(shi)(shi)例(li)。而且，描述(shu)的(de)(de)(de)(de)具體(ti)特(te)(te)(te)(te)征(zheng)、結(jie)(jie)構、材料或(huo)(huo)者(zhe)特(te)(te)(te)(te)點可以(yi)在(zai)(zai)任(ren)一個或(huo)(huo)多個實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)或(huo)(huo)示(shi)(shi)例(li)中以(yi)合(he)(he)(he)適(shi)的(de)(de)(de)(de)方式結(jie)(jie)合(he)(he)(he)。此外(wai)，在(zai)(zai)不(bu)相(xiang)互矛盾的(de)(de)(de)(de)情況下，本領域的(de)(de)(de)(de)技(ji)術(shu)人員可以(yi)將本說明(ming)(ming)書中描述(shu)的(de)(de)(de)(de)不(bu)同(tong)(tong)實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)或(huo)(huo)示(shi)(shi)例(li)以(yi)及不(bu)同(tong)(tong)實(shi)(shi)(shi)(shi)施(shi)(shi)(shi)例(li)或(huo)(huo)示(shi)(shi)例(li)的(de)(de)(de)(de)特(te)(te)(te)(te)征(zheng)進(jin)行結(jie)(jie)合(he)(he)(he)和組合(he)(he)(he)。

盡管上面已經示(shi)出和描述了(le)本(ben)發(fa)明的(de)實施(shi)(shi)例，可以理(li)解(jie)的(de)是，上述實施(shi)(shi)例是示(shi)例性的(de)，不(bu)能(neng)理(li)解(jie)為對(dui)本(ben)發(fa)明的(de)限制，本(ben)領(ling)域(yu)的(de)普通技(ji)術人員在本(ben)發(fa)明的(de)范圍內可以對(dui)上述實施(shi)(shi)例進行變(bian)化、修改、替換和變(bian)型(xing)。