專利名稱：聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬于生 物醫藥技術領域，具體涉及一種聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激 因子凍干粉針劑，本發明還涉及聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針劑的制備 方法。
背景技術：
腫瘤化療后的非髓源性的中性粒細胞減少癥是臨床常見化療并發癥，也是腫瘤患 者死亡的重要原因之一。重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)是防治腫瘤化放療引起的 中性粒細胞減少癥的有效藥物，能夠促進粒細胞集落的形成，促進造血干細胞向中性粒細 胞增殖、分化。對成熟的中性粒細胞可促進游走、吞噬、產酶、釋放活性氧、殺菌能力和對外 來異物的黏著作用。還可動員成熟中性粒細胞從骨髓進入外周。能使早期多能造血干細胞 進入細胞周期，連日應用可促使骨髓造血干細胞進入外周血，然而重組人粒細胞集落刺激 因子(rhG-CSF)在機體內易受蛋白酶降解、半衰期只有1.3 4. 2小時，需每日給藥，而持 續給藥會引發藥疹、發熱、肌痛、骨痛等副作用，直接影響臨床治療效果，這極大的限制了其 在臨床治療中的應用。聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子(PEG-rhG-CSF)是將重組人粒細胞集落 刺激因子與聚乙二醇結合而成，由于其N端經20KD單甲氧基聚乙二醇(Mpeg)化學修飾，使 人粒細胞集落刺激因子蛋白被人體內蛋白酶接觸和酶解的機會大為減少，與常規rhG-CSF 相比，血漿清除率減慢，半衰期明顯延長達46-62h，因此臨床使用能減少給藥次數，避免患 者反復接受注射的痛苦，具有長效、不良反應少等優點。目前美國Amgen公司已有注射液上市，商品名Neulasta，其中含有聚乙二醇化重 組人粒細胞集落刺激因子、山梨醇、吐溫20、醋酸、醋酸鈉，其中山梨醇用于調節滲透壓、醋 酸緩沖鹽可以維持pH在4. 0左右，吐溫20可以防止主藥聚集，使注射液穩定，然而吐溫20 有較強的溶血作用，會增加用藥的風險。另外，目前上市的重組人粒細胞集落刺激因子凍干 粉針劑(商品名格拉諾賽特)處方為每支含單十二酸聚氧乙烯山梨聚糖0. lmg, L-精氨酸 IOmg, L-苯丙氨酸10mg、L-蛋氨酸10mg、D-甘露醇25mg，pH值為6. O 7. 5，但是重組人 粒細胞集落刺激因子聚乙二醇化后分子結構發生改變，為了保護其在凍干過程中不變性失 活，需要摸索新的凍干保護劑和凍干方法。目前并沒有聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激 因子的凍干粉針制劑的相關報道。中國發明專利CN1879875B公開了一種長期穩定的制劑，該技術方案主要通過在 凍干制劑形式存在的G-CSF制劑中添加一種或多種選自賴氨酸、組氨酸、精氨酸、天門冬 氨酸、谷氨酸、蘇氨酸和天冬氨酸的氨基酸；一種或多種苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的疏水 性氨基酸；和甲硫氨酸，由此方案得到的G-CSF制劑在長期貯存后仍可剩余90%或更多的 G-CSF ；或在40°C 2個月的長期貯存后仍可剩余90%或更多的G-CSF ；或在50°C 1個月的 加速試驗后仍可剩余90%或更多的G-CSF ；或在60°C 2周的加速試驗后仍可剩余90%或更多的G-CSF，在50°C 1個月的加速試驗后或在60°C 2周的加速試驗后甲硫氨酸-氧化的 G-CSF為或更少。凍干技術在蛋白制劑方面有很大的優勢，首先整個操作過程都處于低溫狀態，故 尤其適用于熱敏性蛋白質藥物制劑的制備，其次凍干后的蛋白質藥物呈疏松餅塊狀，不僅 有利于保存，而且有利于蛋白質藥物重溶后的復性。然而凍干過程是一個復雜的相變過程， 在凍結、凍融、干燥和儲存過程中，存在著多種誘導藥品中蛋白質變性的因素，故常需采取 一些措施來穩定處方中的蛋白質，目前普遍采用的是加入凍干保護劑。凍干保護劑的種類 繁多，機制復雜，常用的包括多羥基化合物、糖類、氨基酸類以及聚合物類等。選擇合適的凍 干保護劑對于蛋白質凍干產品制備和貯存過程中的穩定性具有重大的意義。中國發明專利 說明書CN100360184C公開了一種穩定等滲的凍干蛋白質制劑，該技術方案中通過在制劑 中添加蔗糖或海藻糖、緩沖液和表面活性劑，所述凍干制劑有的可以在30°C穩定6個月，有 的可以在30°C穩定1年。

發明內容
發明人經過大量的科學研究，對聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子的凍干粉 針制劑進行了有益的探索，從而提供了一種聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉 針，其特征在于，它由如下含量的組分組成聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子 1 10份凍干保護劑10 35份冰醋酸0.3 0.5份醋酸鈉0.1 0.2份其中凍干保護劑為甘露醇、精氨酸、甘氨酸中的一種或任意兩種的混合物。本發明所述的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針中含有2 5重量 份聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子。本發明所述的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針中凍干保護劑的 含量為15 30重量份。本發明所述的一種聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針的制備方法， 其特征在于將所用器皿經過無熱源處理，稱取處方量的凍干保護劑、冰醋酸、醋酸鈉，用注 射用水稀釋至IL的稀釋液，調節pH到3. 2 6. 3 ；分別過濾稀釋液和聚乙二醇化重組人粒
細胞集落刺激因子原液，并混合、分裝，按以下真空冷凍干燥曲線干燥即得
權利要求
1.一種聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針，其特征在于它由如下重量份 的組分組成聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子 1 10份凍干保護劑10 35份冰醋酸0. 3 0. 5份醋酸鈉0. 1 0. 2份其中凍干保護劑為甘露醇、精氨酸和甘氨酸中的一種或任意兩種的混合物。
2.根據權利要求1所述的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針，其特征在 于聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子的含量為2 5重量份。
3.根據權利要求1所述的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針，其特征在 于凍干保護劑的含量為15 30重量份。
4.一種聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針的制備方法，其特征在于稱 取處方量的凍干保護劑、冰醋酸、醋酸鈉，用注射用水溶解，調pH為3. 2 6. 3，然后與聚乙 二醇化重組人粒細胞集落刺激因子原液混合，按以下真空冷凍干燥曲線干燥即得
5.根據權利要求4所述的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針制備方法， 其特征在于凍干保護劑、冰醋酸和醋酸鈉用注射用水溶解后調pH為4. 0 5. 8。
6.根據權利要求4所述的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針制備方法， 其特征在于真空冷凍干燥過程中預凍階段降溫速率不小于2V /min。
全文摘要
本發明屬生物醫藥領域，具體涉及聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針劑及其制備方法。該凍干粉針劑包含活性成分聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子以及凍干保護劑、冰醋酸、醋酸鈉。其制備方法為將輔料配制成稀釋液，然后將含有活性成分的原液用稀釋液稀釋成所需濃度，分裝入潔凈西林瓶中，半加膠塞，放入真空冷凍干燥機中，真空冷凍干燥，即得。本發明制備的聚乙二醇化重組人粒細胞集落刺激因子凍干粉針劑在外觀、純度和平均效價方面具有長期的穩定性。
文檔編號A61K47/12GK102028661SQ201010618740
公開日2011年4月27日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者劉忠, 趙志全 申請人:山東新時代藥業有限公司