一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法
【專利摘要】本發明公開了一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，包括性狀的觀察、內容物的鑒別、內容物的檢查和對含有的成分進行含量測定，內容物的檢查包括有關物質含量的測定和高哌嗪含量的測定。鹽酸法舒地爾在合成反應過程中容易產生降解雜質，且容易發生副反應生成二聚體雜質，起始反應物料高哌嗪不易除盡，均會影響產品的純度和安全性，因此需要在生產過程中對產品雜質進行及時含量測定，以便控制生產過程的產品質量，本發明方法在現有控制方法的基礎上增加了二聚體含量的測定和高哌嗪含量的測定，因此，本發明的質量控制方法進一步提高了鹽酸法舒地爾的質量和完善了現有行業標準，具有簡單易行，精確度和準確性高的優點，對提高產品質量有重大意義。
【專利說明】
_種鹽酸法舒地爾的質量控制方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種藥物制劑的質量控制方法，特別是一種鹽酸法舒地爾的質量控制 方法。
【背景技術】
[0002] 鹽酸法舒地爾，化學名稱為:六氫-1-(5-異喹啉磺酰基)-1Η-1，4-二氮雜卓鹽酸 鹽，分子式為 · HC1，分子量為327.83,英文名為:Fasudil Hydrochloride。
[0003] 其化學結構式如下：
[0005] 鹽酸法舒地爾是日本Asahi Kasei(旭化成)株式會社于上世紀80年代開發的異喹 啉磺胺類藥物，是一種蛋白激酶RH0抑制物(細胞內鈣離子拮抗劑），通過阻斷血管收縮過程 的最后階段，也即通過增加肌球蛋白氫鏈磷酸酶的活性，擴張血管(抑制血管痙攣），降低內 皮細胞的張力發揮藥效，從而改善腦組織微循環，不產生和加重腦的盜血。其臨床上主要用 于改善和預防蛛網膜下腔出血后的腦痙攣及引起的腦缺血癥狀，同時還可保護神經抗凋 亡，促進神經再生。
[0006] 關于鹽酸法舒地爾的質量控制方法，公開號為CN101008637A的中國專利公開了一 種鹽酸法舒地爾注射液的質量控制方法，包括以下步驟:性狀的觀察，內容物的鑒別，內容 物的檢查，對含有的成分進行含量測定，但是鹽酸法舒地爾在合成過程中易生成副產物1， 4-二（5-異喹啉磺酰基）-五氫-1，4二氮雜卓二聚體，化學式為C23H22N4O4S2，分子量為 482.12,結構式為：
[0008] 在二聚體的合成過程中也用到高哌嗪，因此會影響鹽酸法舒地爾的生產和保證質 量，而上述公開的專利中并未對二聚體和高哌嗪的含量進行質量檢測和控制，現有技術并 不能完全有效、準確的控制鹽酸法舒地爾的質量。

【發明內容】

[0009] 本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種鹽酸法舒地爾的質量控制方 法，該方法簡單易行，精確度和準確性高，進一步提高了鹽酸法舒地爾的質量和完善了現有 行業標準。
[0010] 本發明的目的通過以下技術方案來實現:一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，包 括性狀的觀察、內容物的鑒別、內容物的檢查和對含有的成分進行含量測定，所述內容物的 檢查包括有關物質含量的測定和高哌嗪含量的測定。
[0011] 進一步地，所述有關物質含量的測定包括以下步驟：
[0012] S1.取本品，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中含0. lmg的溶液，作 為供試品溶液;精密量取供試品溶液適量，用流動相定量稀釋制成每lml中含lyg的溶液，作 為對照溶液;另取1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體，精密稱定，加流動 相溶解并定量稀釋制成每lml中約含0. lyg的溶液，作為對照品溶液；
[0013] S2.照中國藥典2010年版二部附錄V D高效液相色譜法試驗，用十八烷基硅烷鍵合 硅膠為填充劑，以1. 〇%三乙胺：乙醇：乙腈=1: 〇. 5:0.5為流動相，所述流動相用磷酸調pH 值為7.5，檢測波長為220nm;理論板數按鹽酸法舒地爾計算不低于2000，鹽酸法舒地爾和相 鄰雜峰的分離度應符合要求；
[0014] S3.取對照溶液20μ1，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高 約為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液各20μ1，分別注入液相 色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的6倍；
[0015] S4.供試品溶液色譜圖中如出現與對照品溶液液相色譜中二聚體峰保留時間一致 的峰，按外標法以峰面積計算，其含量不得大于〇. 1 % ;其他單個雜質峰面積不得大于對照 溶液主峰面積的0.1倍，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積。
[0016] 進一步地，所述1,4-二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1,4二氮雜卓二聚體的合成方法 為:異喹啉-5-磺酰氯鹽酸鹽與二氯甲烷混合后降溫至0~5°C，調節pH至5~6后保溫攪拌25 ~35min，靜置分層、水層用二氯甲烷萃取并干燥得干燥液;將高哌嗪溶解于無水四氫呋喃 中，在0~5°C的條件下滴加至干燥液中，保溫攪拌1.5~2.5h，調節pH至5,過濾、干燥后得粗 品1,4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體。
[0017] 進一步地，所述高哌嗪含量的測定方法為：
[0018] (1)取本品，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每lrnl中約含O.lg的溶 液，作為供試品溶液;另取高哌嗪適量，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每lml 中約含0. lmg的溶液，作為對照品溶液；
[0019] (2)照氣相色譜法中國藥典2010年版一部附錄VI E試驗，火焰離子化檢測器：以 5 %二苯基和95 %二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱為色譜柱;起始溫度為80°C，維持 lmin，以10°C/min的速率升溫至260°C，維持lOmin;進樣口溫度為280°C ;檢測器溫度為280 °C ;分流比為10:1;氫氣流速為30ml/min;空氣流速為300ml/min;載氣為氮氣；
[0020] (3)精密吸取二甲基亞砜、供試品溶液、對照品溶液各0.2μ1注入氣相色譜儀，記錄 色譜圖，按外標法以峰面積計算，高哌嗪含量不得大于〇. 1 %。
[0021] 進一步地，所述性狀的觀察為本品為白色或類白色結晶型粉末、無臭、味微苦，有 引濕性;本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中溶解，在氯仿或乙醚中幾乎不溶。
[0022]進一步地，所述內容物的鑒別包括以下步驟：
[0023] A.取本品15mg，加水2ml，加亞硝基鐵氰化鈉試液-5%乙醛溶液1滴，所述亞硝基鐵 氰化鈉試液與5 %乙醛溶液的體積比為2:1，再加碳酸鈉溶液1滴，振搖，溶液顯藍色，漸變為 暗橙色；
[0024] B.取本品適量，加水制成lml中含30yg的溶液，照中國藥典2010年版二部附錄IV A 紫外-可見風光光度法測定，在275nm、312nm與324nm的波長處有最大吸收，在250nm和297nm 的波長處有最小吸收；
[0025] C.取干燥失重項下的供試品測定紅外光吸收圖譜與對照品的圖譜一致，同中國藥 典2010年版二部附錄IV C;
[0026] D.本品的水溶液酰氯化物的鑒別反應，同中國藥典2010年版二部附錄III。
[0027]進一步地，所述對含有的成分進行含量測定方法為照中國藥典2010年版二部附錄 V D高效液相色譜法測定，色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充 劑；以1.0%三乙胺：甲醇：乙腈=1:0.5:0.5為流動相，所述流動相用磷酸調節pH值至7.5; 檢測波長為275nm;理論板數按鹽酸法舒地爾計算不低于2000,鹽酸法舒地爾和相鄰雜質峰 的分離度應符合要求;測定法:取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml 中約含0.15mg的溶液，作為供試品溶液;精密量取20μ1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取 鹽酸法舒地爾對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算。
[0028] 本發明具有以下優點：鹽酸法舒地爾在合成反應過程中容易產生降解雜質，且容 易發生副反應生成二聚體雜質，起始反應物料高哌嗪不易除盡，均會影響產品的純度和安 全性，因此需要在生產過程中對產品雜質進行及時含量測定，以便控制生產過程的產品質 量，本發明方法在現有控制方法的基礎上增加了有關物質含量的測定和高哌嗪含量的測 定，有關物質含量的測定重點測定了二聚體的含量，因此，本發明的質量控制方法進一步提 高了鹽酸法舒地爾的質量和完善了現有行業標準，具有簡單易行，精確度和準確性高的優 點，對提尚廣品質量有重大意義。
【附圖說明】
[0029] 圖1為1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫_1，4二氮雜卓二聚體溶液濃度與主峰面積 的線性回歸曲線圖，檢測波長為220nm;
[0030] 圖2為高哌嗪溶液濃度與主峰面積的線性回歸曲線圖；
[0031]圖3為1，4_二（5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體對照品溶液HPLC色譜 圖譜；
[0032]圖4為鹽酸法舒地爾成品供試品溶液有關物質檢查HPLC色譜圖譜；
[0033] 圖5為高哌嗪對照品溶液氣相色譜圖譜；
[0034] 圖6為鹽酸法舒地爾成品供試品溶液檢查殘留高哌嗪氣相色譜圖譜。
【具體實施方式】
[0035] 下面結合附圖及實施例對本發明做進一步的描述，本發明的保護范圍不局限于以 下所述。
[0036] 實施例1:1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4二氮雜卓二聚體的合成
[0037] 在500ml反應瓶中加入50.0g異喹啉-5-磺酰氯鹽酸鹽和150ml二氯甲烷，混合后降 溫至〇°C，滴加碳酸氫鈉水溶液（16.5g/250mlH20)調節pH至5后保溫攪拌25min，靜置分層、 分出二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取，合并有機層，在〇°C的溫度下用無水硫酸鎂干燥得 干燥液；
[0038] 將18.8g高哌嗪溶解于150ml無水四氫呋喃中，在0°C的條件下滴加至干燥液中，保 溫攪拌1.5h，調節pH至5，攪拌lh，將反應液減壓濃縮至干，加入500ml水，50°C攪拌2h，過濾、 收集濾餅，取500ml燒瓶，加入上述固體，加入250ml甲醇，加熱至沸騰，保溫攪拌lh，熱過濾， 收集濾餅，真空干燥2h，得粗品1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體20g;
[0039] 將20g 1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓（二聚體)粗品用50ml二氯 甲烷溶解，滴加甲醇300ml。滴加完畢后，攪拌lh，過濾，收集濾餅。真空干燥得1，4_二(5-異 喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體)15g。
[0040] 實施例2:1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4二氮雜卓二聚體的合成
[0041 ] 在500ml反應瓶中加入50.0g異喹啉-5-磺酰氯鹽酸鹽和150ml二氯甲烷，混合后降 溫至5°C，滴加碳酸氫鈉水溶液（16.5g/250mlH20)調節pH至6后保溫攪拌35min，靜置分層、 分出二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取，合并有機層，在5°C的溫度下用無水硫酸鎂干燥得 干燥液；
[0042] 將18.8g高哌嗪溶解于150ml無水四氫呋喃中，在5°C的條件下滴加至干燥液中，保 溫攪拌2.5h，調節pH至5，攪拌lh，將反應液減壓濃縮至干，加入500ml水，50°C攪拌2h，過濾、 收集濾餅，取500ml燒瓶，加入上述固體，加入250ml甲醇，加熱至沸騰，保溫攪拌lh，熱過濾， 收集濾餅，真空干燥2h，得粗品1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體20g;
[0043] 將20g 1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓（二聚體)粗品用50ml二氯 甲烷溶解，滴加甲醇300ml。滴加完畢后，攪拌lh，過濾，收集濾餅。真空干燥得1，4_二(5-異 喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體)15g。
[0044] 實施例3:1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4二氮雜卓二聚體的合成
[0045] 在500ml反應瓶中加入50.0g異喹啉-5-磺酰氯鹽酸鹽和150ml二氯甲烷，混合后降 溫至3°C，滴加碳酸氫鈉水溶液（16.5g/250mlH20)調節pH至5.5后保溫攪拌28min，靜置分 層、分出二氯甲烷層，水層用二氯甲烷萃取，合并有機層，在2°C的溫度下用無水硫酸鎂干燥 得干燥液；
[0046] 將18.8g高哌嗪溶解于150ml無水四氫呋喃中，在3°C的條件下滴加至干燥液中，保 溫攪拌2h，調節pH至5，攪拌lh，將反應液減壓濃縮至干，加入500ml水，50 °C攪拌2h，過濾、收 集濾餅，取500ml燒瓶，加入上述固體，加入250ml甲醇，加熱至沸騰，保溫攪拌lh，熱過濾，收 集濾餅，真空干燥2h，得粗品1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體20g;
[0047] 將20g 1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓（二聚體)粗品用50ml二氯 甲烷溶解，滴加甲醇300ml。滴加完畢后，攪拌lh，過濾，收集濾餅。真空干燥得1，4_二(5-異 喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體)15g。
[0048] 實施例4: 一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，包括性狀的觀察、內容物的鑒別、內 容物的檢查和對含有的成分進行含量測定，所述內容物的檢查包括有關物質含量的測定和 高哌嗪含量的測定。
[0049] 所述有關物質含量的測定包括以下步驟：
[0050] S1.取本品，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中含0. lmg的溶液，作 為供試品溶液;精密量取供試品溶液適量，用流動相定量稀釋制成每lml中含lyg的溶液，作 為對照溶液;另取1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4二氮雜卓二聚體，精密稱定，加流動 相溶解并定量稀釋制成每lml中約含Ο. lyg的溶液，作為對照品溶液；
[0051 ] S2.照中國藥典2010年版二部附錄V D高效液相色譜法試驗，用十八烷基硅烷鍵合 硅膠為填充劑，以1. 〇%三乙胺：乙醇：乙腈=1: 〇. 5:0.5為流動相，所述流動相用磷酸調pH 值為7.5，檢測波長為220nm;理論板數按鹽酸法舒地爾計算不低于2000，鹽酸法舒地爾和相 鄰雜峰的分離度應符合要求；
[0052] S3.取對照溶液20μ1，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高 約為滿量程的20%，再精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液各20μ1，分別注入液相 色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的6倍；
[0053] S4.供試品溶液色譜圖中如出現與對照品溶液液相色譜中二聚體峰保留時間一致 的峰，按外標法以峰面積計算，其含量不得大于〇. 1 % ;其他單個雜質峰面積不得大于對照 溶液主峰面積的0.1倍，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積。
[0054] 所述高哌嗪含量的測定方法為：
[0055] (1)取本品，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每lml中約含O.lg的溶 液，作為供試品溶液;另取高哌嗪適量，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每lml 中約含0. lmg的溶液，作為對照品溶液；
[0056] (2)照氣相色譜法中國藥典2010年版一部附錄VI E試驗，火焰離子化檢測器：以 5%二苯基與95%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱為色譜柱;起始溫度為80°C，維持 lmin，以10°C/min的速率升溫至260°C，維持lOmin;進樣口溫度為280°C ;檢測器溫度為280 °C ;分流比為10:1;氫氣流速為30ml/min;空氣流速為300ml/min;載氣為氮氣；
[0057] (3)精密吸取二甲基亞砜、供試品溶液、對照品溶液各0.2μ1注入氣相色譜儀，記錄 色譜圖，按外標法以峰面積計算，高哌嗪含量不得大于〇. 1 %。
[0058] 所述性狀的觀察為本品為白色或類白色結晶型粉末、無臭、味微苦，有引濕性;本 品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中溶解，在氯仿或乙醚中幾乎不溶。
[0059] 所述內容物的鑒別包括以下步驟：
[0060] A.取本品15mg，加水2ml，加亞硝基鐵氰化鈉試液-5%乙醛溶液1滴，所述亞硝基鐵 氰化鈉試液與5 %乙醛溶液的體積比為2:1，再加碳酸鈉溶液1滴，振搖，溶液顯藍色，漸變為 暗橙色；
[0061 ] B.取本品適量，加水制成lml中含30yg的溶液，照中國藥典2010年版二部附錄IV A 紫外-可見風光光度法測定，在275nm、312nm與324nm的波長處有最大吸收，在250nm和297nm 的波長處有最小吸收；
[0062] C.取干燥失重項下的供試品測定紅外光吸收圖譜與對照品的圖譜一致，同中國藥 典2010年版二部附錄IV C;
[0063] D.本品的水溶液酰氯化物的鑒別反應，同中國藥典2010年版二部附錄III。
[0064]所述對含有的成分進行含量測定方法為照中國藥典2010年版二部附錄V D高效液 相色譜法測定，色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以1.0% 三乙胺：甲醇：乙腈= 1:0.5:0.5為流動相，所述流動相用磷酸調節pH值至7.5;檢測波長為 275nm;理論板數按鹽酸法舒地爾計算不低于2000,鹽酸法舒地爾和相鄰雜質峰的分離度應 符合要求；測定法：取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中約含 0.15mg的溶液，作為供試品溶液;精密量取20μ1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取鹽酸法 舒地爾對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算。
[0065] 以下通過實驗說明本發明的有益效果：
[0066] 1.檢測限的測定
[0067] (1)取1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體），用流動相溶解并 稀釋，按照有關物質的檢查方法及儀器條件進行檢測限測定。結果表明在此色譜條件下，當 進樣濃度為0. 〇〇26ug/ml進樣20ul，本品彳目噪比為3:1，故1，4_二(5_異卩奎琳橫醜基)-五氛-1,4-二氮雜卓(二聚體)檢查的檢測限為0.052ng。
[0068] (2)精密稱取高哌嗪適量，用二甲基亞砜(DMS0)溶解，并稀釋制備供試液，按照高 哌嗪的檢查方法及儀器條件進行檢測限測定。結果表明在此色譜條件下，當進樣量0.2ul， 進樣濃度為20ug/ml，本品信噪比為3:1，故高哌嗪檢查的檢測限為4ng。
[0069] 2.進樣精密度試驗
[0070] (1)精密稱取鹽酸法舒地爾樣品l〇mg于50ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，過濾 后待用。在所選色譜條件下，重復進樣6次，進樣量20μ1，記錄色譜圖。計算220nm時1，4-二 (5-異喹啉磺酰基)-五氫-1,4-二氮雜卓(二聚體)的相對標準偏差，結果見表1。
[0074] (2)稱取高哌嗪適量，用二甲基亞砜(DMS0)溶解并稀釋制成含高哌嗪lmg/ml的溶 液作為供試液，按照擬定的氣相色譜條件試驗，精密吸取供試溶液〇 . 2μ1注入氣相色譜儀， 進樣6次，記錄色譜圖，結果主峰面積RSD%為1.3%，測定高哌嗪的精密度良好，結果見表2。 [0075] 表2精密度試驗結果
[0076]
[0077] 3.樣品溶液穩定性試驗
[0078] (1)分別稱取精密稱取1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體）， 鹽酸法舒地爾各適量，分別加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中約含二聚體0. lug、鹽酸 法舒地爾0.2mg+二聚體0. lug的混合供試液。分別在放置Oh、0.5h、1. Oh、1.5h、2. Oh時，取20 μL進樣，測定峰面積和保留時間，以考察被測溶液的穩定性。結果樣品溶液在測定條件下是 基本穩定的，如表3所不。
[0079]表3二聚體溶液穩定性試驗結果
[0082] (2)分別稱取高哌嗪、鹽酸法舒地爾各適量，分別用二甲基亞砜(DMS0)溶解并稀釋 制成含高哌嗪lmg/ml供試液、鹽酸法舒地爾50mg/ml+高哌嗪0.5mg/ml的混合供試液。按照 擬定的氣相色譜條件試驗，精密吸取各供試溶液各〇.2μ1注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，測 定峰面積和保留時間，以考察被測溶液的穩定性。結果高哌嗪樣品溶液在測定條件下是基 本穩定的，如表4所示。
[0083] 表4高哌嗪溶液穩定性試驗結果
[0084]
[0085] 4.線性及其范圍
[0086] (1)1，4_二(5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體)線性范圍測定
[0087]精密稱取1，4_二（5-異喹啉磺酰基)_五氫-1，4-二氮雜卓（二聚體)0.02g，以流動 相為溶劑，采用逐步稀釋法，分別制得〇 · 2mg/ml、0 · 02mg/ml、0 · 002mg/ml、0 · 0002mg/ml、 0.00002mg/ml的標準溶液。在所選擇的色譜條件下，進樣20μ1標準溶液，并記錄峰面積，結 果見表5,圖1。
[0088] 表5二聚體線性范圍的測定
[0091]由圖1可知:將對照品在220nm的峰面積(Υ)對相應的濃度(X)進行線性回歸處理， 得回歸方程y = 135425805.2431x+5932.0220，相關系數r2 = 1。可見，在0.0204~204μg/ml 范圍內1，4-二(5-異喹啉磺酰基)-五氫-1，4-二氮雜卓(二聚體)濃度與峰面積呈良好的線 性關系。
[0092] (2)精密稱取高哌嗪適量，用二甲基亞砜(DMS0)溶解，并采用逐步稀釋法制備不同 濃度供試液，按照擬定的氣相色譜條件試驗，精密吸取各供試溶液各0.2μ1注入氣相色譜 儀，記錄色譜圖，將主峰面積（Υ)對相應的濃度（X)進行線性回歸處理，得回歸方程y = 1901257.95x-238823.86，相關系數r2 = 1。可見，在0.20384~5.096mg/ml范圍內高哌嗪濃 度與峰面積呈良好的線性關系，結果見表6及圖2。
[0093] 表6高哌嗪線性范圍的測定
[0095] 4.準確度（回收率)試驗
[0096] (1)分別稱取鹽酸法舒地爾l.Og，共9份，分別置10ml量瓶中，再分別精密加入二聚 體使每瓶供試液中二聚體重量約為0 · 8ug、0 · 8ug、0 · 8ug、lug、lug、lug、1 · 2ug、1 · 2ug、 1.2ug，用流動相溶解完全搖勻作為供試溶液。另精密稱取二聚體對照品適量，用流動相溶 解并稀釋制成含二聚體〇. lug/ml的溶液作為對照品溶液，按照擬定的液相色譜條件試驗， 精密吸取各供試溶液各20μ1注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計算二聚體的回收率。結果見表 7,可見擬定的液相色譜方法回收率良好，測定結果準確、可信。
[0097]表7二聚體回收率試驗結果
[0100] (2)分別稱取鹽酸法舒地爾l.Og，共9份，分別置10ml量瓶中，再分別精密加入高哌 嗪使每瓶供試液中高哌嗪重量約為 811^、811^、811^、1〇11^、1〇11^、1〇11^、1211^、1211^、1211^，用二 甲基亞砜（DMSO)溶解完全作為供試溶液。另精密稱取高哌嗪對照品適量，用二甲基亞砜 (DMS0)溶解并稀釋制成含高哌嗪lmg/ml的溶液作為對照品溶液，按照擬定的氣相色譜條件 試驗，精密吸取各供試溶液各〇.2μ1注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。計算高哌嗪的回收率。結 果見表8,可見氣相色譜方法回收率良好，測定結果準確、可信。
[0101] 表8高哌嗪回收率試驗結果
[0102]
[0103] 6.方法重現性實驗
[0104] (1)有關物質檢測方法:照高效液相色譜法(附錄V D)測定
[0105] 取本品，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中約含0. lmg的溶液，作為 供試品溶液;精密量取適量，用流動相定量稀釋制成每lml中約含lug的溶液，作為對照溶 液。另取二聚體(1，4-二(5-異喹啉橫酰基)-五氫-1，4-二氣雜卓)對照品，精密稱定，加流動 相溶解并定量稀釋制成每lml中約含0. lug的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（中 國藥典2010年版二部附錄VD)試驗。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以1.0 %三乙胺： 甲醇：乙腈=1:0.5:0.5(用磷酸調節pH值7.5)為流動相，檢測波長為220nm。理論板數按鹽 酸法舒地爾計算不低于2000,鹽酸法舒地爾和相鄰雜質峰的分離度應符合要求。取對照溶 液20μ1，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%。再 精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液各20μ1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至 主成分峰保留時間的6倍。供試品溶液色譜圖中如出現與對照品溶液色譜圖中二聚體峰保 留時間一致的峰，按外標法以峰面積計算，其含量不得大于0.1%。其他各雜質峰面積的和 不得大于對照溶液主峰面積（1.0 %)。單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.1倍 (0.1%),
[0106] 取同一批樣品，按以上有關物質檢查方法進行6次試驗，考察有關物質檢驗方法重 現性，結果該方法重現性良好，見表9、圖3和圖4。
[0107] 表9鹽酸法舒地爾有關物質檢驗方法重現性試驗結果
[0108]
[0109] (2)高哌嗪含量測定方法
[0110] 取本品，精密稱定，加二甲基亞砜(DMS0)溶解并定量稀釋制成每lml中約含O.lg的 溶液，作為供試品溶液；另取高哌嗪適量，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每 lml中約含0. lmg的溶液，作為對照品溶液。照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VIE) 試驗。火焰離子化檢測器(FID);以5%二苯基/95%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱為 色譜柱;起始溫度為80°C，維持lmin，以10°C/min的速率升溫至260°C，維持lOmin;進樣口溫 度為280°C ;檢測器溫度為280°C ;分流比為10:1;氫氣流速為30ml/min;空氣流速為300ml/ min;載氣為氮氣。精密吸取二甲基亞砜、供試品溶液、對照溶液各0.2μ1注入氣相色譜儀，記 錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖中如顯高哌嗪的雜質峰，按外標法以峰面積計算。其含量不 得大于0.1 %。
[0111] 由于樣品中未檢出高哌嗪殘留，為了考察方法重現性，故取同一批樣品，定量加入 約0.1 %的高哌嗪，按以上高哌嗪含量測定方法進行6次試驗，考察含量檢驗方法重現性，結 果該方法重現性良好，見表1 〇、圖5和圖6。
[0112] 表10鹽酸法舒地爾中殘留高哌嗪含量測定方法重現性試驗結果
[0113]
[0114] 7.樣品有關物質測定
[0115] 按照擬定的本品有關物質測定方法，分別測定3批樣品有關物質。三批鹽酸法舒地 爾樣品（批號1220301、1220302、1220303)有關物質測定結果均符合擬定的質量標準規定， 見表11。
[0116] 表11 3批鹽酸法舒地爾及注射液有關物質檢測結果
[0117]
[0118] 8.樣品中高哌嗪含量測定
[0119] 按照擬定的本品高哌嗪測定方法，分別測定3批鹽酸法舒地爾樣品（批號1220301、 1220302、1220303)殘留高哌嗪測定結果均符合擬定的質量標準規定，見表12。
[0120]表12 3批鹽酸法舒地爾殘留高哌嗪檢測結果
【主權項】
1. 一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，包括性狀的觀察、內容物的鑒別、內容物的檢查 和對含有的成分進行含量測定，其特征在于，所述內容物的檢查包括有關物質含量的測定 和高哌嗪含量的測定。2. 如權利要求1所述的一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，其特征在于，所述有關物質 含量的測定包括以下步驟：51. 取本品，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中含0. lmg的溶液，作為供 試品溶液;精密量取供試品溶液適量，用流動相定量稀釋制成每lml中含lyg的溶液，作為對 照溶液;另取1，4_二(5-異喹啉磺酰基)-五氫_1，4二氮雜卓二聚體，精密稱定，加流動相溶 解并定量稀釋制成每lml中約含0. lyg的溶液，作為對照品溶液；52. 照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填充劑，以1. 〇%三乙胺：乙醇：乙腈=1: 〇 . 5:0.5為流動相，所述流動相用磷酸調pH值為 7.5，檢測波長為220nm;理論板數按鹽酸法舒地爾計算不低于2000，鹽酸法舒地爾和相鄰雜 峰的分離度應符合要求；53. 取對照溶液20μ1，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為 滿量程的20%，再精密量取供試品溶液、對照溶液與對照品溶液各20μ1，分別注入液相色譜 儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的6倍；54. 供試品溶液色譜圖中如出現與對照品溶液液相色譜中二聚體峰保留時間一致的 峰，按外標法以峰面積計算，其含量不得大于〇. 1%;其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液 主峰面積的0.1倍，各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積。3. 如權利要求2所述的一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，其特征在于，所述1，4-二 (5-異喹啉磺酰基)-五氫-1,4二氮雜卓二聚體的合成方法為:異喹啉-5-磺酰氯鹽酸鹽與二 氯甲烷混合后降溫至0~5°C，調節pH至5~6后保溫攪拌25~35min，靜置分層、水層用二氯 甲烷萃取并干燥得干燥液;將高哌嗪溶解于無水四氫呋喃中，在0~5°C的條件下滴加至干 燥液中，保溫攪拌1.5~2.5h，調節pH至5,過濾、干燥后得粗品1，4_二(5-異喹啉磺酰基)-五 氫-1,4二氮雜卓二聚體。4. 如權利要求1所述的一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，其特征在于，所述高哌嗪含 量的測定方法為： (1) 取本品，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每lml中約含0. lg的溶液，作 為供試品溶液；另取高哌嗪適量，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并定量稀釋制成每lml中約 含0. lmg的溶液，作為對照品溶液； (2) 照氣相色譜法中國藥典2010年版一部附錄坑：E試驗，火焰離子化檢測器：以5%二苯 基和95%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管柱為色譜柱;起始溫度為80°C，維持lmin，以10 °C/min的速率升溫至260°C，維持lOmin;進樣口溫度為280°C ;檢測器溫度為280°C ;分流比 為10:1;氫氣流速為30ml/min;空氣流速為300ml/min;載氣為氮氣； (3) 精密吸取二甲基亞砜、供試品溶液、對照品溶液各0.2μ1注入氣相色譜儀，記錄色譜 圖，按外標法以峰面積計算，高哌嗪含量不得大于〇. 1%。5. 如權利要求1所述的一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，其特征在于，所述性狀的觀 察為本品為白色或類白色結晶型粉末、無臭、味微苦，有引濕性;本品在水中易溶，在甲醇中 溶解，在乙醇中溶解，在氯仿或乙醚中幾乎不溶。6. 如權利要求1所述的一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，其特征在于，所述內容物的 鑒別包括以下步驟： A. 取本品15mg，加水2ml，加亞硝基鐵氰化鈉試液-5%乙醛溶液1滴，所述亞硝基鐵氰化 鈉試液與5%乙醛溶液的體積比為2:1，再加碳酸鈉溶液1滴，振搖，溶液顯藍色，漸變為暗橙 色； B. 取本品適量，加水制成lml中含30yg的溶液，照中國藥典2010年版二部附錄設：A紫 外-可見風光光度法測定，在275nm、312nm與324nm的波長處有最大吸收，在250nm和297nm的 波長處有最小吸收； C. 取干燥失重項下的供試品測定紅外光吸收圖譜與對照品的圖譜一致，同中國藥典 2010年版二部附錄IV C; D. 本品的水溶液酰氯化物的鑒別反應，同中國藥典2010年版二部附錄m。7. 如權利要求1所述的一種鹽酸法舒地爾的質量控制方法，其特征在于，所述對含有的 成分進行含量測定方法為照中國藥典2010年版二部附錄V D高效液相色譜法測定，色譜條 件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以1.0%三乙胺：甲醇：乙腈=1: 0.5:0.5為流動相，所述流動相用磷酸調節pH值至7.5;檢測波長為275nm;理論板數按鹽酸 法舒地爾計算不低于2000，鹽酸法舒地爾和相鄰雜質峰的分離度應符合要求;測定法:取本 品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每lml中約含0.15mg的溶液，作為供試品 溶液;精密量取20μ1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取鹽酸法舒地爾對照品，同法測定， 按外標法以峰面積計算。
【文檔編號】G01N21/3563GK105866263SQ201610173938
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月24日
【發明人】黃筱萍, 陳開軍, 姚欣, 劉建廷, 楊群慧, 楊波, 蒲洪橙
【申請人】四川升和藥業股份有限公司