粒細胞巨噬細胞刺激因子及其制劑和應用
【專利摘要】本發明屬于蛋白質藥物領域，涉及粒細胞巨噬細胞刺激因子，其適合用于預防宮腔粘連術后的復發并能提高妊娠率。另外，本發明還涉及GM?CSF的藥物制劑及其應用等。
【專利說明】
粒細胞巨噬細胞刺激因子及其制劑和應用
技術領域
[0001]本發明屬于蛋白質藥物領域，具體而言，本發明涉及粒細胞巨噬細胞刺激因子，尤其適合用于預防宮腔粘連術后的復發并能提高妊娠率。另外，本發明還涉及GM-CSF的藥物制劑及其應用等。
【背景技術】
[0002]粒細胞巨.細胞刺激因子(granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，簡稱為GM-CSF)由活化T細胞、單核/巨噬細胞分泌，能夠刺激骨髓前體細胞增殖分化為粒細胞和單核/巨噬細胞，激活成熟的粒細胞和單核/巨噬細胞。
[0003]人GM-CSF可以通過成熟的基因重組技術獲得，如可參見中國專利申請第98126746.7^01105972.9^03137202.3 和 200810137280.5 號等。除了 刺激粒細胞、單核 / 巨噬細胞成熟，促進成熟細胞向外周血釋放等作用外，GM-CSF也被發現能用于治療或預防乙型肝炎，如可參見中國專利申請第200610167110.2號等。
[0004]重組人GM-CSF (簡稱為rhGM-CSF)主要以注射劑(包括粉針劑)形式提供，也有外用液體制劑和噴霧劑等提供，如可參見中國專利申請第200510012840.0和200510103201.5號等。
[0005]在這些較早期的研究之后，GM-CSF的研究歸于平靜，沒有新的藥用用途被發現的預期，也缺乏積極性投入新的制劑的研究，更無法預期新的制劑與新的藥用用途的配合。
[0006]然而，本發明人堅持長期深耕于GM-CSF的研究，沒有受近十年來GM-CSF的研究趨勢的束縛，幸運地發現了GM-CSF在預防宮腔粘連術后的復發和提高妊娠率等方面可能有藥用價值的跡象，深入研究，設計出特別適合預防宮腔粘連術后的復發和提高妊娠率的藥物制劑。

【發明內容】

[0007]本發明的目的在于提供粒細胞巨噬細胞刺激因子，其適用于預防宮腔粘連術后的復發并能提高妊娠率。本發明的目的還在于提供包含上述GM-CSF的藥物組合物及其制備方法。另外，本發明的目的還在于提供上述GM-CSF的藥物應用。
[0008]具體而言，在第一方面，本發明提供了粒細胞巨噬細胞刺激因子，其適用于預防宮腔粘連術后的復發并能提高妊娠率。優選地，本發明的第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子是重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子。盡管rhGM-CSF在生物大分子結構上是已知的，但是本發明人令人意外地發現了其(尤其是其優化的藥物制劑)預防宮腔粘連術后的復發和提高妊娠率的新用途。
[0009]在第二方面，本發明提供了藥物組合物，其包含本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子和藥學上可接受的載體。在本文中，“藥學上可接受的載體”指無毒固態、半固態或液態填充劑、稀釋劑、緩沖劑、保護劑、防腐劑、包裹材料或其他制劑輔料。根據本領域的公知技術，可以根據治療目的、給藥途徑的需要將藥物組合物制成各種劑型，優選該組合物為單位劑量形式，如固體制劑(如片劑、膜劑、丸劑、膠囊、粉劑、粉針劑、或顆粒劑等)、液體制劑(如糖漿劑和乳液劑、消毒的注射用溶液或懸浮液、氣霧劑或液體噴劑、滴劑、或針劑等)、以及自動注射裝置或栓劑。本發明的藥物組合物優選是子宮腔灌注劑，在本文中，可以被簡稱為宮腔灌注劑或灌注劑，其流動性介于注射用溶液和固體制劑之間，是半固體制劑，適合用于向子宮腔灌注。
[0010]優選在本發明第二方面的藥物組合物中，藥學上可接受的載體包括羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和/或白蛋白，更優選，藥學上可接受的載體包括羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白。
[0011]進一步地，優選在本發明第二方面的藥物組合物中，羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比為1.5?2.5:25?40:0.3?0.5:0.45?0.75:0.12?0.18:0.6?I，優選為1.8?2.2:30?40: 0.35?0.45:0.55?0.65:0.13?0.16:0.7?0.9。在本發明的【具體實施方式】中，羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比為2:35:0.4:0.6:0.15:0.8。
[0012]另外，優選在本發明第二方面的藥物組合物中，藥學上可接受的載體還可以包括水。優選羧甲基纖維素鈉和水的重量比為1.5?2.5:45?75，優選為1.8?2.2:55?65，例如為約2:61。在本發明的【具體實施方式】中，配方中的水量為100 %的余量。
[0013]在第三方面，本發明提供了制備本發明第二方面的藥物組合物的方法，其包括:
[0014](I)混合羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯和尼泊金甲酯，加水溶脹；
[0015](2)任選補足水量;和，
[0016](3)滅菌后，加入白蛋白和本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子，混合均勻。
[0017]本發明第三方面的方法制備的藥物組合物適合向子宮腔灌注。
[0018]優選本發明第三方面的方法在步驟(3)后還包括分裝和/或封裝等過程。
[0019]在第四方面，本發明提供了本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子在制備用于預防宮腔粘連術后的復發的藥物中的應用。宮腔粘連(IUA)又稱Asherman綜合征，是指各種原因導致的子宮內膜基底層的嚴重損傷，引起子宮肌壁的相互粘連。當前，宮腔粘連的主要治療手段是通過宮腔鏡手術分離粘連，然后將球囊或避孕環置入宮腔。在本文中，這些手術過程被統稱為宮腔粘連術。該治療方案的最大問題是高復發率，一般術后兩周或I月復查，復發率約為40?50%。本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子能夠預防宮腔粘連術后的復發。
[0020]在第五方面，本發明提供了本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子在制備能提高妊娠率的藥物中的應用。現代社會，尤其是我國，由于計劃生育的實施、婦女生育年齡的延遲以及人工流產等因素，導致不孕不育率呈逐漸走高的趨勢，其中有相當比例即使采用輔助生殖技術(如，試管嬰兒)仍然導致受孕失敗。本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子能夠提高妊娠率，尤其是試管嬰兒的妊娠率。
[0021]在本發明第四或第五方面的應用中，藥物可以以合適的藥物制劑形式來提供本發明第一方面的粒細胞巨噬細胞刺激因子。優選地，藥物是本發明第二方面的藥物組合物。
[0022]本發明的有益效果在于，本發明的粒細胞巨噬細胞刺激因子，特別是以本發明的宮腔灌注劑的形式提供，能有效預防宮腔粘連術后的復發并能提高妊娠率。
[0023]為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發明進行詳細地描述。需要特別指出的是，具體實例僅是為了說明，并不構成對本發明范圍的限制。顯然本領域的普通技術人員可以根據本文說明，在本發明的范圍內對本發明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發明的范圍內。另外，本發明引用了公開文獻，這些文獻也是為了更清楚地描述本發明，它們的全文內容均納入本發明進行參考，就好像它們的全文已經在本發明說明書中重復敘述過一樣。
【具體實施方式】
[0024]以下本文將通過具體的實施例來描述發明。如未特別指明之處，可根據本領域技術人員所熟悉的《藥物制劑學》等手冊和相關藥物法規、規定(尤其是CFDA的相關臨床試驗指引)以及本文所引用的參考文獻中所列的方法來實施。另外，實施例中所使用的材料除有特別說明外，均可通過商業途徑從市場上購買。
[0025]實施例1.rhGM-CSF宮腔灌注劑的制備
[0026]配方量100%中，2%羧甲基纖維素鈉、35%甘油、0.4%吐溫-80,0.6%對羥基苯甲酸甲酯和0.15%尼泊金甲酯溶脹過夜，如有蒸發，次日補足水量，118°C、滅菌30分鐘，溫度在40 °C時加入0.8 %白蛋白及rhGM-CSF (每克輔料基質中含有10yg rhGM-CSF)，攪拌均勻后放涼、封裝，即成。
[0027]實施例2.rhGM-CSF預防宮腔粘連術后復發的臨床試驗
[0028]知情同意的60例宮腔粘連患者隨機分成兩組，其中試驗組(30例)的患者在宮腔鏡下實施粘連宮腔組織銳性分離，術后宮腔灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g，然后放置宮腔球囊;過48小時后取出宮腔球囊，然后再宮腔灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g;
[0029]對照組(30例)與試驗組的宮腔鏡下手術方法一致，術后同樣放置球囊進行擴張，只是并未進行宮腔灌注治療。
[0030]患者一月后復診，結果顯示，試驗組無一例宮腔粘連復發，即復發率為0%;而對照組有13例宮腔粘連復發，即復發率為43%。這表明，本發明的rhGM-CSF灌注制劑能夠有效預防宮腔粘連術后的復發。另外，使用中沒有需要停止試驗的不良反應和副作用事件被報告。[0031 ] 實施例3.rhGM-CSF對提高妊娠率的臨床試驗
[0032]知情同意的78例先期試管嬰兒(IVF)失敗的患者隨機分成三組，其中:
[0033]試驗組1(28例患者)，口服戊酸雌二醇Smg/日，共10日進行內膜準備;檢測卵泡達至IJ12mm后進行宮腔處理，即輕微搔刮子宮內膜+灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g。
[0034]試驗組2(25例患者)，口服戊酸雌二醇8mg/日，共10日進行內膜準備;檢測卵泡達至IJ12mm后進行宮腔處理，即灌注實施例1制備的rhGM-CSF灌注制劑5g，但不進行內膜搔刮。
[0035]對照組(25例患者)，口服戊酸雌二醇Smg/日，共10日進行內膜準備;未進行任何宮腔處理。
[0036]然后，觀察患者行試管嬰兒的妊娠成功率，結果顯示，試驗組I共有14例患者受孕，妊娠率50%;試驗組2共有9例患者受孕，為36%;對照組共有6例患者受孕，妊娠率僅為24%。這表明，本發明的rhGM-CSF灌注制劑能夠提高妊娠率，尤其是有效促進試管嬰兒的妊娠成功。另外，使用中沒有需要停止試驗的不良反應和副作用事件被報告。
【主權項】
1.粒細胞巨噬細胞刺激因子，其適用于預防宮腔粘連術后的復發并能提高妊娠率。2.權利要求1所述的粒細胞巨噬細胞刺激因子，其是重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子。3.藥物組合物，其包含權利要求1或2所述的粒細胞巨噬細胞刺激因子和藥學上可接受的載體。4.權利要求3所述的藥物組合物，其為宮腔灌注劑。5.權利要求3所述的藥物組合物，其中，藥學上可接受的載體包括羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和/或白蛋白。6.權利要求5所述的藥物組合物，其中，羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯、尼泊金甲酯和白蛋白的重量比為1.5?2.5:25?40:0.3?0.5:0.45?0.75:0.12?0.18:0.6?I，優選為1.8?2.2:30?40:0.35?0.45:0.55?0.65:0.13?0.16:0.7?0.9，例如為 2:35:0.4:0.6:0.15:0.8。7.權利要求5或6所述的藥物組合物的制備方法，其包括: (1)混合羧甲基纖維素鈉、甘油、吐溫-80、對羥基苯甲酸甲酯和尼泊金甲酯，加水溶脹； (2)任選補足水量;和， (3)滅菌后加入白蛋白和權利要求1或2所述的粒細胞巨噬細胞刺激因子，混合均勻。8.權利要求1或2所述的粒細胞巨噬細胞刺激因子在制備用于預防宮腔粘連術后的復發和/或能提高妊娠率的藥物中的應用。9.權利要求8所述的應用，其中妊娠率是試管嬰兒的妊娠率。10.權利要求8所述的應用，其中藥物是權利要求3至6之一所述的藥物組合物。
【文檔編號】A61P15/08GK105859869SQ201610172455
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月24日
【發明人】金磊, 王思勤, 岳本亮, 劉云杉
【申請人】長春金賽藥業有限責任公司