專利名稱：：5亞型Na⁺/H⁺交換泵(NHE5)抑制劑在改善記憶保持(memoryretention)中的用途的制作方法5亞型Na+ZH+交換泵(NHE5)抑制劑在改善記憶保持(memoryretention)中的用途本發明涉及5亞型Na+/H+交換泵(NHE5)抑制劑在生產用于治療神經變性病癥、記憶缺陷和癡呆性病癥(dementingdisorders)以及用于改善記憶的藥物中的用途。術語"癡呆，，指智力能力下降。應理解特別指記憶和思維能力下降。老年人中的癡呆或老年性癡呆指老年人的進行性、獲得性智力下降，其可歸因于中樞神經系統的結構和/或代謝異常。在65歲以上的人群中有約7%的人患有不同嚴重程度的癡呆。癡呆的原因是不同的阿爾茨海默病是最常見的形式，占至多50%，隨后是血管性癡呆，例如多發性腦梗塞癡呆，和這兩種形式的組合。非常罕見的原因是Tau突變、朊病毒病、聚谷氨酰胺擴展性障礙(polyglutamineexpansiondisorder)如亨廷頓舞蹈病和脊號小腦性共濟失調以及帕金森綜合征。另外還已知的是在感染(例如HIV感染)、腦外傷、腦腫瘤或中毒(例如酒精中毒)后和/或與之相關的繼發性癡呆。記憶鞏固(memoryconsolidation)的概念是基于新記憶隨時間過程穩定并由此變得對新信息的干擾和腦功能障礙的敏感性降低的能力。借助流行的長時程增強(LTP)細胞模型，能夠研究記憶形成和鞏固的基本方面和機制(iV綴0sdew組9z463-474.2003j5mi'"及m5m/"及es及ev.45:30-37,2004;尸/i"iW及ev.84:87-136，2004)。儲存和加工信息的最重要腦區域之一為海馬結構。長久以來已經知曉在海馬中的某些模式的電刺激(促強直)導致突觸效能改變(Bliss和Lomo，//V^wV/.232:331-356，1973)，其目前稱為"長時程增強"或"LTP"并隨后已經在各種哺乳動物的腦的其它區域在體外和體內均得以證實。LTP目前被視為學習和記憶的神經機制的重要組成。還已知弱的LTP與短期記憶相關，而強的LTP與長期記憶相關(/7Vew^"20:7631-7639，2000;1VvcA^/^cw/Sc/C/SA97:8116-8121，2000)。海馬在情景、空間和陳述性學習和記憶過程中起重要作用，這對于空間定位和回憶空間結構而言是必要的，并且在控制自律機能和營養機能中起重要作用(McEwen1999，"應激和海馬可塑性"0^i^s/;/flWZc剛，j/t聽a/及eW，o/iVewas"'ewce22:105-122)。在人癡呆性病癥中，通常有其中牽涉海馬的學習和記憶過程受損。對其它哺乳動物進行的動物實驗已經顯示了類似的結果。因此，能夠證實，老齡小鼠與青年小鼠相比在空間記憶和LTP中存在缺失，并且改善LTP的物質同時減輕了記憶缺失(Bach等人，1999，"年齡相關性空間記憶缺失在體外與海馬長時程增強晚期的缺陷相關，并且被增強cAMP信號傳導途徑的藥物減弱"04ge-"/fl紐dJe/"fe/"c^MPs/gwa/Z/ig/^/iM^v).P/wA^,/爿oi""'f/Sj.27;96:5280-5;Fujii&Sumikawa2001，"急性和長期接觸尼古丁可逆轉大鼠海馬長時程增強誘導中的年齡相關性下降，，(Jc"feflw</c/ffow/cd/os"re"vm^flge-"/",erf/"幼e/她wft'a,/ort/m幼emf/j,;p/^ai附/m"，5ra/w及"894:347-53，Clayton等人，2002,"海馬NR2B缺陷能模擬Fischer344大鼠的長時程增強和空間學習的年齡相關性變化"(j3628-37)。能夠在轉基因動物上和通過施用p-淀粉樣肽在體內和體外證實這些肽不利地影響LTP或者干擾其維持(Ye&Qiao1999,"在大鼠海馬中通過卩-淀粉樣肽片段31-35所產生的對長時程增強的抑制性活性是N-甲基-D-天門冬氨酸受體依賴性的其通過(-)石杉堿甲抵消"Oywp/;rMwVe,Tim《/r,》"cfl附/7"51〃-廳勿/-1)-<^^她"c印^-/"fife/;ewflfewA.約o加"f^/i"/^rz/"e爿)，iVe"myc/JLe汰275:187-90;Rowan等人,2003，"早期阿爾茨海默病動物模型中的突觸可塑性"OS^"印"c//flWc/印/"ttm'附ff/wo^/s0/eflr(j;爿/z/re/附C51f/i'5^cwe),尸AZ/os7Vyww5WcZ^wrf忍5/o/5"cA358:821-8;Gureviciene等人，2004，"APP+PS1轉基因小鼠中LTP的正常i秀導但加速的衰退，，(7Vof附tf//"^W朋6m^tfcce/eni^flfeoi^o/￡77*,Vi爿PP+尸57fr朋sgew/c附/ce)，NewroWo/D/s15:188-95)。有可能用唂利普蘭和膽堿酯酶抑制劑如也用于人阿爾茨海默病治療中的那些來校正LTP受損和記憶功能受損(Gong等人，2004，"在阿爾茨海默病小鼠模型中用咯利普蘭治療后突觸功負fe和i人知功肯fe的7^C久'i"生改善"(/^rsiytew/iVw/jroveiwew/^""/^ccogw/"ve/"wCV/isi"朋/4/z/r".艦,附o附c附0&/a/ter/—附fm^附c"0,/C""/"艦114:1624-34.)。由此預計，改善LTP的物質將對與認知缺損和癡呆相關的病癥也具有有益作用。已經令人意外地發現，細胞NHE5抑制劑可提高LTP。因此，預期該抑制劑在癡呆性病癥如阿爾茨海默形式和阿爾茨海默樣形式的癡呆中有改善記憶的作用。使用NHE5抑制劑所具有的優點超過迄今為止用于這些病癥的活性成分如乙酰膽堿酯酶抑制劑，即，預計全身作用輕微或不存在，因為NHE5僅在神經元中表達且因此是腦特異性的(Jw./.CW/.腳嵐281:C1146-C1157，2001)。因此，NHE5抑制劑適于治療神經變性病癥、記憶缺陷和癡呆性病癥，例如在老年人中的癡呆、阿爾茨海默病、血管性癡呆如多發性腦梗塞癡呆、阿爾茨海默病與腦血管紊亂的組合、Tau突變、朊病毒病、聚谷氨酰胺擴展性障礙如亨廷頓舞蹈病和脊髓小腦性共濟失調以及帕金森綜合征；以及適于改善記憶。NHE5抑制劑還適于治療在感染如HIV感染、腦外傷、腦腫瘤或中毒如酒精中毒后和/或與之相關的繼發性癡呆。特別適于治療神經變性病癥、記憶缺陷和癡呆性病癥和適于改善記憶的是具有式I結構的如下NHE5抑制劑及其可藥用鹽和三氟乙酸鹽其中各含義為Rl、R2、R3和R4彼此獨立地為氫、F、Cl、Br、I、CN、N02或Rll-(CmH^)-An-;m為0、1、2、3或4;n為0或1;Rll為氫、曱基或CpF2pw;A為氧、NH、N(CH3)或S(O)q;p為1、2或3;q為0、1或2;R5為氫，具有l、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；R6為氫；OH;F;CF3;具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；R7和R8彼此獨立地為氬、F、Cl、Br、CN、C02R12、NR13R14或Rl6-(CmmH2mm)-Enn_;R12為氫；具有l、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；R13和R14彼此獨立地為氫；具有l、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；或者R13和R14與它們所鍵合的氮原子一起形成4-、5-、6-或7-元環，其中一個CH2基團可以被NR15、S或氧替換；R15為氫；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；mm為0、1、2、3或4;im為0或ljR16為氫、甲基或CppF2pp+1;E為氧或S(O)qq;pp為1、2或3'，qq為0、1或2。在一項實施方案中，優選如下定義的式I化合物及其可藥用鹽和三氟乙酸鹽，其中各含義為Rl、R2、R3和R4彼此獨立地為氫、F、Cl、Br、CN或Rll-(CmH2m)-An-;m為0或1;n為0或1;Rll為氫、甲基或CpF2p^;A為氧、NCBb或S(O)q;p為1或2;q為0、1或2;R5為氫、曱基、乙基或環丙基；R6為氫或甲基；R7和R8彼此獨立地為氬、F、Cl、CN、C02R12、NR13R14或R16匪(CmmH2mm)-E加-;R12為氫、甲基或乙基；R13和R14彼此獨立地為氫；具有l、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；或者R13和R14與它們所鍵合的氮原子一起形成5-、6-或7-元環，其中一個CH2基團可以被NR15、S或氧替換；R15為氫；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；mm為0、1或2;nn為0或1;R16為氫、甲基或CppF2pp+1;E為氧或S(O)qq;pp為1或2;qq為0、1或2。特別優選如下定義的式I化合物及其可藥用鹽和三氟乙酸鹽，其中R1和R3為氫；R2和R4彼此獨立地為氫、F、Cl、NH2、NHCH3或N(CH3)2;R5為氫、甲基、乙基或環丙基；R6為氫或甲基；R7和R8為氫。具體優選N-二氨基亞甲基-4-(6，8-二氯-2-甲基-1，2，3,4-四氫異喹啉-4-基)苯磺酰胺及其可藥用鹽和三氟乙酸鹽。在一項實施方案中，優選如下定義的式I化合物其中基團R1、R2、R3和R4被各自獨立地描述為氫、F、Cl、Br、CN或Rll-(CmH2m)-An-，其中m和n彼此獨立地為0或1，Rll為氫、甲基或CpF2pw，且A為氧、NCH3或S(0)q，其中p為l或2且q為0、1或2;特別優選如下定義的式I化合物其中R1和R3為氫，且R2和R4彼此獨立地為氬、F、Cl、NH2、NHCH3或N(CBb)2，例如Cl。在一項實施方案中，優選如下定義的式I化合物其中R2和R4不為氬。在另一項實施方案中，優選如下定義的式I化合物其中R5被描述為氫、曱基、乙基或環丙基，例如曱基。在另一項實施方案中，優選如下定義的式I化合物其中R6被描迷為氫或甲基。在另一項實施方案中，優選如下定義的式I化合物其中基團R7和R8凈皮各自獨立地描述為氳、F、Cl、CN、C02R12、NR13R14或R16-(CmmH2mm)-Enn-，其中R12為氫、曱基或乙基，R13和R14彼此獨立地為氫，具有l、2、3或4個碳原子的烷基，或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；或者R13和R14與它們所鍵合的氮原子一起形成5-、6-或7-元環，其中一個CH2基團可以被NR15、S或氧替換，且其中R15為氫，具有l、2、3或4個碳原子的烷基，或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；且其中mm為0、1或2,nn為0或1，且R16為氫、甲基或CppF2pp+1，其中E為氧或S(O)qq，其中pp為1或2且qq為0、1或2;特別優選如下定義的式I化合物其中R7和R8為氫。如果式I化合物包含一個或多個不對稱中心，那么它們可以彼此獨立地具有S和R構型。這些化合物可以是旋光異構體、非對映異構體、外消旋物或其所有比例的混合物的形式。本發明嚢括式I化合物的所有可能的互變異構形式。本發明還嚢括式I化合物的衍生物，例如式I化合物的溶劑化物(如水合物和醇加合物)、酯類、前藥和其它生理學上可接受的衍生物，以及式I化合物的活性代謝物。本發明同樣嚢括式I化合物的所有晶體變體(crystalmodifications)。烷基可以為直鏈或支鏈的。當它們帶有取代基或作為其它基團的取代基(例如在氟烷基或烷氧基中)出現時，這種情況也適用。烷基的實例有曱基、乙基、正丙基、異丙基(-l-曱基乙基)、正丁基、異丁基(=2-甲基丙基)、仲丁基(=1-曱基丙基)、叔丁基(-l，l-二曱基乙基)、正戊基、異戊基、叔戊基、新戊基和己基。優選的烷基有曱基、乙基、正丙基、異丙基和正丁基。烷基中有一個或多個、例如l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個氫原子可以被氟原子替換。這類氟烷基的實例有三氟甲基、2，2，2畫三氟乙基、五氟乙基、七氟異丙基。取代的烷基可以在任意位置上被取代。亞烷基如CmH2m、C匪Hb,或CrEbr可以為直鏈或支鏈的。當它們帶有取代基或作為其它基團的取代基(例如在氟亞烷基中，例如在CpF2p和CppF2pp中)出現時，這種情況也適用。亞烷基的實例有亞甲基、亞乙基、1-甲基亞甲基、亞丙基、1-甲基亞乙基、亞丁基、1-丙基亞曱基、l-乙基-l-曱基亞甲基、1，2-二甲基亞乙基、l，l-二曱基亞甲基、1-乙基亞乙基、1-甲基亞丙基、2-甲基亞丙基、亞戊基、1-丁基亞甲基、1-丙基亞乙基、1-甲基-2-乙基亞乙基、1，2-二甲基亞丙基、1,3-二甲基亞丙基、2,2-二甲基亞丙基、亞己基和l-曱基亞戊基。亞烷基中有一個或多個、例如l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個氫原子可以被氟原子替換。取代的亞烷基可以在任意位置上被取代。亞烷基中有一個或多個CH2基團可以被氧、S、NH、N-烷基或N-環烷基替換。環烷基的實例有環丙基、環丁基、環戊基或環己基。環烷基中有一個或多個、例如l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個氫原子可以3皮氟原子替換。取代的環烷基可以在任意位置上被取代。環烷基還可以是支鏈形式的，如作為烷基環烷基或環烷基烷基、例如曱基環己基或環己基甲基存在。衍生自其中R13和R14與它們所鍵合的氮原子形成4-、5-、6-或7-元環、其中一個CH2基團可以被NR15、S或氧替換的NR13R14的環的實例有嗎啉、吡咯烷、旅，定、哌溱和N-曱基哌，秦。如果變量作為組成部分出現一次以上，那么變量的定義每次出現時彼此獨立。如果式I化合物包含一個或多個酸性或堿性基團或者一個或多個堿性雜環，那么相應的生理學上或毒理學上可接受的鹽也屬于本發明的范圍，尤其是可藥用鹽。因而，式I化合物可以在酸性基團上被脫質子化，并且例如以堿金屬鹽、優選鈉鹽或鉀鹽的形式使用，或者以銨鹽如與氨或有機胺或氨基酸形成的鹽的形式使用。由于式I化合物始終包含至少一個堿性基團，所以它們也可以以生理學上可耐受的酸加成鹽的形式來制備，例如與下述酸形成的那些無機酸，例如鹽酸、硫酸或磷酸；或有機酸，例如乙酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙二酸、曱磺酸、富馬酸。在本文中適宜的酸加成鹽是與所有藥理學上可接受的酸形成的鹽，例如自化物，特別是鹽酸鹽、乳酸鹽、疏酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽、曱基磺酸鹽、對曱苯磺酸鹽、己二酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、甘油磷酸鹽、馬來酸鹽和樸酸鹽(該基團還相應于生理學上可接受的陰離子);還有三氟乙酸鹽。本文所述的式I化合物可以如下制備通過熟練技術人員已知的方法使式VIII化合物氯磺化，隨后通過熟練技術人員已知的方法與胍反應(例如如iS"狄"/cC麵/w謹Vfffto叫33(7)，1073;2003中所述)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>沒有必要分離在氯磺化后所得的式XII中間體，但是可以直接與胍進行進一步反應。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>式VIII的原料化合物可以如下制備通過使式VI化合物中的羰基部分還原、例如用硼氫化鈉還原且隨后使所得的式VII醇進行酸-或堿-催化環化(參見rwm/^^wi丄e汰1989，30，5837;Org./Vocerf./"t1995，27，513)，能夠通過熟練技術人員已知的方法制備式VIIIa的四氫異壹啉類，其中Rl-R8具有上文所述的含義。VUIa其中R6不為氫的式I的烷基-支鏈的化合物可以如下制備通過已知方法使相應的式IX的二苯基乙酸酯在ot位被R6烷基化。式X化合物可以通過標準方法轉化為相應的式XI酰胺，式XI酰胺在類似皮克特-施彭格勒(Pictet-Spengler)的反應中轉化為所需的式VIIIb的四氫異會啉類(參見r"ra/i^/iwi1987,43，439;Ore附.i^"r抓5"//.1985，33，340),其中Rl-R8如上文所定義，且LG相當于通常用于烷基化的離去基團，例如溴、氯、曱笨磺酸酯基或甲磺酸酯基。千胺和由適當的式V的氨基取代的oc-溴乙酰苯化合物來制備，其中Rl-R8如上文所定義。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>式V的a-溴乙酰苯化合物可以按照文獻方法由相應的乙酰苯前體通過溴化來獲得。如果式IV的節胺前體不能通過購買獲得，則可以通過熟練技術人員已知的標準方法由相應的式III的節基卣化物如爺基氯或節基溴和由相應的胺類R5-NH2來合成，其中Rl-R5如上文所定義，且X為F、Cl、Br或I,特別是Cl或Br。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>或者，式IV化合物還可以通過熟練技術人員已知的標準方法、通過式Ilia的醛進行還原性胺化反應來獲得，其中Rl-R5如上文所定義。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>式III和IIIa、IX和R6-LG和R5-NH2的化合物可以通過購買獲得，或者通過常規方法對產物和/或中間體進行后處理，且如果需要的話進行純化，所述方法例如有萃取、色鐠法或結晶和常規干燥。本發明涉及式I化合物及其可藥用鹽在生產藥物中的用途，所述藥物用于治療神經變性病癥、記憶缺陷和癡呆性病癥，例如在老年人中的癡呆、阿爾茨海默病、血管性癡呆如多發性腦梗塞癡呆、阿爾茨海默病與腦血管紊亂的組合、Tau突變、朊病毒病、聚谷氨酰胺擴展性障礙如亨廷頓舞蹈病和脊髓小腦性共濟失調以及帕金森綜合征；以及適于改善記憶。NHE5抑制劑還適于治療在感染如HIV感染、腦外傷、腦腫瘤或中毒如酒精中毒后和/或與之相關的繼發性癡呆。本發明還涉及包含有效量的式I化合物和/或其可藥用鹽的人用或獸用藥物，并且還涉及包含有效量的單獨的或與一種或多種其它具有藥理活性的成分或藥物組合的式I化合物和/或其可藥用鹽的人用或獸用藥物。包含式I化合物或其可藥用鹽的藥物例如可以通過口服、胃腸道外、肌內、靜脈內、經直腸、經鼻、經吸入、皮下或通過適宜的經皮劑型來施用，優選的施用取決于病癥的具體表現。此外，式I化合物可以單獨使用或者與藥用賦形劑一起使用，特別是在獸用和人用藥中如此。藥物包含其量通常為0.01mg-lg/劑量單位的式I和/或其可藥用鹽的活性成分。根據其專業知識，熟練技術人員熟知哪些賦形劑適于所需的藥物制劑。除了溶劑、凝膠成形劑(gdformers)、栓劑基質、片劑賦形劑和其它活性成分載體以外，還可以使用例如抗氧化劑、分歉劑、乳化劑、消泡劑、掩味矯味劑、防腐劑、增溶劑或著色劑。就口服使用的劑型而言，將活性化合物與適于該目的的添加劑如栽體、穩定劑或惰性稀釋劑混合，通過常規方法轉化為適宜的劑型如片劑、包衣片、兩節套合式膠嚢、水性溶液、醇性溶液或油性溶液。可以使用的惰性載體的實例有阿拉伯樹膠、氧化鎂、碳酸鎂、磷酸鉀、乳糖、葡萄糖或淀粉，尤其是玉米淀粉。制備可以采取干顆粒形式或濕顆粒形式進行。適宜的油性載體或溶劑的實例有植物油或動物油，例如葵花油或魚肝油。就皮下、經皮或靜脈內施用而言，將所用的活性化合物轉化成溶液、混懸液或乳劑，如果需要的話，與常用于該目的物質如增溶劑、乳化劑或其它賦形劑一起轉化為溶液、混懸液或乳劑。適宜溶劑的實例有水、生理鹽水溶液或醇類(如乙醇、丙醇、甘油)以及糖溶液(如葡萄糖或甘露醇溶液)，以及所提及不同溶劑的混合物。適于以氣溶膠或噴霧劑形式施用的藥物制劑例如有式I活性成分在可藥用溶劑、例如特別是乙醇或水或這類溶劑的混合物中的溶液、混懸液或乳劑。如果需要的話，制劑還可以包含其它藥用賦形劑，例如表面活性劑、乳化劑和穩定劑以及拋射劑氣體。這類制劑通常包含濃度為約0.1-10%、特別是約0.3-3%重量的活性成分。所施用的式I活性成分的劑量與施用頻率取決于所用化合物的作用功效和持續時間；另外，還取決于所治療疾病的性質和嚴重性，取決于所治療哺乳動物的性別、年齡、體重和個體響應。平均而言，對體重約為75kg的患者而言，式I化合物的日劑量至少為0.001mg/kg、優選0.1mg/kg、至多30mg/kg、優選lmg/kg體重，在急性情況下，例如在高海拔時呼吸暫停狀態后的即刻，甚至更高的劑量可能也是必要的。直達300mg/kg/天可能是必要的，尤其是對于靜脈內使用而言，例如對重癥監護病房的梗塞患者的靜脈內使用而言。日劑量可以分為一次或多次、例如至多4次單劑量。實驗描述和實施例所用縮略語名單AMPA可被a-氨基-3-羥基-5-曱基異喝唑-4-丙酸酯激活的受體偶聯通道CA1CA-海馬角(阿蒙角)，海馬中的CA1區EA乙酸乙酯EPSP興奮性突觸后電位ES+電噴霧HEP正庚烷ConcNH3飽和NH3水溶液LTP長時程增強LTP1早期LTP(LTP的階段)MeOH曱醇mp溶點MS質鐠法NMDA可被N-甲基-D-天冬氨酸激活的受體偶聯通道RT室溫STP短時程增強(LTP的階段)THF四氫吹喃實施例1:N-二氨基亞甲基-4-(6，8-二氯-2-甲基-l，2，3，4-四氫異壹啉-4-基)苯磺酰胺二鹽酸鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>在氬氣環境中，將0,36g胍混懸于30ml無水THF中，加入0.40g4-(6，8-二氯-2-甲基-l，2，3，4-四氫異壹啉-4-基)苯磺酰氯(W02003048129)。將混合物在RT下攪拌24小時，然后蒸餾出THF。將10ml水加入到殘余物中，過濾出沉淀。用10ml水洗滌，在真空中干燥。然后將固體混懸于10mlEA中，加入10mlHCl在乙醚中的飽和溶液。在真空中除去揮發性成分，將殘余物混懸于10mlEA中，在RT下攪拌5小時。然后過濾出沉淀，在真空中干燥。獲得0.45g，mpl40。C(分解)。Rf(EA/HEP/CH2Cl2/MeOH/濃NH3=10:5:5:5:1)=0.30MS(ES+):412藥理學數據NHE5試.瞼描述在本試驗中，測定LAP1細胞的胞內pH(pHi)在酸化后的恢復，其中LAP1細胞穩定表達鈉-質子交換泵(NHE)的不同亞型。在起作用的NHE的情況下，這一恢復甚至在不含碳酸氫根的條件下開始。為此目的，使用pH-敏感性熒光染料BCECF(分子探針(MolecularProbes)公司，Eugene,OR,USA;使用前體BCECF-AM)測定pHi。首先將細胞與BCECF(5|nMBCECF-AM)在NH4C1緩沖液(NBUC1緩沖液115mM鹽酸膽堿，20mMNH4C1，5mMKC1，ImMCaCl2，ImMMgCl2，20mMHepes，5mM葡萄糖;使用IMKOH建立pH為7.4)中孵育。通過將在NH4C1緩沖液中孵育的細胞用不含NH4C1的緩沖液(133.8mM鹽酸膽堿，4.7mMKCl，1.25mMCaCl2，1.25mMMgCl2，0.97mMK2HP04，0.23mMKH2P04，5mMHepes,5mM葡萄糖；使用1MKOH建立pH為7.4)洗涂，從而誘導細胞內酸化。在洗滌操作后，使90u1不含NH4C1的緩沖液保留在細胞上。在分析儀器(FLIPR，"熒光成像板讀數器"，分子裝置(MolecularDevices)公司，Sunnyvale,Ca.，USA)中通過添加卯pl含Na+的緩沖液(133.8mMNaCl,4.7mMKC1，1.25mMCaCl2，1.25mMMgCl2，0.97mMNa2HP04，0.23mMNaH2P04，10mMHepes，5mM-葡萄糖；使用1MNaOH建立pH為7.4)啟動pH恢復。在498nm的激發波長和FLIPR發射濾波器1(帶隙510-570nm)處測定BCECF熒光。針對NHE5記錄隨后的熒光變化達2分鐘作為pH恢復的測量值。對于計算測試物質的NHE-抑制潛能，首先將細胞在發生pH完全恢復或根本沒有任何恢復的緩沖液中進行測試。對于pH完全恢復(100。/。)而言，將細胞在含Na+的緩沖液(參見上文)和不含Na+的緩沖液中孵育以測定0%值(參見上文)。將測試物質在含Na+的緩沖液中配制。將物質的每一測試濃度下的細胞內pH恢復以占最大恢復的百分數表示。通過XLFit程序(藥物發現軟件(idbs)，薩里，UK)由pH恢復百分數計算具體物質對各NHE亞型的IC5。值。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>測試描述海馬切片長期試驗(體外)實驗手段CA1區中的LTP為在體外已經最佳表征的LTP。該區的分層和輸入結構允許在體外歷經數小時進行場電位測定。在NHE研究中，使用基于e節律并誘導早期LTP(其在3小時內回復到初始值)的弱強直o/A^"r仍"e"ce，18(16)，6071(1998);五w/尸/r"r附tfc^/.502:99-104，2004)。近來已經證實，e發作性訓練的數目增加誘導了強度和持久性增加的PLT(/7Ve"r印/^wW.88:249-255,2002)，即，單一弱刺激誘導了不飽和的LTP,而非最大可獲得的飽和類型的LTP。這種LTP的強度(Behnisch，Reymann等人，A/ewwc/.Ze汰1998，253(2):91-94)和持久性(例如A^"r0/i印ftW^26:421-427，1994)可通過物質改善或受其不利的影響。在我們的研究中所產生的早期LTP同樣是不飽和的。因此，能夠確定物質誘導的早期LTP改善或惡化。所研究的早期LTP由已知持續約30分鐘的STP組件(AWwe335:820-824，1988)和通常在LTP誘導后前1-2小時內持續的LTPl組件(丄^mM^/w.3:1-24，1996)所組成。強直前初始值的短期(30-60分鐘)記錄允許所研究物質對所研究的正常未受刺激的突觸傳遞的早期作用。由于主要的興奮性突觸為谷氨酸能的(JC7/"iVewo/^"/^.9:252-263，1992)，即，單突觸場EPSP非常主要地通過AMPA和僅僅以相當低的程度通過NMDA受體進行測定，所以同時間接地測試了對谷氨酸能傳遞的作用。方法海馬切片長期試驗(體外)動物類型年齡7-8周齡品系威斯特(Wistar)(ShoeWist，Shoe)性別雄性繁殖者海倫'溫克爾曼(HarlanWinkelmann)股份有限公司，人工光(6-18.00h)和每日晝夜節律準備震暈用鐵棒擊打在頸后部上處死斷頭術暴露腦通過沿顱骨矢狀縫由背側至腹側切開，從而開放頭蓋骨。暴露海馬將腦在半球之間切開，采用右半球為原料，使用鈍器拉出海馬。切片的制備將暴露的海馬轉入具有濕濾紙的冷卻塊，借助另一片濾紙吸出過量的水份。將按照這種方式固定在冷卻塊上的海馬放在切物機上，沿水平方向旋轉至海馬與切片刀成適當角度。切割角度為了維持海馬的片狀結構，有必要以相對于切片刀(切物機)約70度的角度將海馬切片。切片以400|iini間隔將海馬切片。借助極軟的、充分濕潤的刷子(貂毛)從刀片上取下切片，轉入具有充入95%02/5%C02的冷卻營養液的玻璃容器中。總制備持續時間不超過5分鐘。切片的儲存浸漬切片切片在溫控室(33。C)內位于液面下l-3mm。流速為2.5ml/min。在預熱室內在輕微升高的壓力(約latm)下和通過顯微操作針進行預先氣體處理。使切片室與預熱室連接，以便能夠維持微循環。通過95%02/5%C02通過顯微操作針流出來啟動微循環。切片適應使新鮮制備的海馬切片在切片室內于33'C適應至少1小時。測試刺激物水平的測定刺激物7K平fEPSP:30。/o的最大EPSP病灶電位的測定刺激將單極刺激電極用于局部刺激謝弗側枝(Schaffercollateral)(電壓l-5V，一個極性脈沖寬度為O.lms，總脈沖0.2ms),所述電極包括涂漆的不銹鋼和恒流電雙相刺激發生器(WPIA365)。測定將充入有正常營養液的玻璃電極(具有纖絲的硼硅玻璃，l-5MOhm，直徑1.5mm,頂圓直徑3-20nm)用于記錄來自輻射層的興奮性突觸后電位(fEPSP)。采用DC電壓》文大器，相對于位于切片室邊緣的氯化銀參比電極測定場電位。通過低通濾波器(5kHz)過濾場電位。場電位的測定測定fEPSP的斜率(fEPSP斜率)用于實驗的統計分析。借助神經生理學部門研發的軟件程序(PWIN)進行實驗的記錄、分析和控制。借助Excel軟件在各時間點進行平均fEPSP斜率的形成和構建圖，并適當宏觀地進行自動數據記錄。營養培養基(林格溶液):<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>將實施例1溶于DMSO中，用林格溶液稀釋至實驗的終濃度(終濃度0.01%DMSO)。實驗概要在對照實驗中，在開始時記錄基線突觸傳遞達60-120分鐘。隨后，以200ms間隔給予兩個雙脈沖4次，其中雙脈沖的脈沖間隔為10ms，且單個脈沖的寬度為0.2ms(弱強直)。記錄所得EPSP增強達至少60分鐘。在測試NHE5抑制劑作用的實驗中，再次在開始時記錄基線達60-120分鐘。在刺激前20分鐘充入NHE5抑制劑(10pM)。以200ms間隔給予兩個雙脈沖4次作為對照實驗，其中雙脈沖的脈沖間隔為10ms，且單個脈沖的寬度為0,2ms。在刺激后洗滌掉物質達20分鐘，記錄EPSP增強達至少60分鐘。結果實施例1的化合物在所用的濃度對突觸傳遞沒有固有(intrinsic)作用。施用實施例1后的增強在刺激后80分鐘時仍然在基線的137%下，而在對照條件下的增強幾乎恢復到基線水平，為基線的113%。這清楚地表明，甚至是10nM的實施例1的化合物也改善了弱LTP的維持。權利要求1.式I化合物及其可藥用鹽在生產用于治療神經變性病癥、記憶缺陷和癡呆性病癥以及用于改善記憶的藥物中的用途，其中各含義為R1、R2、R3和R4彼此獨立地為氫、F、Cl、Br、I、CN、NO2或R11-(CmH2m)-An-；m為0、1、2、3或4；n為0或1；R11為氫、甲基或CpF2p+1；A為氧、NH、N(CH3)或S(O)q；p為1、2或3；q為0、1或2；R5為氫，具有1、2、3、4、5或6個碳原子的烷基，或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；R6為氫；OH；F；CF3；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；R7和R8彼此獨立地為氫、F、Cl、Br、CN、CO2R12、NR13R14或R16-(CmmH2mm)-Enn-；R12為氫；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；R13和R14彼此獨立地為氫；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；或者R13和R14與它們所鍵合的氮原子一起形成4-、5-、6-或7-元環，其中一個CH2基團可以被NR15、S或氧替換；R15為氫；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；mm為0、1、2、3或4；nn為0或1；R16為氫、甲基或CppF2pp+1；E為氧或S(O)qq；pp為1、2或3；qq為0、1或2。2.如權利要求1中所要求的用途，其中使用式I化合物及其可藥用鹽，其中各含義為Rl、R2、R3和R4彼此獨立地為氬、F、Cl、Br、CN或Rll-(CraH2m)-An-;m為0或1;n為0或1;Rll為氫、甲基或CpF2p+j;A為氧、NCBb或S(O)q;p為1或2;q為0、1或2;R5為氫、甲基、乙基或環丙基；R6為氫或曱基；R7和R8彼此獨立地為氫、F、Cl、CN、C02R12、NR13R14或Rl6-(CmmH2mm)-Enn_;R12為氬、甲基或乙基；R13和R14彼此獨立地為氬；具有l、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；或者R13和R14與它們所鍵合的氮原子一起形成5-、6-或7-元環，其中一個CH2基團可以被NR15、S或氧替換；R15為氫；具有1、2、3或4個碳原子的烷基；或具有3、4、5或6個碳原子的環烷基；mm為0、1或2;im為0或ljR16為氫、甲基或CppF2pp+1;E為氧或S(O)qq;pp為1或2)qq為0、1或2。3.如權利要求1或2中所要求的用途用鹽，其中各含義為Rl和R3為氫；R2和R4彼此獨立地為氫、F、Cl、NH2、R5為氫、甲基、乙基或環丙基；R6為氫或甲基；R7和R8為氫。4.如權利要求l-3中一項或多項所要求的用途，其中使用N-二氨基亞甲基-4-(6，8-二氯-2-甲基-l，2，3，4-四氬-異會啉-4-基)苯磺酰胺或其可藥用鹽。5.如權利要求1-4中一項或多項所要求的用途，用于生產治療癡呆性病癥的藥物。6.如權利要求l-5中一項或多項所要求的用途，用于生產治療老年人中的癡呆的藥物。7.如權利要求1-4中一項或多項所要求的用途，用于生產治療阿爾茨，其中使用式I化合物及其可藥NHCH^N(CH3)2;海默病、血管性癡呆、阿爾茨海默病與腦血管障礙的組合、Tau突變、朊病毒病、聚谷氨酰胺擴展性障礙和帕金森綜合征的藥物。8.如權利要求1-4中一項或多項所要求的用途，用于生產治療阿爾茨海默病、多發性腦梗塞癡呆、阿爾茨海默病與腦血管障礙的組合、Tau突變、朊病毒病、亨廷頓舞蹈病、脊髓小腦性共濟失調和帕金森綜合征的藥物。9.如權利要求l-4中一項或多項所要求的用途，用于生產治療在感染、腦外傷、腦胂瘤或中毒后和/或與之相關的繼發性癡呆的藥物。10.如權利要求1-4中一項或多項所要求的用途，用于生產改善記憶的藥物。全文摘要本發明涉及5亞型Na⁺/H⁺交換泵(NHE5)抑制劑在生產用于治療神經變性疾病、記憶障礙和癡呆疾病以及用于改善記憶保持的藥物中的用途。文檔編號A61K31/47GK101267822SQ200680034640公開日2008年9月17日申請日期2006年9月8日優先權日2005年9月20日發明者A·霍夫邁斯特,H·高爾,H-J·朗,H-W·克勒曼,K·雷曼,U·H·施羅德,U·海內爾特申請人:塞諾菲-安萬特股份有限公司