一種抗胃癌細胞表面功能性表達的足萼樣蛋白前體亞型2的單克隆抗體及其制備方法和用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物制藥領域，特別是涉及一種抗胃癌細胞表面功能性表達的足萼樣 蛋白前體亞型2(P0DXL-V2)的單克隆抗體(命名為MS17-38)及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002] 如同發明人陸梅生等早先申請的專利"抗細胞表面異位表達的單克隆抗體MS17-57及其制備方法和用途"（專利申請號為：201310090565.9,已公開和批準）所述的背景知 識，胃癌(Gastric Cancer，GC)是人類最常見的消化系統惡性腫瘤并且是腫瘤相關死亡的 主要原因之一。中國和日本等國家是世界上胃癌發病率最高的國家，每年新發病例近60-70 萬并占世界病例的多數。很多胃癌患者初次就診已屬臨床晚期。胃癌的早期篩查和確診目 前主要依靠胃鏡和組織病理學的活檢，但是依靠這種早期篩查診斷的手段其特異性、敏感 性、準確性和安全性均有一定程度限制性、普及困難以及諸多干擾因素存在和臨床應用效 果并不令人滿意。因此，多數胃癌患者初診時發現已轉移至其它臟器，必須依靠外科手術、 放療和全身化療等。這些傳統治療或補救措施不僅費用昂貴，大大增加個人和社會沉重經 濟負擔，且存在治療的特異性和療效不盡人意等問題。據不完全統計晚期胃癌患者的五年 生存率通常不超過10%，所以新的胃癌特異、高效臨床治療方法迫在眉睫。近年來，雖然有 一些新的化學治療藥物以及聯合治療方案(個性化醫療）的實施使胃癌患者的治療反應率 有所提高，但在已經開展的隨機臨床研究調查中發現均未達到中位生存期1年以上的治療 目標。
[0003] 由于化療及放療對胃癌普遍不敏感，并缺乏對其有效的替補治療方案，近年來新 的胃癌治療方法和藥物的研發成為基礎及臨床研究的熱點。2002年在美國國立癌癥研究所 (NCI)的癌癥專家建議對腫瘤進行分子分析的定義，這樣會有效地實現對腫瘤患者的個體 化治療、復發檢測以及預后評估等。在這些新理念的指導下，胃癌的分子靶向治療和分子生 物功能治療得到快速的發展同時也成為腫瘤治療的新趨勢。
[0004] 發明人陸梅生等在早先申請的專利"抗細胞表面異位表達的單克隆抗體及其制備 方法和用途"（專利申請號為:201310090565.9,已公開和批準)還闡述了腫瘤標志物靶向和 生物學功能治療是在腫瘤細胞表面過度表達或者功能性表達的某些生物標志性分子作為 靶點。從20世紀90年代開始，一直以來多種分子靶向治療藥物(包括抗體藥物)相繼進入臨 床試驗的腫瘤治療并顯示出很好的療效，它們包括兩大類，大分子單克隆抗體(作用于細胞 外的治療性抗體藥物)和小分子酪氨酸激酶抑制劑(作用于細胞內的化學類藥物）。由于抗 體藥物可以高度特異性地識別、結合相應的腫瘤細胞外受體并隨即對細胞激發生物學功 能，如果不能激發功能的，分有另外幾種抗體治療方法1.抗體藥物偶聯(Antibody Drug Conjugation，ADC); 2.抗體與放射性同位素結合而進行的特異性放射免疫治療；3.嵌合抗 原受體(Chimeric Antigen Receptor ,CAR)的T細胞免疫治療。我們把這些歸納為腫瘤的抗 體革巴向治療（Antibody Targeting Therapy ,ATT)和抗體生物功能治療（Antibody Biofunctional Therapy，ABT)，后面那種的抗體生物功能治療(ABT)又可以分為抗體與生 物功能協同作用的激動劑（A g 〇 n i s t)和抗體與生物功能競爭性作用的詰抗劑 (Antagonist)。抗體的生物功能作用主要對腫瘤細胞發生發展的相關分子作為祀點而實現 對腫瘤的特異性殺傷，防止轉移或對其生長微環境的干擾。因此，與傳統的化療、放療和中 醫中藥相比，抗體藥物效果更為明顯、效用期長而毒副作用低。腫瘤的抗體生物功能治療將 會成為腫瘤治療發展的主要方向。
[0005] 發明人陸梅生等在早先申請的專利"抗細胞表面異位表達的單克隆抗體及其制備 方法和用途"（專利申請號為:201310090565.9,已公開和批準)對于胃癌抗體治療的背景還 闡述了抗體藥物對胃癌治療近年來發展迅速。目前已經過美國FDA批準的一些抗體藥物，它 們的臨床前研究毒理試驗和各期臨床病例報告顯示著特異性不高、靶向性不強和實際臨床 治療效果總體上還不十分理想，這些藥物包括抗表皮生長因子受體（EGFR)的西妥昔 (Cetuximab)單抗藥物愛必妥(Erbitux)、抗表皮生長因子受體-2(EGFR2)或叫HER2為靶點 的曲妥珠(Trastuzumab)單抗藥物赫賽汀(Herceptin)以及抗血管內皮生長因子(VEGF)為 革巴點的貝伐(Bevacizumab)單抗藥物阿瓦斯丁(Avastin)等。所以我們必須制備胃癌革El向生 物學功能的高效單抗藥物，以面對當前腫瘤臨床醫學的急需。學者Brichory在世界上首先 將蛋白質組學的多肽合成或構建方法引入到鑒定篩選腫瘤相關抗原及抗腫瘤自身抗體領 域，通過這一思路和方法，人們揭示出了眾多細胞內和細胞外的新腫瘤標志物蛋白分子，比 如葡萄糖調節蛋白（Glucose Regulated Protein，GRP78)，熱休克蛋白-27，-60，-70等 (Heat Shock Protein，HSP-27、-60、_70etc·)以及纖維蛋白肽_A(Fibrin Peptide-A)等。 但是此手段也帶來了很多的局限性，因為腫瘤生物功能靶點不僅具有細胞表面特異性抗 原，而且其功能還必須帶有蛋白質空間結構或天然構象，這樣就大大地限制了Brichory思 路的進一步研究和應用。毋庸置疑，本研究發明就是在人體生物自然狀態下通過活細胞免 疫和活細胞高通量流式細胞儀(FACS)篩選來鑒定胃癌或其它腫瘤細胞表面特異性抗原，從 而捕捉和制備特異、高效的治療性抗體藥物，并為胃癌分子標志物鑒定以及胃癌靶向治療 單抗藥物的臨床應用提供有力工具。
[0006] 足糖萼蛋白（Podocalyxin，PC)是主要表達在腎小球基底膜足細胞(Podocyte)表 面的糖蛋白，蛋白等電點(Pl)小于7,是偏酸和帶負電荷。它在腎小球足細胞上扮演了保持 濾過縫隙的開發。足糖萼蛋白在血小板凝血、早期糖尿病發病中起了一定的作用。但是，足 萼樣蛋白（Podocalyxin-Like protein，P0DXL)是人類獨有的并由PODXL基因編碼的唾液粘 蛋白家族的一個成員蛋白。足萼樣蛋白具有與細胞內結構元素的鈉栗/氫栗交換因子組成 一個復合物，同時在造血細胞的分化中扮演了一定的角色。它能在血管內皮細胞上表達和 能與L型選擇蛋白（L-selectin)結合。PODXL具有一些不同氨基酸序列，不同長短多肽片段 的亞型體并在不同的組織、細胞和腫瘤上表達。

【發明內容】

[0007] 鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種抗胃癌細胞表面功能 性表達的足萼樣蛋白前體亞型2(英文簡寫為:P0DXL_v2;英文全文為Podocalyxin Isoform 2Precursor，P0DXL-v2)的單克隆抗體及其制備方法和用途，用于解決現有技術中的問題。
[0008] 為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種抗胃癌細胞表面功能 性表達的足萼樣蛋白前體亞型2(P0DXL-v2)的單克隆抗體(MS17-38)，其抗體輕鏈可變區的 氨基酸序列為SEQ ID NO: 2或其保守型變異序列，其抗體重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ ID NO:4或其保守型變異序列。
[0009] 優選的，所述輕鏈可變區的編碼序列為SEQ ID NO: 1或其保守型變異序列，所述重 鏈可變區的編碼序列為SEQ ID NO:3或其保守型變異序列。
[0010] 優選的，所述MS17-38單克隆抗體是鼠源性的。
[0011] 更優選的，所述MS17-38單克隆抗體是IgGl重鏈和κ輕鏈亞型的免疫球蛋白。
[0012] 本發明所提供的MS17-38單克隆抗體是一種抗(結合或作用)腫瘤細胞表面功能性 表達的P0DXL-V2抗原(或受體、或表位）、或者部分抗(結合或作用)PODXL抗原、或者部分抗 (結合或作用)P〇DXL-vl抗原的單克隆抗體。
[0013] 本發明進一步提供所述MS17-38單克隆抗體的衍生物，所述衍生物可以為所述 MS17-38單克隆抗體片段、或包含所述MS17-38單克隆抗體或MS17-38單克隆抗體片段的融 合蛋白，所述單克隆抗體的片段為Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv等。
[0014] 本發明第二方面提供一種分離的DNA分子，編碼所述MS17-38單克隆抗體的重鏈 和/或輕鏈的可變區或全長氨基酸。