用于治療精神病癥的(r)-3-((3s,4s)-3-氟-4-(4-羥基苯基)哌啶-1-基)-1-(4-甲基芐基 ...的制作方法
【專利摘要】本公開主要涉及式I化合物，包括它們的鹽，以及組合物及使用所述化合物的方法。所述化合物是NR2B NMDA受體的配體且可用于治療各種中樞神經系統病癥。
【專利說明】用于治療精神病癥的（R )-3-( (3S，4S )-3-氣-4-(4-哲基苯基） 脈暗-1 -基)-1 - (4-甲基芐基)P比略燒-2-酬及其前藥
[0001] 相關申請的交叉引用 本申請要求2014年1月9日提交的臨時專利申請USSN 61/925,405的優先權，其全文W 引用方式并入本文中。
[0002] 發明背景 本公開主要設及式I化合物，包括它們的鹽，W及組合物及使用所述化合物的方法。所 述化合物是NR2B NMDA受體的配體且可用于治療各種中樞神經系統病癥。
[000引N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA)受體是通過谷氨酸鹽（即中樞神經系統中的興奮性 神經遞質）的結合閩控的離子通道。據信其在多種神經疾病(包括抑郁癥、神經性疼痛、阿茲 海默氏病及帕金森氏病）的發展中起關鍵作用。功能性NMDA受體是主要包括兩個NRl及兩個 NR2亞單元的四聚體結構。NR2亞單元進一步細分成四個獨立亞型:NR2A、NR2B、NR2C及NR2D， 其差異性分布于整個腦中。已研究NMDA受體、具體而言含有NR2B亞單元的信道的括抗劑或 別構調節劑作為用于治療重度抑郁癥的治療劑(G. Sanacora, 2008,化ture Rev. Drug Disc. 7: 426-437)O
[0004] NR2B受體含有除針對谷氨酸鹽的配體結合位點外的額外配體結合位點。非選擇性 NMDA括抗劑(例如氯胺酬)是干擾化H穿過通道運輸的孔阻斷劑。氯胺酬已證實在人類臨床 試驗中作為i.v.藥物的快速且持久的抗抑郁藥性質。另外，通過重復、間歇輸注氯胺酬維持 效能（Zarate等人，2006, Arch. Gen. Psychiahy 63: 856-864)。但此類藥物由于其CNS 副作用(包括解離效應)而具有有限治療價值。
[0005] 亦已在NR2B的N-末端結構域中鑒別出別構非競爭性結合位點。于此位點處選擇性 結合的藥劑(例如曲索羅地(Traxoprodi 1))作為i . V.藥物在人類臨床試驗中展現持續抗抑 郁反應及改良的副作用特性（Preskorn等人，2008, J. Clin. Psychopharmacol., 28: 631-637,及F. S. Menniti等人，1998，CNS Drug Reviews, 4，4，307-322)。然而，此種 類的藥物的研發因低生物利用度、差藥物動力學及針對其它藥理學祀標(包括hERG離子通 道)無選擇性而受阻。阻斷hERG離子通道可導致屯、律不齊，包括潛在致命性尖端扭轉型室性 屯、動過速(Torsades de pointe)，因此針對此通道的選擇性是至關重要的。因此，在重度抑 郁癥的治療中，仍存在研發具有有利的耐受性特性的有效NR2B選擇性負向別構調節劑的未 滿足的臨床需求。
[0006] 已在PCT公開WO 2009/006437中公開NR2B受體括抗劑。
[0007] 本發明提供技術優點，例如，所述化合物是新穎的且是NR2B受體的配體且可用于 治療各種中樞神經系統病癥。另外，所述化合物在(例如）W下一或多個方面向醫藥用途提 供優點:其作用機制、結合、抑制功效、祀標選擇性、溶解性、安全特性或生物利用度。
[000引發明描述 本發明的一個方面是式I化合物 其中：
Ari是苯基或二氨化巧基且經O至3個選自W下的取代基取代:氯基、面素、烷基、面代燒 基及面代烷氧基； Ar2是經1個OR取代基取代且亦經O至3個選自W下的取代基取代的苯基:氯基、面素、燒 基、面代烷基及面代烷氧基； R是選自W下的前藥部分:烷基醋、氨基酸醋、烷氧基醋、麟酸、麟酸烷基醋、烷氧基麟 酸、烷氧基麟酸烷基醋、氨基甲酸烷基醋、氨基酸氨基甲酸醋、氨基憐酸烷基醋、氨基憐酸芳 基醋及氨基橫酸醋； X是鍵或C1-C3亞烷基； n是1或2;且 環A是氮雜環下烷基、化咯烷基、贓晚基、贓嗦基、局贓晚基或局贓嗦基且經0至4個選自 面素、烷基、徑基或烷氧基的取代基取代； 或其醫藥上可接受的鹽。
[0009] 本發明的另一方面是下式化合物
其中R是選自W下的前藥部分:烷基醋、氨基酸醋、烷氧基醋、麟酸、麟酸烷基醋、烷氧基 麟酸、烷氧基麟酸烷基醋、氨基甲酸烷基醋、氨基酸氨基甲酸醋、氨基憐酸烷基醋、氨基憐酸 芳基醋及氨基橫酸醋;或其醫藥上可接受的鹽。
[0010]合成方法 式I化合物可通過業內已知的方法(包括哪些下文所述的且包括技術能力內的變化形 式)制得。一些試劑及中間體已為業內已知。其它試劑及中間體可通過業內已知的方法使用 容易獲得的材料制得。用于闡述化合物的合成的變量(例如編號為"r的取代基)僅欲闡釋 如何制備化合物，且不應與權利要求書或說明書其它部分中所使用的變量混淆。W下方法 是出于闡釋性目的且并不意欲限制本發明的范疇。方案涵蓋業內已知的合理變化形式。
[00川方案1顯示實例1 (R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-徑基苯基)贓晚-1-基)-1-(4-甲基 芐基川比咯燒-2-酬的有效合成。徑基內酷胺1是W光學純形式商業購得。其可經保護及N-燒 基化W形成內酷胺4。用甲燒橫酷氯使徑基去保護及活化產生內酷胺5。單獨地，化合物6可 通過使市售4-節氧基漠苯與市售4-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧雜棚雜環戊燒-2-基)-5， 6-二氨化晚-U2H)-甲酸叔下醋之間的Suzuki偶聯反應制得。用原位制得的棚燒處理6、之 后氧化，從而可形成反式外消旋醇7。可將醇7分離成分別的對映異構體，且可在標準條件下 使用氨化暴露酪W制備經取代的酪8。用de-oxofluoH式劑氣化，從而選擇性提供反式芳基 氣9,且利用鹽酸使Boc基團去保護，從而提供呈鹽酸鹽形式的贓晚。在堿性條件下簡單萃 取，從而提供呈游離堿形式的贓晚10。在輕度堿性條件下小屯、使贓晚10與內酷胺5反應，從 而提供(R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基)贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基)化咯燒-2-酬， 即實例1的標題化合物。
[0012] 方案1. (r)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基川比 咯燒-2-酬的合成.
可使用業內已知的方法將實例1的化合物轉變成各種前藥。因此，根據方案2,用P0C13、 化晚及DMAP處理酪、之后水性水解，從而提供實例2,即實例1的憐酸二氨醋。
[0013] 方案2.實例2、即實例1的化合物的麟酸前藥的合成.
類似地，使用業內已知的各種方法、但優選使用二環己基碳二亞胺及4-二甲基氨基化 晚使實例1的化合物與Boc保護的氨基酸反應，從而提供醋11。在酸、優選HCl中使Boc基團解 離，從而提供醋，其包括實例3及4的化合物。
[0014] 方案3.氨基酸前藥的合成
W類似方式，可經由未經保護的側鏈使Boc保護的天冬胺酸叔下醋（12)與實例I的化合 物偶合W提供醋13。再次利用HCl去保護，從而提供實例5的化合物。
[0015] 方案4.經由側鏈簇酸附接的天冬胺酸前藥的合成
具體實施例的描述 方案中所使用的縮寫通常遵循業內所使用的慣例。說明書及實例中所使用的化學縮寫 定義如下："化麗DS"用于雙（立甲基甲娃烷基）氨基鋼；"DMF"用于N，N-二甲基甲酯胺； "MeOH"用于甲醇；"NBS"用于N-漠班巧酷亞胺；"Ar"用于芳基；叮FA"用于立氣乙酸；"LAH"用 于氨化裡侶；"B0C'用于叔下氧基幾基，"DMS爐用于二甲基亞諷；V用于小時；"EtOAc"用于 乙酸乙醋；叮HF"用于四氨巧喃；巧DTA"用于乙二胺四乙酸；巧t2爐用于二乙酸；"DMP"用于 4-二甲基氨基化晚；"D成'用于1,2-二氯乙燒；"ACN"用于乙臘；"DME"用于1,2-二甲氧基乙 燒；"HO化"用于1-徑基苯并S挫水合物；"DIEA"用于二異丙基乙胺，"Nf"用于CF3(CF2) 3SO2-;且叮MOf'用于原甲酸S甲醋。
[0016] 如本文中所用的縮寫是定義如下："IX"用于一次，"2X"用于兩次，"3X"用于S 次，"°C"用于攝氏度，"eq"用于當量，V用于克，"mg"用于毫克，"L"用于升，"mL"用于毫升， "山'用于微升，"N"用于當量濃度，用于摩爾濃度，"mm〇r用于毫摩爾，"min"用于分鐘， 節'用于小時，用于室溫，"RT"用于滯留時間，"atm"用于大氣壓，"psi"用于磅/平方英 寸，"cone 用于濃縮物，"sat"或"satd."用于飽和，"MW"用于分子量，"mp"用于烙點， "ee"用于對映體過量，"MS"或"Mass Spec"用于質譜/'ESr用于電噴射離子化質譜，"郵'用 于高分辨率，"HRMS"用于高分辨率質譜，"LCMS"用于液相色譜-質譜，"HPLC"用于高效液相 色譜，"RP HPLC'用于反相HPLC，"DCM"用于二氯甲燒，叮LC"或"tic"用于薄層層析，"SFC"用 于超臨界流體色譜，"NMR"用于核磁共振譜，"1礦用于質子，用于S，用于單峰，"d"用 于雙峰，"t"用于S重峰，"q"用于四重峰，V'用于多重峰，"br"用于寬峰/'化"用于赫茲，且 "R"、"S"、"護及"Z"是熟習本領域技術人員熟悉的立體化學名稱。
[0017] LC/MS數據是使用W下條件獲得： 條件A:AscentisC18 50 X 2.1 mm，2.7皿柱，使用lmL/min流速，梯度為經1.7分鐘 0-100% B、之后于100% B下I. 3分鐘。溶劑A: 10 mM于水：乙臘(98:2)中的NH4C00H;溶劑B = 10 mM于水：乙臘(2:98)中的畑4〇30山
[001 引條件BJhenomenex C18 2.0 X 50 mm，5皿柱，使用0.8 mL/min流速，梯度為經4 分鐘0-100% B。溶劑A = 10% MeOH/90%水/0.1% TFA，溶劑B = 90% MeOH/10%水/0.1% TFA。
[0019] 中間體的合成 中間體A. 4-(4-(節氧基)苯基)-5,6-二氨化晚-U2H)-甲酸叔下醋
將市售1-(節氧基)-4-漠苯（104 g，395 mmol)及市售4-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二 氧雜棚雜環戊燒-2-基)-5,6-二氨R比晚甲酸叔下醋（147 g, 474 mmol)于1100 ml 乙臘中的溶液用氮氣吹掃2 min。添加水（1100 mL)，之后添加碳酸鋼（126 g, 1186 mmol) 及四苯基麟)鈕(27.4 g，23.7 mmol)。將反應混合物用氮氣吹掃5 min,且隨后加熱至 90°C并攬拌16 h。隨后將反應混合物冷卻至d并用1 L乙酸乙醋稀釋。分離各層，且再用兩 份250 mL乙酸乙醋萃取水層。合并有機層，用200 mL鹽水洗涂，經硫酸鋼干燥，并在真空中 蒸發，W提供灰白色固體。通過硅膠層析用石油酸中的6%乙酸乙醋洗脫來純化產物，W提供 129 g (88%)期望產物。
[0020] 中間體B. (+/-)-相對-(3S，4S)-4-(4-(節氧基)苯基)-3-徑基贓晚-1-甲酸叔下 醋
將棚氨化鋼（15.5 g，410 mmol)溶解于THF中，并將溶液冷卻至0°C。向溶液中添加 S 氣化棚酸合物（52.3 mL, 424 mmol)并使混合物升溫至d并攬拌30 min。隨后添加4-(4-(節氧基）苯基）-5,6-二氨[I比晚甲酸叔下醋（50 g，137 mmol,中間體A)于500 ml THF中的溶液并將反應混合物于d下攬拌2 h。隨后向混合物中緩慢添加一份100 mL的水 (注意：觀察到冒泡）。將混合物用100 mL乙醇稀釋，并添加氨氧化鋼(228 mL，于水中的10% 溶液，0.684 mol)及過氧化氨(20.5 mL, 0.684 mol)。將反應混合物加熱至回流溫度并攬 拌16 h。將混合物冷卻至10°C并用1 L DCM稀釋。隨后用1.5 L 1.5 N HCl將pH調節至7。隨 后分罔各層，并再用兩份500 HiL的DCM卒取水層。合并有機層，用2 X 1 L水及200 mL鹽水 洗涂，經硫酸鋼干燥，并在真空中蒸發，W提供灰白色固體。將固體與500 mL石油酸一起研 磨，并通過過濾分離，W產生46.5克產物(88%，通過HPLC純度為99.0%)。
[0021] 中間體C. (3S，4S)-4-(4-(節氧基)苯基)-3-徑基贓晚-I-甲酸叔下醋
在W下條件下使用制備型超臨界流體層析將外消旋相對-(3S，4S)- 4-(4-(節氧基)苯 基)-3-徑基贓晚-1-甲酸叔下醋（112 g，中間體B)分離成各對映異構體:利用Iliar SFC-250 儀器與Lux- Cellulose -2 (250 X 21 mm),5皿柱，用60% CO2及0.3%二乙胺于甲醇中的 40〇/〇溶液WlOO.O g/min的流速洗脫。W74 mg/mL注射試樣。在Lux- Cellulose -2 (250 X 4.6 mm)、5皿柱上，用55% CO2及0.3%二乙胺于甲醇中的45%溶液W3.0 g/min的流速洗脫， 實施分析型SFC。回收率是50.0 g峰1，滯留時間為2.49分鐘，其對應于期望的（3S，4S)-4-(4-(節氧基)苯基)-3-?基贓晚-1-甲酸叔下醋。分析數據與外消旋體的那些匹配。
[0022] 中間體D. (3S，4S)-3-哲某-4-(4-輝某龍某）脈暗-1-甲酸叔下醋
在壓力瓶中（3S，4S)-4-(4-(平氧基）苯基）-3-巧基販晚-1-甲酸叔下醋（26 g，67.8 mmol,中間體C)于260血甲醇中的溶液用1.6克10%碳載鈕（13.6 mmol)處理。引入50 psi氨 氣，且將反應混合物攬拌16 h。混合物經由娃藻±過濾并濃縮成粗產物（18.9 g，64.4 mmol )，其足夠純，未經進一步純化即繼續使用。
[0023] 中間體E. (3S，4S)-3-氣-4-(4-哲基
苯基)脈晚-1-甲酸叔下醋 將(3S,4S)-3-^基-4-(4-?基苯基）贓晚-1-甲酸叔下醋（15.5 g，61.4 mmol，中間體 D)于270 mL乙臘中的溶液冷卻至(TC。經65 min經由添加漏斗向攬拌溶液中逐滴添加雙(2-甲氧基乙基)氨基S氣化硫于甲苯中的50%溶液(Deoxo-fluor, 58.4 ni, 159 mmol)。添加 后，將反應混合物于(TC下攬拌30 min且隨后使其達到的并再攬拌2 h。隨后添加飽和氯化 錠溶液(150 mU，并將混合物用兩份150 mL的DCM萃取。合并有機層，經硫酸鋼干燥并濃縮， W得到粗產物。通過硅膠層析（1.5 kg二氧化娃）用己燒中的0-15%丙酬的梯度洗脫純化產 物，W得到11.9 g (75%)期望(3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基)贓晚-1-甲酸叔下醋。
[0024] 中間體F. 4-((3S，4S)-3-氣脈晚-4-基)苯酪
將(3S, 4S) -3-氣-4-(4-徑基苯基)贓晚-1 -甲酸叔下醋（12.0 g，40.6 mmo 1，中間體E) 于無水二嗯燒(80 mL)中的溶液用肥1 (4M，于1,4-二嗯燒中，40.6 mL，162 mmol)處理。將 反應混合物于K下攬拌6 h且隨后在真空中蒸發W提供期望產物的肥1鹽。在未進一步分離 情況下，將HCl鹽懸浮于CHCh中并添加80 mL飽和化肥化溶液。分離有機層，且用CHCh (2 X 100 mL)卒取水層。合并有機層,經化2SO4干撫并濃縮，W廣生t不題化合物(7.1 g, 36.4
[0025] 中間體G. (S)-3-((叔下基二甲基甲娃烷基)氧基川比咯燒-2-酬
將市售(5)-3-?基化咯燒-2-酬(5 g，49.5 mmol)于DCM (198 ml)中的攬拌溶液用 DMAP (0.199 g, 1.632 mmol)、咪挫（6.73 g, 99 mmol)及TBDMS-Cl (8.94 g, 59.3 mmol)處理。將反應混合物于d下攬拌16h，且隨后用飽和Na肥化溶液洗涂。濃縮有機層并通 過硅膠層析用石油酸中的50%乙酸乙醋洗脫純化粗制反應產物。分離出白色固體狀期望產 物（8.1 g, 76%)。
[0026] 中間體H. (S)-3-((叔T其二甲其甲巧糕其)氣其)-1-(4-甲基芐基川比咯燒-2-酬
將(S)-3-((叔下基二甲基甲娃烷基)氧基川比咯燒-2-酬(5 g，23.22 mmol,中間體G)溶 解于無水THF (46.4 ml)中并在氮氣氣氛下將反應混合物冷卻至0°C。隨后一次性添加氨化 鋼（1.393 g，34.8 mmol)并將反應混合物攬拌5 min,之后逐滴添加無水THF (46.4 ml)中 的1-(漠甲基)-4-甲苯(5.37 g，29.0 mmol)。將反應物于(TC下攬拌5 min,隨后移除冷卻 浴并將混合物升溫至d過夜。將反應物小屯、地用水（100 mL)澤滅且隨后用乙酸乙醋（3 X 100 mL)萃取。隨后將合并的有機層用鹽水(200 mU洗涂并干燥(MgS化）。在真空中蒸發溶 劑，從而產生粗產物(9.6 g，油），隨后通過硅膠層析(330 g二氧化娃）用己燒中的0%至20% 乙酸乙醋的梯度洗脫對其進行純化，W提供6.53 g (88%)期望產物。
[0027]中間體I. (s)-3-徑基-1-(4-甲基芐基川比咯燒-2-酬
于的下向（S)-3-((叔下基二甲基甲娃烷基)氧基)-1-(4-甲基芐基)郵咯燒-2-酬(6.53 g，20.44 mmol,中間體H)于無水DCM (20.4血）中的溶液中一次性添加肥1 (4 M，于1,4-二 嗯燒中，25.5 ml, 102 mmol)。注意到稍微放熱。將反應混合物于K下攬拌2 h且隨后在真空 中蒸發。將殘余物吸收于DCM (IOOmL)中并用飽和碳酸氨鋼溶液（100 mU及鹽水巧0 mL)洗 涂，且隨后將溶液經MgS〇4干燥并濃縮成殘余物。通過硅膠層析（120 g二氧化娃）用己燒中 的40%至100%乙酸乙醋的梯度洗脫純化粗產物，W提供3.73 g (89%)期望產物。
[002引中間體J. (S)-甲燒橫酸1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基醋
于(TC下在氮氣氣氛下向（5)-3-?基-1-(4-甲基芐基）化咯燒-2-酬（0.5 g，2.436 mmol,中間體I)于無水DCM (12.18 ml)中的冷卻溶液中添加 S乙胺（0.509 ml, 3.65 mmol)。隨后逐滴添加甲燒橫酷氯(0.198 ml, 2.56 mmol)并將反應物于0°C下攬拌15 min， 之后用飽和碳酸氨鋼溶液（10 mL)澤滅。使混合物升溫至的并分離水層并用DCM (2X)萃 取。將合并的有機層經MgS04干燥并在真空中蒸發，W產生白色固體(0.73 g)，隨后通過娃 膠層析（40 g二氧化娃）用己燒中的0%至50%乙酸乙醋的梯度洗脫對其進行純化，W提供 0.63 g (91%)白色固體狀期望產物。
[0029] 中間體K. (S)-3-(叔下基二甲基甲娃烷基氧基)-1-(4-(二氣甲基)芐基川比咯燒-2-酬
于(TC下向（S)-3-((叔下基二甲基甲娃烷基)氧基川比咯燒-2-酬(762 mg，3.54 mmol， 中間體G)于THF (7 mL)中的攬拌溶液中添加氨化鋼于礦物油中的60%分散液（232 mg, 5.31 mmol)Dl5 min后，向反應混合物中添加 1-(漠甲基)-4-(二氣甲基)苯(980 mg, 4.43 mmol)于THF (7 mL)中的溶液。將所得混合物于室溫下攬拌6 h。將反應物用幾克冰丸小屯、 地澤滅。用化OAc萃取所得混合物。將合并的有機層用水洗涂，經硫酸鋼干燥，過濾并在真空 中濃縮。使用硅膠柱層析(0-30% EtOAc/己燒)純化粗制反應混合物，W得到白色固體狀期 望產物(440 mg ,35%產率）：
[0030] 中間體L. (S)-1-(4-(二氣甲基)芐基)-3-徑基化咯燒-2-酬
于的下向（S)-3-((叔下基二甲基甲娃烷基)氧基)-1-(4-(二氣甲基)芐基川比咯燒-2-酬(440 mg，l.24 mmol,中間體K)于二氯甲燒（1.24 mL)中的攬拌溶液中添加4 M HCl于二 嗯燒中的溶液(0.62 mL，2.5 mmol)。將反應混合物攬拌2 h。在真空中濃縮反應混合物，W 得到期望產物(368 mg，定量產率）：LC-MS (M+H)+ 242.1。
[0031] 中間體M. (S)-甲燒橫酸1-(4-(二氣甲基)芐基)-2-氧代化咯燒-3-基醋
于0°C下向（S)-1-(4-(二氣甲基)芐基)-3-?基[I比咯燒-2-酬(368 mg，1.53 mmol,中間 體L)于二氯甲燒(7.63 mL)中的攬拌溶液中添加 S乙胺(0.319 mL, 2.29 mmol)及甲橫酷 氯(0.131 mL, 1.68 mmol)。將反應混合物于(TC下攬拌1 h。將所得混合物用水稀釋并將水 性混合物用二氯甲燒萃取。將合并的有機層用10%碳酸氨鋼溶液洗涂，經硫酸鋼干燥，過濾 并在真空中濃縮。使用硅膠柱層析(0-100%化OAc)純化粗物質。將純部分合并并在真空中 濃縮，W得到白色固體狀期望產物（322 mg,66%產率）：
[0032] 中間體N. 4-徑基-4-(4-甲氧基苯基)贓晚-1-甲酸叔下醋
將市售4-氧代贓晚-1-甲酸叔下醋（2.0 g，10.0 mmol)及二乙酸(30 ml)的混合物冷 卻至0°C。向此混合物中逐滴添加（4-甲氧基苯基）漠化儀的溶液(0.5 M，于二乙酸中，30 ml，15 mmol)。完全添加后，使反應混合物升溫至的并攬拌2 h。隨后將其緩慢用150 ml冰冷 水澤滅且隨后將所得混合物用3X150 ml DCM萃取。合并有機層，干燥，過濾且在真空中濃 縮。通過硅膠柱層析(30:70乙酸乙醋：己燒)純化粗產物，W提供期望產物(3.0 g，100 %產 率)：
[0033] 中間體0. 4-(4-甲氧基苯基)-1，2,3,6-四氨化晚鹽酸鹽
將4-徑基-4-(4-甲氧基苯基)贓晚-1-甲酸叔下醋(700 mg，2.27 mmol,中間體N)及二 嗯燒中的肥1 (4.0 ml, 16 mmol)的混合物于K下攬拌3 h。在真空下濃縮粗物質并將固體 殘余物用3X10 ml DCM洗涂W移除非極性雜質。收集呈微細固體形式的期望鹽(480 mg, 93〇/〇)。
[0034] 中間體P. 4-(4-甲氧基苯基)贓晚鹽酸鹽
向4-(4-甲氧基苯基)-1，2,3,6-四氨化晚肥1 (3.00 g，13.3 mmol,中間體0)于甲醇 (20 mL)中的攬拌溶液中添加10%碳載鈕（1.4 g)并將反應混合物于20 PSi氨氣下攬拌12 h。將反應混合物經由娃藻±墊過濾，用乙酸乙醋洗涂，且濃縮合并的有機部分W獲得白色 固體(2.0 g，70%產率）：
[0035] 中間體Q. 2,4-二漠-N-(4-氣芐基)下酷胺
于(TC下向市售(4-氣苯基）甲胺(4.0 g，32.0 mmol)于二乙酸（15 mU中的溶液中依 序添加 TEA (8.91血，63.9 mmol)及2,4-二漠下酷氯巧.07血，38.4 mmol)。使反應混合 物升溫至的并再攬拌24 h。過濾反應混合物。用二乙酸洗涂固體。在真空中濃縮濾液，W得 到含有2.4-二滋-N-(4-氣,書其）T醜膀的粗制混合物(8.0 g，71%產率）：
[0036] 中間體R. 3-漠-1-(4-氣芐基川比咯燒-2-酬
于(TC下向2,4-二漠-N-(4-氣芐基）下酷胺（10.0 g，28.3 mmol,中間體Q)于THF (25 mU中的攬拌溶液中添加化H于礦物油中的60%分散液(1.70 g，42.5 mmol)。使反應混合物 升溫至的并再攬拌2 h。將反應混合物小屯、地用冰澤滅并用水稀釋。用化OAc萃取所得混合 物。用水及隨后鹽水溶液洗涂合并的有機層。有機層經硫酸鋼干燥，過濾并在真空中濃縮。 使用硅膠柱層析(10%化OAc/己燒)純化粗產物，W得到期望產物(5.90 g，64%產率）：
[0037] 中間體S. 1-(4-氣芐基)-3-(4-(4-甲氧基苯基)贓晚-1-基川比咯燒-2-酬
向3-漠-1-(4-氣芐基)化咯燒-2-酬(0.3 g，1.10 mmol，中間體R)及4-(4-甲氧基苯基)贓 晚鹽酸鹽(0.276 g，l.213 mmol,中間體P)于乙臘(10 mU中的攬拌溶液中添加 TEA (0.768 mL，5.51 mmol)。將反應混合物密封并在化學微波中于100°C下加熱Ih。將反應混合物冷卻至 的并在真空中濃縮。用化OAc稀釋殘余物。用水及鹽水溶液洗涂有機混合物。將有機層經硫酸 鋼干燥，過濾并在真空中濃縮，W得到含有1-(4-氣芐基)-3-(4-(4-甲氧基苯基)贓晚-1-基） 化咯燒-2-酬的粗制混合物(0.35邑，83%產率）:扮;絲象態^^~沒巧條;城為.嫉裝復《滅對難。
[0038] 實例1. (R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基川比 咯燒-2-酬
將4-((3S，4S)-3-氣贓晚-4-基）苯酪(7.10 g，36.4 mmol,中間體F)及DIEA (16 mL， 92 mmo 1)于100 mL乙臘中的溶液加熱至80°C。經4小時的時段將此溶液逐滴用（S)-甲燒橫 酸1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基醋（10.5 g，37.0 mmol,中間體J)于乙臘(80血）中 溶液處理。在完成添加后，將反應混合物于80°C下攬拌16 h。隨后使反應混合物冷卻至d， 且通過旋轉蒸發將體積減少至80 mL。隨后添加飽和N也Cl溶液（100 mL)，且分離各層。用 DCM (2 X 100 mU萃取水層并合并有機層，經化2S〇4干燥并在真空中濃縮W產生粗產物。 通過硅膠層析(750 g硅膠）用溶劑A中的0%至20%溶劑B的梯度洗脫純化粗產物，其中溶劑B =20%甲醇/DCM且溶劑A = DCM。合并含有產物的部分。蒸發溶劑，從而產生9.3克期望產物， 通過LC/MS分析(條件B)純度為97%。將由此獲得的產物(8.5 g)在丙酬:己燒（1:5, 200 mL) 中制成漿液并通過過濾分離固體產物并風干。小屯、SFC分析顯示產物中存在2.1%雜質。使用 Cel 14 0.46 X 25 cm 5皿柱且用C〇2中的45%甲醇W3 mL/min洗脫，于3.800分鐘時洗脫 出期望產物且于4.848分鐘時洗脫出不期望雜質。隨后通過SFC色譜使用Cell4 3 X 25 cm 5曲1柱W150血/min注射1.5 ml 80 mg/mL溶液進一步純化產物。濃縮活性部分，從而提供 7.82克（20.4 mmol, 56%) >99.7%純的白色粉末狀實例1。
[0039] 實例2.憐酸二氨4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋.
向（R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基)郵咯燒-2-酬 (100 mg，0.261 mmol,實例1)于10 mL二氯甲燒中的懸浮液中添加化晚（0.106 mL, 1.31 mmol)及DMAP (160 mg, 1.31 mmol)。將反應混合物冷卻至-20°C。向冷卻溶液中逐滴添加 POCb (0.122血，1.31 mmol),且隨后使反應混合物升溫至K并攬拌1 h。添加水（10血） 并將混合物攬拌1.5 h。隨后分離各層并將有機層經化2S化干燥并蒸發至干燥。通過HPLC在 Symmet巧CS (300 X 17 mm) 7 mM柱上用經7分鐘20%B至50% B的梯度W15 mL/min洗脫 來純化粗產物，其中溶劑A =水中的10 mM乙酸錠，pH 4.5,且溶劑B =乙臘。產物RT = 2.2 min。通過凍干自適當部分分離出白色固體狀期望產物(5.8 mg, 4.7%)。
[0040]實例3. (s)-2-氨基-3-甲基下酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋鹽酸鹽.
步驟3A. (S -1-((R)-1-(4- 甲基芐基)-2-氧' 向（R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基)郵咯燒-2-酬 (0.02 g，0.052 mmol,實例1)于DCM (3 mL)中的溶液中添加（S)-2-((叔下氧基幾基）氨 基）-3-甲基下酸（0.059 g, 0.272 mmol),之后添加 DCC (0.032 g, 0.157 mmol)及DMAP (6.39 mg, 0.052 mmol)。反應混合物于室溫攬拌18 h。隨后添加水（10 mL)，并分離各層。 用DCM (3 X 10 mL)萃取水層，有機層合并，經化2S(k干燥，并濃縮成粗產物。通過制備型 TLC用石油酸中的35%乙酸乙醋洗脫純化粗產物，W提供純化產物(S)-2-((叔下氧基幾基） 氨基)-3-甲基下酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋(27 mg, 79%)。
[0041] 步驟3B. (S)-2-氨基-3-甲基下酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋鹽酸鹽.
于-20°C向（S)-2-((叔下氧基幾基)氨基)-3-甲基下酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基）-2-氧代化咯燒-3-基）贓晚-4-基）苯基醋（0.025 g，0.043 mmol)于DCM (1.5血）中的溶液中添加二乙酸中的肥1 (2.5 ml, 2.50 mmol, 1.0 M)。反應混合物經10 min緩慢升溫至K且隨后于的攬拌19 h。隨后在真空中移除溶劑W提供淺黃色半固體。隨后 通過RP-HPLC在Sunfire C18 (250 X 20 mm) 5皿柱上使用10%溶劑B至75%溶劑B的梯度 W15 mL/min經12分鐘純化粗產物，其中溶劑A =水中的0.05% HCl且溶劑B =乙臘。通過 凍干濃縮活性部分，W提供10.2 mg (44%)灰白色固體狀(S)-2-氨基-3-甲基下酸4-((3S, 4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋鹽酸鹽，即實 例2的標題化合物。
[0042] 實例4. (S)-2-氨基丙酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯 燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋鹽酸鹽
步驟4A. (S)-2-((叔下氧基幾基)氨基)丙酸4-( (3S,4S)-3-氣-1-( (R)-1-(4-甲基節 基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋
向（R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基)郵咯燒-2-酬 (0.03 g，0.078 mmol,實例1)于DCM (5 mL)中的溶液中添加（S)-2-((叔下氧基幾基)氨 基）丙酸（0.077 g，0.408 mmol),之后添加 DCC (0.049 g, 0.235 mmol)及DMAP (9.58 mg, 0.078 mmol)。將反應混合物于的下攬拌18 h。隨后添加水（15血），并分離各層。用DCM (3 X 15 mL)萃取水層且合并有機層，經化2S〇4干燥，并濃縮成粗產物。通過制備型化C用石 油酸中的20%乙酸乙醋洗脫純化粗產物，W提供灰白色半固體狀純化產物(S)-2-((叔下氧 基幾基)氨基)丙酸4-( (3S,4S)-3-氣-1-( (R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代[I比咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋(0.032 g，0.058 mmol,74 %產率）。
[0043]步驟4B. (S)-2-氨基丙酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化 咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋鹽酸鹽
于-20°C下向（S)-2-((叔下氧基幾基)氨基)丙酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基 芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋(0.032 g，0.058 mmol)于DCM (2 mL)中的 溶液中添加二乙酸中的HCl (2.0 ml, 2.0 mmol, 1.0 M)。經10 min使反應混合物緩慢升 溫至d且隨后于的下攬拌19 h。隨后在真空中移除溶劑，W提供淺黃色半固體。隨后通過 RP-HPLC在Kinetex C18 (250 X 20 mm) 5 皿柱上W15 mL/min使用經7分鐘 10%溶劑B至 40%溶劑B的梯度純化粗產物，其中溶劑A =水中的0.05%肥1且溶劑B =乙臘。通過凍干濃 縮活性部分，W提供4.7mg(16%)灰白色固體狀（S)-2-氨基丙酸4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基）贓晚-4-基)苯基醋鹽酸鹽，即實例4的標題化 合物。
[0044] 實例5. (S)-2-氨基-4-(4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯 燒-3-基)贓晚-4-基)苯氧基)-4-氧代下酸鹽酸鹽
步驟5A. (S 巧比咯燒-3-基） 贓晚-4-基)苯基： 向（R)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基)-1-(4-甲基芐基川比咯燒-2-酬 (0.03 g，0.078 mmol)于DCM (5 mU中的溶液中添加(S)-4-(叔下氧基)-3-((叔下氧基幾 基)氨基)-4-氧代下酸(0.118 g，0.408 mmol),之后添加 DCC (0.049 g，0.235 mmol)及 DMAP (9.58 mg, 0.078 mmol)。將反應物于K下攬拌18小時。隨后添加水（15血），并分離 各層。用DCM (3 X 15血)萃取水層并合并有機層，經NasS化干燥，并濃縮成粗產物。通過制 備型化C用石油酸中的25%乙酸乙醋洗脫純化粗產物，W提供灰白色半固體狀純化產物（37 mg, 68%)O
[0045] 步驟58.(5)-2-氨基-4-(4-((35,45)-3-氣-1-((1〇-1-(4-甲基芐基)-2-氧代11比 咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯氧基)-4-氧代下酸鹽酸鹽
于-20°C下向（S)-2-((叔下氧基幾基)氨基)班巧酸I-叔下醋4-(4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基）苯基）醋(0.032 g，0.049 mmol) 于DCM (2血）中的溶液中添加二乙酸中的肥I (2.0 ml, 2. 0 mmol, 1.0 M)。經10 min使 反應混合物緩慢升溫至的且隨后于的下攬拌19 h。隨后在真空中移除溶劑W提供淺黃色半 固體。隨后通過RP-HPLC在YMC hiad C18 (150 X 19 mm) 5皿柱上W15血/min使用經 7分鐘10%溶劑B至40%溶劑B的梯度純化粗產物，其中溶劑A =水中的0.05% HCl且溶劑B = 乙臘。通過凍干濃縮活性部分，W提供17 mg (57%)灰白色固體狀(S)-2-氨基-4-(4-((3S, 4S )-3-氣-1-( (R)-1-( 4-甲基芐基)-2-氧代[I比咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯氧基)-4-氧代下酸 鹽酸鹽，即實例5的標題化合物。
[0046]實例6. (R)-i-(4-(二氣甲基)芐基)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基)贓晚-1-基)化咯燒-2-酬
經1.5 h向維持于85°C下的4-((3S，4S)-3-氣贓晚-4-基）苯酪鹽酸鹽（363 mg，1.57 mmol,中間體F)及N,N-二異丙基乙胺（1.09 ni, 6.26 mmol)于5.0 mL乙臘中的攬拌混合物 中逐滴添加（S)-甲燒橫酸1-(4-(二氣甲基）芐基）-2-氧代化咯燒-3-基醋（500 mg，1.57 mmo 1，中間體M)于5.0 mL乙臘中的溶液。在完全添加后，將反應混合物于85°C下攬拌16 h。 在真空中濃縮反應混合物。使用硅膠柱層析(0-100% EtOAc/己燒)純化殘余物，W得到1-(4-(二氣甲基)芐基)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基）贓晚-1-基）化咯燒-2-酬的非對 映異構體混合物（內酷胺立體中屯、的局部差向異構化）（235 mg，35%產率）。通過制備型手 性SFC (柱=Lux Cellulose-2 (21 X 250 mm, 5 皿）；等度溶劑=20%甲醇(具有15 mM 氨）/ 80% C〇2;溫度=35°C;流速=60 mL/min;注射體積=1.0 ml (約20 mg/mL，于 MeOH中），Wl3 min間隔堆找;A = 210 nM;峰1 = 19.6 min,峰2 = 24.5 min)分離非對映 異構體混合物的試樣(780 mg)，W得到實例6的標題化合物(峰-1,389 mg)及(S)-1-(4-(二 氣甲基)芐基)-3-( (3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基)贓晚-I-基川比咯燒-2-酬(峰2,242 mg)。 實例6的數據：
通過單晶X射線分析確認實例114的相對及絕對構形P-1。
[0047]實例7.憐酸二氨4-((3S，4S)-3-氣-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醉
于-20°C下向（R)-1-(4-(二氣甲基)芐基)-3-((3S，4S)-3-氣-4-(4-?基苯基)贓晚-1-基川比咯燒-2-酬（100 mg，0.239 mmol,來自實例6)于二氯甲燒（10 mL)中的懸浮液中添加 S乙胺（0.233 ml, 1.67 mmol)。于-20°C下向冷卻溶液中添加 POCh (0.111 ml, 1.20 mmol),且隨后將反應混合物于-20°C下攬拌2-3小時。添加水（10 mL)并將混合物攬拌1.5 h。用二氯甲燒萃取混合物。將有機層經硫酸鋼干燥，過濾并在真空中濃縮。通過反相制備型 HPLC在LUNA C8 (250 mm X 19 mm ID) 5皿柱上用溶劑A =水中的10 ml乙酸錠抑4.5 及溶劑B =乙臘的梯度洗脫純化粗產物。通過凍干自適當部分分離出白色固體狀實例7的 標題化合物(21 mg, 18 %)。
[004引實例8. (R)-i-(4-氣芐基)-3-(4-(4-徑基苯基)贓晚-1-基川比咯燒-2-酬
在化氣氣氛下于-78°C下向1-(4-氣芐基)-3-(4-(4-甲氧基苯基)贓晚-1-基）化咯燒- 2-酬(3 g，7.9 mmol,中間體S)于無水二氯甲燒(100 mL)中的溶液中添加二氯甲燒中的I M S漠化棚(39 mL，39 mmol)并在攬拌下經3 h使所得混合物升溫至室溫。用水(30血)澤滅 反應物并分離有機層，用水及鹽水洗涂，并濃縮。通過硅膠上急驟層析使用石油酸中的15% 化OAc純化粗產物，W產生外消旋1-(4-氣芐基)-3-(4-(4-?基苯基)贓晚-1-基川比咯燒-2-酬（2. Ig,73%產率）；
經由SFC在Qiiralpak-IA 250 mm X 4.6 mm 5皿柱上用35%溶劑B洗脫分離一部分外 消旋體(40 mg)，其中溶劑A = 0)2且溶劑B =甲醇中的0.3% DEA，總流量為3 mL/min。峰1顯 不RT為4.35 min (11 mg)且峰2顯不RT為6.29 min (13 mg)。
[0049]實例9. (R)-憐酸二氨4-(1-(1-(4-氣芐基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯 基醋
向裝有THF (10 mL)的圓底燒瓶中添加憐酷氯(1.27 mL 13.6 mmol)。使用冰/甲醇浴 將溶液冷卻于〇°(：^下。添加(1〇-1-(4-氣芐基)-3-(4-(4-徑基苯基)贓晚-1-基川比咯燒-2-酬（1.00 g，2.71 mmol,實例8)于THF (18 mL)中的懸浮液。5 min后，于低于5°C下的浴溫下 緩慢添加 S乙胺(0.946血，6.79 mmol)。將反應混合物于0°C下攬拌90 min。逐滴添加1 N 氨氧化鋼水溶液(8.69 mL, 8.69 mmol) dpH經量測為約0。使混合物升溫至的并攬拌3 h。在 真空中于< 30°C下濃縮粗制反應混合物，W得到澄清溶液。將溶液與1 N化OH水溶液一起 研磨至抑約1。在冰浴中冷卻混合物。析出半固體。傾析出所有液體。將半固體懸浮于90%乙 醇中且隨后通過真空過濾收集。推測產物為(R)-憐酸二氨4-(1-(1-(4-氣芐基)-2-氧代化 咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋的HCl鹽(560 mg, 42 %)。向（R)-憐酸二氨4-(1-(1-(4-氣節 基)-2-氧代化咯燒-3-基)贓晚-4-基)苯基醋肥1巧60 mg, 1.16 mmol)于甲醇中的漿液中 添加甲醇鋼于甲醇(250 mg, 1.16 mmol)中的25%溶液。攬拌混合物直至澄清且隨后在真空 中濃縮。將殘余物溶解于90%乙醇/水中并在冷凍箱中冷卻。使用真空過濾收集固體沉淀。在 高真空下干燥固體，W得到實例9的標題化合物(230 mg，19%產率）：
[0化日]生物方法 放射性配體結合分析.使用化Ro 25-6981在8至10周齡雄性Sprague Dawl巧大鼠 化arlan,化therlands)的前腦上實施用W測定與NR2B-亞型NMDA受體的結合的結合實驗 (Mutel V；Buchy D；Klingelschmidt A；Messer J；Bleuel Z；Kemp JA；Richards JG . Journal of Neurochemistry , 1998, 70(5):2147-2155)。使用斷頭臺（Guillotine)在未 麻醉情況下使大鼠斷頭（由動物倫理委員會批準)且將收獲的腦速凍并于-80°C下儲存3至6 個月用于膜制備。
[(K)引]對于膜制備，將大鼠前腦在包括50 ml KH2PO4 (用KOH將pH調節至7.4)、1 ml EDTA、0.005% Triton X 100及蛋白酶抑制劑混合劑(Sigma Al化ich)的均質化緩沖液中在 冰上解凍20分鐘。將解凍的腦使用Dounce均質器均質化且W48000 X g離屯、20 min。將沉 淀物再懸浮于冷緩沖液中并再次使用Dounce均質器均質化。隨后，將均質物分成等分試樣， 速凍并于-8〇°C下儲存不超過3至4個月。
[0052] 為實施競爭結合分析，向96孔板的每一孔中添加解凍的膜均質物(20 yg/孔）。將 實驗化合物連續稀釋于100% DMSO中并添加至分析板的每一行中W達成期望化合物濃度， 從而保持分析板中的DMSO濃度為最終反應體積的1.33%。接下來，向分析板中添加化Ro 25-6981 (4 nM)。于室溫下培育1 hr后，在GF/B濾板(于室溫下用0.5%陽I處理1 hr川欠獲 膜結合的放射性配體。將濾板于50°C下干燥20 min,與microscint 20-起培育10分鐘，且 最后，在TopCount (Perkin Elmer)上對計數進行讀數。使用MK-0657 (此化合物的制備是 如WO 2004 108705中實例1所述(40 yM))測定非特異性結合。CPM值轉化為抑制%且使用定 制軟件繪示濃度反應曲線。重復每一實驗至少兩次W獲得實驗化合物的最終結合Ki值。使 用此分析，實例1的化合物顯示4 nM的結合Ki,實例6的化合物顯示4 nM的結合Ki,實例8的 化合物顯示1.4 nM的結合Ki。
[0053] 離體化X vivo)占據分析.此分析證實，在投藥后動物中，實例1的化合物占據腦駐 留NR2B-亞型受體。在由10%二甲基乙酷胺、40%陽G-400、30%徑丙基0環糊精及30%水組成的 媒介物中向7至9周齡雄性CD-I小鼠靜脈內給予實驗化合物并在投藥后15分鐘通過斷頭收 獲前腦。立刻將腦試樣速凍并儲存于-80°C下。次日，將投藥的腦試樣在冰上解凍15-20分 鐘，之后在包括50 ml K也P〇4 (用KO聞尋抑調節至7.4)、1 ml抓TA、0.005% Triton X 100及 蛋白酶抑制劑混合劑(Sigma Al化ich)的冷均質化緩沖液中使用化1 yhon均質化10秒。使 用Dounce均質器進一步均質化粗制均質物且將所有動物的均質化膜等分試樣快速冷凍并 儲存于-80°C下直至進一步使用為止。整個均質化過程皆是在冰上實施。
[0054] 對于測定占據，首先在冰上解凍膜均質物且隨后使用25號針進行針均質化。向96 孔板中添加均質化膜(6.4 mg/ml)，之后添加化Ro 25-6981 (6 nM)。將反應混合物于4°C 下在振蕩器上培育5分鐘且隨后收獲至GF/B濾板(于室溫下用0.5%陽I處理1 hr)上。將濾 板于50°C下干燥20 min,與microscint 20-起培育10分鐘并在TopCount (Perkin Elmer) 上讀數。每一劑量或化合物組由4至5只動物組成。向動物的對照組僅給予媒介物。向分析板 中一式=份地添加每一動物的膜。使用添加至含有給予媒介物的動物的膜均質物的孔中的 10 yM Ro 25-6981測定非特異性結合。使用W下等式將特異性計數/分鐘轉化成每一動物 的每一化合物劑量下的占據％:
[(K)扣」化用化巧斤，頭例i的化甘倒顯不仕；3 mg/Kg I.V.絕于后yw。NR2B受體占據。通過 質譜W常用方式測定藥物含量。此劑量下血漿中的藥物含量是1106 nM，且均質化腦組織中 的藥物含量是1984 nM。實例6的化合物顯示3 mg/Kg i.v.投藥后97% NR2B受體占據。此劑 量下血漿中的藥物含量是1800 nM，且均質化腦組織中的藥物含量是2200 nM。實例8的化合 物顯示3 mg/Kg i.v.投藥后96% NR2B受體占據。此劑量下血漿中的藥物含量是570 nM，且 均質化腦組織中的藥物含量是900 nM。
[0化6] hERG電生理學分析.使用膜片錯制技術評價實驗化合物對穩定表達hERG通道的 肥K 293細胞的hERG活性。將經表達hERG的細胞鋪板的蓋玻片放置于實驗室中并于室溫下 灌注包括 W 下（WmM 計）的溶液：140 化 Cl、4 KCK1.8 CaCl2、l MgCbUO GlucoseUO 肥陽S (pH 7.4,化OH)。棚娃酸鹽膜片吸管在填充有含有W下的內部溶液時具有2 MO至4 MQ的端電阻：130KCl、lMgCl2、lCaCl2、10EGTA、10肥陽S、5ATP-K2(pH7.2，K0H)。使 用由pClamp (Axon儀器)軟件控制的Axopatch 200B (Axon儀器，Union City, CA)膜片錯 放大器于-80 mV下W在全細胞構形錯制細胞。在形成吉咖封口（gigaseal)后，重復(0.05 Hz)施加 W下電壓方案W記錄尾電流：自-80 mV至+20 mV達2秒去極化步驟，之后至-65 mV (3秒)的超極化步驟W引發尾電流且隨后返回至保持電位。在尾電流穩定后施加化合物。首 先，在僅細胞外溶液(對照)存在下且隨后在含有增加化合物濃度的細胞外溶液中記錄尾電 流。施加每一化合物濃度2-5分鐘。每一濃度下的抑制%計算為峰尾電流相對于在對照溶液 存在下記錄的峰尾電流的減少。在定制軟件中實施數據分析。繪制不同濃度下的抑制％曲線 W獲得濃度反應曲線，隨后利用四參數方程擬合該曲線W計算hERG ICso值。使用此程序，實 例1的化合物是hERG通道的差抑制劑，其中ICsq = 28測。實例6的化合物是hERG通道的差抑 制劑，其中ICso = 13.5測。
[0057] 小鼠強迫游泳測試(mFST).強迫游泳測試(FST)是在臨床前研究中用于評價抗抑 郁化合物的動物模型。FST是類似于Porsolt等人的方法且進行修改實施（Porsolt RD、 Bertin A、Jalfre M. Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants. Arch Int 陸armacodyn 1?紅 1977;229:327-36)。在此范例中，強制小 鼠在填充水的不可逃脫的圓筒中游泳。在運些條件下，小鼠將最初盡力逃脫且最終進行不 動行為;將此行為解釋為被動應激應對策略或抑郁樣行為。游泳池位于由塑料制得的盒內 部。通過達到圓筒的高度的不透明塑料片將每一罐彼此隔開。=只小鼠同時經受測試。通過 將小鼠置于含有水(20 cm深，維持于24°C至25°C下）的獨立玻璃圓筒(46 cm高度X 20 cm 直徑）中實施6 min的游泳期。在此水位準下，小鼠尾不會接觸容器底部。當小鼠保持被動漂 浮且在水中不掙扎并僅作出保持其鼻/頭在水上方且保持其漂浮所必需的那些運動時，貝U 將小鼠判斷為不動的。在總共6 min的測試期間評估不動性的持續時間，且表示為不動性的 持續時間（sec)。對每一小鼠僅測試一次。在每一期結束時，利用干布干燥小鼠且使其返回 至其置于熱毯上的圈養籠中W防止體溫降低。每一試驗后更換水。使用相機（Sony 化ndicam，型號：DCR-HC38E;PAL)記錄所有測試期，且使用Forced Swim Scan 2.0版軟件 (Clever Systems公司，Reston, VA, USA;參見Hayashi E、Shimamura M、Kuratani K、 Kinoshita M、Hara H. Automated experimental system capturing three behavioral components during murine forced swim test. Life Sci. 2011 年2 月28 日；88(9-10): 411-7及Yuan P、Tra邑on T、Xia M、Leclair CA、Skoumbourdis AP、Zhen邑 W、Thomas CJ、 Huang R、Austin CP、Chen G、Guitart X. Phosphodiesterase 4 inhibitors enhance sexu曰I pie曰sure-seeking 曰ctivity in rodents. Phsrmscol Biochem Beh曰v. 2011;98 (3): 349-55)進行評分。對于NCE測試:在游泳期前15 min在小鼠中通過i . V.途徑給予測試 化合物，且接下來6 min記錄不動時間。在FST結束時，通過快速斷頭方法對小鼠實施安樂 死，且收集血漿及腦試樣并儲存于-80°C下直至進一步分析。在小鼠強迫游泳分析中，在30% 徑丙基0環糊精/70%巧樣酸鹽緩沖液(pH 4)的媒介物中W5 mL/Kg投藥體積靜脈內給予實 例1的化合物。在運些條件下在1 mg/Kg下，實例1的化合物證實統計學上顯著的不動時間減 少。在此劑量下，藥物含量在血漿中為268 +/- 128 nM且在腦中為749 +/- 215 nM。如上文 所報導測定NR2B受體占據且經測定為73%。在運些相同條件下在1 mg/Kg下，實例6的化合物 證實統計學上顯著的不動時間減少。血漿中的藥物含量為360 nM"NR^受體占據經測定為 79〇/〇。
【主權項】
1. 一種式I化合物，其中： Ar1是苯基或二氫化茚基且被0至3個選自以下的取代基取代:氰基、鹵素、烷基、鹵代烷 基及鹵代烷氧基； Ar2是被1個OR取代基取代且亦被0至3個選自以下的取代基取代的苯基:氰基、鹵素、烷 基、鹵代烷基及鹵代烷氧基； R是選自以下的前藥部分:烷基酯、氨基酸酯、烷氧基酯、膦酸、膦酸烷基酯、烷氧基膦 酸、烷氧基膦酸烷基酯、氨基甲酸烷基酯、氨基酸氨基甲酸酯、氨基磷酸烷基酯、氨基磷酸芳 基酯及氨基磺酸酯； X是鍵或&-C3亞烷基； η是1或2;及 環Α是氮雜環丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基或高哌嗪基且被0至4個選自 鹵素、烷基、羥基或烷氧基的取代基取代； 或其藥學上可接受的鹽。2. 如權利要求1的化合物，其具有下式：其中R是選自以下的如藥部分:烷基酯、氣基酸酯、烷氧基酯、勝酸、勝酸烷基酯、烷氧基 膦酸、烷氧基膦酸烷基酯、氨基甲酸烷基酯、氨基酸氨基甲酸酯、氨基磷酸烷基酯、氨基磷酸 芳基酯及氨基磺酸酯;或其藥學上可接受的鹽。3. 如權利要求2的化合物，其是磷酸二氫4-((3S，4S)-3-氟-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2_氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)苯基酯，或其藥學上可接受的鹽；4. 如權利要求2的化合物，其是(S)-2-氨基-3-甲基丁酸4-((3S，4S)-3-氟-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2-氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)苯基酯鹽酸鹽，或其藥學上可接受的鹽；5. 如權利要求2的化合物，其是(S)-2-氨基丙酸4-((3S，4S)-3-氟-1-((R)-1-(4-甲基 芐基)-2_氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)苯基酯鹽酸鹽，或其藥學上可接受的鹽；6. 如權利要求2的化合物，其是（S)-2-氨基-4-(4-((3S，4S)-3-氟-1-((R)-1-(4-甲基 芐基)-2_氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)苯氧基)-4-氧代丁酸鹽酸鹽，或其藥學上可接受的 鹽：7. 如權利要求1的化合物，其是磷酸二氫4-((3S，4S)-3-氟-1-((R)-1-(4-甲基芐基)-2_氧代吡咯烷-3-基)哌啶-4-基)苯基酯，或其藥學上可接受的鹽；8. -種藥物組合物，其包含權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽及藥學上可接 受的載體。9. 一種治療抑郁癥、阿茲海默氏病、神經性疼痛或帕金森氏病的方法，其包括給予患者 治療有效量的權利要求1的化合物。10. 如權利要求9的方法，其用于抑郁癥的治療。11. 如權利要求9的方法，其用于阿茲海默氏病的治療。12. 如權利要求9的方法，其用于神經性疼痛的治療。
【文檔編號】A61K31/454GK105873915SQ201580004095
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年1月8日
【發明人】L.A.湯普森三世, J.E.馬科
【申請人】百時美施貴寶公司