N-(1-芐基哌啶-4-氨基)-2-(4-苯甲酰苯氧基)乙酰胺的新用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及醫藥領域，具體地說，涉及N- (1-芐基哌啶-4-氨基）-2- (4-苯甲酰苯 氧基）乙酰胺（BBA)在制備防治各類急慢性肝損傷藥物方面的新用途。
【背景技術】
[0002] 脂聯素受體（AdiponectinReceptors，AdipoRs)是孕酮和脂聯素Q受體家族 中的一類重要成員，目前已發現AdipoRl和Adip〇R2兩種，它們主要分布于骨骼肌、肝臟、 下丘腦以及血管等器官組織的細胞表面，在內皮細胞、胰島B細胞、巨噬細胞、單核細胞和 受損血管內皮細胞中也有表達。AdipoRs在氨基酸序列以及空間結構上具有很高的保守 性，其跨膜結構域類似于G蛋白偶聯受體（GProtein-CoupledReceptors,GPCRs)，SP具 有7個由a-螺旋組成的跨膜結構域，但與GPCRs結構不同的是，AdipoRs的羧基端位于 細胞膜的外側，而氨基端位于細胞膜的內側。研宄表明：AdipoRl主要分布于骨骼肌細胞 的細胞膜表面，其與配體分子的結合可激活5' -腺苷單磷酸激活蛋白激酶（Adenosine 5 '-monophosphate-activatedproteinkinase,AMPK)，參與糖代謝，并調節膜島素分泌 以及血漿膽固醇和血漿甘油三酯水平；而Adip〇R2則主要在肝細胞中表達，其與配體分 子結合后，可激活過氧化物酶體增殖激活物受體（peroxisomeproliferator-activated rec印tor，PPARs)，參與到包括糖和脂肪代謝以及細胞凋亡等在內的多種重要生理過程。
[0003] 由白色脂肪組織分泌的脂聯素（Adiponectin，一種脂肪細胞因子）是哺乳動物 體內AdipoRs的重要配體之一，它們是血漿蛋白中的重要組成部分（約占血漿總蛋白含 量的0. 05% )，在血漿中以不同形式的聚合物存在，包括：低分子量單體、中分子量六聚體 以及高分子量寡聚體（由18個單體聚合而成），其中后者是主要的活性形式，與AdipoRs 結合后，可激發后續的一系列信號途徑（如AMPK和PPAR-a等），參與到糖和脂肪代謝、 細胞凋亡等多個生理和病理過程，具有抗II型糖尿病和治療動脈粥樣硬化的潛力；此外， Adiponectin還具有抗炎和抗腫瘤的作用；近年來的研宄則顯示：Adiponectin還可以抑制 成纖維細胞（如肝星形細胞HSCs)的激活，在器官纖維化的治療方面具有一定的應用前景。
[0004] N-(1-芐基哌啶-4-氨基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺（BBA)是日本學者Miki Okada等于2013年底報道的一種AdipoRs的人工合成的小分子激動劑，其活性類似于 Adiponectin，S卩：口服時可通過激活AMPK和PPAR-a途徑以改善實驗動物的胰島素抵抗， 具有治療II型糖尿病的潛力。然而，迄今為止并未見有利用該化合物用于治療急慢性肝損 傷的報道。

【發明內容】

[0005] 為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供N-(l-芐基哌啶-4-氨 基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺（BBA)在制備防治各類急慢性肝損傷藥物方面的新用 途。
[0006] 為了實現本發明目的，本發明的技術方案如下：
[0007] N-(l_芐基哌啶-4-氨基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺在制備防治肝損傷藥物 中的應用。
[0008] 所述肝損傷包括但不限于化學性肝損傷、藥物性肝損傷、病毒性肝炎、酒精性肝 病、非酒精性脂肪肝以及由這些肝損傷和肝病引起的肝纖維化和肝硬化。
[0009] 其是利用N-(1-芐基哌啶-4-氨基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺通過抑制炎癥 因子TGF-0、TNF-a、IL-6、IL-I0的表達抑制炎癥的發生，降低膜脂過氧化程度，起到降 酶保肝的作用。
[0010] 本發明還公開了一種防治肝損傷的藥物，所述藥物以N-(l-芐基哌啶-4-氨 基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺為主要有效活性成份。
[0011] 所述藥物通過口服、直腸、舌下、肺部、透皮、離子透入、陰道或鼻內給藥方式給藥。
[0012] 作為優選，所述藥物通過口服方式給藥。
[0013] 進一步地，所述藥物由N-(1-芐基哌啶-4-氨基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺 與藥學上可接受的載體組成，劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、注射劑、噴霧劑 和氣霧劑。優選劑型為各類口服劑型（包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑）。
[0014] 給藥劑量根據制劑形式和期望的作用時間以及治療對象的情況而有所變化，實際 治療所需的量可以由醫師根據實際情況（如病人的病情、體重等）而方便地確定。對于一 般的成人，建議但不限于每日給藥〇. 66-15. 4mg(BBA的實際用量，不含輔料的用量）。
[0015] 所述藥物在應用時針對的所述肝損傷，包括但不限于化學性肝損傷、藥物性肝損 傷、病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝以及由上述肝損傷和肝炎引起的肝纖維化和 肝硬化。
[0016] 本發明的有益效果在于：
[0017] 本發明利用體內外活性篩選模型開展了對N-(l_芐基哌啶-4-氨基）-2-(4-苯甲 酰苯氧基）乙酰胺（BBA)的活性和功能篩選，證明BBA具有抑制炎癥相關細胞因子表達以 及降酶保肝和改善肝功能的作用，具有開發成新型防治各類急慢性肝炎藥物的潛力。
【附圖說明】
[0018] 圖1為本發明所述N-(l-芐基哌啶-4-基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺的化學 結構與關鍵基團。
[0019] 圖2為本發明所述BBA對CCl4誘導的急性肝損傷小鼠肝臟指數的影響。
[0020] 圖3為本發明所述BBA對0：14誘導的急性肝損傷小鼠肝組織的保護作用。
[0021] 圖4為本發明所述BBA對誘導的急性肝損傷小鼠肝組織中炎癥相關因子表達水平 的影響。
【具體實施方式】
[0022] 以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0023] 實施例IN-(1-芐基哌啶-4-基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺對CCl4誘導的 小鼠急性肝損傷的保護作用
[0024] 1、受試藥物
[0025] 藥物劑量：N-(1-芐基哌啶-4-基）-2-(4-苯甲酰苯氧基）乙酰胺（BBA)高劑量 組為〇? 5mg/kg，配制濃度0? 05mg/ml，按0?lml/10g灌胃給藥；中劑量組為0?lmg/kg，配制 濃度〇? 〇lmg/ml，按0?lml/10g灌胃給藥；低劑量組為0? 02mg/kg，配制濃度0? 002mg/ml，按 0?lml/lOg灌胃給藥。
[0026] 實驗對照：空白對照用生理鹽水（氯化鈉注射液），按0.lml/lOg灌胃給藥；陽性 對照藥為雙環醇（Bicyclol，由南京工業大學蘇賢斌教授惠賜），根據臨床推薦用量和動物 耐受容量，設計其動物實驗劑量為20mg/kg，配制濃度2mg/ml，按0.lml/10g灌胃給藥。
[0027] 2、實驗動物
[0028] 健康C57BL/6小鼠，全雄，體重18±2g，購自上海市杰思捷實驗動物有限公司，動 物合格證號：SCXK(滬）2013-0006。
[0029] 3、其他實驗材料
[0030] 四氯化碳，分析純，南京化學試劑一廠生產；甲醛溶液，分析純，南京化學試劑一 廠生產；金龍魚牌精煉一級大豆油，益海嘉里食品營銷有限公司生產；羧甲基纖維素鈉 (CMC-Na)，國藥集團化學試劑有限公司生產；DMS0,國藥集團化學試劑有限公司生產；氯化 鈉注射液，安徽雙鶴藥業有限責任公司生產；轉氨酶活性測定試劑盒、MDA試劑盒、NOS試劑 盒為南京建成生物技術有限公司產品，批號為：20141224。
[0031] 4、實驗方法
[0032] 4. I CC14致小鼠急性肝損傷模型的建立和藥物處理
[0033] 將60只C57BL/6小鼠按體重隨機分為6組，每組10只，即：正常對照組（Normal control)、模型組（Modelcontrol)、陽性藥物對照組（Bicyclol，20mg/kg)和BBA高、中、低 劑量組（劑量分別為〇? 5、0. 1和0? 02mg/kg)，灌胃給藥體積為0?lml/10g。
[0034] 正常組和模型組：給予等體積含2 % DMSO的0. 5 % CMC-Na生理鹽水溶液，灌胃給 藥，2次/天，連續給藥3天。
[0035] 雙環醇組：給予雙環醇20mg/kg，灌胃給藥，2次/天，連續給藥3天。
[0036] BBA高、中、低劑量組：分別按0. 5、0.l、0.02mg/kg，灌胃給藥，2次/天，連續給藥3 天。
[0037] 除正常對照組外，各組動物均于末次給藥后2h，單次給予腹腔注射0. 1 % 0：14大 豆油溶液（w/v)10ml/kg，建立小鼠急性肝損傷模型，期間禁食不禁水。16h后摘取眼球取 血，3000rpm離心15min以分離血清，用改良賴氏法測定血清轉氨酶活性；取血后斷錐處死 小鼠，打開腹腔后，快速切取肝臟左葉，以10%中性甲醛固定24h，石蠟包埋，用于組織病理 學分析；剩余肝臟在液氮中速凍，_80°C保存，用于總RNA提取和生化指標檢測。
[0038] 4. 2生化指標檢測
[0039] 根據試劑盒說明書，分別檢測各組動物的肝指數、ALT、AST、MDA、TNOS和iNOS含 量。
[0040] 4. 3組織病理學分析
[0041] 各組小鼠離體肝臟用10%中性甲醛固定24h后，經脫水、浸蠟、包埋，制成4ym厚 石蠟切片，HE染色，光鏡觀察肝組織的病理變化情況。
[0042] 4.4肝組織中炎癥相關因子表達量分析
[0043] 參照試劑盒說明書，一步法提取離體肝組織中總RNA，經逆轉錄獲得cDNA，-20°C 保存。
[0044] 根據GenBank中小鼠來源的相關細胞因子（IL-6、TGF-0 1、IL-I a、TNF-a )和內 對照基因18SrRNA(18SribosomalRNA，18S)序列設計引物，引物序列見表1。
[0045] 表1細胞因子引物序列
[0046]
[0047] 以逆轉錄獲得的cDNA為模板，通過熒光定量RT-PCR方法分別擴增不同細胞因子 的基因。以18SrRNA為內參，目標基因表達水平采用Caact計算。
[0048] 4. 5數據統計
[0049] 實驗重復3次，實驗結果以"平均值土標準偏差"表示。利用student-t檢驗對 獲得的數據進行統計分析，P〈〇. 05表示有顯著性差異。
[0050] 5、結果
[0051] 5.IBBA具有抑制CCl4對小鼠肝組織的破壞作用
[0052] 實驗